Новые цвиттерионные сорбенты для ионохроматографического определения неорганических и органических ионов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

На правах рукописи

НЕСТЕРЕНКО ЕКАТЕРИНА ПАВЛОВНА

НОВЫЕ ЦВИТТЕРИОННЫЕ СОРБЕНТЫ ДЛЯ ИОНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕОРГАНИЧЕСКИХ И ОРГАНИЧЕСКИХ ИОНОВ

02 0 0 02 - Аналитическая химия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва - 2008

003449680

Работа выполнена на кафедре аналитической химии химического факультета Московского государственного университета имени М В Ломоносова

Научный руководитель

доктор химических наук, член-корреспондент РАН, профессор Шпигун Олег Алексеевич

Официальные оппоненты

доктор химических наук Курганов Александр Александрович Институт нефтехимического синтеза РАН имени А В Топчиева, г Москва

кандидат химических наук Яшин Александр Яковлевич НПО «Химавтоматика», г Москва

Ведущая организация

Институт соединений РАН, г Санкт-Петербург

высокомолекулярных

Защита состоится 22 октября 2008 г в 15 часов 00 минут в аудитории 344 на заседании диссертационного совета Д 501 001 88 по химическим наукам при Московском государственном университете имени М В Ломоносова по адресу 119992, Москва, Ленинские горы, МГУ, химический факультет

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке химического факультета МГУ имени М В Ломоносова

Автореферат разослан 15 сентября 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат химических наук

Торочешникова И И

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы В последнее время особое внимание ионной хроматографии (ИХ) направлено на разработку новых подходов для уветочения числа одновременно разделяемых и определяемых ионов Возможным путем решения данной задачи является создание новых сепективных ионообменников путем варьирования природы функциональных групп и матрицы сорбента В отличие от традиционных монофункциональных катионо- или анионообченников, удерживание ионов на цвитгерионных неподвижных фазах обустовлено не только притяжением к противоположно заряженным группам, но и отталкиванием от одноименнозаряженных групп Цвиттерионные ионообменники, на поверхности которых противоположно заряженные функциональные группы расположены в непосредственной близости друг от друга, позволяют оптимизировать селективность ИХ разделения за счет варьирования соотношения сил электростатического притяжения / отталкивания ионов и функциональных групп сорбента Отталкивание ионов от одноименно заряженных ионообменных групп уменьшает их диффузию внутрь сорбента и увеличивает скорость массообмена. способствуя улучшению эффективности ИХ разделения, а также позволяет использовать разбавленные элюенты, тем самым увеличивая чувствительность определения

Важным достоинством цвитгерионных ионообменников является возможность их использования для одновременного разделения катионов и анионов, что особенно важно при анализе питьевых и природных вод Использование цвитгерионных ионообменников может сократить врет анализа, расход реагентов и дать экономическую выгоду по сравнению с традиционными подходами, где катионный и анионный состав пробы определяется отдельно

Цель и задачи исследования:

- получение цвитгерионных сорбентов путем динамического модифицирования обращенно-фазового (ОФ) носителя цвитгерионными молекулами,

- установление механизма удерживания анионов и катионов на неподвижных фазах, модифицированных цвиттерионными молекулами,

- установление закономерностей удерживания неорганических и органических катионов и анионов, а также прекурсоров нуклеиновых, кислот на цвитгерионных сорбентах при варьировании природы, концентрации и рН элюента,

- оптимизация условий одновременного ИХ разделения и определения катионов и анионов

Научная новизна:

- изучены ионообменные свойства монолитного октадецилсиликагеля (ОДС) и композитного ОФ сорбентов, динамически модифицированных цвиттерионными ПАВ Лг-(додецил-Л'',Лг-диметиламино)алканоатами,

- установлен механизм удерживания катионов и анионов на этих цвиттерионных неподвижных фазах,

- предложена новая концепция градиента заряда катиона элюента, позволяющая сократить время анализа,

- впервые применен комбинированный тройной градиент концентрации / рН / скорости потока для одновременного разделения прекурсоров нуклеиновых кислот, находящихся в катионной, анионной и нейтральной формах на сорбенте, модифицированном цвиттерионным ПАВ ЛЧдодецил-Л'Л-диметиламино)ундеканоатом,

впервые показана возможность использования сорбентов, динамически модифицированных цвиттерионным ПАВ для одновременного разделения катионов и анионов,

- впервые использованы ультракороткие монотитные и набивные колонки, модифицированные Л-(додецил-Аг,Лг-днметиламино)ундеканоатом для разделения анионов

Практическая значимость-

Проведена оценка возможностей сорбентов, динамически модифицированных цвиттерионными ПАВ для разделения и определения катионов, анионов и прекурсоров нуклеиновых кислот Для монолитных или набивных ОФ колонок, динамически модифциро ванных Лг-(додецил-Лг,Л'-диметш1амино)ундеканоатом разработаны ИХ методики одновременного разделения и определения

- анионов в присутствие большого избытка хлорида,

- катионов переходных металлов и анионов в природной воде,

- нуклеотидов, нуклеозидов и оснований нуклеиновых кислот в экстрактах дрожжей Разработана методика определения йодида и йодата в образце столовой соли на ультракороткой котонке, модифицированной Л'-(додсцнл-Д',Л-диметиламино)ундеканоатом

На защиту выносятся следующие положения

- результаты изучения ионообменных свойств цвиттерионных сорбентов, полученных динамическим модифицированием монолитной и набивной ОДС колонок ЛЧдодецил-Лг,Л-димети;[амш1о)алка1юатами,

- установленный механизм удерживания катионов и анионов на полученных цвиттерионных сорбентах,

- результаты изучения удерживания катионов, анионов и прекурсоров нуклеиновых кислот на полученных цвиттерионных сорбентах,

- методики одновременного определения катионов и анионов в природной воде, прекурсоров нуклеиновых кислот в экстрактах дрожжей, а также методика определения йодида и йодата в присутствие значительного избытка хлорида на ультракоротких колонках

Апробация работы. Основные результаты диссертации изложены в 15 публикациях и доложены на Всероссийском симпозиуме «Хроматография и хромато-масс-спектрометрия» (Москва, 2008, 2004), XXXI Международном симпозиуме по высокоэффективной жидкостной хроматографии (Гент, 2007), Аналитическом исследовательском форуме (Глазго, 2007), XIX Международном симпозиуме по ионной хроматографии (Питтсбург, 2006), Международном конгрессе по аналитической химии (Москва, 2006), Международных конференциях студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов 2006», «Ломоносов 2005» и «Ломоносов 2004» (Москва)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 статей и 10 тезисов докладов

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, пяти глав экспериментальной части и списка литературы (276 наименований) Работа изложена на 166 страницах машинописного текста, содержит 81 рисунок и 25 таблиц

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Обзор литературы

В обзоре литературы рассмотрены и классифицированы основные типы цвиттерионных сорбентов исходя из взаимного расположения противоположно заряженных функциональных групп на поверхности или в объеме частиц сорбента, описаны методы их синтеза, проявляемые ионохроматографические свойства, а также области их применения

Экспериментальная часть

В экспериментальной части приведены методики получения и исследования цвиттерионных сорбентов и характеристики промышленно выпускаемых сорбентов, а также аппаратурное оформление экспериментов В работе использовали следующее оборудование для ВЭЖХ градиентные насосы высокого давления Vanan ProStar 230 (США) и SpectraSYSTEM Р4000 (США), инжектор Rheodyne 7125 (США), автосамплер Vanan ProStar 410 (США), детекторов Varían ProStar 330 (США) и SpectraSYSTEM UV2000 (США) Также были использованы ионные хроматографы

Dionex DX-120 и Dionex DX-500 (США) Для сбора и обработки хроматографических данных использовали следующие программные обеспечения Vanan Star, Dionex AI-450, PeakNet SP1 (США) и PicoLog (Великобритания)

Сорбенты, В работе изучены промышленно выпускаемые сорбенты композитный Gemini Cig и монолитные Chromolith RP 18-е и Onyx RP, модифицированные цвиттерионными поверхностно-активными веществами (ПАВ) Л-(додецит-Лг,Лг-дичетиламино)ундеканоатом (ДДМАУ) и #-(додецил-ЛУУ-диметиламино)бутиратом (ДДМАБ)

Сорбция ЛЦдодецил-ЛуУ-диметиламино^лканоатов на обращенно-фазовых

сорбентах

Наиболее простым способом получения цвиттерионных неподвижных фаз является динамическое модифицирование гидрофобных сорбентов подходящими цвиттерионными или амфотерными ПАВ Основными преимуществами этого способа являются простота получения сорбента, большой выбор модификаторов и однотипность закрепляемых ионообменных групп После предварительного выбора гидрофобных носителей и модификаторов, для адсорбционного закрепления были впервые использованы цвиттерионные ПАВ карбоксибетаинового типа ДДМАУ и ДДМАБ (рис 1)

Рис.1. Структуры ДДМАБ (а) и ДДМАУ (б)

Поскольку динамическое модифицирование (физическая адсорбция) используется для получения цвиттерионных ионообменников, очень важно установление структуры адсорбированного слоя молекул ПАВ (монослой, полислой или адсорбированные мицеллы) Для изучения структуры слоя ДДМАУ на поверхности ОФ сорбента, были получены изотермы адсорбции ПАВ на Gemini С¡g при рН 3 0 и 6 6 Учитывая слабокислую природу карбоксильной группы (для ДДМАУ рКа = 5 04 и для ДДМАБ рКа = 4 89, значения определены из данных потенциометрического титрования), можно ожидать, что рН раствора модификатора будет влиять на адсорбцию и структуру образующегося слоя Как видно из изотерм адсорбции при концентрации ПАВ выше 8 мМ начинается полимолекулярная адсорбция При концентрациях ПАВ меньше 8 мМ обе изотермы (рис 2) при рН 6 6 и 3 0 подчиняются уравнению Лэнгмюра

