Тонкослойная хроматография органических соединений в водных подвижных фазах на основе циклодекстринов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

На прзддех рукописи

Фг

АТАЯН Варсения Загидовна

ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ В ВОДНЫХ ПОДВИЖНЫХ ФАЗАХ НА ОСНОВЕ ЦИКЛОДЕКСТРИНОВ

02.00.02 - АНАЛИТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ

Автореферат диссертации на соисканиеученой степени кандидатахимическихнаук

Саратов - 2004 г.

Работа выполнена в Саратовском Государственном университете имени Н.Г. Чернышевского на кафедре аналитической химии и химической экологии

Научный руководитель: доктор химических наук, профессор

Штыков Сергей Николаевич кандидат химических наук, доцент Сумина Елена Германовна

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор

Амелин Василий Григорьевич кандидат химических наук, доцент Третьяченко Елена Васильевна

Ведущая организация: Казанский государственный технологический

университет

Зашита состоится 2004 г. в_часов на заседании

диссертационного совета Д 212.243.07 при Саратовском государственном университете имени Н.Г. Чернышевского по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Астраханская, 83, корп. I, химический факультет СГУ

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Саратовского государственного университета имени Н.Г. Чернышевского

Автореферат разослан 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор химических наук,

профессор

Федотова О.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Циклодекстрины (ЦД) применяются в различных областях аналитической химии для улучшения эффективности разделения и определения органических соединений, в фармацевтической химии для повышения стабильности, улучшения растворимости и биологической активности лекарственных препаратов, в парфюмерии для фиксации летучих веществ, сельском хозяйстве для стабилизации неустойчивых гербицидов, инсектицидов и фунгицидов, в пищевой промышленности и т.д..

Уникальной способностью ЦД является образование комплексов включения «гость-хозяин», в которых полость циклодекстрина выступает в роли «хозяина» для широкого круга органических и неорганических молекул и ионов, образуя соединения за счет гидрофобного, дисперсионного взаимодействий и водородной связи. Избирательность включения определяется соответствием размера полости циклодекстрина размеру молекулы-гостя, а также эффективностью связывания субстрата с внутренней поверхностью полости ЦД.

Известно, что ЦД широко применяются в высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и гораздо реже в тонкослойной хроматографии (ТСХ). В связи с этим возможности их использования в ТСХ в полной мере не изучены. Это касается как круга веществ, которые можно разделять в подвижных фазах на основе ЦЦ, так и влияния на процесс разделения сильных электролитов и органических растворителей, способных изменять условия солюбилизации веществ в полости ЦД. В связи с этим, необходима постановка системных исследований, направленных на изучение действия указанных факторов и выявление путей оптимизации хроматографического разделения в методе ТСХ.

Цель работы состояла в выявлении закономерностей хроматографического разделения органических соединений методом ТСХ в водных подвижных фазах модифицированных циклодекстринами.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

. изучить влияние природы и концентрации органического растворителя и сильных электролитов на хроматографическое разделение органических соединений различных классов методом ТСХ;

- выявить влияние природы неподвижной фазы и ЦД (размер полости и присутствие заместителя), совместное влияние ЦД и органического растворителя, ЦД и электролита на закономерности хроматографического поведения сорбатов в методе ТСХ;

- рассчитать коэффициенты распределения сорбатов в системах вода - ЦД и вода - НФ и параметры, характеризующие эффективность их разделения;

- разработать методики определения степени чистоты препаратов органических реагентов, определения

РОС НАЦИОНАЛЬНА* БИБЛИОТЕКА { СПтр О»

Ь^П !

ЗДЗУ!

различных органических соединении и пищевых красителей в реальных объектах.

Научная новизна работы:

- выявлены закономерности влияния концентрации и природы циклодекстринов в подвижной фазе в отсутствие и присутствии сильных электролитов и органических растворителей на подвижность и селективность разделения производных бензола, хинолина, аминокислот, органических реагентов трифенилметанового и ксантенового рядов и азосоединений на неподвижных фазах различной полярности;

- рассчитаны коэффициенты, распределения сорбатов в системе вода -циклодекстрин и параметры, характеризующие эффективность разделения;

- найдены оптимальные условия разделения соединений различных классов в подвижных фазах на основе циклодекстринов, показана возможность применения циклодекстриновых ПФ в ТСХ для разделения и определения степени чистоты коммерческих препаратов органических реагентов и красителей, повышения эффективности и селективности разделения и определения пищевых красителей и лекарственных препаратов.

Практическая значимость работы. Полученные результаты позволяют расширить возможности метода ТСХ, исключить использование в подвижных фазах токсичных и неудобных для практического использования органических растворителей. На основе результатов проведенных исследований:

- разработаны методики оценки степени чистоты и разделения препаратов органических реагентов методом тонкослойной хроматографии с циклодекстриновыми водными подвижными фазами;

- разработаны методики определения пищевых красителей в

лекарственном препарате "Интетрикс", пищевых объектах, хинозола в лекарственной форме "Контрацептин Т".

На защиту выносятся:

- результаты изучения влияния концентрации и природы циклодекстринов в отсутствие и присутствии сильных электролитов и органических растворителей на. хроматографическое поведение органических соединений различных классов;

- оптимальные условия разделения органических соединений на различных

неподвижных фазах в водных подвижных фазах на основе циклодекстринов;

- коэффициенты распределения органических соединений в системах вода - циклодекстрины и параметры, характеризующие эффективность и селективность разделения сорбатов;

- результаты применения ПФ на основе водных растворов циклодекстринов для оценки степени чистоты и количественного

определения органических соединений в пищевых объектах и лекарственных препаратах.

Личный вклад автора заключается в экспериментальном исследовании хроматографического поведения органических веществ в водных ПФ, содержащих органические растворители, сильные электролиты и циклодекстрины; расчете коэффициентов распределения в системах вода-ЦД, вода-НФ; ЦД-НФ, разработке методик оценки степени чистоты препаратов органических реагентов, количественном определении органических веществ в реальных объектах, обработке и обсуждении результатов эксперимента.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на межвузовской конференции, посвященной 70-летию кафедры аналитической химии СГУ (Саратов, 2000), Всероссийской конференции "Актуальные проблемы аналитической химии" (Москва, 2002), Всероссийском симпозиуме "Современные проблемы хроматографии" (к 100-летию со дня рождения К.В. Чмутова) (Москва, 2002), Международном симпозиуме "Разделение и концентрирование в аналитической химии" (к юбилею академика Ю.А. Золотова) (Краснодар, 2002), Всероссийском симпозиуме "Современные проблемы хроматографии" (Москва, 2002), Ш Черкесовских чтениях "Проблемы аналитической' химии" (Саратов, 2002) Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам "Ломоносов 2003" (Москва, 2003), Международном Форуме "Аналитика и Аналитики" (Воронеж, 2003), IV Всероссийской конференции молодых ученых "Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии" (Саратов, 2003), Всероссийском симпозиуме "Хроматография и хроматографические приборы" (Москва, 2004)

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 12 работ в виде 1 статьи в журнале, 1 депонированной рукописи, 3 статей в сборниках и 7 тезисов докладов на Международных и Всероссийских конференциях.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, трех глав экспериментальной части, выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Работа изложена на страницах, содержит рисунков^Ри таблиц^ список использованной литературы состоит из /¿^наименований.

Диссертационная работа выполнена при поддержке гранта РФФИ № 01-03-32649а.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Хроматографирование проводили методом ТСХ на пластинах с закрепленным слоем сорбента. Использовали коммерческие пластины следующих марок: силуфол (Чехословакия), сорбфил (Россия), полиамид (Германия), сорбтон - RP-2, плазмахром - RP-3 (Россия), RP — 18 (Германия) с

УФ-индикатором. В качестве подвижных фаз использовали водные растворы и водно-органические смеси. Объем ПФ составлял 5 мл, объем наносимой пробы 1 мкл. Идентификацию хроматографических зон проводили на видеоденситометре «Сорбфил» (Краснодар) в УФ- (254 и 365 нм) и видимой областях, как без, так и после химической обработки хроматограмм. Оптическую плотность и спектры поглощения соединений в водно-органических ПФ регистрировали на спектрофотометре СФ-46 и НР-8452 А. Измерения рН растворов проводили на иономере И-120.2.

