ПОЛУЧЕНИЕ И ХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЛИСАХАРИДОВ СОЦВЕТИЙ РОМАШКИ ЛЕКАРСТВЕННОЙ тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ имени К. А. ТИМИРЯЗЕВА

^ Л 6- ¿6-3

На правах рукописи Яковлев Алексей Иванович

ПОЛУЧЕНИЕ И ХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЛИСАХАРИДОВ СОЦВЕТИЙ РОМАШКИ ЛЕКАРСТВЕННОЙ

(02.00.03 — органическая химия)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москоа — 1077

щ

\

г С

Работа выполнена на кафедре органической химии Рязанского медицинского института имени академик;! И, П. Павлова.

Научный руководит е л ь: кандидат химических наук доцент ГОРИН А. Г. .

Официальны с оппонент ы: доктор химических наук Мочал ин В. Б,

кандидат химических наук, старшин научный сотрудник Свиридов А. Ф.

Ведущее предприятие — Харьковский научно-нсследовательскнй химико-фармацевтический институт.

Зашита состоится « »MP^A^t 1977 г. ¡i на заседании

специализированного сонета K-120.3ii.04 (02,00.03: 02,00,04) н Московской сельскохозяйственной академии им. К, Л. Тимирязева.

Адрес: 125008, г. .Москва А-8. \л. Тимирязевская, 49. Ученый сонет ТСХЛ.

С диссертацией можно ознакомить?» п ЦП В ТСХЛ. Автореферат разослан « /V ,,e£fere^>)97j1 г.

Ученый секретарь Специализированного совета доцент — В. Н. КНЯЗЕВ.

4 -О* ■• Ч:1(Ч !■

■ ОБЩАЯХАРШЕИЕТШ.-РАБОТЫ

дкттальнооть а исследований. В директивных документа! 1X7 съезда КПСС "Основные направления развития народного хозяйства СССР на 1976-1980 года" предусматривается увеличение гфоиаводатва ' • дрод'дддш медицинской- лр омышленности на 44-465».1'. Цр еда слагается с<?з— данке и освоение в промышленном производстве до 200 вовнх более эффективных - -зепаратов,1^ Поэтому проблема использования растительных ресурсов нашей страны с целы} выделения г изучения' суруитурн биологически активных соединений является весьма важной и актуальной. ■

Полисахариды — - очень важный класс грушш биополимеров, которые находят все большее применение в прогястгешости к медицине.Еа основе ряда полисахаридов готовят лекарственные Форш - ыази, эцуль^ша, гедн, которые с успехом применяется в мгдяцшской драдшке. Ыногиз' из них вошкгшг устойчивость оргшшгиов к базтерлгльныа и влруснкц ивфеквдям, возникновению я развил® оауходеЯ, действии рентгеновских лучей. Широко пр^енястся в ые^шане бахтериальнкЗ дскстран- в качестве дяаэшзаыв-^ интеля. Ва основе патасахарпдов уже созданы;препараты плантаглшад и -ь^алгпп, применяемые при леченая язвенных болезней и заболеваний верхних дыхательшх путей.-

Полисахариды входят в'состав дэбой живой клетки, дричеа их биологические Функции до настоящего времена мага? изучены. Поэтому ^иссле- . доваще химического состава и структура полип ахарэдоэ играет искжгта-тслгьво вазц/а роль дет иогпггания многих корешшх восросов бяооргажи-

х) Оспогаие иадравденля развитая народного хозаЭства СССР ва 1&761980 годы. Шшкаэдат, 1976, стр,43.

за) А.К.Уедьнпчэнко. Езга индустрии здоровья.' Цедшанская * газ эта,

31 марта 1ЭТ5 г. ! -

. ------------------------- -*.

* -■^■л. типа. '•■ьь/о».

: '■'^¿йВГ'" !

- 2 г

ческсД _хтщй,

Рдаашка аптечная сЬиаояаип ь.) семейства слсг-

нсцветпыг ( Сояроо^аД.) является пешшм лекарственным.сирьем длл получении спирта масел. Бодораствортша деНствутеше вецсства ромагзш практически не изучеш, Еешшестно к алое вегество нет группа веществ является действувсда качал см стваров, экстрактов в настоев. Бользла пробелом .в тгг"1тя рша^аи является отсутствие пестах сведендЗ об углеводном состава этого лекарственного сир га. •

Цель» настоящего нсследовашл яки ось:

I. Разработка оптимальных условсЗ эястрахшш полисахаридов;пз соцветий рошггсд легарственноа.

- .2. Изучение ыоносахарсдного состава пестеахзридного комплекса.

, 3, Взсдедовавпа полисагаракного состава*.

; ■ 4. Доказательство строения основных ^рашшЗ солисахаридпого . нсешленса.

