Применение комплекса физико-химических методов для изучения мочевых камней и мочи и установления связи между ними тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.01 ВАК РФ

На правах рукописи

Антонова Мария Олеговна

ПРИМЕНЕНИЕ КОМПЛЕКСА ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ МОЧЕВЫХ КАМНЕЙ И МОЧИ И УСТАНОВЛЕНИЯ

СВЯЗИ МЕЖДУ НИМИ

Специальность 02.00.01 - Неорганическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва 2015

1о ДЕК г014

005556886

005556886

Работа выполнена на кафедре «Физика и химия твердого тела» Федерального

государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Московский государственный университет тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова»

Научный руководитель: профессор, доктор химических наук

Кузьмичева Галина Михайловна Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный университет тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова».

Официальные оппоненты:

Кустов Андрей Владимирович доктор химических наук, ведущий научный сотрудник объединенного физико-химического центра растворов ФГБУ науки «Институт химии растворов им. Г.А. Крестова РАН» и ФГБОУ ВПО «Ивановский государственный химико-технологический университет».

Киселева Надежда Николаевна доктор химических наук, руководитель группы применения информационных технологий в материаловедении Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Институт металлургии и материаловедения им. А.А Байкова РАН».

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», химический факультет.

Защита состоится 28 января 2015 г. в 14.00 часов на заседании Диссертационного совета Д 212.120.05, созданного на базе Федерального государственного бюджетного учреждения высшего профессионального образования «Московский государственный университет тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова».

Ваши отзывы на автореферат просим присылать по адресу: 119571, Москва, пр. Вернадского, 86, МИТХТ им. М.В. Ломоносова.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МИТХТ им. М.В. Ломоносова по адресу: 119571, Москва, пр. Вернадского, д. 86, МИТХТ им. М.В. Ломоносова.

С авторефератом диссертации можно ознакомиться на сайте http://mitht.ru.

Автореферат диссертации разослан ОЗУ/. 2014 г. Ученый секретарь

Диссертационного Совета л Е.Е. Никишина

Угср/^

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Наблюдаемая в настоящее время тенденция к междисциплинарности в решении имеющихся проблем в каждой области знания не обошла и медицину, в частности, урологию. Выбор метода лечения мочекаменной болезни (МКБ) и метафилактических мероприятий напрямую зависит от состава и строения мочевых камней, состава мочи, в которой произошло их образование и рост, и связи между ними, что требует усилий не только медиков, но и специалистов в других областях науки (химия, кристаллография, математика, информационные технологии).

На сегодняшний день известны работы по определению качественного и количественного фазового состава мочевых камней, в основном, рентгенографическим методом (Лонсдейл К.И. и Сьютор Д. 1971; Каткова В.И. 1996; Голованова О.А. 2009 и др.) и частично методом ИК-спектроскопии (Голованов С.А. 2002), элементного состава рентгенофлуоресцентным методом (Борат В.Ф. 2002 и др.) и изучению микроструктуры методом сканирующей электронной микроскопии (Каткова В.И. 1996, Шевырин А.А., Стрельников А.И., Кустов А.В. 2013). Однако в литературе не представлено описание качественного и количественного анализа многофазных (более 2-х) мочевых камней всех композиций, в частности, фосфатных (разделение апатитов и фосфатов магния). Результаты систематического изучения камней большого размера, включая коралловидные, отсутствуют, а имеющиеся данные ограничиваются лишь определением качественного фазового состава. За исключением небольшого числа работ (Голованов С.А. 2002; Dionex Corporation, 2003) в литературе нет сведений о методах определения в моче таких важных для процесса камнеобразования ионов как цитрат-ионы. Полностью отсутствуют работы, в которых представлено комплексное изучение общего состава мочевых камней и мочи больных МКБ до и после проведенного лечения и последующих метафилактических мероприятий с последующим анализом результатов. Все это делает невозможным установление корреляций между составами мочевых камней и мочи - среды их образования - и формирования представлений о процессах камнеобразования.

С другой стороны, развитие и постоянное усовершенствование инструментальной базы, методического и программного обеспечения позволяют применить методы и/или методики, которые ранее не были доступны, или оптимизировать известные. Эти возможности создают благоприятные условия не только для подтверждения и уточнения имеющихся на сегодняшний день результатов и устранения противоречий, но и для получения новых знаний о мочевых камнях и моче, теории камнеобразования, что впоследствии позволит научно подойти к проблеме предотвращения рецидивов, а также к выбору мер метафилактики МКБ.

Цель данной работы: обоснование, усовершенствование и применение

комплекса информативных физико-химических методов для характеризации общего состава и строения мочевых камней, определения состава мочи и нахождения корреляций между ними.

Для достижения поставленной цели необходимо решить ряд задач:

1. Адаптировать известные и применить новые методы и методики для определения качественного и количественного общего состава многокомпонентных мочевых камней in vitro, включая фазовый и элементный состав, содержание белковых и небелковых органических компонентов, а также кристаллизационной воды в ряде конкрементов;

2. Определить содержание ионов-ингибиторов и ионов-катализаторов камнеобразования в составе мочи химическими и физико-химическими методами;

3. Установить корреляции между видом и свойствами (твердость in vitro, структурная плотность in vivo) мочевых камней и составом мочи; выявить специфику мочевых камней большого размера, в том числе, коралловидных;

4. Проанализировать известные теории роста и предложить модели процессов роста мочевых камней на основе результатов комплексного исследования мочевых камней и мочи;

5. Разработать методологию изучения камнеобразования с использованием результатов обследования больных МКБ, включающего, в том числе, анализы мочи и мочевых камней in vivo и in vitro с конечной обработкой полученных данных с использованием интеллектуальных систем принятия решения.

Научная новизна работы

1. На основании результатов изучения мочевых камней всех композиций комплексом физико-химических методов и их анализа:

• Разработана методика рентгенографического разделения и количественного определения содержания отдельных компонентов, входящих в состав многофазных (двух, трех и более) мочевых камней, в том числе, и смесей апатитов (карбонатапатит, гидроксилапатит и карбонатгидроксилапагит) и фосфатов магния (струвит и гексагидрат смешанного фосфата магния и калия). Предложен рентгенографический и термогравиметрический методы определения количества кристаллизационной воды в составе ведцеллита;

• Адаптирован и оптимизирован метод Лоури для количественного определения белковых компонентов, и применен метод газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектором для качественного и количественного определения ряда небелковых компонентов (ацетальдегид, ацетон, 2-пропанол, 1-бутанол, пропионовая кислота, уксусная кислота, этанол) в составе мочевых камней. Установлен разный характер распределения белка и небелковых компонентов по объему уратов, оксалатов и фосфатов;

• Показана возможность оценки фазового состава мочевых камней (ведделлит, мочевая кислота, дигидрат мочевой кислоты, урат аммония,

