Синтез и изучение модифицированных субстратов и ингибиторов ферментативной трансформации полиненасыщенных кислот тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

Список сокращений

1. Введение

2. Литературный обзор В

2.1. Введение

2.2. 15-Липоксигеназы млекопитающих: ферментативные 10 свойства и биологическое действие

2.2.1. Экспрессия ретикулоцитарной 15-липоксигеназы в 10 клетках млекопитающих

2.2.2. Субклеточная локализация

2.2.3. Выделение 15-липоксигеназ животного происхождения

2.2.4. Белково-химические свойства

2.2.5. Ферментативные свойства 16.

2.2.6. Фермент-субстратное взаимодействие

2.2.7 Различие 12- и 15-липоксигеназ

2.2.8 Биологическая роль 15-липоксигеназ

2.3. Химический синтез модифицированных аналогов и метаболитов 29 природных полиненасыщенных кислот

2.3.1. Создание метиленразделенных ениновых структур

2.3.2. Создание сопряженных ениновых и диеновых структур

2.3.3. Создание 1,4-дииновых структур

2.3.4. Введение асимметрических центров

2.3.5. Введение модификации в углеводороной цепи с 47 использованием гетероатомов

3. Обсуждение результатов 50 3.1. Химический синтез модифицированных аналогов природных полиненасыщенных кислот

3.1.1. Синтез дикарбоновых полиеновых кислот

3.1.1.1. Полный химический синтез диендикарбоновых кислот с 52 различной длинной углеводородной цепи

3.1.1.2. Химический синтез нонадека-(5г,8г,\\Ъ, 142)-тетраен- 57 1,19-диовой кислоты

3.1.2. Синтез полиеновых кислот, гидроксилированных по ю- 58 положению

3.1.3. Синтез полиеновых кислот, содержащих гидрофобные 64 объемные заместители в со-положении 3.2. Изучение фермент-субстратной специфичности модифицированных аналогов ПНЖК с изоформами 15-ЬОХ

3.2.1. Исследование активности модифицированных 66 субстратов с одним центром первичной ферментативной атаки

3.2.2. Влияние мутации 11403Ь на позиционную специфичность 15-ЬОХ

3.2.3. Исследование активности модифицированных 71 субстратов с несколькими центрами первичной атаки

4. Экспериментальная часть

4.1. Общие замечания и синтез исходных соединений

4.2. К разделу 3.1.1. Синтез дикарбоновых полиеновых кислот

4.3. К разделу 3.1.2. Синтез полиеновых кислот, гидроксилированных 86 по со-положению

4.4. К разделу 3.1.3. Синтез полиеновых кислот, содержащих 89 гидрофобные объемные заместители в ю-положении

4.5. К разделу 3.2. Изучение фермент-субстратной специфичности 92 модифицированных аналогов ПНЖК с изоформами 15-ЬОХ

5. Выводы

6. Литература

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

AK - арахидоновая кислота

AADP - 1,Г-(азодикарбонил)дипиперидин

-DET и (-)-DET - (+)-диэтил-Ь-тартрат и (-)-диэтил-О-тартрат

DEAD - диэтилазодикарбоксилат

DHP - 2,3-дигидропиран

DMAP - 4-(К,Н-диметиламино)пиридин

DMF - диметилформамид

DMSO - диметилсульфоксид

DiHETE- дигидроксиэйкозатетраеновые кислоты

ЕЕТ - эпоксиэйкозатриеновые кислоты

НЕТЕ - гидроксиэйкозатетраеновые кислоты

HODE - гидроксиоктадекадиеновые кислоты

НРЕТЕ-гидропероксиэйкозатетраеновые кислоты

НМРА - гексаметилтриамид фосфорной кислоты (гексаметапол)

НХ - гепоксилины

ЖК - жирные кислоты

IL - интерлейкин

Im - имидазол

LOX - липоксигеназы

LDL - липопоротеины низкой плотности

LT - лейкотриены

LX - липоксины

СРВ А - м-хлорпербензойная кислота

NaHMDS - гексаметилдисилазан натрий

PTS - п-толуолсульфонат пиридиния

ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты

ТВНР - трет-бутилгидропероксид

ТНР - тетрагидропиранил

ТХ - тромбоксаны

THF - тетрагидрофуран

TBS - третбутилсилил

TMS - триметилсилил

PI - фосфатидилинозитол

PC - фосфатидилхолин

ЭПР - электронный парамагнитный резонанс

Липоксигеназы млекопитающих (ЬОХ) - негемовые железосодержащие ферменты - как опосредовано, так и непосредственно связаны с регуляцией различных физиологических процессов и липидного гомеостаза живой клетки в норме и при патологии. В результате ответа на определенный стимул, сопровождаемого активацией липоксигеназ, они стереоселективно окисляют полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК) до соответствующих гидропероксидов. Дальнейший ферментативный метаболизм продуктов первичного окисления приводит к образованию серии биологически активных соединений - оксилипинов, являющихся как эффекторами активации сигналов биологического ответа на то или иное событие, происходящее на внутриклеточном уровне, так и межклеточными вторичными мессенджерами, действующими посредством сигналов трансдукции. Регуляция ряда воспалительных процессов, в том числе связанных с возникновением и развитием псориаза и астмы, а также онкологических заболеваний и атеросклероза, находится под влиянием липоксигеназ и их продуктов.

