Сорбционное концентрирование кверцетина и других флавоноидов и их определение различными методами

Кудринская, Вера Александровна

Сорбционное концентрирование кверцетина и других флавоноидов и их определение различными методами тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

Кудринская, Вера Александровна АВТОР

кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ

Москва МЕСТО ЗАЩИТЫ

2010 ГОД ЗАЩИТЫ

02.00.02 КОД ВАК РФ

Диссертация по химии на тему «Сорбционное концентрирование кверцетина и других флавоноидов и их определение различными методами»

Автореферат диссертации на тему "Сорбционное концентрирование кверцетина и других флавоноидов и их определение различными методами"

На правах рукописи

КУДРИНСКАЯ ВЕРА АЛЕКСАНДРОВНА

СОРБЦИОННОЕ КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ КВЕРЦЕТИНА И ДРУГИХ ФЛАВОНОИДОВ И ИХ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РАЗЛИЧНЫМИ МЕТОДАМИ

02.00.02 - аналитическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

2 /. И ЮН 2010

Москва-2010

004606325

Работа выполнена на кафедре аналитической химии Химического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова.

Научный руководитель:

доктор химических наук, профессор Дмитриенко Станислава Григорьевна

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор химических наук Формановский Андрей Альфредович Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, г. Москва

доктор фармацевтических наук, доцент Эпштейн Наталья Борисовна Обнинский институт атомной энергетики Национального исследовательского ядерного университета "МИФИ"

Липецкий государственный технический университет

Защита состоится 23 июня 2010 года в 15 ч. 00 мин. в аудитории 446 на заседании диссертационного совета Д 501.001.88 по химическим наукам при Московском государственном университете имени М.В. Ломоносова по адресу: 119991, Москва, Ленинские горы, МГУ, Химический факультет.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Химического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова.

Автореферат разослан 21 мая 2010 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат химических наук

И.И. Торочешникова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. В настоящее время заметно возрос интерес к определению кверцетина и других флавоноидов в различных объектах, что связано с их высокой антиоксидантной, антимутагенной и антиканцерогенной активностью и рядом других полезных свойств, которыми обладают эти соединения. Кверцетин вводят в состав биологически активных добавок (БАД) и лекарственных препаратов; наряду с другими флавоноидами он присутствует во многих растениях и пищевых продуктах. В связи с этим возникает комплексная задача выделения кверцетина и других флавоноидов из растительного сырья, их концентрирования, в том числе и селективного, и определения различными методами. При этом требования, предъявляемые к методам анализа природных объектов, характеризующихся сложным составом и малым содержанием флавоноидов, и лекарственных средств, содержащих относительно большие количества индивидуальных флавоноидов, существенно различаются.

При определении соединений этого класса в вытяжках из растений, пищевых продуктах и напитках чаще всего используют высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) после предварительного концентрирования флавоноидов методом твердофазной экстракции. В последнем случае возникает проблема, связанная с ограниченным количеством сорбентов, позволяющих осуществлять групповое или селективное выделение флавоноидов. Для решения этой проблемы в рамках данной работы предложено использовать сверхсшитый полистирол (ССПС) и синтезированные нами новые сорбенты - полимеры с молекулярными отпечатками (ПМО) кверцетина.

Не менее важен поиск новых подходов к определению флавоноидов, в том числе и после сорбционного выделения. Весьма перспективно в этом плане сочетание их сорбционного концентрирования на пенополиуретанах (ППУ) с последующим определением этих соединений в матрице сорбента с применением спектроскопии диффузного отражения (СДО). Сведения об использовании ППУ для определения кверцетина и других флавоноидов методом СДО в литературе отсутствуют. Кроме того, в связи с участившимися случаями появления на отечественном рынке некачественных БАД и лекарственных средств актуальной остается разработка простых, экспрессных и недорогих спектрофотометрических методик определения этих соединений.

Цель работы состояла в изучении сорбции кверцетина и других флавоноидов на полимерах с отпечатками кверцетина, сверхсшитом полистироле и ППУ, разработке методик сорбционного концентрирования этих соединений для последующего определения флавоноидов в элюате методом ВЭЖХ или непосредственно в фазе сорбента с применением СДО; оценке возможности использования тетрафторбората 4-нитрофенилдиазония в качестве дериватизирующего агента для спектрофотометрического определения флавоноидов.

Достижение поставленной цели предусматривало решение следующих задач: • оптимизацию методик синтеза полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина методом термической радикальной полимеризации в рамках подхода нековалентного импринтинга, оценку удельной поверхности синтезированных ПМО и соответствующих полимеров сравнения (ПС); изучение особенностей сорбции кверцетина и ряда структурно

родственных ему соединений в зависимости от факторов, варьируемых как на стадии синтеза полимеров, так и на этапе сорбции;

• изучение особенностей сорбции флавоноидов на сверхсшитом полистироле и ППУ в зависимости от условий извлечения и природы сорбируемых соединений;

• оптимизацию условий разделения и определения флавоноидов методом обращенно-фазовой ВЭЖХ;

• изучение возможности сочетания группового концентрирования флавоноидов на сверхсшитом полистироле с последующим определением индивидуальных соединений в элюате методом ВЭЖХ;

• изучение возможности сочетания сорбционного концентрирования кверцетина и других флавоноидов на ППУ с их последующим определением методом СДО;

• изучение условий образования 4-нитрофенилазопроизводных флавоноидов и разработку методики их спектрофотометрического определения;

• разработку методик определения кверцетина и других флавоноидов в различных объектах.

Научная новизна. Синтезированы новые сорбенты для сорбционного выделения кверцетина из водных растворов - полимеры с отпечатками этого соединения. На основании анализа изотерм сорбции показано, что синтезированные сорбенты обладают способностью к молекулярному распознаванию кверцетина. Обнаружено, что на сорбционные свойства полимеров с отпечатками кверцетина влияют природа функционального мономера, количество сшивающего агента, соотношение функциональный мономер - темплат в реакционной смеси и природа растворителя. Установлено, что полимеры с молекулярными отпечатками сорбируют кверцетин в молекулярной форме. Предложено использовать сверхсшитый полистирол и ППУ для сорбционного концентрирования флавоноидов. Выявлены и обсуждены основные факторы, определяющие сорбционное поведение флавоноидов на этих сорбентах. Реализовано сочетание сорбционного концентрирования флавоноидов на ССПС с их определением в элюате методом ВЭЖХ. Предложено использовать спектроскопию диффузного отражения для определения кверцетина в фазе ППУ.

Практическая значимость работы. Продемонстрированы возможности использования ПМО для сорбционного концентрирования кверцетина из водных растворов, выбраны условия концентрирования. Разработана методика хроматографического разделения и определения флавоноидов, включающая их сорбционное концентрирование на микроколонке, заполненной ССПС, десорбцию этанолом и раздельное хроматографическое определение со спектрофотометрическим детектированием. С применением ППУ и спектроскопии диффузного отражения разработана методика определения кверцетина после его сорбционного концентрирования на этом сорбенте. Разработана спектрофотометрическая методика определения флавоноидов в виде их окрашенных 4-нитрофенилазопроизводных. Методики апробированы при анализе модельных водных растворов, лекарственных препаратов и вытяжек из растений.

Положения, выносимые на защиту:

1. Методики синтеза полимеров с отпечатками кверцетина. Совокупность данных о влиянии различных факторов на удельную поверхность ПМО и соответствующих ПС.

2. Результаты исследования сорбции кверцетина и ряда других структурно родственных ему флавоноидов на полимерах с отпечатками кверцетина и соответствующих полимерах сравнения. Данные о связи сорбционной способности ПМО с природой функционального мономера, количеством сшивающего агента, соотношением функциональный мономер - темплат в реакционной смеси, природой растворителя. Результаты исследования селективности ПМО.

3. Обоснование возможности использования ППУ и сверхсшитого полистирола для сорбционного концентрирования флавоноидов. Результаты исследования сорбции флавоноидов на этих сорбентах.

4. Методики сорбционного концентрирования и определения кверцетина и некоторых других флавоноидов методами ВЭЖХ и спектроскопии диффузного отражения. Методика спектрофотометрического определения флавоноидов по реакции с тетрафторборатом 4-нитрофенилдиазония.

5. Результаты определения кверцетина в лекарственных препаратах и вытяжках из растений.

Апробация работы. Основные результаты доложены на XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 2007), XV Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов-2008" (Москва, 2008), Всероссийской конференции "Химический анализ", (Москва-Клязьма, 2008), II Международном Форуме "Аналитика и Аналитики" (Воронеж, 2008), XVI Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов" (Москва, 2009), III Всероссийской конференции "Аналитика России" с международным участием (Краснодар, 2009), Съезде аналитиков России (Москва-Клязьма, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи и 7 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, двух глав обзора литературы, четырех глав экспериментальной части, выводов и списка литературы (274 наименования). Работа изложена на 158 страницах машинописного текста, содержит 30 рисунков и 31 таблицу.

Во введении обосновывается актуальность темы и цель работы, ее новизна и практическая значимость. Первая глава литературного обзора посвящена рассмотрению методов концентрирования и определения кверцетина и других флавоноидов. Во второй главе литературного обзора дана общая характеристика ПМО, обсуждены способы синтеза полимеров с отпечатками кверцетина и их свойства. В третьей главе описаны реагенты, аппаратура и методика эксперимента. В четвертой главе описаны методики синтеза полимеров с отпечатками кверцетина, приведены сведения об удельной поверхности синтезированных полимеров и их сорбционных свойствах. В пятой главе приведены результаты изучения сорбции флавоноидов на пенополиуретане и сверхсшитом полистироле. Возможности практического использования ППУ и ССПС для концентрирования кверцетина и других флавоноидов обсуждены в

шестой главе. Там же приведены методики определения этих соединений с применением спектрофотометрии, спектроскопии диффузного отражения и ВЭЖХ.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты исследования, аппаратура и техника эксперимента

Объектами исследования служили флавоноиды (ФЛ): производные флавона - кверцетин ("Sigmá", 98%), хризин, морин и рутин ("Acres'", 97 - 99%) и флавана - нарингенин и нарингин ("Acres", 97 - 99%). Исходные (0,001 -0,01 М) растворы соединений готовили растворением их точных навесок в ацетоне или этаноле. Рабочие растворы готовили разбавлением исходных непосредственно перед использованием.

В качестве сорбентов использовали полимеры с молекулярными отпечатками кверцетина, сверхсшитый полистирол MN-200 (удельная поверхность 1020 м2/г, степень сшивки 100%, размер частиц 75 - 125 мкм) и пенополиуретан на основе простых эфиров. Пенополиуретан использовали в виде таблеток (высота 5-10 мм, диаметр - 16 мм, масса ~0,02 г), которые выбивали металлическим пробойником из промышленного листа полимера.

В качестве функциональных мономеров (ФМ) при синтезе полимеров с молекулярными отпечатками и полимеров сравнения применяли акриламид (АА, ч.д.а.), 2-(диметиламино)-этилметакрилат (ДМАЭМА, "Acros", 99%) и метакриловую кислоту (МАК, ч.д.а.). Сшивающим агентом (СА) служил этиленгликольдиметакрилат (ЭГДМА, "Acras", 98%). Инициатором реакции полимеризации был 2,2'-азобисизобутиронитрил (АИБН, ч.д.а.). В качестве растворителей при синтезе ПМО и соответствующих ПС использовали ацетон (о.с.ч.), диметилсульфоксид (ДМСО, х.ч.), тетрагидрофуран (ТГФ, х.ч.) и ионную жидкость этилсульфат 1-этил-З-метилимидазолия (ЭСЭМИ, "Merck", 99%).

Спектры поглощения и оптические плотности растворов регистрировали на спектрофотометре СФ-103 ("Аквилон", Россия), значения рН контролировали на иономере "Эксперт 001" (Россия). Диффузное отражение измеряли на колориметре Спектротон (ОКБ А НПО "Химавтоматика", г. Чирчик). Хроматографическую часть работы выполняли на жидкостном хроматографе "ЦветЯуза" со спектрофотометрическим (>. = 255 нм) и амперометрическим (Е = 1,3 В) детекторами. Использовали хроматографическую колонку Luna 5u С18(2) (150x3,0 мм, 5 мкм). В качестве подвижной фазы использовали водно-ацетонитрильные смеси с добавлением фосфорной кислоты (рН 3,5). Объем пробы составлял 20 мкл, ввод пробы осуществляли с помощью петли дозатора. Скорость потока составляла 0,5 мл/мин.

Для изучения сорбции веществ в статическом режиме точные навески сорбентов (0,020 - 0,040 г) помещали в пробирки с притертыми пробками, затем добавляли 5 - 25 мл водного раствора исследуемого вещества и встряхивали на электромеханическом вибросмесителе в течение 20-60 мин. После этого сорбент отделяли от раствора фильтрованием через складчатый бумажный фильтр и определяли концентрацию исследуемого соединения в равновесной водной фазе спектрофотометрическим методом. Для изучения сорбции в динамическом режиме использовали концентрирующую микроколонку (30 х 4 мм), заполненную 55 мгССПС и перистальтический насос (ЛАБ-НП-1).

Синтез и исследование сорбционных свойств полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина

Синтез полимеров с отпечатками кверцетина. Полимеры с молекулярными отпечатками кверцетина (КВ) синтезировали методом нековалентного импринтинга. Синтез осуществляли по механизму радикальной блочной полимеризации, используя в качестве инициатора АИБН. Условия синтеза полимеров были оптимизированы путем варьирования природы ФМ, соотношения функциональный мономер - темплат (Т) и количества сшивающего агента в реакционной смеси, природы растворителя.

Для синтеза ПМО к раствору кверцетина (1; 0,5; 0,25; 0,125 ммоль) в соответствующем количестве выбранного растворителя (табл. 1) прибавляли функциональный мономер (АА, ДМАЭМА или МАК) и помещали раствор в холодильник на 1 час. Затем в раствор добавляли ЭГДМА и АИБН. Мешающее воздействие кислорода исключали, проводя синтез в инертной атмосфере аргона (реакционную смесь продували аргоном в течение 15 мин). Полимеризацию проводили в течение 24 часов в термостате "MLW U2c" при температуре 60°С. Полимер сравнения получали аналогично, но в отсутствие кверцетина. Полученные полимеры растирали в агатовой ступке, просеивали на лабораторных ситах и отбирали фракцию с размером частиц 250 - 400 мкм. Для удаления кверцетина из сорбентов использовали ацетон и смеси 0,1 М гидроксид натрия - метанол (9:1 и 1:9) или уксусная кислота - метанол (1:9); контроль над удалением кверцетина из ПМО осуществляли спектрофотометрически.

В табл. 1 перечислены компоненты, использованные при синтезе ПМО и соответствующих ПС, там же приведены значения удельных поверхностей синтезированных материалов.

Удельная поверхность. Удельную поверхность полимеров определяли из низкотемпературной адсорбции азота методом тепловой десорбции. Анализ экспериментальных данных, представленных в табл. 1, показал, что во всех случаях полимеры с отпечатками кверцетина имеют более развитую поверхность по сравнению с соответствующими ПС.