Объектами исследований явились органические реагенты различных классов: азосоединения (метиловый оранжевый (МО), метиловый красный (МК), люмогаллион (ЛГ), тропеолин 0 (ТР-0), тропеолин 000 (TP-000), кислотный хром темно-синий (КХТС), эриохром черный Т (ЭХЧ-Т)), основные реагенты трифенилметанового ряда (кристаллический фиолетовый (КФ), метиловый фиолетовый (МФ), бриллиантовый зеленый (БЗ), малахитовый зеленый (МлЗ), метиловый зеленый (МтЗ), фуксин (Ф)), кислотные реагенты ксантенового ряда (флуоресцеин (ФЛ), эритрозин (ЭР), эозин (ЭО), дибромфлуоресцеин (ДБФЛ), бенгальский розовый (БР)), хинолины (6-гидроксихинолин, 8-гидроксихинолин, 6-нитрохинолин, этилхинолиний бромистый, этилхинолиний йодистый, 5.7-дихлор-8-оксихинолин, 5.7-бром-8-оксихинолин, хинозол, 2.3-дихлорхиноксалин, 2.3-дигидроксихиноксалин), о -нитроанилин (о-НА), м - нитроанилин (м-НА), п - нитроанилин (п-НА), хлорфенолы и аминофенолы (п-хлорфенол, дихлорфенол, п-хлор-о-аминофенол, п-нитро-о-аминофенол), аминокислоты (лейцин, изолейцин, треонин, метионин, тирозин, триптофан, гистидин, аланин, фенилаланин, 3.4-дигидроксифенилаланин, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота). Всего исследовано более 50 веществ.

В качестве модификаторов ПФ использовали циклодекстрины, отличающиеся размером полости и наличием заместителя: а — циклодекстрин - циклодекстрин 2 - гидроксипропил -- циклодекстрин (2-

ГП-Р-ЦД), у- циклодекстрин (у-ЦД), щцроксипропил у-- циклодекстрин (ГП-в диапазоне концентраций М

Для оценки эффективности и селективности процесса разделения исследуемых соединений в циклодекстриновых и водно-органических ПФ использовали следующие характеристики: число теоретических тарелок высоту, эквивалентную теоретической тарелке (ВЭТТ), коэффициент селективности Для выявления стадии, определяющей подвижность

разделяемых соединений в ПФ, содержащих ЦД, рассчитывали коэффициенты распределения сорбатов в системах вода - ЦД, вода - НФ, ЦД - НФ.

Хроматографическое поведение сорбатов в водных ПФ, модифицированных органическими растворителями, электролитами и

циклодекстринами

Водно-органическиеПФ

Предварительные исследования показали, что при использовании циклодекстринов наиболее эффективно применение подвижных фаз средней полярности: Полиамида, Сорбтона и Плазмахрома. В связи с этим, изучено хроматографическое поведение на Полиамиде указанных выше рядов соединений в водно-органических ПФ на основе протонных (этиловый, изопропиловый, изобутиловый спирты) и апротонных (ацетонитрил) растворителей, которые наиболее часто используются в жидкостной хроматографии. Установлено, что в ПФ на основе воды подвижность на полиамиде практически всех соединений, не имеющих заряда, невелика (Яг < 0.1). Типичные примеры зависимостей подвижности изученных соединений от концентрации растворителя показаны на примере ряда хинолина (рис. 1). Из приведенных данных видно, что независимо от природы органического растворителя, с увеличением его концентрации в ПФ подвижность сорбатов, как правило, возрастает. Такое поведение согласуется с вытеснительным механизмом сорбции теории Хорвата и связано с преимущественной адсорбцией молекул растворителя на поверхности сорбента, усиливающей перенос сорбатов в ПФ. Аналогичным образом изменяется подвижность производных анилина и фенола.

Рис. 1. Влияние концентрации этанола (а) и ацетонитрила (б) на подвижность хинолинов. Са=Ы0"3 М НФ: полиамид. 1 - этилхинолиний бромид, 2 — 2.3-дигидроксихиноксалин, 3 - 6-нитрохинолин, 4 - 6-гидроксихинолин.

Хроматографическое поведение в этаноле, изопропаноле и

ацетонитриле имеет свои особенности. Так, в этанольных ПФ подвижность аминокислот увеличивается при повышении содержания спирта до 30 об. %. Дальнейшее увеличение концентрации этанола уменьшает величину Яг, что

связано с увеличением- сорбции аминокислот на поверхности сорбента модифицированного растворителем. При повышении концентрации ацетонитрила подвижность аминокислот монотонно уменьшается. Подвижность азосоединений и реагентов трифенилметанового ряда, при введении органических растворителей изменяется мало и величины Яр значительно меньше 0.1 (табл. 1).

Таблица 1.

Влияние концентрации этанола на подвижность органических реагентов.

Названия веществ Концентрация этанола в ПФ, об. %

10 20 30 40 50 60 70 80 90

Метиловый красный 0 0 0 0.01 0.04 0.06 0.1 0.13 0.14

Метиловый оранжевый 0 0 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.06 0.07

Флуоресцеин 0 0 0 0 0 0 0.06 0.26 0.51

Эритрозин 0 0 0 0 0 0 0.05 0.19 0.38

Подвижные фазы вода-электролит

Влияние ионной силы на хроматографическое поведение сорбатов зависит от их природы. Так показано, что при увеличении ионной силы (ц) подвижность флуоресцеинов и реагентов трифенилметанового ряда незначительно повышается (рис. 2 а). В случае азосоединений, нитроанилинов, фенолов и аминокислот рост уменьшает величину (рис. 2 б).

Рис. 2. Зависимость подвижности флуоресцеинов (а) и нитроанилинов (б) от ионной силы раствора. Са=1-10'1 М. НФ: полиамид, а) 1 - ФЛ, 2 - ЭО, 3 - ЭР. б) 1 - м-НА, 2 - п-НА, 3 - о-НА.

Установлено, что размер катиона щелочного металла электролита практически не влияет на подвижность сорбатов. В ряду анионов

8

с ростом эффективного радиуса (0.181, 0.189, 0.196, 0.206 нм, соответственно) подвижность сорбатов немного уменьшается.

Подвижные фазы вода - циклодекстрины

Анализ полученных результатов позволил выявить следующие факторы, влияющие на эффективность действия циклодекстринов в ТСХ:

- природа неподвижной фазы;

- природа и концентрация ЦД;

- изомерия положения заместителей молекулы-гостя.

Пример существенного влияния природы неподвижной фазы на хроматографическое поведение исследуемых веществ приведен на рис.3. Хроматографические зоны на полярных неподвижных фазах (силуфол, сорбфил), а также неполярных (ЯР — 18 или силикагель, модифицированный катионным ПАВ (ЦТАБ)), либо сильно размыты, либо имеют очень маленькие значения Щ т.е. оба типа НФ не пригодны для разделения анализируемых веществ в ПФ на основе циклодекстринов. Хроматографические зоны сорбатов на сорбентах средней полярности (Полиамиде, Плазмахроме ЯР-3, Сорбтоне ЯР-2) более компактны. Поэтому в дальнейшей работе использовали преимущественно эти неподвижные фазы.

Л оО о 0 0 0 0 о 0

1 2 1 2 1 2 1 2 1 г 1 2 1 2

а б в г д е ж

Рис. 3. Влияние природы НФ. Ск = 1-Ю"3 М. С(2-ГП-Р-ЦД) = 0.01, С(ГП-у-

ЦД)=0.004 М. 1 - этилхинолиний I, 2 - ЭО. а) силикагель, б) силуфол, в) сорбфил, г) полиамид, д) плазмахром (ЯР - 3), е) ЯР — 18, ж) силикагель, модифицированный ЦТА.

Показано, что присутствие в ПФ циклодекстринов, независимо от их природы, как правило, увеличивает подвижность сорбатов. Эффективность и селективность разделения веществ в подвижных фазах, содержащих ЦД, зависит от концентрации, размера полости ЦД и присутствия в его молекуле заместителя. Так, из рис. 4 видно, что при небольшой концентрации р-ЦД хроматографические зоны флуоресцеинов на сорбенте ЯР-3 сильно размыты; их полное разделение на ЯР-3 при той же концентрации модификатора

наблюдается лишь в ПФ на основе ГП-у-ЦД. Это, вероятно, свидетельствует о том, что связывание происходит преимущественно по ксантеновому фрагменту молекул флуоресцеинов.

Рис. 4. Хроматограммы реагентов ксантенового ряда. ЫО3 М. НФ: ЯР - 3. 1 - флуоресцеин, 2 -эритрозин, 3 - эозин, а) С(ГП-у-ЦД) = 0.004 М; б) С(Р-ЦД) = 0.006 М.

