Электронномикроскопический и кинетический анализ процессов протеолиза в присутствии пищевых волокон тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

■ всесоюзный заочный институт пищевой пршшенности

Ш правах рукописи '■ УДК 543.42:541.66

_ СОЛОГАПЮТИ !&кезл Амориевич

ЭЛШТСШХи^ОСКСШШЖИЙ И: КИНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРОЦЕССОВ ПГОГЕОЛМзА В ПРИСУТСТВИИ ПШЕВЫХ фЛОКОН

Специальность 02.00.02 - Аналитическая зшкая

АВТОРЕФЕРАТ

• диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва - 199О

Работа выполнена в Институте елементоорганических соединений им.А.Н.Несмеянова Академии наук СССР и на кафедре аналитической химии ВЗИППа.

Научные,руководители:

заслуженный деятельннауки и техники РСФСР доктор химических .наук профессор Ю.А.Клячко

кандидат физико-математических . наук, ст.научный сотрудник Белаацева Е.М.

Официальные оппоненты:

д.х.н..профеооор Неклюдов А.Д.

к.х.н..отаршиЯ научный сотрудник Сенькевич С.И.

Ведущая организация -

Институи питания АМН СССР

Защита диссертации ооотоится в чао, на заседании специализированного оовета К 063.45.02 по аналитической химии во Всесоюзном эаочном институте пищевой промышленности по адресу: г.Москва, 109803, ул.Чкалова, ?3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Ученый оекретарь Специализированного ооьета .

кандидат химических наук > , . в.С.КОЛОДИЕЦ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ '

АтаУя^ноо'гт- те™

Белковые гидролизаты находят самое широкое применив в народном хозяйстве и медицине. Получение белковых гидролизатов в присутствии пищевых волокон позволяет, о одной стороны, регулировать скорость и степень гидролиза белка, а о другсй стороны, изучить некоторые аспекты процесса пищеварения.

Поэтому разработка и реализация современных методов аналитического исследования гидролиза белков в присутствии пищевых волокон, вклкяая метод электронной микроскопии, является весьма актуальной научной и практической задачей.

Це/гт, и задачи данного исследования

Цель данной работы состояла в том, чтобы применить современные методы электронной микроскопии и химической кинетики как методы структурного химического анализа к исследованию процесса гетерофазного гидролиза белков ферментамй'в1 приоутотвии пищевых волокон.

Для достижения поставленной цела*необходимо было:

- провести исследование методических аспектов криогенного препарирования водных суспензий целлшозы, установить оптимальный режим препарирования, позволяадий выявлять структуру реального образца;

- разработать методику-препарирования для растровой (РШ) и проовечиваквдэй (ПШ)' электронной микроскопии в системе белок-целлшоза-вода и исялхяащую возможность возникновения артефактов препарирования в условиях использования метода заморажива-ния-выоушивания;

- использовать в качестве независимого контрольного и дополнительного метода исследование кинетики гидролиза белка

(казеина) пепсином в присутствии в раствора различных концентраций целлюлозных волоков ;

- иоолвдовать разработанными методами злектронной микро-окошш микроструктура, образующиеся в ходе гидролиза казеина пепсином в присутствии целлюлозных волокон I

. - иоолвдовать уотойчивооть образующихся микроструктур.

Катэиал новизна

Разработан метод електроакоьлкроскопического исследования оуопензий целлюлозы о белком и образующихся в ходе их взаимодействия структура. Показана тахеометрическая определенность в выоокая уотойчивооть домплекоов белка и целлюлозы.

Методом термического анализа в цроцеоое реализации крио-метода профподготовки изучена зависимость кристаллизации в системе целдвдоза-вода от концентрации целлюдоад и показано, что при концентрации целлюлозы более 20$ кристаллизация льда не происходит, если скорооть ваморажавадая достигает 100 град/с г вше,

Пивимти

В практике електронной микроскопии "криоштоды при определенных условиях препарирования могут быть использованы для выявления реальной структуры систем цшшгаова-вода, а также соответствующих многокомпонентных водных систем с определенной концентрацией зтого полимера.

