Изучение механизма действия органических производных ртути на объекты окружающей среды тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

ВВЕДЕНИЕ.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Общая характеристика токсичности металлоорганических соединений.

1.2. Ртутьорганические соединения как суперэкотоксиканты.

1.2.1. Источники ртутьорганических соединений в окружающей среде.

1.2.2. Свойства ртутьорганических соединений.

1.2.3. Влияние ртутьорганических соединений на процессы дыхания.

1.3. Редокс-процессы с участием металлоорганических соединений и их роль в механизмах токсичности.

1.3.1. Взаимодействие коферментов НАД и НАДФ с соединениями тяжелых металлов.

1.3.2. Взаимодействие НАД и НАДФ с соединениями ртути.

1.3.3. Изучение механизма взаимодействия моделей НАД с металлоорганическими соединениями ртути.

2. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

2.1. Ингибирующее действие ртутьорганических соединений на процессы клеточного и митохондриального дыхания.

2.1.1. Влияние соединений ртути на клеточное дыхание на примере эукариотов Засскаготусез сегеу^ьчае.

2.1.2. Подавление митохондриального дыхания в зависимости от природы органической группы в МН^Х.

2.1.3. Роль добавок НАД(Н) в изменении поглощения кислорода митохондриями в присутствии соединений ртути.

2.2. Влияние ртутьорганических соединений на активность НАД-зависимой малатдегидрогеназы.

2.2.1. Действие ртутьорганических соединений Ш^Х на активность малатдегидрогеназы.

2.2.2. Действие сулемы на активность малатдегидрогеназы.

2.3. Влияние ртутьорганических соединений на активность цитохром-С-оксидазы.

2.3.1. Окисление цитохрома С в неферментативной реакции в присутствии ртутьорганических соединений.

2.3.2. Влияние добавок ртутьорганических соединений на активность цитохромоксидазы в ферментативной реакции.

2.4. Защитный эффект витамина Е при действии соединений ртути на активность цитохромоксидазы.

2.4.1. Сравнительное действие сулемы и метилмеркуриодида на активность цитохром-С-оксидазы в присутствии добавок токоферола.

2.4.2. Зависимость изменения активности цитохром-С-оксидазы в присутствии токсикантов от содержания природного а-токоферола в образцах.

2.5. Изучение взаимодействия ртутьорганических соединений с коферментами НАД и НАДФ.

2.5.1. Исследование реакции окисления коферментов НАД(Н) и НАДФ(Н) в присутствии соединений ртути.

2.5.2. Исследование влияния агентов, способных предотвратить окисление коферментов в присутствии соединений ртути.

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1. Отбор биологических проб.

3.2. Получение суспензии дрожжей.

3.3. Выделение митохондрий.

3.4. Определение активности малатдегидрогеназы.

3.5. Определение активности цитохром-С-оксидазы.

3.6. Изучение взаимодействия токсикантов с коферментами НАД и НАДФ.

3.7. Подготовка растворителей, электродов и фонового электролита для проведения электрохимических исследований.

3.7.1. Очистка растворителей.

3.7.2. Получение фонового электролита.

3.8. Методика электрохимических исследований.

3.8.1. Методика проведения модельных реакций.

3.9. Определение содержания природного а-токоферола в образцах печени и мышц рыб.

ВЫВОДЫ.

Металлоорганические соединения ртути относятся к классу суперэкотоксикантов и могут иметь антропогенное происхождение, либо образовываться в окружающей среде в результате реакций биохимического алкилирования. Метилртутные производные, проявляющие наиболее высокую степень токсичности, попадая в живые организмы, вызывают разного рода отклонения от нормальных метаболических процессов, в том числе и необратимые.