Рис. 5. Зависимость подвижности диоксиксантеновых реагентов от концентрации ГП-у-ЦД в ПФ. НФ: ЯР—З.Са = 1-Ю"3 М. 1 - флуоресцеин, 2 - эритрозин, 3 — эозин, 4 — бенгальский розовый

Концентрационная зависимость подвижности в системе вода ГП-у-ЦД представлена на рис. 5. Видно, что при концентрации ГП-у-ЦД в воде больше 0.01 М величина Яг практически не изменяется. Из рис. 3 и 4 также следует, что чем гидрофильнее сорбат, тем больше его подвижность, что характерно для обращенно-фазовой хроматографии.

Влияние заместителя в молекуле ЦД рассмотрено на примере разделения хинолинов. Установлено, что подвижность хинолинов в 2-ГП-Р-ЦЦ выше, чем Известно, что введение в молекулу ЦД алкильных

заместителей изменяет её форму и размер, что, вероятно, и способствует более эффективному включению сорбатов в полость ЦД. Кроме того, в ПФ на основе 2-ГП-Р-ЦД хинолины имеют более четкие сферические зоны. Такое поведение хинолинов в ПФ на основе соответствует описанному в литературе для

соединений, имеющих в молекуле два ароматических кольца.

Влияние ЦД на разделение изомеров положения заместителя в молекуле-госте, образующей комплексы включения, показано на примере нитроанилинов (рис. 6). Установлено, что в интервале концентраций а- И Р-ЦЦ (0.02-=-0.10) М подвижность нитроанилинов увеличивается. В соответствии с закономерностями обращенно-фазовой хроматографии п-НА элюируется первым, а более гидрофобный о-НА - последним. Размер полости молекулы Р-ЦЦ больше, чем у а-ЦД, поэтому все хроматографические зоны нитроанилинов в ПФ на основе имеют размытый вид.

Рис. 6. Зависимость подвижности

нитроанилинов от концентрации а-ЦД в ПФ. Ся = 1-Ю"3 М. НФ:

полиамид. 1 — п-НА, 2 - м-НА, 3 — п-НА.

Кроме изомеров положения заместителя найдены условия разделения оптических изомеров некоторых аминокислот. Так, Б- и Ь- -изомеры триптофана возможно разделить лишь в (-ЦД ПФ в интервале концентраций

ЦЦ 0.006-5-0.02 М на пластинах Силикагель, модифицированных ЦТА; D- и L--

изомеры апанина в Р-ЦД (0 003 М), дигидроксифенилаланина в а-ЦД (0 05 М) ПФ на пластинах Силикагель.

Совместное влияние циклодекстринов и органического растворителя

С целью улучшения эффективности и селективности разделения сорбатов в циклодекстриновых ПФ, нами исследовано влияние добавок органического растворителя на хроматографическое поведение веществ. Установлено, что для большинства систем, независимо от природы циклодекстрина, введение органического растворителя резко уменьшает что особенно ярко выражено при добавках спиртов (рис. 7). Установленные закономерности характерны для циклодекстринов различной природы и могут быть объяснены конкурирующим включением молекул спирта в полость ЦЦ, препятствующим образованию комплекса «гость-хозяин» с молекулой сорбата. Изменения хроматографических характеристик сопровождаются улучшением компактности и четкости хроматографических зон анализируемых веществ (азосоединений, хлорфенолов, анилинов).

Рис. 7. Зависимости Rf сорбатов от концентрации этанола. ПФ: а-ЦД (0.01 М). НФ:полиамид. С^ЫО3 М. а) 1 - п-НА, 2 - м-НА, 3 - о-НА; б) 1 -дихлорфенол, 2 - п-нитро-о-аминофенол, 3 - п-хлорфенол.

Совместное влияние циклодекстринов и электролитов

Установлено, что увеличение ионной силы раствора, так же как и введение в ПФ органического растворителя, уменьшает подвижность всех сорбатов в циклодекстриновых ПФ, однако не столь резко (рис. 8). Возможно, как и в случае спирта, протекает конкурирующая реакция

комплексообразования между ЦД и электролитом, концентрация ионов которого на несколько порядков больше концентрации сорбатов. Основным положительным результатом введения электролита в циклодекстриновые ПФ является существенное улучшение формы зон сорбируемых веществ (рис. 9). Этот вывод подтвержден расчетом параметров эффективности разделения.

а б

Рис.8. Зависимость подвижности от ионной силы раствора. CR=1-I0"3 М. НФ: RP-3.а)ПФ: а-ЦД(О.ОШ)- Н20 - KCl. 1-п-НА, 2-м-НА, 3-о-НА. б) ПФ: вода - ГП-у-ЦЦ (0.004 М) - Na2S04. 1 - ФЛ, 2 - ДБФЛ, 3 - БР.

Рис. 9. Хроматограммы азосоеди-нений. Са=Н0"3 М. НФ: ЫР-3.

а) водные растворы р-ЦЦ (0.01 М) в отсутствие N82804;

б) водные растворы р-ЦД (0.01 М) в присутствии Ыа2804.

1 - КХТС, 2 - ЭХЧ Т, 3 - МК.

Нами установлено, что на подвижность сорбатов в ПФ на основе ЦД в ряду хлорид, бромид и иодид-иоиов существенно влияет эффективный радиус аниона электролита: чем больше радиус аниона, тем меньше Радиус катионов электролита практически не влияет на удерживание всех сорбатов.

Количественные характеристики разделения сорбатов в циклодекстриновых подвижных фазах

В отличие от классического варианта ТСХ, селективность разделения веществ с использованием ПФ на основе ЦД зависит от специфики их распределения между неподвижной фазой и водой (К$ш), НФ и молекулами ЦЦ (Кбсо), а также распределения внутри самой ПФ, т.е. в системе вода - ЦД Количественная оценка распределения в указанных системах позволяет выявить процесс, оказывающий основное влияние на подвижность сорбата в условиях ТСХ с циклодекстриновыми подвижными фазами (табл. 2).

Из таблицы 2 видно, что присутствие в молекуле органического соединения гидрофобных атомов галогенов, например при переходе от флуоресцеина к эритрозину, или увеличение их числа при переходе от хлорфенола к дихлорфенолу, способствует уменьшению величины Сравнение констант показывает, что в большинстве случаев основное влияние на подвижность соединений в циклодекстриновых ПФ оказывает распределение их в системе вода-ЦД.

В отличие от ТСХ с мицеллярными ПФ, где электролиты практически не влияли на подвижность сорбатов, введение сильных электролитов в ПФ на основе ЦД уменьшает что подтверждено нами расчетом коэффициентов распределения сорбатов в системах вода-ЦД и НФ-ЦД (табл. 3).

Таблица 2.

Коэффициенты распределения Ктж, в ЦД ПФ.

Сорбаты К5\у | К.со\у,Ю 'г

а-ЦД

о — нитроанилин 40 0.37

п - нитроанилин 8.0 0.49

6-нитрохинолин 24 0.70

6-гидроксихинолин 24 0.99

этилхинолиний бромистый 7.7 6.3

п-хлорфенол 21 0.53

дихлорфенол 2.7 0.11

ГП-у-ЦД

флуоресцеин 12 34

эритрозин 2.7 12

а-ЦД

тропеолин 0 36 2.4

тропеолин ООО 67 6.1

метиловый красный 14 3.4

метиловый оранжевый 2.2 3.8

люмогаллион 3.4 2.4

Из таблицы 2 видно, что присутствие в молекуле органического соединения гидрофобных атомов галогенов, например при переходе от флуоресцеина к эритрозину, или увеличение их числа при переходе от хлорфенола к дихлорфенолу, способствует уменьшению величины Ксо\у-Сравнение констант показывает, что в большинстве случаев основное влияние на подвижность соединений в циклодекстриновых ПФ оказывает распределение их в системе вода-ЦД.

В отличие от ТСХ с мицеллярными ПФ, где электролиты практически не влияли на подвижность сорбатов, введение сильных электролитов в ПФ на основе ЦД уменьшает что подтверждено нами расчетом коэффициентов распределения сорбатов в системах вода-ЦД и НФ-ЦД (табл. 3).

Таблица 3.

Коэффициенты распределения в ПФ на основе ЦД в присутствии

электролита.

Сорбаты К^ху К-сош

а-ЦД (0.01 МКС1)

о - нитроанилин 512 -3.2

м — нитроанилин 4.3 0.08

п — нитроанилин 2.4 0.16

п-хлорфенол 4.3 0.07

дихлорфенол 3.2 0.37

Практическое применение метода ТСХ в подвижных фазах на основе циклодекстринов

Показана возможность применения ПФ на основе ЦД для оценки степени чистоты коммерческих препаратов галогензамещенных флуоресцеина (рис. 10). Из рисунка видно, что для компонентов, входящих в состав препарата эритрозина, в ПФ на основе значительно больше, чем в традиционно

рекомендуемых водно-органических ПФ. Аналогично, значительно лучшее разделение компонентов в ПФ на основе получено для препаратов

эозина и дибромфлуоресцеина.