Ч = Яао-

Кс

в_ вщ

(>р 1)

1+Кс

где q - адсорбция, К - константа равновесия, с - концентрация ПАВ, - предел адсорбции, в - число занятых адсорбционных центров, вт - общее число адсорбционных центров Рост адсорбции при высоких концентрациях связан с началом полимолекулярной адсорбции или образованием различных структур на гидрофобной поверхности сорбента В зависимости от гидрофобности поверхности сорбента и свойств цвиттерионного ПАВ возможно образование различных структур

д мш/м'

Рис 2. Изотермы адсорбции ДДМАУ на поверхности йетии С18 при (а) рН 6 б и (б) рН 3 О при 20° С я - степень адсорбции ДДМАУ, с - начальная концентрация ПАВ

с мм

Используя уравнение изотермы Лэнгмюра можно найти площадь, занимаемую молекулой на поверхности раздела фаз Рассчитанные значения для молекулы ДДМАУ составляют 102 + 5 А2 при рН 3 0 и 82 ± 4 А2 при рН 6 0 Более высокое значение площади, занимаемой молекулой в кислых условиях связано с отталкиванием одинаково заряженных молекул ПАВ на поверхности сорбента При рН < 4 0 карбоксильные группы ДДМАУ протонированы, поэтому образование монослоя на поверхности сорбента за счет взаимного отталкивания заряженных молекул наиболее вероятно При рН 6 6 молекулы ДДМАУ могут образовывать внутренние соли или взаимодействовать с противоположно заряженными группами других молекул ПАВ, при этом могут образовываться полислои, увеличивая тем самым предельную адсорбцию Образование внутренних солей также выражается в уменьшении эффективной ионообменной емкости при нейтральном рН В этом случае использование элюентов с высокой ионной силой и/или низким значением рН, должно вызывать быструю реорганизацию адсорбированного слоя и образование равномерного монослоя

Для изучения устойчивости адсорбированного слоя ДДМАУ на поверхности ОДС, модельную смесь анионов вводили в колонку через равные промежутки времени в течение 30 часов. За этот период модельная смесь была введена 288 раз, что эквивалентно более, чем 6200 объемам колонки. Полученные хроматограммы представлены на рис. 3. Было показано, что в исследованных условиях адсорбированный слой ПАВ на поверхности сорбента был устойчив так как не наблюдалось изменений времен удерживания определяемых анионов. Для дальнейшей оценки устойчивости адсорбированного слоя ДДМАУ, та же модельная смесь анионов была введена при повышенной температуре (40°С) 170 раз с интервалом 20 мин. Общее время эксперимента составило 57 часов и за это время через колонку был пропущен объем подвижной фазы, эквивалентный 11 000 объемам колонки, при этом значительного изменения времен удерживания анионов также не наблюдалось. В результате было показано, что после пропускания более 17 000 объемов колонки подвижной фазы адсорбированный слой ПАВ был устойчив.

""мкСм

Рис. 3. Хроматограммы 288 последовательных проб модельной смеси хлорида, нитрита, бромида и ни трата (с = 50 мг/л). Колонка: СЬтотоНШ ЯР, модифицированная ДДМАУ, 50 х 4.6 мм. Элюент: 1 мМ фталевая кислота (рН = 3.0), Б = 2.0 мл/мин. Прямое кондукто-метрическое детектирование

-О.М 0 00

Установление механизма удерживания анионов на обращенно-фазовых сорбентах, динамически модифицированных УУ-(додецил-ЛуУ-диметиламино)алканоатами.

Для установления механизма удерживания ионов на сорбентах, модифицированных карбоксибетаиновыми ПАВ были изучено влияние ионной силы

раствора модификатора на ионообменную емкость неподвижной фазы, влияние концентрации и заряда катиона элюента на удерживание определяемых анионов При увеличении ионной силы модифицирующего раствора наблюдалось нелинейное увеличение ионообменной емкости колонки от 45 до 120 мкмоль (рис 4) Это связано с одновременным увеличением адсорбции цвитгерионных ПАВ за счет уменьшения электростатического отталкивания и формированием более плотного размещения молекул ПАВ на поверхности, и уменьшением мономолекулярной концентрации ПАВ за счет более низких значений ККМ

Рис. 4. Зависимость ионообменной емкости колонки от ионной силы раствора модификатора

Известно, что удерживание ионов на монофункциональных сорбентах уменьшается при увеличении концентрации элюента, однако, для цвитгерионных сорбентов наблюдался максимум удерживания анионов (рис 5) Вероятно, это связано с увеличением эффективной ионообменной емкости сорбентов вследствие разрушения ионных пар, образованных противоположно заряженными группами цвитгерионных молекул, адсорбированных на поверхности ОДС

300 -

200

N¿01

1 №СЮ3

ЫаСЮ.

05 10 15

о тм

30'

20

1<Ч

ЫаС!

12 16

'кыаСТО^— МаСЮ.

\

05 10 15 е им

V

12

16

с, иМ

с,мМ

Рис. 5. Влияние концентрации солей натрия на удерживание йоди-да на колонках Оепнт С]8 (а) и СЬготоМЬ ЯР (б), модифицированных ДДМАУ, 50 х 46 мм

(а)

(б)

Увеличение концентрации элюента с > 01 мМ приводит к уменьшению коэффициентов емкости (к) анионов, которое связано с увеличением элюирующей силы элюента Для сорбентов, модифицированных ДДМАБ наблюдалась та же зависимость, однако значения к были ниже, что связано с более низкой ионообменной емкостью сорбента и неустойчивостью адсорбированного слоя ДДМАБ на поверхности ОФ сорбента

В данной работе внешние карбоксильные группы цвиттерионных молекул обладают отрицательным зарядом, который отталкивает определяемые анионы Величина отрицательного заряда на поверхности зависит от силы взаимодействия катионов элюента с карбоксильными группами сорбента, и от силы взаимодействия между анионами и внутренними аминогруппами Сильное взаимодействие с катионами элюента уменьшает отрицательный заряд на поверхности, а сильное взаимодействие с анионами элюента увеличивает его Таким образом отрицательный заряд на поверхности образует барьер, который определямые анионы должны преодолеть для того, чтобы достичь анионообменную группу Не учитывая очевидное влияние рН элюента, величина отрицательного заряда на поверхности может быть уменьшена за счет частичной нейтрализации при использование в элюенте солей катионов с зарядом 2+ и 3+ (рис 6)

Рис 6. Типичные зависимости удерживания анионов от заряда катиона элюента

Элюенты 10 мМ (по катиону) хлориды (а) и перхлораты (б) / -Na\ 2 - Mg2+, 3 -Се3+ Колонки Gemini С18, модифицированные ДЦМАУ, 50 х 4 6 мм

Слабое взаимодействие Na+ с карбоксильной группой и сильное взаимодействие между С104" и аминогруппой при использование NaC104 элюента приводит к образованию доннановской мембраны с сильным отрицательным зарядом (рис 76), который обеспечивает сильное отталкивание определяемых анионов и уменьшение их удерживания При использование СеС1з элюента, возникает сильное взаимодействие

200

/

150

Y

s<f-

40

I

30 20 10 о'

(а)

"-о г

но,

Вг

jf^q ——■

заряд катиона

16 14 12 10 8 6

4(Г

SZN

.-а г

NO.

Чвг

,т ___~~ "\INO

-----—5------ »ею,

_—-«га,

2 3

заряд катиона

(б)

между Се3+ и карбоксильной группой карбоксибетаина и слабое взаимодействие между СГ и четвертичной аминогруппой (рис 7в), при этом удерживание анионов увеличивается Поскольку ДДМАУ и ДДМАБ содержат слабокислую внешнюю карбоксильную группу, с уменьшением рН эноента уменьшается число диссоциированных карбоксильных групп, при этом увеличивается анионообменная емкость сорбента Ион гидроксония взаимодействует с карбоксильной группой сильнее, чем любой другой катион, тем самым нейтрализует отрицательно заряженный барьер (рис 7г)

<— подвижная фаза <- доннановская мембрана

• неподвижная фаза

(а)

КаСЮ4 элюент

СеС13 элюент

а-

кислота в качестве элюента а-

1гА"1

^А" I

(в) "" ' (Г)

Рис. 7. Схематическое изображение механизма удерживания (а) образование доннановской мембраны, использование КаСЮ4 (б), СеС13 (в) элюентов, (г) элюента с низким значением рН

Поскольку было показано (рис 6), что время удерживания анионов уменьшается при уменьшении заряда катиона элюента, была исследована возможность применения «градиента заряда катиона элюента» для уменьшения времени разделен™ анионов

Для иллюстрации концепции были получены два разделения модельной смеси в отсутствии и при использовании градиента заряда катиона элюента, при этом концентрация элюента не изменялась (рис 8) Было показано, что в случае использования градиента заряда катиона, время анализа сократилось примерно в два раза, при этом улучшилась форма пиков и разрешение

Разделение неорганических и органических анионов на обращенно-фазовых колонках, модифицированных цвиттерионными ПАВ

Влияние концентрации элюента на удерживание анионов было изучено для ОФ С)8 монолитной (СкготоЬШ) и набивной (ветки С^) колонок, модифицированных ДДМАУ или ДДМАБ Для всех неподвижных фаз наблюдалось уменьшение удержи-