Органические соединения ртути способны проникать через клеточную мембрану и накапливаться в клетках ввиду высокой стабильности связи Щ-С. Механизмы токсичности металлоорганических соединений ртути до сих пор не вполне ясны. Возможным механизмом цитотоксичности является действие ртутьорганических солей, 11ЩХ или их гидратированных катионов [КН§(Н20)п]+ непосредственно на функционально активные центры клеток. Распространенным объяснением их токсичного действия является взаимодействие с 8Н-группами белковых систем, что вызывает нарушение структуры белка и его денатурацию.

В качестве одного из предположений высказывается возможность не только прямого связывания различных участков молекулярных структур атомом металла, но и проявление токсического действия органическими продуктами распада соединений, происходящего в результате разрыва связи С-Ь^. Распад металлоорганического производного может происходить в том случае, если это соединение вовлекается в биологическр^й" /' и окислительно-восстановительный процесс. К одному из таких 6 процессов относится транспорт электрона во внутренней мембране митохондрий, обуславливающий клеточное дыхание, т.е. поглощение молекулярного кислорода.

Предметом настоящего исследования является изучение влияния ртутьорганических соединений на процессы клеточного дыхания на клеточном, субклеточном, ферментном и молекулярном уровнях. Такой подход предполагает, в частности, рассмотрение различных участков электронтранспортной цепи (ЭТЦ) в качестве биологических мишеней при действии токсикантов.

Используя такой подход, в настоящей работе проведено сравнительное исследование на клеточном уровне действия ртутьорганических соединений in vitro на клеточное дыхание на примере модельных систем эукариотов - дрожжевых клеток Saccharomyces cerevisiae и на субклеточном уровне на примере поглощения кислорода митохондриями, выделенными из растительного материала и из образцов рыб Русского осетра (.Asipenser gueldenstaedti В.). Изучение влияния ртутьорганических соединений на ферментные системы осуществлено на примере мультифункциональных малатдегидрогеназ, в частности, НАД+-зависимой оксидоредуктазной малатдегидрогеназы и терминального фермента ЭТЦ - цитохром-С-оксидазы, входящего в состав электронтраспортной цепи. Для проведения исследований на молекулярном уровне в качестве субстратов, подвергающихся действию соединений ртути, использованы наиболее важные коферменты редокс-процессов - никотинамидадениндинуклеотид (НАД), поставляющий электроны и протоны в ЭТЦ и его аналог никотинамидадениндинуклеотидфосфат (НАДФ).

Проведение исследований такого рода вызвано предположением об участии металлоорганических соединений в 7 окислительно-восстановительных реакциях на данных этапах электронтранспортной цепи митохондрий, что и приводит к подавлению клеточного дыхания.

Кроме того, возникает необходимость проведения сравнительного исследования действия металлоорганических соединений и соответствующих неорганических солей, содержащих ион металла (Н§ ) в той же степени окисления.

Важной задачей в исследованиях поведения металлоорганических токсикантов в окружающей среде является также поиск соединений, способных либо подавить действие этих токсикантов, либо имеющих достаточный окислительно-восстановительный потенциал, например, для обратного восстановления НАД" и НАДФ+ до НАД(Н) и НАДФ(Н) соответственно. Возможность протекания подобной реакции изучена на примере использования витамина Е и его синтетических аналогов - пространственно-затрудненных фенолов, а также аскорбиновой кислоты. Кроме того рассмотрен способ предотвращения действия соединений ртути, основанный на связывании ионов металлов сильным хелатирующим агентом -ЭДТА.

Цель работы заключается в комплексном изучении влияния ртутьорганических соединений, различающихся природой органических групп, и их неорганических предшественников на процесс поглощения кислорода биологическими системами, а также в поиске агентов, способных понизить степень токсического действия соединений ртути. 8

I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

ВЫВОДЫ

1. Соединения ртути являются окислителями по отношению к коферментам НАД(Н) и НАДФ(Н); константы скорости реакций окисления дигидроникотинамидной группы на 3-4 порядка превышают константы скорости автоокисления коферментов, а их значения определяются природой органической группы, связанной с атомом ртути. Для предотвращения окисления коферментов в присутствии соединений ртути предложено использовать хелатирующие агенты (ЭДТА) и восстановители (а-токоферол, гидрохинон и аскорбиновая кислота).