На примере полимеров, при синтезе которых использовали одинаковый состав реакционной смеси (соотношение ФМ:КВ = 1:0,5, растворитель ацетон), а варьировали только природу ФМ установлено, что удельная поверхность (указана в скобках, м2/г) уменьшается в рядах: МАК (591; ПМ02) > АА (395; ПМ03) > ДМАЭМА (364; ПМО,) для ПМО и, соответственно, для ПС: МАК (573) > АА (389) > ДМАЭМА (321).

Показано, что величина удельной поверхности зависит от соотношения АА:КВ в реакционной смеси: при изменении соотношения от 1:0,0625 (ПМ08) до 1:0,125 (ПМ07) она возрастает от 470 до 524 м2/г; а затем, при уменьшении соотношения до 1:0,25 (ПМ06), уменьшается до 400 м2/г; и практически не изменяется при изменении соотношения до 1:0,5 (395 м2/г, ПМ03). По-видимому, кверцетин в реакционной смеси наряду с растворителем выступает в качестве порообразователя.

Удельная поверхность ПМО зависит и от степени сшивки ПМО (количества сшивающего агента, введенного в реакционную смесь). Степень сшивки полимеров (%, вес.) определяли по содержанию сшивающего агента в реакционной смеси. Обнаружено, что наиболее развитая поверхность (указана

Таблица 1. Компоненты, использованные для синтеза полимеров с отпечатками кверцетина и ПС, и значения удельных поверхностей синтезированных материалов_____

Полимер Растворитель, Кверцетин, ФМ, ЭГДМА, АИБН, с

мл ммоль ммоль ммоль ммоль м/г

ПМО, Ацетон, 1 ДМАЭМА, 10 0,12 364

ПС, 17 - 2 10 0,12 321

пмо2 Ацетон, 1 МАК, 10 0,12 591

ПС2 17 - 2 10 0,12 573

ПМ03 Ацетон, 1 АА, 10 0,12 395

ПС3 17 - 2 10 0,12 389

пмо4 Ацетон, 1 АА, 20 0,12 330

ПС4 17 - 2 20 0,12 319

пмо5 Ацетон, 1 АА, 5 0,12 214

ПС5 17 - 2 5 0,12 201

пмо6 Ацетон, 0,5 АА, 10 0,12 400

пс6 17 - 2 10 0,12 389

пмо7 Ацетон, 0,25 АА, 10 0,12 524

ПС7 17 - 2 10 0,12 389

пмо8 Ацетон, 0,125 АА, 10 0,12 470

пс8 17 - 2 10 0,12 389

ПМО, ДМСО, 1 АА, 10 0,72 916

ПС, 8,5 - 2 10 0,72 527

ПМО,0 ТГФ, 1 АА, 10 0,72 934

ПС,о 10 - 2 10 0,72 591

ПМО,, ЭСЭМИ, 1 АА, 10 0,36 180

пс„ 17 - 2 10 0,36 172

в скобках, м2/г) формируется при степени сшивки, равной 92% (395; ПМ03). Уменьшение степени сшивки до 86% (ПМ05), как и увеличение до 96% (ПМ04), приводит к уменьшению Бул до 214 и 330 м2/г соответственно. Установлено, что удельная поверхность ПМО и соответствующих ПС зависит от природы растворителя, используемого на стадии синтеза этих полимеров (табл. 1), что, вероятно, связано с их различной порообразующей способностью.

Сорбционные свойства. Исследование сорбционных свойств новых материалов проводили с привлечением результатов изучения распределения веществ в системе твердое тело — жидкость. Поскольку важными ожидаемыми свойствами ПМО являются эффективность извлечения и способность распознавать молекулу-темплат, при оценке их сорбционных свойств сравнивали не только степени извлечения (коэффициенты распределения), но и значения импринтинг-факторов (//г). Импринтинг-факторы рассчитывали на линейных участках изотерм сорбции как отношение коэффициента распределения сорбируемого соединения при использовании полимера с отпечатками к коэффициенту распределения этого соединения в случае полимера сравнения. Интерпретацию полученных результатов проводили, сравнивая физико-химические параметры сорбции кверцетина на соответствующих парах полимеров (табл. 2).

Таблица 2. Степени извлечения (Я, %), коэффициенты распределения (£>) кверцетина на полимерах с молекулярными отпечатками этого соединения и полимерах сравнения и значения импринтинг-факторов (1Р). Скв = 2-10"5 М, растворитель - ацетон:вода = 1:4 (об.), У= 5 мл, т = 0,020 ± 0,001 г, г = 60 мин, п = 3, Р = 0,95

Сорбент я, % £>• т2

ПМО! 89 ± 1 20,2 ± 0,3 1,1

ПС, 88 ± 1 18,3 ±0,3

ПМ02 77 ±3 8,9 ± 0,7 1,2

ПС2 74 ±3 7,5± 0,6

ПМ03 80 ±5 10,0 ±0,7 6,0

ПС3 40 ±5 1,7 ±0,3

ПМ04 84 ±3 13,1 ±0,8 1,4

ПС4 79 ±2 9,4 ± 0,5

ПМ05 80 ±2 10,0 ±0,7 1,2

ПС5 77 ±2 8,4 ± 0,5

ПМ06 73 ±4 6,8 ± 0,4 4,1

пс6 40 ±5 1,7 ±0,3

пмо7 71 ± 1 6,10 ±0,09 3,7

пс7 40 ±5 1,7 ±0,3

пмо8 61 ± 1 3,90 ± 0,07 2,3

пс8 40 ± 5 1,7 ±0,3

пмо9 80 ±3 10,0 ± 0,4 1,3

ПС, 76 ±3 7,9 ± 0,4

пмо10 80 ± 5 10,0 ± 0,7 1,0

ПС,о 80 ± 5 10,0 ± 0,7

пмо„ 65 ±5 4,6 ±0,4 1Д

ПС„ 63 ±5 4,3 ± 0,4

Изучено влияние на селективность и эффективность ПМО различных факторов, варьируемых как на стадии их синтеза (природа ФМ, количество сшивающего агента, природа растворителя, соотношение ФМ:КВ в реакционной смеси), так и на стадии сорбции (природа растворителя, рН раствора, время контакта фаз). Рассмотрим влияние этих факторов более детально.

Характер зависимости степени извлечения кверцетина от рН свидетельствует о том, что это соединение извлекается на ПМО и ПС в молекулярной форме: максимальная сорбция наблюдается в интервале рН 2 - 6 (рЛ^'кв = 6,90), сорбционное равновесие устанавливается в течение 60 мин.

Влияние природы ФМ. При выборе ФМ на стадии синтеза ПМО учитывают природу донорных атомов, входящих в состав ФМ, и возможность образования устойчивого ассоциата мономер:темплат за счет нековалентных взаимодействий самых различных типов. Были синтезированы три пары полимеров с отпечатками кверцетина с использованием в качестве функциональных мономеров 2-(диметиламино)-этилметакрилата, метакриловой кислоты и акриламида и проведена оценка их сорбционных свойств. Как видно из сравнения изотерм сорбции, приведенных на рис. 1, природа ФМ влияет как на эффективность синтезированных сорбентов, так и на способность ПМО к

а)

а, м км о ль/г

б)

а, мкмоль/г

в)

а, мкмоль/г

О 5 10 15 [с),мкМ 0 20 40 [с], мкМ 0 20 40 60 [с],мкМ

Рис. 1. Изотермы сорбции кверцетина на полимерах с отпечатками этого соединения (1) и полимерах сравнения (Г), синтезированных с использованием в качестве функциональных мономеров 2-(диметиламино)-этилметакрилата (а), метакриловой кислоты (б) и акриламида (в). V = 5 мл, = 0,020 ± 0,001 г, I = 60 мин. Сорбенты: ПМО,, ПС, (а); ПМ02, ПС2 (б); ПМ03, ПС3 (в).

молекулярному распознаванию целевых молекул. Установлено, что способностью к повторному связыванию кверцетина обладают только ПМО, синтезированные с использованием АА в качестве ФМ. Значения импринтинг-факторов (указаны в скобках) увеличиваются при переходе от ДМАЭМА (1,1; ПМО,) к МАК (1,2; ПМ02) и, далее, к АА (6,0; ПМ03).

Влияние количества сшивающего агента. Для выяснения связи между степенью сшивки ПМО и их способностью к повторному связыванию кверцетина были синтезированы три пары полимеров на основе АА с использованием ЭГДМА в качестве сшивающего агента со степенями сшивки 86 (ПМ05), 92 (ПМ03) и 96 (Г(М04) %, вес. Экспериментальные результаты указывают на то, что способностью к молекулярному распознаванию кверцетина

обладает только ПМ03, при синтезе которого степень сшивки была равна 92%. При увеличении степени сшивки до 96% и уменьшении ее до 86% способность к молекулярному распознаванию кверцетина уменьшается (рис. 2, табл. 2).

Влияние соотношения функциональный мономер — темплат в реакционной смеси на сорбционные свойства ПМО изучено на примере четырех пар полимеров (ПМ03, ПМ06 - ПМ08 и ПС3, ПС6 - ПС8). Важно отметить, что в каждой из изученных систем соотношения компонентов и условия синтеза ПС не отличались. Содержание компонентов в реакционной смеси поддерживали постоянным, варьировали только количество кверцетина (табл. 1). Из сравнения изотерм сорбции кверцетина (рис. 3, а) видно, что

1Р

86%

Степень сшивки

92%

96%

Рис. 2. Значения импринтинг-факторов для пар ПМО/ПС с различной степенью сшивки.

а)

б)

а,мкмоль/г

♦ 1

-.-1-,- 0 | - 1 ■'

0 20 40 60 [с], мкМ 1.0,0625 1:0,125 1:0,25 1:0,5 АА:КВ

Г-4'

Рис. 3. Изотермы сорбции кверцетина на полимерах с отпечатками этого соединения и полимерах сравнения, синтезированных с различным соотношением функциональный мономер (АА) - темплат (а) и значения импринтинг-факторов (б). скв = 2-10"5 М, У= 5 мл, т = 0,020 + 0,001 г, Г = 60 мин.

Сорбенты: ПМ03, ПС3 (1, Г); ПМ06, ПС6 (2, 2'); ПМ07, ПС7 (3, 3'); ПМО, ПС8 (4, 4').

сорбционная способность ПМО зависит от соотношения ФМ:КВ: наклон изотерм сорбции (рис. За) возрастает при уменьшении соотношения ФМ:КВ от 1:0,0625 до 1:0,5. Для соответствующих ПС, синтезированных в разное время, но с одинаковым соотношением компонентов в реакционной смеси, изотермы сорбции практически совпадают. Изменение соотношения ФМ:КВ в реакционной смеси решающим образом влияет и на распознавательную способность ПМО: значения //•" только за счет изменения этого параметра возрастают от 2,3 до 6,0 при уменьшении соотношения до 1:0,5 (рис. 36). Дальнейшее увеличение количества кверцетина в реакционной смеси не представлялось возможным вследствие его малой растворимости в ацетоне.

Влияние растворителя на стадии синтеза ПМО. Известно, что селективность и эффективность ПМО зависят от природы растворителя, использованного при их синтезе. Наиболее подходящими растворителями для молекулярного импринтинга считаются растворители с низкой диэлектрической проницаемостью (толуол, дихлорметан, хлороформ, ацетонитрил, метанол). Однако в случае использования кверцетина в качестве темплата применение традиционных растворителей для синтеза ПМО оказывается невозможным вследствие его низкой растворимости в них. Поэтому в данной работе для выявления связи между природой растворителя компонентов реакционной смеси и способностью ПМО к повторному связыванию темплата были синтезированы четыре пары полимеров на основе акриламида с использованием ацетона, диметилсульфоксида (ДМСО), тетрагидрофурана (ТГФ) и ионной жидкости этилсульфата 1-этил-З-метилимидазолия (ЭСЭМИ) в качестве растворителей (табл. 1).

Из сравнения данных, приведенных в табл. 2, видно, что лучшей способностью к молекулярному распознаванию кверцетина обладает ПМ03, синтезированный в ацетоне (№ = 6,0). Полимеры, синтезированные в ДМСО и

ТГФ, извлекают кверцетин так же эффективно, как и полимер, синтезированный в ацетоне, но не способны к молекулярному распознаванию кверцетина (значения Ш равны 1,3 и 1,0 соответственно). Полимер, синтезированный в ионной жидкости, менее эффективно извлекает кверцетин, чем полимеры, синтезированные в других растворителях, и не способен к молекулярному распознаванию кверцетина (1Р = 1,1). Вероятно, в этих растворителях нековалентные взаимодействия мономер - темплат оказываются более слабыми, чем в ацетоне, что, в конечном итоге, приводит к получению полимеров, обладающих худшей способностью к молекулярному распознаванию.

Влияние растворителя на стадии сорбции. Изучена сорбция кверцетина из растворов, содержащих разное количество ацетона (табл. 3). Установлено, что эффективность ПМ03 и его способность к распознаванию кверцетина возрастают с уменьшением содержания ацетона в растворе. По-видимому, это можно объяснить тем, что в повторное связывание кверцетина с полимером существенный вклад вносят гидрофобные взаимодействия.

Таблица 3. Степени извлечения (Л), коэффициенты распределения (£>) кверцетина на полимере с молекулярными отпечатками этого соединения (ПМ03) и соответствующем полимере сравнения (ПС3) и значения импринтинг-факторов (//*) при сорбции кверцетина из смесей ацетон - вода. скя = 2-10"5 М, У = 5 мл, т = 0,020±0,001 г, < = 60 мин, п = 3, Р = 0,95__

с(ацетон), об. % Кщло> % % Ашо '1&2 £>пс -М ' Ш

100 4,0 ± 0,5 0,80 ± 0,05 0,10 ±0,02 0,020 ± 0,002 5,0

20 80 ± 5 40 ±5 10,0 ±0,7 1,7 ± 0,3 6,0

2,5 91 ±6 60 ±5 25 ±2 3,8 ± 0,4 6,7

1 97 ±6 73 ±5 81 ± 5 6,8 ± 0,5 12,0

Оценка селективности сорбции. Для оценки селективности был выбран ПМ03, обладающий лучшей распознавательной способностью по отношению к кверцетину. На этом сорбенте в статическом режиме изучена сорбция кверцетина и некоторых структурно родственных ему соединений: производных флавона (хризина, морина и рутина) и флавана (нарингенина и нарингина). Из данных, приведенных в табл. 4, видно, что ПМ03 лучше всего распознает кверцетин. Более гидрофобные флавоноиды хризин и нарингенин сорбируются лучше и на ПМ03, и на ПС3, но ПМ03 распознает эти соединения хуже. Напротив, более гидрофильное, чем кверцетин, соединение - морин, а также рутин и нарингин - вещества, содержащие в своей структуре объемные дисахаридные заместители, - сорбируются на ПМ03 менее эффективно и практически так же, как и на ПС3. Экспериментальные данные указывают на то, что ПМ03 содержит в своей структуре центры селективного связывания кверцетина, которые имеют преимущественно гидрофобный характер. Такое сорбционное поведение синтезированных полимеров можно объяснить вовлечением гидрофобных участков молекул ФМ и, возможно, молекул сшивающего агента в образование предполимеризационного комплекса. Ниже приведен ряд селективности сорбции структурно родственных флавоноидов на этом полимере (ПМ03), построенный в соответствии с уменьшением значений

Таблица 4. Параметры гидрофобности (1^), степени извлечения (/<!, %) и значения импринтинг-факторов (//*) флавоноидов на ПМ03 и ПС3. скм = 2-Ю"5 М, растворитель - ацетон:вода = 1:4 (об.), У= 5 мл, т3= 0,020 ± 0,001 г, I = 60 мин, п = 2,Р = 0,95__

Соединение ЬР Я, % Ш

ПМО, ПС3

Нарингенин 3,2 ± 0,4 80 ±5 67 ±4 2,0

Хризин 2,9 ± 0,5 84 ±4 62 ±5 3,3

Кверцетин 2,1 ± 0,7 80 ±5 40 ±5 6,0

Морин 1,6 ±0,7 38 ±5 33 ±4 1,2

Нарингин 2,7 ± 0,7 18 ± 1 15 ± 1 1,3

Рутин 2,0 ± 0,9 12 ± 1 6± 1 2,1

импринтинг-факторов (указаны в скобках): кверцетин (6,0) > хризин (3,3) > рутин (2,1) > нарингенин (2,0) > нарингин (1,3) > морин (1,2).