3 4 0 07

0 0«

1 0 05

\| \1 II „ 0 04 Э

12 3« ^

10

О 03 0 02 0 01 0 00

Рис. 8. Разделение стандартной смеси анионов без (а) и с (б) градиентом заряда катиона элюента 1 -СН3СОО,2-Ш2,3-Вг", 4-да3\ 5-82032", 6 - СЬСНСОО', 7 - I", 10 8 - фталат, 9 - бензоат, ~А_ 10 - БСИ' Элюент 10

0 12 3 4

20 40 60 i t, МИН

43 t МИН

т мМ MgCl2 (а) и градира) ^ ент заряда катиона от 10 мМ MgCl2 до 20 мМ NaCl (0- 10 мин) и 20 мМ "NaCl (10-80 мин) (б) Колонка Gemini С и, модифицированная ДДМАУ, F = 1 0 мл/мин, детектирование УФ 210нм

вания при увеличении концентрации элюента Зависимости удерживания от концентрации элюента в билогарифмических координатах линейны, значения тангенсов углов наклона (tg а) для однозарядных анионов находятся в интервале 0 110 50 для Gemim Cjg модифицированных ДДМАУ или ДДМАБ и в интервале 0 42-0 68 для колонок Chromolith, модифицированных ДДМАУ, что несколько ниже теоретических значений, отражает цвиттерионный характер обеих неподвижных фаз

Для обеих неподвижных Gemmi Ci8 фаз был потучен следующий порядок элюирования анионов Ю3" < ВгО-/ я N02' < Br" < N03" < S2032' < I" < SCN" < C13C202' Порядок элюирования для колонок Chromolith, модифицированных ДДМАУ или ДДМАБ был несколько иным (отмечена более высокая селективность к бромату и нитриту) Юз" < N02" < ВЮ3" < Br' < N03" < S2032" < I" < SCN" < С13С202" При изменении концентрации элюента порядок элюирования не изменялся Более низкие значения факторов емкости для всех анионов в случае использования сорбента, модифицированного ДДМАБ также связам с низкой устойчивостью адсорбированного слоя ПАВ

рН имеет сильное влияние на удерживание анионов на сорбентах, модифицированных карбоксибетаинами Поскольку молекулы ДДМАУ и ДДМАБ содержат слабокислую внешнюю карбоксильную группу, то с уменьшением рН уменьшается число диссоциированных карбоксильных групп на поверхности сорбента, модифицированного этими ПАВ, при этом увеличивается его анионообменная емкость, поэтому для всех исследованных сорбентов наблюдалось увеличение удерживания анионов с уменьшением рН Значения селективностей были

сходны для неподвижных фаз модифицированных ДДМАУ и ДЦМАБ, и было отмечено сильное удерживание поляризуемых анионов Все колонки демонстрировали хорошую селективность разделения ряда пар пиков, как, например, ВгОз'/Вг', Юз'/I" и NCV/NCV Для большинства анионов эффективность разрешения была выше для колонок, модифицированных ДДМАУ

Хроматограммы, полученные в оптимальных условиях для Gemini Qg и Chromohth модифицированных ДДМАУ, представлены на рис 9 Однако несмотря на то, что в выбранных условиях пики на хроматограммах были полностью разрешены, общее время анализа было слишком долгим В таблице 1 представлены хроматографические параметры этих разделений

16

=> <

£

на,

о,

J

NO,

111

D <

£

< б

SCN

JL

1°,

SCN

20

t, МИН

30

40 60 t, МИН

(a)

(6)

Рис. 9. Хроматограммы стандартной смеси анионов (а) Колонка Gemmi C|g, модифицированная ДДМАУ, 50 х 4 б мм, элюент 100 мМ фосфатный буферный раствор, рН 3 0, F = 10 мл/мин, (б) колонка Chromohth RP модифицированная ДДМАУ, 100 х

4 6 мм,элюент 10 мМ фосфатный буферный раствор, рН 4 5, F = 1 0 мл/мин

Таблица 1 Хроматографические параметры разделения смеси анионов

анион Gemini С18 модифицированная ДДМАУ Chromohth RP модифицированная ДДМАУ

к а уУтт/м Rs к a JVtt/M Rs

Юз' 0 35 - 4560 - 0 53 - 8975 -

N02" 1 21 3 45 10400 (NOjTIO,-)! 77 1 56 2 94 7751 (N027I03") 1 59

Br" 2 04 1 70 15140 (Br7N02-) 1 60 2 11 1 35 2374 (Br'/NOi") 1 24

NO3" 2 65 1 30 13280 (N037Br")l 02 6 46 3 06 6278 (NO3W) 1 11

Г 15 8 5 97 34880 (I7NW) 9 74 10 8 1 68 8087 (IVNOj") 1 62

SCN 70 1 4 43 19680 (SCN7T) 11 58 62 7 5 70 3131 (SCN7T) 1 66

Показано, что эффективность пиков для по сравнению с ~ 9000 тт/м для эффективности может быть связано с

набивной колонки достигала ~ 35000 тт/м, монолитной Столь сильное различие в природой носителя Возможной причиной 11

может быть неполное модифицирование монолитной колонки, во-первых, октадецилсиланом, и, во-вторых - ПАВ, в результате этого часть силанольных групп может быть доступна для ионного обмена

Разделение анионов в условиях градиента потока на набивной микроколонке, модифицированной ДДМАУ

Достоинством ультракоротких колонок является возможность сокращения времени анализа Параметры таких колонок позволяют использовать повышенные скорости потока, что может еще сильнее сократить время анализа Повышенные скорости потока могут быть постоянными (изофлюентный способ) или программирование изменяться (градиент скорости потока) На набивной микроколонке, модифицированной ДДМАУ (SecurityGuard Gemini С)8, 4 0 х 3 0 мм) было получено разделение анионов с использованием градиента скорости потока (рис 10)

(б)

t, «да

(а) Изофлюентные условия F = мл/мин

1 0

1, шш

(б) Градиент скорости потока 0 0-30 мин - от 0 3 мл/мин до 5 0 мл/мин

3 0-120 мин - 5 0 мл/мин

Рис. 10. Разделение модельной смеси анионов 1 -N02\ 2 - N03", 3 -C6H5COCr, 4-1, 5 - SCN", 6 -С13ССОО" Колонка SecurityGuard Gemini Cl8, 4 0 x 3 0 мм, модифицированная ДДМАУ Элюент 10 мМ фосфатный буферный раствор, рН 22

В этих условиях градиента скорости потока разрешение слабоудерживаемых ионов сохранилось, а общее время анализа сократилось до 10 мин, что соответствует уменьшению времени анализа на 70 %

Одновременное разделение неорганических анионов и катионов на цвиттерионных неподвижных фазах

ОФ неподвижные фазы, динамически модифицированные ПАВ карбоксибетаинового типа обладают выраженными анионообменными свойствами

Такие сорбенты могут быть использованы для одновременного определения анионов и катионов в форме отрицательно заряженных комплексов методом анионообменной ИХ Ранее цвиттерионные сорбенты не были использованы для этих целей

В качестве элюента была выбрана лимонная кис юта, ранее не использованная для одновременного определения анионов и анионных комплексов щелочноземельных и переходных металлов Лимонная кислота образует растворимые устойчивые отрицательно заряженные комплексы с ионами щелочноземельных и переходных металлов и характеризуется быстрой кинетикой комплексообразования

рН элюента на основе органических кислот (лимонной, щавелевой или уксусной) влияет на удерживание и селективность разделяемых ионов С увеличением рН возрастает степень диссоциации карбоксильных групп молекул адсорбированного ДДМАУ (рКа = 5 04), что влияет на ионообменную емкость сорбента и на удерживание анионов Во-вторых, диссоциация карбоксильных групп лимонной (рК3, 3 13, рК^ 4 76, рК„з 7 40), щавелевой (рКа] 1 20, рК^ 4 20) или уксусной (рКа = 4 76) кислот, используемых в качестве элюента, вызывает увеличение заряда элюирующего аниона, и элюирующей силы подвижной фазы В-третьих, условные константы устойчивости комплексов, образующихся с этими кислотами, равно как и заряды кочплексообразующих ионов, также зависят от рН Зависимость удерживания катионов металлов от рН элюента представлена на рис 11

Для щелочных металлов при использовании оксалатного элюента, рН 4 0 наблюдался порядок элюирования, соответствущий обычному ионному обмену 1л+ < Ма+ < МН4" < К+ < Сз+ Но для цитратного элюента, рН 4 0 наблюдался иной порядок С5+ » < К+ < МН^ < 1л+ Это обусловлено более высокой комплексообразующей способностью цитрата Для катионов щелочноземельных металлов наб подался следующий порядок элюирования М§2+ < Са2+ ~ Зг2+ < Ва21", полученный для оксалатного элюента, является обычным для карбоксильных катионообменников Для цитратного элюента наблюдалось обращение порядка элюирования

Значительно более сильное удерживание наблюдалось для катионов переходных металлов, при этом уменьшение удерживания при увеличении рН элюента наблюдалось для обоих элюентов Переходные металлы образуют отрицательно заряженные комплексы как с лимонной, так и со щавелевой кислотой, удерживание этих комплексов на цвиттернонном сорбенте, модифицированном ДДМАУ, происходит по анионообменному механизму для анионных комплексов металлов наблюдалось уменьшение удерживания с увеличением рН Порядок элюирования катионов переходных металлов был одинаковым для обоих элюентов при рН 4 0 Мп2+ < СсГ « Ш2* < С<12г

Рис 11. Зависимость фактора удерживания от рН элюента для выбранных катионов Колонка Gemini С is,