карбонатапатит, гидроксилапатит, карбонатгидроксилапатит, струвит, брушит) на основе особенностей их морфологии с использованием метода сканирующей электронной микроскопии;

• Найдено, что мочевые камни большого размера (>10 мм) представлены преимущественно фосфатами, оксалатами, уратами, уратно- и фосфатно-оксалатными смесями, а коралловидные - фосфатами, уратами и фосфатно-оксалатными смесями, реже оксалатами и оксалатно-уратными смесями. Найдено изменение от центра к периферии как фазового состава камня, так и элементного (в центре уратов элементный состав менее разнообразен, чем на периферии, а для фосфатов и оксалатов наблюдается обратная картина);

• Выявлена связь между твердостью in vitro и структурной плотностью in vivo и обнаружено, что твердость мочевых камней зависит от аморфной составляющей, вида микроструктуры, наличия текстуры, количества кристаллизационной воды и содержания белка в составе мочевых камней и характера его распределения по объему.

2. На основании результатов изучения состава мочи комплексом методов: клиническим (общий анализ, суточная экскреция), химическим (ферментативный анализ, титриметрия) и основным физико-химическим (безреагентная ионная хроматография):

• Одновременно определены 13 ионов, предложены диапазоны нормальных показателей в моче ионов, участвующих в камнеобразовании (NCV, N03", и изоцитрат- [(СН2)СН(ОН)СН(СОО)3]3" ионов) и подтверждены известные для NH4+, Na+, К+, Mg2+, Са2+, СГ, S042" и цитрат- [(СН2)2С(ОН)(СОО)3]3" ионов. Объяснено расхождение результатов определения ионов РО43" и мочевой кислоты методами клинического исследования мочи (суточная экскреция) и безреагентной ионной хроматографии.

3. Установлена связь между видом мочевого камня (оксалат, урат, фосфат) и концентрациями иона-камнеобразователя (соответственно, оксалат-ион, мочевая кислота, фосфат-ион), а также и иона-ингибитора (цитрат-ионы) в моче больных МКБ для оценки состава мочевого камня in vitro и риска камнеобразования.

4. Уточнены и дополнены теории роста мочевых камней (органическая, коллоидная, инфекционная и нанобактериальная) с использованием результатов совместного изучения мочевых камней и мочи и предложены процессы роста камней размером >10 мм по трем моделям: при значительных отклонениях камнеобразующих компонентов в моче от нормы, нарушении равновесия между коллоидным состоянием и кристаллическим, наличии бактерий (нанобактерий) в составе моче при колебаниях концентрации ионов-камнеобразователей в пределах нормы.

Практическая значимость

1. Создана база данных, включающая в себя информацию комплексного обследования больных МКБ, в том числе, результаты анализа мочевых камней и

мочи физико-химическим методом. Применены и подтверждены математические методы распознавания образов для оценки вида камней in vivo, прогноза возможного рецидива и определения типа камнеобразования с использованием различных алгоритмов распознавания.

2. Разработано исполняемое приложение с графическим интерфейсом для наблюдения динамики изменения показателей мочи (программа «Lithos-Test 1»), мочи и крови (программа «Lithos-Test 2») и оценки риска рецидивного камнеобразования. Применение данных программ позволяет выделить отдельные показатели мочи и крови, выходящие за пределы стандартных (т.е. за пределы «нормы»), контролировать динамику содержания в моче камнеобразующих ионов и ингибиторов роста камней, выбрать оптимальные метафилактические мероприятия, индивидуальные для конкретного больного МКБ. Для эффективного распространения и использования программ Lithos-Test 1 и Lithos-Test 2 создан интернет-сайт www.chem-for-med.ru.

3. Созданные методики рентгенографического качественного и количественного определения состава многофазных мочевых камней, включая фосфаты и ураты, легли в основу комплекса программ ChemMed.

Работа выполнена совместно с факультетом вычислительной математики и кибернетики МГУ им. М.В. Ломоносова, Вычислительным центром им. A.A. Дородницына РАН, кафедрой управления разработкой программного обеспечения Национального исследовательского университета «Высшая школа экономики».

Полученные результаты и методология изучения процесса камнеобразования применяется на кафедре урологии (заведующий кафедрой - член-корреспондент РАМН, профессор Ю.Г. Аляев) Первого МГМУ им. И.М. Сеченова.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Разработанные методики и результаты изучения мочевых камней комплексом физико-химических методов для определения их общего состава (качественный и количественный фазовый и элементный состав, содержание белка и небелковых компонентов во всех видах камней и кристаллизационной воды в ряде конкрементов) и морфологии: дифрактометрия с использованием рентгеновского и рентгеновского синхротронного излучения (основной метод), ИК-спектроскопия, спектрофотометрия, термогравиметрия, газовая хроматография с пламенно-ионизационным детектором, сканирующая электронная микроскопия с рентгеноспектральным микроанализом, низкотемпературная адсорбция азота;

2. Корреляции между общим составом и свойствами (твердость камня in vitro и структурная плотность камня in vivo) мочевых камней, а также видами камней (оксалаты, фосфаты, ураты) и составом мочи (содержание ионов-ингибиторов камнеобразования - цитрат-ионы и ионов-катализаторов — оксалат-и фосфат-ионы, мочевая кислота);

3. Методология исследования камнеобразования, включающая результаты

изучения общего состава и свойств мочевых камней, состава мочи и полученные корреляции, а также этапы обследования больных МКБ (до лечения, после соответствующего лечения и метафилактических мероприятий) с последующей математической обработкой данных.

Личный вклад

Планирование эксперимента, проведение рентгенографических работ, спектрофотометрических исследований, подготовка банков данных для применения математических методов распознавания образов и создания компьютерных программ, обработка, анализ и обобщение всех экспериментальных результатов выполнено непосредственно соискателем.

