Синтез и изучение свойств структурных аналогов фактора активации тромбоцитов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

Работа выполнена нл кафедре Химии и технологии тонких органических соединений Московской Государственной академии тонкой химической технологии им. М.ВЛомоносова

Научный руководитель: доктор химических наук,

профессор Серебренникова ГЛ.

Официальные оппоненты: доктор химических наук,

профессор Молотковский Ю.Г.

кандидат химических наук, у

старший научный сотрудник Мельник СЛ.

Ведущая организация: Московская Государственная академия

ншцевой промышленности

Защита состоится. " /№/¡£¿,/¿-<1- __1995 г. в ' часов на

заседании Специализированного Совета Д 063.41.01 при Московской Государственной академии тонкой химической технологии им. М.В.Ломоносова по адресу: г. Москва, пр. Вернадского, 86.

С диссертацией можно ознакомиться и библиотеке МИТХТ им. М.В.Ломоносова (119831. Мосгсва, ул. М.Пироювская, д.1) Автореферат разослан " ¿з? " ¿¿¿¿>/>76- • 19Э./гГ

Ученый секретарь Специализированного Совета,

кандидат химических наук г, г. Лютик А.И.

д гг< <__

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ' АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Фосфолипиды с простой эфирной связью широко ^распространены в природе. В небольших количествах они присутствуют во всех тканях животного происхождения, а также выделены из многих микроорганизмов. Помимо того, что они, как и все фосфолипиды, являются структурными компонентами биологических мембран, фосфолипиды с простой эфирной связью проявляют разнообразную биологическую активность. Так, среди шпе обнаружен сильнодействующий биорегулятор широкого спектра действия, 1 — О—алкил— 2—О—ацетил—ел — глицеро — 3 — фосфохолин (фактор активации тромбоцитов, ФАТ). ФАТ зыступоет как медиатор многих биологических процессов: стимулирует дегрануляцшо и агрегацию тромбоцитов, увеличивает проницаемость кровеносных сосудов, модулирует внутриклеточную сигнализацию. ФАТ также играет важную роль з ряде физноло — гаческих и патологических процессов, таких как аллергия, гипо— тензия, анафилаютческий шок п др. Непосредственный предшест— вешшк п метаболит ФАТ, 1 — 0—алкил—яп — глицеро—3—фосфо— холил (лизо—ФАТ), является сильным им'туностимулятором.

Для выяснения мкгипвиа взаимодействия ФАТ с клетхамн— мгнпенямп было синтезировало большое количество его структурных аналогов. В результате различных модификаций были получены соединения, обладающее, гак я ФАТ, тромбоцит—агрегирующей и пгпотензипной активностью, а таюхе вещества, специфически ингн— бнрующио активность ФАТ/ ■

Поскольку сам ФАТ/ нельзя использовать в терапевтических целях пз—за его мощного тромбоцит—агрегирующего действия в

* В руководстве работой принимала участие кандидат химических наук, ассистент И.П. Ушакова.

«

концентрациях, необходимых для проявления других видов физиологической активности, были предприняты успешные попытки разделить различные биологические эффекты с помощью структурных модификаций. Так, например, были получены соединения, обладающие более высокой гипотензивной активностью, чем ФАТ, не в значительно меньшей степени способные вызывать агрегацию

* . V /

тромбоцитов и нейтрофилов. Бы/ш также синтезированы иммуно— модуляторы, не проявляющие тромбоцит — агрегирующей активности и не так легко метаболизируемые, как ФАТ. В ходе этих исследований было обнаружено, что многие структурные аналоги ФАТ обладают сильным селективным противоопухолевым действием: активируют цитотоксичеокие макрофаги, ингибнруют пролиферацию злокачественных клеток, вызывают их лизис, а в ряде случаев — структурную и функциональную дифференциацию, препятствуют образованию метастазов, уменьшают вероятность химического канцерогенеза. Обнаружено, что некоторые фосфолипиды с простой эфирной связью обладают анти — ВИЧ эффектом. Таким образом, получен новый класс высокоэффективных терапевтических средств.

Дальнейший прогресс в исследовании механизмов связывают ФАТ со специфическими рецепторами клеток—мишеней, а также изучение причин иммуномодулкругащего, цитотоксического и противовирусного эффектов фосфолипндоБ с простой Эфирной связью немыслим без получения и тестирования новых структурных аналогов ФАТ, Кроме того, такие исследования актуальны еща и потому, что позволяют получить новые высокоэффективные терапевтические препараты.

В связи с вышесказанным представлялось целесообразным синтезировать набор модифицированных фосфолинидов с простой эфирной связью, отвечающих общим требованиям к структуре для

появления противоопухолевого, противовирусного и ФАТ—антагонистического зффектоп с целью проведения биологических йены — тгишй и установления взаимосвязи ¿чежду структурными модификациями и биологической активностью.