модифицирована я ДДМАУ, 100 х 4 б мм Элюент (а) 1 мМ цитрат-ный буферный раствор, (б) 1 мМ оксалатный буферный раствор

(а)

рН

(б)

рн

Для объяснения роли комплексообразования на удерживани катионов металлов на цвиттерионной неподвижной фазе, модифицированной ДДМАУ, была получена зависимость удерживания катионов металлов от рН для ацетатного буферного раствора в качестве элюента Известно, что ацетатные комплексы в основном очень слабые и это оказывает влияние на удерживание и селективность разделения Из рис 12 видно, что для всех изученных катионов характерно очень слабое удерживание и при увеличении рН наблюдается слабое увеличение времен удерживания Наблюдаемый порядок элюирования являлся характерным для простого катионного обмена 1л+ « Ыа+ « К+ * Ш4+ < Сз+ < М82" < Са2+

Sr2+ < Ва2+

< Mn2+ < Со2+ < Cd2+

<Zn

Эффективность колонки Gemini С18, модифицированной ДДМАУ, была почти в два раза выше для цитратных элюентов Это связано с тем, что для образования отрицательно заряженных оксалатных комплексов необходимо двухступенчатое комплексообразование Было показано, что с уменьшением рН элюента, селективность и эффективность увеличивались для всех катионов (рис 13)

При установлении механизма удерживания было показано, что при низких рН комплексы с цитратом преимущественно положительно заряжены, и только малая их доля нейтральна или отрицательно заряжена С ростом рН доля отрицательно заряженных комплексов увеличивается и при рН 7 0 большинство комплексов отрицательно заряжены Однако при рН 7 0 поверхность неподвижной

-0 5

-1 0

2л' ----

Рис. 12 Влияние от рН элюента на удерживание катионов Колонка Оегшш С18, модифицированная ДЦМАУ, 100 х 4 6 мМ Элюент 1 мМ ацетатный буферный раствор

рН

фазы также отрицательно заряжена за счет диссоциации карбоксильных групп ДЦМАУ,что приводит к увеличению отталкивания комплексов, уменьшая время их удерживания Более того, увеличивается элюирующая способность цитрата за счет его диссоциации, что также выражается в уменьшении времени удерживания отрицательно заряженных комплексов

Рис 13. Зависимость эффективности колонки от рН элюента Колонка Gemini С18, модифицированная ДЦМАУ, 100 х 4 6 мм Элюент 1 мМ ЦИТ-ратный буферный раствор (а) и I мМ окса-латный буферный раствор (б), F = 10 мл/мин

20 СО

1503

Мтт

1000

SOD

35 45 45 50 55 80 65 70 рН

3 5 40 4 5 50 60 SS рН

(а)

(б)

Юз-

Основным достоинством цвиттерионных ионообменников является возможность их использования для разделения катионов переходных металлов и анионов С этой целью было предложено использовать неподвижные фазы, модифицированные ДДМАУ На рис 14 показана хроматограмма одновременного разделения 5 катионов и 6 анионов за 16 минут

3 0)- N3» С1 26 20

мкСм Вг

м

10

0.5 00

VJ

no;

\J

0 5 10 15 20 2 5 t. мин

Fe

10 12 14 15

Рис 14. Хроматограмма

одновременного разделения катионов и анионов Колонка Gemini С18, модифицированная ДДМАУ, 100 х 4 6 мм, Элюент 1 мМ цитратный буферный раствор, рН 4 0 F = 1 0 мл/мин

{, мин

Разделение прекурсоров нуклеиновых кислот

Ввиду цвиттерионной природы неподвижной фазы, модифицированной ДДМАУ, а также существования нуклеозидов и оснований нуклеиновых кислот в катионной или нейтральной форме, а нуклеотидов - в анионной форме в широком диапазоне рН, была исследована возможность одновременного разделения нуклеотидов, нуклеозидов и оснований нуклеиновых кислот на ОФ сорбентах, модифицированных цвигтерионным ПАВ карбоксибетаинового типа

Основания нуклеиновых кислот удерживаются наиболее слабо из всех исследованных прекурсоров, так как преимущественно находятся в катионной форме Показано (рис 15), что при увеличении рН удерживание всех оснований, за исключением цитозина, не изменялось

Нуклеозиды Удерживание нуклеозидов так же связяно со значениям их рКа (рис 16) Так, гуанозин и уридин преимущественно нейтральны в выбранном диапазоне рН Поэтому при увеличении рН не наблюдается значительного изменения удерживания этих нуклеозидов (рис 16) В то же время, аденозин и цитидин, которые протонированы при рН < 3 3 и 4 2, соответственно, при использовании кислых элюентов ведут себя так же как цитозин

--------

Рис. 15. Зависимость фактора удерживания от рН элюента для 1 - цитозина, 2 - урацила, 3 - тимина, 4 - гуанина, 5 - аденина. Колонка: ОгготоНШ ЯР, 100 х 4.6 мм, модифицированная ДДМАУ. Элюент: 1 мМ ацетатный буферный раствор

-0-8

Рис. 16. Зависимость удерживания от рН .1.01- элюента для 1 - цитидина, 2 - уридина, 3

аденозина, 4 - гуанозина. Колонка: СЬгошоШЬ КР, 100 х 4.6 мм, модифицировать ДДМАУ. 4 5 5 0 ^ ¡^ Элюент: 1 мМ ацетатный буферный раствор

рН

Нуклеотиды. В отличие от нуклеозидов и оснований, нуклеотиды имеют отрицательный заряд в выбранном рабочем диапазоне рН. Разделение нуклеотидов при рН от 4.0 до 6.0 происходит за счет анионного обмена. В результате при увеличение рН элюента от 4.0 до 6.0, увеличивается отрицательный заряд на поверхности модифицированного сорбента, при этом заряд нуклеотидов остается практически неизменным, поэтому с увеличением рН наблюдается уменьшение удерживания нуклеотидов (рис. 17). Для сокращения времени анализа возможно использование градиента рН.

Достоинством монолитных колонок является возможность их использования при повышенных скоростях потока. Модифицирование таких колонок ДДМАУ, который находится в цвиттерионной форме в выбранном диапазоне рН и позволяет варьировать селективность путем изменения рН и концентрации элюента,

обеспечивает возможность применения комбинированного градиента концентрации, рН и скорости потока для разделения соединений, находящихся в катионной, анионной и нейтральной формах (рис 18)

Рис 17. Зависимость удерживания от рН элюента для 1 - ЦМР, 2 - СМР, 3 - АМР, 4 - ОМР, 5 - СОР, 6-ГОР, 7-СТР, 8-1ГГР,9~АОР, Ю-ОБР, 11-АТР, 12 - СТР. Колонка СЬготоЬШ ИР, 100 х 4 6 мм, модифицированная ДДМАУ Элюент 5 мМ ацетатный буферный раствор

45 50 55 SO 65 70 РН

5

(Я

5

Рис. 18 Разделение стандартной смеси прекурсоров нуклеиновых кислот в условиях тройного градиента концентрации /рН/ скорости потока Колонка Chromohth RP, модифицированный ДДМАУ 200 х 4 6 мм Элюент А 5 мМ уксусная кис юта, рН 3 6 Элюент Б 100 мМ ацетат аммония, рН 5 3 Градиент от 0 0 до 8 0 мин -100 % A, F = 0 5 мл/мин ,от 8 0 до 14 0 мин - от 100 % А до 50 % А -50 % Б, F = от 0 5 до F = 2 0 мл/мин , от 14 0 до 22 0 мин - от 50 % А - 50 % Б до 100 % Б, F = 2 0 мл/мин, от 22 0 до 28 0 мин - 100 % Б, F = от 2 0 до 3 5 мл/мин, от 28 0 до 32 0 мин- 100 % Б, F = от 3 5 до 4 5 мл/мин, от 32 0 до 50 0 мин - 100 % Б, F = 4 5 мл/мин Температура колонки 8 5 °С Прямое УФ-детектирование, X - 260 нм

Q 003 ■

0 002

0 001

0 000

Видно, что соединения, находящиеся в катионной форме элюируются первыми (цитозин, цитидин), затем в нейтральной форме (уридин, тимин, аденин, гуанин, аденозин, гуанозин) и, наконец, в анионной форме -1 (CMP, UMP, AMP), -2 (CDP, UDP, GDP) и -3 (СТР, UTP, АТР и GTP)

Определение неорганических и органических анионов и катионов в объектах

В работе была продемонстрирована возможность использования ОФ сорбентов, модифицированных ДЦМАУ, для определения катионов, анионов и прекурсоров нуклеиновых кислот в реальных объектах

Анализ йодированной соли

Микроколонка, модифицированная ДЦМАУ, была использована для анализа столовой йодированной соли (рис 19) В присутствии многократного избытка хлорида были получены следующие значения содержаний йодида 3 55 + 0 05 мкг Г/г (R2 = 0 974) и йодата 1 05 ± 0 02 мкг Ю37г (R2 = 0 991) (п = 5, Р = 0 95) чистого образца столовой соли

м

сг

25

20

3

4 15 Е 15

XI <

10

00 05 1 0 1 5 20 25

t МИН

Рис. 19. Разделение Юз' и I" в присутствие высокого содержания СГ в растворе йодированной столовой соли с концентрацией 20 г/л Колонка Оепнш С18 модифицированная ДДМАУ, 4 0x30 мм Элюент 10 мМ фосфатный буферный раствор рН 2 2, Р=1 0 мл/мин

Анализ образца воды кисчого стока с рудников

Методика, разработанная для одновременного определения анионов и катионов была использована для анализа образца природной воды, взятой из кислотного стока с рудников (р Авока, окр Виклоу, Ирландия) Поток, несущий кислый сток, берет свое начало в рудниках, расположенных в горной части бассейна реки Преобладающими минералами в месторождении являются пирит и халькопирит с включениями сфалерита и галенита