Апробация работы

Основные результаты работы докладывались и обсуждались на Российских и Международных конференциях: II Всероссийская конференция с международным участием «Аналитика России» (Краснодар, 2007), XVIII Менделеевская конференция молодых ученых (Белгород, 2008), Научно-практическая конференция «Научно - техническое творчество молодежи — путь к обществу, основанному на знаниях» (Москва, 2008), Всероссийская конференция по рентгеноспектральному анализу с международным участием (Краснодар, 2008), III Всероссийская конференция с международным участием «Аналитика России» к 175-летию со дня рождения Д.И. Менделеева (Краснодар, 2009), Конкурс проектов молодых ученых в рамках 15-й международной выставки химической промышленности и науки «Химия - 2009» (Москва, 2009), I Международная конференция Российского химического общества имени Д.И. Менделеева «Ресурсо- и энергосберегающие технологии в химической и нефтехимической промышленности» (Москва, 2009), Российская научная конференция с международным участием «Фундаментальные исследования в уронефрологии» (Саратов 2009), XVII международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва, 2010), Российская научная конференция с международным участием «Мочекаменная болезнь: фундаментальные исследования, инновации в диагностике и лечении» (Саратов 2011), XIX Менделеевский съезд по общей и прикладной химии (Волгоград 2011), IV молодежная научно-техническая конференция «Наукоемкие химические технологии - 2011» (Москва, 2011), Н-Конгресс урологов Сибири с международным участием (Томск, 2013), XII (Саратов,2012), XIII (Москва,2013) и XIV (Саратов, 2014) Конгрессы урологов, Первая российская конференция по медицинской химии «MedChem Russia 2013» (Москва, 2013), Конкурс «От идеи к бизнесу: возможности инновационной инфраструктуры и институтов развития в России. Проблемы, опыт, идеи, предложения», http://9000innovations.ru/, 15 июня - 31 августа 2013 (III место).

Получено 6 дипломов лауреата Российских и Международных выставок, конференций и конкурсов.

Публикации

По результатам диссертационной работы опубликовано 12 оригинальных статей, из них 10, входящих в список изданий, рекомендованных ВАК, а также 21 тезисы докладов на Российских и международных конференциях, и семинарах; получены 3 свидетельства о регистрации программ для ЭВМ.

Структура и объем работы

Диссертационная работа состоит из введения, 5 глав, выводов, списка цитируемой литературы (139 наименований) и 15 приложений. Объем диссертации составляет 233 страницы машинописного текста (154 страницы основного текста), содержит 28 таблиц и 61 рисунок.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Во введении обоснована актуальность темы диссертации, показано современное состояние проблемы, сформулированы цель и основные задачи работы, представлены положения, выносимые на защиту.

Методика эксперимента Объекты исследования

В представленной работе изучены мочевые камни пациентов НИИ уронефрологии и репродуктивного здоровья человека Первого МГМУ им. И. М. Сеченова. Особенность объектов исследования - отсутствие двух одинаковых по составу мочевых камней, отличие по составу и строению центра и периферии конкремента, встречающийся малый размер объектов (-1-3 мм), необходимость в применении, адаптации и усовершенствовании методов, ранее не использующихся при изучении этих веществ, а также разработка новых методик в рамках известных методов.

Анализ мочевых камчей

Рентгенография с использованием рентгеновского и синхротронного излучения. Рентгеновская съемка мочевых камней осуществлена на автоматизированных дифрактометрах ДРОН-3 (графитовый плоский монохроматор), HZG-4 (Ni фильтр) и XRD-6000 (фирма Shimadsu, графитовый монохроматор) на СиКа излучении в интервале углов 29 5-50° (непрерывный режим, 1 град/мин) и в интервале углов 20 5-100° (пошаговый режим: время набора импульса 10 с, величина шага 0.02°). Съемка ряда образцов проведена в Научно-исследовательском центре «Курчатовский институт» на пучке синхротронного излучения с >.=0.98004 А из поворотного магнита накопителя «Сибирь-2».

Качественный рентгенофазовый анализ выполнен с использованием автоматизированной базы данных PDF JCPDS, структурного банка данных ICSD, оригинальных работ и рассчитанных по структурным данным теоретических дифрактограмм.

Количественный рентгенофазовый анализа проведен методами

коэффициентов (впервые рассчитаны коэффициенты К для всех возможных сочетаний составов многофазных мочевых камней), модельных смесей (подготовлены и изучены 10 смесей с различным содержанием вевеллита и мочевой кислоты; Дг = 5 %), корундового числа (впервые определено 1/1С0Г = 1.07 для вевеллита; Аг = 3 %), полнопрофильным (Дг = 1 %). Разработан комбинированный метод определения количественного состава мочевых камней, который учитывает коэффициенты К и возможное отклонение от прямолинейной зависимости 100%-ой интенсивности дифракционного отражения компонента от его содержания в ряде смесей (Дг = 3 %).

Впервые качественно и количественно разделены апатиты на карбонат-гидроксил- и карбонатгидроксилапатит, а также фосфаты магния на струвит и гексагидрат смешанного фосфатат калия и магния на основе выбора рентгенометрических данных группы отражений (не всегда максимальных и не подверженных текстуре), однозначно характеризующих отдельную фазу. На основании полученных данных был создан комплекс программ СЬетМес! для моделирования дифрактограмм двухфазных смесей мочевых камней и камней предстательной железы всех композиций, и определения их качественного и количественного фазового состава.

Для определения количества кристаллизационной воды в составе оксалатных мочевых камней по структурным данным ведцеллита СаС204 х иН20 выполнен расчет теоретических значений интенсивности дифракционных отражений по формулам дифракционной кристаллографии в предположении разного содержания молекул кристаллизационной воды (п =2.0, 2.25, 2.375, 2.5). Анализ результатов расчета позволил найти отражения (121, 141, 213, 532), наиболее чувствительные к вариациям величины п, что подтверждено экспериментальными данными.

Термогравиметрический анализ проведен на приборе (^-дериватограф: термопара - Р1/Р1-Ш1, 1„ач ~28 °С, 1ко„ 600 °С; скорость развертки (нагрева) 10°/мин; материал тигля - кварц, масса навесок ~ 100 мг для определения содержания кристаллизационной воды в оксалатах (Дг = 10 %).

Метод ИК-спектроскопии (ИК-Фурье спектрометр Ер 5.5) применен для качественного анализа и определения количественного состава мочевых камней аналогично (Голованов С. А. 2002 г) (Дг= 10 %).

Содержание белка в мочевых камнях разных композиций определено методом Лоури на спектрофотометре СФ-26 (длина волны >.=750 нм). При построении градуировочного графика использовались 6 стандартных растворов триптофана СпН^^Ог с концентрацией от 8 до 48 мкг/мл. На этапе пробоподготовки для установления времени выщелачивания проводилось исследование белка, выделившегося из навески (0.1 г и 0.15 г) измельченного камня в растворе 0.1М ЫаОН в дискретном временном интервале 24 - 144 ч. Экспериментально установлено, что наибольшая концентрация белка выделяется

при выщелачивании в течение 96 ч, а в течение 120 и 144 ч белок разлагается (Дг = 7 %).

