Синтез конъюгатов полиэдрических соединений бора с лактозой как новых потенциальных агентов для бор-нейтронозахватной терапии рака тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ ОРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ имени Н. Д. ЗЕЛИНСКОГО

На правах рукописи

ОРЛОВА Анна Витальевна

СИНТЕЗ КОНЪЮГАТОВ ПОЛИЭДРИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ БОРА С ЛАКТОЗОЙ КАК НОВЫХ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ АГЕНТОВ ДЛЯ БОР-НЕЙТРОНОЗАХВАТНОЙ ТЕРАПИИ РАКА

02.00.03 — Органическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва — 2005

Работа выполнена в лаборатории химии углеводов Института органической химии имени Н. Д. Зелинского РАН

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ- кандидат химических наук

Кононов Леонид Олегович

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: док юр химических наук

Возный Яков Васильевич

кандидат химических наук Ольшевская Валентина Анюновни

ВЬДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ

Институт биоорганической химии им. М. М Шемякина и Ю. А Овчинникова РАН

Защита диссертации состоится "_24_" _июня_ 2005 г в /О шсов на заседании Диссертационного совета К 002.222.01 по присуждению ученом степени кандидата химических наук при Инсштуте органической химии им. Н Д. Зелинскою РАН по адресу: 119991, Москва, Ленинский проспект, д 47

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИОХ РАН

Автореферат разослан " 20 " мая 2005 г.

Ученый секретръ Диссертационного совета доктор химических наук

Родиновская Людмила Александровна

чтлч ,

Общая характеристика работы Актуальность работы:

Несмотря на впечатляющий прогресс в лечении злокачественных опухолей с

использованием хирургии и различных видов терапии, вероятность летального

исхода рака остается высокой. Бор-нейтронозахватная терапия (БНЗТ) представляет

собой метод лечения рака, основанный на введении в опухоль стабильного изотопа

<0В и последующем облучении опухоли потоком тепловых нейтронов. Облучение

приводит к генерации высокоэнергетических продуктов деления, обладающих

пробегом, сравнимым с размерами клетки, что, в принципе, позволяет избирательно

разрушать кле1ки опухоли, не затрагивая окружающую здоровую ткань. Достижение

необходимой терапевтической концентрации изотопа 10В в ткани опухоли

облегчается при использовании полиэдрических соединений бора (ПСБ; обычно это

производные орто-карборана или додекаборат-аниона)

Основным ограничением БНЗТ на данный момент является недостаточно

высокая селективность накопления борсодержащих соединений в опухолевых тканях

по сравнению с окружающими тканями. Одним из путей повышения селективности

препаратов для БНЗТ является использование соединений, обладающих

способностью к направленному транспорту в опухолевые ткани.

Направленная доставка ПСБ в опухолевые клетки может быть основана на

селективном взаимодействии моно- и олигосахаридов с углеводсвязывающими

белками (лектинами), экспрессирующимися на поверхности многих типов клеток

человека. Очень часто перерождение клеток в раковые сопровождается

гиперэкспрессией соответствующих лектинов. Препараты для БНЗТ, обладающие

повышенным сродством к опухолевым тканям, могут быть получены введением

борсодержащих фрагментов в углеводные лиганды этих лектинов Их селективность

к опухоли достигается за счет использования принципа биомолекулярного узнавания,

т е. выбор олигосахарида делается на основании знания углевод-связывающей

специфичности лектинов опухоли. В настоящее время не существует единого подхода

к синтезу конъюгатов олигосахаридов с ПСБ различного типа. Известны лишь

отдельные примеры успешных синтезов конъюгатов додекаборат-аниона с

моносахаридами и конъюгатов орто-карборана с моно- и дисахаридами. Это связано

как со сложностью синтеза функционал»нЙвСл^А*Ы1едйЫ№ЖИ (прежде всего,

БИБЛИОТЕКА, С. Петер О» МО'

ьА»>9КЮ ■»■¿КА* |

производных додекаборат-аниона), так и с тем, что известные условия функционализации и присоединения углеводного фрагмента значительно различаются для гидрофобных карборанов и гидрофильных додекаборат-анионов и во многих случаях неприменимы для конъюгации сложных олигосахаридов. Вместе с 1ем, существует необходимость в разработке подхода, который позволял бы присоединять к различным ПСБ однотипные производные олигосахаридов любой сложности, в том числе и выделенные из биологических источников.

Цель работы:

Данная диссертационная работа посвящена разработке унифицированного подхода к синтезу конъюгатов производных как орто-карборана, так и додекаборат-аниона, исходя из однотипных олигосахаридных предшественников на примере дисахарида лактозы. Лактоза является лигандом многих лектинов (галектинов); в частности, сверхэкспрессия галектинов наблюдается на поверхности клеток меланомы.

Научная новизна и практическая ценность работы:

Изучены различные способы конъюгирования карборанилуксусной кислоты с различными защищенными О-лактозидами и с незащищенными О- и Л'-лактозидами, содержащими аминогруппу в агликоне Предложены способы удаления защитных групп с углеводного фрагмента. Изучено конъюгирование карбоксильного производного додекаборат-аниона с незащищенными О- и Л'-лактозидами, содержащими аминогруппу в агликоне. Впервые получены олигосахаридные конъюгаты додекаборат-аниона.

Впервые обнаружено превращение углеводных конъюгатов клозо-карборанов в соответствующие конъюгаты нидо-карборанов в нейтральных условиях Показано, что легкость этого превращения зависит от строения мостиковой группы (спейсера), соединяющего углеводный фрагмент и карборановый каркас. Обнаруженное превращение открыло путь к получению конъюгатов О- и /^-лактозидов с нидо-карбораном через соответствующие конъюгаты клозо-карборана.

Разработан унифицированный подход, позволяющий синтезировать конъюгаты лактозы с карбоксильными производными как гидрофобного орто-карборана, так и гидрофильного додекаборат-аниона, исходя из однотипных производных лактозы, содержащих аминогруппу в агликоне. Полученные соединения представляют интерес

в качестве агентов для БНЗТ, они переданы на биологические испытания в Институт биофизики Минздрава РФ.

Публикации:

По материалам диссертации опубликовано девять печатных работ, в том числе две статьи и тезисы шести докладов на научных конференциях, одна статья находится в печати

Апробация работы:

Результаты диссертационной работы были представлены автором на международной конференции «Carbohydrate Workshop 2003» (Гюстров, Германия, 2003 г., стендовый доклад), XVII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Казань, 2003 г., стендовый доклад), школе-конференции «Актуальные проблемы органической химии» (Новосибирск, 2003 г., устный доклад), Европейской конференции по химии бора «Euroboron 3» (Прухонице под Прагой, Чешская республика, 2004 г., устный доклад) и I молодежной конференции ИОХ РАН (Москва, 2005 г., устный доклад).

Структура и объем работы:

Диссертация изложена на страницах и состоит из введения,

литературного обзора на тему «Агенты для бор-нейтронозахватной терапии рака Известные подходы к синтезу конъюгатов полиэдрических соединений бора с углеводами», обсуждения результатов, экспериментальной части и выводов. Список цитируемой литературы состоит из наименований.

Основное содержание работы

1. Разработка подхода, позволяющего синтезировать конъюгаты лактозы с производными как ор/мо-карборана, так и додекаборат-аниона.

