Реагентная смесь для блистерного экспресс-тестирования и фотометрического определения фосфат-ионов из малых объемов водных проб тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.01 ВАК РФ
|
Жевнеров, Алексей Валерьевич
АВТОР
|
||||
|
кандидата химических наук
УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ
|
||||
|
Москва
МЕСТО ЗАЩИТЫ
|
||||
|
2006
ГОД ЗАЩИТЫ
|
|
02.00.01
КОД ВАК РФ
|
||
|
|
||||
На правах рукописи
ЖЕВНЕРОВ Алексей Валерьевич
РЕАГЕНТНАЯ СМЕСЬ ДЛЯ БЛИСТЕРНОГО
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЯ И ФОТОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФАТ-ИОНОВ ИЗ МАЛЫХ ОБЪЕМОВ ВОДНЫХ ПРОБ
Специальности: 02.00.01 - неорганическая химия, 02.00.02 - аналитическая химия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук
Москва 2006
Работа выполнена на кафедре неорганической и аналитической химии Российского государственного аграрного университета РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева
Научный руководитель' Консультант'
доктор химических наук, профессор Д А. Князев доктор химических наук, профессор В М Иванов
Официальные оппоненты'
доктор химических наук, профессор Ю.М. Дедков кандидат химических наук, старший научный сотрудник А В. Михайлова
Ведущая организация' Российский химико-технологический
университет имени Д И. Менделеева
Защита диссертации состоится" " июня 2006 г в " " часов "00" минут на заседании диссертационного совета К220 043,04 при Российском государственном аграрном университете - МСХА имени К А Тимирязева по адресу. 127550, Москва, Тимирязевская ул, 49
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГАУ-МСХА имени К А Тимирязева.
Автореферат разослан" " мая 2006 г. Ученый секретарь диссертационного Совета
Кандидат химических наук Г П Токмаков
¿00 6 А
Общая характеристика работы
Актуальность темы. Тест-методы постепенно приобретают все большее значение во всех областях химического контроля. Чаще всего тест-методы используют для предварительной оценки наличия и содержания химических веществ непосредственно там, где находится анализируемый объект. Фосфор -один из наиболее часто определяемых элементов и потому разработка быстрого и простого метода его определения очень нужна. Почвенные вытяжки, физиологические жидкости, питьевая вода, сточные воды а также вода прудов, рек и озер - вот неполный список объектов определения фосфора.
В настоящей работе предложена готовая к использованию смесь реагентов для блистерного полуколичественного экспресс-определения фосфат-ионов в водных средах. Она может был. также использована для количественного фотометрического, определения фосфат-ионов. Концентрирование сухих аналитических реагентов на поверхности сорбента - перспективный и успешно зарекомендовавший себя метод получения тест-систем. В качестве носителя использован силикагель, выбор которого как носителя стал результатом предварительных испытаний ряда других сорбентов и был определен его высокой сорбционной способностью в отношении реагентов, его химической и гидролитической устойчивостью, отсутствием собстветюй окраски, а также доступностью и дешевизной.
Цель работы. Основная цель работы состояла в разработке полуколичественного визуального тест-метода определения фосфора в малом объеме блистерной ячейки. В ходе работы выявлена возможность применения разработанной тест-россыпи для количественного спектрофотометрического определения. Достижение этих целей предусматривало решение следующих задач: ► Выбор условий проведения цветной реакции с образованием синей гетерополикислоты при условии применения сухих реагентов, подбор сухих реагентов, их соотношений и носителя для реагентов.
РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА С.-Петеобуог
► Изучение химико-аналитических свойств, смеси россыпей реагентов, кинетики реакции образования молибдофосфорной гетерополикислоты (МФК) (восстановленной и невосстановленной), а также условий сохранения образующейся окраски.
►Разработка цветной шкалы для тест-метода с привлечением большого числа испытателей.
►Изучение применимости россыпей для количественного фотоколориметрического определения фосфат-ионов.
Научная новизна. Изучена возможность применения "сухой" россыпи с использованием силикагеля для полуколичественного и количественного определения фосфора. Экспериментально подтверждена возможность применения сорбированных на сшшкагеле реагентов для проведения реакции образования МФК в восстановленной и невосстановленной формах. Выявлены условия протекания аналитической реакции и условия хранения готовой россыпи. Показано, что в подобранных условиях реагенты сорбируются силикагелем, что предотвращает их преждевременное взаимодействие и способствует длительному хранению смешанной россыпи в состоянии стартовой готовности. Оптимизированы условия изготовления химически модифицированного различными реагентами силикагеля.
Практическая значимость работы. Впервые предложен блистерно-колориметрический количественный метод определения фосфат-ионов из малых (3 капли из глазной пипетки) объемов анализируемого раствора. Проведена оценка аналитических возможностей нового блистерного визуально-капельного тест-анализа на фосфат-ионы в водных средах. Апробация разработанного блистерного полуколичественного тест-метода на фосфат-ионы осуществлена на почвенных вытяжках, природных водах различного происхождения, пищевых продуктах, биологических жидкостях и водных растворах. В ходе выполнения работы разработан способ построения колористической шкалы, который может быть применен для разработки других тест-систем. Разработанный способ
воспроизведен с привлечением свыше четырехсот испьпагелей, что позволило судить о правильности получаемых с его помощью результатов. Положения, выносимые на защиту:
► Свойства реагентных россыпей для получения восстановленной формы МФК,
применяемой для блистерного экспресс-определения фосфат-ионов в блистерных ячейках.
► Изучение условий протекания реакции образования и восстановления МФК с
применением гидросульфата калия в качестве кислотообразующего вещества.
► Оптические и цветометрические характеристики восстановленной МФК,
полученной с использованием реагентной россыпи.
► Способы получения тест-россыпей различных составов и составы смешанных реагентных россыпей для экспресс-тестирования.
► Методика построения и корреляции колористической шкалы для полуколичественного определения фосфат-ионов.
►Методика количественного экспресс-метода определения фосфат-ионов из блистерно-малых объемов исследуемого раствора (блистерная колориметрия).
Апробация работы. Результаты работы доложены на V Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2003» (СПб, 2003); XVII Международной научно-технической конференции «Реактив 2004» (Уфа, 2004); Научной конференции молодых ученых и специалистов Московской сельскохозяйственной академии имени К.А. Тимирязева (Москва, 2004); II Всероссийской конференции «Аналитические приборы» (СПб, 2005); Международной научной конференции, посвященной 140-летию РГАУ- МСХА им. К.А. Тимирязева. (Москва, 2005).
Публикации. По материалам диссертации опубликована 1 статья и 3 тезисов докладов. Две статьи прошли рецензирование в журнале аналит. химии и находятся в печати.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, пяти глав экспериментальной части, выводов и списка литературы.
Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста, включает 27 рис. и 20 табл. Список литературы содержит 168 работ.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Обзор литературы
Обсуждены имеющиеся способы определения фосфат-ионов в различных объектах с применением инструментальных, полевых и тест-методов. Кратко проанализированы возможности спектрофотометрических, хроматографических и других инструментальных методов определения фосфора. Особое внимание уделено фотометрическому анализу и экспресс-тестированию. Рассмотрены границы определения количественного содержания и влияние мешающих примесей при проведении спектрофотометрических определений с использованием восстановленной формы МФК.
Экспериментальная часть
Поиск реакции, способа и условий визуального тестирования фосфат-ионов. Исходной идеей работы являлось совмещение тест-россыпи с проведением тест-определения непосредственно в малом объеме ячейки блистера. Ввиду плохой различимости желтых оттенков с самого начала было решено использовать восстановленную форму МФК. Более яркий синий цвет восстановленной МФК по сравнению с невосстановленной позволял предполагать, что будет возможно ее использование в тест-методе с достаточно малым объемом пробы (1-4 капель исследуемой жидкости).
В основу взята реакция образования восстановленной формы МФК, состоящая из двух основных стадий: 1. Образование невосстановленной МФК в кислой среде. 2. Восстановление МФК.
При выборе восстановителя были учтены следующие критерии: 1. устойчивость в кристаллическом состоянии и в виде растворов различных концентраций; 2.
вещество не должно быть токсичным; 3. оно должно быстро и количественно растворяться в воде, 4; растворы не должны иметь собственной окраски и должны сочетаться с другими компонентами россыпи; 5. рН этих растворов должны быть в пределах кислотного режима реакции образования МФК.
Рассматривали также следующее три возможности создания кислой среды:
1. Сильное изменение коэффициентов активности за счет увеличения ионной силы (присутствия аниона [М07О24]6") позволяло надеяться, что органические кислоты средней силы в этих условиях могут сильно увеличить кислотность (концентрацию Н").
2. Высокие концентрации ионов Н', получали также путем вытеснения этих ионов из двухосновных органических кислот при хелатообразовании с участием бесцветных катионов (Ре2+, Мп2+,
3. Третья возможность состояла в отыскании кристаллической соли в которой не все ионы водорода замещены нонами щелочных металлов (№+, К1} или в нахождении таких солей поликислот, которые при гидролизе поставляют в раствор ионы Н+.
В ходе исследований было показано, что гидросульфат натрия обеспечивает хорошую динамику образования восстановленной МФК и воспроизводимость результатов определения фосфат-ионов в водных растворах.