Установлено, что в процессах получения белковых гидролиза-тов проведение ферментативного гидролиза казеина пепсином в присутствии целлюлозы позволяет, регулируя концентрацию целлюлоз¡ы в раствора, изменять степень гидролиза полученных белкошх

гидроливатов. Это, открывает возможность получения гидроли8атов о заданной глубиной гидролиза.

ЙВМЙШПГ • • .

Основные положения диссертационной работы были представлена в виде докладов»

- на третьей Воеооюаной научно-технической конференции "Разработка процессов получения комбинированных продуктов питания (медико-биологические аспекты, технология* аппаратурное оформление, оптимизация)*, Москва 1988 г. ;

- на Всесоюзной конференции "Химия пищешх веществ. Свой» ства и использование бк. «олюлеров в пищевых продуктах", 2931 мая 1990 г»* г.Магйлвв *

- ш научных конференциях Воеооганого заочного института пищевой промышленности в 1988 и 1990 гг. ;

- на кафедре аналитической химии ВЗШПа в 1990 г.

Двтпп игностт ня аяптатт мииптпия ппжннив тннжмям!

- Методику препарирования для элвктроняо-шкроскопич еского исследования образцов суспензии целлюлоза-вода ;

- Методику 8лектронйо-4штроскопич8ского анализа систем белок-целлюлоза-вода в присутствии протеояитического фермента;

- обнаружение Поверхностного комплекса белок-селлюяоза-фермент а присутствии волоков целлюлоза ; установление концентрационной области его существования и относительной химической устойчивости I

- обнаружение активизирующего и ингибирупдего влияния целлюлозных волокон на гтротеолиз белка в зависимости от концентрации целлюлозы в системе.

(йруктти оЧът работа

Диссертация., достоит из введения, обзора литературы, вкспе-риментальвой|.чаатр,.,.включавдвй данные о материалах и методах исследования, результатах исследования и обоувдения подученных результатов} выводов, опиока цитируемой литературы. Работа изложена.на:83 страницах машинописного текста, содержит 25 рисунков ж одну таблицу.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Литературный обаор

Проблеме ооздания продуктов питания, отличающихся легкой усвояемостью и полноценным аминокислотным составом, в последние года уделяется большое внимание. Белковые гидролизаты являются одним из лучших источников для ооздания новых белковых продуктов. Для изучения условий оптимизации процвооов ферментативного гидролиза белкового сырья до сих пор не был применен такой сильный метод как едектронная микроокопия.

Основной цельцданшй работы была разработка електронно-

■г

микроскопического метода исследования и контроля ферментативного гидролиза белка на примере системы казоин-целлшоза-протеаза.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Материал». метопн птмпятягоовяияя о«ттяянов

В работе использовали:

Казеин по Гаммеротену, производство НПО Биохимреактив, г.Олайне.

целлюлоза - Мип^гсс # фирщ « -(ц^ция^

Пепсин кристаллический, фирмы *ЫИ1 'XX " (ФРГ).

2,4,&-Тринитробензосульфокиолога (ТНБС) фирмы "

Соли, кислоты, щелочи и растворители марки "х.ч." или "ч.д.а.".

Первая глава экспериментальной части поовящена изучению препаративной методики электронной микроскопии оуопензий.

Для исследования структуры казеина в працеоое гидролиза использовались растровый и просвечивапций электронные микроскопы: раотровый - $ - 405 А (Япония), просвечивающий Ш-100 л (СССР).

Поскольку объекты содержали жидкость, важным этапом работы явилась разработка методов препарирования, так как необходимо удалить воду таким образом, чтобы не нарушить структуру объекта.

В последние годы для исследования бистйм.бйополмер-вода в электронном микроскопе исаэльзуяйся р'йздкчще способы Подготовки объекта к исследований в В8Й и ЙЭА. Найболее распространенными методами являются оушка в критической «очке (КГС) й Метод замораживания-высушйвания. (3-В).

