Иммобилизация оксидоредуктаз на неорганических носителях тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.15 ВАК РФ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЖТЕРАТУРЫ.ИММОБИЛИЗАЦИЯ ФЕРМЕНТОВ НА

НЕОРГАНИЧЕСКИХ НОСИТЕЛЯХ

1. Иммобилизованные ферменты и их применение в различных областях народного хозяйства

2. Способы иммобилизации ферментов на неорганических носителях

2.1. Физическая адсорбция ферментов на неорганических носителях

2.2. Включение в неорганические гели

2.3. Ковалентное связывание фермента с поверхностью

2.4. Поперечная сшивка адсорбированных молекул бифункциональными реагентами

3. Свойства неорганических носителей 31 ЗЛ. Физико-химические свойства неорганических носителей

3.2. Пористая структура неорганических носителей

4. Закономерности стабилизации иммобилизованных ферментов 40 Заключение

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

1. Препараты

2. Методика определения чистоты ферментных препаратов

3. Методика иммобилизации ферментов

3.1. Методиа адсорбции и десорбции

3.2. Методика поперечного сшивания адсорбированных молекул бифункциональными реагентами

4. Методика определения ферментативной активности 55 4.1. Методика определения активности нативного фермента

4-.2. Методика определения активности иммобилизованного фермента 55 4.3. Состав реакционных растворов для определения ферментативной активности

4.3.1. Лактатдегидрогеназа

4.3.2. Алкогольдегидрогеназа

4.3.3. Тирозиназа

4.3.4. Глюкозооксидаза

5. Методика определения стабильности и термостабильности иммобилизованного фермента

6. Методика определения концентрации основных и кислых центров на поверхности носителя

7. Оценка гидрофобных свойств носителя

8. Методика приготовления геля кремниевой кислоты

9. Обработка экспериментальных данных

ГЛАВА 3. ИММОБИЛИЗАЦИЯ 0КСИД0РЕДУКТАЗ НА НЕОРГАНИЧЕСКИХ

НОСИТЕЛЯХ

1. Исследование роли пористой структуры носителя в процессе иммобилизации ферментов

1.1. Иммобилизация лактатдегидрогеназы

1.2. Иммобилизация алкогольдегидрогеназы

2. Исследование влияния кислотно-основных свойств и гид-рофобности поверхности на активность и стабильность

- ц. иммобилизованных ферментов

2.1. Иммобилизация лактатдегидрогеназы 89'

2.2. Иммобилизация алкогольдегидрогеназы

2.3. Иммобилизация тирозиназы и глюкозооксидазы

3. Структурная стабилизация ферментов НО

4. Двойная иммобилизация ферментов. "Замуровывание" ферментов в поры неорганического носителя

Ферменты являются высокоактивными и селективными катализаторами многочисленных химических превращений. Однако использование их для нужд технологии длительное время ограничивалось относительно высокой стоимостью и низкой стабильностью по сравнению с катализаторами обычного типа.

В последние десятилетия в этой области был достигнут значительный прогресс, в основном, благодаря разработке техники иммобилизации, т.е. закрепления молекул ферментов на поверхности твердых водонерастворимых носителей или включения их в структуру гелей. Процесс иммобилизации решает две основные задачи: превращает фермент в гетерогенный катализатор, обеспечивая его многократное использование в проточных системах, и увеличивает его операционную стабильность, что является основным фактором, определяющим внедрение биокатализа в практику. Уже Ъ настоящее время иммобилизованные ферменты нашли широкое применение в пищевой и фармацевтической промышленности, медицине и аналитической химии.

Перспективы применения ферментов в химической технологии в промышленном масштабе связаны с получением высокостабильных и активных биокатализаторов, иммобилизованных либо адсорбцией, либо включением в гель. Среди препаратов для практического использования нет ковалентносвязанных ферментов вследствие очень высокой стоимости получаемого гетерогенного биокатализатора. В настоящее время в промышленных процессах с участием иммобилизованных ферментов применяются, в основном, органические носители (например, ДЕАЕ - сефадекс в производстве L -изомеров аминокислот в Японии).

- б

Органические материалы имеют достаточно высокое гидродинамическое сопротивление и не устойчивы в водных средах. Производительность таких процессов, как правило, не велика. Неорганические материалы обладают рядом преимуществ перед органическими: высокой механической прочностью; жестким скелетом, не изменяющимся при варьировании среды; возможностью регенерации; хорошими гидродинамическими характеристиками. Эти свойства позволяют использовать неорганические носители в высокопроизводительных реакторах проточного типа практически неограниченное время.

Несмотря на преимущества неорганических носителей, эти материалы в процессе иммобилизации используются недостаточно широко вследствие малой их изученности. Так, недостаточно исследованы проблемы влияния пористой структуры носителя на стабилизацию белковой глобулы и макрокинетическое поведение ферментативной реакции, а также практически не изучены проблемы влияния химической природы поверхности на каталитические свойства фермента во взаимосвязи свойств белковой глобулы и носителя.

Целью данной работы является изучение закономерностей иммобилизации и стабилизации ферментов на неорганических матрицах и разработка на этой основе эффективных методов иммобилизации, позволяющих получать высокостабильные и активные гетерогенные биокатализаторы, перспективные для промышленного применения.

выводы

1. Детально исследована роль пористой структуры в стабилизации ферментов на неорганических носителях. На примере изменения каталитических свойств лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и алкогольдеги-дрогеназы (АДГ), адсорбированных на различных формах окиси алюминия (<L , 9, £ ), показано, что оптимальной является бидиспер-сная пористая структура 0- и J- • Мез0П0Ры этих носителей соответствуют по размеру ферментативной глобуле (^100 А), обеспечивая ее многоточечное и прочное связывание с носителем и тем самым значительно повышая стабильность фермента, а макропоры о 1000 А) облегчают транспорт реагентов, что позволяет реализовать высокий процент активности. Адсорбированные на и ^ -окиси алюминия АДГ и ЛДГ превзошли по стабильности все известные препараты: стабильность этих ферментов увеличилась приблизительно на порядок по сравнению с нативными биокатализаторами.