В данной работе мы предлагаем унифицированный подход, который позволяет связывать производные лактозы, известного лиганда лектинов, экспрессирующихся на поверхности клеток меланомы, с различными полиэдрическими соединениями бора. Такой подход требует наличия однотипных предшественников на основе лактозы, содержащих агликон с функциональной группой, одинаково

функционализованных производных орто-к арборана и додекаборат-аниона и эффективного метода связывания этих фрагментов

Олигосахарид с функциональной группой в агликоне

}

Бор-содержаший фрагмент с функциональной группой

^ II %

Восстанавливающие олигосахариды, выделенные из природных источников

Ол игосахариды, полученные химическим синтезом

Разработку этого подхода мы начали с поиска метода, который позволял бы уверенно связывать производные лактозы как с ортяо-карборанами, так и с клозо-додекаборат-анионами. В качестве таковых нами были выбраны эффективные методы синтеза амидов, широко применяемые в пептидной химии. Данный способ связывания предполагает наличие карбоксильной группы на одном из исходных компонентов и аминогруппы или ее предшественника на другом. Синтез карбоксильных производных как орто-карборана, так и додекаборат-аниона описан в литературе. Таким образом, функциональной группой в агликоне лактозы должна быть аминогруппа или ее предшественник, например, азидогруппа. В качестве таких производных лактозы были выбраны как 0-лактозиды, так и ЛЧтактозиды. В Ы-гликозиды с функциональной группой могут быть превращены не только олигосахариды, полученные химическим синтезом, но и восстанавливающие олигосахариды, выделенные из природных источников. Это позволит в дальнейшем применять разработанный нами подход для конъюгирования производных полиэдрических соединений бора с широким набором олигосахаридов.

2. Синтез предшественников

Прежде чем приступить непосредственно к поиску метода связывания, необходимо было синтезировать как О-лактозиды и Л^-лактозиды, содержащие аминогруппу в агликоне, так и карбоксильное производное додекаборат-аниона. Карбоксильное производное орто-карборана, карборанилуксусная кислота, была любезно предоставлена к.х н., с.н.с. И. Б. Сиваевым (ИНЭОС РАН).

2.1. Синтез углеводных предшественников

В качестве О-лактозида и Л^-лактозида, содержащих аминогруппу в агликоне, были выбраны следующие соединения: Л'-глицил-Р-лактозиламин (13) и (2-аминоэтил)-0-лактозиды, как свободный (10), так и с различными О-защитными группами: ацетильными (6) и бензильными (9). (2-Аминоэтил)-2,3,6-три-0-ацетил-4-0-(2,3,4,6-тетра-0-ацетил-Р-В-галактопиранозил)-р-В-глюкопиранозид (6) был получен, исходя из лактозы (1), в четыре стадии.

ноон он

1 Ас^О, НСЮ„, 30-40°С

АсзО.безв NaOAc, НО ОН кипячение

АсО <—ОАе

_________^___ОАс

2 НОСН2СНгС1, ^(СМ)г,кипячение, Аг

58%

4

Ыа^, 18-краун-6, ДМФА. Л,

95%

АсО ОАС ^-ОАс

АсО АсО

5

КаВН4, Н3ВО3, №С12 6Н20, ЕЮН

АсО --ОАс —-ОАс 70 /о

АсО АсО

6

1ЧН2

Для введения агликона с функциональной группой мы использовали два пути синтеза для того, чтобы затем выбрать из них наиболее эффективный Первый заключался в гликозилировании 2-хлорэтанола при кипячении в присутствии цианида ртути(П) ацетобромлактозой (2), предварительно полученной последовательным ацетилированием и бромированием лактозы (1). Выход продукта на стадии гликозилирования составил 58%. Другой путь предполагал гликозилирование 2-хлорэтанола в присутствии хлорида олова(1У) в ацетонитриле при охлаждении октаацетил-р-лактозой (3), полученной из лактозы ацетилированием уксусным ангидридом в присутствии безводного ацетата натрия при нагревании. Выход продукта в этом случае - 49%. Таким образом, первый путь синтеза оказался если и

ненамного эффективнее, то более удобным. В полученном (2-хлорэтил)-Олактозиде (4) проводили замену хлора на азидогруппу с помощью азида натрия в ДМФА при нагревании Восстановление азидогруппы в аминогруппу системой КаВН4-№С12-Н3ВО3 в этаноле протекало с выходом 74%.

Все промежуточные вещества выделены в чистом виде. Их строение доказано с помощью спектроскопии ЯМР 13С и 'Н.

(2-Амшюэтил)-2,3,6-три-0-бензшт-4-0-(2,3,4,6-тетра-0-бензил-р-0-галактопиранозил)-Р-0-глюкопиранозид (9) был получен из ацетилированного (2-азидоэтил)-0-лактозида (5) в три стадии. Первая стадия, удаление ацетильных защитных групп каталитическим количеством метилата натрия в метаноле, прошла успешно. Бензилирование (2-азидоэтил)-0-лактозида (7) с помощью бензилхлорида и гидроксида калия в ДМСО прошло с выходом 80%. Далее бензилированный (2-азидоэтил)-0-лактозида (8) восстанавливали трифенилфосфином. Полученный бензилированный (2-аминоэтил)-0-лактозид (9) использовали на следующей стадии без дополнительной очистки в виде смеси с трифенилфосфиноксидом, который можно легко отделить с помощью ВЭЖХ после образования амида.

Ас0_ОЛс ОАс МаОМе н()

АСО N Ч

АсО АсО 3 . .__

5 70% ОН 7 ОН

ВПС!,КОН.ВпО^-'ОВ« _-0В» И,,Р-Н,0-МН,, В»0 г—-ОВп

80% 0В° ОВ° ов. ОВв

8 9

Особо следует отметить тот факт, что нам удалось найти условия выделения (2-азидоэтил)-Олактозида (7) с помощью кристаллизации. Ранее для очистки этого соединения использовали только хроматографические методы, что существенно усложняло получение больших количеств азида (7) для последующих превращений. Все промежуточные вещества также были выделены в чистом виде и охарактеризованы с помощью спектроскопии ЯМР 13С и 'Н.

(2-Аминоэтил)-4-0-р-В-галактопиранозил-Р-В-глюкопиранозид (10) был получен восстановлением (2-азидоэтил)-0-лактозида (7) водородом в присутствии катализатора Р<3/С.

он он чон хон ^ >н2

7 10

Полученный продукт охарактеризован с помощью спектроскопии ЯМР 13С и 'н и масс-спектрометрии.

Л'"-Глицил~р-лактозиламин (13) был получен по описанной методике из лактозы (1) в три стадии.

НО ^ОН ЫН2СООЫН4, но ^-он ^-оп

НО НО он он

1

11

(С1СН2СО)гО <^0Н

□ ^ип г-"" н0 ОН ^он

он он I V; г; Г"™,

12 13

Данные спектроскопии ЯМР 13С и 'Н амина 13 полностью соответствовали литературным.

2.2. Синтез трис(тетрабутиламмоний)-4-карбоксибутилокси-ундекагидро~ кл0зо-додекабората.