Для определения небелковых органических компонентов в составе мочевых камней (ацетальдегид, ацетон, 2-пропанол, 1-буганол, пропионовая кислота, уксусная кислота, этанол) впервые применен метод газовой хроматографии: хроматограф Кристалл-2000М с пламенно-ионизационным детектором и капиллярной колонкой ZB-5 (длина 30 м, диаметр 0.32 мм, толщина слоя жидкой неподвижной фазы с 5% фенилполисилоксаном и 95% диметилполисилоксаном 0.5 мкм; используемый расход газа-носителя: водород - 20 мл/мин, воздух - 200 мл/мин, азот - 0.7 мл/мин, сброс - 21 мл/мин, деление потока - 1:30; линейная скорость азота через колонку при 40 °С - 25.3 см/сек; нагрев колонки: 40 °С -изотерма 5 мин., далее нагрев до 300 °С со скоростью 10 °С/мин). Количественный анализ ацетальдегида, ацетона и 2-пропанола проводился по методу внешнего стандарта (Дг = 7 %). В процессе подготовки к анализу измельченные пробы помещались в трубку-пробоотборник, на конец которой крепились заглушки из стекловаты, предварительно продутые около 1 часа азотом при 300 °С. Ввод пробы осуществлялся в два приема: сначала проба термостатировалась 1 мин при 100 °С или 150 °С, азот поступал в колошсу минуя пробоотборник, затем через трёхходовой кран азот поступал в пробоотборник и далее в колонку. Одновременно с переводом направления азота производился запуск программы хроматографа.

Сканирующая электронная микроскопия с рентгеноспектральым микроанализом (РСМА) (сканирующий электронный микроскоп высокого разрешения с автоэмиссионным катодом 7500F фирмы JEOL). С целью исключения эффектов зарядки поверхности образцов и их разрушения под воздействием электронного пучка применяли различные методические подходы: исследования проводили при низком токе электронного пучка (3x10-11 А), применяли специальный режим Gentle Beam (диаметр электронного зонда оставался небольшим, что способствовало сохранению высокого разрешения), на поверхность скола методом магнетронного напыления наносили металлическую пленку платины (для повышения электронной плотности поверхности образца). Количественный и качественный РСМА выполнен на энергодисперсионном рентгеновском микроанализаторе INCA Penta FETx3 фирмы OXFORD (Великобритания), установленным в той же высоковакуумной камере микроскопа. Калибровка прибора (6 итераций) осуществлялась по двум линиям К-серии стандартного образца кобальта. Количественный анализ элементов с атомным номером N>3. проведен с использованием программы INCA Penta FET (Дг = 0.5 %).

Анализ мочи

Для одновременного определения 13 ионов в моче впервые в России применен физико-химический метод безреагентной ионной хроматографии —

БИХ (работа выполнена совместно с аналитическим центром МГУ им. М.В. Ломоносова). Разделение катионов и анионов проведено на ионном хроматографе ICS-2000 фирмы «Dionex» с кондуктометрическим детектором с использованием колонок «IonPac CS17» (250x4 мм, 5 мкм, 30°С) и «IonPac AS11» (250x4 мм, 5 мкм, 30°С), соответственно. В результате полностью разделены и количественно определены неорганические катионы NH4+, Na+, К+, Mg2+, Са2+ и анионы СГ, N02-, N03\ S042", Р043\ а также цитрат- [(СН2)2С(ОН)(СОО)3]3~, изоцитрат- [(CH2)CH(OH)CH(COO)3]J" ионы и мочевая кислота - C5H4N4O3 (урат-ионы). Для определяемых ионов разрешение пиков больше 1.0 (сравнимые результаты получены в Dionex corporation, 2003). Содержание N02", N03~, Р043" и изоцитрат-ионов [(СН2)СН(ОН)СН(СОО)3] ~ в моче больных МКБ определено нами впервые как и их стандартные (нормативные) показатели в моче Объяснены различия между концентрацией фосфат-ионов и мочевой кислоты в моче, полученные химическими методами и БИХ.

Для определения ионов С2042" и цитрат-ионов в моче применялся ферментативный метод с малатдегидрогеназой и L-лактатдегидрогеназой.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ Мочевые камни и методы их исследования Состав мочевых камней можно условно разделить на три группы: фазовый, элементный и общий. Элементный состав включает в себя химические элементы, которые входят в состав камня и определяются физико-химическими, химическими и различными спектральными методами (в частности, мы использовали для этих целей РСМА).

Ураты:

C5H4N403x 2Н20 (дигидрат мочевой кислоты) CsH4N403 (безводная мочевая кислота), (NH4)C5H3N403 (урат аммония)

Фосфаты:

MgNH4P04 «6Н20 (струвит) МдКР04 вбНгО

MgNH4P04 • Н20 (диптщрит) Са10(РО4)6(ОН)2 (гидроксилапатит)

Са10(РО4, С03, ОН)6(ОН)2

Са10(РО4)6(СО3) (KapÔoiнатапатит) СаНР04 • 2Н20 (брушит)

СаС204 СаС204

Мочевые камни

Оксалаты:

Н20 (веоеллит) пН20 (вед^ллит)

Рис. 1. Основные виды мочевых камней 11

Другие:

1) Органические: С6Н12М20432 (цистин). С5Н4М402 (ксантин), С270450Н (холестерин) и другие белковые и небелковые компоненты;

2) Неорганические: СаС03 (кальцит, арагонит, ватерит)

Ре203, БЮ2«2Н20, Са504 • 2Н20

К фазовому составу можно отнести все твердые компоненты как кристаллические, так и аморфные. На сегодняшний день известно 58 соединений, входящих в состав мочевых камней, которые можно разделить на 4 основные вида: оксалаты, фосфаты, ураты и другие (органические и неорганические) соединения (рис. 1). Среди 500 изученных мочевых камней на долю камней большого размера (>10 мм) приходится ~ 10% с преобладанием фосфатов, уратов и оксалатно-уратных смесей (рис. 2). 6.5 % всех камней составляют коралловидные, занимающие практически всю полостную систему почки и представленные преимущественно фосфатами, уратами и оксалатно-фосфатными смесями (рис. 2). Данные камни встречаются в ~3 + 5% случаев МКБ, вероятность их рецидива достигает -10%, а в течение 5 лет уже -50% при отсутствии лечения.

Изученные камни (500 - 100%)

Смешанные камни:

оксалаты ураты -15 %: оксалаты + фосфаты-3 %

Камни большого размера {¿10 мы}: ~15°Л

Смешанные намни:

оксалаты + ураты-19 %: оксалат ы * фосфат ы - 6%

Коралловидные камни: ~ 6.5 %

Смешанные камни: оксалаты + у роты-7 %; оксалаты * фосфаты - 26 Ж

Рис. 2. Распространенность изученных мочевых камней 2010-2014 гг.

Если же провести подобную статистику среди камней всех размеров (> 1 мм), то оксалаты, фосфаты и ураты составляют -67%, -11% и -4%, соответственно, а остальные -18% - смешанные камни: оксалаты+ураты (-15%) и оксалаты+фосфаты (-3%) (рис. 2). Отметим, что наиболее часто встречаются камни смешанного типа (в том числе смешанные камни одного вида), являющиеся и более сложными в исследовании, для которых мы применили рентгенографию, а для аморфных фаз или для подтверждения найденного

состава - ИК-спектроскопию. Нами впервые идентифицирован и описан (рентгенография и ИК-спектроскопия) мочевой камень, состоящий из текстурированного ди(гидрата) мочевой кислоты в смеси с красным пигментом 3.