Сорбция флавоноидов на пенополиуретане и сверхсшитом полистироле

С целью расширения ассортимента сорбентов, пригодных для сорбционного концентрирования флавоноидов, изучена сорбция кверцетина, а также нарингенина, морина, хризина, рутина и нарингина на ППУ на основе простых эфиров и сверхсшитом полистироле в зависимости от времени контакта фаз, рН и состава раствора, природы и концентрации извлекаемых соединений.

Сравнение сорбционного поведения ФЛ указывает на то, что сорбция флавоноидов на этих сорбентах имеет много общего. Прежде всего, следует отметить, что флавоноиды сорбируются на ППУ и ССПС в молекулярной форме. Степень извлечения максимальна при рН < 6, то есть там, где диссоциация флавоноидов полностью подавляется. Изотермы сорбции флавоноидов приведены на рис. 4.

а) б)

Рис. 4. Изотермы сорбции флавоноидов на ППУ (а) и ССПС (б), а) кверцетин (1), морин (2), хризин (3), нарингенин (4), нарингин (5) рутин (6) (У = 25 мл, тппу = 0,020 ± 0,001 г, Г = 60 мин); б) хризин (1), нарингенин (2), кверцетин (3), морин (4), нарингин (5), рутин (6) (У = 10 мл, тСспс = 0,020 ± 0,001 г, I = 20 мин). сНс1 = 0,1 М, растворитель - этанол:вода = 1:3 (об.).

Обращает на себя внимание сходство изотерм сорбции, которые относятся к изотермам Лэнгмюра. Начальные участки изотерм линейны в диапазоне концентраций ФЛ 1-15 мкМ.

Сопоставление степеней извлечения и коэффициентов распределения (табл. 5) показывает, что на сорбцию флавоноидов на ППУ и ССПС существенное влияние оказывает их гидрофобность. Наряду с кверцетином на этих сорбентах лучше всего извлекаются более гидрофобные соединения - хризин и нарингенин. Рутин и нарингин, содержащие в своем составе гликозидные заместители, сорбируются хуже и на ППУ, и на ССПС.

Таблица 5. Степени извлечения (/?, %) и коэффициенты распределения (1^) флавоноидов на пенополиуретане и сверхсшитом полистироле. сфл = 5-10"5 М, сНс1 -0,1 М, растворитель - этанол:вода = 1:3 (об.), т3 = 0,020 ± 0,001 г, У= 25 мл, I = 60 мин, п == 3, Р = 0,95

Соединение 1&Р рКд, 1 ППУ ССПС

/?,% 1&0

Нарингенин 3,2 ± 0,4 7,58 75 ±4 3,57 98 ±4 4,79

Хризин 2,9 ± 0,5 7,06 86 ±2 3,88 97 ±2 4,60

Нарингин 2,7 ± 0,7 7,17 И ± 1 2,18 51 ±2 3,11

Кверцетин 2,1 ± 0,7 6,90 90 ± 3 4,05 95 ±5 4,38

Рутин 2,0 ± 0,9 6,84 3± 1 1,59 33 ±2 2,79

Морин 1,6 ±0,7 6,88 86 ±2 3,88 80 ±2 3,70

Есть и различия, проявляющиеся во вкладе взаимодействий с образованием водородных связей при сорбции флавоноидов на ППУ. Известно, что простые эфирные группы ППУ склонны к образованию водородных связей с сорбатами, содержащими в своем составе различные кислотные группы. Так, если на ССПС коэффициенты распределения флавоноидов без гликозидных заместителей коррелируют с их параметрами гидрофобности для всех изученных соединений, то на ППУ эта корреляция нарушается. Из данных, приведенных в табл. 5, видно, что значение коэффициента распределения для менее гидрофобного, но более "кислого" кверцетина выше, чем для более гидрофобных, но менее "кислых" нарингенина и хризина.

Еще одним фактором, влияющим на

380 430 480 К нм

Рис. 5. Спектры диффузного отражения флавоноидов на ППУ. I - кверцетин, 2 - морин, 3 - хризин, 4 - рутин, 5,6- нарингенин, нарингин. Сфл = 5-10"5 М, сна = 0,1 М, растворитель - этанол:вода = 1:3 (об.), У= 25 мл, тППу = 0,020 ± 0,001 г.

сорбцию, является наличие в водной фазе добавок органических растворителей. Так, сорбция КВ на ППУ уменьшается при увеличении объемной доли этанола или ацетона в анализируемом растворе, причем мешающее влияние ацетона проявляется при меньшем его содержании (>5%), чем в случае этанола (>25%).

Установлено, что некоторые флавоноиды обладают собственной окраской не только в водном растворе, но и в матрице ППУ. На рис. 5 приведены спектры диффузного отражения образцов ППУ после сорбции на них флавоноидов, из которых видно, что в фазе ППУ наиболее интенсивно окрашены сорбаты кверцетина, морина и хризина. В пределах линейных участков изотерм сорбции наблюдается линейная зависимость между значением функции Кубелки-Мунка и концентрацией флавоноидов в водном растворе, что позволяет определять эти соединения на ППУ с использованием СДО.

Сорбционное концентрирование кверцетина и других флавоноидов и их последующее определение различными методами

Результаты исследования сорбции кверцетина и некоторых других ФЛ на полимерах с отпечатками кверцетина, ППУ на основе простых эфиров и ССПС свидетельствуют о том, что эти сорбенты можно использовать в аналитической химии ФЛ. Для решения практических задач, связанных с определением флавоноидов методом ВЭЖХ, предпочтительным представляется использование ПМО или ССПС, так как на этих сорбентах можно проводить сорбцию в динамическом режиме. В рамках данной работы ССПС предложен для разработки комбинированной методики определения ФЛ, основанной на групповом концентрировании этих соединений с помощью ССПС в динамических условиях, десорбции и их последующем определении методом ВЭЖХ. Сорбция флавоноидов на ППУ отличается большей селективностью. Различия в сорбционном поведении ФЛ и спектральных характеристиках их сорбатов позволили предположить, что с использованием ППУ может быть разработана гибридная методика определения кверцетина, основанная на сорбционном концентрировании этого соединения на ППУ и его последующем определении непосредственно в матрице сорбента с применением СДО.

Сорбционное концентрирование ФЛ на ППУ и их определение с применением спектроскопии диффузного отражения. Изучена возможность применения СДО для разработки методики определения кверцетина и некоторых других ФЛ после их сорбционного концентрирования на ППУ. Методика включает сорбционное концентрирование ФЛ на ППУ в статических условиях и измерение диффузного отражения образцов на длине волны 380 нм. Характеристики разработанных методик приведены в табл. 6.

Таблица 6. Характеристики методик определения флавоноидов с применением спектроскопии диффузного отражения. V = 25 мл, сНа = 0,1 М, тппу = 0,020 ± 0,001 г, растворитель - этанол:вода =1:3 (об.)

Соединение Уравнение градуировочного графика Я2 ДОС, мкг/мл Ст/Л5 мкг/мл

Кверцетин ДР= 14,99 с 0,996 0,03 - 2 0,01

Морин ДИ = 2,614 с 0,999 0,2-10 0,07

Хризин ДИ = 0,754-с 0,998 0,6-25 0,2

Правильность и воспроизводимость определения кверцетина подтверждены методом "введено - найдено" на модельных образцах, содержащих другие ФЛ (табл. 7). Поскольку сорбаты рутина, нарингина и нарингенина в фазе ППУ практически не окрашены, возможно определение кверцетина в присутствии 50-кратных количеств этих соединений.

Методики применены для определения кверцетина в вытяжках из растений и пищевом концентрате полифенолов винограда "Эноант" (табл. 8).

Таблица 7. Результаты определения кверцетина в модельных растворах, содержащих рутин, нарингин и нарингенин (п = 3,Р = 0,95)

Состав модельной смеси Найдено кверцетина, мкг/мл Sr

Кверцетин - 0,5 мкг/мл Нарингин - 25 мкг/мл 0,55 ± 0,07 0,05

Кверцетин - 0,5 мкг/мл Нарингенин - 25 мкг/мл 0,57 ±0,05 0,04

Кверцетин - 0,5 мкг/мл Рутин - 25 мкг/мл 0,56 ± 0,06 0,04

Таблица 8. Результаты определения кверцетина в различных объектах (п = 3, Р = 0,95)

Образец Спектроскопия диффузного отражения ВЭЖХ

Найдено, мкг/мл (* - мг/г) Sr Найдено, мкг/мл (*-мг/г) sr

Пищевой концентрат полифенолов винограда "Эноант" 23 ±5 0,08 18± 2 0,04

Шелуха лука 9± 1* 0,05 8,7 ± 0,9* 0,05

Листья монарды дудчатой (бергамота) 0,73 ± 0,07* 0,04 0,6 ±0,1* 0,08

Этанольные настойки:

Боярышника (ООО "Гиппократ") 14 ±2 0,05 14± 1 0,03

Календулы (ЗАО "МосФарма") 17 ± 2 0,04 - -

Боярышника (ОАО "Флора Кавказа") 6,3 ± 0,9 0,06 - -

Эвкалипта (ОАО "Ивановская фармацевтическая фабрика") 330 ±20 0,03

Сорбционное концентрирование на ССПС и ПМО и определение методом ВЭЖХ. Разработана методика хроматографического определения флавоноидов, включающая их сорбционное концентрирование на ССПС, десорбцию этанолом и раздельное хроматографическое определение со спектрофотометрическим детектированием. Концентрирование ФЛ проводили в динамическом режиме на микроколонке (30 х 4 мм), заполненной ССПС. Перед использованием колонку промывали 0,1 М раствором HCl. Скорость

пропускания раствора через колонку поддерживали постоянной и равной 0,33 мл/мин. Установлено, что при пропускании через микроколонку 25 мл водных растворов флавоноидов с концентрацией 5-10"5 М в присутствии 0,1 М НС1 рутин сорбируется на 90 ± 4%, а остальные ФЛ - на 95 - 99% (п = 3, Р = 0,95).

Элюирование ФЛ проводили этанолом в противоточном режиме. Предварительно, перед элюированием, колонку промывали 1 мл дистиллированной воды. Установлено, что при пропускании через колонку 1 мл этанола ФЛ десорбируются на 90%, а увеличение объема элюента до 2 мл позволяет десорбировать эти соединения на 99 %.

На примере трехкомпонентной модельной смеси, содержащей кверцетин, нарингенин и хризин, проведено сопоставление чувствительности спектрофотометрического и амперометрического детекторов. В табл. 9 приведены уравнения градуировочных зависимостей и рассчитанные пределы обнаружения, из сравнения которых видно, что чувствительность изученных детекторов примерно одинакова для кверцетина и хризина, тогда как для нарингенина более чувствительным оказался амперометрический детектор.

Таблица 9. Уравнения градуировочных зависимостей (площадь пика - с, мкг/мл) при определении кверцетина, нарингенина и хризина с использованием спектрофотометрического и амперометрического детекторов. Подвижная

Соединение Детектор

УФ (А. = 255 им) Амперометрический (Е= 1,3 В)

Кверцетин у = 165,44 с (Я2 = 0,9985) ст„ = 0,2 мкг/мл у = 239,62-с (И2 = 0,9833) Стт = 0,1 МКГ/МЛ

Нарингенин у = 38,52 с (Я2 = 0,9999) с„„„ = 0,9 мкг/мл у = 178,67 с (II2 = 0,9905) Стт ~ 0,2 МКГ/МЛ

Хризин у = 236,19 с (Я2 = 0,9806) стш = 0,1 мкг/мл у = 212,38 с (Я2 = 0,8786) Стт ~ 0,2 МКГ/МЛ

Так как различие в чувствительности изученных детекторов не очень велико, для дальнейших исследований был выбран более удобный в эксплуатации спектрофотометрический детектор, поскольку при работе с амперометрическим детектором необходима ежедневная электрохимическая очистка электрода и его механическая очистка раз в три недели.

Установлено, что удерживание соединений возрастает по мере уменьшения содержания ацетонитрила в подвижной фазе. Так, например, рутин практически не удерживается на колонке при содержании ацетонитрила в подвижной фазе более 30%, а время выхода хризина (или нарингина) увеличивается от 6,4 до 108 мин при уменьшении содержания ацетонитрила от 50 до 25%. На основании анализа данных по влиянию состава подвижной фазы на удерживание ФЛ показано, что в исследуемой хроматографической системе за приемлемое время анализа (менее 40 мин) возможно разделение следующих смесей ФЛ: подвижная фаза ацетонитрил: 0,1%-ный водный раствор Н3Р04, 25:75 - рутин, морин, кверцетин, нарингенин (время анализа 28 мин); подвижная фаза ацетонитрил : 0,1%-ный водный раствор Н3Р04, 50:50 - кверцетин, нарингенин, хризин (или нарингин) (время анализа 8 мин); морин, нарингенин, хризин (или нарингин) (время анализа 8 мин).

На примере модельной смеси, содержащей рутин, морин, кверцетин и нарингенин, разработаны два варианта определения ФЛ методом ВЭЖХ: без (вариант I) и с предварительным сорбционным концентрированием на микроколонке, заполненной ССПС (вариант II). На рис. 6 приведена хроматограмма модельной смеси после концентрирования из 25 мл, характеристики методик приведены в табл. 9. Правильность и воспроизводимость определения ФЛ методом ВЭЖХ подтверждены методом "введено - найдено" на модельных растворах, приготовленных на основе дистиллированной воды и модельной смеси, имитирующей по своему составу мочу (искусственная моча), содержащей 22,0 г мочевины, 1,50 г креатинина, 5,20 г хлорида натрия, 1,40 г дигидрофосфата натрия, 1,10 г гидрофосфата натрия, 1,0 г азида натрия и 0,01 г тетразина в 1 л дистиллированной воды (табл. 10).

Показана принципиальная возможность определения кверцетина методом ВЭЖХ после его сорбционного выделения на ПМ03. Правильность определения кверцетина подтверждена методом "введено - найдено" при анализе модельного раствора, приготовленного на основе искусственной мочи. При определении 1 мкг/мл кверцетина найдено 0,9 ± 0,1 мкг/мл (sr = 0,06, п = 3, Р = 0,95).