Для синтеза карбоксильного производного додекаборат-аниона в качестве исходного соединения нами был выбрано тетраметиленоксониевое производное додекаборат-аниона 15, получение которого из додекаборат-аниона под действием эфирата трифтористого брома описано в литературе: 2-

"1 1)ВР3-Е12О,тгф

+ 2) МеЛЧЧЗг" VIУ^^- -аА. / ] I

+ 2) Ме4№"Вг"

-- ^^ЕГ-'°ч I м +

Me4N

«-В о-ВН

86%

В литературе описано раскрытие соединения 15 под действием цианида натрия в условиях межфазного катализа тетрабутиламмоний бромидом. Однако при воспроизведении литературной методики нами было замечено, что происходит побочный процесс, связанный с взаимодействием оксониевого производного 15 с бромид-анионом с образованием соответствующего бромпроизводного 17. Нам

удалось подавить этот процесс, использовав катализатор межфазного переноса ВщМШСи с ненуклеофильным противоионом.

ЫаСЫ, Ви4даг СН2С12-Н20

Замена катализатора привела к тому, что в ходе реакции образовался исключительно целевой нитрил 16. В результате этой замены, нам удалось избежать дополнительной стадии отделения продукта от бромпроизводного 17, представляющей собой нетривиальную задачу. Данные спектроскопии ЯМР 1Н, ИВ и 13С нитрила 16 полностью соответствовали литературным.

Далее был проведен щелочной гидролиз нитрила 16 в карбокси-производное 18 Данные спектроскопии ЯМР *Н, 11В и 13С подтвердили строение этого соединения.

о-(Сн2)4га

16

+ КОН, МеОН 2В^

0-(СН2)4-

+

ЗВи4>

82% 18

Полученное таким образом карбоксильное производное додекаборат-аниона 18 использовалось в дальнейшем без дополнительной очистки.

3. Изучение связывания производных лактозы с карбоксильным производным орто-карборана.

Изучение связывания карбоксильных производных полиэдрических соединений бора с лактозой мы начали на примере производного орто-карборана — карборанилуксусной кислоты и ацетилированного О-лахтозида.

3.1. Конъюгирование ацетилированного 2-азидоэтил-О-лактозида с карборанилуксусной кислотой.

Известно, что реакция азидов с трифенилфосфином приводит к образованию фосфиниминов, которые реагируют с кислотами, превращаясь в амиды. Применение данного метода для создания амидной связи позволило бы избежать необходимости получения ацетилированного 2-аминоэтил-О-лактозида, который является потенциально неустойчивым соединением из-за возможного протекания побочпых реакций аминолиза сложноэфирных групп В связи с этим изучение конъюгирования лактозы с орто-карбораном было начато с реакции ацетилированного 2-азидоэтил-О-лактозида (5) с карборанилуксусной кислотой (19) в присутствии трифенилфосфина.

АсО ^-ОАС ^-ОАс

ОАс _ ОАс

АсО

РРЬ3, толуол, кнпяченяс

N=PPhJ

-С—сн,-соон ' = нс$|

ВюН10

8, 44.4

8С 42.3

ТЧН—РРЬз оос-сн2-с\.

I 19.СН

У н,оВ,„

5Р 38.1

(лит. данные 5Р 35.2-39.2) 21

+

толуол, кипячение

АсО ^-ОАс

' АсО-

ОАс О.

6С 39.6

м>

8, 42.8

Т^ГСН Н10В1Ф

20

В результате кипячения смеси азида 5, карборанилуксусной кислоты (19) и трифенилфосфина в толуоле образовалась смесь амида 20 и фосфорановой соли 21 Их строение было подтверждено данными спектроскопии ЯМР на ядрах 13С и 31Р. Характеристические сдвиги показаны на схеме Так, присутствие в спектре ЯМР 13С наряду с сигналом группы СН2ЫН аминоэтильного агликона (5С 39.6) дополнительного сигнала группы СНгСО, соседней с карборановым фрагментом (8С

42 8), свидетельствует об образовании амида 20. Доказательством наличия в соединении 21 группы ЫН+=РРЬ3 является сигнал в фосфорном спектре при 5Р 38.1, что согласуется с литературными данными для соединений, имеющих такую группу (8Р 35.2-39.2).

Соль 21 при дальнейшем кипячении в толуоле или ксилоле переходит в продукт 20, но данная реакция идет медленно, что препятствует ее применению для препаративных целей. По этой причине мы отказались от использования этого метода создания амидной связи.

3.2. Конъюгирование ацетилированного и бензилированного (2-аминоэтил)-0-лакгозидов с карборанилуксусной кислотой.

В настоящее время для создания амидной связи широко используются различные конденсирующие агенты, которые позволяют получать амиды непосредственно из кислот и аминов.

Для синтеза гликопептидов часто используется Лг-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидрохинолин (ЭЭДХ). Мы решили воспользоваться ЭЭДХ для связывания ацетилированного (2-аминоэтил)-0-лактозида (6) с карборанилуксусной кислотой (19). По данным ТСХ исходные соединения отсутствовали в реакционной смеси, однако желаемый продукт выделить не удалось.

АсО ^-ОАс --ОАС

иХ—о о—п ______,С—СН2СООН

АсоЛ^Л/0-^^-^ + НСЛ1 \чл. ОА1- »1оИю

ог>

^ь оа

ЕЮ-С=0

19

толуол

неразделимая смесь

Дициклогексилкарбодиимид (ДЦГК) вот уже более 50 лет является наиболее часто применяемым конденсирующим агентом в пептидной химии. Обычно он применяется вместе с Л^-гидроксисукцинимидом в качестве нуклеофильной добавки. Конъюгирование бензилированного и ацетилированного (2-аминоэтил)-0-лактозидов с карборанилуксусной кислотой (19) с помощью этого конденсирующего агента оказалось более удачным.

но ^оя

-он

^с—сн2-соон нсф| в10н,0

19

Я = Ас 19% К = Вп 15%

ол

ои

и

' 19-СН 22 И = Вп

НщВю

В результате реакций и последующей ВЭЖХ на силикагеле были выделены индивидуальные целевые амиды 20 и 22 с выходами 19% и 15% соответственно Данные спектроскопии ЯМР 'н, 13С и ПВ и масс-спектрометрии полностью соответствовали предложенным структурам карборан-углеводных конъюгатов 20 и 22.

Попытка конъюгирования бензилированного (2-аминоэтил)-0-лактозида (9) с

карборанилуксусной кислотой (19) с помощью Л^-этил-Л"-

диметиламинопропилкарбодимидгидрохлорида (ЕБС) в присутствии ЛГ-

гидроксисукцинимида закончилась неудачей. Судя по данным ТСХ. исходные

реагенты оставались в неизменном виде.

ВпО ОВп ^-ОВп

-О

ВпО

ОВп

ОВп

О £

19

-С—сн2-соон + нс$|

ВюНю

9 о

Ме2К(СН2)зКСМЕ1вНС], НОЫ

реакция не идет

ТГФ

Недавно в литературе был описан новый конденсирующий агент - хлорид Аг-(4,6-диметокситриазин-2-ил)-Лг-метилморфолиния (ДМТ-ММ). Одной из его отличительных особенное!ей является то, что реакции с ним могут проводиться не только в органических растворителях, но и в воде или в смесях метанола и воды.

К сожалению, применение ДМТ-ММ в качестве конденсирующего агента не привело к увеличению выхода амида по сравнению с выходом в реакции с ДЦГК в качестве конденсирующего агента в случае производного лактозы с бензильными

защитными группами. Конъюгат 22 был выделен с помощью ВЭЖХ с выходом 7%. Данные спектроскопии ЯМР 'Н, 13С и ПВ и масс-спектрометрии полученного конъюгата 22 полностью совпадали с аналогичными данными для образца конъюгата, полученного нами ранее другим способом.