Совместное применение СЭМ и рентгенографии с анализом литературных (Каткова В.И. 1996, Кустов A.B., 2011) и полученных результатов позволило предложить оценку составов мочевых камней по их морфологии (табл., рис. 3).

Общий состав помимо кристаллических веществ включает в себя водорастворимые органические компоненты, которые представлены белками, гликопротеидами и полисахаридами, как правило, рентгеноаморфными.

а б в

Рис. 3. Фотографии микроструктуры урата аммония (а), струвита и карбонатапатита (б) и карбонатгидроксилапатита (в)

Выявлено, что количество белка сильно варьируется в зависимости от вида камней: его доля в фосфатных образованиях может составлять до нескольких процентов от общей массы, в уратах содержание белковых веществ выше, а в оксалатах - наиболее высокое (рис. 4а). Кроме того, белок по-разному распределяется по объему мочевых камней: в центре уратов и оксалатов больше белка нежели на периферии, а для фосфатов наблюдается обратная картина.

Для оксалатов характерно отсутствие 2-пропанола (в вевеллите) и пропионовой кислоты (в ведцеллите), а наименьшее число небелковых компонентов зафиксировано в фосфатном камне (смесь карбонатгидроксилапатита -43% и струвита -57%), в котором присутствует только 2-пропанол и 1-бутанол. В уратном камне (смесь мочевой кислоты -68% и дигидрата мочевой кислоты -32%) найден весь набор компонентов, содержание которых меняется неравномерно по объему кристалла (от центра к периферии): в центре камня преобладают ацетон и 2-пропанол, а на периферии - ацетальдегид. Перечисленные жидкие небелковые органические вещества диффундируют в мочевые камни из мочи, и в отличие от белка по-иному распределяются по

камням разного типа: наибольшее их количество (в частности, ацетальдегид, ацетон, 2-пропанол) содержится в уратах (рис. 46).

а б

Рис. 4. Содержание белка (а) и небелковых компонентов (б) в мочевых камнях разного состава

Найдено, что твердость камней in vitro (Р, усл. ед), зависит от доли аморфной составляющей и концентрации белка (чем больше их содержание, тем мягче камень) и от характера распределения белка по конкременту, количества кристаллизационной воды (чем меньше молекул воды в составе, тем тверже камень), кристаллического состояния (текстурированные камни наиболее твердые) и вида микроструктуры. Так, из рис. 5 видно, что периферия урата представлена переплетением кристаллических образований, а центр -отдельными кристаллами: центр более рыхлый (Р=0 усл. ед) по сравнению с очень твердой (Р=1.0 усл. ед) периферией.

а Б

Рис 5. Фотография микроструктуры периферии (а) и центра (б) уратного камня

(мочевая кислота) 14

Таблица. Микроструктура и состав мочевых камней.

Вид камня Точечная группа Литературные данные Результаты исследования

ОКСАЛАТЫ

Вевеллит 2/гп Плоские кристаллы, собранные в розетку, размером ~ 1 мкм (ось текстуры <010>)

Ведделлит 4/ш Бипирамидальные кристаллы Призматические кристаллы (~50 мкм)

УРАТЫ

Мочевая кислота 2/ш Призматические объемные кристаллы Таблитчатые кристаллы ромбовидной формы (-10 мкм) (возможна текстура)

Дигидрат мочевой кислоты шшш В литературе не описаны Кристаллиты в форме призмы (от ~1 до ~5 мкм)

Урат аммония 1 Полосчатые, вытянутые в одном направлении, образования (~10 мкм) (рис.За) (возможна текстура)

ФОСФАТЫ

Струвит шш2 Призматические многогранные кристаллы Ромбовидные кристаллиты ( -0.5 мкм) (рис. 36) (оси текстуры <001> и <Ы2>)

Карбонат-апатит 6/ш Сросшиеся друг с другом округлые форм (от ~1 до -3 мкм) (рис. 36)

Пластинчатые кристаллиты (~1мкм) (возможна текстура)

Гидроксил-апатит В литературе не описаны Сросшиеся игольчатые кристаллы (1 мкм) (рис. 4в) (возможна текстура)

Карбонат-гидроксил-апатит Округлые формы, сросшиеся друг с другом (-5 мкм)

Брушит ш Бесформенные сросшиеся образования (от 0.1 до 1 мкм)

Цистин 622 Плоские прямоугольные кристаллы (-10 мкм) (возможна текстура)

Обнаружена связь между твердостью камней (Р, усл. ед), определяемой in vitro, и структурной плотностью (Н, отн. ед) этого же камня, полученной мультиспиральной компьютерной томографией (MCKT) in vivo: Н}КС„(±196)=832Р+202. Это позволяет по величине Н (in vivo) оценить величину Р (in vitro) и состав мочевого камня (Кузьмичева Г.М., и др. Патент на изобретение № 2304425), а отсюда и назначить оптимальное для данного вида уролитиаза лечение.

Результаты изучения камней предстательной железы

Для установления возможности применения предложенного комплекса методов и корреляций, полученных при изучении мочевых камней, были изучены камни предстательной железы (КПЖ). В результате проведенного исследования выявлено, что преобладающее большинство этих камней представлено фосфатами (~33%) и фосфатно-оксалатными смесями (-30%), остальные 37% - оксалаты, ураты и оксалатно-уратные смеси. Найдено отличие внешней и внутренней частей КПЖ по элементному составу (центр более разнообразен по составу нежели периферия), обнаружено, что в состав камней предстательной железы входит белок, как правило, в количестве ~50 масс. % (намного больше, чем в мочевых камнях, что обусловлено средой их образования), выявлена связь твердости КПЖ с содержанием белка, найденная для мочевых камней.

Моча и методы исследования состава мочи

Процесс формирования и роста камней происходит в моче, поэтому определение ее состава является неотъемлемой частью изучения проблемы патогенного камнеобразования. Методы определения состава мочи можно разделить на три группы: биохшшческие, или клинические, химические и физико-химические. В нашем распоряжении были клинические анализы мочи: общий анализ (удельный вес, бактерии, лейкоциты, эритроциты, солевой осадок, пигменты, рН среды, общий белок) и суточная экскреция (альбумин, креатинин, Са +, Na+, К+, СГ, Cu2+, Pb2+, NH4+, Mg2+, неорганический фосфор, мочевая кислота и мочевина), которые не предусматривают определение таких важных ионов как цитрат и оксалат. Роль ионов Са2+, Mg2+, К+, Na+, NH4+, СГ, N02", N03", SOA P043\ цитрат-ион - [(СН2)2С(ОН)(СОО)з]3", мочевая кислота - C5H4N4O3, оксалат-ион- С2042", изоцитрат-ион - [(СН2)СН(ОН)СН(СОО)3]3" в процессе камнеобразования в моче (в частности, цитрат-ион препятствует процессам кристаллизации, обусловливает необходимость их одновременного количественного определения, для чего использовался метод безреагентной ионной хроматографии. В качестве метода сравнения использовали ферментативный метод определения цитрат- и оксалат-ионов в моче. Кроме того, мы принимали во внимание результаты титриметрического определения оксалат-ионов и мочевой кислоты в Консультативно-диагностическом центре ФГУП МНИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.