Настоящая работа ввдтолиена в рамках плановых исследований, проводимых на кафедре ХТТОС МИТХТ им. М. В. Ломонос ва по теме № 1Б—18 —865 "Получение лязндов, биорегуляторов липидной пр1фоды н их коныогатов, изучение поведения п биологических системах, нспользовапн-й для создать физиологически активных липидкых пр^пордтов и д:тг:оссг.пал форм" (помер государственной регистрации 01?»2G01S102).

HBûii-il-'E.CîbL. Сятез структурных аналогов фактора акта— гпции трсОоцитов с целыо itayiciKL'i влияния структурных модификаций по С(1)— и С{2) — положению глицеринового скелета на физкологэтоскую активность полученных соединений, а именно, на способность к специфическому связыванию с ФАТ—рецепторами, на иммут ïc ! '.одулиругощую, цитотокстпескую и. апти—ВИЧ активность. Наработка ,кодпф:1Ц1фово1П1ых фосфалнпндо» з количествах, достаточных для проведения биологических ьспытаиий.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА, В работа впервые осуществлен синтез 1 —О— п 1 — S— алхилышх фосфатидилхолшюз с аллнльнон группой прп С{2)—атоме глицеринового скелета. Впервые получены фосфа — игдтихолины, имеющие 2'— гцдрокси— или 2'—ацетокси—замести — толь в мирной плглльпсй цепи н трудномстаболиз1фуемый фрагмент при С(2) —атоме глицерииопого скелета (метоксигруппу или атом хлора). Впервые синтезирован 2' — м'етокси — аналог ФАТ с непри— родной конфигурацией асимметрического центра глицеринового скелета. Получены новые данные по способности сиптезиров4шшх соедгаюнш"* к специфическому связыванию с ФАТ—рецепторами, а

также предварительные данные относительно противовирусной активности синтезированных соединений.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Синтезированные соединения могут бьггь использованы для детальных биологических исследований с целью создания новых терапевтических препарата*, л также'для изучения особенностей связывания ФАТ с клетками— мишенями и механизма противоопухолевого и противовирусного действия фосфолипидов алкильного типа. Данные по корреляции биологической активности полученных соединений с нх структурой могут быть использованы в планировании синтеза липидов с заранее заданными свойствами.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕН ИЛ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ;

синтез 1—О— и t —S—алкнл—2—О—аллил—гас—(тио)глице— ро—3—фосфохол инов;

синтез фосфатиднлхолинов с 2'—гидрокск — или 2' —ацетоксн— заместителем в 0(1} — алкильной цепи и метоксигруппой или атомдо хлора при С(2)—атоме глицеринозого фрагмента;

синтез 2' — метокси — аналога ФАТ и его изомера с неприродной конфигурацией асимметрическог-о атома глицеринового фрагмента;

данные по ьлиянию структурных модификаций по С(1) — м С(2)—положению глицерик вого скелета на физиоло- лческую активность синтезированных структурных аиалогоь ФАТ.

АПРОБАЦИЯ: Результаты диссертационной работы частично доложены на Российской конференции "Биологически шспшныо соединения, синтез к использование" (Пенза, сентябрь 1992 г.)

ПУБЛИКАЦИИ: По материалам диссертационной работы опубликованы 3 статьи, тезисы 1 доклада, два статьи находятся в печати.

V - 5 - у

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА. РАБОТЫ: Диссертационная работа

■■■■■ ■ ." - ¿¿Г

изложена на ... Стр. машинописного текста, содержит ... рисунков, /^Г.таблиц, п состоит пз следующих разделов: введение, литературный обзор, обсуждение результатов, «доводы, сгшсох литературы,

включающий ... ссылок, приложения.

) ' »2»

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ И ИХ ОЕСУ51СДЕНИЕ Из литературных данных известны основные направления модификащт структуры молекулы ФАТ, приводящие к . нстезновешко способности вызыв&ть' агрегацию тромбоцитов и появлению ФАТ— атаготшёгпсского, цнтотоксипеского и щм>зд»мфусиопу йффзхпоз (Рис. 1).

Налболго ощутагю злшпст на физиологическую активность вышеперечислештых Т1Шоа изменения а глицериновом скелете и в непосредственной близости от пего, а тазихе в полярной пасти мо— легсулм.