Спектрофотометрическое определение флавоноидов. Согласно "Руководству по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище" (Р 4.1.1672-03 от 30.06.2003) производные флавона (кверцетин, рутин, морин и хризин) определяют спектрофотометрическим методом в виде комплексов с алюминием (к = 415 нм), а производные флавана (нарингенин и нарингин) - в виде продуктов их взаимодействия с 2,4-динитрофенилгидразином (X = 495 нм). При этом в БАД обычно регламентируется суммарное содержание производных либо флавона, либо флавана. Недостатком этого подхода является невозможность одновременного определения суммарного содержания производных флавона и флавана. Поэтому представляется важным разработка новых методик определения этих соединений при совместном присутствии, которые бы позволили определять их суммарное содержание при проведении реакции с одним дериватизирующим реагентом.

В настоящей работе в качестве реагента для спектрофотометрического определения флавоноидов предложен тетрафторборат 4-нитрофенилдиазония (4-НФД). Установлено, что флавоноиды вступают во взаимодействие с 4-НФД в щелочной среде с образованием окрашенных в желто-оранжевый цвет продуктов (425 - 435 нм). При оптимизации условий проведения спектрофотометрической реакции варьировали концентрации карбоната натрия и 4-НФД. Характеристики разработанных методик приведены в табл.11. Правильность методики подтверждена методом "введено - найдено" (табл. 12). На основании анализа условий образования 4-нитрофенилазопроизводных флавоноидов и их спектральных характеристик предложен способ оценки суммарного содержания этих соединений. Он основан на переведении ФЛ в 4-нитрофенилазопроизводные и измерении оптической плотности при 430 нм.

Для оценки возможности практического применения методики проведено определение кверцетина в лекарственных препаратах "Липофлавон", "Корвитин" и "Кверцетин" (табл. 13). Полученные результаты согласуются с данными, заявленными производителями.

Рис. 6. Хроматограмма модельной смеси флавоноидов после концентрирования на микроколонке, заполненной ССПС. 1 - рутин; 2 - морин; 3 - кверцетин, 4 - нарингенин. Концентрация каждого компонента в исходном растворе составляла 0,8 мкг/мл. Подвижная фаза - ацетонитрил: 0,1%-ный водный раствор Н3Р04 (25:75, об., рН 3,5).

Таблица 9. Характеристики методик определения флавоноидов методом ВЭЖХ без (I) и с (II) предварительным концентрированием на микроколонке, заполненной ССПС, из 25 мл водного раствора

Соединение Диапазон определяемых содержаний, мкг/мл С ГП1П мкг/мл

I II I II

Рутин 1-50 0,05-2 0,3 0,02

Морин 1-50 0,05-2 0,3 0,02

Кверцетин 0,5 - 50 0,04-2 0,2 0,01

Нарингенин 3-50 0,2-2 1 0,04

Таблица 10. Результаты определения рутина, морина, кверцетина и нарингенина методом ВЭЖХ в модельных растворах, приготовленных на основе дистиллированной воды (I, II) и искусственной мочи (III), без (I) и после (II, III) концентрирования на ССПС из 25 мл (п = 3, Р = 0,95)

Соединение Найдено, мкг/мл

I* II** III*** I* II** III***

Рутин 10,5 ±0,7 0,8 ±0,1 0,38 ± 0,04 0,03 0,06 0,04

Морин 10,2 ±0,5 0,82 ± 0,06 0,39 ± 0,05 0,02 0,03 0,05

Кверцетин 10,0 ±0,6 0,81 ±0,07 0,37 ± 0,03 0,03 0,04 0,03

Нарингенин 10,0 ±0,5 0,79 ± 0,03 0,36 ± 0,05 0,02 0,02 0,06

* введено по 10 мкг/мл каждого соединения; ** введено по 0,8 мкг/мл каждого соединения; *** введено по 0,4 мкг/мл каждого соединения.

Таблица 11. Характеристики методик определения флавоноидов с тетрафторборатом 4-нитрофенилдиазония. с4.НФд = 1,5'10"3 М, с(ТЯа2С03) = 0,2 М

Соединение Уравнение градуировочного графика (мМ) дос,м (мкг/мл) с М ипип, 11 (мкг/мл)

Кверцетин у = 38,8 с 5-10"' - 2-Ю"5 (0,2 - 7) 1,8-Ю-7 (0,06)

Нарингенин у = 34,7 с 6-10"'-2-10"5 (0,2-5) 2,0-10"' (0,05)

Хризин у= 17,8 с но"-2-ю5 (0,3-5) 3,9-10"' (0,1)

Рутин у = 38,1 с 5-10"'-2-10"5 (0,3-13) 1,8-10"7 (0,1)

Морин у = 45,1 с 5-10"'-2-ИГ5 (0,2-6) 1,5-10"' (0,05)

Нарингин у = 24,6 с 810"'- 2-10"5 (0,5-12) 2,8-10"' (0,2)

Таблица 12. Проверка правильности методики определения флавоноидов методом "введено - найдено" (п = 3, Р = 0,95)

Соединение мкг/мл

введено найдено

Кверцетин 2,7 2,9 ± 0,4 0,05

Нарингенин 1,6 1,6 ±0,1 0,03

Хризин 1,5 1,6 ±0,2 0,04

Рутин 4,0 3,9 ±0,3 0,03

Морин 1,8 1,9 ± 0,2 0,04

Нарингин 3,5 3,7 ±0,5 0,05

Таблица 13. Результаты определения кверцетина в лекарственных препаратах "Липофлавон", "Корвитин" и "Кверцетин" (п = 3, Р = 0,95)

Лекарственный препарат Состав препарата Найдено кверцетина

Лиофилизованный порошок для приготовления глазных капель "Липофлавон"; ЗАО "Биолек", г. Харьков 0,75 мг кверцетина, 0,75 мг лактозы, 7,5 мг лецитина 0,7 + 0,1 мг 0,05

Лиофилизованный порошок для приготовления раствора для инъекций "Корвитин"; ЗАО НПЦ "Борщаговский химико-фармацевтический завод" 0,05 г кверцетина, 0,45 г повидона (мол. масса 7100- 11000) 0,052 ± 0,003 г 0,03

Гранулы для приготовления геля или суспензии "Кверцетин"; ЗАО НПЦ "Борщаговский химико-фармацевтический завод" Смесь кверцетина с яблочным пектином, глюкозой и сахарозой, 100 г гранул содержат 4 г кверцетина 3,9 ± 0,4 г на 100 г гранул 0,04

выводы

1. Методом термической радикальной полимеризации синтезированы новые материалы - полимеры с молекулярными отпечатками (ПМО) кверцетина. Оптимизированы условия синтеза полимеров путем варьирования природы функционального мономера, соотношения функциональный мономер (ФМ) - темплат (Т), количества сшивающего агента, природы растворителя в реакционной смеси. Проведена оценка удельной поверхности синтезированных полимеров.

2. Проведена сравнительная оценка сорбционных свойств синтезированных материалов и выявлены основные факторы, оказывающие влияние на сорбцию кверцетина: природа ФМ, соотношение ФМ:Т в реакционной смеси, природа растворителя. На примере структурно родственных флавоноидов проведена оценка селективности полимеров с отпечатками кверцетина. Высказано предположение о гидрофобном характере центров селективного связывания кверцетина в ПМО.

3. Исследована сорбция кверцетина и других флавоноидов (нарингенина, морина, хризина, рутина и нарингина) на пенополиуретане и сверхсшитом полистироле. Даны объяснения особенностей сорбции флавоноидов в зависимости от природы сорбента, кислотности раствора, природы и концентрации соединений. Показано, что сверхсшитый полистирол можно использовать для группового концентрирования этих соединений.

4. С применением спектроскопии диффузного отражения разработана методика определения кверцетина с пределом обнаружения 0,01 мкг/мл после концентрирования этого соединения на пенополиуретане. Методика позволяет определять кверцетин в присутствии 50-кратных количеств рутина, нарингина и нарингенина. Проведено определение кверцетина в этанольных вытяжках календулы, боярышника и эвкалипта, пищевом концентрате полифенолов винограда "Эноант" и вытяжке из шелухи лука.

5. Оптимизированы условия разделения флавоноидов и их определения в элюате методом ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектором после предварительного сорбционного выделения этих соединений на микроколонке, заполненной сверхсшитым полистиролом.

6. В качестве реагента для спектрофотометрического определения флавоноидов предложен тетрафторборат 4-нитрофенилдиазония. Показано, что в щелочной среде этот реагент вступает в реакцию азосочетания с кверцетином, нарингенином, хризином, морином, рутином и нарингином с образованием окрашенных в желто-оранжевый цвет продуктов. Оптимизированы условия проведения спектрофото-метрической реакции. Показана возможность определения суммарного содержания флавоноидов. Проведено определение кверцетина в лекарственных препаратах "Липофлавон", "Корвитин" и "Кверцетин".

Автор выражает искреннюю благодарность акад. Ю.А. Золотову за постоянное внимание к работе; к.х.н. В.В. Апяри и A.B. Степановой за сотрудничество в работе и помощь в обсуждении результатов.

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах:

1. Кудринская В.А., Дмитриенко С.Г., Золотов Ю.А. Синтез и исследование сорбционных свойств полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина. // Вестн. Моск. ун-та. Серия 2. Химия. 2009. Т. 50. № 3. С. 156-163.

2. Кудринская В.А., Дмитриенко С.Г. Влияние растворителя на сорбционные свойства полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина. // Сорбц. хром. проц. 2009. Т. 9. Вып. 6. С. 824 - 829.

3. Кудринская В.А., Дмитриенко С.Г., Золотов Ю.А. Спектрофотометрическое определение флавоноидов по реакции азосочетания с тетрафтороборатом 4-нитрофениддиазония. // Вестн. Моск. ун-та. Серия 2. Химия. 2010. Т. 51. № 4. С. 296-301.

4. Дмитриенко С.Г., Попов С.А., Кудринская В.А., Золотов Ю.А. Синтез и исследование сорбционных свойств полимеров с молекулярными отпечатками органических соединений. / Материалы XVIII Менделеевского съезда по общей и прикладной химии, Москва, 23 - 28 сентября 2007. Т. 4. С. 130.

5. Кудринская В.А. Влияние состава предполимеризационной смеси на сорбционные свойства полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина. / Материалы XV Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов-2008", секция "Химия", Москва, 8-11 апреля 2008. С. 43.

6. Кудринская В.А., Дмитриенко С.Г., Золотов Ю.А. Выделение и концентрирование кверцетина полимерами с отпечатками этого соединения. / Тез. докладов Всероссийской конференции "Химический анализ", Москва-Клязьма, 21 - 25 апреля 2008. С. 36.

7. Кудринская В.А., Дмитриенко С.Г., Золотов Ю.А. Синтез и исследование сорбционных свойств полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина. / Рефераты докладов II Международного Форума "Аналитика и Аналитики", Воронеж, 22 - 26 сентября 2008. Т. 1. С. 334.

8. Кудринская В.А. Спектрофотометрическое определение кверцетина по реакции азосочетания с тетрафтороборатом 4-нитрофенилдиазония. / Материалы докладов XVI Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов", Москва, 13 - 18 апреля 2009. Электронный ресурс. М.: МАКС Пресс, 2009. ISBN 978-5-317-02774-2. Адрес ресурса в сети Интернет: http://www.lomonosov-msu.ru/2009/.

9. Кудринская В.А., Дмитриенко С.Г., Золотов Ю.А. Сорбционные свойства полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина. / Материалы III Всероссийской конференции "Аналитика России" с международным участием, Краснодар, 27 сентября - 3 октября 2009. С. 181.

10. Кудринская В.А., Степанова A.B., Апяри В.В., Дмитриенко С.Г. Сорбция флавоноидов на пенополиуретане и их определение с применением спектроскопии диффузного отражения. / Тез. докладов Съезда аналитиков России, Москва-Клязьма, 26 - 30 апреля 2010. С. 165.

Подписано в печать 19.05.10 Формат 60x88 1/16. Объем 1 п.л. Тираж 120 экз. Заказ № 957 Отпечатано в ООО «Соцветие красок» 119991 г.Москва, Ленинские горы, д. 1 Главное здание МГУ, к. А-102

Содержание диссертации автор исследовательской работы: кандидата химических наук, Кудринская, Вера Александровна

СОКРАЩЕНИЯ И ОБОЗНАЧЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Глава 1. Методы выделения, концентрирования и определения кверцетина и других флавоноидов

1.1. Общие сведения

1.2. Методы выделения и концентрирования

1.2.1. Экстракционные методы

1.2.2. Сорбционные методы

1.3. Методы определения

1.3.1. Хроматографические методы

1.3.2. Капиллярный электрофорез

1.3.3. Методы спектрофотомстрии и люминесценции

1.3.4. Электрохимические методы

Глава 2. Полимеры с молекулярными отпечатками кверцетина

2.1. Общие представления о полимерах с молекулярными отпечатками

2.2. Полимеры с молекулярными отпечатками кверцетииа

2.3. Формулирование задач исследования 48 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 3. Объекты исследования, аппаратура и методика эксперимента

3.1. Исходные вещества и реагенты

3.2. Аппаратура и методика эксперимента

3.3. Спектрофотометричсское определение флавоноидов по их собственному поглощению

Глава 4. Синтез и исследование сорбционных свойств полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина

4.1. Синтез полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина

4.2. Удельная поверхность синтезированных полимеров

4.3. Исследование сорбционных свойств полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина

4.3.1. Факторы, влияющие на стадии синтеза

4.3.2. Факторы, влияющие на стадии сорбции

4.3.3. Оценка селективности полимеров с отпечатками кверцетина 85 4.4. Резюме к главе

Глава 5. Сорбция флавоноидов на пенополиуретане и сверхсшитом полистироле

5.1. Сорбция флавоноидов на пенополиуретане

5.1.1. Общие сведения о сорбции органических соединений на ППУ 90,

5.1.2. Факторы, влияющие на сорбцию флавоноидов на ППУ

5.1.3. Спектральные характеристики сорбатов

5.2. Сорбция флавоноидов на сверхсшитом полистироле

5.2.1. Общие сведения о сорбции органических соединений на

5.2.2. Сорбция в статических условиях

5.2.3. Сорбция в динамических условиях

5.3. Резюме к главе

Глава 6. Концентрирование и определение кверцетина и других флавоноидов

6.1. Определение кверцетина с применением спектроскопии диффузного отражения после концентрирования на ППУ

6.2. Определение флавоноидов методом ВЭЖХ после концентрирования на сверхсшитом полистироле

6.3. Определение флавоноидов по реакции азосочетания с тетрафторборатом 4-нитрофенилдиазония

Введение диссертация по химии, на тему "Сорбционное концентрирование кверцетина и других флавоноидов и их определение различными методами"

Актуальность работы. В настоящее время заметно возрос интерес к определению кверцетина и других флавоноидов в различных объектах, что связано с их высокой антиоксидантной, антимутагенной и антиканцерогенной активностью и рядом других полезных свойств, которыми обладают эти соединения. Кверцетин вводят в состав биологически активных добавок (БАД) и лекарственных препаратов, наряду с другими флавоноидами он присутствует во многих растениях и пищевых продуктах. В связи с этим возникает комплексная задача выделения кверцетина и других флавоноидов из растительного сырья, их концентрирования, в том числе и селективного, и определения различными методами. При этом требования, предъявляемые к методам анализа природных объектов, характеризующихся сложным составом и малым содержанием флавоноидов, и лекарственных средств, содержащих относительно большие количества индивидуальных флавоноидов, существенно различаются.