2. Изучено влияние химической природы поверхности В -окиси алюминия, ее кислотно-основных и гидрофобных свойств, изменяющихся либо при последовательном зауглероживании носителя, либо предварительной адсорбцией веществ основного характера, на активность и стабильность адсорбированных оксидоредуктаз: АДГ, ЛДГ, глюкозо-оксидазы ^ГО) и тирозиназы (ТЗ). Показано, что для алкогольдегид-рогеназы и тирозиназы, ферментов с гидрофобной щелью активного центра оптимальными являются незауглероженные и малозауглерожен-ные (О-З/ьС) гидрофильные носители, поверхность которых модифицирована адсорбцией триса (аминоспирта). Ферменты ЛДГ и ГО, имеющие гидрофильный по природе активный центр, наиболее стабильны на д -окиси алюминия с 3-17%-ным гидрофобным углеродным покрытием на поверхности. На основании полученных результатов сформулирован принцип взаимного соответствия химической природы носителя ферментативной глобуле, в первую очередь, природе ее активного центра, с точки зрения их гидрофильно-гидрофобного характера. В дальнейшем сформулированный принцип был подтвержден и для ферментов других классов.

3. Разработаны методы дополнительного увеличения стабильности ферментов с лабильной четвертичной структурой (дрожжевая ал^-когольдегидрогеназа) путем поперечного сшивания адсорбированных на неорганическом носителе белковых молекул с помощью бифункциональных реагентов (глутарового альдегида и водорастворимого карбодиимида). Полученные предложенным способом препараты иммобилизованной АДГ обладают исключительно высокой стабильностью: стабильность этого очень лабильного фермента увеличилась в 20-40 раз.

4. Разработан простой и быстрый способ двойной иммобилизации оксидоредуктаз, позволяющий получать стабильные и активные гетерогенные биокатализаторы с высокими физико-механическими характеристиками. Он заключается в "замуровывании" ферментов в поры неорганического носителя с помощью неорганического геля, в данном случае геля кремниевой кислоты. При этом белковая глобула оказывается включенной одновременно и в гель, что сопровождается сохранением высокого процента (до 100%) активности и увеличением стабильности, и в пористую структуру неорганического носителя, что улучшает технические характеристики получаемого препарата (механическую прочность, гидродинамические показатели). Предложенный способ в силу мягкости условий "замуровывания" и отсутствия специфического ингибирующего влияния кремнегеля на ферментативную глобулу является эффективным и технологичным методом полу^ чения иммобилизованных ферментов самых различных классов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Б данной работе выявлены некоторые общие закономерности иммобилизации ферментов на неорганических носителях, позволяющие получать высокостабильные и активные биокатализаторы, перспективные для практического применения:

I. Важную роль в получении стабильных и активных препаратов иммобилизованных ферментов играет пористая структура неорганического носителя. Оптимальной пористостью из изученных модификаций окиси алюминия (d , # , Ц , ^ ) обладают $ и ^ -формы АЗ^О^, имеющие бидисперсную пористую структуру. Мезопоры этих носителей о

100-200 А) имеют размер, соответствующий ферментативной глобуле. В таких порах фермент связан наиболее прочно и многоточечно, кон-формационная подвижность его молекулы уменьшается, и, как следствие, значительно увеличивается стабильность. Макропоры д окиси алюминия облегчают транспорт реагентов, уменьшая тем самым диффузионное сопротивление, что позволяет реализовать высокий процент активности.

Препараты адсорбированной на 0 - ;и Ц- окиси алюминия дрожжевой алкогольдегидрогеназы (АДГ) превзошли по стабильности все известные из литературы: стабильность этого очень лабильного фермента увеличилась приблизительно на порядок по сравнению с натив-ной АДГ. Удалось также получить исключительно стабильные препараты иммобилизованной лактатдегидрогеназы (ЛДГ), сохранившие довольно высокую активность по истечении I года хранения при комнатной температуре, тогда как нативный фермент в этих же условиях дезактивировался за 1-2 месяца.

2. Другим важным фактором в получении активных и стабильных гетерогенных биокатализаторов является химическая природа поверхности, ее кислотно-основные и гидрофобные свойства (ранее этот фактор практически не учитывался). Химическая природа поверхности носителя изменялась двумя способами: последовательным зауглерожи-ванием д -окиси алюминия, обладающей оптимальной пористой структурой, в каталитической реакции пиролиза дивинила и предварительной адсорбцией.веществ основного характера, экранирующих сильнокислые поверхностные центры и уменьшающие полярность носителя. Было показано, что для получения активного и стабильного препарата иммобилизованного фермента необходимо взаимное соответствие химической природы поверхности ферментативной глобуле, природе ее функционально важных центров, в первую очередь, природе ее активного центра. Например, изученные нами ферменты (алкогольдегидроге-наза АДГ, лактатдегидрогеназа ЛДГ, тирозиназа ТЗ и глюкозооксида-за ГО) отличаются между собой природой активного центра: одни (АДГ, ТЗ) имеют гидрофобную щель активного центра, другие (ЛДГ) -гидрофильную. Исходя из этого, можно предположить, что экранирующее и деформирующее влияние поверхности носителя на активный центр фермента проявится в меньшей степени, если ферменты с гидрофобной щелью активного центра адсорбировать на гидрофильном носителе, а ферменты с гидрофильным активным центром - на гидрофобном. Действительно, было показано, что для каждого из изученных ферментов в зависимости от строения его белковой глобулы существует носитель с оптимальными кислотно-основными и гидрофобными свойствами поверхности, на котором фермент наиболее активен и стабилен. Так, для ЛДГ, фермента, как уже отмечалось, с гидрофильным активным центром, оптимальным является носитель с 3-17%-ным содержанием углерода на поверхности: адсорбированная на таких носителях лак-татдегидрогеназа сохранила до 70-80% первоначальной активности по истечении 3 лет хранения при комнатной температуре. АДГ и ТВ, наоборот, активны и стабильны, на носителе, поверхность которого почти не зауглерожена (0-3%) и модифицирована адсорбцией триса (аминоспирта), уменьшающего полярность поверхности.

Сформулированный на основании полученных результатов принцип взаимного соответствия поверхностных свойств носителя свойствам белковой глобулы, в первую очередь, ее активному центру, имеет важное как теоретическое, так и практическое значение, являясь практическим руководством в выборе оптимального для каждого конкретного фермента носителя.

3. Исходя из необходимости стабилизации макроструктуры белковой глобулы (особенно это важно для лабильных ферментов), нами были разработаны методы дополнительного увеличения стабильности иммобилизованного на неорганическом носителе фермента, при этом носитель обладал оптимальной пористой структурой (п.1) и оптимальной химической природой поверхности (п.2). Они заключаются в поперечном сшивании адсорбированных молекул фермента бифункциональными реагентами (глутаровым альдегидом и карбоднимидом), в результате чего значительно увеличивалась стабильность иммобилизованного биокатализатора. Так, сшивка глутаровым альдегидом адсорбированной на д -окиси алюминия дрожжевой алкогольдегидрогеназы увеличила стабильность этого фермента в 20-40 раз по сравнению с на-тивным ферментом.