Тазу-замена простой эфирной связи п зп— 1 положении на тпозфирную, Ьмпдную или карба1ютш.нузо фугаоиО! пли впадение в от—2 положение вместо ацетильной группы любого небольшого трудноиетаболпзирусыото зокеспггпля (корогхоцепной алкиламид— пой, алхилг.арбамоильной, алхоксигруппы илистому галогена) при— содиг х значительному спгсхеишо или исчезновению тромбоцит— агрегирующей егшпжсяяа я появлению шггагоиизма к ФАТ и противоопухолевой активности

• К исчеэпозеишо способности вызывать агрегацию тромбоцитов и Потере пшотснзивнсго эффекта ведет также замена фосфохоли— повой группы на объемный патиониын заместитель. Некоторые модификации такого рода приводят к усилению противоопухолевой

и протиьошгруснсй активности, повышают способность к специфическому блокированию ФАТ—рецепторов.

® . "

Р~1 V -^о- 4СН2(СН2)ПСНЗ

Ч.

©

1 - изменение длинь: и природы жирной цепк

2 - замена простой эфирксй свази яа тиээфнрную, амидную,

карбимоильную функции

3 - изменение конфшурадии оптического центра

4 - удаление или замена слола'оэфлрпой связи на грудиоматаболд-

зируемы« функцкк

5 - кзмепение микы и природ! | заместителя

6 - удаление или замена фосфсрильной группы ка другяе функция

7 - изменение колнчестьа металепоких групп, сведение дополни-

тельных заместителей

8 - замена тримьтиламхонкгвэй группы на катнешшь Ы-. Р-, для 5- '

содержащие структуры, о там числе грисличесшге

Рис. 1 Направления модификации структуры молекуи ФАТ.

Конфигурация оптического цэнтра имеет важное значение для связывания с ФАТ—рецепторами Соединения с непрнредной конфигурацией оптического центра не проявляют тромбоцит—агрегирующей и гипотензивной активносш. Слияние конфкхгурацнн оптического центра на противоопухолевую активность неоднозначно. Некоторые опухоли более чувствительны к изомерам природной конфигурации, друтна — к изомерам неарпроднек конфигурации, •фзтьи одинаково *пл>сте:тголы«ы к соодшкл;:;1ям различной

конфигурации. Более того, опыты in vivo и in vitro часто дают противоположные результаты. Поэтому соединения, представляющие интерес с точки зрения противоопухолевой активности, мы получали в виде смеси оптичеехкх изомеров.

Д\я изучения влиянья структурных модификаций по С(1)- и С(2)— положениям глицеринового скелета на физиологическу: з активность фосфолипидов с простоя г-фзфной связью нами были синтезированы следующие соединения: 1 — О—октадецнл—2 — О— аллил— гас—гллцеро—3 — фссфохолии (1), 1— 5— октадецнл—2—О — аллил—кс—глн^гро—3—фзеф'охолии (2), 1 - О— (2'-(R,S)— гидр — оксигексадГк )—2—О—i íctxw.—гас—глнцоро — 3—фссфохолин (3),

i — O—-шдрохсптсксэдоцнл) — 2 — дезокси—2—хлор — гас—

в

глицеро—3—фосфохолия (4), 1— О— (2' — (/?,S)— ацетоксигехсаде — цил) — 2—О—мстил— гас— глицеро—3 — фосфсхолин (5), 1—0~(2' — (fí,S)—ацетохенгскегдецил)—2 —дсзскси—2—хлор — гас—глицеро — 3—фосфохолин (S), 1 — О— (2'—кетотгсигекседецил) — ял — глицеро — 3—фосфохолип (7), 3— О — (2' — (i?,S) —кетсхсшчжсадецкл)~5л — глицеро— 1—фосфохолии {0}, 1 — О— (2'~(R,S)~метоксигексодецил)-2— О—ацетил—еп— глкцеро — 3—фосфохолхи^ (9} я его изомер с не— природноГх конфигурацией хиральпого центра глицеринового скелета, 3 — О — (2' — (i?,S) — метокс1ггексадец!1л) — 2 — О— ацетил—sn—гли — церо— 1— фосфохслш! (1S).

SCicH» ОСН2СН=СН2 О. С€ И 2" Н Н 3)3

<*>V

(2)

COC1SH37 . ОСН2С»=СН2 '—О. .GC".2CH2N*(CH3)3 О о

ОН

1

-ОСН2СНС14Н29 -ОСНз

-О^ ^ОСН2СН2Ы+(СНз)з

(3) 0С{0)СНЗ

—OCH2CHC14H2Ü

г •

—ОСНз -О^ ^ОСН2СН2М*1СНз)3 о с

(5) .^СНз

—OCH2CHCI^:2S

но»— —»н

—О. ,ОСН2СН2Н4(СНЗ)3

0>V (7)

ОСНз I—ОСН2СНС14Н29 СНзС(0)0в.-4—iH

'—О^ xOCH2CH2N*(CH3)3

О)

О'

он I

г—ОСН2СНС14Н29

I—С|

•—О^ ^0CH2CH2N+(CH3)3 о^о-

(4) 0С(0)СНз

г— ОСН2СНС14Н28

}—Cl

L-O^ ^ОСН2СН2Ы*(СН$)з

opV.