, ' ■• Научная новизна и вротггяческш пеппость. Из сшветпй роаагжи лшсарствепаоЗ выселен иошЗ Еолисахарпгашй кскзлекс. Изучен ионо- в вогисахаридннй состав. Установлено строение осноошас долЕгахарддов. препарата. По ж""*™ фаркагалотческнг ссследовалсЗ ИВКШ {А.Г.Го-рлн, ^.В.ОЙолеЕдава в др.) додвсахартщтгЯ препарат-обладает варазен-шл пнтдазввнннм в шткиа аптациднын действием. Это позволило реко-нендовать препарат в аачестве нового лекарственного средства дзя практачесгоЭ.иедшишн. В вастоядее вреия препарат,: вазучшшШ названа каЗаизсознд, успешно пра&ея. клинические изпдтандя л находится на утвераденнж Сараазголотзчесюго Коаятста Шншзтерства' здравоохранения СССР к применения в вздпцитной практике. Результаты химического со-следовашя использована лду контроля производства при наработке препарата для клинических Есдытаний.лрж фармакологических л кышячес-хях «спнтанхях, а также гопогьзугтеа яра разработке нориативно-тех-вРюакйС документация ва вашлозвд-оубвташш) к хранулн-камилоэвд.;-.

дпройацгит рас/отц.1 Катер^алы дисссртащсг докладанад::с ь на У Г£ ее ежих" кокоре тзд-л по хл^п и бг.ох:::.'^ углеводов (Тбпжюи, 1ЭТ2), кпучс:« рязс1;з:;ого угдхакнского института пмеш! П.Ш

Павлова (Рязань,1971,1972.1974,1975), Ц .Всероссийски! съезда кармане т-гоз (Сзорд.тогск.ГЭТЕ), каа:я?едральяоазаседании фарглшевтическо-го факультета Рязанского ксдишюкого июгсггута шло!га VI.П.Павлова {Рязань,1975), заседгасга оргаштчес^сй хжпи Московской сехь-

с^охозлГ.стяишсЗ скадаищ токе л.А.Тнкирвзевэ (1'осквз, 1977). '

П^лгкапгч По яолуюп:::^ результатам исследований опубликовано 7 ¡г-х-^^'к 'работ, сш:сс:г ттоторих дай в конце автореферата.

ОДгеч работа. Л^сссртаугоннгУ! рш5сга состоит 1!3 ьведеши, литературного обзора (трех глав), содержащего свсдашя о икзпескса состава р01:а~а лекарствешоЗ, обцеЯ характеристика и осо-

6г:п;ссте1: гослс-доваетл тлгегурокоглжаиов, о«5суздсш1Я результатов, я; с л г р: ~; *. 1*1' ал ы Ю'Лчас г (трях'глав), исколов л сп;:ска цитируемой литератур:; (2;"5 )Шг.к новая: й). работа иэлсжзнана 133 страшатдх ;.:ава:-еопксйого текста, содердлт 2 схе-.м, 16 таблгщ п 24 рисунка. •";"..

СОДЕРГЛЛЕ РАБОТЫ - 7;

I. ¡^олеине додисахаршзшго кс^лплс'кйа п.'анализ его копо-спхаш'лного состава и .

Для вид слепня песня:егарздоз использовали вродаглое сырье ро-: :.*а^к:1 лекарственной, которое отвечало трсбовонипл' ГОСТа ССС? 227-53 к Государственно;! £арь:з5СЛСЕ X изд., М., 1953. • "

растжгельшХ"катеркаа обрабатывает сиосьэ- серного с

этанолсл для удалепся "»¿дрЕК пас ел, лшадов, злая ксслот, частич-■ но вротегшоз и друзгаг' йкзксаачйяу^ярыых примесей, в том чделе д не-ерглютесютс. патглагарцди акстраггрогалл вз остатка 'горячеЗ.'водоЗ гри тегллературе к затем оссгдалл этаеслоа. йзеод от.

воздушно-сухого сырья, зсльлос тЫ . В золе обнаружены каткош. Са+Ч К4", - л*а+ п 'апзош С1\

Для-демпперадизапяи полисахаридов использовалиыстод яере-осазяенвя, отанодов, .доддлсцкнйыи сагишой кислотой аз водюго рас?-, вора, диализ--через яазуоровгяаеаые мембраны, а такие фильтрование через ионообменные смоли КУ-2 (1Г*> и АВ-17 СОИ*).

.: ПсяЕсахарвдная фрашгл затем очякагась-от сокугстдушис бед-ков по методу Совага.

, ,Йшу=ендае образца декинерадазовшшого полпсахаридного ксьш-декса вредставдяют соСсй пярсикп серовато-белого шэета,. зольность ■ 0,5%, шевяге свсЗствз органических кислот (1% раствори о рН 3,55), растворима в. воде с образованием вязких растворов, . [<¿¡^+158° (с 0,22 в воде), содержат. 53,95 остатков уроносой котлета, количество иетоксп-грукд 3,8£. ... .

. Пссксцгьку-.подЕсагарКЕШЫй комплекс ромашки содержит значстель-Ейв Еашчество уроновой кислоте, . «ш псяояьзовалп для его вияеления. Бсщшеи раствори онсаллта амяонют, а также. сь:есь растворов

.аксшшта сжоейя и щавелевой кислота (равные, объема). Выход панка-. харидов составил 9-10® о? воздушо-сухого сирья, зольность 18-20?.: Сравнеяиеойразцов яотис егардяов, подученных на розных стадиях сту-ланчагой опстракадш растительного магергала оясалатом акконпя • а скееш'шваневой ккслоти я оке адата олшаниа; показало, что этп образцы :таещзпни нпалнсахзряда не претерпевают существенных изменений . на стадии ввдеяешя. Деминерализованные полисахарида, подученные от см цатодомс-выходом 6—€С» от воздушно-сухого, сарья, представит?, собой яорсотп серовато-белого цвета, (с 0,2!! в воде), кшппест-:

во урешового авгидряда 51,3^,

;. Вшояое содерканко осгатнов уроновой кислоты в дояисахарзи—' иоа кондлексе дрпводит к значительной устойчивости его цеди к кислот-ноиу гяиролнзу.ЕаЕ доказало проведенное исследование, огяелление нейт-ражьняг йовосохарадов дри кислотной-гидролизе I н раствором серной

кислоты заканчивается, за Q часов. Б _ продуктах частичного гкцролиза поело восьютасовсЗ. о0работаа ,1 н растворена серной * кислоты обнару-гены уроновая кислота а.олггоурояика; Установлено, что полней гидролиз коддеахаркдного комплекса соцветдЗ ■/■ роваетд '-: проаодга'^за'' 20 -часов. ' ■ ■ v ■ ' ■

■ Количество.нейтральнее «оносзхарвдов в гадродиэате определа-г^етодш буиатшсЯ 1роуатогроф1Ш.ЧЕХ) по методу ЗгйцевоЗ. Т.Н. п Л*анасьевоЙ Т. Г. Результаты Сила обработаны статсстическн.

Ваяо устаноалгно, что s состав полисзхарндного ксмялекса роьйгкл лекаретвгипоЗ входят остатка • следудашс ■ моносахаридов : гглакт-уроиовэя кислота ; 50, 95; галактоза гящоза 2,3^, арайшоза 10,25,* -

кситоза 20,1?, реудоза St2ï (таОл.1). : ■ ■ ,

Налдчае значительных кошчеств галактуродовой кислота указнза- : ет иа лрлнедлегзюсть иолпсахоркдного нскслокса к классу деЕтдноЕих веществ. С этой аелъэ;проведена строгал вдентпфткешаг кпвлотаого ио- : !юсахзр::да. Пол;эахарцц зглдролцзоваж 1н растворам ссрпоа- , кислота Э чаоов. ÎÎ3 гсдролпзлта -вцделалл го^оналкер; (впход 403), (с 0,1% в воде в ВЕде натриевой солп), нотори2 до дазаши БХ состодт аз остатков уроновоа кислота. Патлуроиовуэ кпалоту перовояялз.в слсз-еыЗ "этглоЕЙ а£кр путей обработка I Ц растворов серной ксслотд в абсолютном котаноде я восстшавядвалд борпщодоа - натрш. Дрд этои, де-структпровашал дестуроаовая : кислота - dicia cpenpa^sna - в почтп нейтральный глпнон. Последний гдцроллзовалп 1л раствором сордо2 кгалотн. ТЬд-роллзат нейтралгзовадд карОоиатог-î баргл. Раствор уяарпвалп, д бариевые солп южлотеых Сахаров, содеряастс;уроко:туп/д:адп£о&^ осчсемли .этанолом. Осадок ярд окпелёшзг кощсвтрпрованноД азотной кдо- ■ лотей. дал кристаллы слдзовоД кезлотн, т.ел.. 208-210°. Сдльтрат : по дав-ю БХ содержит галактозу, которуа внделллл в кристаллической состой- - : плп, т.зл. 163-164° (дз дедякоЗ уксуспой-Егсдтуги), (с 0,5? ;

в воде). .Получешшз дашшо огнозпачно СБЛдатегьствугтг, что осношшн ■ кскпсксктса саггсатархзхого .ксмллеЕса: рокагшд лекарствеппоЗ является v

- 6 -

р-галактуроновая кислота.

Для полной ддсита$гк;ш1га нейтрализм моносахаридов исходил . пояисзхорпдпкЦ комплекс подвергали кдслссншу гидролизу I п раствором серной всслоти. Тйнролкэят парализовали карбонатом баогл. Д-галактуроновая кислота с слпгоуронлдц бщзг удплеш пз гидрат зато в виде Оариевях солей при осаядети этанолом, Нейтральные шло-сахаради зроыатогро|троваля на колохже пз цехлплозн при элшроваикл. водонаошцешши буталолоп, Контроль разделения моносахаридов осудест-' вдяли методом БХ. Сракяви, содержание сиссс Сахаров, есполъзовпля дм повторного разделе 1Щя моносахаридов в аналогичная условиях. в результате 6шт ввделеш все иэносахарцдн а кристаллическом состст-шш л охарактеризовав* но фазгпк^хгасгнескш свойствам п получением ярдеталлсчесгаз врошшодгои (табл.!). -

■ . Таблица I.

*: :.; Физшсо-димотесяве характергстиш: моносахаридов латдеахорлд-' ' ' ' ного комплекса ротики

.1 * ' 1'Содержа-'! Г.пл., } } Производило ; Т.ял.про- :

| Компонент | | Од | грая* | ^ сшаров | кздодшх, |

Галактуроновая 50,9 254-156 - 5 -галактоза 163-164 ' кислота (I) . слизевая к-та 208-210

; Еялактоаз (П> 8,3 164-165 +83,0 Озотрзозо! ПО-Ш

. 151гаоза (В) 2,3 144-145 +52,7 Озотриаза! '194-196-

V, Драбянора (1У) 10,2 ; 157-159 +104,0 Озотрпазач 68-70

• ^ Ксилоза (У) 20,1 143-145 +93,6 Бензгкэдазол 221-223

: Рамяоза (У1) . 5,3 ; 90-92 +8,1 Озазон 179-181

Вещество (УП) 0,25 --1-" ''■ ■ '