Россыпи с гидросульфатом натрия хорошо сохранялись и сочетались с другими компонентами россыпи. Было оценено время для завершения реакции в оптимизированных условиях. Оно составляет 5 мин (рис. I.). В дальнейшем подбор других компонентов россыпей осуществляли только с применением
№то4.
Рис. I. Зависимость оптической плотности А от концентрации с(Р043") с экспозицией А5 и я20 мин при рН 1,4.
4
в
10 12 14
16
С фосфат-ионов, иг/л
Исследованы бензидин, хлорид олова(П), соль Мора и аскорбиновая кислота в присутствии антимонилтартрата калия. Выявлено, что ЯпС12 в качестве восстановителя МФК в наших условиях непригоден. Он мало растворим в воде, и поэтому не может бьггь количественно переведен с поверхности силикагеля в реакционный раствор. Кроме того, реакция с использованием БпСЬ имеет низкую воспроизводимость. В ходе реакции образуется муть. Бензидин подходит в качестве восстановителя, однако ввиду его высокой токсичности он не может быть использован в нашем случае, как не отвечающий вышеизложенным требованиям. Соль Мора содержит ионы Ре2+ ,что вызывало проблемы, связанные с окислением до Ре^ и образованием сини в отсутствие фосфора (изополикомплекс). Это сильно влияло на воспроизводимость и нижнюю границу определяемых концентраций.
Хорошие результаты дала реакция восстановления МФК с аскорбиновой кислотой в присутствии антимонилтартрата калия (АТК). В ходе экспериментов были подобраны оптимальные условия нанесения аскорбиновой кислоты на силикагель ввиду ее неустойчивости при повышенных температурах.
Определяли содержание фосфат-ионов в воде и почвенных вытяжках с использованием гидросульфата калия в качестве кислотообразующего реагента (табл.1).
Уравнения градуировочных графиков:
Л = 2,123 7с - 0,0013 (стандартная методика спектрофотометрического
определения) А = 2,0729с + 0,0099 (предложенная методика)
Таблица 1. Результаты определения фосфора (РО43" мг/100г) в почвенных вьггяжках (п=5; Р = 0,95)
Почвенная вытяжка Мегодгаач № 5 розы №13 хризантемы №14 хризантемы
Стандартная 0,057*0,00194 0,217±0,0039 0,026±0,00207
Видоизмененная 0,057±Й,00194 0,2 }5±0,0039 0,028±0,00209
Выбор условий нанесения реагентов на силикагель. Критерии выбора.
При сорбции реагентов на силикагеле важно было найти оптимальные режимы сорбции веществ в виде водных или неводных растворов. Для силикагелей характерны большая величина поверхности (5-800 м2/г) и высокая пористость, хорошая термостойкость, незначительная собственная каталитическая активность и экологичность.
Силикагель был использован ранее в качестве носителя для создания россыпей и таблеток различного состава для полуколичественного определения М03" и ЫСЬ". При иммобилизации реактивов на поверхности сшшкагеля важно выбрать правильный температурный режим, а также время вакуумирования сшшкагеля, время выдерживания силикагеля при данной температуре. В ходе экспериментов мы пришли к выводу о необходимости раздельного насыщения силикагелей индивидуальными реагентами, с последующим их порционированием в гест-россытть Это вызвано необходимостью исключить преждевременный контакт и взаимодействие реагентов друг с другом.
Выбор температуры нанесения основывали на температурном ходе растворения индивидуальных веществ - увеличение концентрации при более высоких температурах позволяет сорбировать большое количество вещества.
Нанесение реагентов на поверхность силикагеля позволяет изолировать каждый из реагентов до момента протекания химической реакции. В то же время важным обстоятельством является кинетика перехода сорбированных реагентов из сорбента в раствор, а также количественные соотношения всех реагентов в раствор«.
Было выявлено, что вакуумирование в течение 10 мин способствует выделению пузырьков газа при прибавлении к россыпи анализируемых растворов. Это позволило обойтись без перемешивания системы во время проведения тест-определения и тем самым упростить процедуру.
Исследование составов и свойств тест-россыпи, при различных соотношениях масс компонентных россыпей. Составление комбинированного тест-реагента. Для выявления сроков хранения тест-россыпей исследовали свойства россыпей в течение 6-ти месяцев с периодичностью контроля - одна
неделя. В ходе эксперимента изучали не только физические свойства, но и аналитические характеристики тест-россыпи. С этой целью герметично закрытые порции россыпи вскрывали, описывали внешние изменения и проводили тест-определение фосфат-ионов с применением колористической шкалы.
В ходе экспериментов было выявлено, что наилучшим вариантам россыпи являются серии Р 3-12 и Р 12-14 (табл. 3). Однако совмещение всех компонентов в одной россыпи приводило к развитию окраски раствора при отсутствии фосфат-ионов. Это происходило либо в течение нескольких минут после добавления испытуемого раствора, либо через несколько суток в сухой россыпи. Исследовали россыпи, составленные из индивидуальных компонентов.
Каждый компонент универсальной силикагельной россыпи включал только один реагент, что позволяло полностью избежать нежелательного взаимодействия этих реагентов до начала аналитической реакции. Таким образом, была предпринята попытка изолировать каждый компонент в отдельной россыпи и в то же время контролировать дозирование компонентов при создании тест-системы для полуколичественного визуального тестирования и для количественного определения содержания фосфат-ионов в растворе.
Цветометрические характеристики тест-системы. Цветометрические характеристики тест-системы представляют интерес в плане расширения возможностей определения фосфат-ионов с использованием цветометрических функций (ЦФ). К этим функциям относятся координаты цвета. Методом наименьших квадратов были линеаризованы зависимости и вычислены уравнения прямых ЦФ = а + вс и найдены коэффициенты уравнений. Интерес представляют все приведенные функции, в частности белизна - \У (табл. 2).
Таблица 2. Коэффициенты уравнения ЦФ = а + Ьс для растворов фосфат-ионов.
ЦФ Л X Г г 1 А В 5 С ИГ Т
а 0.8731 87 49 91 58 103 3 97 35 -3 93 3.70 2 95 148 9 96.12 6 56
в -0.006 -0 55 -0 55 -0.39 -0.28 -0.07 -0.20 0.160 -0.60 -0 32 1.18
Использование цветеметрических функций позволяет повысить чувствительность определения фосфат-ионов по сравнению с фотометрическим методом. Это в первую очередь связано с тем, что коэффициенты а на несколько порядков превышают молярные коэффициенты светопоглощения е. Эти коэффициенты позволяют корректировать диапазон определяемых концентраций фосфат-ионов.
Таблица 3. Некоторые варианты составов россыпей для экспресс-тестирования __РОд3" на основе гомогенизированных смесей._
Компоненты или свойства Состав россыпи, в масс %
РЗ-12 | Р 4-10 Р12-14 Р16-13 Р 18-22
Реш енты тН4)6М0;О24*41Ь0 2,5 4,0 4,0 5,5 4,0
К(БЬО)С4Н406*0,5Н2 О 0,48 0,55 0,55 0,8 0,85
кнво. 12,5 12,5 18,6 18,6 18,6
Виннокаменная кислота С4Н60б 1,25 1,55 0,8 0,0 0,8
Аскорбиновая кислота ЗДА 1,25 0,85 1,0 1,25 1,25
ЫаНБО, 14,2 14,2 24,2 24,2 24,2
Носитель Силикагель марки СЬешаро1 Ьюо/адо 64,3 66,5 58,2 52,4 53,8
Результаты испытаний Экспозиция, сутки 21 21 21 60 90
Гигроскопичность нет нет нет нет Пет
рн 1,4-1,6 1,4-1,6 1,4-1,8 1,8-2,1 1,8-2,0
Окраска с 3 каплями раствора Р045,80 мг/л Темно-синяя Темно-серо-синяя Темно-синяя Черно-синяя Черно-синяя
Окраска с 3 каплями раствора РО/, 0 мг/л Бледно-голубая Оибаябяздно-псиубая Голубая Бледно-голубая Бледно-голубая
Примечание Окраска размается втечем»? Л£В0Й Овбаяоцяоа Оцвоа рвисаегся в ГЦфО шиуш Вкрятетяи несдаоротост окраски Вкраггамяи наодсрааноаь офаски
Применение аналитической реакции для полуколичественною определения фосфат-ионов. В предлагаемом методе в качестве реакционного сосуда используют блистерную ячейку, а в качестве эталона - колористическую шкалу. При этом исключается главная проблема измерений - отсутствие многочисленных подготовительных стадий. Необходимо лишь вскрыть ячейку и прибавить 3 капли исследуемого раствора и через 3-5 мин сравнить образующуюся окраску раствора с оттенком на колористической шкале.
Сильно затруднённым оказались построение цветной шкалы для фосфат-ионов и последующие операции по приданию ей надлежащей чувствительности и достаточной дифференцирующей способности при визуальном тестировании. Это потребовало изменения методики всей работы по созданию шкалы. Поскольку методика создания цветных шкал для визуального таблетно-колориметрического экспресс-определения в литературе вообще не описана, для простоты последующего изложения изложим сначала более простой вариант, пригодный в случае сильного изменения цвета проб при росте концентраций.
В предварительном исследования было найдено, что отношение различимых концентраций приблизительно постоянно в интервале от 0,50 до 30 мг/л по оксиду фосфора (V). Это отвечает практическим целям нашей разработки, так как верхний предел концентраций фосфат-ионов в почвах близок к 50 мг/л, то есть к содержанию в тепличных образцах почв под культурами с высокой потребностью в усвояемом фосфаге (подразумевается применение стандартной водной вытяжки).