4. С целью, улучшения каталитических свойств получаемого препарата иммобилизованного фермента и ускорения процесса иммобилизации, нами предложен метод двойной иммобилизации ферментов на неорганической матрице. Он заключается в "замуровывании" белковой глобулы в пористую структуру носителя с помощью неорганического геля. Иммобилизация в геле сопровождается сохранением высокого процента активности (до 100%) и увеличением стабильности, а иммобилизация на неорганической матрице улучшает технические характеристики получаемого препарата (механическую прочность, гидродинамические характеристики). "Замурованные" ферменты сочетают в себе эти свойства и являются перспективными для практического использования. В силу мягкости условий "замуровывания" (нейтральные значения рН, комнатная температура, отсутствие инициирующих радикальные реакции добавок) предложенный способ особенно эффективен для иммобилизации таких сложных по строению, лабильных ферментов, как оксидоредуктазы. Кроме того", этот способ прост в исполнении, отличается быстротой и технологичностью.

В заключении следует отметить, что закономерности иммобилизации ферментов на неорганических носителях, изученные на примере оксидоредуктаз, оказались эффективными и для ферментов других классов, в частности, для различных протеаз.

С практической точки зрения в данной работе в результате проведенных исследований удалось получить препараты иммобилизованных оксидоредуктаз, обладающих достаточной активностью и высокой стабильностью, превосходящих в ряде случаев все известные литературные данные, в том числе полученные при ковалентной иммобилизации ферментов (табл.17). Так, стабильность иммобилизованных предложенными способами дрожжевой алкогольдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы приблизительно на порядок превышает стабильность биокатализаторов, полученных при ковалентном связывании этих ферментов с поверхностью неорганических носителей (табл.17).

1. Котов В.Б. Новые разработки в области использования ферментовза рубежом: обзор,- М., 1981, 15 е.- Гл.управл. микробиол. пром. Отд-ние науч.-техн. информ. и техн.-эконом, исслед. микробиол. пром.серия У.

2. Чернов Г.Н., Москалев Г.Е., Верболова М.й. Микробиологическаяпромышленность сегодня и завтра (по страницам печати).- Экспресс-информация. Гл.управл.микробиол. пром.,М., 1983, вып. I, с.З.

3. Введение в прикладную энзимологию. Иммобилизованные ферменты

4. Под ред. И.В.Березина и К.Мартинека.- М.: изд-во Моск.Ун-та, 1982.- 382 с.

5. Chibata I.,Tosa Т.Industrial applications of immobilized enzymes and immobilized microbial cells.- Appl.Biochem. and

6. Bioeng., Vol.1, 1976,v .I, p.329-357.

7. Goldstein L.,Eatchalski-Katzir E. Immobilized enzymes-a survey.-Appl.Biochem. and Bioeng.,Vol.1, 1976, v. I, p.1.22.

8. Чернов Г.Н., Москалев Г.Е., Верболова М.И. Микробиологическаяпромышленность сегодня и завтра (по страницам печати).- Экспресс-информация. Гл.управл.микробиол. пром., М., 1983, вып. 2, с.2.

9. Barker S.A.Immobilized Enzymes. -Microbial. Enzymes and Bioconversion, 1980, v. 5, p.331-367.

10. Чернов Г.Н., Москалев Г.Е., Верболова М.И. Микробиологическаяпромышленность сегодня и завтра (по страницам печати).- Экспресс-информация. Гл.управл.микробиол.пром.,М., 1982, вып. 2, с.18.

11. Чернов Г.Н., Москалев Г.Е., Вероолова М.И. Микробиологическая промышленность сегодня и завтра (по страницам печати;.- Экспресс-информация. Гл.управл.микробиол.пром., М., 1981, вып. 9, сЛ.

12. Ю. Pat. 434.84.76 ( USA ;. Production of epoxides such as propylene oxide using packed catalytic bed containing moist resting cells exhibiting oxygenase activity/ Hou Ching T. Publ. 7.09.82.

13. Чернов Г.Н., Москалев Г.Е., Верболова М.И. Микробиологическая промышленность сегодня и завтра (по страницам печати;. Экспресс-информация. Гл.управл. микробиол./пром., М., 1982, вып.5, с.9-12.

14. Чернов Г.Н., Москалев Г.ш., Верболова М.И. Микробиологическаяпромышленность сегодня и завтра (по страницам печати).- Экспресс-информация. Гл.управл.микробиол. пром., М., 1982,вып. 6, с.2, с.II.

15. Чернов Г.Н., Москалев Г.Е., Верболова М.И. Микробиологическаяпромышленность сегодня и завтра (по страницам печати).- Экспресс-информация. Гл.управл.микробиол. пром., М., 1983, вып.З, с.З.

16. Иммобилизованные ферменты. Современное состояние и перспективы. Том.2 /Под ред. И.В.Березина, В.К.Антонова и К.Мартине-ка.- М.: изд-во МГУ, 1976.- 358 с.

17. Людшос Л.Л., Глемжа А.А., Устинников Б.А., Суменков Б.И.,

18. Березин И.В., Егоров A.M., Осипов А.П., Осипова Т.А. Иммобилизованные ферменты и перспективы их использования.- Ж. Всесоюзн. хим.общ-ва, 1980, т.25, № 5, с.581-588.

19. Allen Б.R.,Charles M.,Coughlin В. Fluidized-bed immobilized- enzyme reactor for the hydrolysis of cornstarch to glucose.- Biotechnol. and Bioeng., 1979, v. 21, Ю 4, p.689-706.

20. Егоров A.M., Ананичев А.В. Глюкозофруктозный сироп полноценный заменитель сахара. I. Всес.хим. о-ва, 1982, т.27, кн 6, с.676-682.

21. Ганга Б.С. Новое в технологии виноградных вин.- Кишинев: Картя Молдовеняска, 1982.- I7d с.