2. Обнаружено, что органические производные ртути и сулема образуют координационные соединения с анионом щавелевоуксусной кислоты, что приводит к понижению активности НАД-зависимой с^сидоредуктазной малатдегидрогеназы растительного происхождения.

3. Показано, что скорости неферментативных реакций окисления цитохрома С в присутствии соединений ртути сопоставимы с таковыми для реакций автоокисления в присутствии кислорода. Влияние ртутьорганических соединений на активность цитохром-С-оксидазы митохондриальных частиц, выделенных из печени Русского осетра, заключается в понижении активности фермента и зависит от времени экспозиции токсикантов.

4. Ртутьорганические соединения, содержащие различные органические группы, ингибируют клеточное дыхание и деление клеток, что показано на примере одноклеточных дрожжей, при этом максимальный эффект проявляют соли метил- и изопропилртути.

5. Показано, что витамин Е (а-токоферол) является детоксицирующим

134 агентом по отношению к действию ртутьорганических соединений на процессы клеточного дыхания. 6. Высказано предположение о том, что вклад в общую токсичность ртутьорганических соединений вносит генерирование свободных органических радикалов, образующихся в результате участия соединений ртути в редокс-процессах.

1. The biological alkylation of heavy elements. Ed. Craig P.J. Royal Soc.Chem., London, 1988.

2. Manahan S.E. Toxicological Chemistry. 2nd ed. Chelsea, MI: Lewis Publ., 1993.

3. Nriagu J.O., The Biogeochemistry of Mercury in the Environment, Elsevier, Amsterdam, 1979, p.89.

4. Aldridge W.N. Organotin compounds: new chemistry and application. Adv.Chem.Ser., v. 157, p. 186.

5. Waldron H.A. Subclinical lead poisoning. London: Academic Press, 1974, p.224.

6. Шустов С.Б., Шустова Л.В., Химические основы экологии, М., Просвещение, 1994, 239с.

7. Togwell A. Jackson. The influence of clay minerals, oxides, and humic matter on the methylation and demethylation of mercury by micro-organisms in freshwater sediments. Appl. Organometallic Chemistry, 1989, v.3, p. 1.

8. Vonk J.W., Sijpesteijn A.K. Studies on the methylation of mercury chloride by pure cultures of bacteria and fungi. Antoine Van Leeuwenhoek/J. Microbiol. Serol~ 1973„ v.39,, p.505.

9. Hamdy M.K., Noyes O.R. Formation of methylmercury by bacteria. Appl. Microbiol., 1975, v.30, p.424.

10. Baldi F., Filipelli M., Olson G.J., Biotransformation of mercury by bacteria from a river collecting cinnabar mine waters. Microb. Ecol., 1989, v. 17, p.263.

11. Ершов Ю.А., Плетенева Т.В., Механизмы токсического действия неорганических соединений, М., Медицина, 1989, с.164.

12. Gillespie D.C., Scott D.P. Mobilization of mercury sulfide from sediment into fish under anaerobic condition. J. Fish. Res. Board Can., 1971, v.28, p. 1807.

13. Fagestrom Т., Jernelov A. Formation of methylmercury from pure mercury sulfide in aerobic organic sediment. Water Res.,1971, p.121.

14. Gilmor C.C., Henry E.A., Mitchel R. Methylation of HgCl2 and HgS by sulfate-reducing bacteria. Abstracts of Annual Meeting of the American Society for Microbiology, Miami, FL May 8-13 1988, p.306.

15. Yamada M., Tonomura K. Microbial methylation of mercury in hydrogen sulfide-evolving environments. J. Ferment. Technol.,1972, v.50, N12, p.901.