Наибольший интерес среди липоксигеназ млекопитающих представляет 15-ЬОХ, которая в отличие от других изоформ (5-, 8-, 12-ЬОХ) способна окислять не только свободные ПНЖК, но и кислоты в составе фосфолипидов, эфиров холестерина и липид-белковых комплексов. Несмотря на то, что 15-ЬОХ человека и кролика достаточно хорошо охарактеризованы по их молекулярно-биологическим и ферментативным свойствам, механизмы процессов их фермент-субстратного связывания изучены недостаточно.

В процессе субстратного связывания значительную роль играет позиционная специфичность ЬОХ, являющаяся решающим параметром в определениии их функциональных особенностей, однако причины ее различия не полностью выяснены. Необходимым условием для высокой скорости ферментативной реакции и региоспецифичности окисления, как показали эксперименты с различными аналогами арахидоновой кислоты, является оптимальное расположение субстрата в активном центре. Данные, полученные с использованием субстрато-подобных аналогов ПНЖК (зондов активного центра), результаты в области направленного мутагенеза активного центра фермента и рентгено-структурные исследования комплекса 15-ЬОХ с необратимым ингибитором установили наличие гидрофобного субстрат-связывающего кармана в активном центре ЬОХ, его основные аминокислотные детерминанты и показали ключевую роль концевой метальной группы субстрата, проникающей внутрь субстрат-связывающего кармана, при его взаимодействии с ферментом. Таким образом, в противоположность 5-ЬОХ млекопитающих, для которой возможна «инверсная ориентация» субстрата (то есть карбоксильной группой внутрь кармана), о чем свидетельствует стереоспецифичность образования продуктов с Б-конфигурацией хирального центра, для 15-ЬОХ была выдвинута гипотеза, предполагающая «прямую ориентацию» субстрата в субстрат-связывающем центре. До настоящего времени, однако, остается неясным, насколько точно ориентация ингибитора, молекулярная структура которого существенно отличается от структуры ПНЖК, отражает ориентацию молекулы жирной кислоты в активном центре фермента.

Отсутствие каких-либо экспериментальных данных, подтверждающих или опровергающих возможность локализации в гидрофобном субстрат-связывающем кармане жирных кислот, содержащих полярные (или даже заряженные при рН биологической среды) группировки, а также стерически затрудненные гидрофобные группы, стимулируют проведение исследований по изучению динамики процесса субстратного связывания 15-ЬОХ. При этом научный и практический интерес представляют результаты исследований с использованием модифицированных гидрофильными группами по со-положению аналогов ПНЖК с одной стороны, а также данные, полученные с помощью изменения аминокислотного окружения гидрофобного субстрат-связывающего центра методами направленного мутагенеза с другой.

Таким образом целью данной работы является поиск эффективных путей синтеза модифицированных полиненасыщенных кислот - аналогов природных субстратов липоксигеназ, содержащих гидрофильные и гидрофобные группировки в соположении, и исследование взаимодействия полученных соединений с 15-липоксигеназами животного и растительного происхождения.

Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований по теме № 1Б-18-865 «Получение природных и модифицированных глицеро- и гликолипидов, субстратов липоксигеназ с различным набором гидрофобных и гидрофильных групп с целью создания на их основе препаратов медицинского, экологического назначения и использования для проведения биохимических и биофизических исследований» и 7 проектом РФФИ № 96-003-32768 «Синтез модифицированных субстратов и ингибиторов липоксигеназ».