22. Linko p. Biotechnology in whey valorization.- Proceed.Int.

23. Symp. CIIA METE:Pood Ind.and Environ.,Budapest,1982,Budapest, s.a., P«201-209.21» Dohan L.A.,Baret J.L.,Pain S.,Delalande P. Lactose hydrolysis by immobilized lactase:semiindustrial experience.-Proceed.Pood Process Eng.Proc.2nd Int.Congr.Eng. and

24. Food and 8th Eur.Food Symp.,Helsinki, Vol. ^'London, 1980, p.137-147.

25. Henry S.,Koczan J.,Richardson 3?. Bactericidal effectivenessof immobilized peroxidases.-Biotechnol.and Bioeng., 1974, v. 16, № 12, p.289-291.

26. Веремеенко K.H., Карпенко Г.Ф. Перспективы применения иммобилизованных ферментов в медицине.- Укр. биохим. ж., 1979, т.51, № 4, с.409-419.

27. Takashi M.,Yoshiaki S.,Tabata M.,Sugaharo M.,Endo J. Application of immobilized enzymes to clinical analysis: use of co-immobilized, glucose oxidase and peroxidase in column form,- Biochimie, 1980, v. 62, № 8-9, p.581-585.

28. Marconi W. Biomedical application of enzymatic fibres Enzyme Eng. Vol. 4, 1978, v. 4, p.179-186.

29. Макаров К.Л., Кибардин С.А. Иммобилизованные биопрепаратыв медицине.- М.: Медицина, 1980.- 128 с.

30. Кулис Ю.Ю. Аналитические системы на основе иммобилизованныхферментов.- Вильнюс: Мокслас, 1981.- 200 с.

31. Ngo T.T.Bioanalytical application of immobilized enzymes.-Int.J.Biochem., 1980, v. Ц, № 6, p.459-466.

32. Weaver J.C.,Burns S.K.,. Potential impacts of physics and electronics on enzyme-based analysis.- Appl. Biochem.and Bioeng.Vol.5» 1981, v. 3, p. 271-308.

33. Werner .№.,Mahrlacher R.J.,Eiendeau C.J.,Murador E.,Cambi-aghi S. Immobilized enzymes in continuous-flow analysis.- Clin.Chem.,1979, v. 35, № I, p.20-23.

34. Weetall H.H. Preparation,characterization and application of enzymes immobilized on inorganic supports.- in:Immobilized Biochemicals and Affinity Chromatography/Ed.by R.B.Dun-lap.-New York-London:Plenum Press,1974,v.42,p.191-212.

35. Ianniello B.M.,Lindsay T.J.,Yacynych I.M. Immobilized xanthine oxidase chemically modified electrode as a dual analytical sensor.- Anal.Chem., 1982, v. 54, № 12, p.1980-1984.

36. Pfeiffer D.,Scheller P.,Janehen M.,Bertermann K.

37. Glucose oxidase bienzyme electrode for ATP,NAD,starch and dissacharides.- Biochimie,1980,v. 62,No.8-9, p.587-593*

38. Blaedel M.J.,Engstroom R.C. Reagentless enzyme electrodes for ethanol,lactate and malate.- Anal.Chem.,1980,v.52,No.11, p.1691-1697.

39. Walter R.R.,Johnson P.A.,Buck R.P. Histidine ammonia-lyase enzyme electrode for determination of L-histidine.-Anal. Chem,,1980,v.52,No.11,p.1684-1690.

40. Mattiasson B.,Danielsson B.,Mosbach K. Enzyme thermistor analysis in clinical chemistry and environmental and process control.- Enzyme Eng. Vol.4,1978,v.4,p.213-216.

41. Sundaram P.Y. Routine automated analysis of serum components with immobilized enzyme nylon tube reactors.-Proceed. 1st Eur, Congr.Biotechnol.,Interlaken,1978,Prepr.Part 2, Prankfurt/M.,19 78,p.116-117.

42. Нага Tadashi,Toriyama Motohiro,Imaki Masakatsu. The flow-injection analysis of D-glucose using a flow-cell with immobilized peroxidase and its application to serum.-Bull.Chem.Soc.Jap.,1982,v.55,No.6,p.1854-1857.

43. Березин И.В. Перспективы применения иммобилизованных ферментов.- Ж.Всео.хим. о-ва, 1977, т.22, Ш 5, с.538-544.

44. Samejima Hirotoshi. Kecent trends of enzyme engineering in Japan.- Enzyme Eng.Vol.2,1974,v.2,p.363-367.

45. Wiseman A. Biochemical basis of free and immobilized enzyme applications in industry,analysis,synthesis and therapy.- J. Cbem.Technol. and Biotechnol.,1980,v.30,No.10, p.521-529.

46. Patel Ramesh N.,Hou Ching T.,Laskin Allen I.,Felix Andre. Epoxidation of alkenes and hydroxylation of alkanes by soluble methane monooxygenase:regeneration of cofactor NADH2« J.Appl.Biochem.,1982,v.4,Жо.2,p.175-184.

47. Bont J.A.M. de,Ginkel D.G. van,Tramper J.,buyben K.Ch.A.M. Ethylene oxide production by immobilized Mycobacterium Py 1 in a gas-solid biorector.- Enzyme and Microbial.Technol.,1983,v.5,No.1,p.55-59.

48. Furuhashi K.,Uchida S«,Karube I.,Suzuki S. Propylene-oxide production by immobilized Nocardia corallina В-276,-Enzyme Eng. Vol.6,1982,v.6,p.139-140.

49. Alkenoider med enzym.- Kemisk Tidskrift,1980,No.8,p.19.

50. Никольская И.И., Петрова В.В., Хлудова М.С., Мхитаров Р.А.,

51. Орешин М.М., Казанская Н.Ф. Бессеребряные фотографические ферментные процессы.- В сб.: Успехи биоорганичёского катализа. Мш, 1979, с.275-285.

52. Martinet K.,Berezin I.Y. Artificial light-sensitive enzymatic systems as chemical amplifiers of weak light signals.-Photochem. and Photobiol.,1979,v.29,No.3,p.637-649,

53. Deloggio T.J.,Graves D.J. The kinetics and thermodynamics of hydrogen production using an immibilized hydrogenase enzyme.-Proceed. 2nd Pacif.Chem.Eng.Gong. (PAChPC* 77), Denver ,Golo,1977,Vol.2,p.791-792.

54. Zaborsky O.R. Enzymatic production of chemicals.- Proceed. Future Sources Org.Raw Mater. CHEMRAWI Invit.Lect.World Сonf.,Toronto,1978,Oxford e.a.,1980,p.513-531.