После пробоотбора воды к образцу была добавлена азотная кислота до рН 3 О для консервации пробы На рис 20 представлена хроматограмма одновременного определения и разделения анионов в образце природной воды Содержание катионов переходных металлов и анионов в пробе было определено из уравнений градуировочных зависимостей, методом стандартных добавок, а также методами ААС с пламенным атомизатором и атомно-эмиссионной спектроскопии с ИСП атомизацией (табл 2, 3)

и»*

Рис. 20. Хроматограмма образца воды кислотного стока Колонка Опух модифицированная ДДМАУ, 100 х 3 0 мм Элюент 1 мМ цитратный буферный раствор, рН 3 8, Р = 0 8 мл/мин

Таблица 2. Характеристики определения анионов и катионов на колонке Опух Ш3, модифицированной ДДМАУ Элюент 1 мМ цитратный буферный раствор, рН 3 8 Детектирование кондуктометрическое

Ион С1" Си2+ Ре N03 ЭО/

ПО, мг/л 0 69+0 05 0 30+0 02 0 48±0 09 0 46+0 02 0 37+0 01 1 39+0 06

а* 53 95 49 94 44 78 ¡9 29 81 88 50 64

Ь* 0 19 -0 10 0 75 1 44 -5 67 0 13

г 0 999 0 999 0 981 0 986 0 995 0 999

* Коэффициенты градуировочных графиков зависимостей Б пиков от концентрации иона с, мМ 8пИка =а+Ь*с

Таблица 3. Концентрации ионов в пробе природной воды, определенные разными методами

Ион Градуировочный график, мг/л (мМ) Метод добавок, мл/л ААС мл/л ИСП-АЭС, мл/т

Zni+ - 29 68±2 98* 46 4110 23 58 97+0 18

сг 12 92±0 57 (0 425 мМ) 12 31±0 62 - -

Cui+ 3 80±0 19 (0 61 мМ) 4 06±0 20 716±0 13 4 25+0 06

FeJ+ 387 27±18 97 (6 89 мМ) 410 13+20 51 354 50±14 08

NO, 804 57±10 90 (12 97 мМ) - - -

S042 1329 05+18 37 (13 84 мМ) 1297 0±19 05 - -

Определение прекурсоров нуклеиновых кислот в экстрактах дрожжей

Комбинированный тройной градиент, предложенный для разделения прекурсоров нуклеиновых кислот, был также применен для анализа образцов коммерческих экстрактов дрожАей на содержание оснований нуклеиновых кислот, нуклеозидов и нуклеотидов (рис 21) Несмотря на наличие большого числа неидентифицированных пиков на хроматограммах, прекурсоры нуклеиновах кислот

Рис. 21. Хромато-граммы образцов коммерческих дрожжевых экстрактов в условиях тройного градиента концентрации / рН / скорости потока Колонка Chro-mohth RP, модифицированная ДЦМАУ 200 х 46 мм Остальные >с-

5 10 15 20 25 30 35 ловиякакнарис 18

t, мин

ВЫВОДЫ

1 Получены новые цвиттерионные сорбенты путем динамического модифицирования набивных (Gemini С]8) и монолитных (Chromolith) ОФ сорбентов карбоксибетаиновыми ПАВ N-(jioaemn-N,N-

диметиламино)ундеканоатом и Л''-(додецил-уУ,Аг-диметиламино)бутиратом

были идентифицированы методом стандартных добавок

Изучена адсорбция этих ПАВ на поверхности и показано, что структура адсорбированного слоя на поверхности и ионообменная емкость колонки зависит от рН и ионной силы модифицирующего раствора

2 Установлен механизм удерживания анионов на цвиттерионных сорбентах модифицированных карбоксибетаиналш Показано, что механизм состоит из двух эффектов ионной эксклюзии и хаотропных взаимодействий

3 Изучено влияние заряда катиона элюента на удерживание определяемых анионов Основываясь на полученных результатах была предложена концепция градиента заряда катиона, использование которого позволило сократить общее время анализа до 50 %

4 Изучены анионообменные свойства полученных сорбентов В оптимальных условиях получены разделения молельных смесей анионов Показана возможность использования набивных ультракоротких колонок, модифицированных ДДМАУ, для разделения анионов в условиях градиента скорости потока и для определения анионов в присутствии многократного избытка хлорида

5 Изучено удерживание катионов в виде анионных комплексов на сорбентах, модифицированных ДДМАУ Использование цитратного элюента позволило улучшить селективность разделения катионов по сравнению с использованием аминокарбоксильных комплексонов в качестве элюентов

6 Предложен способ одновременного разделения и определения анионов и катионов на ОДС, модифицированном ДДМАУ

7 Показана возможность использования цвиттерионных ионообменников для одновременного разделения прекурсоров нуклеиновых кислот, находящихся в катионной, анионой или нейтральной формах при использовании нового тройного комбинированного градиента концентрции / рН / скорости потока

Основные результаты диссертации изложены в следующих статьях:

1 Р A Kebets, Е Р Nesterenko, Р N Nesterenko, AI Alpert Ion chromatography performance of poly(aspartic) acid bonded silica with various pore sizes at different ionic strengths and column temperatures//Microchimica Acta 2004 V 146 P 103-110

2 С O'Riordain, Leon Barron, E P Nesterenko, P N Nesterenko, В Paull Double gradient chromatography using short monolithic columns modified with a long chained zwittenonic carboxybetame surfactant IIJ Chromatogr A 2006 VI109 P 111-119

3 EP Nesterenko, LP Barron, PN Nesterenko, В Paull Flow gradient liquid chromatography using a coated anion exchange microcolumn //J Sep Sci 2006 V 29 P 228-235

4 ЕР Nesterenko, С. Guivarc'h, С Duffy, В Paull Separation of nucleic acid precursors on an amphoteric surfactant modified monolith using combined eluent flow, pH and concentration gradient //J Sep Sci 2007 V30 P 2910-2916

5 E P Nesterenko, P N Nesterenko, В Paull Anion-exchange chromatography on short reversed-phase columns modified with N-(dodecyl-N,N-dimethylammomo)alcanoates // J Chromatogr A 2008 V 1178 P 60-70

и тезисах:

1 E П Нестеренко, А В Иванов, Jle Тхи Хиен, П Н Нестеренко Ионообменные свойства сорбентов с закрепленной иминодиуксусной кислотой // Всероссийский симпозиум «Хроматография и хромато-масс-спектрочетрия», 15 -19 Марта 2004г Москва Р 159

2 Е П Нестеренко Ионообменные свойства силикагеля, модифицированного иминодиуксусной кислотой Международная конференция студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов 2004» 12-14 апреля 2006 г Москва, Россия

3 Е П Нестеренко Анионообменные свойства колонки Gemmi Ci8 модифицированной Аг-(додецил-?/г?/-диметиламино)ундеканоатом Международная конференция студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов 2005» 10 -12 апреля 2005 г Москва, Россия С 32

4 ЕП Нестеренко Анионообменные свойства обращенно-фазовых сорбентов, модифицированных Л^-(додецил-Л'',Лг-диметиламино)алканоатами Международная конференция студентов и аспирантов по ф> ндаментальным наукам «Ломоносов 2006» 10 -12 апреля 2006 г Москва, Россия

5 ЕР Nesterenko, Р N Nesterenko, О A Shpigun, А V Ivanov Ion-exchange properties of iminodiacetic functional groups bonded silica International congress on Analytical Sciences (ICAS 2006) 25-30 June 2006 Moscow, Russia

6 E P Nesterenko, В Paull Amon-exchange properties of Ar-(dodecyl-Ar,Ar-dimethylammomo)alkanoate coated stationary phases International congress on Analytical Sciences (ICAS 2006) 25-30 June 2006 Moscow, Russia

7 E P Nesterenko, В Paull Selectivity and versatility of zwittenonic ion columns prepared using Ar-(dodecyl-A'yA'-dimethylammomo)alcanoates XIXth Annual International Ion Chromatography Symposium (IICS2006) 24lh-27lh September 2006 Pittsburgh, PA, USA P 8

8 E P Nesterenko, В Paull Selectivity of reversed-phase columns modified with amphoteric iV-(dodecyl-Ay/-dimethylammonio)alcanoates for inorganic and organic cationic and anionic species 31st International Symposium on High Performance Liquid

Phase Separations and Related Techniques (HPLC2007) 17lh-21sl June 2007 Gent, Belgium P 237

9 E P Nesterenko, В Paull Separation of nucleic acid precursors on iV-(dodecyl-iVJV-dimethylammonio)undecanoate modified stationary phases Analytical Research Forum (ARF2007) 16th-18л July. 2007 Glasgow, UK P05

10 E П Нестеренко, О А Шпигун, П H Нестеренко Одновременное определение неорганических катионов и анионов методом одноколоночной ионной хроматографии Всероссийский симпозиум «Хроматография и хромато-масс-спектрометрия» Москва 14-18 апреля 2008 г С 108

Подписано в печать -/4,09 2008 года Заказ № ¿/(£ Формат 60x90/, е Уел печ л $ Тираж /00 экз Отпечатано на ризографе в отделе оперативной печати и информации Химического факультета МГУ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЦВИТТЕРИОННЫЕ СОРБЕНТЫ В ИОННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1.1. Классификация цвиттерионных неподвижных фаз

1.2. Цвиттерионные ионообменники, в которых противоположно заряженные группы хаотически распределены в объеме частицы или на ее поверхности