ВпО ,

П. Л +

ВпО

гчн2

^с—сн2-соон нсф|

В10Ню

19

МеЧ Ме N О

мю С1-

МеОН

7%

ВпО

ВпО

ОВп

ОВп

С-

фен

НюВ]0

22

Таким образом, для связывания карборанилуксусной кислоты с защищенными производными (2-аминоэтил)-0-лактозида все использованные нами конденсирующие агенты оказались неэффективными.

Поэтому мы продолжили поиски условий связывания для О-защищенных (2-аминоэтил)-(Э-лактозидов.

3.3 Конъюгирование ацетилированного и бензилироваиного (2-аминоэтил)-б>-лактозидов с хлорангидридом карборанилуксусной кислоты.

Для связывания с защищенными (2-аминоэ1Ш1)-0-лактозидами в дальнейшем было решено использовать хлорангидрид карборанилуксусной кислоты (24)

иг

^ОИ --.(Ж

яо

сж

Ой

о.

га, + нсСр|

х:—сн2-сос1 В.оНю

6 Н = Ас 9 И = Вп

КаНС03-Н20 - СН2С12

24

К = Ас 47% Я = Вп 53%

ЯО

Н(

СЖ

ои

Н,Ло

20 И = Ас 22 И = Вп

В этом случае выходы желаемых карборан-углеводных конъюгатов удалось увеличить до 47% в случае использования производного лактозы 6 с ацетильными защитными группами и до 53% в случае производного лактозы 9 с бензильными защитными группами. Стоит отметить быстрое протекание данной реакции — в течение 1-2 часов наблюдалась полная конверсия исходных веществ.

Полученные конъюгаты были очищены с помощью ВЭЖХ. Данные спектроскопии ЯМР 'Н, |3С и "В и масс-спектрометрии полностью совпадали с аналогичными данными для образцов конъюгатов 20 и 22, полученных нами ранее с использованием других конденсирующих агентов.

3.4 Удаление бензильных и ацетильных защитных групп с остатка лактозы в карборан-углеводных конъюгатах.

Целевыми соединениями данной работы являются незащищенные конъюгаты Возможны два пути синтеза таких конъюгатов- конъюгирование незащищенного О-лактозида с карборанилуксусной кислотой и удаление защитных групп с остатка лактозы в готовых карборан-углеводных конъюгатов.

Удаление как ацетильных групп с помощью каталитических количеств метилата натрия в метаноле, так и бензильных групп гидрогенолизом в присутствии катализатора Р<1/С прошло успешно с получением целевого конъюгата 23. Выходы конъюгата 23 составили 84% из конъюгата 22 и 80% из конъюгата 20. Строение конъюгата 23 подтверждено данными спектроскопии ЯМР *Н, 13С и ПВ и масс-спектрометрии

с.

\н ^ |$;сн

Н|вВ|0

4. Конъюгирование незащищенных О- и Л^-лактозидов с карбоксильными производными орто-карборана и додекаборат-аниона.

4.1. Конденсация свободных О- и Л-лактозидов с карборанилуксусной кислотой.

Для конъюгирования карборанилуксусной кислоты с (2-аминоэтил)-0-лактозидом 10 был применен ДМТ-ММ.

НО ^ОН

но

+

но ^ОН

но

он

ме0иы Ме

>=кч I/ ч N О

МеО с,-

он

^с—сн2-соон ВщНю 19

Ме0Н-Н,0

75%

о

но-

он

он

~мн "" фен

НщВю

23

Интересно отметить, что в этом случае применение ДМТ-ММ в качестве конденсирующего агента позволило получить целевой конъюгат 23 с выходом 75%. В то же время следует подчеркнуть, что реакция протекала медленно' полная конверсия исходных соединений наблюдалась только через 20 часов. Данные спектроскопии

ЯМР 'Н, 13С и "В и масс-спектрометрии продукта совпали с аналогичными данными для конъюгата 23.

Таким образом, мы изучили и осуществили оба возможных пути синтеза незащищенного конъюгата лактозы с карборанилуксусной кислотой. Наиболее удобным оказалось непосредственное конъюгирование карборанилуксусной кислоты с незащищенными производными лактозы с использованием ДМТ-ММ в качестве конденсирующего агента. Мы перешли к синтезу других конъюгатов лактозы как с карборанилуксусной кислотой, так и с карбоксильным производным додекаборат-аниона.

Конъюгирование /У-гтацил-Р-лактозиламина (13) с карборанилуксусной кислотой (19) в присутствии ДМТ-ММ в качестве конденсирующего агента также прошло успешно.

но ^-ОН ^~он

но

.о

но-

он

он

ВюНц

13

19

дмтмм, Ме0Н-Н20

50%

но --ОН

он

НО

-о

НО-

ОН

ОН

и

,псн

вюН)о

25

Целевой конъюгат 25 был выделен в индивидуальном состоянии с выходом 50% с помощью обращеннофазной хроматографии. Данные спектроскопии ЯМР 'Н 13С, ПВ и масс-спектрометрии полностью подтвердили строение конъюгата.

4.2. Конъюгирование незащищенных О- и Л'-лактозидов с

трис(тстрабутиламмоний)-4-карбокснбутилокси-ундекагидро-к/1030-

додекаборатом.

Собственно реакция конъюгирования 2-аминоэтил-О-лактозида (10) с трис(тетрабугиламмоний)-4-карбоксибутилокси-ундекагидро-клозо-додекаборатом (18) в присутствии ДМТ-ММ в качестве конденсирующего агента в смеси метанол-вода прошла успешно: исходные соединения прореагировали полностью и анализ

спектров ЯМР свидетельствовал о присутствии в реакционной смеси целевого продукта 26.

НО^-ОН

но

О (СН2)4

1 ДМТ-ММ, Ме0Н-Н20 (2 1),

2 Оо«>ех 50\Ух8 в Ыат-форме

+

= В ИЛИ ВН

А^ .О

¡ЧН 7СН2)4

Однако очистка целевого конъюгата 26 от побочно образующегося 3,5-диметокситриазин-2-ола вызвала трудности, не позволившие получить целевой продукт с чистотой выше 70%. Строение конъюгата подтверждено данными спектроскопии ЯМР !Н, 13С, "В и масс-спектрометрии.

Как и в случае О-лактозида (10) реакция конъюгирования Лг-глицил-р-лактозиламина (13) с карбоксильным производным додекаборат-аниона (18) прошла успешно.

но ^-ОН

но

ОН

А1Т

НО-

13

ь„>НГ- +

1 ДМТ-ММ, Ме0Н-Н20 (2 1), 2. Истех 50Wx8 в Н^-форме, 3 10М ЫаОН

57%

0-(ГНг)4-

18

зв^

(о-»ВилиВн)

НО г^-ОИ

ОН

НО

-о

ОН

2 Ън

О

г™ . 1

У N11 (СН2)4-0 О

Интересно отметить, что, используя такую же процедуру очистки целевого конъюгата, как и в случае конъюгата 26, в данном случае удалось избавиться от примеси 3,5-диметокситриазин-2-ола полностью. Целевой продукт в качестве примеси содержал карбонат натрия (6С 156.6). Строение полученного конъюгата 27 подтверждено данными спектроскопии ЯМР !Н, 13С, ИВ и масс-спектрометрии.