55. Тимофеева С.С. Перспективы применения иммобилизованных оксидоредуктаз в очистке сточных вод. Тезисы докл. I Все-союзн. конф. "Микробиол.очистки воды", Киев,1982, с.195--196.

56. Иммобилизованные ферменты. Современное состояние и перспективы. Том I/ Под ред. И.В.Березина, В.К.Антонова, К.Марти-нека.- М.: изд-во МГУ, 1976.- 296 с.

57. Митрофанова A.M., Чухрай Е.С., Полторак О.М. Нековалентноесвязывание алкогольдегидрогеназы на гидротермальном селика-геле.- Ж.физ. химии, 1975, т.49, № 12,с.3182-3184.

58. Микельсоне З.В., Митрофанова А.Н., Полторак О.М., Арен А.К.

59. Адсорбционная иммобилизация алкогольдегидрогеназы на сили-кагеле и силикагеле, модифицированном альбумином.- Вестник Моск.Ун-та,сер.химия, 1979, т.20, № 2, с.109-114.

60. Микельсоне З.В., Митрофанова А.Н. Алкогольдегидрогеназы натвердых носителях.- Рига, 1982.- Рукопись представлена ред. ж. Известия АН Латв.ССР. Деп.в ВИНИТИ 24 марта 1982, № 1331-82.

61. Митрофанова А.Н., Микельсоне З.В., Полторак О.М., Арен А.К. Адсороционная иммобилизация алкогольдегидрогеназы на гидрофобных носителях.- Вестн. Моск. Ун-та, сер.химия, 1979,т. 20, ге 2, C.II4-II7.

62. Toshio Xao,soichiro Musha. Иммобилизация ферментов на найлоновой трубке и силикагеле.- Рж. биолог, химия,1982, 21 Ф 472, Бунсэки кагаку , Bunseki Kagaki,i98i,v,30,Но.ЗэР.184-187.

63. Pat.No.4268423 (USA).Support matrices for immobilized enzyme s/Rohrbach R.P.,Maliarik M. Publ. 19.05.81.

64. Pat,No.951947 (USA). Preparation of support matrices for immobilized enzymes/Eohrbach R.P.,Lester G.W. Publ.19.08.80.

65. Митрофанова A.H., Чухрай E.C., Пряхин A.H., полторак О.М. Адсорбционная иммобилизация лактатдегидрогеназы на силикагеле, модифицированном холестерином.- Вестн. Моск. Ун-та, сер. химия, 1977, т.18, Ш 4, с.379-383.

66. Акц. заявка № 1259322, пр. США 767II6 от I4.IU.68 (Великобрига

67. HHH)Insolubilized enzymes/Corning Glass Works. Publ. 5.01.72.

68. Дегтярь P.Г., Гулый М.Ф. Иммобилизация глюкозооксидазы Peniciiiium vitale на аминосилохроме и свойства иммобилизованного фермента.- Укр. биохим. ж.,1979,т.51, № 4, с.363-368.

69. Ралис Э.В., Мурыгин В.Г., Мейзерайтите М.В., Дикчювене А.А., Селезнева А.А., Кулис Ю.Ю., Денис Г.И., Глемжа А.А. Анализатор дисахаридов на основе иммобилизованных ферментов.- Прикл. биохим. и микробиол., 1983, т.19, № I, с.136-142.

70. Моркявичене М.В., Дикчювене А.А., Паулюконис А.Б., Казлаускас Д.А. Иммобилизация полиферментной системы инвертаза мутаро-таза - глюкозооксидаза. - Прикл. биохим. и микробиол., 1982, т.18, № 5, с.688-695.

71. Kelly N.,Elynn A.,Johnson D.B. Preliminary investigation of the immobilization of yeast alcohol dehydrogenase.- Biotechnol. and Bioeng.,21977,v.19,No.8,p.1211-1213.

72. Johnson D.В.,Brougham M.J. Stability of immobilized alcohol dehydrogenase prepared using the thermostable enzymefrom yeast mitochondria.-Enzyme and Microbial.Technol., 1981,v.3,No.3,p.258-259.

73. Johnson D.B. Horse liver alcohol dehydrogenase immobilized on inorganic supports. Stabilizing effect of bound enzyme.-Biotechnol. and Bioeng.,1978,v.20,No.7,p.1117-1125.

74. Dixon J.E.,Stolzenbach ЗГ.Е.,Berenson J.A.,Kaplan И.О. The catalytical properties of lactate dehydrogenase cova-lently attached to glass beard.- Biochem. Biophys. Res. Comm.,1975,v.52,No.5,p.905-9l2.

75. Newirth T.L.,Diegelman M.A.,Pye E.K.,Kallen R.G. Multiple immobilized enzyme reactors determination of pyruvate and phosphoenolpyruvate using immobilized lactate dehydrogenase and pyruvate kinase.- Biotechnol. and Bioeng.,1975,^.15,No.6, p.1089-1100.

76. Dixon J.E.,Stolzenbach E.E.,Tsao Lee Сhing-lun,Kaplan N.O. Immobilized lactate dehydrogenases.- Isr.J.Chem.,1974,v.12, Ко.1-2,p.529-541.

77. Cho I.C.,Swaisgood H. Surface-bound lactate dehydrogenase: preparation and study of the effect of matrix microenviron-ment on kinetic and structural properties»- Biochim. et Biophys. Acta,1974,v.334,No.2,p.243-256.

78. Cho I.C,,Swaisgood H. The reactivation of an anfolded sub-units enzyme linked to solid surface.- Biochim. et Biophys. Acta,1972,v.258,No.2,p.675-679.

79. Messing R.A. Relationship of pore size and surface area to quantity of stabilized enzymes bound to glass.-Enzymologia,1970,v.39,N0.1,p.12-14.

80. Wasserman B.P.,Jacobson B.S.,Hultin H.O. E:xplanation of anomalous binding kinetics wiht a high yield immobilized enzyme system.- Biochim. et Biophys. Acta,1981,v,657,No.1,p.52-57.

81. Pat. No.3983000 (USA). Binding proteins to inoianic supports/Messing R.A. Publ. 28.09.76.

82. Valentova 0.,Marek M.,Svec P., Stamberg J,,Vodrazka Z. Comparison of different methods of glucose oxidase immobilization.- Biotechnol. and Bioeng.,1981,v.23,No.9,p.2093-2104.

83. Gorton Lo,Bhatti K.M. Potentiometric determination of glucose by enzymatic oxidation in flow system.- Anal.Chim, Acta, 1979,^.105,p.43-52.