Следовало убедиться, что различимость цвета - реальное свойство человеческого зрения. Поэтому было принято решение провести массовое испытание следующей шкалы концентрации: 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 10; 20; 30 мг/л РОД При этом объективную оценку свойств градуировочной шкалы могло дать только привлечение большого числа "наивных" наблюдателей, то есть студентов.
На первом этапе градуировочная шкала не обладала требуемыми свойствами. Числа попадания оценок в графы с положительными и отрицательными номерами шага располагались асимметрично, хотя увеличение номера шага и в левой, и в правой частях эмпирических распределений для каждой концентрации не имеет значимых отклонений от монотонного хода с ростом номера шага. Главными препятствиями на пути к этим целям являлись незнание закона распределения погрешностей и неопределённость природы аргумента «х» функции распределения погрешностей У(х). Чтобы принять ту или иную гипотезу о законе распределения погрешностей, была построена гистограмма, на оси абсцисс которой откладывали помер шага, а по оси ординат - нормированную по числу измерений сумму чисел отклонений по всем концентрациям. Эта гистограмма показана на рис.2. Она близка
к логнормальному распределению, хотя число измерений было не очень большим (около 200).
В рамках гипотезы о лог-нормальном распределении мы осуществили коррекцию положения центра тяжести гистограммы. Его положение было найдено как среднее арифметическое средних точек шагов (-1) и (+1):х(центр)=0,5х(-0,99+1,32)=0,16.
приемлемости этой гипотезы для дальнейшего изучения функции У(1о£ с).
На основании полученных результатов было предпринято расширенное изучение функции распределения шмрешностей с откорректированной шкалой абсцисс. Это также проводившееся с привлечением наивных наблюдателей - студентов исследование имело следующие отличия от прокомментированной первой стадии:
1. Сглаженная градуировочная цветная шкала получила смещённую вправо разметку концентраций на 0,16 в единицах десятичных логарифмов концентраций (0,16 с) с тем,
чтобы избежать систематических завышений концентраций наблюдателями.
2. Был установлен вдвое меньший шаг, равный 0,1505 = 0,51ц2 с тем, чтобы попытаться повысить дифференцирующую способность способа и снизить его погрешность. Соответственно было увеличено число окрашенных бумажных полос.
3. Диапазон измеряемых концентраций был расширен в сторону их высоких значений, чтобы попытаться увеличить область возможных применений способа. Таким образом, рабочий интервал шкалы разумно определить как [0,5; 61,7] и дальнейшее рассмотрение и обработку ограничить только им. Как видно из табл. 4
гистограмма близка к логнормальному распределению, был сделан вывод о
Рис. 2 Гистограмма графического распределения погрешностей при использовании «наивными» наблюдателями.
Поскольку экспериментальная
-4 -з л о
I 5 А
и рис.3, удовлетворительно описать экспериментальную кривую распределения пмрешностей удалось лишь в предположении полимодального логнормального распределения (рис.4).
Рис.3. Кривая распределения погрешностей. Гистограмма - экспериментальные результаты. Аппроксимирующая кривая посгроена по уравнению (1).
Рис. 4. Разложение суммарной аппроксимирующей кривой на слагаемые составляющие правой части уравнения (1) —»
•«.«.< -2 о 2 1 е »
Эта полимодальная функция имеет следующий общий вид:
Ч4х}=0,31¥{3х/а} + 0,474>{х/ст} + 0,1 14j{0.8(3-x)/g} + 0,1 №{0,8(3 fx)/o} (1) где х = Ige, ст = 0,51g2 = 0,1505, a функции У суть стандартные функции нормального распределения погрешностей. exp(~t/2)dt.
Первое слагаемое правой части уравнения (1) вносит основной вклад вблизи нуля, то есть при малых значениях аргумента х, а второе при больших. Первое слагаемое обусловливает приподнятость функции распределения вблизи нуля. Оно и является причиной того, что экспериментальная кривая лучше соответствует задаче точного визуального определения концентраций, чем это следует из простого логнормального закона. Третье и четвёртое слагаемые свидетельствуют о наличии существенного рассеяния визуальных тест-определений на левом и правом краях основного массива тестов. Вероятно, присутствие этих слагаемых является свидетельством недостаточной ответственности части наблюдателей, но вряд ли они говорят об отсутствии у них способности различать оттенки. Аналогично
первое слагаемое, по-видимому, указывает на присутствие среди наблюдателей ответственных людей с высокой способностью различать оттенки синих и голубых тонов. Выраженные предположения о причинах полимодального характера рассеяния неточных определений нельзя считать, сколько ни будь доказательными.
Это скорее постановка вопросов. Их решение требует дополнительных исследований, сопряжённых с необходимостью предварительного обследования зрения наблюдателей и с выявлением желающих участвовать в этой работе.
Таблица 4. Резулыаты исследования распределения погрешностей при визуальном определении концентраций фосфат-ионов "наивными" наблюдателями с помощью исправленной шкалы. _
-5 -4 -3 -2 0 1 2 3 4 5
1 I 4 8 20 50 17 7 3 3 1
1 4 3 4 14 51 17 10 4 6 3
1 2 8 10 15 43 17 9 5 2 -
4 4 11 14 48 15 4 9 2 1
1 5 4 10 12 54 14 10 4 6 1
- 4 10 14 43 12 4 8 - 2
1 - 8 6 13 51 14 9 6 - 2
1 4 6 8 14 49 13 10 6 1 -
3 4 6 12 54 12 6 8 - 2
1 - 4 10 13 42 12 8 5 - 2
1 4 - 5 14 53 12 4 6 • 1
1 3 - 6 12 43 11 9 4 2 -
4 3 9 14 42 15 13 4 8 2
1 - 3 7 14 45 12 4 9 4 1
1 - 4 7 12 50 13 6 6 - 2
Примечание. Каждая концентрация шага соответствует изменению концентрации в 1.4 раза. Отрицательные шали свидетельствуют о занижении концентрации, а положительные - о завышении кощен грации.
Разработка методики количественного определения фосфат-ионов в сельскохозяйственных объектах и физиологических жидкостях. Блистерная колориметрия. Исследован процесс образования восстановленной МФК при взаимодействии реагентов, находящихся в универсальной тест-россыпи в объеме блистерной ячейки (рис.5) и определены оптимальные объемы анализируемого раствора и соотношения индивидуальных россыпей - реагентов. Оптимизированы
количества компонентов россыпи для определения фосфат-ионов в объеме, необходимом для заложения кюветы, толщиной 5 мм.
Измерения проводили, используя кювету толщиной 1 см на спектофотометре
Бресогс! М40.
0,9
0,7
Рис. 5. Спектры поглощения растворов с различным содержанием фосфат-ионов при использовании реагентной россыпи.
1- 0,5; 2 -1,0; 3 - 3,0; 4 - 6,0; 5 -10,0; 6 - 12,0 и 7-15,0мг/ЛГО43".
650
700
800 Ч»
850
900 950
Максимум поглощения находится в области 820 нм. Переведя концен фации фосфора в молярную концентрацию, получаем следующие значения молярных коэффициентов поглощения: е= 1608 (5,0 мг/л Р043'), е= 1410 (10,0 мг/л РОД е= 1495 (18,0 мг/л Р043') Для количественного определения находили оптимальный промежуток времени перед фотометрированием растворов. На рис. 6 представлена зависимость изменения оптической плотности от времени экспозиции растворов.
Рис. 6. Зависимость оптической плотности от концентрации фосфат-иона: ♦ - сразу после разбавления, - — через 5 мин, А- через 10 мин, через 30 мин.
При спекгрофотометрическом
определении фосфат-ионов в виде восстановленного МФК оценивали мешающие влияния посторонних ионов. С этой целью исследовали растворы фосфат-ионов с добавлением и без добавления мешающих компонентов и без. Результаты изучения
2 4 6 8 10 12 14 16 С фосфат-ионов,
селективности реакции приведены в табл. 5. Силикат-ионы не создают помех при концентрациях до 5 мг/л. Более высокие концентрации завышают результат. Арсенат-ионы вызывают окрашивание, подобное окрашиванию от фосфата.
Таблица 5 Влияние посторонних ионов на блистерно-колориметрическое определение фосфат-ионов (введено 2 мг/л РО43", п=3, Р= 0,95).
Посторонний ион Концентрация, мг/л Найдено фосфат-иона, мг/л S,
Si<V 50 2 1±0 1 0.05
S2- 2.0 1 9±0 1 0.05
г 700 1М)1 0.05
NOs' 3.0 0.8+0.1 0.1
Fe-" 20.0 2.1±0.1 0.01
Влияние можно устранить восстановлением арсената до арсенита тиосульфатом натрия. До 2 мг/л допустимо присутствие растворимых сульфидов; до 70 мг/л фторидов. При концентрации нитрита (в пересчете на азот) выше 3,3 мг/л, раствор обесцвечивается. Для устранения влияния нитрита вводят небольшой избыток сульфаминовой кислоты. Железо незначительно влияет на интенсивность окраски (при содержании железа до 20 мг/л погрешность меньше 5%). До 25 мг/мл железа можно маскировать ЭДТА.