Литературный

2.1. Введение

Липоксигеназы принадлежат к семейству диоксигеназных ферментов и окисляют ПНЖК в соответствующие гидропероксипроизводные. Механизм ферментативного катализа не полностью ясен, однако предположили, что липоксигеназная реакция включает образование фермент-связанного жирнокислотного радикала, который образуется посредством стереоселективного отщепления водорода от бис-аллильной метиленовой группы /1/. Следует подчеркнуть, что существует альтернативное объяснение механизма реакции, предусматривающее отрыв электрона одного из атомов углерода двойной связи с образованием жирнокислотного катиона и последующее отщепление протона. Однако это потребовало бы присутствия достаточно сильного основного остатка в активном центре фермента /2/. Допуская радикальный механизм, липоксигеназная реакция имеет много общего с неферментативным перекисным окислением липидов. В принципе обе реакции можно разделить на три стадии (Рис.1): 1) отщепление водорода, 2) радикальная К

СООН отщепление водорода К н

СООН радикальная перегруппировка К

НГ^Н

СООН н

02 введение кислорода

СООН Н

Рис. 1. Радикальный механизм липоксигеназной реакции. перегруппировка и, 3) введение кислорода. В процессе липоксигеназной реакции каждая стадия контролируется ферментом, что приводит к образованию специфических продуктов окисления. Так если в молекуле субстрата присутствует более одной бис-аллильной метиленовой группы, липоксигеназа выбирает одну из них для первичного отщепления водорода /3/. Напротив, в процессе неферментативного перекисного окисления липидов водород отщепляется от всех бис-аллильных метиленовых групп. Также введение молекулярного кислорода происходит стереоселективно в случае липоксигеназной реакции, тогда как стереонеселективное окисление характерно для неферментативной реакции.

Ферментативный и неферментативный катализ перекисного окисления липидов отличаются не только специфичностью образующихся продуктов, но и каталитическими свойствами /4/. Липоксигеназная реакция характеризуется низкими значениями Кт и высокими скоростями молекулярной инверсии. Напротив, для большинства неферментных катализаторов сродство к субстрату и молекулярная инверсия довольно низкие. Липоксигеназная реакция может регулироваться на разных уровнях, таких как транскрипция гена липоксигеназы, трансляция липоксигеназной м-РНК и модуляция специфической активности фермента. В противоположность этому, для направленной регуляции неферментативного процесса перекисного окисления липидов существует мало возможностей.

Выводы

1. Разработана универсальная схема синтеза изомерных по положению системы двойных связей со-карбокси- и ш-гидроксидиеновых кислот с различной длиной углеводородной цепи - «зондов» для исследования активного центра липоксигеназ.

2. Получены новые структурные аналоги линолевой и арахидоновой кислот, содержащие в ш-положении гидрофильные группы, стерически затрудненные гидрофобные заместители, а также атомы галогенов.

3. Изучены процессы субстратного связывания 15-ЬОХ ретикулоцитов кролика и 15-ЬОХ соевых бобов с использованием полученных «зондов» активного центра фермента.

4. На примере гидроксидиеновых кислот показано, что введение гидрокси-группы в со-положение значительно понижает сродство фермента к субстрату, не изменяя существенно при этом скорости образования оксигенированных продуктов, тогда как га-карбоксилирование практически полностью препятствует протеканию липоксигеназной реакции. Полученные данные свидетельствуют о том, что фермент-субстратное связывание в случае ю-гидроксикислот является лимитирующей стадией липоксигеназного окисления.

5. Впервые на примере ю-гидроксиарахидоновой кислоты и ее более короткого аналога (19-гидрокси-(52,82,1 \Ъ, 142)-нонадекатетраеновой кислоты) показано, что в двухсубстратной (жирная кислота и кислород) липоксигеназной реакции введение гидрокси-группы в ш-положение ПНЖК понижает сродство комплекса фермент-жирная кислота к кислороду.

1. Egmond MR., Veldink G.A., Vliegenthart J.F.G. and Boldingh J. C-ll H-abstraction from linoleic acid, the rate-limiting step in lipoxygenase catalysis// Biochem.Biophys.Res.Commun. 1973. V.54. P.1178-1184.

2. Siedow J.N. Plant lipoxygenase: Structures and functions// Annu.Rev.Physiol.Plant Mol.Biol. 1991. V.42. P. 145-188.

3. Yamamoto S. Mammalian lipoxygenase: molecular structures and functions// Biochim.Biophys.Acta. 1992. V. 1128. P. 117-131.

4. Kuhn H. Biosynthesis, metabolization and biological importance of the 15-lipoxygenase metabolites 15-hydro(pero)xy-5Z,8Z,llZ,13E-eicosatetraenoic acid and 13-hydro(pero)xy-9Z,llE-octadecadienoic acid// Prog.Lipid Res. 1996. V.35. P.203-226.

5. Rowley A.F., Kuhn H., Schewe T. Eicosanoids and related compounds in plants and animal// Portland Press Ltd. London. 1998

6. Levy B.D., Romano M., Chapman H.A., Reilly J.J., Drazen J., Serhan C.N. Human alveolar macrophages have 15-lipoxygenase and generate 15(S)-hydroxy-5,8,ll-cis-13-trans-eicosatetraenoic acid and lipoxins// J. Clin. Invest. 1993. V.92. P. 15721579.

7. Sigal E., and Nadel J.A. The airway epithelium and arachidonic acid 15-lipoxygenase// Am. J. Respir. Dis. 1991. V.143. P.71-74.