При определении соединений этого класса в вытяжках из растений, в пищевых продуктах и напитках чаще всего используют высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) после предварительного концентрирования флавоноидов методом твердофазной экстракции. В последнем случае возникает проблема, связанная с ограниченным количеством сорбентов, позволяющих осуществлять групповое или селективное выделение флавоноидов. Для решения этой проблемы в рамках данной работы предложено использовать сверхсшитый полистирол (ССПС) и синтезированные нами новые сорбенты - полимеры с молекулярными отпечатками (ПМО) кверцетина.

Цель работы состояла в изучении сорбции кверцетина и других флавоноидов на полимерах с отпечатками кверцетина, сверхсшитом полистироле и ППУ, разработке методик сорбционного концентрирования этих соединений для последующего определения флавоноидов в элюате методом ВЭЖХ или непосредственно в фазе сорбента с применением СДО; оценке возможности использования тетрафтор бората 4-нитрофенилдиазония в качестве дериватизирующего агента для спектрофотометрического определения флавоноидов.

Достижение поставленной цели предусматривало решение следующих задач:

• оптимизацию методик синтеза полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина методом термической радикальной полимеризации в рамках подхода нековалентного импринтинга, оценку удельной поверхности синтезированных ПМО и соответствующих полимеров сравнения (ПС); изучение особенностей сорбции кверцетина и ряда структурно родственных ему соединений в зависимости от факторов, варьируемых как на стадии синтеза полимеров, так и на этапе сорбции;

• оптимизацию условий разделения и определения флавоноидов методом обращенно-фазовой ВЭЖХ;

• изучение условий образования 4-нитрофенилазопроизводпых флавоноидов и разработку методики их спектрофотометрического определения;

• разработку методик определения кверцетина и других флавоноидов в различных объектах.

Научная новизна. Синтезированы новые сорбенты для сорбционного выделения кверцетина из водных растворов — полимеры с отпечатками этого соединения. На основании анализа изотерм сорбции показано, что синтезированные сорбенты обладают способностью к молекулярному распознаванию кверцетина. Обнаружено, что на сорбционные свойства полимеров с отпечатками кверцетина влияют природа функционального мономера, количество сшивающего агента, соотношение функциональный мономер - темплат в реакционной смеси и природа растворителя. Установлено, что полимеры с молекулярными отпечатками сорбируют кверцетин в молекулярной форме. Предложено использовать сверхсшитый полистирол и ППУ для сорбционного концентрирования флавоноидов. Выявлены и обсуждены основные факторы, определяющие сорбционное поведение флавоноидов на этих сорбентах. Реализовано сочетание сорбционного концентрирования флавоноидов на ССПС с их определением в элюате методом ВЭЖХ. Предложено использовать спектроскопию диффузного отражения для определения кверцетина в фазе ППУ.

Положения, выносимые на защиту:

2. Результаты исследования и изученные особенности сорбции кверцетина и ряда других структурно родственных ему флавоноидов на полимерах с отпечатками кверцетина и соответствующих полимерах сравнения. Данные о связи сорбциоипой способности ПМО с природой функционального мономера, количеством сшивающего агента, соотношением функциональный мономер - темплат в реакционной смеси, природой растворителя. Результаты исследования селективности ПМО.

3. Обоснование возможности использования ППУ и сверхсшитого полистирола для сорбционного концентрирования флавоноидов. Результаты исследования и изученные особенности сорбции флавоноидов на этих сорбентах.

4. Методики сорбционного концентрирования и определения кверцетина и некоторых других флавоноидов методами ВЭЖХ и спектроскопии диффузного отражения. Методика спектрофотометрического определения флавоноидов по реакции с тетрафтор бор атом 4-нитрофенилдиазония.

5. Результаты определения кверцетина в лекарственных препаратах и вытяжках из растений.

Апробация работы. Основные результаты доложены на XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 2007), XV . Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов-2008" (Москва, 2008), Всероссийской конференции "Химический анализ", (Москва-Клязьма, 2008), II Международном Форуме "Аналитика и Аналитики" (Воронеж, 2008), XVI Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов" (Москва, 2009), III Всероссийской конференции "Аналитика России" с международным участием (Краснодар, 2009), Съезде аналитиков России (Москва-Клязьма, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи и 7 тезисов докладов.

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах:

1. Кудринская В. А., Дмитриенко С. Г., Золотов Ю. А. Синтез и исследование сорбционных свойств полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина. // Вестн. Моск. ун-та. Серия 2. Химия. 2009. Т. 50. № 3. С. 156 - 163.

2. Кудринская В. А., Дмитриенко С. Г. Влияние растворителя на сорбционные свойства полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина. // Сорбц. хром. проц. 2009. Т. 9. № 6. С. 824 - 829.

3. Кудринская В. А., Дмитриенко С. Г., Золотов Ю. А. Спектрофотометрическое определение флавоноидов по реакции азосочетания с тетрафтороборатом 4-нитрофенилдиазония. // Вестн. Моск. ун-та. Серия 2. Химия. 2010. Т. 51. №4. С. 296-301.

4. Дмитриенко С. Г., Попов С. А., Кудринская В. А., Золотов Ю. А. Сиитез и исследование сорбционных свойств полимеров с молекулярными отпечатками органических соединений. / Материалы XVIII Менделеевского съезда по общей и прикладной химии, Москва, 23-28 сентября 2007. Т. 4. С. 130.

5. Кудринская В. А. Влияние состава предполимеризационной смеси на сорбционные свойства полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина. / Материалы XV Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов-2008", секция "Химия", Москва, 8-11 апреля 2008. С. 43.

6. Кудринская В. А., Дмитриенко С. Г., Золотов Ю. А. Выделение и концентрирование кверцетина полимерами с отпечатками этого соединения. / Тез. докладов Всероссийской конференции "Химический анализ", Москва-Клязьма, 21-25 апреля 2008. С. 36.

7. Кудринская В. А., Дмитриенко С. Г., Золотов Ю. А. Синтез и исследование сорбционных свойств полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина. / Рефераты докладов II Международного Форума "Аналитика и Аналитики", Воронеж, 22-26 сентября 2008. Т. 1. С. 334.

8. Кудринская В. А. Спектрофотометрическое определение кверцетина по реакции азосочетания с тетрафтороборатом 4-нитрофепилдиазония. / Материалы докладов XVI Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов", Москва, 13-18 апреля 2009. Электронный ресурс. М.: МАКС Пресс, 2009. ISBN 978-5-317-02774-2. Адрес ресурса в сети Интернет: http://www.lomonosov-msu.ru/2009/.

9. Кудринская В. А., Дмитриенко С. Г., Золотов Ю. А. Сорбционные свойства полимеров с молекулярными отпечатками кверцетина. / Материалы III Всероссийской конференции "Аналитика России" с международным участием, Краснодар, 27 сентября - 3 октября 2009. С. 181.

10. Кудринская В. А., Степанова А. В., Апяри В. В., Дмитриенко С. Г. Сорбция флавоноидов на пенополиуретане и их определение с применением спектроскопии диффузного отражения. / Тез. докладов Съезда аналитиков России, Москва-Клязьма, 26 - 30 апреля 2010. С. 165.

ЛИТЕРАТУРНЫМ ОБЗОР

Заключение диссертации по теме "Аналитическая химия"

выводы

1. Методом термической радикальной полимеризации синтезированы новые материалы - полимеры с молекулярными отпечатками (ПМО) кверцетина. Оптимизированы условия синтеза полимеров путем варьирования природы функционального мономера, соотношения функциональный мономер (ФМ) — темплат (Т), количества сшивающего агента, природы растворителя в реакционной смеси. Проведена оценка удельной поверхности синтезированных полимеров.

6. В качестве реагента для спектрофотометрического определения флавоноидов предложен тетрафторборат 4-нитрофенилдиазония. Показано, что в щелочной среде этот реагент вступает в реакцию азосочетания с кверцетином, нарингенином, хризином, морином, рутином и нарингином с образованием окрашенных в желто-оранжевый цвет продуктов. Оптимизированы условия проведения спектрофотометрической реакции. Показана возможность определения суммарного содержания флавоноидов. Проведено определение кверцетина в лекарственных препаратах "Липофлавон", "Корвитин" и "Кверцетин".

Список источников диссертации и автореферата по химии, кандидата химических наук, Кудринская, Вера Александровна, Москва

1. Andersen О. М., Markham К. R. Flavonoids: chcmistry, biochemistry and applications. Boca Raton: Taylor & Francis Group. LLC. 2006. 1212 p.

2. Корулькин Д. Ю., Абилов Ж. А., Музычкина Р. А., Толстиков Г. А. Природные флавоноиды. Новосибирск: Гео. 2007. 232 с.

3. Robards К., Antolovich М. Analytical chemistry of fruit bioflavonoids. A review. // Analyst. 1997. V. 122. P. 11R 34R.

4. Cook N. C., Samman S. Flavonoids chemistry, metabolism, cardioprotective effects and dietary sources. // J. Nutr. Biochem. 1996. V. 7. № 2. P. 66 - 76.

5. Tsao R., Deng Z. Separation procedures for naturally occurring antioxidant phytochemicals. // J. Chromatogr. B. 2004. V. 812. № 1 2. P. 85 - 99.

6. Pulido R., Bravo L., Saura-Calixto F. Antioxidant activity of dietary polyphenols as determined by a modified ferric reducing/antioxidant power assay. // J. Agric. Food. Chem. 2000. V. 48. № 8. P. 3396 4302.

7. Blasa M., Candiracci M., Accorsi A., Piacentini M. P., Piatti E. Honey flavonoids as protection agents against oxidative damage to human red blood cells. // Food Chem. 2007. V. 104. № 4. P. 1635 1640.

8. Soobrattee M. A., Neergheen V. S., Luximon-Ramma A., Aruoma О. I., Bahorun T. Phenolics as potential antioxidant therapeutic agents: Mechanism and actions. // Mutation Res. 2005. V. 579. № 1 2. P. 200 - 213.

9. Ferreira R. de Q., Avaca L. A. Electrochemical determination of the antioxidant capacity: the Ceric Rcducing/Antioxidant Capacity (CRAC) assay. //Electroanalysis. 2008. V. 20. № 12. P. 1323 1329.

10. Robak J., Gryglewski R. J. Favonoids are scavengers of suoeroxide anions. //Biochem. Pharm. 1988. V. 37. № 5. P. 837 841.

11. Roginsky V. Chain-breaking antioxidant activity of natural polyphenols as determined during the chain oxidation of methyl linoleate in Triton X-100 micelles. //Arch. Biochem. Biophys. 2003. V. 414. P. 261 -270.

12. Tan W., Lin L., Li M., Zhang Y., Tong Y., Xiao D., Ding J. Quercetin, a dietary-derived flavonoid, possesses antiangiogenic potential. // Eur. J. Pharm. 2003. V. 459. № 2 3. P. 255 - 262.

13. Беликов В. Г. Фармацевтическая химия: в 2 ч. Ч. 2. Специальная фармацевтическая химия. Пятигорск. 2003. С. 457 460.

14. Wei В. L., Lu С. М., Tsao L. Т., Wang J. P., Lin С. N. In vitro antiinflammatory effects of quercetin 3-O-methyl ether and other constituents from Rhamnus species. // Planta Med. A. 2001. V. 67. № 8. P. 745 747.

15. Wach A., Pyrzyñska K., Biesaga M. Quercetin content in some food and herbal samples. // Food Chem. 2007. V. 100. № 2. P. 699 704.

16. Dowd L. E. Spectrophotometric determination of quercetin. // Anal. Chem. 1959. V. 31. № 7. P. 1184- 1187.

17. Swatsitang P., Tucker G., Robards K., Jardine D. Isolation and identification of phenolic compounds in Citrus sinensis. II Anal. Chim. Acta. 2000. V. 417. № 2. P. 231 -240.

18. Tarola A. M., Giannetti V. Determination by LC of polyphenols in italian red wine. // Chromatographia. 2007. V. 65. № 5 6. P. 367 - 371.

19. Zieliriska D., Nagels L., Piskula M. K. Determination of quercetin and its glucosides in onion by electrochemical methods. // Anal. Chim. Acta. 2008. V. 617. № 1-2. P. 22-31.

20. Williams F. B., Sander L. C., Wise S. A., Girard J. Development and evaluation of methods for determination of naphthodianthrones and flavonoids in St. John's wort. // J. Chromatogr. A. 2006. V. 1115. № 1 2. P. 93 - 102.

21. Mesbah M. K., Khalifa S. I., El-Gindy A., Tawfik K. A. HPLC determination of certain flavonoids and terpene lactones in selected Ginkgo biloba L. phytopharmaceuticals. // II Farmaco. 2005. V. 60. № 6 7. P. 583 - 590.

22. Van Beek T. A., Montoro P. Chemical analysis and quality control of Ginkgo biloba leaves, extracts, and phytopharmaceuticals. // J. Chromatogr. A. 2009. V. 1216. № 11. P. 2002-2032.

23. Hasler A., Sticher O., Meier B. Identification and determination of the flavonoids from Ginkgo biloba by high-performance liquid chromatography. //J. Chromatogr. 1992. V. 605. № 1. P. 41-48.

24. Sultana B., Anwar F. Flavonols (kaempeferol, quercetin, myricetin) contents of selected fruits, vegetables and medicinal plants. // Food Chem. 2008. V. 108. P. 879 884.

25. Manach C., Regerat F., Texier O., Agullo G., Demigne C., Rem'esy C. Bioavailability, metabolism and physiological impact of 4-oxo-flavonoids. //Nutr. Res. 1996. V. 16. № 3. P. 517 544.

26. Mayer В., Schumacher M., Brandstiitter H., Wagner F. S., Hermetter A. High-throughput fluorescence screening of antioxidative capacity in human serum. //Anal. Biochem. 2001. V. 297. № 2. P. 144- 153.

27. Bozin В., Mimica-Dukic N., Samojlik I., Goran A., Igic R. Phenolics as antioxidants in garlic {Allium sativum L., Alliaceae). // Food Chem. 2008. V. 111. №4. p. 925-929.

28. Pejic N., Kuntic V., Vujuc Z., Micic S. Direct spectrophotometry determination of quercetin in the presence of ascorbic acid. // II Farmaco. 2004. V. 59. № 1. P. 21 -24.

29. Зиятдинова Г. К., Будников Г. К. Определение флавонолов в фармпрепаратах методом вольтамперометрии. // Хим.-фарм. журн. 2005. Т. 39. № 10. С. 54-56.

30. Слепченко Т. Б., Анисимова JI. С., Слипченко В. Ф., Михеева Е. В., Пикула Н. П. Контроль качества биологически активных добавок методами вольтамперометрии. Определение витаминов В., В2, С, Е и кверцетина. // Хим.-фарм. журн. 2005. Т. 39. № 3. С. 54 56.