Определение фосфат-ионов в почвенных вытяжках и физиологических жидкостях. Разработанную методику можно использовать для определения фосфат-ионов в почвенных вытяжках, физиологических жидкостях и в продуктах питания. По разработанной методике проанализированы образцы почв, питьевая вода и образцы мочи.
Вода. Используя подход «введено - найдено», определяли фосфат-ионы в воде с применением стандартной [45] методики и методики, предложенной нами. Результаты приводятся ниже.
Введено Р043" мг/л 0 1,0 2,0 5,0 15,0
Найдено Р043'мг/л 0,5 1,1 ±0,06 2,1 ±0,1 5,2 ± 0,3 16,0 ±0,4
Почвенные вытяжки. В почвенных вытяжках фосфат-ионы определяли, используя предложенную методику, и контролировали правильность с применением стандартной методики (табл. 6). Образцы почв брали из теплиц с хризантемами - (почва №1 и №2) и розами (№3).
Таблица 6. Результаты определения фосфат-ионов в образцах почв (п = 3, Р = 0,95).
Почва Стандартный метод Предлагаемый метод
Найдено, мкг/кг Найдено, мкг/кг ir
Почва №1 2,25 2,40 0,066
Почва №2 4,20 4,15 0,011
Почва №3 4,80 4,95 0,031
Моча. При определении фосфат-ионов в моче ее предварительно разбавляли в 20 раз. В результате стандартным методом в моче (суточный сбор) было определено 240 мг/л, предлатемым 245мгР043".
Напитки Содержание фосфорной кислоты, добавляемой при изготовлении газированных напитков определяли с помощью предлагаемой методики. Так, в напитке "Sprite" (разбавление в 100 раз) стандартным методом определено 800 мг/л РО/", предлагаемым - 820 мг/л, в воде "Колокольчик" (разбавление в 100 раз) стандартным методом определили 1050 мг/л Р043', предлагаемым - 1080 мг/л, sr -0,025 и 0,028 соответственно.
Из приведенных результатов видно, что различия в содержаниях фосфат-ионов, определенных стандартными методами и предложенным, незначительны. Это позволяет утверждать, что разработанная методика пригодна для количественного определения фосфора в различных объектах - почве, физиологических жидкостях, пищевых продуктах.
ВЫВОДЫ
1. В результате систематического анализа литературных данных по методам определения фосфора показано, что наибольший практический интерес представляют фотометрические методы определения фосфат-ионов в растворах и прежде всего - фотометрия восстановленной молибдофосфорной
18
гететерополикислоты (МФ ГПК). Сведения о свойствах восстановленной форме МФ ГПК хорошо изучены в различных литературных источниках.
2. Показана возможность использования гидросульфата калия в качестве кислотообразующего реагента, найдены оптимальные условия образования восстановленной формы МФ ГПК в отсутствие минеральных кислот и предложен принципиально новый метод определения фосфат-ионов с применением этого вещества.
3. Спектрофотометрически изучены условия образования восстановленной (синей) формы МФ ГПК с применением гидросульфата калия. Метод апробирован при количественном определении фосфат-ионов в почвенных вытяжках.
4. Предложена методика построения и корреляции колористической шкалы для определения фосфат-ионов с привлечением «наивных наблюдателей». Методика позволяет корректировать положения точки отсчета и шаг изменения цветовых оттенков, что позволяет варьировать диапазон определяемых концентраций фосфат-ионов.
5. Применительно к водным растворам, почвенным вытяжкам, физиологическим жидкостям и питьевой воде предложен блистерно-колориметрический способ полуколичественного определения фосфат-ионов.
6. Предложенный полуколичественный блистерно-колориметрический способ модифицирован в количественный фотометрический и позволяет определять фосфор в различных объектах без приготовления растворов реагентов, используя россыпь, упакованную в ампулу или блистер. Показана достаточная для практических целей надежность предлагаемого экспрессного метода.
7. Изучено влияние условий проведения блистерного анализа (компонентов россыпи, мешающих влияний) на условия образования окрашенных растворов и устойчивость растворов.
8. Изучены цветометрические функции (ЦФ) универсальных тест-россыпей, содержащих реагенты в стехиометрических соотношениях для проведения аналитической реакции.
Основные результаты диссертации изложены в следующих публикациях
1. Д.А Князев., A.B. Жевнеров, О.К.Зайцев, С.А.Шафаревич, А.М. Маринов. Методика построения градуировочной шкалы для визуального экспресс-анализа на фосфат-ион. // Изв. ТСХА. Вып. 1.2004. С. 141 -146.
2. Д.А. Князев, В.М. Иванов, Ю.А. Золотев, A.B. Жевнеров, В.Д. Князев, И.В. Дайдакова, В.М. Маркина. Количественные колориметрические окончания блистерных экспресс-анализов из микропроб (нитрат-, нитрит- и фосфат-анионы). / Тез. докл. II Всерос. конф. «Аналитические приборы». СПб.: СГ16ГУ, 2005. С.80-81.
3. Д А. Князев, В.М. Иванов, Ю.А Золотев, A.B. Жевнеров, С.А. Шафаревич, В.Д. Князев. Блистерный капельно-визуальный экспресс-тест на фосфат-ион. / Тез. докладов V Всеросс. конф. По анализу объектов окружающей среды. «Экоаналитика-2003». СПб.: СПбГУ, 2003. С.225.
4. ДА. Князев, В.М. Иванов, Ю.А. Золотев, A.B. Жевнеров, В.Д. Князев, И.В. Дайдакова. Реагентная смесь на фосфат-ион для колориметрического и визуально-блистерного экспресс-анализа. / Тез. докладов XVII Международной научно-технической конф. «Реактив 2004». Т. 1. - Уфа: Государственное издательство научно-технической литературы «Реактив», 2004. С.24-25.
*
Объем 1,25 печ. л._Зак. 305._Тираж 100 экз.
Центр оперативной полиграфии ФГОУ ВПО РГАУ - МСХА им. К.А. Тимирязева 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 44
с
»
»
I
03 V/
97 4t
Введение.
Глава 1. Методы определения фосфат-ионов (обзор литературы).
1.1. Объект исследования - фосфат-ионы в водных средах.
1.2. Методы определения фосфат-ионов в водных средах.
1.2.1. Редко используемые инструментальные методы.
1.2.2. Фотометрические методы.
1.2.3. Хроматографические методы.
1.2.4. Полевые методы.
1.2.5. Тест-методы.
Экспериментальная часть.
Глава 2. Используемые реагенты, применяемые приборы и оборудование.
Глава 3. Выбор цветной реакции. Критерии выбора.
3.1. Подбор реагентов для реакции с восстановленной молибдофосфорной кислотой (МФК).
3.2. Свойства восстановленной МФК и мсшибдованадофосфорной кислоты (МВФГПК).
3.2.1. Подбор восстановителя для МФК. Критерии выбора.
3.2.2. Подбор вещества для создания высокой кислотности. Критерии выбора.
3.3. Определение фосфат-ионов в воде и почвенных вытяжках с использованием гидросульфата калия в качестве кислотного средообразователя.
Глава 4. Разработка тест-системы для определения фосфат-ионов.
4.1. Нанесение реагентов на силикагель. Исследование свойств россыпи.
4.1.1. Выбор и оптимизация условий нанесения реагентов на силикагель. Критерии выбора.
4.1.2. Изучение свойств россыпей. Гигроскопичность и выбор условий хранения.
4.2. Исследование составов растворов и их свойств при различных соотношениях масс компонентов россыпи и объемов испытуемых жидкостей.
4.2.1. Исследование различных составов тест-системы при изменении соотношений компонентов (россыпей).
4.2.2. Цветометрические характеристики тест-системы.
Глава 5. Применение аналитической реакции для полуколичественного определения фосфат-ионов.
5.1. Разработка колористической шкалы с привлечением массовых измерений.
5.2. Исследование россыпи применительно к почвенным вытяжкам, сточным водам и физиологическим жидкостям.
Глава 6. Разработка методики количественного определения фосфта-ионов в сельскохозяйственных объектах, физиологических жидкостях. Блистерная колориметрия.
6.1. Оптические свойства восстановленной МФК в растворе использованием тест-россыпи.
6.2. Оптимизация условий проведения блистерно-колориметрического анализа.
6.2.1. Определяющие факторы при разработке блистерно-колориметрического анализа.
6.2.2. Методика блистерно-колориметрического определения фосфат-ионов.
6.3. Определение фосфат-ионов в почвенных вьпяжках и физиологических жидкостях.
6.3.1. Определение фосфат-ионов с привлечение неопытных исполнителей. Сравнение предложенной методики со стандартной.
Выводы.
Актуальность работы. Тест-методы постепенно приобретают все большее значение во всех областях химического контроля. Чаще всего тест-методы используют для предварительной оценки наличия и содержания непосредственно на месте, то есть там, где находится анализируемый объект. Тест-методы сильно способствуют удешевлению и массовому распространению химического анализа как средства рационального решения задач и проблем.
Фосфор — один из наиболее часто определяемых элементов, и потому трудно переоценить важность быстрого и простого метода экспресс-определения фосфора. Сточные воды, почвенные вытяжки, физиологические жидкости, питьевая вода, пищевые продукты, а также вода прудов, рек и озер - вот неполный список объектов для определения фосфора.