Изучений,литература показало, ч®0 практическй отсутствует методические работы, касакщаесй суспензий целлюлоза-вода. Поэтому нами проведена методическая работа по определении режимов, при • которых не возникают артефакты, связанные о кристаллизацией, льда в системах целлкгаоза-вода.

Так как опособ замораживашя-выоушвания соотоит из двух этапов: I) замораживание и 2) шоупшвание, то мы подробно изучали их как электронно-микроскопическим методом, так и методом термического анализа. . < .

Контроль качества криофиксации в электронной микроскопии о помощью термограмм предложен Белавцевой и Чеыериоом. Этот метод выгодно отличается от предложенного Моором (Швейцария), основанным на выживаемости макроорганизмов.

Результаты, полученные методом термического анализа, прй-годщ при зштерпретации результатов как проовечиващей, так и. растровой электронной микроскопии.

С помощью данных термографии научно обоснован режим крио^-генного препарирования систем целлюлоза-вода, который позволяет избежать артефактов препарирования.

Основные рекомендации для IISMi измельченный образец концентрации 0,005-0,01/2 наносится тонким олоем на сетку с пленкой, быстро заморажаваетоя в,жидком азоте, налитым в специальный сосуд-, находящийся в вакуумной установке. Далее производится откачка воздуха и газообразного азота. Температура образца постепенно, повышается от -150°С до -80°0. После полной сублимации льйй тёмйература образца повышается до комнатной, после чего образец отменяется металлом. ■ '

Для растровой электронной микроскопии образец (целлюлоза-вода) замораживается со скороотью 100 град/с, затем помещается в специальный столик вакуумной установки.

Производится оублимация льда оначала при температуре -100°С, а аатем при температуре - 80°0. Далее температура достигает комнатной.

Важным моментом предложенных нами методик для ПЗД и РЗЛ является исключение переноса образца иа хладоагента по воздуху, что гарантирует постоянство температуры образца при температуре -150° —130°С и исключает его нагрев. Нагрев замороженного образца, как показали результаты термограммирования, приводит к рекристаллизации льда и, следовательно, к артефактам. Электронные микрофотографии позволяют убедиться, что при правильном подборе условий криогенного препарирования удается получить реальную структуру объекта.

- 7 -

ОПИСАНИЕ РАЗРАБОТАННЫХ МЕТОДИК ПОДГОТОВКИ ОБРАЗЦА

Разработаны методики подготовки образцов для электронных микроокопов ПШ и РШ. •

Дал проовечиваыцего электронного микроскопа использовались методы реплик, негативного контрастирования и криомэтода. Предварительно образцы диспергировались при действии ультразвука в течение 5-10 минут на прибора УЗДН-2Т. Потом исследуемый объект наносился на слвду специально для этого приспособленными капиллярами и в течение 8-10 часов образец высушивали на ВУП-2К I затем оразу напыляли. Посла данной процедуры образцы снимали оо слвды и перенооили на сетчатую поверхность. После высыхания образец был готов для рассмотрения в микроскопе. При применении криометодов попользовали аналогичную процедуру, предварительно замораживания иоследуемое вещеотво в жидком азоте.

Для растрового электронного микроскопа образцы готовили следующим образом. Исследуемое вещество наносили на фольгу, фолыу о исследуемым веществом замораживали в жидком азоте, после чего высушивали объект на ВУП-2К в течение 8-10 часов. Выпушенный образец приклеивали к одециальноцу отодику для рассматривания к растровом электронном микроскопе.

Понтомещ раствора шеина а иаллюгазд

В 25 мл 0,01 н.НС1 вводили 300 кг казеина и нужное количество целлюлозы, затем при температуре 37° перемешивали раствор в течение 4-х часов. Доводили РН до 2,2 (раотвором концентрированным ш по каплям).