■ йгеохое содерзамле остатков В-галактуроповой кислоты (50,955) ;

, 'позволяет- отнести далигахарэдгш2 комплекс кклассу пектиновых веществ. ■ Для подтверждения этого факта проведен ферыептатявгай ГЕДрачиэ пата-сагаридов рсиашки ш фоае ззведокях пектиновых веществ гогарусових и ^

-яолск. 3 качестве 4 ер^ента.'катализ врущего /гидролитический распад - ■>.■. ■ пектипсЕоЛ какротлсленулы, кспсльзовали сектолитический,препарат.

pecttnaac auo Schitsel ( i'ernk lieriin )* лм;, 1. ..' ■:'

.'y;.' ; ;" Хроматографичесхие: исследования процесса ферментативного гид-ратгза полисахаридов ромазки' показали, что наряду с галадтуроновой; = ■;. кислотой (Р„^ = 0,29), среди продуктов гидролиза обнаружены соедине- *:. л шй 1-3 с в 0,24,; 0,14, 0,06 соответственно и нейтральные моносахариды, идентифицированные как галактоза, арабкяоза, ксилоза, '.рам-коза. Ферментативный этцршшз пентинолых'веществ цитрусовых и яблок ■■':' проходит акатогично.": рсху.'шрность в значениях ;"галакгуроновой кис-• логи и соединений 1-3 позволила г-редполають, что она являются члена:' ¡si одного теологического ряда. Бос:ес наглядно это показывает ipafem' . зависимости » со п (рис,1). ' '•"/■ '.•

■ ■ v' 'i'- 2 • :."'л

Рис.1. Ií>aiia? зависимости Е : ао ■'.■

■ .'■'■ Поскольку кислотный гидролиз соединения ,1-3 дал;только га- .. лактуроновув кислоту , - эти ; соединения бкли Едентк^ицированны - как . да-, ■ .три-, тетрагалактуроноьпе- кислот; \ у' "■:.■■.■"■"".'

Пзлт^ГфергЦнтагивцца ггдрслиз полисахаридов pouazsn проходит ■' 'за-Т2С .часов в уел¿¡ких, .акалогалных заведома; пектиновым кислотам." • Из продуктов ферментативного гидролиза: с ;поксаЪ .аниона АВ-Г7 (HC0Í)

• • - в -

получепа галактуроновая гасла?а, соответствующая по <[ знко-хк:.-и1 юс-кии свойствам зоведокоцу образцу 2) -галактуроновоЗ кисло?!:. Л В результате установлено, что фермент атившй гидролиз поли- _ сахаридов рсмакки и заведо-ягс пектцновш: веществ шггрусовщ: и яблок проходит аналогично к позволяет лреддолекпть наличие (¿-1,4 связей между остатками галактуроновоЗ кислоты, ■ <

2. полнсахартцшв состав ясегтигювого комплекса роиозуи ;

, Современные кетоди установления строения.полисахаридов приме-вш лея.к пндивкцуальмм веществам, так как работа с неочищенными полисахаридами ыоает привести к выводам, весьма далеким о? истшы.^

Поскольку растительное полисахарида, как правило, яачяются смесями нескольких полисахаридов, кн уделяла большое вникание $рах—. цаонировашш полисахаридпого комплекса на ипдпвцяуальнке полисахарида.

Сракцнонпровзнис патпеахярпдного комплекса ромазжн сроведено.

.по схеме I. '.■'"■

Схе.ыа I

|1',СТСШКД1 ШЖСАШЧД)

_кг-2. ав-х7

(ДЕШМЕРАЛИЗОВДШШ! ООЛИСАХАРКД| 1 Ув0Н/0,12$/ [О&ШЗШЫЗ ШЯКСАХАР11ДI

1СРАКШЯ Ш

нвиаишяна

1ШИСШРВД

неизменный шшзшрш

i неизменный""

|голжмгаш,

ацетат нет

Ыщ

ПОЛИСАХАРИД ;

| ГОМОГМАКГУРОНДН! ! МАТОЧНЫЙ РАСТВОРГ

этанол

^ДЭАЭ'ЧцТ'

[НЕИЗМЕННЫЙ ШШТСАХАР^Щ]

iпбктовая кислота!

Учитывая рас?вор ¡кость в воде пектиновых и пектовых кислот, л а первом этапе ксследонаг^ч проведи шгкий щелочной гидролиз слояю!>1;фкцх метоксичызсс групп лектлна рсш'сня лекарственной Отошентрэдия колота а рчетьоре 0,125?) .После водкисдсгсш выпадал гедссбрпзяий осадок, котеркй отделяли от ипдкости при поиощи цент-р^угпровангл (фракция I). Раствор посла первого центр:т£угЕрования ■ оСрабативали- этаноле:.; (1:2) и полугода полисахарид (фракция П).

£ракиш I предегазлга"': ссбсй г^ср^на:! пороюк, плохо раство-в пода и водна* растворах га слот, раствсрпшЯ в водных растворам кзлочей, (с 0,2? в воде в виде натриевой соли).

Оспоешл: ко:-этонептои франции I является галактуроновая кислота (СГ>-5СД). Среди нейтральных моносахаридов методом ЕХ.обнаружена галактоза, арабиноза, ксилоза и рагжоза.