84. Greenfield P.P.,Laurence R.L. Characterization of glucose oxidase and catalase on inorganic supports.- J.Pood Sci.,1975,v.40,No.5,p.906-910.

85. Atallah M.T.,Wasserman B.P.,Hultin H.O. Increasing catalyst activity by immobilization of enzyme conjugate.-Biotechnol. and Bioeng.,1976, v.18,No.12,p.1833-1837.

86. Weibel M.K.,Dritschiro W.,Bright H.J.,Humphrey A.E. Immobilized enzymes:a prototype apparatus for oxidase enzymes in с chemical analysis utilizing covalently bound glucose oxidase.- Anal.Biochem.,1973,v.52,No.2,p.402-414.

87. Ramachandran K.B.,Perlmutter D.D. Effect of immobilization on the kinetics of enzyme-catalyzed reactions.1.Glucose oxidase in reciculation reactor systems.- Biotechnol. and Bioeng.,1976,v.18,No.5,p.669-684.

88. Weetall H.H. Storage stability of water insoluble enzymes covalently coupled to organic and inorganic carriers.- Bio-chim. et Biophys.Acta,1970,v.2l2,No.1,p.1-7.

89. Bouin J.C.,Attalah M.0}.,Hultin H.O. Parameters in the construction of an immobilized dual enzyme catalyst.

90. Biotechnol. and' Bioeng.,1976,v.18,No.2,p.179-187.

91. Bouin J.C.,Dudgeon P.Ii.,Hultin H.O. Effect of enzyme ratio and pH on the efficiency of an immobilized dual catalystof glucose oxidase and catalase.-J.Food Sci.,1976,v.41,No.4, p.886-890.

92. Bouin J.C.,Attalah M.T.,Hultin H.O. Relative efficiencies of a soluble and immobilized two-enzyme system of glucose oxidase and catalase.- Biochim. et Biophys. Acta,1976,v.4J8,No.1,p.23-26.

93. Brotherton J.E.,Emery A.,Rodwell V.W. Characterization of sand as a support for immobilized enzymes.- Biotechnol. and Bioeng.,1976,v.18,No.4,p.327-543.

94. Pat.Wo.46l4 (Great Britain). Binding of biologically active macromolecules/Koch-Light Laboratories Ltd.Publ.1.09»77*103»Prenosil J.E. Immobilized glucose oxidase/catalase:deactivation in differential reactor.- Enzyme Eng.Vol.4,1978,v.4, p.99-100.

95. Федосеев В.Н., Треуфельдт Э.Э. Получение и свойства препаратов совместно иммобилизованных глюкозооксидазы и каталазы.-Тр. Таллин, политех, института, 1981, № 510, с.125-130.

96. Ястребова Е.А., Осипов И.В., Варфоломеев С.Д., Огасян П.К. Адсорбционная иммобилизация /iM'St)4" и алкогольдегидрогеназы на саже. Вест. Моск. ун-та, сер. химия, 1982, т.23, № 2, с.145-146.

97. Torstensson A.,Johansson G. Electrochemical regeneration of NAD covalently hound to liver alcohol dehydrogenase.-Anal. Lett.,1980,v.B13,No»10,p.837-849.

98. Cho Т.К.,Bailey J.E. Immobilization of enzymes on activated carbon:properties of immobilized glueoamylase,glucose oxidase and glucolactonase.- Biotechnol. and Bioeng.,1978, v.20,No.10,p.1651-1665.

99. Pat.No. 147353 (USA). High loading of immobilized enzymes on activated carbon supports/bailey J.E.,Cho Y.K. Publ. 15.09.81.

100. Tsukamoto T.,Morita S.,0kada J. Oxidation of glucose on immobilised glucose oxidase.- Chem. and Pharm. Bull., 1982,v.30,N0.3,p.782-788.

101. Coughlin R.W.,Aizawa M.,Alexander B.P.,Charles M. Immobilized enzyme continuous-flow reactor incorporating continuouselectrochemical regeneration of HAD.- Biotechnol. and Bioeng.,1975,v.17,No.4,p.515-526.

102. Aizawa M. ,0oughlin R.W.,Charles M. Activation of alumina with bovine serum albumine for immobilized enzymes.- Biotechnol. and Bioeng.,1975»v.17,No.9,p.1369-1372.

103. Kovalenko G.A.,Sokolovskii V.D. Immobilization of oxido-reductase on inorganic supports based on alumina.Immobilization of alcohol dehydrogenase on nonmodified and modified alumina.- Biotechnol. and Bioeng. ,1983;, v. 12,p.3177-3181.

104. Авт. свид. СССР № 1057535. Способ получения иммобилизованной дрожжевой алкогольдегидрогеназы / Коваленко Г.А., Соколовский В.Д., Шитова Н.Б. Опубл. в б.и. Ш 44, 30.11.83.

105. PatЛТо.4268419 (USA). Support matrices for immobilized enzymes/Rohrbach R.P. Publ. 19.05.81.

106. Messing R.A. Simultaneously immobilization of glucose oxidase and catalase in controlled-pore titanium.- Biotechnol. and Bioeng.,1974,v.16,p.897-908.

107. Pat.Ho. 850890 (USA). Immobilization of proteins on inorganic supports/Keyes Melvin. Publ. 3.O6.8O.

108. Лауринавичюс В.А., Кулис Ю.Ю. Свойства глюкозооксидазы, включенной в неорганические гели. Тез. Второго Всесоюзн. совещ. по ферментам микроорганизмов, 1978, Минск, с.206.

109. Pat. No. 3928143 (USA).Nethod of carrying out enzyme-catalyzed reactions/Coughlin R.W. Publ. 23.12.75.

110. Messing R.A. Adsorption of protein on glass surfaces and pertinent parameters for the immobilization of enzymes in the pores of inorganic carriers.-J.Non-Cryst.Solids,1975,v.19,p.277-285.

111. Cho Т.К.,Bailey J.E. Immobilization of enzymes on activated carbon:selection and preparation of the carbon supports.- Biotechnol. and Bioeng.,1979,v.21,No.3,p.461-476.

112. Tosa Т.,Mori T.,Puse N.,Chibata I. Studies of continuous enzyme reactions.1.Screening of carriers for preparationof water-insoluble aminoacylase.-Enzymologia (Acta Biocata-lytica),1966,v.31,No.4,p.21^-224.

113. Melander V/. ,Horvath C. Hydrophobic interactions in purification and utilization of enzymes.-Enzyme Eng.Vol.4,1978, v.4,p.355-363.