В настоящей работе предложена готовая к использованию смесь реагентов на носителе для блистерного экспресс-анализа на фосфат-ионы в водных средах. Смесь может быть использована как для блистерного полуколичественного, так и для количественного фотометрического определения фосфат-ионов в той же или другой пробе. Концентрирование различных реагентов на поверхности сорбента - перспективный и успешно зарекомендовавший себя метод получения тест-систем. В настоящей работе в качестве носителя использован силикагель. Выбор силикагеля в качестве носителя стал результатом предварительных испытаний ряда других сорбентов. Высокая сорбционная способность силикагеля, его химическая и гидролитическая устойчивость, отсутствие собственной окраски, а также относительная доступность и дешевизна явились теми критериями, которые привели к его выбору.
Однако сведения о закреплении на поверхности силикагеля химических реагентов, необходимых для определения фосфора в виде восстановленной и невосстановленной гетерополикислот, в литературе отсутствуют. Исследование аналитической реакции на фосфор с образованием молибдофосфорной ГПК с применением россыпей силикагелей с химическими реагентами на них, а также получение этих россыпей представляет большой практический интерес. Цель работы состояла:
1. В разработке полуколичественного визуального тест-метода определения фосфат-ионов в малом объеме блистерной ячейки.
2. В подборе сухих и легко растворимых реагентов для осуществления тест-реакции в объеме капли.
3. В разработке цветовой шкалы.
4. В применимости разработанной россыпи для количественного анализа с использованием колориметра.
Достижение поставленных целей предусматривало решение следующих задач:
1. Выбор условий проведения цветной реакции с образованием синей формы молибдофосфорной гетерополикислоты - подбор носителя для реагентов, подбор сухих реагентов и их соотношений.
2. Изучение химико-аналитических свойств, смесей россыпей с нанесенными реагентами, кинетики реакции образования молибдофосфорной гетерополикислоты (восстановленной и невосстановленной) и условий устойчивости образующейся окраски.
3. Разработка цветной шкалы для тест-метода с привлечениением большого числа испытателей.
4. Изучение применимости россыпей для количественного фотоколориметрического определения фосфат-ионов из капельных объемов проб.
Научная новизна. В ходе работы экспериментально подтверждена возможность применения сорбированных на силикагеле реагентов для проведения реакции образования молибдофосфорной гетерополикислоты в восстановленной и невосстановленной формах. Выявлены условия протекания аналитической реакции и условия хранения готовой россыпи. Показано, что в подобранных условиях реагенты сорбируются силикагелем, что предотвращает их преждевременное взаимодействие и способствует ф длительному хранению россыпи в состоянии стартовой готовности. Впервые изучена возможность применения "сухой" россыпи с использованием силикагеля для полуколичественного и количественного определения фосфора.
Предложен новый способ, а также оптимизированы условия изготовления химически модифицированного различными реагентами силикагеля. Установлено, что с поверхности силикагеля десорбирутся строго определенные количества реагентов. Растворы над поверхностью россыпей окрашиваются, что дает возможность исследовать оптическую плотность этих растворов для количественного определения фосфора.
Практическое значение работы. Проведена оценка аналитических ^ возможностей нового блистерного визуально-капельного тест-метода определения фосфат-ионов в водных средах. Разработана и апробирована методика блистерного полуколичественного определения фосфора в виде фосфат-ионов. Апробация способа осуществлена на почвенных вытяжках, природных водах различного происхождения, пищевых продуктах, биологических жидкостях и водных растворах. Разработан способ построения колористической шкалы, который может быть применен при разработке других тест-систем. Погрешность разработанного способа 0 изучена с привлечением более чем четырехсот испытателей, что позволило получить большой статистический материал по результатам, полученным с помощью данного метода.
Впервые предложен блистерно-колориметрический количественный метод определения фосфат-ионов из капельно малых (3 капли из глазной пипетки) объемов анализируемого раствора.
Положения, выносимые на защиту:
1. Химико-аналитические свойства тест-россыпей для визуального определения фосфат-ионов в блистерных ячейках.
2. Результаты испытаний визуально-колориметричесского экспресс-метода определения фосфат-ионов в малых объемах блистерных ячеек.
3. Способы получения тест-россыпей различных составов.
4. Методика построения и корреляции колористической шкалы для полуколичественного определения фосфат-ионов.
5. Свойства цветной колористической шкалы сравнения для определения содержания фосфат-ионов.
6. Методика количественного экспресс-метода определения фосфат-ионов из блистерно-малых объемов исследуемого раствора (блистерная колориметрия).
Апробация работы. Результаты работы доложены на V Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2003» (СПб, 2003); XVII Международной научно-технической конференции «Реактив 2004» (Уфа, 2004); Научной конференции молодых ученых и специалистов Московской сельскохозяйственной академии имени К.А. Тимирязева (Москва, 2004); II Всероссийской конференции «Аналитические приборы» (СПб, 2005); Международной научной конференции, посвященной 140-летию РГАУ-МСХА им. К.А. Тимирязева. (Москва, 2005). Публикации.
Основные результаты диссертации изложены в следующих работах:
1. Князев Д.А., Жевнеров A.B., Зайцев O.K., Шафаревич С.А., Маринов A.M. Методика построения градуировочной шкалы для визуального экспресс-анализа на фосфат-ион. // Изв.ТСХА Вып.1. 2004. С. 141-146.
2. Князев Д.А., Иванов В.М., Золотов Ю.А., Жевнеров A.B., Князев В.Д., Дайдакова И.В., Маркина В.М. Количественные колориметрические окончания блистерных экспресс-анализов из микропроб (нитрат-, нитрит- и фосфат-анионы). / Тез. докл. II Всерос. конф. «Аналитические приборы». СПб.: СПбГУ, 2005. С.80-81.
3. Князев Д.А., Иванов В.М., Золотов Ю.А., Жевнеров A.B., Шафаревич С.А., Князев В.Д. Блистерный капельно-визуальный экспресс-тест на фосфат-ион. / Тез. докладов V Всеросс. конф. По анализу объектов окружающей среды. «Экоаналитика-2003». СПб.: СПбГУ, 2003. С.225.
4. Князев Д.А., Иванов В.М., Золотов Ю.А., Жевнеров A.B., Князев В.Д. Дайдакова И.В. / Реагентная смесь на фосфат-ион для колориметрического и визуально-блистерного экспресс-анализа. / Тез. докладов XVII Международной научно-технической конф. «Реактив 2004». Т. 1. - Уфа: Государственное издательство научно-технической литературы «Реактив», 2004. С.24-25.
5. Князев Д.А., Жевнеров A.B., Иванов В.М., Князев В.Д. Блистерно-колориметрическое определение фосфат-ионов в воде, сельскохозяйственных объектах и биологических жидкостях. // Журн. аналит. химии. 2006 (в печати).
6. Князев Д.А., Жевнеров A.B., Иванов В.М., Князев В.Д. Построение и коррекция градуировочной шкалы для визуального полуколичественного экспресс-определения фосфат-ионов в сельскохозяйственных объектах. // Журн. аналит. химии. 2006 г (в печати).
7. Князев Д.А., Жевнеров A.B., Иванов В.М., В.Д. Князев. Определение фосфат-ионов в воде и сельскохозяйственных объектах с использованием тест-реагентной россыпи // Докл. ТСХА. Вып. 2006 (в печати).
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, пяти глав экспериментальной части, выводов и списка литературы. Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста, включает 27 рис. и 20 табл. Список литературы содержит 168 работ.
выводы
1. В результате систематического анализа литературных данных по методам определения фосфора показано, что наибольший практический интерес представляют фотометрические методы определения фосфат-ионов в растворах и прежде всего - фотометрия восстановленной молибдофосфорной гететерополикислоты. Сведения о свойствах восстановленной формы МФ ГПК хорошо изучены в различных литературных источниках.
2. Показана возможность использования гидросульфата калия в качестве кислотообразующего реагента, оптимальные условия образования восстановленной формы МФ ГПК в отсутствие минеральных кислот и предложен принципиально новый метод определения фосфат-ионов с применением этого вещества.
3. Спектрофотометрически изучены условия образования восстановленной (синей) формы МФ ГПК с применением гидросульфата калия. Метод был апробирован при количественном определении фосфат-ионов в почвенных вытяжках. Показана хорошая воспроизводимость результатов определения с использованием гидросульфата калия.
4. Предложена методика построения и корреляции колористической шкалы для определения фосфат-ионов с привлечением «наивных наблюдателей». Методика позволяет корректировать положения точки отсчета и шаг изменения цветовых оттенков, что позволяет варьировать диапазон определяемых концентраций фосфат-ионов.
5. Применительно к водным растворам, почвенным вытяжкам, физиологическим жидкостям и питьевой воде предложен блистерно-колориметрический способ полуколичественного определения фосфат-ионов.
6. Способ модифицирован в количественный фотометрический и позволяет определять фосфор в различных объектах без приготовления растворов реагентов, используя россыпь, упакованную в ампулу или блистер. Показана достаточная для практических целей надежность предлагаемого экспрессного метода.
7. Изучено влияние условий проведения блистерного анализа (компонентов россыпи, мешающих влияний) на условия образования окрашенных ф растворов и устойчивость растворов.
8. Изучены цветометрические функции универсальных тест-россыпей, содержащих реагенты в стехиометрических соотношениях для проведения аналитической реакции.
1. Корбридж Д. Основы химии, биохимии, технологии. М.: Мир, 1982. 287 с.
2. Богдановский А.Г. Химическая экология. М.: МГУ, 1999. 214 с.