31. Wang S.-P., Huang K.-J. Determination of flavonoids by high-performance liquid chromatography and capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. 2004. V. 1032. № 1 -2. P. 273-279.

32. Chen H., Zuo Y., Deng Y. Separation and determination of flavonoids and other phenolic compounds in cranberry juice by high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 913. № 1 2. P. 387 - 395.

33. Tsuchiya H. High-performance liquid chromatographic analysis of polyhydroxyflavones using solid-phase borate-complex extraction. // J. Chromatogr. B. 1998. V. 720. № 1 2. P. 225 - 230.

34. Liu В., Anderson D., Ferry D. R., Seymour L. W., Takats P. G., Kerr D. J. Determinations of quercetin in human plasma using reversed-phase highperformance liquid chromatography. // J. Chromatogr. B. 1995. V. 666. № 1. P. 149- 155.

35. Ishii K., Furuta Т., Kasuya Y. High-performance liquid chromatographic determination of quercetin in human plasma and urine utilizing solid-phase extraction and ultraviolet detection. // J. Chromatogr. B. 2003. V. 794. № 1. P. 49-56.

36. Будников Г. К., Зиятдинова Г. К. Антиоксиданты как объекты биоаналитической химии. // Журн. аналит. химии. 2005. Т. 60. № 7. С. 678-691.

37. Бурлакова Е. Б. Биоантиоксиданты. // Рос. хим. журн. 2007. Т. 51. № 1. С. 3- 12.

38. Buratti S., Pellegrini N., Brenna О. V., Mannino S. Rapid electrochemical method for the evaluation of the antioxidant power of some lipophilic food extracts. // J. Agric. Food Chem. 2001. V. 49. № 11. P. 5136 5141.

39. Яшин Я. И., Рыжнев В. Ю., Яшин А. Я., Черноусова Н. И. Природные антиоксиданты. Содержание в пищевых продуктах и их влияние на здоровье и старение человека. М.: ТрансЛит. 2009. 212 с.

40. Яшин А. Я. Инжекционно-проточная система с амперометрическим детектором для селективного определения антиоксидантов в пищевых продуктах и напитках // Рос. хим. журн. 2008. Т. 52. № 2. С. 131 135.

41. Naczka М., Shahidi F. Extraction and analysis of phenolics in food. // J. Chromatogr. A. 2004. V. 1054. № 1 2. P. 95 - 111.

42. Kaushal G. P., Sekhon B. S., Bhatia I. S. Spectrophotometric determination of quercetin with V02+. // Mikrochim. Acta Wien. 1979. V. 71. № 5 6. P. 365 -370.

43. Zhang S., Dong S., Chi L., He P., Wang Q., Fang Y. Simultaneous determination of flavonoids in chrysanthemum by capillary zone electrophoresis with running buffer modifiers. // Talanta. 2008. V. 76. № 4. P. 780-784.

44. Bankova V. S., Popov S. S., Marekov N. L. A study on flavonoids of propolis. // J. Nat. Products. 1983. V. 46. № 4. P. 471 474.

45. Chiu K.-L., Cheng Y.-C., Chen J.-H., Chang C. J., Yang P.-W. Supercritical fluids extraction of Ginkgo ginkgolides and flavonoids. // J. Supercritical Fluids. 2002. V. 24. № 1. P. 77 87.

46. Yang Y., Zhang F. Ultrasound-assisted extraction of rutin and quercetin from Euonymus alatus (Thunb.) Sieb. // Ultrason. Sonochem. 2008. V. 15. № 4. P. 308 313.

47. Merken H. M., Beecher G. R. Liquid chromatographic method for the separation and quantification of prominent flavonoid aglycones. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 897. № 1 2. P. 177 - 184.

48. Hasler A., Sticher O., Meier B. High-performance liquid chromatographic determination of five widespread flavonoid aglycones. // J. Chromatogr. A. 1990. V. 508. № l.P. 236-240.

49. Koh E., Wimalasiri K. M. S., Chassy A. W., Mitchell A. E. Content of ascorbic acid, quercetin, kaempferol and total phenolics in commercial broccoli. // J. Food Composition and Analysis. 2009. V. 22. № 7 8. P. 637 - 643.

50. Schieber A., Keller P., Carle R. Determination of phenolic acids and flavonoids of apple and pear by high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 910. № 2. P. 265-273.

51. Michodjehoun-Mestres L., Souquet J.-M., Fulcrand H., Bouchut C., Reynes M., Brillouet J.-M. Monomeric phenols of cashew apple (Anacardium occidentale L.). // Food Chem. 2009. V. 112. №4. P. 851 857.

52. Xiao W., Han L., Shi B. Microwave-assisted extraction of flavonoids from Radix Astragali. II Separ. Purif. Tech. 2008. V. 62. № 3. P. 614 618.

53. Adam M., Dobiás P., Eisner A., Ventura K. Extraction of antioxidants from plants using ultrasonic methods and their antioxidant capacity. // J. Sep. Sci. 2009. V. 32. P. 288-294.

54. Rodríguez-Delgado M. A., Malovaná S., Pérez J. P., Borges T., Montelongo F. J. G. Separation of phenolic compounds by high-performanceliquid chromatography with absorbance and fluorimetric detection. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 912. № 2. P. 249 257.

55. Chafer A., Fornari Т., Berna A., Stateva R. P. Solubility of quercetin in supercritical C02 + ethanol as a modifier: measurements and thermodynamic modelling. // J. Supercrit. Fluids. 2004. V. 32. № 1 3. P. 89 - 96.

56. Senorans F. J., Ibanez E., Cavero S., Tabera J., Reglero G. Liquid chromatographic mass spectrometric analysis of supercritical-fluid extracts of rosemary plants. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 870. № 1 - 2. P. 491 - 499.

57. Michalkiewicz A., Biesaga M., Pyrzynska K. Solid-phase extraction procedure for determination of phenolic acids and some flavonols in honey. // J. Chromatogr. A. 2008. V. 1187. № 1 2. P. 18 - 24.

58. Suarez В., Picinelli A., Mangas J. J. Solid-phase extraction and highperformance liquid chromatographic determination of polyphenols in apple must and ciders. // J. Chromatogr. A. 1996. V. 727. № 2. P. 203 209.

59. Тюкавкина H. А., Лаптева К. И., Беляева В. А., Куличкова В. А. Изучение сорбционных процессов на полиамидном сорбенте. // Химия природ, соед. 1968. Т. 4. № 6. С. 349-352.

60. Удалова Н. А., Карпов С. И., Селеменев В. Ф., Шармар И. А. Кинетические и равновесные параметры сорбции кверцетина анионообменниками. // Сорб. хром. проц. 2008. Т. 8. Вып. 2. С. 304 313.

61. Удалова Н. А., Карпов С. И., Селеменев В. Ф., Шармар И. А. Сорбция кверцетина высокоосновными анионообменниками. // Журн. физ. химии. 2009. Т. 83. № 6. С. 1143 1149.

62. Кочетова М. В., Семенистая Е. Н., Ларионов О. Г., Ревина А. А. Определение биологически активных фенолов и полифенолов в различных объектах методами хроматографии. // Успехи химии. 2007. Т. 76. № 1. С. 88- 100.

63. Hsiu S.-L., Tsao C.-W., Tsai Y.-C., Ho H.-J., Chao P.-D. L. Determinations of morin, quercetin and their conjugate metabolites in serum. // Biol. Pharm Bull. 2001. V. 24. № 8. P. 967 969.

64. Wang L., Morris M. E. Liquid chromatography-tandem mass spectroscopy assay for quercetin and conjugated quercetin metabolites in human plasma and urine. //J. Chromatogr. B. 2005. V. 821. № 2. P. 194-201.

65. Tinttunen S., Lehtonen P. Distinguishing organic wines from normal wines on the basis of concentrations of phenolic compounds and spectral data. // Eur. Food Res. Technol. 2001. V. 212. № 3. P. 390 394.

66. Hollman P. C. H., van Trijp J. M. P., Buysman M. N. C. P. Fluorescence detection of flavonols in HPLC by postcolumn chelatation with aluminum. // Anal. Chem. 1996. V. 68. № 19. P. 3511 3515.

67. Peyrat-Maillard M. N., Bonnely S., Berset C. Determination of the antioxidant activity of phenolic compounds by coulometric detection. // Talanta. 2000. V. 51. №4. P. 709-716.

68. Paganga G., Miller N., Rice-Evans C. A. The polyphenolic content of fruit and vegetables and their antioxidant activities. What does a serving constitute? // Free Rad. Res. 1999. V. 30. № 2. P. 153 162.

69. Hertog M. G. L., Hollman P. C. H., Katan M. B. Content of potentially anticarcinogenic flavonoids of 28 vegetables and 9 fruits commonly consumed in the Netherlands. // J. Agric. Food. Chem. 1992. V. 40. № 12. P. 2379 2383.

70. Li W., Fitzloff J. F. High performance liquid chromatographic analysis of St. John's wort with photodiode array detection. // J. Chromatogr. B. 2001. V. 765. № l.P. 99- 105.

71. Tarola A. M., Milano F., Giannetti V. Simultaneous determination of phenolic compounds in red wines by HPLC-UV. // Anal. Lett. 2007. V. 40. № 12. P. 2433-2445.

72. Hollman P. C. H„ Gaag M. V. D., Mengelers M. J. B., van Trijp J. M. P., de Vries J. H. M., Katan M. B. Absorption and disposition kinetics of the dietary antioxidant quercetin in man. // Free Radical Biol. Med. 1996. V. 21. № 5. P. 703 707.

73. Gudej J., Tomczyk M. Determination of flavonoids, tannins and ellagic acid in leaves from Rubus L. species. // Arch. Pharm. Res. 2004. V. 27. № 11. P. 1114-1119.

74. Crozier A., Lean M. E. J., McDonald M. S., Black C. Quantitative analysis of the flavonoid content of commercial tomatoes, onions, lettuce, and celery. // J. Agric. Food Chem. 1997. V. 45. № 3. P. 590 595.

75. Vukics V., Hevesi B., Fukasz A., Kery A. Impact of flavonoid composition of medicinal plants: difficulties in selecting an LC method. // Chromatographia Suppl. 2006. V. 63. Suppl. 13. P. S125 S129.

76. Rijke E., Out P., Niessen W. M. A., Ariese F., Gooijer C., Brinkman U. A. Th. Analytical separation and detection methods for flavonoids. // J. Chromatogr. A. 2006. V. 1112. № 1-2. P. 31-63.

77. Jones D. J. L., Lim C. K., Ferry D. R., Gescher A. Determination of quercetin in human plasma by HPLC with spectrophotometric or electrochemical detection. // Biomed. Chrom. 1998. V. 12. № 4. P. 232 235.

78. Wang F. M., Yao T. W., Zeng S. Determination of quercetin and kaempferol in human urine after orally administrated tablet of ginkgo biloba extract by HPLC. // J. Pharm. Biomed. Anal. 2003. V. 33. № 2. P. 317 321.

79. Volpi N., Bergonzini G. Analysis of flavonoids from propolis by on-line HPLC-electrospray mass spectrometry. // J. Pharm. Biomed. Anal. 2006. V. 42. № 3. P. 354 361.

80. Spacil Z., Novakova L., Solich P. Analysis of phenolic compounds by high performance liquid chromatography and ultra performance liquid chromatography. // Talanta. 2008. V. 76. № 1. P. 189 199.

81. Castellari M., Sartini E., Fabiani A., Arfelli G., Amati A. Analysis of wine phenolics by high-performance liquid chromatography using a monolithic type column. // J. Chromatogr. A. 2002. V. 973. № 1 2. P. 221 - 227.

82. Cimpoiu C. Analysis of some natural antioxidants by thin-layer chromatography and high performance thin-layer chromatography. // J. Liquid Chromat. & Rel. Tech. 2006. V. 29. № 7 8. P. 1125 - 1142.

83. Федосеева JI. M., Кудрикова Л. Е., Турчанинов А. А., Сивова Ю. С. Изучение флавоноидов сборов на основе листьев бадана толстолистного. // Хим. раст. сырья. 2006. № 4. С. 49 54.

84. Gage Т. В., Wender S. Н. Quantative determination of certain flavonol-3-glycosides by paper partition chromatography. // Anal. Chem. 1950. V. 22. №5. P. 708-711.

85. Polasek M., Petriska I., Pospisilova M., Jahodar L. Use of molybdate as novel complex-forming selector in the analysis of polyhydric phenols by capillary zone electrophoresis. // Talanta. 2006. V. 69. № 1. P. 192 198.

86. Jac P., Polasek M., Batista A. I. V., Kaderova L. Tungstate as complex-forming reagent facilitating separation of selected polyphenols by capillary electrophoresis and its comparison with borate. // Electrophoresis. 2008. V. 29. №4. P. 843-851.

87. Xu J., Zhang H., Chen G. Carbon nanotube/polystyrene composite electrode for microchip electrophoretic determination of rutin and quercetin in Flos Sophorae Immaturus. // Talanta. 2007. V. 73. № 5. P. 932 937.

88. Sadecka J., Polonsky J. Electrophoretic methods in the analysis of beverages. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 880. № 1 2. P. 243 - 279.

89. Xu X., Ye H., Wang W., Chen G. An improved method for the quantitation of flavonoids in herba leonuri by capillary electrophoresis. // J. Agric. Food Chem. 2005. V. 53. № 15. P. 5853 5857.

90. Коренман И. М. Фотометрический анализ. Методы определения органических соединений. М.: Химия. 1970. 343 с.

91. Sakamoto М., Takamura К. Consecutive determination of rutin and quercetin by spectrophotometry measurements. // Microchem. J. 1978. V. 23. № 3. P. 374-383.

92. Baranowska I., Rarog D. Application of derivative spectrophotometry to determination of flavonoid mixtures. //Talanta. 2001. V. 55. № 1. P. 209-212.

93. Kuntic V., Blagojcvic S., Malesev D., Radovic Z., Bogavac M. Spectrophotometric investigation of the Pd(II)-quercetin complex in 50% ethanol. // Monatshefte flir Chemie. 1998. V. 129. P. 41 48.

94. Kostic D. A., Miletic G. Z„ Mitic S. S., Rasic I. D., Zivanovic V. V. Spectrophotometric determination of microamounts of quercetin based on its complexation with copper(II). // Chem. Pap. 2007. V. 61. № 2. P. 73 76.

95. Malesev D., Kuntic V. Investigation of metal-flavonoid chelates and the determination of flavonoids via metal-flavonoid complexing reactions. // J. Serb. Chem. Soc. 2007. V. 72. № 10. P. 921 939.

96. Viswanathan P., Sriram V., Yogeeswaran G. Sensitive spectrophotometric assay for 3-hydroxy-substituted flavonoids, based on their binding with molybdenum, antimony, or bismuth. // J. Agric. Food. Chem. 2000. V. 48 № 7. P. 2802-2806.

97. Bhatia I. S., Singh J., Bajaj K. L. A sensitive colorimetric method for the microdetermination of flavonols, // Mikrochim. Acta Wien. 1974. V. 62. № 5. P. 909-913.

98. Barnum D. W. Spectrophotometric determination of catechol, epinephrine, dopa, dopamne and other aromatic vic-diols. // Anal. Chim. Acta. 1977. V. 89. № l.P. 157- 166.