Найденные корреляции. Теории роста мочевых камней

При сопоставлении состава мочевых камней и мочи (рис. 6) наблюдается связь между содержанием мочевой кислоты, фосфат- и оксалат-ионов с видом мочевых камней: концентрация данных ионов в моче больных МКБ меньше «нормы» в случае роста соответственно уратного, фосфатного (за исключением коралловидных камней) и оксалатного камня (рис. 6).

£

.о 7000-

ш" 6000

о

т

о 5000

4000

#

о

о 3000

■е-

к

2000

з-

Я

а. I- 1000

X

0)

д-

X

о

£

и 60-

2

о" о 50-

X

о

X 40

1-

га с 30

я

о

^

о 20-

к

X

=г п 10-

о.

X ш 0-

Я-

X

о

ФОСФАТЫ

до лечения после лечения норма

ОКСАЛАТЫ

2200 2000 180016001400 1200 1000800600 400 200-

УРАТЫ

до лечения после лечения норма б

и

ш

О 1000

го о. н

■з

500

до лечения после лечения норма

о.

Ё

О)

г

X

о

до лечения после лечения норма

Рис. 6. Изменение фосфат-иона (а), мочевой кислоты (б) оксалат- (в) и цитрат- (г) ионов в моче ДО и ПОСЛЕ лечения больного МКБ с соответствующими видами мочевых камней. Стрелками показана тенденция изменения концентрации ионов в моче конкретного больного МКБ.

Из полученных результатов следует, что изменение состава мочи может оказать влияние на процесс камнеобразования. В комплексы лечебных метафилактических мероприятий, направленных на коррекцию нарушений обмена камнеобразующих веществ в организме, входят кроме диетотерапии,

лекарственных препаратов и минеральные воды. На основании данных (рН воды, степень минерализации, химический состав) 4-х видов минеральной воды, применяемой для метафилактики МКБ («Краинская» (Россия), «Демидовская» (Россия), «Нафтуся» (Украина), «Фьюджи» (Италия)) отмечены воды «Фьюджи» и «Нафтуся», содержащие гуминовые кислоты. Предложены реакции взаимодействия активных компонентов гуминовых кислот с камнеобразующими ионами в составе мочи, которые подтверждены полуэмпирическими методами расчета (программа HyperChem) и обоснована роль минеральной воды в достижении нормальных показателей в моче ионов-ингибиторов и ионов-катализаторов камнеобразования.

Полученные результаты изучения мочевых камней большого размера и мочи были проанализированы и систематизированы в рамках имеющихся теорий образования камней, которые нами были уточнены и дополнены:

- органический механизм образования характерен для уратных, оксалатных и смешанных оксалатно-уратных камней (наши данные),

- для фосфатных камней (в том числе, коралловидных), состоящих из струвита, брушита, гидроксилапатита, карбонатапатита и карбонатгидроксилапатита (наши данные) - коллоидный содержание фосфат-ионов в моче ниже нормы), инфекционный и нанобактериальный (содержание фосфат-ионов в моче в пределах нормы) механизмы;

-найдена связь между видом камня и бактериями (Pseudomonas aeruginosa, St. pyogenes, Sp. acinetobacter) и показано, что наиболее разнообразная флора у больных МКБ с фосфатными камнями (рис. 7);

фосфаты- (3)®С5) А ® 46%

к

X

i ураты- Q) • 15%

ч s ш

оксалаты- ■ ■ ■ 39%

__St. pyogenes е. Coli нет бактерий_

Р. aeruginosa Sp.acinetobacter Е. faecalis смешанная

флора

вид бактерии

Рис. 7. Связь вида мочевых камней с бактериями в моче

-бактерии в моче (Pseudomonas aeruginosa, St. pyogenes) являются инициатором роста камней, содержащих струвит, гидроксилапатит и карбонатгидроксилапатит (наши данные для коралловидных камней) по инфекционной теории, а бактерии Sp. Acinetobacter — для нанобактериальной;

- основные отличительные черты нанобактериальной теории роста мочевых камней - форма (овальная, палочковидная), размер (~20-100 нм) и состав (ионы кальция, фосфора и кислорода) частиц, образованных на поверхности мочевого камня. Нами методом СЭМ зафиксированы подобные образования, состоящие из гидроксилапатита, которые ранее никем не были зафиксированы.

Показано, что рост мочевых камней может происходить как при значительных отклонениях камнеобразующих компонентов от нормы и отсутствии бактерий (все виды камней, кроме коралловидных) - по органической и коллоидной теориям, так и при наличии флоры (рост коралловидных камней) -по инфекционной и нанобактериальной теориям.

В настоящее время в литературе не описаны теории образования камней предстательной железы, однако по результатам изучения микроструктуры и данных рентгенографии можно предложить, по крайней мере, две теории, известные для мочевых камней: инфекционную и органическую.

Методология изучения камнеобразования (обобщение результатов).

Применение информационных технологий Проведенная работа свидетельствует о существовании корреляций между отдельными показателями обследования больных МКБ (концентрациями ионов-катализаторов и ионов -ингибиторов камнеобразования и видами мочевых камней), с одной стороны, и о необходимости одновременного учета многих показателей с последующей обработкой большого объема информации, с другой. Это показывает многоплановость проблемы МКБ, вследствие чего возникла необходимость обращения к информационным технологиям.

Результаты обследования больных МКБ совместно с составами мочевых камней и мочи обобщены и систематизированы по 3-м этапам и занесены в банк данных (4-ый этап) соответственно под рубриками «ДО лечения» и «ПОСЛЕ лечения».

ЭТАП 1: Обследование пациентов ДО лечения: общие сведения о пациенте (возраст, длительность рецидива, место жительства, предыдущее лечение, сопутствующие заболевания и др.), показатели анализа крови и мочи (клинический, химический и физико-химический) и дополнительных исследований (размер, структурная плотность камня in vivo, данные УЗИ, рентгеноскопии и МСКТ и др).

ЭТАП 2: Обследование пациентов ПОСЛЕ различных видов лечения (через 1 месяц), в том числе, общий состав мочевого камня in vitro, анализы крови и мочи.