Рис. 10. Хроматограммы ЭР (изготовитель - завод им. Войкова). НФ: ЫР-З. ПФ: 1 - 0.004М ГП-у-ЦЦ, 2 - диоксан-23 %-ый М^ОН-изопропанол (2:1:1) (зона ЭР темная).

С использованием ПФ на основе ЦД идентифицированы синтетические красители, содержащиеся в красках для пасхальных яиц, в капсуле лекарственного препарата "Интетрикс" (Франция), в фр>ктовых леденцах "Бон Пари" (Россия) (табл. 4).

Проведено количественное хроматографическое определение индигокармина в капсуле лекарственного препарата "Интетрикс" и тартразина в фруктовых леденцах "Бон Пари", где они являются основными красящими веществами. Правильность определения подтверждена

спектрофотометрическим методом. Результаты приведены в табл. 5.

С использованием ЦД ПФ разработана методика определения хинозола в лекарственном препарате "Контрацептин Т" (табл. 5). Для хроматографического определения хинозола использовали метод градуировочного графика. Интервал линейности составляет пять порядков. Результаты определения в сравнении с спектрофотометрией, приведены в табл. 5.

Содержание индигокармина в лекарственном препарате "Интетрикс" составляет 0.03 %, хинозола в лекарственном препарате "Контрацептин Т" -0.32 % от общей массы.

О

«о

<о>

<5

1 2

Таблица 4.

Идентификация ПК в пищевых продуктах и лекарственных препаратах на пластинах RP - 3 (п=3, Р=0.95).

Объект исследования ПФ я,

свидетеля красителя в объекте

Лекарственный препарат "Интетрикс" 9-10"3 М Р-ЦД (0.01 М КС1) 0.60 (Е 132) 0.61

Фруктовые леденцы "Бон Пари" 7-10"3 М Р-ЦД (0.01 М^БО,,) 0,39 (Е 102) 0,40

Красители для пасхальных яиц 7-10"3 М Р-ЦД (0.01 М№2В04) 9-10"3 МР-ЦД (0.01 МКС1) 0.39 (Е 102) 0.60 (Е 132) 0.39 0.59

Красители для пасхальных яиц 7-Ю"3 М р-ЦД (0.01 М №2804) 9-10"3 М р-ЦД (0.01 МКС1) 0.39 (Е 102) 0.60 (Е 132) 0.39 0.60

Таблица 5.

Результаты количественного определения органических соединений в пищевых объектах и лекарственных препаратах (п=3, Р=0.95)

Объекты Найдено методами, мг/кг

Тонкослойной хроматографии Спектрофотометрии

Х±АХ Бг Х±6Х Бг

Лекарственный • препарат "Интетрикс" (индигокармин) 0.29+0.04 0.03 0.275±0.012 0.02

Конфеты "Бон Пари" (тартразин) 38.5+1.3 0.02 40.5±2.1 0.03

Лекарственный препарат "Контрацептин Т" (хинозол) 2.15±0.1 0.04 1.9510.15 0.04

выводы

1. Показано, что ПФ на основе водных растворов ЦД позволяют эффективно разделять методом ТСХ органические соединения различной природы. Лучшее разделение достигается на пластинках ТСХ, содержащих сорбенты средней полярности (полиамид, плазмахром ЯР-3, сорбтон ЯР-2). Полярные (силуфол, сорбфил) и неполярные (ЯР-18) сорбенты не пригодны для разделения веществ в водных циклодекстриновых ПФ.

2. Установлено, что основные закономерности разделения органических соединений методом ТСХ в подвижных фазах, содержащих циклодекстрины, состоят в следующем:

- увеличении подвижности сорбатов с ростом концентрации циклодекстринов в подвижной фазе;

- уменьшении подвижности сорбатов при дополнительном

модифицировании циклодекстриновых подвижных фаз электролитами или органическими растворителями, которое сопровождается улучшением формы хроматографических зон и эффективности разделения веществ;

- влиянии природы циклодекстрина (размера полости, присутствия в молекуле ЦД заместителей) на эффективность и селективность разделения.

3. Рассчитаны коэффициенты распределения сорбатов в системах вода-ЦД, вода-НФ, ЦД-НФ и показано, что в большинстве случаев определяющее влияние на разделение оказывает распределение в системе вода-ЦД. Установлено, что введение электролитов в ПФ, содержащие ЦД, приводит к увеличению роли распределения в системе вода-НФ. Рассчитаны параметры, характеризующие эффективность и селективность разделения в циклодекстриновых ПФ.

4. Предложены методики оценки степени чистоты препаратов органических реагентов ряда флуоресцеина и моноазосоединений. Разработаны методики количественного определения органических соединений в пищевых объектах и лекарственных препаратах.

Основные результаты работы изложены в следующих публикациях:

1. Атаян В.З., Сумина Е.Г., Штыков С.Н. Тонкослойная хроматография азосоединений в подвижных фазах, модифицированных циклодекстринами // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2003. - Т.З, вып.4. - С. 392-398.

2. Атаян В.З., Сумина Е.Г., Штыков С.Н. Циклодекстрины в жидкостной хроматографии // Саратов. Гос. Ун-т. - Саратов, 2004. - 72с. - Деп. В ВИНИТИ 07.04.04, № 574-В2004.

3. Атаян В.З., Сумина Е.Г., Штыков С.Н. Циклодекстрины как основные компоненты подвижных фаз в тонкослойной хроматографии // Органические реагенты в организованных средах: Сб. науч. статей. - Саратов: изд-во СГУ. -2003. Вып. 7.-СПб.

4. Атаян В.З., Сумина Е.Г. Тонкослойная хроматография диоксиксантеновых и триарилметановых реагентов в подвижной фазе на основе -циклодекстрина // Органические реагенты в организованных средах: Сб. науч. ст. — Саратов: изд-во СГУ. - 2003. Вып. 7. - С. 153.

5. Атаян В.З., Сумина Е.Г., Штыков С.Н. Расчёт коэффициентов распределения

некоторых органических реагентов трифенилметанового ряда в системе вода - Р-циклодекстрин методом ТСХ // Проблемы аналит. химии. (III Черкесовские чтения): Сб. науч. ст. - Саратов, 2002. - С.63-65 .

6. Атаян В.З., Сумина Е.Г., Штыков С.Н. Применение Р-циклодекстрина в ТСХ

органических реагентов ксантенового и трифенилметанового ряда // Актуальные проблемы аналитической химии. Тез. докл. Всерос. конф. Москва, 11-15 марта. 2002.-Т.2.-С. 103-104.

7. Сумина Е.Г., Атаян В.З., Штыков С.Н. Аналитические возможности подвижных фаз на основе -циклодекстрина в ТСХ органических реагентов трифенилметанового ряда // Всерос. симп. "Современные проблемы хроматографии" (к 100-летию со дня рождения К.В. Чмутова): Тез. докл., Москва, 18-22 марта. 2002.-С.133.

8. Атаян В.З., Сумина Е.Г., Штыков С.Н. Анализ пищевых красителей методом ТСХ с циклодекстриновыми подвижными фазами // Междунар. симп. "Разделение и концентрирование в аналитической химии" (к юбилею академика Ю.А. Золотова). Краснодар, 6-11 октября, 2002. - С.104.

9. Атаян В.З., Сумина Е.Г., Штыков С.Н. Оценка степени чистоты и разделение

моноазокрасителей методом тонкослойной хроматографии в подвижных фазах, модифицированных -циклодекстрином // Междунар. форум "Аналитика и Аналитики". Воронеж, 2-6 июня. 2003. - Т.2. - С.186.

10. Атаян В.З., Сумина Е.Г., Штыков С.Н. Разделение производных бензола методом тонкослойной хроматографии в циклодекстриновых подвижных фазах // Материалы Междунар. конф. студентов и аспирантов по фундамент, наукам "Ломоносов 2003". Москва. 15-18 апр. 2003. - СЮ.

11. Атаян В.З., Лазарева Ю.С, Сумина Е.Г., Штыков С.Н., Кармышова А.Н. Хроматографическое поведение хинолинов в циклодекстриновых

подвижных фазах // Соврем, проблемы теорет. и эксперим. химии: Тез. докл. IV Всерос. конф. молодых ученых, 23-25 июня 2003. Саратов. 2003. С.134. 12.Сумина Е.Г., Атаян В.З., Штыков С.Н. Применение подвижных фаз на основе циклодекстринов и сильных электролитов для разделения азосоединений методом тонкослойной хроматографии // Всерос. симп. "Хроматография и хроматографические приборы": Тез. докл. - Москва, 1519 марта, 2004.-С. 159.