Пгагшаданва мотива йешанта

Раствор фермента о коцегсграцией 2 мг/мл готовили, растворяя пепсин в 0,01 н.НС1. РН доводили до 2,2 (раотвором коцентрирован-

'о -8 -

ним П^ по кадяям).

Шидр баш в тяиитоиив цздатош .

Гидролиз проводили в термостатированной кювете о магнитной мешалкой. К раствору казеина я целлшозы добавляли 5 мл раствора пепоина. За кинетикой гидролиза следили по изменении аминного азота раствора в ходе реакции, отбирая черев определенные интервалы времени пробы объемом 0,5 мл. Концентрацию аминного азота в отобранных пробах определяли, осаждая пробу 5 мл 1С# ТХУ (трпхлрруксуоной кислоты) и анализом фильтрата о помощью ТНБС -(2,4,6,Триштробензолсульфакислота).

Контрольной пробой служила проба, отобранная в самом начале реакции - в нулевой момент времени. Градуировочную кривую отроили по стандартному раствору норяейцина в 0,001 В.НС1 в интервале от 0,625 до 10 мкмолъ/мл ворлейцина. Среднеквадратичное отклонение параллельных измерений раотвора аминокислоты ооотавляло ± 1.656. , .

АКШОТТг теашт

Скорость реакции гилролиза определяли по тангенсу угла наклона подученных кинетических кривых.

Одшаделив етстт пшшаа белков

Степень гидролиза белка раоочитывали по фррцула

где - аминный азот полученного гидролизата,

конечная концентрация аминного азота при полном гидролизе белка, определяемая по формуле:

Сж Я -

Ь^а-----

\Ч

где - общий азот образца,

- азот небелковых веществ, которзй составляет 0,1$ от белкового азота. , Св - масса образца. ' ' '

Общий азот для казеина определяем по Ддаа; он равен 14,8$. По формуле (2) рассчитано, что для концентрации казеина 1% йца>= 93,2*10"%. Все анализы и определения сделаны как минимум в трех повтор-ностях. Все приведенные в работе кривые экспериментально воспро-изводаш. Экспериментальные данные обрабатывались методами математической статистики.

Доследование комплекса, образовавшегося на поверхности

дш гапкшзз ка?шш. После проведения реакции гидролиза казеина пепсином в при-сутствш 'целлМозЫ'решащойную смесь фильтровали. Полученный осадск щюшвали холодной (+4°) 0,01 н.НС1 по 5 мл 12 раз. Измеряли оптическую плотность .фильтрата при 220 км (максимум поглощения пептидной связи). Содержание азота в промытом осадке 'определяли по Дома.. Параллельно, был проведен гидролиз казеина 'пепсином без целлюлозы. ' \\ . ,,

Общий азот в полученном осайке 'состайия 0,18^. Таким образом, в полученный бсадок перешло'1,13$ (0,18* 6,25) белка (в расчете на азот). ' /;./

Ш спектщ подтверждают наличие полипептидных групп на целлюлозе. Это выражается появлением полосы Амид I в области 1650-1680 и Амид П в области 1620-1660, которые не наблюдаются в исходной целлюлозе.

Г. 10 -

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Доследование взаимодействия белка о волокнистым компонентом В последние годы появилооь большое количество работ, в которых отмечлэтся существенное влияние пищевых волокон на процесс перо варивания пищи,

В работе Амарорвера и др..отмечалось, что волокна отрубей оказывают ингибируицее действие на ферментативный гидролиз (переваривание) белка. Однако существенное значение для процесса имеет химический оостав пищевого волокна, содержание и соотношение в нем целлюлозы, гемицеллшозы, лигнина и др., поскольку ети компоненты могут оказывать различное влияние на окорость гидролиза белков. Кроме того,: Оольшрз влияние на скорость процесса оказывает и т® использревдо фермента. (децоив, -трипсин, хткь. трипсин).