ЭТАП 3: Обследование пациента ПОСЛЕ метафилактических мероприятий через 3 месяца и через 6 месяцев.

ЭТАП 4: Создание и обработка банка данных.

Одним из наиболее перспективных направлений в прогнозировании медицинских показателей являются математические методы распознавания образов. Для этого все виды обследования отнесены к признакам (выбраны 68 наиболее информативных для МКБ признаков, в том числе, с использованием найденных нами корреляций: отдельные показатели анализа крови, мочи (фильтрат крови), длительность рецидива, предыдущее лечение, сопутствующие заболевания, размер, состав, твердость, плотность и локализация камня и др) и обработаны с применением математических методов распознавания образов, с помощью которых спрогнозирован результат (состав камня irt vivo - 93 %, риск камнеобразования и рецидива - 100 %, тип камнеобразования: коралловидные камни и остальные — 76.2%). Определены признаки, оказывающие существенное влияние (не менее 50%) на результат: в частности, при определении типа камнеобразования коррелирующими признаками являются рН мочи (70%), содержание в моче фосфат-ионов (90%), мочевой кислоты (52%), ионов кальция (51%), содержание в крови глюкозы (63%), креатинина (55%) и альбумина (65%). Кроме того, были подтверждены корреляции вида мочевых камней с концентрациями ионов-катализаторов и ионов -ингибиторов камнеобразования для большой группы пациентов, которые были получены нами на примере отдельных больных МКБ с камнями каждого вида.

Для оценки риска и рецидива МКБ, а также выбора оптимальных метафилактических мероприятий необходимо, прежде всего, контролировать динамику изменения показателей мочи и крови. Нами разработано исполняемое приложение с графическим интерфейсом для наблюдения динамики изменения показателей мочи (программа «Lithos-Test 1»), а также мочи и крови (программа «Lithos-Test 2»). Данные приложения позволяют систематизировать и анализировать показатели мочи и крови, выделить ряд из них, выходящих за пределы стандартных (т.е. за пределы «нормы»), контролировать изменение их содержания в моче, а также выбрать оптимальные метафилактические мероприятия, индивидуальные для каждого больного МКБ до и после проведенного лечения и метафилактики. Программы имеют удобный интерфейс, где в диалоговом режиме вносятся все данные обследования пациента по мере его обращения к врачу. Применение программ возможно для самоконтроля динамики изменения показателей мочи и крови, так как простой интерфейс позволяет работать даже самым неуверенным пользователям персональных компьютеров.

ВЫВОДЫ

1. На основе применения комплекса химических, физических и физико-химических методов (восемь методов) и разработанных методик (шесть методик), сопровождающихся в ряде случаев кристаллохимическими расчетами:

- продемонстрирована возможность по дифракционным данным качественно и количественно разделены апатиты и фосфаты магния и определить содержание

кристаллизационной воды в ведделлите;

-предложен метод оценки фазового состава камней (ведделлит, мочевая кислота, дигидрат мочевой кислоты, урат аммония, карбонатапатит, гидроксилапатит, карбонатгидроксилапатит, струвит, брушит) по их морфологии, определено содержание белка в составе мочевых камней модифицированным методом Лоури и органических веществ небелковой природы (ацетальдегид, ацетон, 2-пропанол, 1-бутанол, пропионовая кислота, уксусная кислота, этанол) методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектором; установлено наибольшее количество белка в оксалатах и небелковых органических компонентов в уратах, а наименьшее - в фосфатах.

2. В результате определения общего состава мочевых камней совместно с данными по их твердости (in vitro) и плотности (in vivo) найдено, что присутствие аморфной составляющей, отсутствие текстуры, большое количество молекул кристаллизационной воды и высокое содержание белка уменьшает твердость камней; выявлена количественная связь между твердостью камней in vitro и структурной плотностью тех же камней in vivo.

3. Методом безреагентной ионной хроматографии (впервые в России) одновременно определены 13 ионов в моче, включая ионы-ингибиторы и ионы-катализаторы. Найдена связь между видом камня (фосфаты, оксалаты, ураты) и содержанием ионов-камнеобразователей в составе мочи (ниже нормы соответственно для фосфат, оксалат и урат ионов) больных МКБ до лечения, что дает возможность оценивать вид камней in vivo. Предложен способ контроля за концентрацией цитрат-ионов в моче (выше или ниже нормы либо соответствует нормальным показателям), позволяющий предотвратить риск камнеобразования.

4. Систематизированы результаты изучения коралловидных камней совместно с анализом мочи, установлены особенности их состава и свойств (в частности, для наиболее часто встречающихся фосфатов: большая доля аморфной составляющей, малая твердость (плотность), большая удельная поверхность и размеры пор, большая скорость роста; содержание фосфат-ионов в пределах нормы и наличие бактерий в составе мочи). Уточнена и расширена теория роста для всех видов мочевых камней и предложены модели роста камней размером >10 мм, в том числе, коралловидных.

5. Разработана методология изучения камнеобразования, включающая комплексное обследование больных МКБ с последующей обработкой результатов (формирование базы данных, применение математических методов распознавания образов, создание программ Lithos-test 1 и Lithos-test 2).

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Аляев Ю.Г. Клиническое значение физико - химического исследования состава мочевых камней и мочи / Аляев Ю.Г., Кузьмичева Г.М., Колесникова М.О., Чернобровкин М.Г., Мельников Д.М., Руденко В.И. // Урология. 2009. №1.

С. 8-12.

2. Аляев Ю.Г. Исследование состава мочевых камней in vivo с применением современных информационных технологий / Аляев Ю.Г., Кузьмичева Г.М., Колесникова М.О., Мельников Д.М., Руденко В.И., Рязанов В.В. // Врач. 2009. №1. С. 19-22.

3. Антонова М.О. Применение физико - химических методов для изучения мочевых камней in vitro / Антонова М.О. Кузьмичева Г.М. Руденко В.И. // Химия в интересах устойчивого развития. 2011. №4. С. 437 - 445.

4. Кузьмичева Г.М. Определение состава мочи и мочевых камней и установление связи между ними / Кузьмичева Г.М., Антонова М.О., Чернобровкин М.Г., Руденко В.И., Мельников Д.В. // Известия ВУЗов. Химия и химическая технология. 2012. №2. С. 26-30.

5. Аляев Ю.Г. Применение воды «Фьюджи» в метафилактике мочекаменной болезни / Аляев Ю.Г., Антонова М. О., Кузьмичева, Г.М., Руденко В. И., Мельников Д.В. // Фундаментальные исследования, 2012, №9 (часть 1), С. 186-192.