04" 14428

Автореферат

Атаяи Варсения Загидовна

Тонкослойная хроматография органических соединений в водных подвижных фазах на основе циклодекстринов

Подписано в печать 24.05.2004 г. Формат 60x84 1/16. Объем 1,0 усл. печ. л. Тираж 100 экз. Заказ №¿3

Типография издательства Саратовского государственного университета им. Н.Г. Чернышевского, 410012, г. Саратов, ул. Астраханская, 83.

Введение

ГЛАВА 1. Обзор литературы. Применение циклодекстринов в жидкостной хроматографии

1.1. Краткая характеристика циклодекстринов

1.2. Циклодекстрины как основные компоненты подвижных фаз в тонкослойной хроматографии

1.3. Применение циклодекстринов в составе подвижных фаз в

1.4. Разделение методом ВЭЖХ на сорбентах, модифицированных циклодекстринами

ГЛАВА 2. Экспериментальная часть

2.1. Объекты исследования

2.2. Техника эксперимента в тонкослойной хроматографии

2.3. Расчет коэффициентов распределения в системе вода - ЦД - НФ

ГЛАВА 3. Хроматографическое поведение сорбатов в водных подвижных фазах, модифицированных органическими растворителями, электролитами и циклодекстринами

3.1. Влияние природы и концентрации органического растворителя

3.2. Влияние концентрации и природы ионов сильного электролита

3.3. Влияние концентрации и природы циклодекстринов

3.4. Совместное влияние циклодекстринов и органических растворителей

3.5. Совместное влияние циклодекстринов и сильных электролитов

ГЛАВА 4. Количественные характеристики разделения сорбатов в циклодекстриновых подвижных фазах в отсутствие и присутствии сильных электролитов

ГЛАВА 5. Практическое применение метода ТСХ в подвижных фазах на основе циклодекстринов и электролитов

5.1. Определение степени чистоты эритрозина с применением циклодекстриновых ПФ на основе ГП-у-ЦД

5.2. Разделение бинарных смесей реагентов ряда флуоресцеина

5.3. Идентификация красителей в пищевых объектах и лекарственных препаратах

5.4. Количественное определение индигокармина в капсуле лекарственного препарата "Интетрикс"

5.5. Хроматографическое определение тартразина в фруктовых леденцах "Бон Пари"

5.6. Хроматографическое определение производных 8-оксихинолина в лекарственных препаратах

Выводы

Циклодекстрины (ЦД) применяются в различных областях аналитической химии для улучшения эффективности разделения и определения органических соединений, в фармацевтической химии для повышения стабильности, улучшения растворимости и биологической активности лекарственных препаратов, в парфюмерии для фиксации летучих веществ, сельском хозяйстве для стабилизации неустойчивых гербицидов, инсектицидов и фунгицидов, в пищевой промышленности и т.д.

Уникальной способностью ЦД является образование комплексов включения «гость-хозяин», в которых полость циклодекстрина выступает в роли «хозяина» для широкого круга органических и неорганических молекул и ионов, образуя соединения за счет гидрофобного, дисперсионного взаимодействий и водородной связи. Избирательность включения определяется соответствием размера полости циклодекстрина размеру молекулы-гостя, а также эффективностью связывания субстрата с внутренней поверхностью полости ЦД.

Известно, что ЦД широко применяются в высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и гораздо реже в тонкослойной хроматографии (ТСХ). В связи с этим возможности их использования в ТСХ в полной мере не изучены. Это касается как круга веществ, которые можно разделять в подвижных фазах на основе ЦД, так и влияния на процесс разделения сильных электролитов и органических растворителей, способных изменять условия солюбилизации веществ в полости ЦД. В связи с этим, необходима постановка системных исследований, направленных на изучение действия указанных факторов и выявление путей оптимизации хроматографического разделения в методе ТСХ.

Цель работы заключается в выявлении закономерностей хроматографического разделения органических соединений методом ТСХ в водных подвижных фазах модифицированных циклодекстринами.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить влияние природы и концентрации органического растворителя и сильных электролитов на хроматографическое разделение органических соединений различных классов методом ТСХ;

- выявить влияние природы неподвижной фазы и ЦД (размер полости и присутствие заместителя), совместное влияние ЦД и органического растворителя, ЦД и электролита на закономерности хроматографического поведения сорбатов в методе ТСХ;

- рассчитать коэффициенты распределения сорбатов в системах вода -ЦД и вода НФ и параметры, характеризующие эффективность их разделения;

- разработать методики определения степени чистоты препаратов органических реагентов, разделения и количественного определения различных органических соединений и пищевых красителей в реальных объектах.

Научная новизна:

- выявлены закономерности влияния концентрации и природы циклодекстринов в подвижной фазе в отсутствие и присутствии сильных электролитов и органических растворителей на подвижность и селективность разделения производных бензола, 8-оксихинолина, аминокислот, органических реагентов трифенилметанового ряда и азосоединений;

- рассчитаны коэффициенты распределения сорбатов в системе вода -циклодекстрин и параметры, характеризующие эффективность разделения;

- найдены оптимальные условия разделения соединений различных классов в подвижных фазах на основе циклодекстринов, показана возможность применения циклодекстриновых ПФ в ТСХ для

разделения и определения степени чистоты коммерческих препаратов, повышения эффективности и селективности разделения и определения пищевых красителей и лекарственных препаратов;

Практическая значимость. Полученные результаты позволяют расширить возможности метода ТСХ, исключить использование в подвижных фазах токсичных и неудобных для практического использования органических растворителей. На основе результатов проведенных исследований: разработаны методики оценки степени чистоты и разделения препаратов органических реагентов методом тонкослойной хроматографии с циклодекстриновыми водными подвижными фазами; разработаны методики определения пищевых красителей в лекарственном препарате "Интетрикс", пищевых объектах, хинозола в лекарственной форме "Контрацептин Т".

На защиту выносятся; результаты изучения влияния концентрации и природы циклодекстринов в отсутствии и в присутствие сильных электролитов и органических растворителей на хроматографическое поведение органических соединений различных классов; оптимальные условия разделения соединений различных классов в ПФ на основе циклодекстринов; коэффициенты распределения сорбатов в системе вода-ЦД и параметры, характеризующие их эффективность; результаты применения ПФ на основе циклодекстринов для оценки степени чистоты и результаты определения органических соединений в пищевых объектах и лекарственных препаратах.

Апробация результатов исследования. Основные результаты работы доложены на конференции, посвященной 70-летию кафедры аналитической химии и химической экологии СГУ (Саратов, 2000), Всероссийской конференции "Актуальные проблемы аналитической химии" (Москва, 2002), Всероссийском симпозиуме "Современные проблемы хроматографии" (к 100 летию со дня рождения К.В. Чмутова) (Москва, .2002), Международном симпозиуме "Разделение и концентрирование в аналитической химии" (к юбилею академика Ю.А. Золотова) (Краснодар, 2002), Всероссийском симпозиуме "Современные проблемы хроматографии" (Москва, 2002), III Черкесовских чтениях "Проблемы аналитической химии" (Саратов, 2002) Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам "Ломоносов 2003" (Москва, 2003), Международном Форуме "Аналитика и Аналитики" (Воронеж, 2003), IV Всероссийской конференции молодых ученых "Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии" (Саратов, 2003), Всероссийском симпозиуме "Хроматография и хроматографические приборы" (Москва, 2004).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 12 работ: 1 статья в центральной печати, 1 депонированная рукопись, 3 статьи в сборниках, 7 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 152 страницах, включая введение, 5 глав, выводы, список литературы (127 источников). Работа содержит 60 рисунков и 23 таблицы.

ВЫВОДЫ

1. Показано, что ПФ на основе водных растворов ЦД позволяют эффективно разделять методом ТСХ органические соединения различной природы. Лучшее разделение достигается на пластинках ТСХ, содержащих сорбенты средней полярности (полиамид, плазмахром RP-3, сорбтон RP-2). Полярные (силуфол, сорбфил) и неполярные (RP-18) сорбенты не пригодны для разделения веществ в водных циклодекстриновых ПФ.

2. Установлено, что основные закономерности разделения органических соединений методом ТСХ в подвижных фазах, содержащих циклодекстрины, состоят в следующем:

- увеличении подвижности сорбатов с ростом концентрации циклодекстринов в подвижной фазе;

- уменьшении подвижности сорбатов при дополнительном модифицировании циклодекстриновых подвижных фаз электролитами или органическими растворителями, которое сопровождается улучшением формы хроматографических зон и эффективности разделения веществ;

- влиянии природы циклодекстрина (размера полости, присутствия в молекуле ЦД заместителей) на эффективность и селективность разделения.