8. Izumi T., Radmark o., Jornvall H., and Samuelsson B. Purification of two forms of arachidonate 15-lipoxygenase from human leucocytes// Eur. J. Biochem. 1991. V.202. P. 1231-1238.

9. Zijlstra F.J., and Wilson J.H.P. 15-HETE is the main eicosanoid in mucus of ulcerative procto colitis// Prostaglandins Leucotr. Essent. Fatty Acids. 1991. V.43. P.55-59.

10. Green F.A. Transformation of 5-HETE by activated keratinocyte 15-lipoxygenase and the activation mechanism// Lipids. 1990. V.25. P.618-623.

11. Liminga M., Fagerholm P., and Oliw E.H. Lipoxygenases in corneal epithelia of man cynomologus monkey// Exp. Eye Res. 1994. V.59. P.313-321.

12. Yla-Herttuala S., Rosenfeld M.E., Parthasarathy S., Glass C.K., Sigal E., Sarkioja T., Witztum J.T., and Steinberg D. Gene expression in macrophage rich human atherosclerotic lesions//J. Clin. Invest. 1991. V.87. P.1146-1152.

13. Lei Z.M., and Rao C.V. The expression of 15-lipoxygenase gene and the presence of functional enzyme in cytoplasm and nuclei of pregnancy human myometria// Endocrinology 1992. V. 130. P.861-870.

14. Hoedemaker M., Weston P.G., and Wagner W.C. Arachidonic acid metabolism by bovine placental tissue during the month of pregnancy// Prostaglandins 1991. V.41. P.75-84.

15. Oliw E.H., Fabiani R, Johansson L., and Ronquist G. Arachidonic acid 15-lipoxygenase and traces of E prostaglandins in purified prostasomes// J. Reprod. Fertil. 1993. V.99. P. 195-199.

16. Ostareck D.H., Ostareck-Lederer A., Wilm M., Thiele B.J., Mann M., and Hentze M.W. mRNA silencing in erythroid differentiation: hnRNP El regulate 15-lipoxygenase translation from the 3' end// Cell 1997. V.89. P.l-10.

17. Nassar G.M., Morrow J.D., Roberts L.J.H., Lakkis F.G. and Badr K.F. Induction of 15-lipoxygenase by interleukin-13 in human blood monocytes// J. Biol. Chem. 1994. V.269., P.27631-27634.

18. Brinckmann R, Topp M.S., Salan I., Heydeck D., Ludwig P., Kuhn H., Berdel W: and Habenicht A.J.R. The regulation of 15-lipoxygenase expression in lung epithelial cells by interleukins// Biochem. J. 1996. V.318. P.305-312.

19. Wiesner R, Rathmann J., Holzhutter H.G., Stosser R., Mader K., Nolting H., and Kuhn H. Nitric oxide oxidizes ferrous mammalian lipoxygenases to a pre-activated ferric species// FEBS Lett. 1996. V.389. P.229-232.

20. Brinckmann R, Schnurr K, Heydeck D., Rosenbach T., Kolde G., Kuhn H. Membrane translocation of 15-lipoxygenase in hematopoietic cells is calcium dependent and activates the oxygenase activity of the enzyme// Blood 1998. V.91. P.64-74.

21. Vickers P.J. 5-Lipoxygenase activating protein (FLAP)// J. Lipid Med. Cell Signal1995. V.12. P.185-194.

22. Sloane D.L., Craik C.S., Mulkins M. and Sigal E. The expression of active human reticulocyte 15-lipoxygenase in bacteria// Biomed. Biochim. Acta 1992. V.49. P.ll-16.

23. Kuhn H., Barnett J., Grunberger D., Baecker P., Chow J., Nguen B., Bursztyn-Pettegrew H., Chan H., Sigal E. Overexpression, purification and characterization of human recombinant 15-lipoxygenase//Biochim. Biophys. Acta 1993. V.1169. P.80-89.

24. Reddy R.G., Yoshimoto T., Yamamoto S., Funk CD., and Marnett L.J. expression of porcine leukocyte 12-lipoxygenase in a baculovirus/insect cell system and its characterization// Arch. Biochem. Biophys. 1994. V.312. P.219-226.

25. Gilmor S.A., Villasenor A., Slatterick R, Sigal E. and Browner M.F. Structure of mammalian 15-lipoxygenase revealed similarity to the lipases and determinants of substrate specificity// Nat. Struct. Biol. 1997. V.4. P. 1003-1009.

26. Minor W., Steczko J., Stec B., Otwinowski Z., Bolin J.T., Walter R. and Axelrod B. Crystal structure of soybean lipoxygenase L-l at 1.4 A resolution// Biochemistry1996. V.35. P. 10687-10701.