16. Wood J.M., Scott Kennedy F., Rosen C.G. Nature, 1968, v.220, p. 174.

17. Chu V.C.W., Gruenwedel D.W. On the reaction of methylmercuric hydroxide with methylcobalamin. Z. Naturforsch, 1976, v.31, p.753.

18. Baldi F. Microbial transformation of mercury, in «Proceeding of the FAO/UNEP/IAEA Consultation Meeting». Ed. G.P. Gabrielidis, MAP Technical Reports Series. N 59, 1991, p. 58.

19. The dictionary of substsnces and their effects. Eds, M.L.Richardson, S.Gangolli. The Royal Society of Chemistry, 1994, v.5.

20. Методы элементоорганической химии. Ртуть. Под ред. Л.Г.Макаровой, А.Н.Несмеянова. М.: Наука, 1965.

21. Rabenstein D.L. The Aqueous solution chemistry of methylmercury and its complexes. Am. Chem. Soc., 1978, v. 11, p.100.

22. Зигель X., Зигель А. Некоторые вопросы токсичности ионов металлов. М.: Мир, 1993, с.117.

23. Feltier J. S., Salick В. Ann. Intern. Med. 1972, v.76, p.779.

24. Walsh C.T. The influence of age one the gastrointestinal absorption of mercuric chloride and methylmercury chloride in the rat. Environ. Res., 1982, v.27, p.412.

25. Norseth Т., Clarkson T.W. Arch. Environ. Health.1970, v.21,p.717.

26. Swenson A. Acta Pharmacol. Toxicol. 1968, v.26, p.273.

27. Chang L.A. Exp. Neurol. 1972, v.37, p.62.

28. Syversen T.L.M. Biochem. Pharmacol. 1974, v. 23, p.2299.

29. Junghaus R.P. Environ. Res. 1983, v.31, p.l.

30. Эйхлер В., Яды в нашей пище, М., Мир, 1993, 189с.

31. Merian Е., Metalle in der Umwelt, VCH Publ., Berlin, 1984, p.245.

32. Niimi A.J., Kissoon G.P. Evaluation of the critical body burden concept based on inorganic and organic mercury toxicity torainbow trout ( Oncorhynchus mykics), Arch. Environ. Contam. And Toxicol., 1994, v.26, N2, p. 169.

33. Repetto G., Sanz P., Repetto M. In vitro effects of mercuric chloride and methylmercury chloride on neuroblastoma cells. Toxicol. Vitro.,1993, v.7, N4, p.353.

34. Hare M.F., Atchison W.D. Comparative action of methylmercury and divalent inorganic mercury on nerve terminal and intraterminal mitochondrial membrane potentials. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1992, v.261, N1, p. 166.

35. Bondy S.C., McKee M. Disruption of the potential across the synaptosomal plasma membrane and mitochondria by neurotoxic agents. 1991, v.58, N1, p.13.

36. Tan X., Tang C., Castoldi A.F., Manzo L., Costa L.G. Effects of inorganic and organic mercury on intracellular calcium levels in rat lymphocytes. J. Toxicol. Environ. Health., 1993, v.38, N2, p.159.

37. Renzoni A., Zino F., Franchi E. Mercury levels along the food chain and risk for exposed populations. Environ. Res., 1998, v.77, p.68.

38. Renzoni A. Mercury in seafood and human health. Environ. Contaminants, Ecosystems and Human Health., 1995, Ch. 22, p.308.

39. М.В.Гапеева, О.Л.Цельмович, М.А.Широкова. Тяжелые металлы в осетровых рыбах Нижней Волги. Сб. тез. Физиолого-биохимический статус Волго-Каспийских осетровых в норме при расслоении мышечной ткани (кумулятивный политоксикоз), Рыбинск, 1990, с.55.

40. Cappon Chris J, Content and chemical form of mecury and selenium in Lake Ontario salmon and trout, J. Great Lakes Res., 1984, v.10, N4, p.429.

41. Горовая С.Л., Столярова C.A. Морфофизиологические особенности личинок карпа в токсической среде. Ред. ж. Изв. АН БССР. Сер. биолог.наук. Минск, 1982, 26 с.