6. Кузьмичева Г. М. Методология изучения образования мочевых камней / Кузьмичева Г.М., Антонова М.О., Руденко В.И., Щичко A.C., Рязанов В.В., Натыкан A.A. // Фундаментальные исследования, 2012, №9 (часть 1), с. 193-198.

7. Глыбочко П.В. Камни простаты: состав и структура / Глыбочко П.В., Гусейнов Ф.И., Винаров А.З., Кузьмичева Г.М., Антонова М.О. // Андрология и генитальная хирургия, 2012, № 2, с. 49-55.

8. Антонова М.О. Состав, микроструктура коралловидных мочевых камней. Теории роста / Антонова М.О., Кузьмичева Г.М., Руденко В.И., Натыкан A.A., Садовская Н.В. // Вестник МИТХТ, 2013, Т. 8, № 4. с. 64 - 72.

9. Антонова М.О. Применение метода газовой хроматографии для определения небелковой органической составляющей и ее распределения по объему мочевых камней / Антонова М.О., Кузьмичева Г.М., Руденко В.И. // Международный научно-исследовательский журнал. 2013. № 7, с. 22-24.

10. Кузьмичева Г.М., Антонова М.О., Щичко A.C., Руденко В.И. Свидетельство о регистрации программы для ЭВМ «Litos-test 1» №2012610733.

11. Кузьмичева Г.М., Антонова М.О., Щичко A.C., Руденко В.И. Свидетельство о регистрации программы для ЭВМ «Litos-test 2» №2012614204.

12. Кузьмичева Г.М., Антонова М.О., Подбельский В.В. Свидетельство о регистрации программы для ЭВМ «ChemMed-1 Моделирование дифрактограмм двухфазных мочевых камней и камней предстательной железы всех композиций» №2014619404.

13. Антонова М.О. Применение комплекса физико-химических методов и информационных технологий для оптимизации, диагностики, выбора метода лечения и метафилактики мочекаменной болезни / Антонова М.О., Щичко A.C., Кузьмичева Г.М., Руденко В.И., Рязанов В.В. // Конкурс «От идеи к бизнесу: возможности инновационной инфраструктуры и институтов развития в России.

Проблемы, опыт, идеи, предложения», http://9000innovations.ru/, 15 июня - 31 августа 2013 (III место).

14. Кузьмичева Г.М. Методы анализа состава и строения мочевых камней / Кузьмичева Г.М., Ефимова Ю.А., Ловчиновский И.Ю., Колесникова М.О. // Материалы II Всероссийской конференции с международным участием «Аналитика России», Краснодар, Россия, 2007, с. 440.

15. Колесникова М.О. Физико - химическое исследование уролитов и урины с целью усовершенствования диагностики и лечения мочекаменной болезни / Колесникова М.О., Кузьмичева Г.М., Ловчиновский И.Ю. // Материалы XVIII Менделеевской конференции молодых ученых, Белгород, Россия, 2008. С. 38-39.

16. Колесникова М.О. Физико - химические методы для медицины / Колесникова М.О., Кузьмичева Г.М., Ловчиновский И.Ю. // Материалы научно -практической конференции «Научно - техническое творчество молодежи - путь к обществу, основанному на знаниях», Москва, Россия, 2008. С. 137.

17. Кузьмичева Г.М. Применение рентгенофазового анализа и рентгеноспектрального микроанализа для изучения мочевых камней / Кузьмичева Г.М., Ефимова Ю.А., Ловчиновский И.Ю., Колесникова М.О. // Материалы VI Всероссийской конференции по рентгеноспектральному анализу с международным участием, Краснодар, Россия, 2008. С. 154 - 155.

18. Чернобровкин М.Г. Применение безреагентной ионной хроматографии в урологии / Чернобровкин М.Г., Кузьмичева Г.М., Колесникова М.О., Мельников Д.В., Натыкан A.A., Шпигун O.A. // Материалы III Всероссийской конференции по аналитической химии (с международным участием) к 175-летию со дня рождения Д.И. Менделеева «Аналитика России 2009», Краснодар, Россия, 2009. С.430.

19. Антонова М.О. Химия для урологии / Антонова М.О. // Материалы Конкурса проектов молодых ученых, проведенного в рамках 15-й международной выставки химической промышленности и науки «Химия — 2009», Москва, Россия 29 сентября 2009. С. 22-24.

20. Антонова М. О. Усовершенствование и применение физико-химических методов для характеризации мочевых камней и нахождения корреляций между их составами и средой образования / Антонова М.О. // Материалы XVII международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов», Москва, Россия, 2010.

21. Антонова. М.О. Коралловидные камни и методы их изучения / Антонова. М.О., Кузьмичева Г.М., Садовская Н.В., Руденко В.И., Ларцова Е.В. // Материалы XIX Менделеевского съезда по общей и прикладной химии, Волгоград, Россия, 2011, 25 - 30 сентября, Т. 1, с. 120.

22. Антонова М.О. Физико-химические методы и информационные технологии для оценки активности камнеобразования / Антонова М.О., Ларцова Е.В., Щичко A.C. // Материалы IV молодежной научно-технической

и

конференции «Наукоемкие химические технологии — 2011», Москва, 2011, 9-10 ноября, с. 75.

23. Антонова М.О. Применение комплекса физико-химических методов и интеллектуальных систем принятия решения для изучения мочевых камней и мочи и установления связи между ними / Антонова М.О., Кузьмичева Г.М., Руденко В.И., Щичко A.C., Рязанов В.В. // Первая Российская конференция по медицинской химии с международным участием, Москва, 8-12 сентября 2013. С. 194.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает искреннюю благодарность: научному руководителю проф, д.х.н. Г.М. Кузьмичевой, а также д.м.н., доц. В.И. Руденко (Первый МГМУ им. И.М. Сеченова, кафедра урологии), проф. A.A. Ищенко (зав.каф. аналитической химии МИТХТ им. М.В. Ломоносова), доц., к.х.н. Ю.А. Ефимовой и доц, к.т.н. И.Ю. Ловчиновскому (МИТХТ им. М.В. Ломоносова, кафедра аналитической химии), к.ф.-м.н. Н.В. Садовской (НИФХИ им. Л.Я. Карпова), к.х.н. М.Г. Чернобровкину и к.х.н. A.A. Натыкану (МГУ им. М.В. Ломоносова), проф. В.В. Рязанову (Вычислительный центр им. A.A. Дородницына РАН), аспиранту A.C. Щичко (МГУ им. М.В. Ломоносова), проф. В.В.Подбельскому (НИУ ВШЭ).

Антонова Мария Олеговна Применение комплекса физико-химических для изучения мочевых камней и мочи и установления связи между ними

Формат 60x90/16 Тираж 100 экз. Подписано в печать 21.11.2014 Заказ № 229 Типография ООО «Генезис» 8 (495) 434-83-55; 119571, г. Москва, пр-т Вернадского, 86