114. Англ.заявка № 7830535 . Immobilized enzyme preparation/ Corcoran E.G.,Senior P.J. Publ. 14.02.79. Опубл. 14.02.79.

115. Pat. No. 492508 (USA). Hydrophobic noncovalent binding of proteins to support material. Publ.1974.

116. Cashion P.,Javed A.,Lentini V.,Harrison D.,Seeley J,,

117. Pat.No. 16587 (USA). Protein immobilization on chelating resins/Hier Deborah E.,Oriel Patrich J. Publ. 20.06.81.

118. Lonnerdal Bo,Keen Carl L. Review. Metal chelate affinity chromatography of proteins.- J.Appl.Biochem.,1982,v.4, No.3,p.203-208.

119. Кестнер А.И. Иммобилизованные ферменты, в сб.: Успехи химии, 1974, т.43, № 8, с.1480-15II.

120. Тертых В.А., Янишпольская В.В. Химические аспекты иммобилизации ферментов на неорганической матрице.- в сб.: Адсорбция и адсорбенты, Киев: Наукова Думка, I960, вып.8, с. 3-27.

121. Heideprilm P.M. Immobilization of several multienzyme on porous glass beads J.Solid-Phase Biochem.,1980,v.5,No.1, P.5-9.

122. Eklund H.,Samama J.-P.,Wallen L.,Branden C.-I. Structure of a triclinic ternary complex of horse liver alcohol dehydrogenase at 2,9 £ resolution.~J.Mol.Biol.,1981,v.146,No.4,p.561-587.

123. Branden C.-I.,Eklund H.,Zeppezauver E.,Samama J.-P.,Plapp B. Structure and mechanism of alcohol dehydrogenase.-Proceed. Protein:Struct.,Funct. and Ind.Appl. PEBS Fed.Eur.Biochem. Soc.l2th Meet.,Dresden,1978,Oxford e.a.,1979,p.15-23.

124. Семичаевский В.Д. Иммобилизация Ст эндоглюконаз S с hi. 20

125. Eaton David L. The optimization of porous materials for immobilized enzyme systems.-in:Immobilized Biochemicals and Affinity Chromatography/Ed.by Bruce D.R.-New York-London :PIenum Pre s s,19 74,v.42,p,241-258,

126. Alexander G,В.,Helton W.M.,Iler R.K. The solubility of amorphous silica in water.-J.Phys.Chem.,1954,v.58,No.6,p.453-455* 172. Айлер P.К. Коллоидная химия кремнезема и силикатов.

127. М.: Госстройиздат, 1959.- 288 с. 173» Эйтель В. Физическая химия силикатов.- М.: Изд-во Иностр.лит-ры, 1962, с.244. 174.Weetall H.H.,Havewala Ж.В.,Pitcher W.H.,Jr.,Detar С.С.,

128. Yann W.P.,Yaverbaum S. Preparation of immobilized lactase:continued studies on the enzymatic hydrolysis of lactose.

129. Pat. No.4779 (Great Britain). Polysaccharide beads/Takeda Y.K.K.K. Publ. 29.10.80.179*Koyer G.P. Supports for immobilized enzymes and affinity chromatography.- Chem.Technol.,1974,v.4,No.11,p.694-700.

130. Sharma G.P.,Clark G.C.P.,Williams D.P. The adsorption of protein on metal surface.- Eng.Med,,1981,v.10,No.1,p.11-16.

131. Hailing P.J.,Dunnill P. Enzymes on magnetic supports.-Enzyme Eng.Vol.4,1978,v.4, p.151-152.

132. Halling P.J. ,Dunnill P.,Asenjo J.A. Nonporous magnetic supports for proteases,cell-lytic enzymes and ribonuclease: limits of reactants size.- Biotechnol. and Bioeng.,1979,v.21,No.12,p.2359-2563.

133. Hailing P.J., Dunnill P. Improved nonporous magnetic supports for immobilized enzymes.- Biotechnol. and Bioeng.,1979,v.21, N0.3,p.393-416.

134. Messing E.A. A stannous bridge for coupling urease to controlled pore titanium.- Biotechnol. and Bioeng.,1974,v.16, No.10,p.1419-1423.

135. Pat. No.22 (Prance). Composition insolubles comprenant des compos6s organiques doues d'activite biologique ou chimique. Publ. 2.06.78.

136. Танабэ К. Твердые кислоты и основания.- М.: Мир, 1973, с.57-63.

137. Липпенс Б.К., Стеггерда И.й. Активная окись алюминия.- в кн.: Строение и свойства адсорбентов и катализаторов, М.: Мир, 1973, с.190-232.

138. Березин И.В., Кершенгольц Б.М., Угарова Н.Н. Микроокружение ферментов как один из факторов, определяющих стабильность фермента. Стабилизация растворимой и иммобилизованной пероксидазы хрена.- Докл. АН СССР, 1975, т. 223, № 5, с. 1256-1259.

139. Pat. No. 95020 (USA). Support matrices for immobilized enzymes/Rohrbach P.P.'Publ. 19.05.81.

140. Pat. No.13 (France). Nouveau meteriau a oaractere cationique capable de fixer de fagon reversible des macromolecules biologique procedes de preparation et application/Tayot J.-M., Tardy M. Publ.1.04.77.

141. Pat. No. 4614 (Great Britain).Stable support material for enzyme immobilization/Koch-Light Lab.Ltd. Publ. 1.09.77. Киселев A.B.,.Лукьянович B.M., Никитин Ю.С., Оганесян Э.Б.,

142. Мартинек К., Торчилин В.П. Основные принципы стабилизацииферментов.- в сб.: Итоги науки и техники, сер. биологич. химия, М.: изд-во ВИНИТИ, 1978, т.12, с.17-47.

143. Мартинек К., Березин И.В. Стабилизация ферментов ключевойфактор при внедрении биокатализа в практику.- в сб.: Успехи химии, 1980, т.49, № 5, с.737-770.

144. Гольдмахер B.C., Клибанов A.M., Торчилин В.П., Смирнов В.Н.,

145. Мартинек К. Многоточечное взаимодействие белковой молекулы с носителем универсальный метод стабилизации ферментов.- Вестн. Моск. Ун-та, сер.химия, 1978, т.19, № 4, с.429-432.

146. Бровко Л.Ю., Угарова Н.Н. Кинетика и механизм инактивации и реактивации иммобилизованной люциферазы светляков Luciofdцессах. Биохимия, 1980, т.45, вып.5, с.794-801.