42. Tianyi Chen, Мс Naught D.C. Toxicity of methylmercury to Daphnia pulex. Bull. Environ. Contam. And Toxicol., 1992, v.49, N4, p.606.

43. Сторожук Н.Г. Смирнов Б.П., Влияние ртути на интенсивность дыхания личинок горбуши Oncorhynchus gorbuscha (Walbaum), Вопросы ихтиологии, 1982, т.22, N5, с.889.

44. Verma S.R., Tonk LP. Effect of sublethal concentrations of mercury on the composition of liver, muscles and ovary of Notopterus notopterus. Water, Air and Soil Pollut., 1983, v.20, N.3, p.287.

45. Baatrup E. Structural and functional effects of heave metalls on the nervous system including sense organs of fish. Compar. Biochem. and Physiol. C., 1991, v. 100, N1-2, p.253.

46. Dutt Dev, Sharma Ashok Kumar, Uttar Pradesh. Toxicity and respiratory effects of mercuric chloride and methyl mercuric chloride on catfish Mystus vittatus. F. Zool., 1989, v.9, N1, p.43.

47. Wester P.W. Histopathological effects of environmental pollutants P-HCH and methylmercury on reproductive organs in freshwater fish, Compar. Biochem. and Physiol. C., 1991, v.100, N1-2, p.237.

48. Mohamed M.K., Evans T.C., Mottet N.K., Burbacher T.M. Effects of methyl mercury on sperm oxygen consumption. Acta Pharmacol. Toxicol., 1986, v.58, N3, p.219.

49. Ally A., Phipps J., Miller Dr. Interaction of methylmercury chloride with cellular energetics and related processes. Toxicol. Appl. Pharmacol., 1984, v.76, N2, p.207.

50. Stagg R.M., Rusin I., Brown Fiona. Na+, K+- ATPase activity in the gills of the flounder ( Platichthys flesus) in relation to mercury contamination in the Firth of Forth, Mar. Environ. Res., 1992, v.33, N4, p.255.

51. Naidu K. Akhilender., Naidu K. Abhinender, Ramamurthi R., Acute effect of mercury toxicity on some enzymes in liver of teleost Sarotherodon mossambicus, Ecotoxicol. And Environ. Safety., 1984, v.8, N3,p.215.

52. Sastry K.V., Rao D.K., Effect of HgC^ on some biochemical and physiological parameters of the freshwater murrel Channa punctatus, Environ. Res., 1984, v.34, N2, p.342.

53. Kramer V.J., Newman M.C., Mulvey M., Ultsch G.R., Glycolysis and Krebs cycle metalolites in mosquitofish, Gambusia holbrooki Girard 1859, exposed to mercuric chloride: allozyme genotype effects, Environ. Toxicol, and Chem., 1992, v.11, N3, p.337.

54. Rana S.V.S., Sharma Rekha. In vitro reversal of mercury inactivated renal dehydrogenases by EDTA in fish Chana punctatus. Ind. Health. 1982, v.20, N4, p.371.

55. Verma S.R., Jain Madhur, Dalela R.C. In vitro effect of mercury on tissue phosphatases of Notopterus notopterus and the role of EDTA and ascorbic acid in their restoration. Toxicol. Lett., 1982, v.10, N1, p.25.

56. Rana S.V.S., Sharma Rekha. Co-enzyme effects of inorganic mercury in the liver of a freshwater fish Chana punctatus. J. Appl. Toxicol. 1982, v.2, N6, p.275.

57. Benesh R. J. Amer. Chem. Soc. 1951, v.73, N7, p. 3391.

58. Бутин К.П., Рахимов Р.Д., Новикова И.В. Сравнение электрохимического восстановления ртутьорганических галогенидов на платиновом, ртутном и стеклоуглеродном электродах. Металлорган. химия. 1989, т.2, N4, с.849.