27. Kuban R.J., Wiesner R., Rathman J., Veldink G., Nolting H., Sole V.A. and Kuhn H. The iron ligand sphere geometry of mammalian 15-lipoxygenases// Biochem. J. 1998. V.332. P.237-242.

28. Murray J.J., and Brash A.R. Rabbit reticulocyte lipoxygenase catalyzes specific 12(S) and 15(S) oxygenation of arachidonil-phosphatidilcholine// Arch. Biochem. Biophys. 1988. V.265. P.514-523.

29. Ludwig P., Holzhutter H.-G., Colosimo A., Silvestrini M.Ch. Schewe T. and Rapoport S.M. A kinetic model for lipoxygenases based on experimental data with the lipoxygenase of reticulocytes// Eur. J. Biochem. 1987. V.168. P. 325-337.

30. Nelson M.J., Cowling R.A., and Seitz S.P. Structural characterization of alkyl and peroxyl radicals in solution of purple lipoxygenase// Biochemistry 1994. V.33. P.4966-4973.

31. Sloane D.L., Browner M.F., Dauter Z., Wilson K., Fletterick R.J. and Sigal E. Purification and crystallization of 15-lipoxygenase from rabbit reticulocytes// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990. V.173. P.507-513.

32. Prigge S.T., Boyington J.C., Gaffney B J., and Amzel L.M. Structure conversation in lipoxygenases: Structural analysis of soybean lipoxygenase-1 arid modeling of human lipoxygenases// Proteins: Structure, Function and Genetics 1996. V.24. P.275-291.

33. Borngraber S., Kuban R.J., Anton M., and Kuhn H. Phenylalanine 353 is a primary determinant for lipoxygenase positional specificity of mammalian 15-lipoxygenases// J. Mol. Biol. 1996. V.264. P.1145-1153.

34. Gan Q.-F., Browner M., Sloane D.L., and Sigal E. Defining the arachidonic acid binding site of human 15-lipoxygenase. Molecular modeling and mutagenesis// J. Biol. Chem. 1996. V.271. P.25412-25418.

35. Kuhn H., Sprecher H. and Brash A.R. On the singular or dual positional specificity of lipoxygenases// J. Biol. Chem. 1990. V.265. P.16300-16305.

36. Dixon R.A., Jones R.E., Diehl R.E., Bennett CD., Kargman S., and Rouzer C.A. Cloning of the cDNA for human 5-lipoxygenase// Proc. Natl. Acad. Sei. USA 1988. V.85. P.416-420.

37. Lehmann W.D. Regio- and stereoselectivity of the dioxygenatin reaction catalyzed by (S)-type lipoxygenases or by cyclooxygenase activity of prostaglandin H synthase// Free Rad. Biol. Med. 1994. V. 16. P.241-253.

38. Chen X.-S., Kurre U., Jenkins N.A., Copeland N.G. and Funk C.D. cDNA cloning, expression, mutagenesis of C-terminal isoleucine, genomic structure and chromosomal localization of murine 12-lipoxygenase// J. Biol. Chem. 1994. V.296. P. 13979-13987.

39. Berger M., Schwarz K., Thiele H., Boragraber S., Kuhn H. and Thiele B.J. Simultaneous expression of leukocyte-type 12-lipoxygenase and reticulocyte-type 15-lipoxygenase in rabbits// J. Mol. Biol. 1998. V.287. P.933-946.

40. Brash A.R., Boeglin W.E., Chang M. Discovery of a second 15S-lipoxygenase in humans// Proc. Natl. Acad. Sei. USA 1997. V.94. P.6148-6152.

41. Rapoport S.M., Schewe T., and Thiele B.J. Maturational breakdown of mitochondria and other organelles in reticulocytes// In: Harris, J.R. (ed.) Blood Cell Biochemistry. V.l. New York, NY, Plenum Press, 1990, P. 151.

42. Funk C.D. Lipoxygenase gene disruption studies Status and application// Abstract book, P.21, Internal Conference on Lipoxygenases and Their Products, May 21-24, 1997, Malta.

43. Shen J., Herderick E., Cornhill J.F., Zsigmond E., Kim H.S., Kuhn H., Valentinova N. and Chan L. Macrophage-mediated 15-lipoxygenase expression protects against atherosclerosis//J. Clin. Invest. 1996. V.98. P.2201-2208.

44. Kuhn H., Chan L. The role of 15-lipoxygenase in atherogenesis. Pro- and/or antiatherogenic action// Curr. Opinion Lipidol. 1997. V.8. P. 111-117.

45. Alpert S.E., and Walenga R.W. Human tracheal epithelial cells selectively incorporate hydroxyeicosatetraenoic acid into phosphatidylinositol// Am. J. Resp. Cell. Mol. Biol. 1993. V.8. P.273-281.