3. Роуэлл Д.Л. Почвоведение: методы и использование. Пер. с англ. М.: Колос, 1998. 486 с.
4. Воробьева Л.А., Горобец А.В., Рудаков Т.А. Методы оценки подвижности фосфора в почвах. // Почвоведение. 1995. № 8. С. 963-968.
5. Отраслевой сборник методик проведения химического анализа веществ, применяемых в легкой промышленности, содержащихся в сточных водах. М.: ЦНИИТЭИЛегпром, 1988. С. 153-160.
6. Новиков Ю.В., Ласточкина К.О., Болдина З.Н. Методы исследования качества вод водоемов. М.: Медицина, 1990. 400 с.
7. Сорокин И.Н., Алябина Г.А., Калинина Л.А. Анализ миграции фосфора в системе водосбор-озеро. Изучение процессов формирования химических составов природных вод в условиях антропогенного воздействия. Часть 1. Л. 1987. 153 с.
8. Контроль химических и биологических параметров окружающей среды. Серия справочных изданий. // Под ред. Исаева Л К. С.Пб.: Изд-во «Кристмас+», 1998. 851 с.
9. Нормативное обеспечение контроля качества воды. Справочник. М.: Госстандарт России, 1995.
10. Sang J. Yu G. Zhang X., Wang Z. Relation between phosphorus and bacterial regrowth in drinking water // Huan Jing Ke Xue. 2003. V. 24. № 4. P. 81-84.
11. European Commission. Council Directive. Water bathing quality. 76/160/EEC of 8.12.1975.
12. Baquerizo A., Anselmo D., Shackleton C. Phosphorus analysis an early predictive factor in patients with acute liver failure. // Lippincott Williams&Wilkins, Inc. Medicine-Abstract. 2003. V. 75. № 12. P. 2007-2014.119-J
13. Burtis C.A., Ashwood E.R., editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3 ed. Philadelfia: W.B. Saunders Company, 1999. 1829 p.
14. Митчел M., Стапп У. Показатель качества воды. Полевое руководство по мониторингу качества воды (Green, USA). — Сокр. перевод с англ. СПб.: «Прозрачные воды Невы», 1995. 334 с.
15. Муравьев А.Г. Руководство по определению качества воды полевыми методами. С.Пб:. «Крисмас+». 1998. 224 с.
16. Лурье Ю.Ю., Рыбникова А.И. Химический анализ производственных сточных вод. М., Химия, 1974. 335 с.
17. Cross, A.F., Schlesinger W.H. A Literature rewiew of the Hedley fractionation: Applications to the biogeochemical. Cycle of Soil Phosphorus in natural ecosystems. // Geoderma. 1995. V. 64. P. 197-214.
18. Bollinger D.W., Tsunoda A., Ledoux D.R., Ellersieck M.R., Veum T.L. A simple in vitro test tube method for estimating the bioavailability of phosphorus in feed ingradients for swine. // J. Agric. Food Chem. 2004. V. 52. №7. P. 1804-1809.
19. Федоров А.А, Черняховская Ф.В., Вернидуб A.C. и др. Аналитическая химия фосфора. М.: Наука. 1974. 219 с.
20. Золотов Ю.А., Иванов В.М., Амелин В.Г. Химические тест-методы анализа. М.: УРСС, 2002. 304 с.
21. Золотов Ю.А. Еще раз о тест-методах. // Журн. аналит. химии. 1996. Т. 51. № Ю. С. 1029.
22. Моросанова С.А., Прохорова Г.В., Семеновская Е.Н. Методы анализа природных и промышленных объектов. М.: Изд-во МГУ, 1998. 297 с.
23. Основы аналитической химии. Под ред. Ю.А. Золотова. T.l. М.: Высш. Школа, 1999. 351 с.
24. Эпова Е.Н., Эпов В.И., Алексеева Е.В., Дудинский В.Ф. Использование метода масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой для непрямого определения фосфатов в воде. // Заводская лаборатория. 2003. №5. С.13.
25. Андреева И.Ю., Поливанова Н.Г., Богомолова Д.Н. Рентгеноспектральное определение фосфат-, арсенат-, силикат- и сульфат-ионов в водах с предварительным концентрированием на волокне ионообменнике. // Журн. аналит. химии. 1992. Т. 47. №2. С. 383-387.
26. Никифорова Т.Г., Русских Я.В. Использование метода вольтамперометрии для определения фосфат- и сульфат-анионов в водных средах. // Журн. аналит. химии. 1995. Т.50. №3. С.315-318.
27. Файгль Ф. Капельный анализ неорганических веществ. Т. 2. М.: Наука. 1976. 392 с.
28. Островская В.М. Хромогенные аналитические агенты, закрепленные на носителях. // Журн. аналит. химии. 1977. Т.32. №9. С. 1820-1835.
29. Амелин В.Г. Тест-метод определения суммарных показателей воды с использованием индикаторных бумаг. // Журн. аналит. химии. 2000. Т. 55. № 5. С. 532-538.
30. Поп М.С. Гетерополи- и изополикислоты. Новосибирск.: Наука, 1990. 232 с.
31. Тарасова Н.С., Дорохова E.H., Алимарин И.П. Экстракционно-фотометрическое определение кремния и фосфора с использованием изомерии молибденовых гетерополикислот. // Журн. аналит. химии. 1981. Т. 36. № 3. С.459-465.
32. Duval L. Etude des conditions de validité du dosage ceruleomolybdique de l'acide phosphorique. //J. Chim. anal. 1983. V. 45. P. 237.
33. Уэллс A. Структурная неорганическая химия. T.2. M.: Мир. 1987. C.22.
34. Helrich К. Official Methods of Analysis. Association of official analytical chemists. 1990. Arlington, Virginia 22201 USA, V. 1. P 4-7,12-17,40,42,56,8788,328-330,344-345 V. 2, P 713,779,916,1007-1008,1106-1107.
35. Никитина E.A. Гетерополисоединения. M.: Госхимиздат, 1962. 424 с.
36. Тарасова Н.С., Дорохова E.H. Спектрофотометрическое изучение поведения восстановленной а-молибденофосфорной кислоты приизменении рН растворов и при экстракции кислородсодержащими растворителями. // Журн. аналит. химии. 1980. Т.25. №10. С.1132-1138.
37. Дорохова Е.Н. Химико-аналитическое изучение условий образования и восстановления кремнемолибденовой кислоты. Дисс. канд. хим. наук. М.: МГУ, 1965. 132 с.
38. Тарасова Н.С., Дорохова Е.Н., Алимарин И.П. Определение кремния и фосфора в сталях и сплавах с использованием изомерии молибденовых гетерополикомплексов // Журн. аналит. химии. 1983. Т.38. № 1. С. 63.
39. Золотов Ю.А., Кузьмин Н.М. Концентрирование микроэлементов. М.: Химия, 1982. 288 с.
40. Уильяме У.Дж. Определение анионов. М.: Химия, 1982. 624 с.
41. Motomizu S., Wakimoto P., Toei К. Spectrophotometric determination of phosphate in river waters with molybdate and malachite green. // Analyst (London). 1983. V. 8. P. 361-367.
42. Fernandez J.A., Neill F.X. A rapid and sensitive automated determination of phosphate in natural waters. // Limnol. Oceanogr. 1985. V. 30. P. 227-230.
43. Mallarino A.P., Blackmer A.M. Comparison of Methods for Determination Critical Concentration of Soil Test Phosphorus for Corn. // ARGON. J. 1992. V. 84. №. 5. P. 850-856.
44. Van Veldhoven P.P., Mannaerts G.P. Inorganic and organic phosphate measurements in nanomolar range. // Anal. Biochem. 1987. V.161. P. 45-48.
45. Москвин JI.H., Булатов А.В., Николаева Д.Н., Григорьев Г.Л. Проточно-инжекционное экстракционно-фотометрическое определение фосфат- и силикат-ионов. // Журн. аналит. химии. 2002. Т.57. №7. С. 709-714.
46. Медвецкий А.В, Тихомирова Т.И., Цизин Г.И., Дмитриенко С.Г., Золотов Ю.А. Сорбционно-спектроскопическое определение фосфатов в водах в виде молибденовых гетерополикислот // Журн. аналит. химии. 2003. Т. 58. №9. С. 944-947.
47. Упор Э., Мохаи М, Новак Д. Фотометрические методы определения следов неорганических соединений. М.: Мир, 1985. 359 с.
48. Фомин Г.С. Вода. Контроль химической, бактериальной и радиационной опасности по международным стандартам: Энциклопедический справочник. М.: Проректор. 1995. 624 с.
49. Фомин Г.С., Фомин А.Г. Почва. Контроль качества и экологической безопасности по международным стандартам. Справочник. М., «Проректор», 2000. 528 с.
50. Гончаров A.IO. // Экология моря. 2001. №. 58. С. 64-68.
51. Бордовский O.K., Иваненкова В.Н. Методы гидрохимических исследований океана. М.: Наука, 1987. 271 с.
52. Руководство по химическому анализу морских вод. С.Пб.: Гидрометеоиздат, 1993. 218 с.55. www.aqua-analyt.com. Шифр методики: ЦВ 2.04.01-91 "А"
53. Grasshoff К. Methods of Sea Water Analysis // Verlag Chemie. 1983. P. 125187.
54. Morphy J., Reiley J.P. Modified single solution method for the determination of phosphate in natural waters. // Anal. Chim. Acta. 1962. V. 27. №. 1, P. 31— 36.