J. (в)

^ у0"9

г—OCH2CHC14H29 Н»—{-»ОН

O^ xOCH2CH2N+(CH3)3

o^V

(8)

OCH3 г~ОСН2СНС14Н2в Н"«4-^ОС(0)СНз

I—О^ хОСН2СН2Н*(СНз)з

(10)

—ОС18Н37 —ОСНЗ -О ^OCH2CH2tl^CH3)3

о*

В качестве соединения сравнения для биологически:: тесюв нами синтезирован 1 — О— октадецнл—2— О— метил—гас—глицеро — 3—фосфохолин (11). В настоящее время это соединенна достаточно хорошо изучено в плане его противоопухолевой, противовирусной и иммуномодулиругащей активности и поэтому почти всегда используется для сопоставления' данных по физиологической активности полученных аналогов с ранее синтезированными и описашими в литературе соединениями.

Соединения 1—0 и 10 получены впервые.

1. Синтез кэ/^фтг.гфояг '.отес фосфатп.дплхолаиоз с перззпетался-

СШ-олнпльаой цепью

3.1 С"."ггаз 2-<?-Ш1АПЛ5.тлх фзефзтадплхолгшоа Впедонма оллильной группы по С(2)—положению глицеринового скелета отвечает общим требования!! к модификациям структуры молекулы для появления противоопухолевого эффекта и нечезковитя тромбоцит—агрегирующей активности. Кроме того, наличие тершшальной двойной' связи открывает перспективы получения ряда аналогов на основе общего предшественника — аллнлыгого производного. Модификация аллильного остатка путем введения различных' функциональных групп- делает возможным получение коютлексных соединений фосфолиппдоз с другими классами вещретя пли создание иммобилизованных препаратов.

Поскольку известно, что затаена простой эфирной связи на •пюгфкрнуга приводггг к исчезновению тромбофгг—агрегирующей етггг'.аносп; и дальнейшему увеличению цитотокспческого эффекта, было целесообразно также получить 1 — таоалкнльное произйодпое.

Исходные 1 —О—октадецил—пзс—г/уицергш (12) и 1—5— октадецил— гас—тпоглицернн (13} получали по ранее отработанным ме —

•годикам. Первичные гидроксильные функции соединений 12 и 13 защищали тритилированием (Схема I) и полученные •фитильные производные 14 и 15 алкилировали аллилбрсмидом. После удаления тритильиой Защитной группы и мягких условиях переэтерификацией триметилхлорсиланом на силикагеле получали 1 — О—октадецил— 2— О—аллил—гас—глицерин (18) и 1—5— октадецил — 2—О—аллил— гас—тиоглицерин (19). Производные 18 и 19 переводили в соответствутохцие фосфатидилхолины 1 и 2 по методу Брокерхоффа последовательным взаимодействием с хлороксидом фосфора в присутствии триэтила: -.ина и л—толуолсульфонатом холина ь прксутсткии пиридина в хлороформе.

-ХС18Н37 —ОН —ОН 12,13

ТгС1

~ХС18НЭТ

—ОН

—ОТг

14, 89% 15

СН2—СНСНгВг --—:-»

КОН, бензол

Схема /

ЕХС18Н37 ОСН2СН—СН2 с

-ОТг

16, 77% 17

51МезС1, I силмсаг*ль

—ХС18Н37 —ОСН2СН=СН2 —о.

^ ^ССН2СН2Мч(СНз)з

1, 60% 2, Р0%

1. РОС1з,Е«зМ

2. НОСЯ2СИ2Ы+М9з ОТ»", Ру

3. НгО

-ХС16Н37 - ОСН2СН=СН2 -ОН

18, 70%

19, 72% мз соед.13

Х = 0 (1,12,14,10,13) Х = 3 (2,13,15,17,1!))

1.2 Синтез *-ОоктаАе1щл-2-0-иетил-гас-глпдеро'3-фосфохолпна 1 — О—Октадецил—2—О—метил—гас—глицеро—3—фосфо — холин (11) получали аналогично соединению I. В качестве алкили — рующего агента использовали метилиодид (Схема 2).

Схема 2

ЕОС18НЭТ |—ОСчбНз?

СНз1 аМвзС!