Разработанный нами унифицированный подход к синтезу конъюгатов углевода с полиэдрическими соединениями бора можно представить в виде следующей общей схемы:

но

\'0

Углеводная часть

и

ноос

Борсодержаший полиэдр

Производные олигосахаридов, содержащие аминогруппу в агликоне, могут быть связаны с карбоксильными производными полиэдрических соединений бора с помощью ДМТ-ММ в качестве конденсирующего агента.

Предложенный нами подход позволяет синтезировать конъюгаты углеводов как с карборанами, так и с додекаборат-анионом. Мы опробовали данный подход как на 0-лактозидах, так и на Л'-лактозидах, что указывает на его применимость не только к синтетическим гликозидам, но и выделенным из природных источников. Предложенный подход является первым примером синтеза таких конъюгатов, не требующим защитных групп на остатке лактозы. Этот факт особенно важен для додекаборат-углеводных конъюгатов, для которых проведение этой стадии по опубликованным в 2005 году лит. данным превращается в нетривиальную задачу

5. Легкое превращение углеводных конъюгатов клозо-карборанов в конъюгаты с нидо-карборанами.

Данный раздел работы посвящен изучению необычного для карборан-углеводных конъюгатов свойства. Известно, что в некоторых случаях каркас клозо-

карборана может терять один атом бора и превращаться в нидо-карборан. В литературе предложен следующий механизм деборирования: сначала идет нуклеофильная атака по атому бора В(3), который является наименее электроотрицательными в икосаэдре, или эквивалентному ему атому бора В(6).

Вторая нуклеофильная атака приводит к отрыву боргидридного фрагмента из икосаэдра и образованию отрицательнозаряженного нидо-карборана В литературе описано деборирование клозо-карборанов в основных условиях (под действием щелочей, алкоголятов или аминов) и под действием фторид-аниона. Кроме того, известно, что а-карбонильные производные клозо-карборана деборируются в растворах в ДМСО или метаноле в нейтральных условиях; однако метиловый эфир карборанилуксусной кислоты, содержащий карбонильную группу в р-положении, в этих условиях стабилен В ходе выполнения данной работы мы обнаружили, что полученные нами конъюгаты оозо-карборанилуксусной кислоты с лактозой деборируются в водных и метанольных растворах в нейтральных условиях.

5.1. Обнаружение конъюгата лактозы с нмдо-карбораном в качестве примеси в образцах конъюгатов клозо-карборанов.

Спектры ЯМР 'Н и 13С полученного конъюгата незащищенного О-лактозида с орто-карбораном (23) содержали один набор ожидаемых сигналов. В то же время, внимательное изучение спектров ЯМР "В выявило, что в спектрах всех образцов полученного карборан-углеводного конъюгата в растворах в П20 или С03СЮ наряду с ожидаемыми сигналами клото-карборанового каркаса [бв -2.2 (1В), -5 1 (1В), -9.4 (уширенный сигнал, 8В); здесь и далее приведены данные ЯМР "В для растворов в В20] присутствуют дополнительные минорные сигналы (бв -32.3, -36.4), которые можно отнести к мидо-карборановому каркасу, содержащему на один атом бора меньше в полиэдре, а также сигнал борной кислоты (8В 18 9).

.-С

о -В

клозо-

нидо-

Количество «идо-карборана (1-15% по данным ЯМР) зависело от метода получения и варьировало от образца к образцу. Существенно, что в спектрах ЯМР ПВ карборан-углеводных конъюгатов с защитными группами в остатке лактозы присутствовали только сигналы клозо-карборана.

В нашем случае деборирование с образованием нидо-карборана протекает в нейтральных условиях (рН ~ 6) и, по всей вероятности, не связано с присутствием в образцах основных примесей. Действительно, например, все образцы конъюгата 23, полученного тремя разными способами из предшественников, очищенных с помощью ВЭЖХ на силикагеле, претерпевают деборирование в водном или метанольном растворе с образованием соответствующего «идо-конъюгата.

5.2. Разделение конъюгатов лактозы с клозо-карбораном и нидо-карбораном.

При непосредственной конденсации (2-аминоэтил)-0-лактозида (10) и карборанилуксусной кислоты (19) была получена смесь конъюгатов (23) с соотношением клозо- и нидо-форм 20:3. Разделением смеси обращеннофазной хроматографией на катридже SepPak С18 (МеОН в воде) был получен образец, содержащий 94% клозо-формы, 5% нидо-формы и 1% борной кислоты (по данным спектра ЯМР ПВ). Этот образец хранился в твердом виде при -20°С, не показывая признаков деструкции в течение 2 мес.

5.3. Ускорение образования нидо-карборанов при повышении температуры. Выделение нмдо-карбораи-углеводных конъюгатов в индивидуальном состоянии.

Было замечено, что при хранении в водном растворе при комнатной температуре количество «идо-формы возрастает с течением времени. Процесс образования нмдо-формы значительно ускоряется при повышении температуры. Так, например, водный (D20) »

раствор конъю! ача, полученного в результате гидрогенолиза О-бензилированного предшественника, который был очищен с помощью ВЭЖХ на силикагеле, нагревали при 60°С в ампуле для спектроскопии ЯМР, периодически регистрируя спектры ЯМР ПВ (рис. а - с). Спектр исходного образца представлен на рис. а. Интенсивность сигналов нидо-карборана возрастала во времени, а через 17 часов сигналы исходного клозо-карборана в спектре ЯМР "В отсутствовали и в смеси присутствовали только ниОо-карборан и борная кислота (рис. Ь). Образец конъюгата 1,2-дикарба-нидо-ундекаборана с (2-аминоэтил)-0-лактозидом (23-нидо), не содержащего борной кислоты (рис с), был получен многократным соупариванием с МеОН и уксусной кислотой Выделенный таким образом 23-нидо был охарактеризован с помощью спектроскопии ЯМР 'Н, 13С и ПВ и масс-спектрометрии.

Деборирование монозамещенных орто-карборанов может приводить к двум стереоизомерным кидо-карборанам (А и В)

* 1 и * 2 изображает диастереотопньге борные атомы, удаление которых приводит к образованию конъюгатов 23-иидо-А и 23-нидо-В

Нами было замечено, что при переходе от конъюгата клозо-карборана к конъю i а [у с нидо-карбораном величина оптического вращения меняет знак Так, водный раствор конъюгата клозо-карборана (23-клозо) характеризовался величиной [аЪ20 +7 0 (с 2.4), a водный раствор конъюгата нидо-карборана (23-нидо) - величиной [a]D2íl -15.4 (с 0.2). Это может означать, что в нашем случае данный процесс протекает стереоселективно К сожалению, имеющиеся данные не позволили сделать выбор между структурами А и В.

Аналогичное превращение наблюдалось при нагревании водного (Т)20) раствора конъюгата клозо-карборана с Л'-лактозидом (25). Однако, в этом случае превращение в конъюгат нидо-карборана протекало значительно медленнее и полная конверсия была достигнута через 165 часов. Многократное соупаривание смеси с МеОН и уксусной кислотой привело к конъюгату 1,2-дикарба-кмдо-ундекаборана с № глицил-р-лактозиламином (25-нидо), не содержащему борной кислоты. Выделенный таким образом конъюгат 25-нидо охарактеризован с помощью спектроскопии ЯМР 13С и ПВ и масс-спектрометрии Спектр ЯМР "В соответствовал ожидаемому для нидо-карборана. Вместе с тем, в аномерной области спектра ЯМР 13С вместо одного сигнала атома углерода С-1 остатка галактозы 8 ~ 103-104 м.д., присутствовавшего в спектре исходного конъюгата 25-клозо, имелся набор большого числа пиков в области 8 93-109 м.д.