99. Зельцер JT. E., Талипов Ш. Т., Морозова Л. А. Исследование и аналитическое применение люминесценции нолиоксифлавонов. // Журн. аналит. химии. 1981. V. 36. № 8. С. 1477 1482.

100. Бельтюкова С. В., Бычкова А. А. Сорбционно-люминесцентное определение кверцетина в лекарственных растениях. // Труды Одесского политех, ун-та. 2008. Вып. 2. № зо. С. 242 246.

101. Абдуллин И. Ф., Турова Е. Н., Будников Г. К. Кулонометрическая оценка антиоксидантной способности экстрактов чая электрогенерированным бромом. //Журн. аналит. химии. 2001. Т. 56. № 6. С. 627 629.

102. Flavin К., Resmini М. Imprinted nanomaterials: a new class of synthetic receptors. // Anal. Bioanal. Chem. 2009. V. 393. № 2. P. 437 444.

103. Cormack P. A. G., Mosbach K. Molecular imprinting: recent developments and the road ahead. // React. Func. Polym. 1999. V. 41. № 1 3. P. 115 - 124.

104. Ye L., Mosbach K. Molecular imprinting: synthetic materials as substitutes for biological antibodies and receptors. // Chem. Mater. 2008. V. 20. № 3. P. 859-868.

105. Лисичкин Г. В., Крутяков Ю. А. Материалы с молекулярными отпечатками: синтез, свойства, применение. // Успехи химии. 2006. Т. 75. № 10. С. 998- 1017.

106. Поляков М. В. Адсорбционные свойства силикагеля и его структура. //Журн. физ. химии. 1931. Т. 2. № 6. С. 799- 805.

107. Поляков М. В. Стадник П. М., Парицкий М. В., Малкин И. М., Духина Ф. С. К вопросу о строении силикагеля. // Журн. физ. химии. 1933. Т. 4. №4. С. 454-456.

108. Поляков М. В., Кулешина.Л. П., Неймарк И. Е. К вопросу о зависимости адсорбционных свойств силикагеля от характера его пористости. // Журн. физ. химии. 1937. Т. 10. № 1. С. 100- 112.

109. Dickey F. Н. Specific adsorption. // J. Phys. Chem. 1955. V. 59. № 8. P. 695 -707.

110. Патрикеев В. В., Баландин А. А., Клабуновский Е. И. Мардашев Ю. С., Максимова Г. И. Селективность действия .адсорбента, сформированного в присутствии бактерий, в отношении оптических изомеров. // Докл. АН СССР. 1960. Т. 132. № 4. с. 850 852.

111. Клабуновский Е. И., Волкова JI. М., Агрономов А. Е. О новом методе получения стереоспецифических силикагелей. //Изв. АН СССР. Отд. хим. наук. 1961. № 11. С. 2101.

112. Патрикеев В. В., Шолин А. Ф., Никифорова И. А. Специфически сформированные силикагели и метод разделения сложных смесей органических веществ. // Изв. АН СССР. Отд. хим. наук. 1963. № 6. С. 1031 1035.

113. Мардашев Ю. С., Гребенщикова О. Г. Специфичность серебряных катализаторов на носителях. // Журн. физ. химии. 1974. Т. 48. № 3. С. 792.

114. Wulff G., Sarhan A. The use of polymers with enzyme- analogous structures for the resolution of racemates. // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1972. V. 11. № 4. P. 341 -343.

115. Arshady R., Mosbach K. Synthesis of substrate-selective polymers by host-guest polymerization. // Makromol. Chem. 1981. V. 182. № 2. P.687 692.

116. Piletslcy S. A., AIcoclc S., Turner A. P. F. Molecular imprinting: at the edge of the third millennium. // Trends Biotechnol. 2001. V. 19. №. 1. P. 9 12.

117. Mosbach K. Imprints formed using functionally complementary monomers. European patent EP0982591. 10.2.1994.

118. Mosbach K., Nicholls I., Ramstrom O. Use of moleeularly imprinted polymers for stereo and/or regioselective synthesis. European patent EP0675898. 28.12.1992.

119. Sellergren B. Direct drug determination by selective sample enrichment on an imprinted polymer. // Anal. Chem. 1994. V. 66. №. 9. P. 1578 1582.

120. Moleeularly imprinted polymers. Man-made mimics of antibodies and their applications in analytical chemistry. Ed. Sellergren B. Amsterdam: Elsevier. 2001. 582 p.

121. Andersson L. I. Molecular imprinting: developments and applications in the analytical chemistry field. // J. Chromatogr. B. 2000. V. 745. № 1. P. 3 13.

122. Haupt K. Moleeularly imprinted polymers in analytical chemistry. // Analyst. 2001. Y. 126. P. 747-756.

123. Spegel P., Schweitz L., Nilsson S. Moleeularly imprinted polymers. // Anal. Bioanal. Chem. 2002. Y. 372. № 1. P. 37 38.

124. Haupt K. Moleeularly imprinted polymers: the next generation. // Anal. Chem. 2003. Y. 75. № 17. P. 367A 383A.

125. Mahony J. O., Nolan K., Smyth M. R., Mizaikoff B. Moleeularly imprinted polymers potential and challenges in analytical chemistry. // Anal. Chim. Acta. 2005. V. 534. № l.P. 31-39.

126. Olsen J., Martin P., Wilson I. D. Molecular imprints as sorbents for solid phase extraction: potential and applications. //Anal. Commun. 1998. V. 35. 13H-14H.

127. Sellergren B. Polymer- and template-related factors influencing the efficiency in moleeularly imprinted solid phase extractions. // Trends Anal. Chem. 1999. V. 18. №3. P. 164-174.

128. Stevenson D. Molecular imprinted polymers for solid-phase extraction. //Trends Anal. Chem. 1999. V. 18. № 3. P. 154 158.

129. Andersson L. I. Molecular imprinting for drug bioanalysis: A review on the application of imprinted polymers to solid-phase extraction and binding assay. // J. Chromatogr. B. 2000. V. 739. № 1. P. 163-173.

130. Stevenson D. Immuno-affinity solid-phase extraction. // J. Chromatogr. B. 2000. V. 745. № l.P. 39-48.

131. Lanza F, Sellergren В. The application of molecular imprinting technology to solid phase extraction. // Chromatographia. 2001. V. 53. № 11 12. P. 599-611.

132. Martín-Esteban A. Molecularly imprinted polymers: new molecular recognition materials for selective solid phase extraction of organic compounds. //Fresenius' J. Anal. Chem. 2001. V. 370. № 7. P. 795 802.

133. Masqué N., Mareé R. M., Borrull F. Molecularly imprinted polymers: new tailor-made materials for selective solid-phase extraction. // Trends Anal. Chem. 2001. V. 20. № 9. P. 477 486.

134. Andersson L. I. Selective solid-phase extraction of bio- and environmental samples using molecularly imprinted polymers. // Bioseparation. 2001. V. 10. №6. P. 353 -364.

135. Haginaka J. Molecularly imprinted polymers for solid-phase extraction. // Anal. Bioanal. Chem. 2004. V. 379. № 3. P. 332 334.

136. Дмитриенко С. Г., Ирха В. В., Кузнецова А. Ю., Золотов Ю. А. Использование полимеров с молекулярными отпечатками в процессах разделения и концентрирования органических соединений. // Журн. аналит. химии. 2004. V. 59. № 9. Р. 902 912.

137. Pichón V., Haupt К. Affinity separations on molecularly imprinted polymers with special emphasis on solid-phase extraction. // J. Liq. Chromatogr. & Rel. Tech. 2006. V. 29. № 7 8. P. 989 - 1023.

138. Pichón V. Selective sample treatment using molecularly imprinted polymers. // J. Chromatogr. A. 2007. V. 1152. № 1 2. P. 41 - 53.

139. Pichón V., Chapuis-IIugon F. Role of molecularly imprinted polymers for selective determination of environmental pollutants a review. // Anal. Chim. Acta. 2008. V. 622. № 1 - 2. P. 48 - 61.

140. Kempe M., Mosbach К. Molecular imprinting used for chiral separations. // J. Chromatogr. A. 1995. V. 694. № 1. P. 3 13.

141. Takeuchi T., Haginaka J. Separation and sensing based on molecular recognition using molecularly imprinted polymers. // J. Chromatogr. B. 1999. V. 728. № l.P. 1 -20.

142. Turiel E., Martin-Esteban A. Molecularly imprinted polymers: towards highly selective stationary phases in liquid chromatography and capillary electrophoresis. // Anal. Bioanal. Chem. 2004. V. 378. № 8. P. 1876 1886.

143. Schweitz L., Andersson L. I., Nilsson S. Capillary electro chromatography with molecular imprint-based selectivity for enantiomer separation of local anaesthetics. // J. Chromatogr. A. 1997. V. 792. № l 2. P. 401 409.

144. Haupt K:, Mosbach K. Molecularly imprinted polymers and their use in biomimetic sensors. // Chem. Rev. 2000. V. 100. № 7. P. 2495 2504.

145. Ye L., Haupt K. Molecularly imprinted polymers as antibody and receptor mimics for assays, sensors and drug discovery. // Anal. Bioanal. Chem. 2004. V. 378. №8. P. 1887- 1897.

146. Dias А. С. В., Figueiredo E. C., Grassi V., Zagatto E. A. G., Arruda M. A. Z. Molecularly imprinted polymer as a solid phase extractor in flow analysis. // Talanta. 2008. V. 76. № 5. P. 988 996.

147. Гендриксон О.Д., Жердев A.B., Дзаитиев Б,Б. Молекулярно-импринтированные полимеры и их применение в биохимическом анализе //Успехи биологической химии. 2006. Т. 46. С. 149 192.

148. Owens Р. К., Karlsson L., Lutz Е. S. М., Andersson L. I. Molecular imprinting for bio- and pharmaceutical analysis. // Trends Anal. Chem. 1999. V. 18. № 3. P. 146- 154.

149. Xu X., Zhu L., Chen L. Separation and screening of compounds of biological origin using molecularly imprinted polymers. // J. Chromatogr. B. 2004. V. 804. № l.P. 61-69.

150. Fernández-González A., Guardia L., Badía-Laíño R., Díaz-García M. E. Mimicking molecular receptors for antibiotics analytical implications. // Trends Anal. Chem. 2006. V. 25. №. 10. P. 949 - 957.

151. Ramstrm O., Skudar K., Haines J., Patel P., Brggemann O. Food analyses using molecularly imprinted polymers. // J. Agrie. Food. Chem. 2001. V. 49. № 5. P. 2105 2114.

152. Mayes A. G., Mosbach K. Molecularly imprinted.polymer beads: suspension polymerization using a liquid perfluorocarbon as the dispersing phase. // Anal. Chem. 1996. V. 68. № 21. P. 3769 3774.

153. Ye L., Weiss R., Mosbach K. Synthesis and characterization of molecularly imprinted microspheres. // Macromol. 2000. V. 33. № 22. P. 8239 8245.

154. Tan C. J., Wangrangsimakul S., Bai R., Tong Y. W. Defining the interactions between proteins and surfactants for nanoparticle surface imprinting through miniemulsion polymerization. // Chem. Mater. 2008. V. 20. № 1. P. 118 127.

155. Pérez-Moral N., Mayes A. G. Comparative study of imprinted polymer particles prepared by different polymerisation methods. // Anal. Chim. Acta. 2004. V. 504. № l.P. 15-21.

156. Kempe II., Kempe M. Development and evaluation of spherical molecularly imprinted polymer beads. // Anal. Chem. 2006. V. 78. № 11. P. 3659 3666.

157. Kriz D., Kriz C. B., Andersson L. I., Mosbach K. H. Thin-layer chromatography based on molecular imprinting technique. // Anal. Chem. 1994. V. 66. № 17. P. 2636-2639.

158. Kochkodan V., Weigel W., Ulbricht M. Thin layer molecularly imprinted microfiltration membranes by photofunctionalization using a coated a-cleavage photoinitiator. // Analyst. 2001. V. 126. № 6. P. 803 809.

159. Guo H., He X., Liang H. Study of the binding characteristics and transportation properties of a 4-aminopyridine imprinted polymer membrane. // Fresenius' J. Anal. Chem. 2000. V. 368. № 8. P. 763 767.

160. Tasselli F., Donato L., Drioli E. Evaluation of molecularly imprinted membranes based on different acrylic copolymers. // J. Membrane Sci. 2008. V. 320. №1-2. P. 167- 172.

161. Sergeyeva T. A., Piletsky S. A., Brovko A. A., Slinchenko E. A., Sergeeva L. M., Panasyuk T. L., El'skaya A. V. Conductimetric sensor for atrazine detection based on molecularly imprinted polymer membranes. // Analyst. 1999. V. 124. №3. P. 331 -334.

162. Yan M., Kapua A. Fabrication of molecularly imprinted polymer microstructures. // Anal. Chim. Acta. 2001. V. 435. № 1. P. 163 167.

163. Tan Y., Nie L., Yao S. A piezoelectric biomimetic sensor for aminopyrine with a molecularly imprinted polymer coating. // Analyst. 2001. V. 126. № 5. P. 664-668.

164. Jenkins A. L., Yin R., Jensen J. L. Molecularly imprinted polymer sensors for pesticide and insecticide detection in water. // Analyst. 2001. V. 126. № 6. P. 798 802.

165. Matsui J., Akamatsu K., Hara N., Miyoshi D., Nawafune H., Tamaki K., Sugimoto N. SPR sensor chip for detection of small molecules using molecularly imprinted polymer with embedded gold nanoparticles. // Anal. Chem. 2005. V. 77. № 13. P. 4282 -4285.

166. Zhang Z., Li H., Liao H., Nie L., Yao S. Effect of the extraction method on the MlP-sensor. // Anal. Lett. 2005. V. 38. № 2. P. 203 217.

167. Yang L., Wei W., Xia J., Tao H. Artificial receptor layer for herbicide detection based on electrosynthesized molecular imprinting technique and capacitive transduction. // Anal. Lett. 2004. V. 37. № 11. p. 2303 2319.

168. Liang C., Peng H., Nie L., Yao S. Bulk acoustic wave sensor for herbicide assay based on molecularly imprinted polymer. // Fresenius' J. Anal. Chem. 2000. V. 367. № 6. P. 551 555.

169. Zhou Y., Yu B., Shiu E., Levon K. Potentiometric sensing of chemical warfare agents: surface imprinted polymer integrated with an indium tin oxide electrode. // Anal. Chem. 2004. V. 76. № 10. P. 2689 2693.

170. Bianco-Lopez M. C., Lobo-Castanon M. J., Miranda-Ordieres A. J., Tunon-Blanco P. Voltammetric sensor for vanillylmandelic acid based on molecularly imprinted polymer-modified electrodes. // Biosens. Bioelectron. 2003. V. 18. №4. P. 353 -362.

171. Shoji R., Takeuchi T., Kubo I. Atrazine sensor based on molecularly imprinted polymer-modified gold electrode. // Anal. Chem. 2003. V. 75. № 18. P. 4882-4886.

172. Luo C., Liu M., Mo Y., Qu J., Feng Y. Thickness-shear mode acoustic sensor for atrazine using molecularly imprinted polymer as recognition element. // Anal. Chim. Acta. 2001. V. 428. № 1. P. 143 148.