'ракш'л I практически полностью осаждается цетавлоиогл ц пере-ссаздается -через секта? кальция без изменения ксносахаридного состава. Лоэтоку в дальней ем бил применен метод Фракционирована сод' однооконного испа при лемецзгецетата натрия, Суть метода заключается в'переведении яектовой кислоты ».натриевую соль (натрлй-кеглат) :: прибавлении соли органической кислоты; содср^ацзй одноп^ен-ннл нон. При 07ом происходит резкое пЬнвяепве. растворгмоетя натриЯ-лектата л идоле;ше его в виде осадка, Образовагзйсл гелеобразный осадок центрифугировали с промывали этанолом и аяетонсм. Получили полисахарид (с 0,12% в воде в хщдв натриевой сади). В гид-

ролизато методом БХ обнаружены галактуроновая кислота и следы ксило-311. Такта образом, полисахарид является гомогадактуронапом. Из маточного раствора получили пектозу» кислоту, содержащую 77% галактуропо-вой кислоты, [<¿¡^+226° (с 0,33 в водо в виде натриевой соли). Среда центральных ыоносахаркдов методом количественной БХ обнаружены Б -галактоза 6,4^. ¿-араокноза £-ксилоза 5.&1, .'¿-ремяоза

Гомогенность пектова" кислоты подтверждена методсм ионообаен-

а.

. ' I' I .'■ I I . I. I

г- |

, ,( ■, ■ ■ ( . "1

/

пой Хроматографии на ДЭАЭ-иеялкаозе в фос£атно£ $ормо, которая приводит лкзь к одному, пику кислотного. ясяисахарзда,' появляющегося в . алвате яри вымывании щелочью с кеизмегозла ьтоносахаркдшга. составом (рпс.2). ' . -

. д

1.0 •0,9

о,е"

0.7

■ 0,с | ■ :: , ;

/ 0,5 ■ а ■ 1 '

0,4 -.0,3 . 0,2 0,1

10

20

30 40 в о мера.

■ - 50 -, ' 60 Ф р а в пи Л

-70

:: Рю.2.Шходная кривая фракционирования пектсвой нкс--, • -: лоты. роиащш лекарственной на ДЭАЭ-целлшоэе--

'.ч - ; ' .". Эдгарованив: а) 0,5 М фосфатным -буфером {градкентао), ■' /.ч■ "б), едаяы натрем (0,05-0,2 Ц).

■ ■ -. Оптическую дготность измеряли сри 490 вм. • . ' ■;■> г

• Фракция ^ П легко растворяется в воде: в в водных-растворах; кя;*

лот; [<¿1^+48° (с 0.2* В воде). - , '; \ "

Vг! Два научения' ыоносахаридного состава фракции Ппояиоахарвд

подвергали полному- кислотному гидролизу и исследовали '1летодш колп- ;

чветвегшой БХ.-Количество уронового ангидрида определяли методом". ^

иотенписшетричесяого титрования. В результате было доказано,■что в.

состав яшшсахаридов фракции П вжодят следующие ыоносахариды: уро-

новая кислота - 35£, Д-галактоза - 10,2^, 5-глюкоза - 6,6?,

■.'."■: - гп - .'.'■'-

I-араСднсэа - 10,15, В-кыкоза - 27,55, . ¿-ракноза - 6,з£. Методов БХ в нескольких скстеках раствора елей обнаружено слабое пятно У-гдокуронолактсиа (Бс^ествоУП), и . ераиююз! с заиедсмсл образце« " (тсбл.Х).

Урошвад кгсдота Ираклии п Едектйпшровакна.в вале 23-галан-тозн,т.пл. 162-163° ,0га ледяной уксусной кислоты),^] +62° (с 0,5? в воде).

ЫинорнкЗ псеисахарзд Зрахпша П не изменяет'своего моноссхарид-иого состава прн фракписнЕш оссзденли этанолом и ^ракпзспированиа с Ессользовшсец кедшзх; комплексов, ■

Такими обраэш, в результате изучения, полисахарвдвого состава с применение« ряда методов §раишошфования показано, что постааха-р:щшй комплекс ромазяи состоит-из трех кислотных полисахаридов: гдаогалактуронзна, пектовой кислоты в моторного гетерополжеахарида : в весовых соотношениях 14:6:1.

Цюведеко определение среднего молекулярного веса гоиогалахт-; • уровава а пектовой кислоты,. применив уравнение Куна-Марка-Хаувйнка!

К - константа,-' зависящая от: сгруктурн полимеров и их взадмо-- . . , действия с растворителем ; ■ „п - характеристическая вязкость. \ .'.'Л' .■:-"

: • Значение констант)в уравнении взята (К=Д,1. * 10 , оС «1,22), которые опредашш ТЬшкааном п, Орловым при изучении' молекулярного ■■■ веса пектинов различных источников, -У-;! "V

- 'Для повышения растворимости гсшгаяактуронана последний под-■ ■ вергали этерификашш ! Ц раствором серноЗ кислота в метаноле.

Электровязкосткый эффект устраняли введением добавок Л^аСТ, . УН40Н.. ; . ' .-■..

Характеристическая вязкость гомогахактуронана составила 2,91, что соответствует Му*- 28000, а пектовой кислоты 1,77, соответствует. Йу -16000.