55. Glumac E.L., Felker P.,Reyes I. Correlation between biomass productivity and soil and plant tissue nutrient concentration for Leucaena leucocephala(K-8)growing on calkareous soils. // Forest Ecol. Manag. 1987. V. 18. №4. P. 241250.
56. Дедков Ю.М., Кельина С.Ю., Коничев M.A. Определение фосфатов в водах на уровне ПДК. // Заводская лаборатория. 2001. №7. С. 8-10.
57. Орлов Д.С. Химия почв. М.: Изд-во МГУ, 1992. 400 с.
58. Пуховский А.В., Пуховская Т.Ю, Кирпичников Н.А. О методахопределения фосфатного режима почв. // Плодородие. 2004. №5 С.19-22.
59. Bates Т.Е. Prediction of Phosphorus availability from 88 Ontario soil tests. // Communic in Soil Sc. Plant Analysis, 1990; T.21. № 13/16, 1009-1023.
60. Sibbesen, E., and A.N. Sharpley. Setting and justifying upper critical limits for phosphorus in soils. H. Tunney et al., (ed.) Phosphorus Loss from Soil to Water.CAB International. London. 1997.
61. Irving G.C.J., McLaughlin M.J. A rapid and simple field test for phosphoruus in Olsen and Bray №.1 extracts of soil. // Commun. Soil Sci. Plant Anal. 1991V. 22. P. 2245-2255.
62. Kuo S., Sparks D.L. Methods of Soil Analysis: Part 3- Chemical Methods.
63. SSSA, Madison, WI. Phosphorus. 1996. P.869-919.
64. ГОСТ 26204-91. Почвы. Определение подвижных форм фосфора и калия по методу Чирикова в модификации ЦИНАО. М.: 1991, 9с.
65. ГОСТ 26205-91. Почвы. Определение подвижных форм фосфора и калия по методу Мачигина в модификации ЦИНАО. М.: 1991. 10 с.
66. Bolland M.D. A. and Wilson I.R. Comparison of Standart and total Colwell Procedures for Measuring Soil Test Phosphorus. // COMMUN. SOIL SCI. PLANT ANAL. 1994. V. 25. № 13-14. P. 2395-2407.
67. ГОСТ 26207-91. Почвы. Определение подвижных форм фосфора и калия по методу Кирсанова в модификации ЦИНАО. М.: 1991. 10 с.
68. ГОСТ 27753.5-88. Грунты тепличные. Метод определения водорастворимого фосфора. М.: 1989. 4 с.
69. Novozamsky I., Van Dijk D., Van der Lee J.J., Houba V.J.G. Automated determination of trace amounts of phosphate in soil extracts using malachite green. // Commun. Soil Sci. Plant Anal. 1993.V. 24. P. 1065-1076.
70. Sarirullah M., Flowers Т.Н., Pulford I.D. Removal of phosphorus contamination from charcoal prior to decolorization of soil extracts. // Commun. Soil Sci. Plant Anal. 1990. V. 21 P. 2227-2231.
71. Ohno Т., L.M. Zibilske. Determination of law concentration of phosphorus in soil extracts using malachite green. // Soil Sci. Soc. Am. J., 1991.V.55. P. 892895.
72. Watanabe F.S., Olsen S.R. Test of an ascorbic acid method for determining phosphorus in water and ЫаНСОз, Extracts from Soil. // Soil Sci. Soc. Am. Prod. 1965.V. 29. P. 677-678.
73. Subba Rao A., Sammi Reddy K., Takkar P.N. Malachite Green Method Compared to Ascorbic Acid for Estimating Small Amounts of Phosphorus in Water, 0.01M Calcium Chloride. And Olsen Soil Extracts. // Commun. Soil Sci. Plant Anal. 1997. V. 28. P. 589-601.
74. Лебедева Л.И., Николаева Д.Н. Ассоциат молибдованадофосфорной гетерополикислоты с бриллиантовым зеленым и его аналитические возможности. // Журн. аналит. химии, 1982, Т. 37. № 2. С.260-266.
75. Логинов Ю.М., Ефимов В.М., Газов В.А., Потапов М.А., Стрельцов А.Н. Поточное определение фосфора в почвенных пробах по новой технологии. Агрохимический вестник. 1997. №5. С.22-23.
76. Fixen Р.Е., Grove J.H., Westerman R.L. Testing soils for phosphorus. Soil Testing and Plant Analysis. SSSA, Madison, WI.1990. P. 141-180.
77. Fiske C.H., SubbaRow Y. The determination of phosphorus and the discovery of phosphocreatine and ATP // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. P. 21-26.
78. Тюкавкина H.A., Бауков Ю.И. Биоорганическая химия. 2-е изд.-М. Медицина, 1991. 528 с.
79. Doose H.Z. Determination of phosphorus in the smallest blood sample; ultramicromodiflcation of the Fiske-Subbarow method using amidol. // Gesamte Exp. Med. 1959. V. 131. P. 646-648.
80. ООО "Агат-мед" Гематологический научный центр РАМН. Диагностический набор для клинической химии. Фосфор-Агат.ft, 84. ЗАО «ЭкоЛаб-Фосфор». Набор диагностический для определениясодержания неорганического фосфора колориметрическим методом.
81. Cormay® Product Catalogue Cat. No. 3-243. Liquick Cor- PHOSPHORUS 30
82. BIOCON® Inc. The Custom Service laboratory, www.bioconinc.com.
83. ЗАО «Вектор Бест». Набор реагентов «Фосфор-Ново» для определения неорганического фосфора в сыворотке крови и моче.88.www.diakit.ru. Набор реагентов для определения содержания фосфора в сыворотке крови. № кат. Р 7516-120.
84. Березкин В.Г., Бочков A.C. Количественная тонкослойная хроматография. М.: Наука, 1980. 183 с.
85. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная ^ хроматография. Рига, 1988. С. 51, 36, 211.
86. Фритц Дж., Гьерде Д., Поланд К. Ионная хроматография. М.: Мир. 1984. 221 с.
87. Крамаренко В.Ф., Туркевич Б.М. Анализ ядохимикатов. М.: Химия, 1978. С. 30.
88. Шпигун O.A., Золотов Ю.А. Ионная хроматография, и ее применение в анализе вод. М.: МГУ, 1990. 198 с.
89. Иванова Г.Г., Иванов A.A., Кашин A.JI. Ионохроматографическое ^ определение фосфора в органических соединениях // Журн. аналит. химии.1994. Т. 49. С. 302-306.
90. Иванова Г.Г., Иванов A.A., Шпигун O.A. Определение форм фосфора в природных водах. // Вестн. Моск. Ун-та. Серия 2. 1999. Т.40. №2. С. 118123.
91. Тихомирова Т.И., Крохин О.В., Дубовик Д.Б., Иванов A.B., Шпигун O.A. Хроматографическое определение кремния и фосфора в виде молибденовых гетерополикислот с предварительным концентрированием. // Журн. аналит. химии. 2002. Т. 57. №1. С. 24-29.
92. Крохин О.В., Дубовик Д.Б., Иванов A.B., Шпигун O.A. Определение кремния и фосфора в виде молибденовых гетерополикислот методом ион-парной ОФ ВЭЖХ. // Вестн. Моск. ун-та. Серия 2. Химия. 2002. Т.43. №1. С.20-24.
93. Дубовик Д.Б., Иванов A.B., Нестеренко П.Н., Тихомирова Т.И. Влияние сильного электролита в составе элюента на удерживание гетерополикислот фосфора и кремния в ион-парной ОФ ВЭЖХ. // Вестн. Моск. ун-та. Серия 2. Химия. 2002. Т.43. №5. С.300-303.
94. Дубовик Д.Б., Тихомирова Т.В., Иванов A.B., Нестеренко П.Н., Шпигун O.A. Определение кремния, фосфора, мышьяка и германия в виде гетерополикислот (обзор). // Журн. аналит. химии. 2003. Т.58. № 9. С. 902920.
95. Отраслевой сборник методик проведения химического анализа веществ, применяемых в легкой промышленности, содержащихся в сточных водах. М.: Изд-во ЦНИИТЭИЛегпром, 1988. С. 153-160.
96. Алексеев C.B., Беккер A.M. Изучаем экологию экспериментально. (Практикум по экологической оценке состояния окружающей среды) / Под ред. Алексашиной И.Ю. СПб.: Изд. СПб ГУПМ, 1993. 126 с.
97. Феленберг Г., Загрязнение природной среды. Введение в экологическую химию, М.: Мир, 1997. 184 с.
98. Орлов Е.В., Шустов C.B., Орлова К.А. Методологические рекомендации по обследованию водоемов. / Информационный бюллетень экологического центра «Дронт». Н. Новгород.: Эк. центр «Дронт», 1994 г.
99. Нормативное обеспечение контроля качества воды/ Справочник.-М.: Госстандарт России, 1995.
100. ГОСТ 17.1.5.05-77. Охрана природы. Гидросфера. Общие требования к отбору поверхностных и морских вод, льда и атмосферных осадков.
101. ГОСТ 2874-82. Вода питьевая. Гигиенические требования и контроль качества.
102. ГОСТ 18309-72. Вода питьевая. Метод определения содержания полифосфатов.