1.2.1. Полиамфолитные ионообменники

1.2.2. Неподвижные фазы «Змея-клетка»

1.2.3. Амфотерные неорганические оксиды

1.2.4. Неподвижные фазы с закрепленными на поверхности катионо- и анионо-обменными группами

1.2.5.Цвиттерионные неподвижные фазы с закрепленными белками

1.3. Ионообменники с двумя противоположно заряженными слоями ионообменных групп на поверхности

1.3.1. Центрально локализованные ионообменники с анионообмеиым ядром

1.3.2. Агломерированные ионообменники

1.3.3. Сорбенты, модифицированные полиэлектролитами

1.3.4. Сорбенты, модифицированные полисахаридами

1.3.5. Сорбенты, модифицированные полиаминокислотами

1.4. Цвиттерионные ионообменники с ковалентно закрепленными или физически адсорбированными цвиттерионными молекулами

1.4.1. Сорбенты с ковалентно закрепленными цвиттерионными молекулами

1.4.2. Сорбенты с закрепленными аминокислотами

1.4.3. Сорбенты, динамически модифицированные цвиттерионными молекулами

1.5. Выводы

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Аппаратура

2.2. Сорбенты

2.3. Реагенты

2.4. Методики экспериментов

2.4.1. Модифицирование колонки

2.4.2. Синтез додецилиминодиуксусной кислоты

2.4.3. Синтез (додецилдиметиламино)уксусной кислоты

2.4.4. Изотермы адсорбции

2.4.5. Определение ионообменной емкости сорбентов, модифицированных ПАВ

2.4.6. Экстракция нуклеотидов хлорной кислотой

ГЛАВА 3. СОРБЦИЯ ЛЧДОДЕЦИЛ-ЛГД-ДИМЕТИЛАМИНО)АЛКАНОАТОВ

НА ОБРАЩЕННО-ФАЗОВЫХ СОРБЕНТАХ

3.1. Выбор материалов и модификаторов

3.1.1. Выбор модификаторов

3.1.2. Выбор неподвижных фаз для модифицирования

3.1.2.1. Монолитные обращенно-фазовые колонки

3.1.2.2. Гидрибные обращенно-фазовые колонки

3.2. Характеристика поверхности сорбента Gemini С is, модифицированного ДДМАУ

3.3. Устойчивость адсорбированного слоя ПАВ

3.4. Выводы

ГЛАВА 4. УСТАНОВЛЕНИЕ МЕХАНИЗМА УДЕРЖИВАНИЯ АНИОНОВ НА ОБРАЩЕННО-ФАЗОВЫХ СОРБЕНТАХ, ДИНАМИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ЛНДОДЕЦИЛ-iV,yV-ДИМЕТИЛАМИНО)-АЛКАНОАТАМИ

4.1. Установление механизма удерживания

4.1.1. Влияние ионной силы раствора модификатора на ионообменную емкость неподвижной фазы

4.1.2. Влияние концентрации элюента на удерживание анионов

4.1.3. Влияние заряда катиона элюента на удерживание определяемых анионов

4.2. Концепция градиента заряда катиона элюента

4.3. Выводы

ГЛАВА 5 .РАЗДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКИХ И ОРГАНИЧЕСКИХ АНИОНОВ НА ОБРАЩЕННО-ФАЗОВЫХ КОЛОНКАХ, МОДИФИЦИРОВАННЫХ ЦВИТТЕРИОННЫМИ ПАВ

5.1. Влияние концентрции элюента на удерживание анионов

5.1.1. Набивные ОФ колонки, модифицированные ДДМАУ или ДДМАБ

5.1.2. Монолитные ОФ колонки, модифицированные ДДМАУ или ДДМАБ

5.2. Влияние рН элюента на удерживание анионов 87 •

5.2.1. Набивные ОФ колонки, модифицированные ДДМАУ или ДДМАБ

5.2.2. Монолитные ОФ колонки, модифицированный ДДМАУ или ДДМАБ

5.3. Разделение анионов 94 5.3.1. Оптимизация разделения анионов

5.3.1.1. Набивные ОФ колонки, модифицированные ДДМАУ или ДДМАБ

5.3.1.2. Монолитные ОФ колонки, модифицированные ДДМАУ или Д ДМАБ,

4.4. Характеристика ионообменной емкости колонок, модифицированных ДДМАУ

5.4.1. Изучение буферной емкости сорбентов

5.4.2. Определение ионообменной емкости колонки

5.4.2.1. Набивная ОФ колонка, модифицированная ДДМАУ

5.4.2.2. Монолитная ОФ колонка, модифицированная ДДМАУ

5.5. Разделение анионов в условиях градиента потока на набивной микроколонке, модифицированной ДДМАУ

5.5.1. Применение градиента скорости потока

5.5.2. Влияние градиента скорости потока и ионной силы образца на эффективность пиков и стабильность времен удерживания

5.5.3. Ионообменная емкость микроколонки, модифицированной ДДМАУ

5.6. Выводы

ГЛАВА 6. ОДНОВРЕМЕННОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКИХ

АНИОНОВ И КАТИОНОВ НА ЦВИТТЕРИОННЫХ НЕПОДВИЖНЫХ ФАЗАХ

6.1. Влияние pH элюента на селективность удерживания катионов металлов

6.2. Влияние природы элюента на селективность разделения катионов металлов

6.3. Влияние pH элюента на эффективность разделения катионов металлов

6.4. Изучение удерживания катионов металлов на монолитной ОФ колонке, модифицированной ДДМАУ

6.5. Установление механизма удерживания катионов металов на сорбентах, модифицированных ДДМАУ

6.6. Одновременное разделение катионов и анионов

6.7. Выводы

ГЛАВА 7. РАЗДЕЛЕНИЕ ПРЕКУРСОРОВ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ

7.1. Изучение селективности разделения нуклеотидов, нуклеозидов и оснований нуклеиновых кислот

7.1.1. Влияние рН на удерживание нуклеотидов, нуклеозидов и оснований нуклеиновых кислот

7.1.2. Влияние концентрации элюента на удерживание прекурсоров нуклеиновых кислот 13 9 <

7.2. Влияние добавок Са2+ к элюенту на удерживание нуклеотидов

7.3. Разделение прекурсоров нуклеиновых кислот с использованием тройного градиента

7.4. Разделение нуклеотидов на ультра-коротких колонках

7.4.1. Разделение нуклеотидов на монолитной ультра-короткой колонке

7.4.2. Разделение нуклеотидов на набивной ультра-короткой колонке

7.5. Выводы

ГЛАВА 8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКИХ И ОРГАНИЧЕСКИХ АНИОНОВ И КАТИОНОВ В ОБЪЕКТАХ

8.1. Анализ йодированной соли

8.2. Анализ образца воды кислотного стока с рудников

8.3. Определение прекурсоров нуклеиновых кислот в экстрактах дрожжей 150 ВЫВОДЫ 152 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ а селективность S Площадь поверхности, м2/г

С Электрокинетический Thy Тимин потенциал

Электростатический и Уридин потенциал

А Аденозин UDP Уридин-5 '-дифосфат

ААС Атомно-абсорбционная UMP Уридин-5'-монофосфат спектроскопия

Ade Аденин Ura Урацил

ADP Аденозин-5'-дифосфат UTP уридин-5'-трифосфат

AMP Аденозин-5'-монофосфат V v nops Объем пор, мл/г

ATP Аденозин-5'-трифосфат БСА Бычий сывороточный альбумин

С Цитидин ДДМАА (додецилдиметиламино)ук сусная кислота

CDP Цитидин-5' -дифосфат ДДМАБ ЛЦдодецил-АуУ

СМР Цитидин-5'- монофосфат диметиламино)бутират

СТР Цитидин-5'- трифосфат ДДМАУ 7У-(додецил-./УДдиметиламино)ундеканоат

Cyt Цитозин дэс Двойной электрический d pores Диаметр пор, нм ИСП-АЭС Атомно-эмиссионная

F Скорость потока, мл/мин спектроскопия с индуктивно-связанной

G Гуанозин плазмой

GDP Гуанозин-5'-дифосфат ИХ Ионная хроматография

GMP Гуанозин-5' -монофосфат ккм Критическая концентрация мицеллообразования, мМ

GTP Гианозин-5' -трифосфат оде октадецилсиликагель

Gua Гуанин ОФ Обращенно-фазовый к Фактор емкости Т.т./м Число теоретических тарелок на метр

MeCN Ацетонитрил эих Электростатическая

N Эффективность ионная хроматография

Rs Разрешение

Актуальность темы. В последнее время особое внимание ионной хроматографии (ИХ) направлено на разработку новых подходов для увеличения числа одновременно разделяемых и определяемых ионов. Возможным путем решения данной задачи является создание новых селективных ионообменников путем варьирования природы функциональных групп и матрицы сорбента. В отличие от традиционных монофункциональных катионо- или анионообменников, удерживание ионов на цвиттерионных неподвижных фазах обусловлено не только притяжением к противоположно заряженным группам, но и отталкиванием от одноименно заряженных групп. Цвиттерионные ионообменники, на поверхности которых противоположно заряженные функциональные группы расположены в непосредственной близости друг от друга, позволяют оптимизировать селективность ИХ разделения за счет варьирования соотношения сил электростатического притяжения / отталкивания ионов и функциональных групп сорбента. Отталкивание ионов от одноименно заряженных ионообменных групп уменьшает их диффузию внутрь сорбента и увеличивает скорость массообмена, способствуя улучшению эффективности ИХ разделения, а также позволяет использовать разбавленные элюенты, тем самым увеличивая чувствительность определения.