147. Мартинек К., Клибанов A.M., Чернышева А.В., Березин И.В. Основные принципы стабилизации ферментов. Повышение термостабильности <к -химотрипсина при иммобилизации в геле полиметакриловой кислоты. Докл. АН СССР, 1975, т.223, № I, с.233-236.

148. Гольдмахер B.C., Клибанов A.M., Торчилин В.П., Мишин А.А.,

149. Кулис Ю.Ю. Термическая стабильность лактатдегидрогеназы и.алкогольдегидрогеназы, включенных в высококонцентрированные гели.- Биохимия, 1979, т.44, вып. 3, с.417-423.

150. Мартинек К., Можаев В.В., Березин И.В. Можно ли реактивировать "необратимо" денатурированные ферменты? Докл. АН ССОР, 1978, т.239, № 2, с.483-485.

151. Можаев В.В., Смирнов М.Д., Мартинек К., Березин И.В. Изучениемеханизма термоинактивации иммобилизованных трипсина и (k -химотрипсина. Биоорган, химия, 1979, т. 5, К? 7, C.I09I-II0I.

152. Рачковская Л.Н., Мороз 3.M., Ануфриенко В.Ф., Гаврилов Р.Г.,

153. Левицкий Э.А., Зайковский В.И., Криксина Т.М., Физико-химическое исследование углеродминеральных адсорбентов на основе | -окиси алюминия.- Изв. СО АН СССР, 1982, вып.5, с.34-40.

154. Гаврилов В.Ю., Фенелонов В.Б., Рачковская Л.Н. Исследованиераспределения кокса в гранулах окиси алюминия.- Кинетика и катализ, 1983, т.24, № 5, с.1149-1153.

155. Hartree E.F. Determination of proteins a modification ofthe Lowry method that gives a linear photometric response . Anal. Biochem.,1972,v.48,N0.2,p.422-427•

156. Bearden I.C.,Jr. Quantitation of submicrogram quantitiesof protein by an improved protein-dye binding assay.-Biochim. et Biophys. Acta,1978,v.553»P«525-529.

157. Johnson D.B. Some observations on the effects of glutaraldehyde on horse liver alcohol dehydrogenase.- "l£nt. J. Biochem., 1977, v. 8,Ho. 6,p.475-475.

158. Краткий справочник химика / Сост. Перельман В.И.- М.: Химия,1964, с.313, с.325.

159. The Enzymes/Ed. by Boyer P.D.-New York:Academic Press,1975,v. XII, p. 427.

160. Siegel J.M.,Montgomery G.A. Ultraviolet absorption spectraof ПРИ and analogs of EPN.- Arch. Biochem. and Biophys., 1959,v.82,No.2,p.288-299.

161. Engasser J.M. A fast evaluation of diffusion effects on boundenzyme activity.- Biochim. et Biophys. Acta,1978,v.526,No. 2,P.301-310.

162. Полторак О.М., Пряхин A.H., Шайтан К.В. Об одном общем подходе к решению кинетических задач во внутридиффузионной области.- Вестн. Моск. Ун-та, сер.химия, 1975, т.16, № 5, с.536-543.

163. Полторак О.М., Пряхин А.Н., Шайтан К.В., Митрофанова A.M.,

164. Чухрай Е.С. Об определении констант Михаэлиса для иммобилизованных ферментов.- Вестн. Моск. Ун-та, сер. химия,1975,т.16, № 5, с.544-553.

165. Пряхин А.Н., Полторак О.М. Кинетика ферментативных реакцийс учетом эффектов внутренней диффузии.- Вестн. Моск.Ун-та, сер. химия, 1982, т.23, № 5, с.452-457.

166. Митрофанова А.Н., Чухрай Е.С., Полторак О.М. О некоторых вопросах диффузионной кинетики, осуществляемой лактатдегид-рогеназой.- Вестн. Моск. Ун-та^ сер. химия, 1977, т.18, № 3, с.277-281.

167. Таблицы физических величин / Под ред. Кикоина И.К. М.:

168. Атомиздат, 1976, с.292, с.294.

169. Заграфская Р.В., Карнаухов А.П., Фенелонов В.Б. Сущностьсравнительного метода и его применение к исследованию микропористых силикагелей. Кинетика и катализ, 1976, т.17, № 3, с.730-737.

170. Карнаухов А.П., Фенелонов В.Б., Буянова Н.Е., Заграфская Р.В.

171. Enzymes.Catalogue BDH Chemicals Ltd.-England,p.54.

172. Диксон M., Уэбб Э. Ферменты.- Мир, 1961, с.457.

173. The Enzymes / Ed. Ъу Boyer P.D.-New York:Academic Press,1975,v.XI,part A,p.124-185,p. 203-257.226. pfiffner E.,Lerch K. Histidine at the active site of Neurospora tyrosinase.- Biochem.,1981,v.20,No.21,p.6o29-6o35.

174. Ленинджер А. Биохимия. ,Mv: Мир, 1974, с.198.

175. Авт.свид. СССР, № 530885. Способ получения водонерастворимыхферментов /Кестнер А.И., Мандель М.О., Федосеев В.Н., Сий-мер Э.Х. Опубл. в б.и. № 37, 05.10.76.

176. Pat. No. 4177Ю7 (USA).Process for producing compositioncontaining insolubilited enzymes and/or insolubilized bacterial cells/Kumakura M. ,Yoshida M. ,Kaetsu I. Publ. 4.12.79.

177. Pat. No. 4225938 (USA). Method for immobilizing enzymes /

178. Kumakura M. ,Yoshida M., Kaetsu I. Publ.7.10*80.

179. Пат. 5633076 (Япония). Получение иммобилизованного фермента,включенного в пористый полимер /йосида Кацу, Кумакура Минору, Каэцу Исао. Опубл. 31.07.81.

180. Митрофанова А.Н., Чухрай Е.С., Полторак О.М. Некоторые аспекты механизма действия лактатдегидрогеназы в растворе и иммобилизованном состоянии.- Вестник Моск. Ун-та, сер.химия, 1976, т.17, № 4, с.413-416.

181. Митрофанова А.Н., Чухрай Е.С., Полторак ОцМ. О некоторых вопросах диффузионной кинетики реакции, осуществляемой лак-татдегидрогеназой,- Вестник Моск.ун-та, сер.химия, 1977, т. 18, № 3, с.277-281.