Предотавюш интерес изучит^ ^адаодейсувиз казеина, наиболее перевариваемого белка, о целлщовой, являадейоя модельной системой пищевых волокоц. Дня установления структурных закономерностей в процессе шпцеварания ваш применена электронная микро-окопия о использованием метода негативного контрастирования объекта. Для интерпретации результатов електронной микроскопии использовались данные малоуглового раооеяная рентгеновских лучей. Электвонше микрофотографии показывают, что волокна целлю-

швду которыми имеются промежутки 7-10 нм. Анализ малоузловых рентгенограмм показал, что такие промежутки отсутствуют в сухом волокне | они возникают лишь в результате набухания волокна целлюлозы в жидкой среде. Известно, что аффект набухания зависит от природы жидкой ореды. Это обстоятельство необходимо учитывать при интерпретации результатов олектронной микроскопии, полученных

состоят из микрофибралл толщиной 5-7 ш

при исследовании гетерофазных структур. В работе обсуждаются результаты электронно-микроскопического исследования взаимодействия казеина о целлюлозой.

С точки зрения адекватного питания, пищевые волокна играют важную роль. В работе исследовано влияние целлюлозы как ооновного компонента пищевых волокон на гидролиз казеина пепсином. Исследование показало, что скорость этой реакции существенным образом зависит от количества целлюлозы.

Исследование структуры комплексов, образующихся в процессе реакции, осуществлялось в растровом электронном мнкроокопе. Показано, что в отсутствие фермента казеин слабо взаимодействует о целлюлозой, преимущественно находясь в пространстве между ее волокнами (рио.1). При добавлении в смеоь казеина и целлюлозы пепсищ оразу же происходит интенсивная оорбцня комплексов казеина о пепсином на поверхности целлюлозы, по-видимому, продуктов химического протеолиза казеина (рис.2). К концу реакции про-теолиза отдельные сорбированные комплексы пепсина о казенном сливаетоя и почти, полностью покрывают поверхность волокон (рио.З). Это может свидетельствовать об образовании прочного комплекса волокон целлюлозы о. продуктами протеолиза и пепсином, гетерофазно обособляющегося в реакционной смеои. Полученные результаты позволяют заключить, что протеолиз казеина происходит, в основном, на поверхности, целяюярзннх волокон.

Такой результат может иметь важное значение для получения и применения пищевых продуктов на основе гидролизатов белков дон диетического, лечебного и специального питания.

Скорость реакции гидролиза казеина пепсшшм в присутствии целлюлозы, как уже отмечалось, существенным образом зависит от концентрации целлюлозы.

Рио.1. Электронная микрофотография раствора казеина в присутствий целлюлозы. X 20000

Рас. 2. Электронная микрофотография коишшвоа казеина о пепсином на поверхности целлюлозы. Начало гидролиза (Т=О мин). X 16000.

Рио.З. Электронная микрофотография комплекса казеина с пепсином на поверхности целлшозы. Конец гидролиза (Т =120 мин) X 8000.

ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАВИСИМОСТИ СКОРОСТИ РЕАКЦИИ ОТ КОНЦЕНТРАЦИИ ЦЕЛЛЮЛОЗЫ

Скорость реакции гидролиза казеина Йепшном в присутствии целлюлозы, как уже отмечалось," существенншл-образом зависит от

I

концентрации целлюлозы.

На рис. 4 и 5 приведены кинетические кривые гидролиза казеина пепсином в присутствии целлюлозы при концентрациях целлюлозы в раствора 0,3$ (рис.4) и 0,5$ (рио.5)..Для сравнения на каждом рисунке приведены кинетические кривые .гидролиза казеина пепсином без целлюлозы, полученные в параллельное опыте в этом яе эксперименте.

Как видно из приведенных рисунков, скорость гидролиза казеина пепсином (определяемая как тангенс угла наклона кривой, опи-сывавдей изменение аминного азота в ходе реакщш) при 0,1$ целлюлозы (рис,4) составила / р„ = 0,8 мкмЛщ). дщ гидролиза казеи-

11 . . МИН /

на пепсином эта величина составила [/ ок = 1,2 л .