Важным достоинством цвиттерионных ионообменников является возможность их использования для одновременного разделения катионов и анионов, что особенно важно при анализе питьевых и природных вод. Использование цвиттерионных ионообменников может сократить время анализа, расход реагентов и дать экономическую выгоду по сравнению с традиционными подходами, где катионный и анионный состав пробы определяется отдельно.

Цель и задачи исследования:

- получение цвиттерионных сорбентов путем динамического модифицирования ОФ носителя цвиттерионными молекулами;

- установление механизма удерживания анионов и катионов на неподвижных фазах, модифицированных цвиттерионными молекулами;

- установление закономерностей удерживания неорганических и органических катионов и анионов, а также прекурсоров нуклеиновых кислот на цвиттерионных сорбентах при варьировании природы, концентрации и рН элюента;

- оптимизация условий одновременного ИХ разделения и определения катионов и анионов.

Научная новизна:

- изучены ионообменные свойства монолитного ОДС и композитного ОФ сорбентов, динамически модифицированных цвиттерионными ПАВ ^/-(додедил-ДА^-диметиламино)алканоатами;

- установлен механизм удерживания катионов и анионов на этих цвиттерионных неподвижных фазах;

- предложена новая концепция градиента заряда катиона элюента, позволяющая сократить время анализа;

- впервые применен комбинированный тройной градиент концентрации / рН / скорости потока для одновременного разделения нуклеотидов, нуклеозидов и оснований нуклеиновых кислот, находящихся в катионной, анионной и нейтральной формах на сорбенте, модифицированном цвиттерионным ПАВ Л^-(додецил-7У,Л^-диметиламино)ундеканоатом; впервые показана возможность использования сорбентов, динамически модифицированных цвиттерионным ПАВ для одновременного разделения катионов и анионов; впервые использованы ультракороткие монолитные и набивные колонки, модифицированные Л'-(додецил-Л',Л^-диметиламино)ундеканоатом для разделения анионов.

Практическая значимость:

Проведена оценка возможностей сорбентов, динамически модифицированных цвиттерионными ПАВ для разделения и определения катионов, анионов и прекурсоров нуклеиновых кислот. Для монолитных или набивных ОФ колонок, динамически модифцированных А^-(додецил-Л',А^-диметиламино)ундеканоатом, разработаны ИХ методики одновременного разделения и определения:

- катионов переходных металлов и анионов в природной воде;

- нуклеотидов, нуклеозидов и оснований нуклеиновых кислот в экстрактах дрожжей. Разработана методика определения йодида и йодата в образце столовой соли на ультракороткой колонке, модифицированной А/'-(додецил-ДА^-диметиламино)ундеканоатом.

На защиту выносятся следующие положения:

- результаты изучения ионообменных свойств цвиттерионных сорбентов, полученных динамическим модифицированием монолитной и набивной ОДС колонок тУ-(додецил-./У,Л^ диметиламино)алканоатами;

- установленный механизм удерживания катионов и анионов на полученных цвиттерионных сорбентах;

- результаты изучения удерживания катионов, анионов и прекурсоров нуклеиновых кислот на полученных цвиттерионных сорбентах;

- методики одновременного определения катионов и анионов в природной воде, прекурсоров нуклеиновых кислот в экстрактах дрожжей, а также методика определения йодида и йодата в присутствие значительного избытка хлорида на ультракоротких колонках.

Апробация работы. Основные результаты диссертации изложены в 15 публикациях и доложены на Всероссийском симпозиуме «Хроматография и хромато-масс-спектрометрия» (Москва, 2008, 2004), XXXI Международном симпозиуме по высокоэффективной жидкостной хроматографии (Тент, 2007), Аналитическом исследовательском форуме (Глазго, 2007), XIX Международном симпозиуме по ионной хроматографии (Питтсбург, 2006), Международном конгрессе по аналитической химии (Москва, 2006), Международных конфененциях студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов 2006», «Ломоносов 2005» и «Ломоносов 2004» (Москва).

Публикации по работе. Основные результаты диссертации изложены в следующих статьях:

1. P.A. Kebets, Е.Р. Nesterenko, P.N. Nesterenko, A.J. Alpert. Ion chromatography performance of poly(aspartic) acid bonded silica with various pore sizes at different ionic strengths and column temperatures // Microchimica Acta. 2004. V. 146. P. 103-110.

2. C. O'Riordain, L. Barron, E.P. Nesterenko, P.N. Nesterenko, B. Paull. Double gradient chromatography using short monolithic columns modified with a long chained zwitterionic carboxybetaine surfactant. // J. Chromatogr. A. 2006. V.l 109. P. 111-119.

3. E.P. Nesterenko, L.P. Barron, P.N. Nesterenko, B. Paull. Flow gradient liquid chromatography using a coated anion exchange microcolumn. // J. Sep. Sci. 2006. V.29. P. 228235.

4. E.P. Nesterenko, C. Guivarc'h, C. Duffy, B. Paull. Separation of nucleic acid precursors on an amphoteric surfactant modified monolith using combined eluent flow, pH and concentration gradient. // J. Sep. Sci. 2007. V.30. P. 2910-2916.

5. E.P. Nesterenko, P.N. Nesterenko, B. Paull. Anion-exchange chromatography on short reversed-phase columns modified with N-(dodecyl-N,N-dimethylammonio)alcanoates. // J. Chromatogr. A 2008. V.l 178. P. 60-70. и тезисах:

1. Е.П. Нестеренко, О.А. Шпигун, П.Н. Нестеренко. Одновременное определение неорганических катионов и анионов методом одноколоночной ионной хроматографии. Всероссийский симпозиум «Хроматография и хромато-масс-спектрометрия». Москва 14-18 апреля. 2008 г. С. 108.

2. E.P. Nesterenko, В. Paull. Separation of nucleic acid precursors on jV-(dodecyl-/Vr/V-dimethylammonio)undecanoate modified stationary phases. Analytical Research Forum (ARF2007). 16th -18th July. 2007. Glasgow, UK. P05.

3. E.P. Nesterenko, B. Paull. Selectivity of reversed-phase columns modified with amphoteric iV-(dodecyl-iVr/V-dimethylammonio)alcanoates for inorganic and organic cationic and anionic species. 31st International Symposium on High Performance Liquid Phase Separations and Related Techniques (HPLC2007). 17th-21st June. 2007. Gent, Belgium. P.237

4. E.P. Nesterenko, B. Paull. Selectivity and versatility of zwitterionic ion columns prepared using iV-(dodecyl-iV,A^-dimethylammonio)alcanoates. XIXth Annual International Ion Chromatography Symposium (IICS2006). 24th-27th September. 2006. Pittsburgh, PA, USA. P.8.

5. E.P. Nesterenko, B. Paull. Anion-exchange properties of -/V-(dodecyl-jV,iV-dimethylammonio)alkanoate coated stationary phases. International congress on Analytical Sciences (ICAS 2006). 25-30 June. 2006. Moscow, Russia.

6. E.P. Nesterenko, P.N. Nesterenko, O.A. Shpigun, A.V. Ivanov. Ion exchange properties of iminodiacetic functional groups bonded silica. International congress on Analytical Sciences (ICAS 2006). 25-30 June. 2006. Moscow, Russia.

7. Е.П. Нестеренко. Анионообменные свойства обращенно-фазовых сорбентов, модифицированных Л/'-(додецил-Л',А'-диметиламино)алканоатами. Международная конференция студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов 2006». 10 -12 апреля. 2006 г. Москва, Россия.

8. Е.П. Нестеренко. Анионообменные свойства колонки Gemini Cis модифицированной. ЛЦдодсцил-Лг,/*/-диметиламино)ундекноатом. Международная конференция студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов 2005». 10-12 апреля. 2005 г. Москва, Россия. С.32.

9. Е.П. Нестеренко. Ионообменные свойства силикагеля, модифицированного иминодиуксусной кислотой. Международная конференция студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов 2004». 12-14 апреля. 2004 г. Москва.

10. Е.П. Нестеренко, Ле Тхи Хиен, П.Н. Нестеренко, А.В. Иванов. Ионообменные свойства сорбентов с закрепленной иминодиуксусной кислотой. Всероссийский симпозиум «Хроматография и хромато-масс-спектрометрия». Москва 15-19 марта. 2004 г. С. 159.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, пяти глав экспериментальной части и списка литературы (276 наименований). Работа изложена на 166 страницах машинописного текста, содержит 81 рисунок и 25 таблиц.

выводы

1. Получены новые цвиттернонные сорбенты путем динамического модифицирования набивных (Gemini Cis) и монолитных (Chromolith) ОФ сорбентов карбоксибетаиновыми ПАВ 7^-(додецил-7^7^-диметиламино)ундеканоатом и N-(додецил-Л^ уУ-диметиламино)бутиратом. Изучена адсорбция этих ПАВ на поверхности и показано, что структура адсорбированного слоя на поверхности и ионообменная емкость колонки зависит от рН и ионной силы модифицирующего раствора.

2. Установлен механизм удерживания анионов на цвиттерионных сорбентах модифицированных карбоксибетаинами. Показано, что механизм состоит из двух эффектов: ионной эксклюзии и хаотропных взаимодействий.

3. Изучено влияние заряда катиона элюента на удерживание определяемых анионов. Основываясь на полученных результатах была предложена концепция градиента заряда катиона, использование которого позволило сократить общее время анализа до 50 %.

4. Изучены анионообменные свойства полученных сорбентов. В оптимальных условиях получены разделения модельных смесей анионов. Показана возможность использования набивных ультракоротких колонок, модифицированных ДДМАУ для разделения анионов в условиях градиента скорости потока и для определения анионов в присутствие многократного избытка хлорида.