59. Бутин К.П., Рахимов Р.Д., Новикова И.В. О влиянии материала электрода на электрохимическое восстановление ртутьорганических солей. Вестник Моск. Ун-та. Сер.2. Химия. 1990, т.31, N6, с.574.

60. Реутов О.А., Бутин К.П., Рахимов Р.Д. Ж. Орг. химии. 1984, т.55, вып.6, с.1309.

61. Есикова И.А., Темкин О.Н., Томилов А.П. Электрохимия. 1971, т.7, N1, с.139.

62. Comprehensive Organic Chemistry v.5, p.490. Hamilton G.A. Progressing in Bioorganic Chemistry. N.Y.:Interscience, 1971, v.l, p.83.

63. Кибизова А.Ю., Берберова H.T., Охлобыстин О.Ю. Рибофлавин как катализатор аутодегидрирования НАД(Н). Журнал общей химии, 1980, т.60, N4, с.952. Gutman М. Biochemistry. 1968, v.7, p.2778. Куликова Е.В. Укр. Хим. Журнал. 1988, т.54, №12, с.1303.

64. Weber G. Nature. 1957,v.l80, р.1409. Woenckhaus С. Z . Natureforsch. 1975, v.30, p.562. Hamdy M.K., Noyes O.R. Effect of mercury on NADH and the protective role of oxalacetate. Bull.Environ.Contam.Toxicol., 1977, v.17, p.l 12.

65. Marshall J.L. J. Biolog. Chem. 1984, v.259, N5, p.3033. Гавриленко В.Ф., Ладыгина M.E., Хандовина Л.М. Большой практикум по физиологии растений. М., Высшая Школа, 1975, с.262.

66. Шугаев А.Г. Некоторые особенности структурной организации и окислительной активности дыхательной цепи митохондрий растений. Успехи современной биологии , 1991, т. 111, вып.2, с. 178.

67. Полевой В.В. Физиология растений. М.: Высшая Школа., 1989, 464с.

68. Ogata М., Kenmotsu К., Hirota N., Meguro Т., Aikoh Н. Reduction of mercuric ion exhalation of mercury in acatalasemic and normal mice. Arch. Environ.Health, 1987, v.42, p.26.

69. Plant Physiology Biochemistry and Molecular Biology, Ed. D.T.Dennis, D.H.Turpin, Longman Group, UK, 1990, p. 106.

70. M.Neuburger, in Higher Plant Cell Respiration, Ed. R.Douce, D.A.Day, 1985, v.l8,p.7.

71. C.J.R.Thorne, in Techniques in Protein and Enzyme Biochemistry, Elsevier North Holland, 1978, sect. В104.

72. Р.Досон, Д.Эллиот, У.Эллиот, К.Джонс, Справочник биохимика, Мир, Москва, 1991, 544 с. R.Dawson, D.Elliot, W.Elliot, K.Jones, Data for Biochemical Research, Clarendon Press, Oxford, 1986.

73. A.J.Mann, H.E.Auer, J.Biol.Chem., 1980, v.255, p.454.

74. D.Bickar, J.Bonaventura, C.Bonaventura, H.Auer, M.Wilson. Paradoxical effects of methylmercury on the kinetics of cytochrome с oxidase. Biochemistry, 1984, v.23, N4, p.680.

75. Зайцев В.Ф., Федорова H.H., Крючков В.Н., Горден Ю.В. Биомониторинг загрязнения тяжелыми металлами производителей севрюги. Труды международ. Форума по проблемам науки техники и образования, вып.1, Москва, 1997, с.130.

76. B.П Скулачев, Биохимия мембран, М., Высшая Школа, 1989, с.88.

77. C.E.Cooper, Biochim.Biophys.Acta, 1994 , v. 1017, p. 187.

78. Q.H.Gibson, C.Greenwood, D.C.Wharton, G.Palmer,

79. J.Biol.Chem., 1965, v.240, p.888.

80. R.A.Morton, J.Overnell, H.A.Harbury, J.Biol.Chem., 1970, v.245, p.4653.

81. Ganther H.E. Modification of methylmercury toxicity and metabolism by selenium, and vitamin E: possible mechanisms. Environm. Health Perspect., 1978, v.25, p.71.