Аналогично этому на рио.5 были определены Уог для концентрации целлюлозы 0,5$: |/о_ « 0,9 ШМ и 1/0 „ х,2

Г * МИН ' . к * МИН

Таким образом на основание шэлучеющх. результатов можно заключить, что при ц&щсбких ковдвнтравдях ц'еялхшозы (до 3$) скорость гидролиза казеина снижается по .оравнвнаю о. щдролизок казеина пепсзшом без целлюлозы..

На рис. 6 приведены кинетические яшвые- Гидролиза казеина пепсином при концентрации целлюлозы 3$.

• Для 3$ концентрадаи целлюлозы (рис.'?)

\/0 „ г и хл

" "Г -мин * * К- А,х мин

Таким образом, на основании" полученных результатов можно заключить, что при концентрации целлюлозы 3$ скорость гидролиза

У0к«12

(

К

К - гидролиз казеина пепсином вез целлюлозы

Г - гидролиз казеина пгпсином в присутствии

целлюлозы

Рис.4. Кинетические кривые гидролиза.казеина пепсином в присутствии целлюлозы (Г) и без целлюлоза (К). Концентрация целлкшозы в растворе 0,1%.

Ч>«'12

120 4,мин

К - гидролиз л спей на пепсином вез целлюлозы Г- гидролиз казеина пепсином в присутствии

целлюлозы

Рио.5. Кинетические кривые гидролиза казеина пепсином в присутствии целлюлозы (Г) и без целлюлозы (К). Концентрация целлюлозы в растворе 0,5$,

V"

5 15 30 45 60

120

мин

Рис;6. Кинетичеакие кривые гидролиза казеина пепсином в присутствии целлюлозы (К) в без цалладовы (Г). Концентрация целлшозы 3%.

казеина возрастает.

На рио.7 и 8 приведены кинетические кривые гидролиза казеина пепсином в присутогвии целлюлозы соответственно при концентрациях целлюлозы 10% и 15$.

Так же как на рио. 4,5 для сравнения на каядом из рисунков приведены кинетические кривые гидролиза кйзеййа пепсином без целлюлозы, полученные в. параллельном опыте в этом ае эксперименте.

Как видно, из :прйведеййых'^йсунйов, скорость гидролиза казеина пепсином при 10$ целлюлозе (рис.8) составила Уог=0,7 ^^ . Для гидролиза казеина пепсином без целлюлозы окорость равна

\}0 = 13 МШ/Ш- . °к 1,0 мин I

' Аналогично этому из рио.8 били определены ор для концентрации целлюлозы 15*. \/ог = 0,6 и \/ок » 1,3 ,

Таким образом, как показали результаты исследования кинетическим методом при высоких концентрациях целяйюзы снова наблюдается ингибированне процеооа.

Проведенное исследование позволило усыновить, что незначительные (0,1 и 0,5$) и высокие (10. я 15$) Концентрации целлюлозы в растворе приводят к снижению скорооти гидролиза казеияа неполном. В то яе время при концентрации целлюлозы 3% наблюдаетоя значительное уокорение реакции. Для концентрации целлюлозы 3% скорость реакции увеличивается в 2,? раза по оравнению оо скоростью гидролиза казеина пепсином без целлюлозы (рио.9).

Эти результаты могут быть проиллюстрированы данными электронной микроскопия. Как показали проведенные исследования* сорбция комплексов казеина а пепсина на целлюлозе существенным образом зависит от концентрации целлюлозы в растворе.

5 15 30 «5 60

—¿

120 +,мим

H - гидролиз xaisuHo пепсиной ьез целлюлозы

Г - гиуродз Kamine талей ном & присутствии

щмлкмюы

Ряо.7. Кинетичеокив кривые гидролиза казеина пепсином в приоутотвии целлюлозы (Г) л без целлюлозы (К). Концентрация целлюлозы в растворе 10$.