Отдельного комментария требует значительное (почти десятикратное!) различие в скорости деборирования клозо-карборанового каркаса в конъюгатах 23 и 25.

он

но

%:сн

НюВщ

НО но

ли

он

но-

он

он

25

га

сн

Как нетрудно видеть, различия в строении конъюгатов 23 и 25 минимальны. Более того, различающиеся фрагменты (отмечены на схеме) значительно удалены от карборанового каркаса. В связи с этим достаточно трудно найти причины столь драматического изменения реакционной способности при изменении структуры конъюгата Мы полагаем, что решающим моментом является присутствие второй амидной связи в конъюгате 25. По-видимому, вследствие образования более прочной системы (сетки) межмолекулярных водородных связей в растворах конъюгата 25 образуются такие супрамолекулярные агрегаты, в которых доступность карборанового каркаса для атаки растворителем (водой или метанолом) значительно уменьшена по сравнению с таковой в растворах конъюгата 23.

Таким образом, обнаруженное превращение открывает путь к получению конъюгатов О- и Л'-лактозидов с нидо-карбораном через соответствующие конъюгаты с клозо-карбораном. Следует отметить, что свойства конъюгатов «кдо-карборанов значительно отличаются от свойств конъюгатов клозо-карборанов. Так, например, ншЭо-карборан-углеводные конъюгаты имеют большую растворимость в воде, нежели клозо-карборан-углеводные конъюгаты, которые, являясь поверхностно-активными вещее гвами, образуют с водой пенящиеся растворы. Можно ожидать, что биологическая активность этих двух типов конъюгатов также будет существенно различаться. Обнаруженная нами легкость превращения клозо- в нидо-форщ имеет важное значение с практической точки зрения, особенно при планировании использования карборан-углеводных конъюгатов в качестве агентов для БНЗТ.

6. Выводы.

1 Разработан новый унифицированный подход к синтезу как карборан-, так и додекаборат-углеводных конъюгатов в качестве новых потенциальных агентов для бор-нейтронозахватной терапии рака, исходя из однотипных производных олигосахаридов на примере лактозы.

2 Впервые изучено конъюгирование карборанилуксусной кислоты с защищенным О-лактозидом с аминогруппой в агликоне. Синтезированы карборан-углеводные конъюгаты с ацетильными и бензильными защитными группами на остатке лактозы.

3. Изучено конъюгирование карборанилуксусной кислоты с незащищенными О- и Ачиактозидами с аминогруппой в агликоне в присутствии хлорида ,¥-(4,6-диметокситриазин-2-ил)-Лг-метилморфолиния (ДМТ-ММ) в качестве конденсирующего агента. Впервые синтезированы соответствующие клозо-карборан-углеводные конъюгаты, исходя из незащищенных О- и А^лактозидов.

4. Впервые осуществлено конъюгирование трис(тетрабутиламмоний)-4-карбоксибутилокси-ундекагидро-клозо-додекабората с незащищенными О- и Ы-лактозидами с аминогруппой в агликоне при использовании ДМТ-ММ в качестве конденсирующего агента. Синтезированы соответствующие додекаборат-углеводные конъюгаты.

5. Обнаружено превращение углеводных конъюгатов клозо-карборанов в конъюгаты нидо-карборанов в нейтральных условиях. Показано, что легкость этого превращения зависит от строения мостиковой группы (спейсера), соединяющего остаток лактозы и карборановый каркас. Получен конъюгат лактозы с 1,2-дикарба-мидо-ундекабораном.

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах:

1. А. V Orlova, L. О. Kononov, I. В. Sivaev, V. I. Bregadze. //New approach to the preparation of carbohydrate-carborane conjugates as potentional BNCT agents// Book of abstracts of The Carbohydrate Workshop 2003, - 2003, Guestrov, Germany

2. А. В Орлова, Л. О Кононов, И. Б. Сиваев, В. И. Брегадзе. //Новый подход к получению yi левод-карборановых конъюгатов в качестве потенциальных агентов для БНЗТ// Сборник тезисов XVII Менделеевский съезд по общей и прикладной химии, - 2003, Казань, Россия. - т. 4 - с.284.

3 А В. Орлова, J1. О. Кононов. И. Б. Сиваев, В. И. Брегадзе. //Новый подход к получению углевод-карборановых конъюгатов в качестве потенциальных агентов для БНЗТ// Молодежная научная школа по органической химии «Актуальные проблемы органической химии», - 2003, Новосибирск, Россия - Д84.

4 А В. Орлова, А. И Зинин, Н. Н. Малышева, Л О Кононов, И. Б. Сиваев, В. И. Брегадзе //Конъюгаты полиэдрических соединений бора с углеводами. Сообщение 1. Новый подход к дизайну селективных агентов для бор-нейтронозахватной терапии рака// Изв АН, Сер хим -2003, с. 2617-2620.

5 А V Orlova, N N Kondakov, L О Kononov, A I Zinin, S. L Sedinkin, N N. Malysheva, L. M Likhosherstov, O. S. Novikova, V. N. Shibaev, I. B. Sivaev, V. I. Bregadze. //A universal approach to the preparation of conjugates of polyhedral boron hydrides with carbohydrate ligands of tumor-specific lectins as potential BNCT agents// The 3rd European Meeting on Boron Chemistry Euroboron 3, - 2004, Pruhonice-near-Prague, Czech Republic. - Abstract 043.

6 N. N. Kondakov, A. V. Orlova, L. O. Kononov, A. I. Zinin, N. N. Malysheva, S. L. Sedinkin, I. В Sivaev, V 1. Bregadze //Straightforward preparation of carbohydrate derivatives of cfoio-dodecaborate anion as potential BNCT agents// The 3rd European Meeting on Boron Chemistry Euroboron 3, - 2004, Pruhonice-near-Prague, Czech Republic - Abstract P36

7 L O. Kononov, A. V. Orlova, A. I Zinin, I B. Sivaev, V. I. Bregadze //Conjugates of polyhedral boron compounds with carbohydrates. 2. Unexpected easy closo- to nido-transformation of a carborane—carbohydrate conjugate in neutral aqueous solution// J Organomet Chem - 2005 - v.690 - p.2769-2774.

8 А. В Орлова, H H. Кондаков, Л. О. Кононов, А. И. Зинин, Б. Г. Кимель, И. Б. Сиваев, В. И. Брегадзе. Синтез новых потенциальных агентов для БНЗТ на основе конъюгатов полиэдрических соединений бора с лактозой// Сборник тезисов докладов / молодежной конференции ИОХ РАН - 2005, Москва, Россия, -с 99.

9. А В. Орлова, Н. Н. Кондаков, А. И. Зинин, Б. Г, Кимель, Л. О. Кононов, И. Б. Сиваев, В И Брегадзе //Конъюгаты полиэдрических соединений бора с углеводами. Сообщение 3. Первый пример синтеза конъюгата додекаборат-аниона с дисахаридом - лактозой в качестве потенциального агента для бор-нейтронозахватной терапии рака// Изв АН, Сер хим -2005 -№ 5, в печати.