103. ГОСТ 4212-76. Реактивы. Методы приготовления растворов для колориметрического и нефелометрического анализа.
104. Water analysis handbook. HACH Company, Loveland, Colorado, USA, 1992.
105. НПО «Крисмас+». Тест-комплекты для химических анализов воды и почвенных вытяжек, www.cristmas-plus.ru
106. Комплект-лаборатория "НКВ", производство НПО «Крисмас+». Паспорт KMC 100ПС.
107. Aquamerk- Reagenziensalz zur Phosphat-und Silikatbestimmung in Wasser. Reagenzien fur die Wassranalyse. MERCK. E. Merck, Darmstadt.
108. ЗАО «ИРИМЕКС». Номер в каталоге № 24960-00.
109. Daly J.A., Erthingshausen G. Clin. Chem. 1972. V. 18, P. 263.
110. Золотов Ю.А., Залетина М.М. Применение тест-методов для анализа пищевых продуктов. // Партнеры и конкуренты. 2000. № 6. С. 30-33.
111. Амелин В.Г. Химические тест-методы определения компонентов жидких сред. // Журн. аналит. химии. 2000. Т.55. №9. С. 902-932.
112. Tests Kits Aquamerk®, Aquaquant®, Microquant® for mobile Analyse/ Darmstadt: E. Merck, 1994. 28 p.
113. Островская В.М. О максимальной погрешности визуального тестирования воды реагентными индикаторными средствами. // Журн. аналит. химии. 1999. Т. 54. № 11. С. 1126-1133.
114. Золотов Ю.А. Химический анализ без лабораторий: тест-методы. // Вест. РАН. 1997. Т.67. №6. С. 508-513.
115. Островская В.М. Реактивные индикаторные средства для экспрессного тестирования. // Журн. аналит. химии. 1996. Т. 51. № 9. С. 987-992.
116. Брыкина Г.Д., Марченко Д.Ю., Шпигун O.A. Твердофазная спектрофотометрия. // Журн. аналит. химии. 1995. Т.50. №5. С. 484-491.
117. Золотов Ю.А. Простейшие средства аналитического контроля.// Химическая промышленность. 1997. №6. С. 48-56.
118. Золотов Ю.А. Тест-методы. // Журн. аналит. химии. 1994. Т. 49. №2. С. 149.
119. Амелин В.Г. Индикаторные бумаги в тест-методах визуальной колориметрии. // Журн. аналит. химии. 2002. Т. 57. №8. С. 867-873.
120. ЗАО «Интермедика». Кат.№ Р 7516-120, 7516-1L, 7516-500.
121. Островская В.М. Реактивные индикаторные бумаги для многоэлементного тестирования воды. М.: 1-ая Образцовая типография, 1992. 36 с.
122. Моросанова Е.И., Великородный A.A., Кузьмин Н.М., Золотов Ю.А. Способы получения пористого диоксида кремния. 1998. Пат. РФ № 2139244.
123. Мясоедова Г.В., Саввин С.Б. Хелатообразующие сорбенты. М.: Наука, 1984. 252 с.
124. Тертых В.А., Белякова Л.А., Химические реакции с участием поверхности кремнезема. Киев: Наукова думка, 1991. 264 с.
125. Braun Т., Farag A.B. Polyuretane foams and microspheres in analytical chemistry. // Anal. Chim. Acta. 1978. V 69. №1. P. 1-36.
126. Braun Т., Farag A.B. Cellurar and foamed plastics as separation media. A new geometric form of the solid phase in analytical liquid-solid contact. // Talanta. 1975. V. 22. № 9. P. 699-705.
127. Braun T. Trends in using resilient polyuretane foams as sorbent in analytical chemistry. // Fr. Z. Anal. Chem. 1983. Bd. 314. № 7. P. 652-656.
128. Dmitryenko S.G., Kozyreva O.A., Runov V.K., Zolotov Yu.A. Utilization of Polyurethane Foams in Sorption- Photometric Analysis. // Mendeleev Comm. 1991. №2. P. 75-77.
129. Дмитриенко С.Г. Пенополиуретаны в химическом анализе: сорбция различных веществ и ее аналитическое применение. Дисс. докт. хим. наук. М.: МГУ. 2001.135. www.vitislabs.com. ©Vitis Labs. Reflectoquant®, Phosphate test, Cat. № 16978.2001.
130. Perfecting Simplicity in Water Analysis. Chemetrics. 1999. 40 p.
131. Rapid Tests, Macherey-Nagel. Macherey-Nagel&Co. KG. 2000. 118 p.
132. Test Kits and Portable Laboratories. Darmstadt: E. Merck Co. 2000. 56 p.
133. Федосеев П.Н., Шепелева Jl.И. Методические указания к лабораторным работам по курсу качественного анализа (анионы) с применением реактивных бумаг. Киев.: изд-во Киевск. технологич ун-та легкой пр-ти, 1965.40 с.
134. Hach®, Фосфор реакционноспособный. Каталог № 20760-49, № 2525025, 20760-32.
135. Mercoquant®. Chemical microchips for analysis you take in your stride, Merck Kga A, 1999. 14659/2.
136. Katsuyama H. (Jap). Пат. США 5186894, 1993.
137. Островская B.M. Хромогенные аналитические реагенты, закрепленные на носителях. //Журн. аналит. химии. 1977. Т.32. №9. С. 1820-1835.
138. Indicator and test papers. Test kits for water analysis. Macherey-nagel. Duren. West Germany, 1988.
139. Амелин В.Г. Модифицированные поверхностно активными веществами органические реагенты и реактивные индикаторные бумаги в фотометрических и тест-методах определения микроэлементов. Дисс. докт. хим. наук. Владимир: ВГУ. 1998. 388 с.
140. Daly J.A., Erthingshausen G. Clin. Chem. 1972. V. 18, P. 263.
141. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics Ist ed. Frankfurt: TH books Verlagsgesellschaft. P. 241-247.
142. НПО «Крисмас+». Тест-комплекты для химических анализов воды и почвенных вытяжек, www.cristmas-plus.ru.
143. Патент 170 98 24 РФ, МКИ G 01 № 31/22 Способ изготовления индикаторной бумаги для определения фосфорорганических пестицидов / Вашкевич О.В., Устинова А.Н.; Заявл. 12.11.89. Опубл. 16.10.95, Б.И. №29.
144. Патент 16035510 Франции, МКИ G 01№ 31/22
145. Способ приготовления реактивной бумаги для определения анионов и катионов. / Orley Catharine (Франция) Заявл. 10.03.70. Опубл. 04.11.72.
146. Модифицированные кремнеземы в сорбции, катализе и хроматографии. Под ред. Г.В. Лисичкина. М.: Химия, 1986. 246 с.
147. Нейман Е.И., Шейнфайн Р.Ю. Силикагель, его получение и применение. Киев: Наукова Думка, 1973. 199 с.
148. Холин Ю.В. Количественный физико-химический анализ комплексообразования в растворах и на поверхности химически модифицированных кремнеземов: содержательные модели, математические методы и их приложения. Харьков: ФОЛИО, 2000. 286 с.
149. Лисичкин Г.В., Фадеев А.Ю. Химия привитых поверхностных соединений как часть науки о поверхности. // Росс. Хим. Журн. 1996. Т.40. №3. С. 65-79.
150. Моросанова Е.И., Великородный A.A., Кузьмин Н.М., Золотов. Способ получения пористого диоксида кремния, модифицированногофосфорномолибденовыми гетерополисоединениями. Патент РФ № 2139243. опубл. 10.10.99.
151. Амелин В.Г. Многокомпонентный анализ жидких сред тест-методом. // Журн. аналит. химии. 2002. Т.57. №12. С. 1296-1302.
152. Aquaquant®, Aquamerk® , Microquant® . Fergtests fur die Mobile Analytik, E. Merk.
153. Magdoff F.R., Hryshko C., Jokela W.E., Durieu R.P., Bu Y. Comparison of Phosphorus Soil Test Extractants for Plants Availability and Environmental Assessment. // SOIL SCI. AMERJ. 1999. V. 28. P. 234-238.
154. Bowden M., Sequiera M., Crog J.P., Gravesen P., Diamond D. Analysis of river water samples utilizing a prototype industrial sensing system for phosphorus based on micro-system technology. // J. Environ. Monit., 2002. V. 4 №5. P. 767-771.
155. Маркина B.M. Разработка таблетных экспресс-методов определения нитратов и нитритов в сельскохозяйственной продукции. Дисс. канд. химич. наук. М.: МСХА. 1998. 183 с.
156. Микленеа Я. Адсорбция малых ионов. Адсорбция из растворов на поверхности твердых тел. М.: Мир, 1986. С. 261-272.
157. Пилипенко А.Т., Пятницкий И.В. Аналитическая химия. М.: Химия, 1990. Т. 1,2.
158. Бурмаа Д. Аналитическое аспекты использования фотометрических и цветометрических характеристик комплексов редкоземельных элементов с пиридиновыми азосоединениями. Дисс. канд. химич. наук. М.: МГУ. 2000. 149 с.
159. LaMotte Company®. Soil Testing Products Catalog.
160. Князев Д.А., Жевнеров A.B., Зайцев O.K., Шафаревич С.А., Маринов A.M. Методика построения градуировочной шкалы для визуального экспресс-анализа на фосфат-ион. // Изв. ТСХА. 2004. Вып.1. С. 141-146.