46. Cho Y. and Ziboh V.A. Incorporation of 13-hydroxyoctadecadienoic acid (13-HODE) into epidermal ceramides and phospholipids: phospholipase C-catalyzed release of novel 13-HODE containing diacylglycerol// J. Lip. Res. 1994. V.35. P.255-262.

47. Lai C.K., Phillips G.D., Jenkins J.R., Holgate S.T. The effect of inhaled 15-(s)-hydroxyeicosatetraenoic acid (15-HETE) on airway caliber and non-specificresponsiveness in normal and asthmatic human subjects// Eur. Respir. J. 1990. V.3. P.38-45.

48. Lai C.K., Polosa R., Holgate S.T. Effect of 15-(s)-hydroxyeicosatetraenoic acid on . allergen-induced asthmatic response// Am. Rev. Respir. Dis. 1990. V.141. P. 14231427.

49. Lax Y., Grossman S., Rubinstein S., Magid N., Breitbart H. Role of lipoxygenase in the mechanism of acrosome reaction in mammalian spermatozoa// Biochim. Biophys. Acta 1990. V.1943. P.12-18.

50. Holtzman M.J., Zhang v., Hussain H., Roswit W.T., Wilson J.D. Prostaglandin H synthase and lipoxygenase gene families in the epithelial cell barrier// Ann. N.Y. Acad. Sci. 1994. V.744. P.58-77.

51. Yadav J.S., Yadapalli P. Total synthesis (stereo) 8R and 8S, 11R,12S-trihydroxyeicosa-5Z,9E,14Z-trienoic acid from 2-desoxyribose // Tetrahedron Lett. 1994. V.35. P. 641-644.

52. Yeola S.N, Saleh S.A., Brash A.R., Prakash Ch., Taber D.F., Blair I. A. Synthesis of (lOS)-Hydroxyeicosatetraenoic acid: a novel cytochrome P-450 metabolite of AA// J. Org. Chem. 1996. V.61. P.838-841.

53. Мягкова Г.И., Евстигнеева Р.П. Полиацетиленовая стратегия направленного синтеза природных полиненасыщенных кислот и их метаболитовэйкозаноидов// Журн. Всесоюз. хим. о-ва им. Д.И. Менделеева. 1991.T.XXXVI. С.411-417

54. Uwai К., Oshinia Y. Synthesis and stereochemical assignment of toxyc C17-polyacetilenic alcohols, viroles А, В and C, isolated from water hemlock// Tetrahedron. 1999. V. 55. P. 9469-9480.

55. Rokash J., Guindon Y., Young R.N., Adams J., Atkinson J.G. The total synthesis of natural products. Ed. J. ApSimon//Wiley & Songs. N.Y. 1988. V.7. P. 141-273.

56. Brandsma L. Preparative acetylenic chemistry. 2nd edition// Elsevier 1988. Amsterdam.

57. Posner G.H. An introduction to the synthesis using organocopper reagents// Wiley & Songs. N.Y. 1980

58. Gardete M., Alexakis A., Normat J.F. Carbocupration of alkynes by organocopoper reagents bearing a protected hydroxygroup or thiol function// Tetrahedron. 1985. V. 41. P.5887-5889.

59. Furber M., Taylor R.J.K., Burford C. The synthesis of leucotriene analogues via acetylene carbocupration// Tetrahedron Lett. 1985. V. 26. P. 2731-2734.

60. Gmelin A. Organocopper compounds (Part 3).// Springer Verlag 1986.

61. Shin D.S., Yadagiri P., Falck J.R., Masferrer J.L.Schwarzman ML. Synthesis and structure confirmation of compound D, A proinflamatory arachidonate metabolite// Tetrahedron Lett. 1989. V.30. P. 3923-3926

62. Gaudin J.M., Morel C. Two new stereoselective syntheses of (3E,5Z)-1,3,5-undecariene//Tetrahedron Lett. 1990. V.31. P. 5749-5752/

63. Kwok P.-Y., Muellner F.W., Chen C.-K., Fried J. Total synthesis of 7,7-, 10,10-and 13,13-difluoroarachidonic acids//J. Amer. Chem. Soc. 1987. V.109. P. 36843692.

64. Mignani G.M., Chevalier C., Gross F., Allmang G., Morel D. Synthesis of new unsaturated enynes catalysed by copper (I) complexes// Tetrahedron Lett. 1990. V. 31. P. 5161-5164.

65. Бумагин Р.А., Пономарев А.Б., Белецкая И.П. Синтез аллилацетиленов из терминальных ацетиленов и аллилгалогенидов// Изв. Акад. наук СССР. Сер. Хим. 1987. №7. С. 1565-1569.