Принято к исполнению 18/05/2005 Исполнено 19/05/2005

Заказ № 871 Тираж 120 экз

ООО «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 Москва, Балаклавский пр-т, 20-2-93 (095) 747-64-70 'лплго' аиЮгеГега1 то

m

РНБ Русский фонд

2006-4 7394

1. L. Locher //Biological effects and therapeutic possibilities of neutron// Am. J. Roentgenol. Radium Ther. -1936 - v.36 - p.l -13.

2. P. Caravan, J. J. Ellison, T. J. McMurry, R. B. Lauffer //Gadolinium(III) chelates as MRI contrast agents: structure, dynamics, and applications.// Chem Rev. 1999 - v.99 - p.2293-2352.

3. M. O. Oyewumi, R. J. Mumper //Engineering tumor-targeted gadolinium hexanedione nanoparticles for potential application in neutron capture therapy// Bioconjugate Chem. 2002 -v.13 -p.1328-1335.

4. A. H. Soloway, W. Tjarks, B. A. Barnum, F-G. Rong, R. F. Barth, I. M. Codogni, J. G. Wilson //The chemistry of neutron capture therapy// Chem. Rev. 1998 - v.98 - p.l 515-1562.

5. M. F. Hawthorne, A. R. Pitochelli //The reaction of bis-acetonitrile decaborane with amines// J. Am. Chem. Soc. 1959 - v.81 - p.5519-5519.

6. M. F. Hawthorne, A. R. Pitochelli //The isolation of the icosahedral B12H12"2 ionII J. Am. Chem. Soc. 1960 - v.82 - p.3228-3229.

7. H. C. Miller, N. E. Miller, E. L. Muetterties//Synthesis of polyhedral boranes// J. Am. Chem. Soc. 1963 - v.85 - p.3885-3886,

8. N. N. Greenwood, J. H. Morris //A novel synthesis of the B12H122" anion// Proc. Chem. Soc. -1963 p.338-338.

9. R. M. Adams, A. R. Siedle, J. Grant //Convenient preparation of the dodecahydrododecaborate ionЛ Inorg. Chem. 1964 - v.3 - p.461-461.

10. Л. И. Захаркин, В. И. Станко, В. А. Братцев, Ю. А. Чаповский, О. Ю. Охлобыстин //Синтез нового класса борорганических соединений, В10С2Н12 (барена) и его производных// Изв. АН СССР, Сер. хим. 1963 - с.2238-2239.

11. W. Н. Knoth //B10H12CNH3, В9Н9СН", ВцНцСН", and metallomonocarboranes// Inorg. Chem. 1971 - v.10 - p.598-605.

12. M. F. Hawthorne //Chemistry of the polyhedral species derived from transition metals and carboranesll Acc. Chem. Res. 1968 - v.l - p.281-288.

13. H. R. Snyder, A. J. Reedy, W. J. Lennarz //Synthesis of aromatic boronic acids. Aldehydo boronic acids and a boronic acid analog of tyrosine//J. Am. Chem. Soc. — 1958 v.80 - p.835-838.

14. Y. Satoh, C. Gude, K. Chan, F. Firooznia //Synthesis of 4-substituted phenylalanine derivatives by cross-coupling reaction of p-boronophenylalanines// Tetrahedron Lett. 1997 -v.38 - p.7645-7648.

15. C. Malan, C. Morin //Synthesis of 4-borono-L-phenylalanine// Synlett- 1996 p. 167-168.

16. C. Malan, C. Morin //A concise preparation of 4-borono-L-phenylalanine (L-BPA) from L-phenylalanine// J. Org. Chem. 1998 - v.63 - p.8019-8020.

17. M. E. Jung, Т. I. Lazarova //New efficient method for the total synthesis of (S,S)-isodityrosine from natural amino acidsII J. Org. Chem. 1999 - v.64 - p.2976-2977.

18. H. Nakamura, M. Fujiwara, Y. Yamamoto //A concise synthesis of enantiomerically pure L-(4-boronophenyl)alanine from L-tyrosine// J. Org. Chem. 1998 - v.63 - p.7529-7530.

19. H. Nakamura, M. Fujiwara, Y. Yamamoto //A practical method for synthesis of enantiomerically pure 4-borono-L-phenylalanine// Bull. Chem. Soc. Jap. 2000 - v.73 - p.231-235.

20. W. H. Knoth, J. C. Sauer, D. C. England, W. R. Hertler, E. L. Muetterties //Chemistry of boranes. XIX.1 Derivative chemistry of ВюНю'2 and B12H12'2// J. Am. Chem. Soc. 1964 - v.86 -p.3973-3983.

21. E. I. Tolpin, G. R. Wellum, S. A. Berley //Synthesis and chemistry of mercaptoundecahydro-closo-dodecaborate(2-)// Inorg. Chem. 1978 - v.17 - p.2867-2873.

22. M. Komura, К. Aono, K. Nagasawa, S. Sumimoto //A convenient preparation of 10B-enriched B12H11SH2", an agent for neutron capture therapy// Chem. Express 1987 - v.2 - p.173-176.

23. К. Солт, А. Дж. Леннокс, M. Такагаки, Дж. А. Магуайр, Н. С. Хосман // Бор- и гадолиний-нейтронозахватная терапия// Изв. АН, Сер. Хим. 2004 - № 10 - с. 1 -18.

24. J. F. Valliant, K. J. Guenter, A. S. King, P. Morel, P. Schaffer, О. O. Sogbein, K. A. Stephenson //The medicinal chemistry of carboranes// Coord. Chem. Rev. 2002 - v.232 -p. 173-230.

25. И. Б. Сиваев, В. И. Брегадзе //Бор-нейтронозахватная терапия рака. Химический аспект.// Росс. хим. журн. 2004 - Т.48 - с.109-125.

26. P. Basak, T. Lowary // Synthesis of conjugates of L-fucose and ortho-carborane as potential agents for boron neutron capture therapy// Can. J. Chem. — 2002 v.80 - 943-948.

27. L. F. Tietze, U. Bothe // О/Ло-carboranyl glycosides of glucose, mannose, maltose and lactose for cancer treatment by boron neutron-capture therapy// Chem Eur. J. 1998 - v.4 -p.l 179-1183.

28. G. B. Giovenzana, L. Lay, D. Monti, G. Palmisano, L. Panza // Synthesis of carboranyl derivatives of alkynyl glycosides as potential BNCT agents// Tetrahedron 1999 - v.55 -p.14123-14136.

29. L. F. Tietze, U. Bothe, U. Griesbach, M. Nakaichi, T. Hasegawa, H. Nakamura, Y. Yamamoto // Carboranyl bisglycosides for the treatment of cancer by boron neutron-capture therapy// ChemBioChem. 2001 -v.2 - p.326-334.

30. M. Ramburrun, C. Morin //O-carboranes from ynol ethers// Curr. Top. Chem. Boron (edited by G. W. Kabalka), Royal Society of Chemistry 1994-p.228-231.

31. C. Thimon, L. Panza, C. Morin // Synthesis of a glycosylated ortho-carboranyl amino acid// Synlett-2003 -p.1399-1402.

32. S. Ronchi, D. Prosperi, C. Thimon, C. Morin, L. Panza // Synthesis of mono- and bisglucuronylated carboranes// Tetrahedron: Asymmetry 2005 — v.16 - p.39-44.