он —--е»- —осн3 —;-в»-

КОН, бензол I скликаголь

ОТг 1—ОТг

14 20 21, 41% на совд. 14

1. РОСЦ.Е.зМ г-ос^нзг

2. НОСИ2СН2Ы М*з ОТ« , Ру --I»» I—ОСНз

3. н*>

1—О^ ^,ОСН2СН2Н*<СНз)з

о^-о-

11. 73%

2. Спптез модифицированных фосфатндплхолиноз с заместителями

в жирной цепн

Известно, что фракции эфиров глицерина, выделенные из жи — ютных тканей, содержат минорные количества 1— О— {2' — мет— >кскалкял)—5л —глицеринов. Домшшрукуцим соединением е этой руппе является {2'й) — 1 — О— (2* — метоксигексадецил) — ял- гмще — 1ин, сначала выделенный из иечени гренландской акулы, а затем олученный синтетически. Обнаружено, что у мышей это оединекие икгабирует рост опухолей и образование метастазов, тимулирует иммунный ответ. В связи с эткм представлялось елесообразным получить модифицированные фосфолишгдм с 01 окск —заместителем а р — положении жирной алкильпоа цапа, а иксе соединения'с другими 2'— узмеспгголямг:, чтобы изучи??, мвтие таких структурных модификаций на гоп^йомодг.'лттаз/юс".-

и противоопухолевую активность. Интересно проследить изменение способности взаимодействия 2" — метокси—аналога ФАТ и его стереоизомера с ФАТ—рецепторами. Возможно, увеличение объема жирной цепи в непосредственной близости от глицеринового скелета в результате введения 2' — заместителя будеяг оказывать на биологическую активность влияние, сходгое с влиянием замены простой эфирной связи на более объемные тиоэфириые, омидные, карбамоильные и сложиоэфирные связи.

По некоторым данным, для возникновения противоопухолевой активности более важен набор заместителей, чем их расположение относительно глицеринового скелета. В связи с этим интересно сравнить результата биологических тестов для груЪи соединений 3, 7, 0 и 5, 0, 10, которые являются структурными изомерами.

2.1 Синтез Т-ззмещешхых фосфгтпдплколхшба с птасхгЗсАЕисруо* мимп грузшошх в С(2)-прлозхс1шп глпцсрппоссго скелета Свободную гидроксзШлиу»о группу 1 —0—(2' —— гидроксигексадецил) — 2,3 — О— изопропилидеп—гас—глицерина (22), полученного, по ранее отработанной методике, елкилировалк бензилхлоридом (Схема 3). Изопропилнденовую защитную группу удаляли метанолизом в присутствии каталитических количеств л— толуолсульфокислоты. Первичную гидроксилыгую группу 1—О—(2' — (Д.Э) — бензилоксигексадецил) —лас—глицерина (24) защищали тритилированием. Тритильноэ производное 25 елгашфовали метилйодидом, получая 1 — О — (2' — (7?,5) — бепзилоксигексадецнл) — 2— О — метил— 3 — О—тритил—тс—глицерин (20).

Схема 3

Т

-оснгснсини

Х-

Вх!С1

КОН, 8*изол

Еси :

ОВг)

I

ОСН2СНС14Н20

X

л-ТСХ

метанол

ОВг)

I

ЕССК2СНС14Н29

он

он

Н ез%

03

I

ЕОСН2СНС14Н29

ОСНз ОТг

26, 84% на 24

1. РОС»з. ЕЦМ

2. НОСН2СНгМ+(СНз)з ОТ»?, Ру -£»»

ТгСК

23, 85% ОВг!

Г

—ОСН2СНС14Н» —ОН -ОПГг 25

СНз!

КОН, бензол

81М«зС!

склнкагаль

Р

ОВ*1 1

ОСН2СНС14Н29

3. НгО

Г

г-1

-ОСНз '—ОН

27, 91%

ОВг!

I

ОСН2СНС14Н29

ОСНз

Н2,Р<*/С

• I 1 | 5а»»

'—о

х ^ОСН2СН2М+(СНзЬ

О*^ 28, 89%

ОН

I

1-ОСН2СНС14Н29

—ОСНз

АсгО

О.

>с

НСЮ4 0сн2снгм*(снз)з

0С(0)СНЗ

-оснгснс^га.

-ОСНз

—о.

О" 3, 75%

о^Ч"

3, сэ%

ОСН2СН2Н+(СНз)з

Сгрма 4

08г1 ОСН2СНС«4Н29

С® II

I

ЕОСН2СНС14Н2З

ОТ»

ОТг

29, 81% чм 24

1. РОС1з,ЕезЫ

2. НОСН2СН2М+КвЗ ОТ«',

РУ

3. »20

У ОЗх)

I

-ОСИ2СНС14Н2З -С!

ОВг!

I

-0СНгСНС1«Н2э

—с» —он

31, 70% (и 20

аи.ЪзС! «вг——

ис! уОМг

ОЗИ

I

-осм^ис^га

-С!

-ОТг 20 '

И*, Р01С

о^-о-

32, 81%

ОН

I

—ОСН2СНС14Н2З -С» -гз

О^О-

52% '

ас20 НСЮ4

0С(0}СНЗ -ССН2СПС14Н2Э

-С1

-о.

О'-' О"

с, ез%.