66. Jeffery Т., Guengnot S., Linstrumelle G. An efficient routre to skipped diynes and triynes, (Z,Z) dienes and (Z,Z,Z) trienes// Tetrahedron Lett. 1992. V.33. P.5757-5760.

67. Ramiandrasoa P., Brehon В., Thivet A. Alami M., Cahiez G. An efficient synthesis of stereodefined enynes and dienes via Pd catalysed reaction of chloroenynes and chlorodienes with Grignard reagents// Tetrahedron Lett. 1997. V.38. P.2447-2450.

68. Kobayashi Y., Nakayama Y., Kumar G.B. Stereoselective synthesis of 10,11-dihydro-LTB4 and related methabolites// Tetrahedron Lett. 1998. V.39. P.6337-6340.

69. Perez I., Sestelo J.P., Saraoleses L.A. Palladium catalysed cross-coupling reactions of triorganoindium compounds with vinyl and aryl triflates or iodides// Organic Lett. 1999. V.l. P.1267-1269.

70. Yi Ch. S., Liu N. The ruthenium acetylide catalysed cross-coupling reaction of terminal and internal alkynes: isolation of catalytically active (3-agostic intermediate species// Organometallics. 1998. V.17. P.3158-3160.

71. Белослудцев Ю.Ю., Демин П.М., Мягкова Г.И., Заболотский Д.А., Евстигнеева Р.П. Синтез 5,8,11,14,17-эйкозапентаеновой кислоты//Биоорган, химия. 1988. Т. 14. С. 100-102ю

72. Sprecher Н. The organic synthesis of unsaturated fatty acids// Prog. Chem. Fatts and Other Lipids. 1978. V. 15. P.219-254.

73. Jeffery T. Copper (I) and phase transfer catalyzed allylic substitution by terminal alkynes//Tetrahedron Lett. 1989. V. 30. P. 2225-2228.

74. Lapitskaya M.A., Vasiljeva L.L., Pivnitsky K.K. A chemoselective synthesis of functionalized 1,4-alkadiynes// Synthesis. 1993. P.65-66.

75. Taylor R.J. Organocopper conjugate addition-eriolate trapping reactions// Synthesis. 1985. P.364-392.

76. Corey E J., Kyler K., Raju N., Aschorta F. A short three-component total synthesis of 12-hydroxyeicosa-5,8,14(Z), 10(E)-tetraenoic acids (12-HETE) via corresponding ketone// Tetrahedron Lett. 1984. V.25. P. 5115-5118.

77. Yamaguchi M., Hiaro I. An efficient method for the alkylation of oxyranes using alkynyl boranes// TetrachedromLett. 1983. V. 24. P.391-394.

78. Ooi T., Morikawa J., Ichikawa H., Maryoka K. Remarkable catalytic activity MesGa in the alkylation of hetero-substituted epoxydes with alkyllithiums// Tetrahedron Lett. 1999. V.40. P.5881-5884.

79. Ennis M., Baze M.E.Asymmetric total synthesis of 14(R), 15(S)-, 14(S), 15(R)-, 14(R),15(R)-, and 14(S), 15(S)-epoxyeicosatrienoic acids//Tetrahedron Lett. 1986. V.27. P.6031-6034.

80. Manna S., Viala J., Yadagiri J., Falck J.R. Synthesis of 12(S), 20-, 12(S), 19(R)-, and 12(S), 19(S)-Dihydroxyeicosa-cis-5,8,14-trans-10-tetraenoic acids, metabolites of 12(S)-HETE// Tetrahedron Lett. 1986. V.27. P.2679-2682.

81. Lumin S., Falck J.R., Schwartzman M.L. A concise synthesis of (R)-hydroxy-E,Z-diene fatty acids: preparation of 12(R)-HETE, tetranor-12(R)-HETE, and 13(R)-HODE//Tetrahedron Lett. 1991. V.32. P.2315-2318.

82. Yadagiri P., Lumin S., Mosset P., Capdevila J., Falck J.R. Enantiospecific total synthesis of 8- and 12-hydroxyeicosatetraenoic acid// Tetrahedron Lett. 1986. V. 27. P. 6039-6040.

83. Djuric S.W., Myashiro J.M., Penning T.D. A practical synthesis of 12-hydroyeicosatetraenoic acids// Tetrahedron Lett. 1988. V.29. P.3459-3462.

84. Davis F.A., Stringer O.D. Chemistry of oxaziridines. 2. Improved synthesis of sulfoniloxaziridines// J. Org. Chem. 1982. V.47. P. 1774-1775.

85. Skede S., Sorensen H.N., Larsen L.N., Steineger H.H., Horvik K., Spydevold O.S., Horn R., Brenur J. Tia fatty acids, methabolism and metabolic effects// Biochim. Biophys. Acta. 1997. V.1344. P.115-131.