3. -."трое готе полподнарядов

Структурное исследовании .основных поллсахаргдов голюгачакг-урокага и псктовоЛ кяслота <5цло прсдадено по схеме 2. ■

таги окислен») метапер^одатои натр^. Установлено, что при перцодат-пои окислении гоуогалаххурсцаязтшблкдазтся. практически полньы распад .остатков Д-галактурсново" кислоты; что указывает на отсутствие "1,3 - СЕЯзеМ и разветвлений в молекуле.

С дели» установления порядка связи телду оотат:;а;ш галактуро-новой и золоти гзлактурснапа провели пер::одатБо-азоткс кислотное ркис-лекке слОлПото метаиоЕого- э'лгра полиурозтда. Пр:1 окгелсшз: метаперц-. одато^ иатрля получрлл'полг.гльде г та, (с 0,5? в воде). В

. продуктах гидролиза поллаль^епай методом ЕХ обнаружены следи галакт-троиозей кпелоты.

Цатсзльдегид в дапьнейгем подвергали ок^слешаз 25^ растворов

- 13 -

азотпои кислоты п гицрелжюрали. Продукту г::лполиз,1 лсгледозадн методе:.; БХ. Обшруг.они в сравнении с зазедо-лыя образцам;! цапелевля и втпшая кислоты. Эиеленке последней в кристаллическом состоять с пл. 167-169° (проба емс-ет-л с завслскам образком винной кислота не дават депрессии) указывает на тс, чго полной кнодотоЯ окисляются группировке 1.хвд7 2 к 3 углеродной атомами. Это воз;.*сшю в случае каралозного шясла яра 1,4 порядке связи кеГчДу остатками галакт-уроновоЯ кислоты. О юадигоа пиранознэго цикла свидетельствует устойчивость I: кислотному гидролизу, в пользу этого свидетельствует налз-чне характерно: голос поглощения в области 1СОО-1ПЭ см-1, что по данным ряда авторов свидетельствует о 1Г,гсу?стп1Ш ппраноэпих г-орм.

Окончательное закл:^еяае о строении галактуронана било сделано на основании результатов нечертевазгсцего метилирования, в данпсЗ работе исяатьзовади метод Хаксмори. (Подует ответить, чго непосредственное метилирование по Хакомсрн не приводило к гзелааллд результатам, так как квегократша повторением операций' (4 раза) получали лизь проект частичного метилировался, найдено -ОСН3 31? (по Цей-зелю).Поэтоьд метилирование галактуронана проводили после предв^- ' рительной этерификашш и восстановления слояноэфнрпнх карбслспльгаст групп боргадридо« натрия до леркгпшх сшфтопас гпдроксплов. В результате из кислого пол1лазс!\рида бил получен галактан, (с 0,55* в хлороформе), зольность 0,9%, содержащий 3,95 галактуроповой кислоты. Галактан мстилпроватн трижды. Подучили спаяна метилированный полисахарид {-ССН3 - 39,9.^, в КХ-спектре отсутствует полоса поглощения гддрокспла), который подвергали кетанолизу 72^ хлорной кислотой в метаноле (1:10) и гцдролйзоваяп. I» гидролпзата перметилата (200 мг) выделили 2,3, б-три-0-;-'етлл~!>-галактозу (140 мг), бесцветньй сироп, (о в воде), которую цри ояисленяи бромом превратили в 2,3,б-три-0-ыетид-Л-гйпактано-ЗГ-лактон, т.пл. 97-99° и 2,3, 4ге-тетра-О-иетЕЛ-Ь-галактозу (20 кг), которую вденти^ишфовадя & виде аниявда, т.пл. 135-187°.

- Ra основа nza сезудьтатов гилоолиза,: Ку^ссекгроскоаял, пери- . ' ояагвого окссленгя, хтюмгогра^и^, гочеоглшатшего; метилирований с . . 1 уч«тем степени полйглзргэттяа выяснены основное чести стпзенпя га-лакттсонона, выделенного лекарственно?, котоснЯ .

мо*но потлстапять следугще'» £ормуло?; (спс; Зл. .:

V',íРгс.З. Строение гомогаяоктуровака полисахаридов вомалкз ■'". -' ' лекарствевноР, п = 40.

-iТЪлактуоснан пведставляет сойоЯ дкпегяыЯ полвсахарпд, состоя-

• оей из остатков Д-галактугоновоЯ кг.слоти в пяранооноД фогае с ^ -

: Г, 4 связяма. <¿ -конфигурация глякозпшшт певтсов диедлояеяа на осно-

ваияя структурно* исследования, а такжена осяовэкаи внсокгх знзче-

ягй полоаательиого врозеиия полссатаргдов. : :

■-Г-; На пеовом этапе структ.ушшх исследований пектовоП кгслотн ро-

лики; тгодвсахарид подергала вет^нтативномт гадголвзу. В продуктах й«смевтативкого гидролиза ойпэоуяеяв kobo-, да-,. три-, тетрэгалактуро-вовне кислот», галактоза, айбгнозо, ксилоза. .• ;

•. " При перголатпом'оксслении пектово* кислота z мягкие условиях +Г5°Сустановлено, что окпсленее.зекаРпшоется за■ 24 часа. Расход , ■ нетапервддатп натрия составкл'0,81 коля на одпо аяггдрозвево. Следовательно, полвсатарщг .яе дкеет'сильно разветвленной структури. Про-. хукт.'окисления вкделяла аз реакааонной счесв,'t^j^-850-' (с 22 в воде-* /"V гядролиэовада.'^Втидролазате"методом "EX обварены, йебешейе "коли-;

чсства галактуроповоЗ кислота п ра:-:.чозу, а ?ш:ле ксклози к галактозы.