После удаления грцгалшой мацитаой грухшы и фосфориля— рования получали ,1—0 — (2" — (/,',5) — бокзилоксш-ексвАсхусл) — 2— О— метил—глицеро—3—фосфо::олкн (23). Удаление бензшьцой защитной группы к последующа &цсшл;фО&аш:& свободной гиД—

роксильной группы фосфолипида 3 уксусным ангидрндом в при сутствии хлорной кислоты давало 1 — О— (2' —(fi.S) — ацетоксигексо — децил) — 2—О—метил—гас—глицеро—3 — фосфсхолин (5).

Для получения 2 — дезокси—2—хлор — производных соединение 25 переводили г. тозильное производное 29. а затем меняли то — зильную группу на хлор пс реакции ФинкельШтейна (Схема 4). Использование на этой стадии DMF позволило избежать частичного отщепления тритильной защитной группы, которое имело место при проведении реакции в метклэтилкетоне. После удаления тритильной защитной группы получали 1 — О— (2' — (К,5) — бензнлоксигекса— децнл)—2—дезокси —2—хлор—гяс-глицерик (31), который затем последоьатльно подвергали фосфорилированюо и гидрогенолизу, что давало 1 — О— (2' — (Я,5) — гидрохсигексадецил) — 2—дезокси—2-хлор—гас—глицеро—3 —фосфохолин (4). Фосфолипид 4 ацетили — ровалн, получая 1— О— (2* — ацетоксигексадецил) — 2 — дезокси—2—хлор—гас—глицеро—3—фосфохолин (б).

2.2 Синтез 2*-метоксн аналогов ФАТ

Свободную гидроксильную группу исходного 1— О—(2' — (#,£) — гидроксигексадецил) — 2,3 — О— изопропк\иден—гас—глицерина (22) . алкилчровали метилйодидсм (Схема 5). ГТосле удаления изопропн — лиденовой защитной группы производное 34 переводили г дифе — нилметнл ллилоьый эфир, чтобы защитить первичню гадроксильную группу, а затем дцилировали миристоилхлоридом. Полученный 1 — О— (2* — (R,S) — метоксигексадецил) -2 — О—миркстоил—гас— глицерин (35) фосфорилпропали по Брокерхоффу.

1 — 0- {2'~(ñ,S) -Метозснгексадйцнл) — 2 — О—миристоил — гас—глицеро —3 —фосфохолин (35) подвергали ферментативному гидролизу фосфолипазой А2 яда эфы Echis miütusqu amalus, которая расщепляла знантиомер природлоГ' конфигурации до 1 —О—(2' —

(Л,5)-метоксигексалецил)--Я1—глицеро—З-фосфохолина (7)5 не затрагивая неприродный 3—О—(2'——метоксигексадецил) — 2— О—миристоил—зп—глицеро — 1 — фосфохолин (37) (Схема 6), [После хроматографипескогб разделения смеси соедшгенне 37 гидролизо— вали метилатом натрия до 3—О— (2'—(Л,в)—иетоксигексадецкл) — вп—глицзро— 1 — фосфохолина (8). По данным поляриметрии соединения 7 и 0 являются зпнмерами относительно асимметрического центра глицеринового фрагмента.

Схсиа 5

Е

Г

0сн2скс-}«нга

X

СНЗ>

^СИз -ОСН2СНС14Я23

КОН, бензол

22

п-тс;:

ОСНз

ЕОСН2СНС14Н23 1' ^^¿С!. Ру 2. С1-П27СОС]

он --—-с*-

I ■ ■ - ■

-ОН 34, 91% иа 22

1. РОС!з,Е«зМ

2. НОСНгСН2Я+(СНз)з Ото". Ру

игтг;»гя

,ОСЯ3

ЕОСН2СНС14)12Э осезод!» — сл

4« ГГЛ* : -

3. НгО

:Е

ОСНз СС(0}С1,Л27

..Лр«, ■

ТР

Лнзофосфатидилхолншл 7 и С йцгтнлирсиали уксусным ангидридом в присутствии хлорной кислоты в хлороформе, получая;!-^-

Схема б

^СНз

ЕОСН2СНС14Н2»

ОС(0)С13Н27

О^ ^ОСН2СН2М4(СН5)з

о^-о-

Зв

фоефолмпмс Аг

^СНз I—оснгснсцнгэ ко—I—н

ДсО

О^ хОСН2СН^1*{СНЗ5З о^-о-

7, «О*

1АС20,

I НСЮ4

^СНЗ —ОСН2СНС14Н2Э

и

—о о'