86. Pitt M. J., Easton C. J., Moody C.J., Ferrante A., Poulos A., Rathjen D. A. Synthesis of polyunsaturated ß-oxo fatty acids via rhodium mediated carbenoid insertion// Synthesis. 1997. P. 1240-1242.

87. Falck J.R., Jing-Yu Lai, Su-Dong Cho, Jurong Yu. Alkylthioether synthesis via imidazole mediated Mitsunobu condensation// Tetrahedron Lett. 1999. V.40. P.2903-2906.

88. Иванов И.В., Гроза H.B., Мальченко Г.М., Мягкова Г.И., Шеве Т. Синтез а,ш-дикарбоновых полиненасыщенных кислот. I. Химический синтез изомерных по двойным связям октадекадиеновых кислот//Биоорган. химия. 1997. Т.23. С. 519-525.

89. Иванов И.В., Гроза Н.В., Мягкова Г.И. Синтез а,со-дикарбоновых полиненасыщенных кислот. П. Химический синтез диендикарбоновых кислот с различной длиной цепи//Биоорган, химия. 1998. Т 24. С.454-457.

90. Иванов И.В., Гроза Н.В., Мнасина Е.Е., Мягкова Г.И. Синтез арахидоновой кислоты и ее ацетиленового предшественника// Биоорган. Химия. 1995. Т.21. С.802-805.

91. Ames А.Е., Covell A.N., Goodburn T.G. Synthesis of Long-chain acids. Part V. Synthesis of some ю-hydroy-acetylenic acids// J. Chem. Soc. 1963. P.5889-5893.

92. Cossy J., Pete J.P. A one step synthesis of w-hydroxyacetylenic carboxylic acids// Tetrahedron Lett. 1986. V.27. P.573-574.

93. Ivanov I. V., Groza N. V., Romanov S. G., Kühn H., Myagkova G.I. Total synthesis of (5Z,8Z, 11Z, 14Z)-nonadeca-5,8,11,14-tetraen-l, 19-dioic acid and5Z,8Z,11Z, 14Z)-20,20-dimethylheneicosa-5,8,11,14-tetraenoic acid// Synthesis. 2000. P.

94. Плешаков М.Г., Сарычева И.К., Преображенский H.A. Синтетические исследования в области полиацетиленовых кислот// Ж. Общ. химии. 1960. Т.30. С.2983-2985.

95. Vasiljeva L.L., Manukina Т.А., Demin P.M., Lapitskaja M.A., Pivnitsky K.K. Identifikation of epimeric hepoxylines (-)-(10R)-B3 and (+)-(10S)-B3// Tetrahedron. 1993. V.49. P. 4099-4106.

96. Ivanov I. V., Myagkova G. I, Kuhn H. A simple preparation of co-hydroxydienoic fatty acids with double-bond positional isomerism// Mendeleev Commun. 1998. P. 222-224.

97. Lipshutzt B.H., Wilhelm R.S., Kozlowski J.A. Conjugate Addition Reactions of a,b-unsaturated ketones with higher order, mixed organocuprate reagents, R2Cu(CN)Li2// J. Org. Chem. 1984. V.49. P. 3938-3942.

98. Bretz S., Dabbagh G. Organocopper reagents in dimethyl sulfide// Tetrahedron. 1989. V. 45. P. 425-434.

99. Ivanov I. V., Schwarz K, Holzhutter H., Myagkova G.I., Kuhn H. co-Oxidation impairs oxidizability of polyenoic fatty acids by 15-lipoxygenases: consequences for substrate orientation at the active site//Biochem. J. 1998. V. 336. P.345-352.

100. Wotiz J.H., Buco S.N. The Arndt-Eistert sysnthesis of unsaturated acids// J. Org. Chem. 1955. N20. P.210-213.

101. Newman M.S., Wotiz J.H. The preparation of six n-octynoic acids// J. Am. Chem. Soc. 1949. N.71. P.1292-97.

102. Bohlman F., Inhoffen E., Herbst P. Synthesen von Polyin-kohlenwasserstoffen aus aus Artemisia Vulgaris// Chem. Berichte. 1957. N.90. P. 1661-1666.

103. Boeynaems J.M., Brash A.R., Oates J.A., Hubbard W.C. Preparation and assay of monohydroxy-eicosatetraenoic acids// Anal. Biochem. 1980. V.104. P. 259-267.

104. Crombie L., Jacklin A.G. Lipids. Part V. Total synthesis of ximenynic acid, homoricinsteardic acid and two fatty hydroxy-acids within allenic side branches// J. Chem. Soc. 1957. P. 1622-1631.

105. Автор выражает глубокую благодарность своему научному руководителю доктору химических наук профессору Мягковой Г. И. за большую помощь в работе.