6. V813

г К - гидролиз келейно пепсином без целлюлозы

Г - гидролиз казеина пепсином в присутствии

целлюлозы

Ряо.8. Кинетичеокие крявыв гидролиза казеина пепсином в пряоутотвяи целлюлозы (Г) я дез целлюлозы (К). Концентрация целлюлозы в раотворе 15?.

У> мин

5 Ю 15 Сцелл

Рио.9. Изменение скорости гидролиза пепсином в зависимости от концентрация целлюлозы в растворе.

-- - Скорость гидролиза казеина пепсином

в отоутствие целлюлозы.

- 23 -

ИССЛЕДОВАНИЕ УСТОЙЧИВОСТИ ОЕРАЗШЩСЯ В ХОДЕ ПР0ТЕ0ЛИЗА

КОМПЛЕКСОВ ЦЕМШ031 С БЕЛКОВЫМ ШДРОЛИЗАТОМ

При действии ультразвука (в течение 5-10 мин.) наблюдаетоя разрушение поверхноотного слоя образующихся отруктур. Однако на поверхнооти целлюлозы вое хе остается тонкий "белковый"олой, что свидетельствует о высокой устойчивости комплекоов гидролива-тов о целлюлозой (риоДО).

Это подтверждается и многократной промывкой целлюлозного волокна 0,01 н.НС при ?Яз, причем полной екотракцди доотичь не удаетоя. О результатах элементного и ИК-опектрооконического анализа "белкового* олоя оказано выше.

ВЫВОДЫ

1. В работе впервые проведено алектронномикроокошчеокое исследование взаимодействия волокнистого компонента о белком в уоловиях ферментативного гидролиза белка и обнаружено образование поверхноотного соединения белка о целлюлозой в определенном узком интервале концентраций компонентов,

2. Установлены условия пробоподгоговки целлюлозно-белковых оуопензий для обеспечения бе зартефактного электронномикроокопя-чеокого иооледованяя этих оиотем.

3. Данные алектронномикроокопичеокого анализа оопоотавлены и подтверждены результатами химико-кинетичеокого контроля процесса ферментативного гидролиза белка в присутствии волокнистого компонента, а также ИК - ояектроокогшей в элементным анализом поверхноотного соединения,

Ряо.Ю. Электронная микрофотография волокон целлюлозы

и образовавшихся на ее поверхности отрунтур пооле действия ультразвука. X 20000.

4.' Установлена значительная химичеокая отойкооть поверхностного соединения.

5. Разработанные в диосертации физико-химические аналитические методы и полученные результаты могут играть оущеотвенную роль в исследованиях технологических нроцеооов биотехнология п физиологии пищеварения.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные полодешя диооертацяонвой работы были представлены в следующих публикациях:

- ВАСХНИЛ. ВНИИТЭИАгропром. АгроНИИТЭИПП. Пищевая прокша-леннооть.

Передовой производственный и тучный опыт, рекомендуемый для внедрения в безалкогольной, дрошгавой и бродильных отраслях промышленности.

Информационный сборник, выпуск I, отр.12-13. Москва 1990 г.

- Гооагропром СССР, Академия наук СССР. Химия пищевых добавок. Тезисы докладов Всесоюзной конференции. 25-27 апреля, стр.147, 149. 1989 г. г.Черновцы.

- Еурнал Всесоюзного Химического общества им.Д.И.Менделеева. Том ХХХУ» # 4, отр.524. Москва 1990 г.

- Академия наук СССР. Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Химия газдешх веществ. Свойства и использование биополимеров

в пищевых продуктах". Стр.145. 29-31 мая 1990 г. г.Могилев.

- Тезиоы докладов Третьей Воесоюзной научно-технической конференции. "Разработка процеосов получения комбинированных продуктов питания (медико-биологические аспекты, технология, аппаратурное оформлешга, оптимизация)", стр.227. Мооква 1988 г.