■ В дальне^псм провели частично; л ;:сл отшй гидролиз лсхтозсЛ кислоты. Из продуктов гндроллэата г,оделила гсмсподимр, выход СО;',

+3'17° (с 0,2? в воде я гиде натри о вой соли), прп гидролизе дпет только I)-галагтуроноттую кислоту. Пол1к;ахарзд по £изико-хин2-чеекпп свойствам блпзс:; к продуктам частичного гидролиза, получеи-1шх ранее из яективдшх веществ. ГГС-сяектры продуктов частичного гидролиза (р1:с.4) содержат полосы погло-ск-л в области 1000-ПЮ су (колебании т^анезкого цикла), НС0-15С0 смГ* (полеси валеэтиых ко-лебанлй ионизированных карбокс^кшос. групп), 3300-3500 см (колсг-баикя гадроксила) и 700-1ЛЭ0, Х2СО-Х5СО с:"1 - (иере^рксавдсгд группоиде, полосы плоскостных и иеядескостапс де^оркзциошеде колебания гидроксильвкх групп). О иалкчии пирапозного цикла так^е свидетельствует устойчивость к кислот попу гщролазу полисахарида, е(-ксн-&цурацшг гл!зсозлдпш: связей предложена на основании структурных исследований и высокого солсдаггелшого удельного вращения,-

100

90

60

. аГ 70

в

' « 60

1 50

40

3600'2800 2000 1800' .1600' 1400 ' 1200 :-1рОО .800 , .....*'- •. ■ ■ частота, сц .

- рис.4. ИК-спектр деструктированной ясктовоЛ кислоты' ромадки лекарственной; -■

■■'.■'■■л- -16• -

Окончательное заключение остроенип.иектовой кислота йнлоу. сделано на основания дашшг исчераываадего ыетилированпя. Полисахарид восстанавливали боргацрдаад натрия н метилировали со Хаксыори и

В результате получили сполна чгетндировантЗ полисахарид, [с(.]^+1Э6° (с 0,53 в хетрефетм);': найдено -0а'3 - 40.06Й (дальнейшее метилирование:не гфиводжю*к уведяченга>-катичества -0СН3),\ в КК-спектре отсутствует полоса поглощения • гпдрокспла.

Ери исследовании продуктов деструкции: метилированного полиса-'.

■ харгда методом БХ. получили, слояшй набор метилированных моносахаридов, поэтому дальне^ее :жатедоваш:е проводила после предварительного разделения на "колонке из; целлялозы в системе бутан од-этанок-всда (5:1:4). В результате пелучхлд 6 ЗракздД;:садераагпи смеси из двух, •

* трех кегплпровашшх ыоносахарлдов.':Дт вденти5пка1Ши метилированных коЕосахзрцдов проводили повторное разделение; та:колонке из целлкаосы ■

. .'в'тех ае условиях. Из сивса »этилированных ионосахаридоа (1,6 г) подучены 2,3,6-три-0-катил-^)-гагактозз (5Ш мг), :2,3,4,С-тстра-0~^зтил-О-галактоза (П5 иг), 2,3,5-три-О-м стшг- I. -арабкноза (60 иг), 2,3,4-триЧкыгтил-£)-всплоза (80 мг).'з,4-да-Скке?ид-1-ращ10за (20 мг).

Бцдалание в качества главного продукта"гидролиза 2,3,6-три-О-

* ыетпл-Л -гагактоэи (920 мг) свидетельствует о наличии скедетнсй струн-' тури, состоящей из остатков 5-галактуроиовоЛ кислоты, связанных ■■'/■!■■

.-■ е£-Т,4 связяк:; ■ - ■

'!."■.. . Получение зпачитсдыпя: яоддчеств сполна котнязровашшх ¿.-арайпнази а 0 -ксилоза показывает,-что энд связаны ксвалентаой '■■'; свйзьэ с основной скелетной структурой полисахарида и ппде единич— вых ответвлений. То жекешо сказать и. о 'А-галактозе, выделенной ;■ да продуктов.деструкции:серметилата в.значительных количествах (115 мг). ■■ ■

-.' Выделение _ 3,4-дп-0-иетлл-¿-рамнозы

созвсгдло предположить, ■

■что она вклгпена а осяашуц.:цеаь 1,2-- углеродшшд атомами.

■ ■ . - 17 -

' По оезультатам гядюлсоа, хроматогоа£аи, ГГС-спектроскояпв, пвпр.олотяого окисловил и ссчепшвзтгего кетгливстишвя основяве чет>-тк стсоеНЕя- пектово* квелотя гюлапнп лекарственно^ можно пведстаяить , в веде следттего готового ¿таилента

-■ . . газ £ - галактоза аоабпкоза ксилоза

■ Рг.с.5. Л^агкеят струкгтш псктовоЯ кислот» ромапки лекар-, / ствепноР. *'•,

. . Основная подпеататтлная цепь состоит из остатков 2-галахт-уроново*.кислоты в пяраио'зпоя Форме, связонпит ¿-1,4 положеншвии Не^гоалБЦРе мопосатаспдн галактоза, асабпвозз, ксилоза соединена по-лузггетальнвмп грдрокскламп со вторым шш ■ третьем уг.^роднста степса« ■ оеяовиоР пеяя в вяяе едпнятвги- ответвления, что установлено методом .. исчерпыватчпзго ШТИЛИВОТШНЕЯ;