3. Рассчитаны коэффициенты распределения сорбатов в системах вода-ЦД, вода-НФ, ЦД-НФ и показано, что в большинстве случаев определяющее влияние на разделение оказывает распределение в системе вода-ЦД. Установлено, что введение электролитов в ПФ, содержащие ЦД, приводит к увеличению роли распределения в системе вода-НФ. Рассчитаны параметры, характеризующие эффективность и селективность разделения в циклодекстриновых ПФ.

4. Предложены методики оценки степени чистоты препаратов органических реагентов ряда флуоресцеина и моноазосоединений. Разработаны методики количественного определения органических соединений в пищевых объектах и лекарственных препаратах.

1. Штыков С.Н. Организованные среды - стратегия, основанная на принципах биоподобия в аналитической химии // Вестник ХНУ. - 2000, № 495. Химия, вып. 6(29). - С.9-14.

2. Штейнман А.А. Циклодекстрины // ЖВХО. 1985. - Т.30, №5. с.514-518.

3. Компанцева Е.В. Производные |3-циклодекстрина и перспективы их использования в фармации / Е.В. Компанцева, М.В. Гаврилин, Л.С. Ушакова // Хим.фарм. журн. 1996. № 4. - С.43-46.

4. Politzer I.R. TLC of p-nitroanilines and their analogues with cyclodextrins in the mobile phase / I.R. Politzer, K.T. Crago, T. Hollin, M. Young // J. Chromatogr. Sci. 1995. - Vol.33, № 6. -P.316-320.

5. Hinze W.L. Thin-layer chromatography with urea-solubilized P-cyclodextrin mobile phase / W.L. Hinze, D.Y. Pharr, Z.S. Fu, W.G. Burkert // Anal. Chem. 1989. - Vol.61. - P.422-428.

6. Cserhati T. Reversed-phase thin-layer chromatography of some chlorophenols in the presence of a soluble (3-cyclodextrin polymer / T. Cserhati, J. Szejtli, E. Fenyvesi // J. Chromatogr. 1988. - Vol.439. -P.393-403.

7. Cserhati T. Charge- transfer chromatographic study an inclusion complex formation between two hydroxypropyl-p-cyclodextrins and some chlorophenols / T. Cserhati, J. Szejtli, M. Szogyi // J. Chromatogr. 1990. -Vol.509.-P.255-262.

8. Hinze W.L. Thin-layer chromatography separation of ortho, meta and para substituted benzoic acid and phenols with aqueous solutions of ot-cyclodextrin / W.L. Hinze, D.W. Armstrong I I Anal. Lett. 1980. - Vol.13. -P. 1093-1100.

9. Burkert W.G. The use of a-cyclodextrin mobile phase in the thin-layer chromatography separation of ortho, meta and para substituted phenols /

10. Ward T.J. Improved cyclodextrin chiral phases: a comparison and review / T.J. Ward, D.W. Armstrong // J. Liquid Chromatogr. 1986. - Vol. 9. - P. 407-423.

11. Huynh T.K.X. Adsorbtion chromatography on cellulose XIII. Chromatography with aqueous solutions of carbohydrates as eluents / T.K.X. Huynh, M. Lederer, E. Leipzig-Pagani // J. Chromatogr. A. 1995. -Vol.695.-P.160-164.

12. Huynh T.K.X. Adsorbtion chromatography on cellulose XI. Chiral separations with aqueous solutions of cyclodextrins as eluent / T.K.X. Huynh, M. Lederer // J. Chromatogr. A. 1994. - Vol.659. - P.191-197.

13. Cserhati T. Reversed-phase thin-layer chromatography of barbiturates in the presence of soluble (3-cyclodextrin polymer / T. Cserhati, J. Bojarski, E. Fenyvesi, J. Szejtli // J. Chromatogr. 1986. - Vol.351. - P.356-362.

14. Cserhati Т. Charge-transfer chromatographic study on the inclusion complex formation of some barbituric acid derivatives with various cyclodextrins / T. Cserhati, J. Szejtli, J. Bojarski // Chromatographia. 1989. - Vol.28, № 9/10. - P.455-458.

15. Darwish Y. Reversed-phase thin-layer chromatography of various pesticides in the presence of water-soluble P-cyclodextrin / Y. Darwish, T. Cserhati, E. Forgacs // J. Chromatogr. 1994. - Vol.38, № 7/8. - P.509-513.

16. Politzer I.R. Thin-layer chromatography of laser dyes and dye analogs with cyclodextrins in the mobile phase / I.R. Politzer, K.T. Crago, K. Amos, K. Mitchell, T. Hollin // Talanta. 1992. - Vol.39, №8. - P.953-958.

17. Cserhati T. Chromatographic properties of s-triazines in the presence of soluble p-cyclodextrin polymer / T. Cserhati, B. Bordas, E. Fenyvesi, J. Szejtli // J. Inclusion Phenom. 1983. - Vol.1. - P.53-59.

18. Lepri L. Separation of optical and structural isomers by planar chromatography with development by p-cyclodextrin solutions / L. Lepri, V. Coas, P.G. Desideri, L. Checchini // J. Planar Chromatogr. 1990. - Vol.3. -P.311-316.

19. Armstrong D.W. Use of hydroxypropyl- and hydroxyethyl-derivatized 3-cyclodextrins for the thin-layer chromatographic separation of enantiomers and diastereomers / D.W. Armstrong, J.R. Faulkner, S.M. Han // J. Chromatogr. 1988. - Vol.452. - P. 323-330.

20. Armstrong D.W. Cyclodextrin as chiral mobile phase additives in TLC // J. Chromatogr. 1988. - Vol.452. - P.331-345.

21. Han S.M. Enantiomeric separation by thin-layer chromatography / S.M. Han, D.W. Armstrong // Chem. Anal. (N.Y.) 1990. - V.108. - P.81-100.

22. Mack M. Separation of by thin-layer chromatography / M. Mack, H.-E. Hauck // J. Planar Chromatogr. 1989. - Vol.2. - P.190-193.

23. Hattori K. Host-guest chromatography // Bio Ind. 1987. - Vol.4. - P.327-338.

24. Duncan J.D. Chiral separations: a comparison of HPLC and TLC // J. Liquid Chromatogr. 1990. - Vol.13, № и. P.2737-2755.

25. Li S. Cyclodextrins and their applications in analytical chemistry / S. Li, W.C. Purdy//Chem. Rev. 1992. - Vol.92, № 6. - P. 1457-1470.

26. Schneiderman E. Cyclodextrins: a versatile tool in separation science / E. Schneiderman, A.M. Stalcup // J. Chromatogr. B. 2000. - Vol.745. - P.83-102.

27. Alak A. Thin-layer chromatography separation of optical, geometrical, and structural isomers / A. Alak, D.W. Armstrong // Anal. Chem. 1986. -Vol.58, №3.-P.582-584.

28. Armstrong D.W. Use of pseudophase TLC in teaching laboratories / D.W. Armstrong, K.H. Bui, R.M. Barry // J. Chem. Educ. 1984. - Vol.61, № 5. -P.457-458.

29. Duncan J.D. Chiral mobile phase additives in reversed-phase TLC // J. Liquid Chromatogr. 1990. - Vol.13, № 14. -P.2737-2755.

30. Armstrong D.W. Planar chromatographic separation of enantiomers and diastereomers with cyclodextrin mobile phase additives / D.W. Armstrong, F.-Y. He, S.M Han // J. Chromatogr. 1988. - Vol.448. - P.345-354.

31. Cserhati T. Complex-forming eluent additives in reversed-phase thin layer chromatography of methylated p-cyclodextrins / T. Cserhati, L. Szente, J. Szejtli // J. High Resolut. Chromatogr. and Chromatogr. Commun. 1984. -Vol.7, № 11. -P.635-636.

32. Retention properties of cyclodextrins on polyamide TLC plates / P.K. Zarzycki, J. Nowakowska, A. Chmielewska, H. Lamparczyk // J. Planar Chromatogr. 1996. - Vol.9. - P.260-263.

33. Guilleux J.-C. Towards a quantitative determination of retinoids complexed to cyclodextrin: the diphenyl polyene model / J.-C. Guilleux, K.N. Barnouin, D.A. Lerner // Anal. Chim. Acta. 1994. - Vol.293. - P. 141-149.