33. J. L. Maurer, F. Berchier, A. J. Serino, С. B. Knobler, M. F. Hawthorne //Glycosylcarborane derivatives and the determination of the absolute configuration of a diastereomeric triol from X-raydiffraction// J. Org. Chem. 1990-v.55-p.838-843.

34. W. V. Dahloff, J. Bruckmann, K. Angermund, C. Krueger //l-l,7-dicarba-c/050-dodecaborane(12)-l-yl.aldoses: novel boron neutron capture candidates// Liebigs Ann. Chem. -1993 -p.831-835.

35. J. L. Maurer, A. J. Serino, M. F. Hawthorne //Hydrophilically augmented glycosyl carborane derivatives for incorporation in antibody conjugation reagents// Organometallics — 1988 v. 7 -p.2519-2524.

36. S. Ronchi, D. Prosperi, F. Compostella, L. Panza // Synthesis of novel carborane-hybrids based on a triazine scaffold for boron neutron capture therapy// Synlett 2004 - p. 1007-1010.

37. F. Wang, X. Wang // Synthesis of boronated methylglucoside compounds and studies of their biodistribution// Chinese Journal of Nuclear and Radiochemistry 1999 - v.21 - p.153-159.

38. B. Lechtenberg, D.Gabel // Synthesis of a boron containing glycoside as potential prodrug for BNCT// The 3rd European Meeting on Boron Chemistry Euroboron 3, 2004, Pruhonice-near-Prague, Czech Republic. - Abstract 040.

39. B. Lechtenberg, D.Gabel // Synthesis of a (B12H11S)2' containing glucuronoside as potential prodrug for BNCT// J. Organomet. Chem. 2005 - in press.

40. B. Dean, H. Oguchi, S. Cai, E. Otsuji, K. Tashiro, S. Hakomori, T. Toyokuni // Synthesis of multivalent p-lactosyl clusters as potential tumor metastasis inhibitors// Carbohydr. Res. 1993 -v.245-p.l75-192.

41. B. Sivaev, V. I. Bregadze, S. Sjoberg // Chemistry of c/oso-dodecaborate-anion (B12HJ22"): a reviewII Collect. Czech. Chem. Commun. 2002 - v.67 - p.679-727.

42. A. H. Soloway, H. Hatanaka, M. A. Davis //Penetration of Brain and Brain Tumor. VII. Tumor-Binding Sulfhydryl Boron Compounds// J. Med. Chem. 1967 - v.10 -p.714-717.

43. E. Kallin, Н. Lönn, Th. Norberg, M. Elofsson // Derivatization procedures for reducing oligosaccharide glycosylamines, and their conversion into oligosaccharides acrylamide copolymers// J. Carb. Res. - 1989 - v.8 - p.597-611.

44. А. А. Гершкович, В. К. Кибирев //Химический синтез пептидов// Издательство «Наукова Думка», Киев 1992 -с.5-92.

45. JI. И. Захаркин, Ю. А. Чаповский, В. А. Братцев, В. И. Станко // Синтез карборановых кислот баренового рядаJ! Журн. Орган. Хим. 1966 - №5 - с.878-886.

46. М. JI. Вольфром, А. Томпсон, // Ацетилирование.// В книге «Методы химии углеводов» Издательство «Мир», Москва 1967 - с. 115.

47. К. Воск, С. Pedersen, Н. Redersen // Carbon-13 nuclear magnetic resonance spectroscopy for oligosaccharides// In Advances in carbohydrate chemistry and biochemistry, vol. 42 1984 -p. 193-225.

48. П. E. Чешев, E. А. Хатунцева, Ю. E. Цветков, А. С. Шашков, H. Э. Нифантьев // Синтез аминоэтилгликозидов олигосахаридных цепей ганглиозидов GMi и асиало-GMi// Биоорг. химия 2004 - т.ЗО - с.68-79.

49. О. N. Yudina, A. A. Sherman, N. Е. Nifantiev // Synthesis of propyl and 2-aminoethyl glycosides of a-D-galactosyl-(l-»3')-ß-Iactoside// Carbohydr. Res. -2001 v.332 -p.363-371.

50. A. Chernyak, S. Oscarson, D. Turek. // Synthesis of the Lewis b hexasacharide and squarate acid-HAS conjugates thereof with various saccharide loadings// Carb. Res. 2000 - v.329 -p.309-316.

51. A. K. Ray, U. Nilsson, G. Magnusson // Synthesis and conformational analysis of GM3 lactam, a hydrolytically stable analogue of GM3 ganglioside lactone// J. Am. Chem. Soc. 1992 - v.114 -p.2256-2257.

52. А. Томпсон, M. JI. Вольфром, E. Паксу // Дезацетилирование// В книге «Методы химии углеводов» Издательство «Мир», Москва — 1967 с.119.

53. J. N. BeMiller, R. E. Wing // Methyl terminal-4-O-methylmalto-oligosaccharides// Carbohydr. Res. 1968 - v.6 - p. 197-206.

54. S. Nagarajan, B. Ganem //Chemistry of naturally occurring polyamines. 11. Unsaturated spermidine and spermine derivatives// J. Org. Chem. — 1987 v.52 — p.5044-5046.

55. R. U. Lemeiux, S. Z. Abbas, M. H. Burzynska, R. M. Ratcliffe // Syntheses of derivatives of N-acetyl-D-lactosamine from D-galactal hexaacetate. Hexa-0-acetyl-2-deoxy-2-phthalimido-p-D-lactosyl chloride// Can. J. Chem. 1982 - v. 60 - p.63-67.

56. J. Garcia, F. Urpi, J. Vilarrasa // New synthetic "tricks". Triphenylphosphine-mediated amide formation from carboxylic acids and azides// Tetrhedron Lett. 1984 - v.25 - p.4841 -4844.

57. К. Д. Неницеску // Непредельные карбонильные соединения// В книге «Органическая химия» Издательство «Иностранной литературы», Москва 1963 - с.685.

58. М. F. Hawthorne, D. С. Young, Ph. М. Garret, D. A. Owen, S. G. Schwerin, F. N. Tebbe, P. A. Wegner // The preparation and characterization of the (3)-l,2- and (3)-l,7-dicarbadodecahydroundecaborate(-l) ions// J. Am. Chem. Soc. 1968 - v.90 -p.862-868.

59. Л. И. Захаркин, В. И. Калинин // О взаимодействии аминов с баренами// Изв. АН, Сер. Хим. 1965 - №3 - с.579-579.

60. Н. Tomita, H.Luu, Т. Onak // Cage opening of parent closo cage carboranes with fluoride ion: formation oiS-V-nido-2,A-C2B^\ll Inorg. Chem.-1991 v.30 - p.812-815.

61. Л. И. Захаркин, В. С. Кириллова II Исследование расщепления о-карборанов до (3)-1,2-дикарбаундекаборатов под действием аминов// Изв. АН, Сер. Хим. 1975 -с.2596-2598.

62. Е. Svantesson, J. Pettersson, A. Olin, К. Markides, S. Sjoberg // A kinetic study of the self-degradation of o-carboranylalanine to nido-carboranylalanine in solution// Acta Chem. Scand. -1999 -v.53- 731-736.

63. S. HermSnek // nB NMR spectra of boranes, main-group heteroboranes, and substituted derivatives. Factor influencing chemical shifts of skeletal atoms// Chem. Rev. 1992 - v.92 -325-362.

64. А. Гордон, P. Форд // Очистка растворителей. Метанол// В «Спутник химика» Издательство «Мир», Москва 1976 - с.440.