Ромноза, которая находится в полисахариде-в везвачательнш: количествах (1,55!б\ по-видимому, вюточева в основную вйлйсагараияуп' пвпь. • ' ■ ■*

■■.;•' V В У 3 0 . Д Ы

I; ИЗ соппётвЯ ромашка лекарстве иной выделен водорзстзоршшВ полвсахарядный комплекс (препарат Вамилозта1 , крторэй оря бвологетес-

KJ2C 1!сдита1^тх шпагат шсокуи ант;:яавет:уа" aîîTnmoc?!». Препарат усг.Етю лроггл испыталкя.

: 2," Ус?ано?,ле::э, что в состав полисахаридкого комплекса входят D -галак тур опсзал к полета - SC.Î-5, D-галактоза - 8,35,. Л-т.гг-лога - 2,35, D-r.cvxoza - СОД^.^Х-арабшюза-:10,25, ' L -рамноэа - 5,3.'', которис охарактеризованы; ржтхъ-пгческ!::.^ яр отведши. :■■'-',■.. '■■ _ '..->■'

■ 3. Ирог.сдопо оргвгателиюз изучение условий £ср;.;еитат:шного и кислотного гг^рогдза полпопхарпдпого ка-плекса рока^ки и пектнно-енх.кг.олот детрусоса: и яйло;:. Показано, "что "характер и скорость ткяролиза акрлопгчш!. Э?о позволяет' сделать вывод о << -1,4 порядке связи. . . :

,*:■." 4. Делите по ускоса.арлдцсиусоставу,, характер кислотного и . Фсркептатаюго гг-дра-пза,, а такие к»сское содерглндо остатков : Э-ггиактуроковоД кделоти (50,9^) ■позволили.' otijûcth кегдлекс рлекарственной к классу.лектлноввх веществ,

5. Изучен дадксахарвд^Д состаз'пектинового комплекса, установлено, что яскяяеко-.в -оейоьши: состоит из трех различию: полисахаридов гск-'огалактурошша, пектовоЗ кислоте п напорного патио аязрт;-да'.в весов:ж соотиосецглх Ï4:G:I. Патпсакарадн -охарактеризовали со

физгао-хкотеекпгг свойствам и количествеинсэд коносохаридно^у составу. '

6. Установлено строение осиоиаа: патпеахарпдов пектинового

' кеадлскс ас сцв е ткй р^гпзп лекарственной гс-югалактуронака и пекто-

кпелоти кзтода-л гццра>жэа (кислотного п £ер«ептатшшого), ih-• спектроскопии, серкодатного оглслешм и качершваатцего г*.атдаярова-кия: ■ - -'.;.■■'■'.

.: . а) гсу.огалаг.туронап является линейным патисахаридом, состоянии из "остатков J) -г^л^туроноЕой кпелотн в шфанознсЗ форме с ct~ 1,4,порядком связи,- Средний кслекудярюй вес - 28000;

б) сектой кислота состоот из остатков ' 2)-гадактуроповоЗ

- 19 -

кислоты с <¿-1,4 лорядксп; связи, содер¡жаиих в качестве едаиичша: от ветше пай остатки D -галактозы,. ¿-арабивозы, D -ксилозы прсаер-но 7 третьего или четвертого звена основной цеди, связашоя полу-■ азетадькши гадроксолака-со'тггсрым или трстыаг углеродцымл атомама .основной пени/ Средни» ыолекулярныЯ вес ~Г6000.

Ыа основании дашшг исчеркивавшего «стилирования исхно сделать вывод о еклечснпи в цепь полисахарида отдельны! звеньев L -релогазы 1,2 -углеродишя атсмамз.

7. дашше хтаического исследования содгсахзрсдов рскапкн иэ-лользогаи! для контроля производства 'при наработке препарата для клинических взпнташй, - при фармадологпческих и клинических испытаниях, а таете используются при разработке норкатдина-тегиаческог-дскументашш на садилозид-субстакапв и гранули-кпт'-юзщ;.

Основное содерааш» работы изложено в следугсяс публикациях;

1. А.Г.Горин, А.И.Яковяев. ПС, 515 (1971).

2. А.Г.Горин,- A.1Î. Яковлев. Тезке и докладов У Веесстансй яон^ерешшя по химии и биазсЕЯШ углеводов.,!.'.., 1972, стр.38. -

3. А.Г.Горин, А.И.Яковлев. ПС, 137 (1374).

4. А.Г.Гсрш, A.II.Яковлев. Б сб.: Вопросы разработка'ноют лсяарст-' вешан средств, изд. КШ, Рязань, 50, '5 (1975).

5. А.Г.Гсрин, А. {[.Яковлев. В сб. : Вопросы разработки нош* лекарственных средств, изд. ИЛ!, Рязань, 50, 9 (1975). '

S. А.Н.Яковлев,. А, Г. Горин. Материалы D ОзероссиЕского съезда $арма: певтов. Свердловск, 1975, стр.314. 7. А.П.Яковлев, А.Г.1Ърин. ХПС, IGG (1977).

Tupi'fil). ■ .'ßt.i.t)£i.i*IHü..