34. Cserhati T. Determination of cyclodextrin inclusion complex stability by reversed-phase thin-layer chromatography / T. Cserhati, E. Fenyvesi, J. Szejtli // Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung. 1983. - Vol.18. - P.60.

35. Armstrong D.W. Evaluation of partition coefficients to micelles and cyclodextrins via planar chromatography / D.W. Armstrong, G.Y. Stine // J. Amer. Chem. Soc. 1983. - Vol.105, № 10. - P.2962-2964.

36. Koizumi K. Analysis of branched cyclodextrins by high-performance liquid and thin-layer chromatography / K. Koizumi, T. Utamura, T. Kuroyanagi, S. Hizukuri, J. Abe // J. Chromatogr. 1986. - Vol.360. - P.397-406.

37. Lederer M. Adsorbtion chromatography on cellulose XIV. Some results using aqueous solutions of soluble cyclodextrin polymers as eluent / M. Lederer, H.K.N. Nquyen // J. Chromatogr. 1996. - Vol.723. - P.405-409.

38. Cserhati T. // J. Inclusion. Phenom. Macrocycl. Chem. 2000. - Vol.38. -P.440-447.

39. Lederer M. A simple alternative determination of the formation constant for the inclusion complex between rutin and (3-cyclodextrin / M. Lederer, E. Leipzig-Pagani // Anal. Chim. Acta. 1996. - Vol.329. - P.311-314.

40. Mohseni R.M., Puntubise R.J. Reversed-phase chromatographic separation of selected hydroxylaromatics with |3-cyclodextrins as a mobile phase additive // J. Chromatogr. 1990. - Vol.514, № 1. - P. 19-27.

41. Fujimura K. Reversed-phase retention behavior of aromatic compounds involving (3-cyclodextrin inclusion complex formation in the mobile phase / K. Fujimura, T. Ueda, M. Kitagawa // Anal. Chem. 1986. - Vol.58. -P.2668-2674.

42. Takenshi T. Stationary phase effect on enantioselectivity of dansyl phenylalanine in microcolumn liquid chromatography with y-cyclodextrin as mobile phase additive / T. Takenshi, N. Nagae // J. Chromatogr. 1992. -Vol.595.-P.121-124.

43. Shimada K. Retention behavior of derivatised amino acid and dipeptides in high-performance liquid chromatography using cyclodextrins as a mobile phase additive / K. Shimada, K. Hirakata // J. Liquid. Chromatogr. 1992. -Vol.15,№ 10. -P.1763-1771.

44. Luca C. Noi tipuni de compusi de inclusiune. III. Utilizarea compusilon de inclusine in cromatografie / C. Luca, C. Mihaila, A. Popa // Rev. chim. -1990.-Vol.41,№ 1. -P.50-58.

45. Roussel C. Cationic (3-cyclodextrin a new versatile chiral additive for separation of drug enantiomers by high-performance liquid chromatography / C. Roussel, A. Favrou // J. Chromatogr. A 1995. - Vol.704, № 1. - P.67-74.

46. Takeuchi Т. Stationary phase effect on enantioselectivity of dansyl phenylalanine in microcolumn liquid chromatography with y-cyclodextrin as mobile phase additive / T. Takeuchi, N. Nagae // Chromatogr. 1992. -Vol.595.-P.121-124.

47. Shimada K. Separation of the diastereomers of baclofen by high-performance liquid chromatography using cyclodextrin as a mobile phase additive / K. Shimada, M. Kuniko, M. Makiko // J. Liquid. Chromatogr.1993. Vol.16, № 15. - P.3311-3320.

48. Ameyibor E. Enantiomeric HPLC separation of selected chiral drugs using native and derivatised P-cyclodextrins as chiral mobile phase additives / E. Ameyibor, J.T. Stewart // J. Liquid. Chromatogr. Relat. Technol. 1997. -Vol.20, № 6. - P.855-869.

49. Pettit G.R. Procedures for the analysis of dolastatins 10 and 15 by high-performance liquid chromatography/ G.R. Pettit, D. Kantoci, D.L. Herald, G. Barcoczy, J.A. Slack // J. Liquid. Chromatogr. 1994. - Vol.17, № 1. -P.191-202.

50. Shimada К. Retention behavior of cardiac steroids using cyclodextrin in the mobile phase in high-performance liquid chromatography / K. Shimada, T.01, Y. Hirose, Y. Komihe // J. Chromatogr. 1989. - Vol.478, № 2. -P.339-347.

51. Shimada K., Nonaka M. Utility of cyclodextrin in mobile phase for high-performance liquid chromatographic separation of C2psteroids // J. Liquid. Chromatogr. 1991.-Vol.14, № 11. - P.2109-2117.

52. Cossebt M. Effect of |3-cyclodextrin in the mobile phase on the retention and indirect detection of non electrolytes in reversed-phase liquid chromatography II. Steroids / M. Cossebt, B. Sebille // J. Chromatogr. -1991.-Vol.552, № 1-2.-P.583-592.

53. Shimada K. Studies on neurosteroids. II. Retention behavior of derivatized 20-oxosteroids and their sulfates using high-performance liquid chromatography / K. Shimada, S. Nishimura // J. Liquid. Chromatogr.1995. Vol.18, № 9. -P.1691-1701.

54. Bazant L. p-Cyclodextrin as a selective agent for separation of selected aromatic acids by high-performance liquid chromatography / L. Bazant, M. Wurst, E. Smolkova-Keulemansova // J. Chromatogr. 1988. - Vol.445, №2. -P.337-352.

55. Garcia S.F. a-Cyclodextrin as a restricted access mobile phase for reversed-phase liquid chromatography with fluorimetric detection of phenolic compounds / S.F. Garcia, D.A. Nonas, J. Lovillo // Anal. Chim. Acta.1996.-Vol.328, № 1. P.73-79.

56. Mohseni R. Retention characteristics of several compound classes in reversed-phase liquid chromatography with (3-cyclodextrin as a mobilephase modifier / R. Mohseni, R.J. Hurtubise // J. Chromatogr. 1990. -Vol.499.-P.395-410.

57. Anigbogy V.C. Retention behavior of p-cyclodextrin complex of antracene and pyrene using reversed-phase liquid chromatography / V.C. Anigbogy, A.M. Penadela, T.T. Ndou // J. Chromatogr. 1992. - Vol.594, № 1-2. -P.37-43.

58. Zarzycki P. Retention behavior of the inclusion complexes of some polycyclic aromatic hydrocarbons with (3-cyclodextrin / P. Zarzycki, R. Ochocka, D. Sybilska // J. Chromatogr. 1991. - Vol.531, № 3-4. - P. 157162.

59. Vazquez M.L. Liquid chromatographic study of the interaction between aflatoxins and p-cyclodextrin / M.L. Vazquez, C.M. Franco, A. Cepeda, P. Prognon, G. Mahuzier // Anal. Chim. Acta. 1992. - Vol.269, № 2. -P.239-247.

60. Shimada K. High-performance liquid chromatographic separation of sensitive fluorescent derivatives of bile acids with cyclodextrin containingmobile phase / К. Shimada, M. Kuniko, I. Satoko // J. Liquid. Chromatogr. -1993.-Vol.16, № 18. P.3965-3976.

61. Seno M. Chromatographic behavior cyclodextrin complexes of nucleotides, nucleosides and their bases / M. Seno, M. Rin, K. Jwando // J. Chromatogr. 1990. - Vol.523. -P.293-299

62. Mitchel P. Drug and analogue structural relationships in chiral-separations with mobile phase additives / P. Mitchel, B.F. Clark // Anal. Proc. 1993. -Vol.30, № 2. -P.101-103.

63. Fujimura K. Retention behavior of some aromatic compounds on chemically bonded cyclodextrin silica stationary phase in liquid chromatography / K. Fujimura, T. Ueda, T. Ando // Anal. Chem. 1983. - Vol.55. - P.446-450.

64. Mohseni R.M. Changes in the entropy of hydroxyl aromatics in reversed-phase liquid chromatography with P-cyclodextrin in mobile phase / R.M. Mohseni, R.S. Hurtubies // J. Chromatogr. 1991. - Vol.537, № 1-2. -P.67-71.

65. Kawagchi Y. Chemically bonded cyclodextrin stationary phases for liquid chromatographic separation of aromatic compounds / Y. Kawagchi, M.

66. Tanaka, M. Nakae, К. Funazo // Anal. Chem. 1983. - Vol.55. - P.1852-1857.

67. Armstrong D.W. Liquid chromatographic separation of diastereoisomers and structural isomers on cyclodextrin bonded-phase / D.W. Armstrong, W.L. Hinze, H. Khanh // Anal. Chem. 1985. - Vol.57. - P.234-237.