Ог Й,СЗ%

ОСНз

I—ОСН2СМС14Н29

Н*4-«0С(0)С13Н27

•—о^ ^оснгснгн^снзь

о^ог зг, ва%

оснз I—0снгснс1«н2з Нг=4-вСН

х .осн2снгМ (снзЬ

С

¿к*

О, 01%

ОСН2СН-Н*(СНз}з

оснэ

I—ОСМ2СНС14Н2Э

НваД<«эОЛс

Ас10, НС!0.}

'—О. .ОСН2СНг!1+(СН;Ь

10, С214

О — (2' — (Я,5) — метоксигексадецил) — 2 —О—ацетил— ел — глицери—3— фосфохолин (9) и 3—О — (2' — - метоксвгексадецил) — 2 — О— ацетил— зп—глнцеро —1—фосфохалин (10). Проведение ацетили— рования в условиях' кислотного катализа позволяло избежать образования структурного изомера (фосфохол!шорая группа в С(2) — положении), которое имеет место при проведении реакции в присутствии органических оснований. Отсутствие структурного изомера подтверждалось наличием единичных пккод в 31Р—ЯМР спектрах соединений 9 и 10.

Индивидуальность и структура всех сшггезироЕашшх соединений подтверждены данными элементного аиализа, "ГСХ, ИК — и ЯМР —спектроскопии, масс—спектрометрии. Характеристики целевых соединений приведены в Таблице.

3. Предварительные результаты биологических исщххалпй

Соединения 1—6 переданык. х. и. А-Д. Дергоусову в НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского МГУ им, М.В. Ломоносова (для-изучения способности связывания с ФАТ—рецепторами). Показано, что при ипкубацш! с богатой тромбоцитами плазмой человека фосфэлипиды 1ц 2 в концентрациях 1*10-5 -! 1х}0~7 М нЪ вызыпали агрегации тромбоцитов и не шшзбиропалк агрегацию тромбоцитов, индуцируемую ФАТ. Обработка богатой тромбоцитами плазмы соединениями 3—0 в концентрации 1>:10~° Ь* в течение 5 мин не Еызывала заметой агрегации .тромбоцитов. Тромбоциты, предварительно обработанные соедипешгами 3—0 в концентрации 1x10"? М, агрегкрозали под дейстс:«;;,! ФАТ (1х10~6 М). Ингибироьатю агрегации в данных условиях не наблюдалось, однако, в присутствии фосфолшшдок 3 и 5 отмечалась незначительное снижение степени агрегации (10—15%). ГТолучешше

Фнзико—химические характеристики целевых соединений

Соед. ....... R,' Масс —сцектр, т/г «Н-ЛМР, 8 (характеристич. хим. сдвиги) 31Р-ЯМР, 8 IOID. СНС13

1 0,27 550 (М-Н1 + 3,42 (-СН2ОСЯ2-); 3,47 (-СЯ2ОСН2-); 3,68 (CH-OA11); 4,10, 4,16 (-CHjCH^CHJ; 5,13, 5,26 (-СН,СН = СЯ2); 5.89 (-СН2СЯ=СН2) едишгчн. сигнал

2 0,41 2,56 t - CH2SCH2 -); 2,65 (- CH2SCH2 -); 3,68 (СН-OAllj;4,10, 4,21 (-СЯ2СН=СН,); 5,17, 5.29 (~СН2СН=СЯ2); 5,92 (--СН2СН= СН,) единичн. сигнал -

3 0,11 512,8 ГМ+Н1 + 3,29 - 3,66 (СЯ2М, СЯ2ОСЯ2, СЯ-ОСН3); 3,45 (OCH,); 3,72 (СЯ-ОН); 1,13 . -

4 0,12 517,1 (М + Н1 + 3,67 - 3,30 (СЯ-ОН, СЯаОСНа); 4,21 (СН-С1) 0,65 -

5 0.15 554,7 [М+Н] + 2,07 (ОС(О)СНз); 3,41-3,67 (СЯ2Ч СЯ2ОСЯ2, С Я- ОСНд); 3,45 (ОСНз); 5,0 (СЯ- ОАс) 1.17 -

6 0,15 559,2 [M+HJ + 2,08 (ОС(О)СНз); 4,18 (СН-С1); 5,0 (СЯ-ОАс) 0,64 -

7 0,11 512,5 {М + Н1+ . 3,35-3,75 (СЯ2N, СЯ2ОСЯ2, СЯ-ОСН3); 3,39 (ОСН3); 3,78 — 4,0 (СЯ-ОН, СН2ОР) 2,12 -3,87 (с 1.5)

8 0,11 511,2 . [М]+ • 3,35-3,75 (СЯ2Ы, СЯ2ОСЯ2, СЯ-ОСН3); 3,39 (ОСН,); 3,78- 4,0 (СЯ- ОН, СН2ОР) 1,52 + 3,73 (с 1.5)

9 0,16 554,4 [M+HJ + 2,07 (ОС(О)СНз); 3,35-3,75 (СЯ2Ы, СЯ2ОСЯ2, СЯ-ОСИ-)); 3,38 (ОСН3); 5,13 (СЯ- ОАс) 0,96 -0,75 (с 1,2)

10 0,16 554,2 (М + Н] + 2д)7 (ОС(О)СНз); 3,35-3,75 (СЯ2Ч СЯ2ОСЯ2, СЯ-ОСНз); 3,37 (ОСН-,); 5,13 (СЯ-ОАс) 0,73 + 0,85 (с 0,71)

" Silufol, хлороформ —метанол—вода, 65:25:4

данные указывают на возможную антиагрегационную активность этих соединений и необходимость их дальнейшего изучения.