82. Бурлакова E.B., Храпова Н.Г., Кухтина E.H. Докл. АН СССР, 1983, т.272, с.729.

83. Чудинова В.В., Алексеев С.М., Захарова Е.И., Евстигнеева Р.П. Биоорган.хим., 1994, т.20, с. 1029.

84. Welsh S.O. The protective effect of vitamin E and N,N'-diphenyl-p-phenylenediamine (DPPD) against methyl mercury toxicity in the rat. J.Nutr., 1979, v. 109, N. 10, p. 1673.

85. G.A.Russel. Free radical chain reactions involving alkyl-and alkenylmercurials. Acc.Chem.Res., 1989, v.22, N1, p.l.

86. Г.П.Гумидова, Н.Н.Сорокина, Бюлл.эксп.биол.медиц., 1967, с. 41.

87. Т.А.Назарова, В.И.Стороженко, Н.Т.Берберова, О.Ю.Охлобыстин, Вестн.АГТУ, Сб.научных трудов, 1996, вып.2, с.6.

88. Milaeva E.R., Kharitonashvili E.V., Osipova V.P., Berberova N.T., Pimenov Yu.T., Petrosyan V.S. Symposium on Ecological Chemistry. EERO-USAID, 1995, Chisinau, Moldova, p. 105.

89. Berberova N.T., Osipova V.P., Pimenov Yu.T., Kaljavin V.A., Milaeva E.R. XII FECHEM Confernce on Organometallic Chemistry, 1997, Czech Republic, Prague, PA 106.

90. Kharitonashvili E.V., Milaeva E.R., Petrosyan V.S. Fifth SETAC-Europe Congress. Denmark, Copenhagen, 1995, P 0122.

91. Н.Т.Берберова, Т.А.Назарова, О.Ю.Охлобыстин. Способ количественного определения а-токоферола в тканях гидробионтов: положительное решение о выдаче патента на N 01/03-1018 от 12.11.96 по заявке N95102263/13(004387) (приоритет от 17.02.95 г.)

92. Svanholm U., Bechard К., Parker D.V. Electrochemistry in media of intermediate acidity. VIII. Reversible oxidation products146of the a-tocopherol model compound. Cation radical, cation, and dication. J. Amer. Chem. Soc., 1974, v.96, p.2409.

93. J.Phipps et D.R.Miller. Toxicite genetique du chlorure de methylmercure (CH3HgCl ) sur les mitochondries de Saccharomyces cerevisiae. Can.J.Microbiol. 1983, v.83, N29, p. 1149.

94. Методы биологии развития. Под ред. А. Детлафа, Наука, Москва, 1974, 619 с.

95. Б.А.Рубин, Большой практикум по физиологии растений, Высшая школа, Москва, 1978, 340 с.

96. Г.И.Клебанов, И.В.Бабенкова, Ю.О.Теселкин, О.С.Комаров, Ю.А.Владимиров, Лаборат. Дело, 1988, N5, с.59.

97. Г.К.Шелухин, Сб. докладов 1 конгресса ихтиологов России, Астрахань, 1997, Изд-во ВНИРО, М., 1997, с.467.

98. Вайсбергер А., Проскауэр Э., Риддик Д.М. и др. Органические растворители, М.: Изд-во иностр. лит., 1985, с.76.

99. А.Кост. Общий практикум по органической химии, М.: Мир, 1975,.618.

100. House Н.О., Peng E.N., Peet N.P. A Comparison of Various Tetra-alkylammonium Salts as Supporting Electrolytes in Organic Electrochemical Reaction / J.Org.Chem., 1971, v.366, N16, p.2372.