68. Raleobogon M. Liquid chromatographic retention behavior and separation of chlorophenols on a (3-cyclodextrin bonded-phase column. Part III. Diaromatic chlorophenols / M. Raleobogon, W.C. Purdy // Can. J. Chem. -1990. Vol.68, №7. - P.1208-1214.

69. Ringo M.C. Pressure-dependent retention and selectivity in reversed-phase liquid chromatographic separations using (3-cyclodextrin stationary phases / M.C. Ringo, C.E. Evans // Anal. Chem. 1997, - Vol.69, № 4. - P.643-649.

70. Purdy W.S. Liquid chromatographic separation the enantiomers of dinitrophenyl amino acids using a P-cyclodextrin-bonded stationary phase / W.S. Purdy // J. Chromatogr. 1991 - Vol.543, №1. - P.105-112.

71. Duchateau A.L.L. Separations of benzf.isoindole derivatives of amino acid and amino acid amide enantiomers on a p-cyclodextrin-bonded phase / A.L.L. Duchateau, G.M.P. Heemels, L.W. Maesen, N.K. de Vries // J. Chromatogr. 1992.-Vol.603,№ 1-2.-P.151-156.

72. Merino M.I. Liquid chromatographic enantiomeric resolution of amino acids with P-cyclodextrin-bonded phases and derivatization with o-phtalaldehyde / M.L Merino, G.E. Blanco, A. Sanz-Medel // Anal. Chim. Acta. 1990 -Vol.234, №1.-P.127-131.

73. Bender M.L., Komiyama M. Cyclodextrin Chemistry, Springer, New York, 1976.

74. Armstrong D.W. Liquid chromatographic separation of anomeric forms of saccharides with cyclodextrin bonded phases / D.W. Armstrong, H.L. Jin // Chirality. 1989. - Vol.1, № 1. - P.27-37.

75. Tsou T.I. The effects on separation of cephalosporins by HPLC with (3-cyclodextrin bonded stationary phase / T.I. Tsou, J.-R. Wu, T.-M. Wang // J. Chromatogr. and Relat. Technol. 1996. - Vol.19, №7 - P.l081-1095.

76. Piperaki S. A separation study of tricyclic antidepressant drugs by HPLC with (3-cyclodextrin bonded stationary phase / S. Piperaki, M. Parissi-Poulon, M. Koupparis // J. Liquid. Chromatogr. 1993. - Vol.16, № 16. -P.3487-3508.

77. Aboul-Enein H.Y. Direct HPLC resolution of racemic nomifensine hydrogen maleate using a chiral (3-cyclodextrin bonded stationary phase / H.Y. Aboul-Enein, M.R. Islam, S.A. Bark // J. Liquid. Chromatogr. 1988. - Vol. 11, № 17. - P. 1485-1493.

78. Piperaki S. Use of the cyclodextrins as chiral selectors for direct resolution of the enantiomers of fluoxetine and its metabolite norfluoxetine by HPLC / S. Piperaki, M. Parissi-Poulon // Chirality. 1993. - Vol.5, № 4. - P.258-266.

79. El-Gizawy S.M. High-performance liquid chromatography determination of multivitamin preparations using a chemically bondedcyclodextrin stationary phase / S.M. El-Gizawy, A.N. Ahmed, N.A. El-Rablat // Anal.Lett. 1991. - Vol.24, № 7. - P. 1173-1181.

80. Merino I.M. Liquid chromatographyc separation of penicillamine enantiomers derivatized with OPA/2-ME on a P-cyclodextrin bondet phase / I.M. Merino, E.B. Gonzales, S-M. Alfredo // Microchim. Acta. 1992. -Vol.2, № 1-2. -P.73-80.

81. Siret L. Separation des stereoisomeres de lacide norbornyl-2-(thienyl-3)-2-glycolique / L. Siret, A. Tambule, P. Rocca // Analusis. 1992. -Vol.20, № 7.-P.375-378.

82. Stalcup A.M Separation of carotenes on cyclodextrin bonded phase / A.M Stalcup, H.L. Jin, D.W. Armstrong, P. Mazur, F. Derguini, K. Nakanishi // J. Chromatogr. 1990. - Vol.499. - P.627-635.

83. Florance J. Chiral high-performance liquid chromatography of aromatic cyclic dipeptides using cyclodextrin stationary phases / J. Florance, Z. Ronteatis // J. Chromatogr. 1991. - Vol.543, № 2. - P.299-305.

84. Nakatsu C.N. Separation of enantiomers using a (S)-naphtylethylcarbamoylated y-cyclodextrin stationary phases / C.N. Nakatsu, A.M. Stalcup // J. Liquid. Chromatogr. 1993. - Vol.16, № 1. - P.209-223.

85. Beesley Т.Е. Retention behavior of the inclusion complexes of some polycyclic aromatic hydrocarbons with P-cyclodextrin / Т.Е. Beesley, D.W. Armstrong, J.A. Lupia // Pittsburgh. Conf., Anal. Chem. And Appl.

86. Spectrosc., Chicago, III., Febr. 27 March 4, 1994: Abstr. - Chicago(IIL)., 1994. -P.375-379.

87. Hilton M.L. Comparison of the enantioselectivity of phenethyl- and naphtylethylcarbamate substituted cyclodextrin bonded phase / M.L. Hilton, S.-C. Chang, M.P. Gasper // J. Liquid. Chromatogr. 1993. - Vol.16, № 1. - P.127-147.

88. Tihamer H. Evaluation of 3,5-dimethylphenyl carbamoylated a-, (3-and y-cyclodextrins as chiral stationary phases for HPLC / H. Tihamer, O. Yoshio // J. Liquid. Chromatogr. 1993. - Vol.16, № 4. - P.843-858.

89. Chen S. HPLC enantioseparation of di- and tripeptides on cyclodextrin bonded stationary phases after derivatization (AQC) / S. Chen, M. Powlowska, D.W. Armstrong // J. Liquid. Chromatogr. 1994. - Vol.17, № 3. - P.483-497.

90. Ciucanu J. Optimization of mobile phase in liquid chromatography on permethylated cyclodextrin bonded phase / J. Ciucanu // An. Univ. Timisoara. Ser. Chim. 1994. - Vol. 3. - P.31-34.

91. Cserhati Т. Retention characteristics of a P-cyclodextrin polymer-coated liquid chromatography column / T. Cserhati, E. Forgancs, A. Vjhazy //Anal. Chim. Acta. 1993.-Vol.279, № 1.-P. 107-113.

92. Haing L.S. Systematic study on the different cyclodextrin bonded stationary phases/ L.S. Haing, B. Alain, D.W. Armstrong // J. Chromatogr. -1992. Vol.603, №1-2. - P.83-93.

93. Гейсс Ф. Основы тонкослойной хроматографии (планарная хроматография) // М.: Химия. 1999. - Т. 1,2.

94. Гордон Дж. / Органическая химия растворов электролитов // М.: Мир. 1979.-712 с.

95. Тюрина Н.В. Поверхностно-активные вещества как модификаторы подвижной и неподвижной фазы в тонкослойной хроматографии: Дис. . канд. хим. наук. Саратов: СГУ, 1997. - 157с.

96. Атаян В.З. Тонкослойная хроматография азосоединений в подвижных фазах, модифицированных циклодекстринами / В.З. Атаян, Е.Г. Сумина, С.Н. Штыков // Сорбционные и хроматографические процессы. 2003. - Т.З, вып.4. - С. 392-398/

97. Атаян В.З. Циклодекстрины как основные компоненты подвижных фаз в тонкослойной хроматографии / В.З. Атаян, Е.Г. Сумина, С.Н. Штыков // Органические реагенты в организованных средах: Сб. науч. статей. Саратов: изд-во СГУ. - 2003. Вып. 7. -С.116.

98. Атаян В.З. Расчёт коэффициентов распределения некоторых органических реагентов трифенилметанового ряда в системе вода р-циклодекстрин методом ТСХ / В.З. Атаян, Е.Г. Сумина, С.Н. Штыков //

99. Проблемы аналит. химии. (Ill Черкесовские чтения): Сб. науч. ст. -Саратов, 2002. С.63-65/

100. Государственная Фармокопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье /11 издание. М.: Медицина, 1987, 1989, вып. 1,2.-359с.

101. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Пособие для врачей / М.Д. Машковский. Москва, 2002. С. 189-198.

102. Перельман Я.М. Анализ лекарственных форм. Практическое руководство / Я.М. Перельман. Госуд. из-во. мед. лит. МЕДГИЗ. 1961. -616с.