173. Panasyuk-Delaney T., Mirsky V. M., Ulbricht M., Wolfbeis O. S. Impedometric herbicide chemosensors based on molecularly imprinted polymers. // Anal. Chim. Acta. 2001. V. 435. № 1. P. 157 162.

174. Piletska E. V., Romero-Guerra M., Chianella I., Karim K., Turner A. P. F., Piletsky S. A. Towards the development of multisensor for drugs of abuse based on molecular imprinted polymers. // Anal. Chim. Acta. 2005. V. 542. № 1. P. 111-117.

175. Liu Z.-S., Xu Y.-L., Wang H., Yan C., Gao R.-Y. Chiral separation of binaphthol enantiomers on molecularly imprinted polymer monolith by capillary electrochromatography. // Anal. Sci. 2004. V. 20. № 4. P. 673 678.

176. Kim H., Guiochon G. Comparison of the thermodynamic properties of particulate and monolithic columns of molecularly imprinted copolymers. // Anal. Chem. 2005. V. 77. № 1. P. 93 102.

177. Huang X., Zou H., Chen X., Luo Q., Kong L. Molecularly imprinted monolithic stationary phases for liquid chromatographic separation of enantiomers and diastereomers. // J. Chromatogr. A. 2003. V. 984. № 2. P. 273 282.

178. Pérez-Moral N., Mayes A. G. Direct rapid synthesis of MIP beads in SPE cartridges. // Biosens. Bioelectron. 2006. V. 21. № 9. P. 1798 1803.

179. O'Mahony J., Molinelli A., Nolan K., Smyth M. R., Mizaikoff B. Anatomy of successful imprint: analyzing the recognition mechanisms of a molecularly imprinted polymer for quercetin. // Biosens. Bioelectron. 2006. V. 21. № 7. P. 1383- 1392.

180. Tunc Y., Hasirci N., Yesilada A., Ulubayram K. Comonomer effects on binding performances and morphology of acrylate-based imprinted polymers. // Polymer. 2006. V. 47. № 20. P. 6931 6940.

181. Spivak D. A. Optimization, evaluation, and characterization of molecularly imprinted polymers. // Adv. Drug Deliv. Rev. 2005. V. 57. № 12. P. 1779-1794.

182. Katz A., Davis M. E. Investigations into the mechanisms of molecular recognition with imprinted polymers. // Macromol. 1999. V. 32. № 12. P. 4113 4121.

183. O'Mahony J., Wei S., Molinelli A., Mizaikoff B. Imprinted polymeric materials. Insight into the nature of prepolymerization complexes of quercetin imprinted polymers. // Anal. Chem. 2006. V. 78. № 17. P. 6187 6190.

184. Pavel D., Lagowski J. Computationally designed monomers and polymers for molecular imprinting of theophylline and its derivatives. Part I. // Polymer. 2005. V. 46. № 18. P. 7528-7542.

185. Pavel D., Lagowski J. Computationally designed monomers and polymers for molecular imprinting of theophylline part II. // Polymer. 2005. Y. 46. № 18. P. 7543 -7556.

186. Salvador J.-P., Estevez M.-C., Marco M.-P., Sánchez-Baeza F. A new methodology for the rational design of molecularly imprinted polymers. // Anal. Lett. 2007. V. 40. № 7. P. 1294 1306.

187. Дмитриенко С.Г., Ирха В.В., Дуйсебаева Т.Б., Михайлик Ю.В., Золотов Ю.А. Синтез и исследование сорбционных свойств полимеров с отпечатками 4-гидроксибензойной кислоты. // Журн. аналит. химии. 2006. Т. 61. № 1.С. 18-23.

188. Dmitrienko S. G., Irkha V. V., Apyari V. V., Klokova E. V., Zolotov Yu. A. Recognition of hydroxybenzoic acids and their esters by molecularly imprinted polymers: a comparative study. // Mendeleev Commun. 2008. V. 18. № 6. P. 315-317.

189. Попов С. А., Дмитриенко С. Г., Чумичкина Ю. А., Золотов Ю. А. Сорбционные свойства полимеров с молекулярными отпечатками хлорсодержащих пестицидов.// Журн. физ. химии. 2009. Т. 83. № 4. С. 649-654.

190. Yilmaz E, Mosbach K, Haupt K. Influence of functional and cross-linking monomers and the amount of template on the performance of molecularly imprinted polymers in binding assays. // Anal. Commun. 1999. V. 36. P. 167- 170.

191. Spivak D., Gilmore M. A., Shea K. J. Evaluation of binding and origins of specificity of 9-ethyladenine imprinted polymers. // J. Am. Chem. Soc. 1997. V. 119. № 19. P. 4388-4393.

192. Muldoon M. Т., Stanker L. H. Molecularly imprinted solid phase extraction of atrazine from beef liver extracts. // Anal. Chem. 1997. V. 69. № 5. P. 803 808.

193. Andersson L. I. Application of molecular imprinting to the development of aqueous buffer and organic solvent based radioligand binding assays for (S)-propranolol. // Anal. Chem. 1996. V. 68. № 1. P. 111 117.

194. Baggiani C., Giraudi G., Giovannoli C., Trotta F., Vanni A. Chromatographic characterization of molecularly imprinted polymers binding the herbicide 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 883. № 1 2. P. 119-126.

195. Chen W., Liu F., Xu Y. T., Li K. A., Tong S. Molecular recognition of procainamide-imprinted polymer. // Anal. Chim. Acta. 2001. V. 432. № 2. P. 277-282.

196. Siemann M., Andersson L. I., Mosbach K. Selective recognition of the herbicide atrazine by noncovalent molecularly imprinted polymers. // J. Agric. Food Chem. 1996. V. 44. № 1. P. 141 145.

197. Schweitz L., Andersson L. I., Nilsson S. Molecularly imprinted CEC sorbents: investigations into polymer preparation and electrolyte composition. // Analyst. 2002. V. 127. № l.p. 22-28.

198. Andersson L. I., Abdel-Rehim M., Nicklasson L., Schweitz L., Nilsson S. Towards molecular-imprint based SPE of local anaesthetics. // Chromatographia. 2002. V. 55. Suppl. 1. P. S65 S69.

199. Xie J., Zhu L., Luo H., Zhou L., Li C., Xu X. Direct extraction of specific pharmacophoric flavonoids from gingko leaves using a molecularly imprinted polymer for quercetin. // J. Chromatogr. A. 2001. V, 934. № 1 2. P. 1 - 11.

200. Weiss R., Molinelli A., Jakusch M., Mizaikoff B. Molecular imprinting and solid phase extraction of flavonoid compounds. // Bioseparation. 2002. V. 10. №6. P. 379-387.

201. Jin Y.-z., Row K. H. Adsorption isotherms of quercetin and catechin compounds on quercetin-MIP. // Chem. Res. Chin. Univers. 2007. V. 23. № 4. P. 412-416.

202. Song X., Li J., Wang J., Chen L. Quercetin molecularly imprinted polymers: preparation, recognition characteristics and properties as sorbent for solid-phase extraction. // Talanta. 2009. V. 80. № 2. P. 694 702.

203. Molinelli A., Weiss R., Mizaikoff B. Advanced solid phase extraction using molecularly imprinted polymers for the determination of quercetin in red wine. // J. Agrie. Food. Chem. 2002. V. 50 № 7. P. 1804 1808.

204. Xia Y.-q., Guo T.-y., Song M.-d., Zhang B.-h., Zhang B.-l. Selective separation of quercetin by molecular imprinting using chitosan beads as functional matrix. // React. Func. Polym. 2006. V. 66. № 12. P. 1734 1740.

205. Ding L., Li H., Tang F., Yao S. Molecularly imprinted solid-phase extraction of epicatechin from tea beverage. // Anal. Lett. 2006. V. 39. № 12. P. 2373 2385.

206. Suárez-Rodríguez J. L., Díaz-García M. E. Flavonol fluorescent flow-through sensing based on a molecular imprinted polymer. // Anal. Chim. Acta. 2000. V. 405. №1-2. P. 67-76.

207. Tasselli F., Donato L., Drioli E. Evaluation of molecularly imprinted membranes based on different acrylic copolymers. // J. Membrane Sci. 2008. V. 320. № 1-2. P. 167- 172.

208. Zhu L., Xu X. Selective separation of active inhibitors of epidermal growth factor receptor from Caragana Jubata by molecularly imprinted solid-phase extraction. // J. Chromatogr. A. 2003. V. 991. № 2. P. 151 158.

209. Даванков В. А., Волынская А. В., Цурюпа M. П. Сорбционные свойства макросетчатых изопористых полимеров стирола типа "Стиросорб". // Высокомол. соед. Серия Б. 1980. Т. 22. № 10. С. 746 748.

210. Хрящевский А. В., Подловченко М. В., Нестеренко П. Н., Шпигун О. А. Применение сверхшитого микросетчатого полистирола для концентрирования фенолов. // Вестн. Моск. ун-та. Серия 2. Химия. 1998. Т. 39. № 3. С. 196-204.

211. Андреева Е. Ю., Дмитриенко С. Г., Золотов Ю. А. Сорбция кофеина и теофиллина на сверхсшитом полистироле. // Вестн. Моск. ун-та. Серия 2. Химия. 2010. Т. 51. № 1. С. 48-52.

212. Ирха В. В. Синтез и исследование сорбционных свойств полимеров с молекулярными отпечатками органических соединений. Дисс. канд. хим. наук. МГУ. Москва. 2006.

213. Попов С. А. Синтез, исследование сорбционных свойств и аналитическое использование материалов с молекулярными отпечатками 2,4-дихлорфеноксиуксуной кислоты. Дисс. канд. хим. наук. МГУ. Москва. 2009.

214. Дмитриенко С. Г., Апяри В. В. Пенополиуретаны. Сорбционные свойства и применение в химическом анализе. М.: URSS. 2009. 261 с.

215. Экспериментальные методы в адсорбции и молекулярной хроматографии. Под ред. Ю. С. Никитина и Р. С. Петровой. М.: Изд-во МГУ. 1990. 316 с.

216. Schumack L., Chow А. Extraction of aromatic organic Compounds by Polyurethane foam. // Talanta. 1987. V. 34. № 11. P. 957 962.

217. Chow A., Branagh W., Chance J. Sorption of organic dyes by polyurethane foam. // Talanta. 1990. V. 37. № 4. P. 407 412.

218. Dmitrienko S. G., Pyatkova L. N., Myshak E. N., Runov V. K. Sorption of sodium dodecylsulfate and cetyltrimetylammonium bromide by polyurethane foams. // Mendeleev Comm. 1996. № 4. P. 137 139.

219. Dmitrienko S. G., Myshak E. N., Pyatkova L. N. An empirical relationship between distribution coefficients of phenols by polyurethane foams and their octanol-water distribution constants and pKa values. // Talanta. 1999. V. 49. №3. P. 309-318.

220. Медведева О. M., МышакЕ. H., Дмитриенко С. Г., Иванов А. А., ШпигунО. А. // Вестн. Моск. ун-та. Серия 2. Химия. 2002. Т. 43. № 1. С. 25-27.

221. Дмитриенко С. Г., ЛогиноваЕ. В., МышакЕ. Н., РуновВ. К. Сорбция родаминовых красителей пенополиуретанами. // Журн. физ. химии. 1994. Т. 68. №7. С. 1295- 1297.

222. Дмитриенко С. Г., Пяткова Л. Н., Малиновская Н. В., Рунов В. К. Сорбция сульфофталеиновых красителей пенополиуретанами. // Журн. физ. химии. 1997. Т. 71. №4. С. 709-712.

223. Dmitrienko S. G., Myshak Е. N., Runov V. К., Zolotov Yu. A. Sorption-photometric determination of phenols with polyurethane foams. // Chem. Anal. (Warsaw). 1995. V. 40. № 1. P. 291 -298.

224. Dmitrienko S. G., Kosyreva O. A., Runov V. K., Zolotov Yu. A. Utilization of polyuretane foams in sortion-photometric analisis. // Mendeleev Comm. 1991. № 2. P. 75 77.

225. Dmitrienko S. G., Myshak E. N., Zhigulev A. V., Runov V. K., Zolotov Yu. A. Sorption-photometrie determination of 1-naphtol with polyurethane foams. //Anal. Lett. 1997. V. 30. № 14. P. 2541 2553.

226. Dmitrienko S. G., Khatuntseva L. N., Apyari V. V., Zolotov Yu. A. Azo coupling reactions of polyurethane foams and their application in chemical analysis. // Chem. Anal. (Warsawa). 2005. V. 50. № 1. P. 327 337.

227. Tsyurupa М. P., Maslova L. A., Andreeva A. I., Mrachkovskaya Т. А., Davankov V. A. Sorption of organic compounds from aqueous media by hypercrosslinked polysterene sorbents "Styrosorb". // React. Polym. 1995. V. 25. P. 69-78.

228. Streat M., Sweetland L. A., Horner D. J. Removal of pesticides from water using hypercrosslinked polymer phases: part 3 mini-column studies and the effect of fulvic and humic substances. // Process Saf. Environ. Prot. 1998. V. 76. Part B. P. 135-141.

229. Цюрупа M. П., Ходченко E. JI., Даванков В. А. Сорбция лецитина на сверхсшитом полистирольном сорбенте. // Коллоид, журн. 1983. Т. 45. №5. С. 1016- 1024.

230. Хрящевский А. В. Сорбционное концентрирование первичных длинноцепочечных алифатических аминов и фенолов и их определение методом обращенно-фазовой высокоэффективной хроматографии. Дисс. канд. хим. наук. МГУ. Москва. 1997.

231. Streat M., Sweetland L. A. Removal of pesticides from water using hypercrosslinked polymer phases: part 1 physical and chemical characterization of adsorbents. // Process Saf. Environ, Prot. 1998. V. 76. Part B. P. 115-126.

232. Penner N. A., Nesterenko P. N. Anion-exchange ability of neutral hydrophobic hypercrosslinked polystyrene. // Anal. Commun. 1999. V. 36. №5. P. 199-210.

233. Пеннер H. А., Нестеренко П. II., Рыбалко M. А. Высокоэффективная жидкостная хроматография комплексов металлов с тетра-4-трет-бутилфталоцианином. // Журн. аналит. химии. 2001. Т. 56. № 10. С. 1067- 1074.

234. Penner N. A., Nesterenko P. N., Khryaschevsky А. V., Stranadko Т. N., Shpigun О. A. A novel stationary phase for the high performance liquid chromatographic separation and determination of phenols. // Mendeleev Commun. 1998. V. 8. № 1. P. 24 26.

235. Penner N. A., Nesterenko P. N. Simultaneous determination of dihydroxybenzenes, aminophenols and phenylenediamines in hair dyes byhigh-performance liquid chromatography on hypercross-linked polystyrene. // Analyst. 2000. V. 125. № 7. P. 1249 1254.

236. Hjerten S. Free zone electrophoresis. // Chromatogr. Rev. 1967. V. 9. № 2. P. 122-219.

237. Hansel M. C., Rowell F. J., Landon J., Sidki A. M. Single-reagent polarisation fluoroimmunoassay for cotinine (a nicotine metabolite) in urine. // Ann. Clin. Biochem. 1986. V. 23. № 5. P. 596 602.