Соединения 3 и 4 нереданы вед. м. е.. Э.В. Карамову в Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (для тестирования на анти—ВИЧ—активность). По предварительным данным, фосфолн— пиды 3 н 4 обладают гшти—ВИЧ эффектом in vitro в концентрациях, не токсичных для контрольных клеток.

Фосфолипиды 1 — 10 переданы к. м. н. С. Токсамбаевой в НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН (для иммунолопгческих исследований). Соединения 1 — 4, 7, 8 переданы вед. и. с. А.М. Козлову в Институт экспериментальной диагностики н терашш опухолей Онкологического научного центра {для исследований на противоопухолевую активность).

ВЫВОДЫ:

1. Осуществлен синтез 1 — 0— и 1 —S—алкнлышх* фосфатадилхолннов с аллильной группой при С (2)—стома глнцо— ринового скелета.

2. Получены фосфатцдилхолшш, имеющие 2' — гидроксн— или 2'— ацетокси—заместитель в жирной алкильной цепи и трудномс— таболизируемый фрагмент при С(2) атоме глицеринового скелета (метокси группу или атом хлора), •

3. Синтезированы 2' —метокси—аналог ФАТ'и его зпиьюр с неприродной конфигурацией асимметрического центра глицеринового скелета.

4. Синтезированные аналоги переданы для изучения физиологической активности в различные организации медицинского профиля. Получены данные относительно отсутствия способности 2—* О—аллнлькых фосфатидилхолшюБ и 2'--заиащешшх фосфатндил— холинов с труднометаболнзнруемьшя группам;; при С(2) —бтоме

глицеринового скелета вызывать агрегацию тромбоцитов, а также

предварительные данные относительно противовирусной активности

2'—гидрокси фосфатидилхолинов.

Основные результаты диссертации опубликованы в работах:

1. Синтез аналогов фактора активации тромбоцитов. / Саблина MA, Ушакова И.П., Дементьева Е.В., Серебренникова ГА, Дергоусов АЛ. // Биоорган, химия! — 1993. - Т. 19. - Na 3. - С. 354 - 359.

2. Саблина MA, Ушакова И.П., Серебренникова ГА Липиды с простой эфирной связью в онко\огии И Хим.—фарм. журнал. — 1993. — Т. 27. — № ti. — С. 3—13 (обзор).

3. Саблина MA, Ушакова И.П., Серебренникова ГЛ. Аналога и антагонисты фактора активации тромбоцитов. // Хим.—фарм. журнал. - 1994. - Т. 28. - Na 6. - С. 9-24 (обзор).

47 Синтез модифицированных фосфолипндов с простой эфирной связью. / Саблина MA, Ушакова И.П., Дементьева Е.В., Серебренником ГА. // Тезисы докл. на I Российской коиф. "Биологически активные соединения. Сшггез и использование". Пенза. - 1991. - С. 79.

5. Sablina MA, Ushaköva I.P., Serebrennikoya G A Synthesis of analogues of platelet activating fnctor 1(3) — O— (2' — {R,S) — methoxyhexadccyl) — 2—O— acetyl—sn—glycero—3( 1 ) — phospho — cholinto. // Mendeleev Commun, (in press).

6. Саблина MA, Ушакова И.П., Серебрешшкова ГА Сшггез кодифицированных фосфолипндов с простой эфирной связью. // Изв РАН. Сер. хим (а печати).

Заказ 89 Тира,х 90 Бесплатно

Ротацрц.адная ЮТХГ им. IL В.Ломоносова

М.Плроголская jur.,. ц.1

МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ТОНКОЙ ХИМИЧЕСКОЙ ТЕХНОЛОГИИ им. М.В.ЛОМОНОСОВА Диссертационный Совет Д 063.41.01

САБЛИНА МАРИНА АЛЕКСАНДРОВНА

СИНТЕЗ И ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ СТРУКТУРНЫХ АНАЛОГОВ ФАКТОРА АКТИВАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ

02.00.10. — Бноорганическая химия, химия природных и физиологически активных веществ

На правах рукописи

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степега! кандидата химических наук

Москва — 1994