5. Изучено удерживание катионов в виде анионных комплексов на сорбентах, модифицированных ДДМАУ. Использование цитратного элюента позволило улучшить селективность разделения катионов по сравнению с использованием аминокарбоксильных комплексонов в качестве элюентов.

6. Предложен способ одновременного разделения и определения анионов и катионов на ОДС, модифицированном ДДМАУ.

7. Показана возможность использования цвиттерионных ионообменников для одновременного разделения прекурсоров нуклеиновых кислот, находящихся в катионной, анионой или нейтральной формах при использовании нового тройного комбинированного градиента концентрции / рН / скорости потока.

1. H.Small, T.S.Stevens, W.C.Bauman. Novel Ion Exchange Chromatographic Method Using Conductimetric Detection // Anal.Chem. 1975. V.47. P. 1801-1809.

2. P.R.I-Iaddad, P.E.Jackson Ion Chromatography Principles and Applications. Elsevier. Амстердам. 1991.

3. B.Paull, P.N.Nesterenko. Novel ion chromatographic stationary phases for the analysis of complex matrices // Analyst 2005. V.130. P. 134-146.

4. H.Small. Ion Chromatography. Plenum Press, New York. 1989.

5. J.S.Fritz, D.T.Gjerde. Ion Chromatography. Wiley-VCH, Вейнхейм. 2000.

6. S.P.Verma, E.Santoyo. High-performance liquid and ion chromatography: Separation and quantification analytical techniques for rare earth elements. // Geostand.& Geoanal.Research 2007. V.31.P.161-184.

7. S.D.Chambers, K.Glenn, C.A.Lucy. Developments in ion chromatography using monolithic columns. //J.Sep.Sci. 2007. V.30. P. 1628-1645.

8. P.N.Nesterenko, P.Jones. Recent developments in the high-performance chelation ion chromatography of trace metals. // J.Sep.Sci. 2007. V.30. P. 1773-1793.

9. R.Michalski. Ion chromatography as a reference method for determination of inorganic ions in water and wastewater. // Critical Rev.Anal.Chem. 2007. V.36. P. 107-127.

10. P.N.Nesterenko, P.R.Haddad. Zwitterionic Ion-Exchangers in Liquid Chromatography // Anal.Sci. 2000. V.16. P. 565-574.

11. P.N.Nesterenko. Simultaneous separation and detection of anions and cations in ion chromatography // Trends Anal.Chem. 2001. V.20. P.311-319.

12. V.K.Jones, J.G.Tarter. Simultaneous determination of selected transition metal cations and inorganic anions by ion chromatography. //Analyst. 1988. V.113. P. 183-187.

13. Z.Iskandarani, T.E.Miller. Simultaneous independent analysis of anions and cations using indirect photometric detection. //Anal.Chem. 1985. V.57. P.1591-1594.

14. K.J.B.A.Karim, J.Y.Jin, T.Takeuchi. Simultaneous separation of inorganic anions and cations by using anion-exchange and cation-exchange columns connected in tandem in ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 2003. V.995. P.153-160.

15. M.C.Bruzzoniti, E.Mentasti, C.Sarzanini. Simultaneous determination of inorganic anions and metal ions by suppressed ion chromatography. // Anal.Chim.Acta. 1999. V.382 P.291-299.

16. K.Ohta, K.Tanaka. Suppressed ion chromatography of inorganic anions and divalent metal cations with pyromellitic acid as eluent. // J.Chromatogr.A. 1998. V.804. P.87-93.

17. D.J.Pietrzyk, S.M.Senne, D.M.Brown. Anion—cation separations on a mixed-bed ionexchange column with indirect photometric detection. // J.Chromatogr.A. 1991. V.546. P.101-110.

18. D.M.Brown, D.J.Pietrzyk. Anion—cation separations on a mixed bed alumina—silica column. //J.Chromatogr.A. 1989. V.466. P.291-300.

19. M-Y.Ding, Y.Suzuki, H.Koizumi. Simultaneous determination of organic acids, inorganic anions and cations in beverages by ion chromatography with a mixed-bed stationary phase of anion and cation exchangers. // Analyst. 1995. V.120. P.1773-1777.

20. D.J.Pietrzyk, D.M.Brown. Simultaneous separation of inorganic anions and cations on a mixed bed ion exchange column. //Anal.Chem. 1986. V.58. P.2554-2557.

21. I.Isildak, A.Asan. Simultaneous detection of monovalent anions and cations using all solidstate contact PVC membrane anion and cation-selective electrodes as detectors in single column ion chromatography. //Talanta. 1999. V.48. P.967-978.

22. K.Tanaka, K.Ohta, J.S.Fritz, S.Matsushita, A.Miyanaga. Simultaneous ion-exclusion chromatography-cation-exchange chromatography with conductimetric detection of anions and cations in acid rain waters. // J.Chromatogr.A. 1994. V.671. P.239-248.

23. N.Bonte, A.Laschewski. Zwitterionic polymers with carbobetaine moieties. // Polymer. 1996. V.37.P.2011-2019.

24. C.Viklund, A.Sjogren, K.Irgum. Chromatographic interactions between proteins and sulfoalkylbetaine-based zwitterionic copolymers in fully aqueous low-salt buffers. // Anal.Chem. 2001. V.73. P.444-452.

25. J.H.Perez, J.Cardoso, O.Manero. Mechanisms of ionic conductivity for zwitterionic polymers. // Polymer. 1998. V.39. P.6969-6975.

26. C.Viklund, K.Irgum. Synthesis of porous zwitterionic sulfobetaine monoliths and characterization of their interaction with proteins // Macromolecules. 2000. V.33. P.2539-2544.

27. M.J.Hatch, J.A.Dillon, H.B.Smith. Preparation and use of snake-cage polyelcctrolytes. // Ind.Eng.Chem. 1957. V.49. P.1812-1819.

28. S.S.Aldabbgh, R.Dybczynski. Ion-exchange behavior of 18 elements on amphoteric resin Retardion 11A8 in ammonium-chloride, nh4ci+nh3 and nh4ci+HCI media. // J.Radioanal.NucI.Chem. 1985. V.92. P.37-50.

29. G.A.Brooks, M.J.Bissell, J.A.Bassham. Ion-retardion desalting of blood and other animal tissues for separation of soluble metabolides by 2-dimensional chromatography. // Anal.Biochem. 1977. V.83. P.580-588.

30. M.Goto, N.Hayashi, S.Goto. Separation of electrolyte and non-electrolyte by an ion retardation resin. // Sep.Sci.Technol. 1983. V.18. P.475-484.

31. M.L.Reis, W.Draghetta, L.J.Greene. A 11A8 ion-retardion resin. 1. Separation of proteins from NaCl, buffer ions and reagents used to deproteinize solutions. // Anal.Biochem. 1977. V.81. P.346-357.

32. C.Y.Zhu, S.H.Wu, L.R.Li. Synthesis of snake-cage resins and study of their separation ability. // Chem.Res.Chinese.Uni. 1996. V.12. P.102-107.

33. R.Dybczynski, Z.Samczynski. The use of amphoteric ion-exchange resin for the selective separation of cadmium from other radioelements present in neutron-irradiated biological materials. //J.Radioanal.NucI.Chem. 1991. V.150. P.143-153.

34. R.Dybczynski, S.S.Aldabbgh. Selective separation of zinc from other elements on the amphoteric resin Retardion 11A8 and its use for the determination of zinc in biological materials by neutron activation analysis. //Analyst. 1987. V.l 12. P.449-453.

35. R.Dybczynski, Z.Samczynski. Some examples of the use of amphoteric ion-exchange resins for inorganic separations. // J.Chromatogr.A. 1997. V.789. P. 157-167.

36. C.Rollins, L.Jensen, A.N.Schwarz. Desalting of amino acid solutions by an ion retardation resin. // Anal.Chem. 1962. V.34. P.711-712.

37. D.J.Pietrzyk, G.L.Schmitt. Liquid chromatographic separation of inorganic anions on an alumina column. //Anal.Chem. 1985. V.57. P.2247-2253.

38. T.Takeuchi, E.Suzuki, D.Ishii. Ion chromatography with micropacked alumina columns. // Chromatographic 1988. V.25. P.480-482.

39. M.Macka, J.Borak. Chromatographic behavior of some platinum (II) complexes on octadecylsilica dynamically modified with a mixture of a cationic and an anionic amphiphilic modifier.//J.Chromatogr.A. 1993. V.641. P.101-103.

40. Q.Xu, M.Mori, K.Tanaka, M.Ikedo, W.Hu, P.R.Haddad. Ion chromatographic determination of hydroxide ion on monolithic reversed-phase silica gel columns coated with nonionic and cationic surfactants. // J.Chromatogr.A. 2004. V.1041. P.95-99.

41. K.Ito, Y.Takayama, N.Makabe, R.Mitsui, T.Hirokawa. Ion chromatography for determination nitrite and nitrate in seawater using monolithic ODS columns. // J.Chromatogr.A. 2005. V.1083.P.63-67.

42. A.Suzuki, L.W.Lim, T.Hiroi, T.Takeuchi. Rapid determination of bromide in seawater samples by capillary ion chromatography using monolithic silica columns modified with cetyltrimethylammonium ion. // Talanta. 2006. V.70. P.190-193.

43. J.Li, G.Wu, Y.Zhu. Determination of zonisamide by a coated monolithic column. // J.Chromatogr.A. 2006. V.l 118. P.l51-154.

44. J.Li, Y.Zhu, Y.Guo. Fast determination of anions on a short coated column. // J.Chromatogr.A. 2006 V. 1118. P.46-50.

45. S.Pelletier, C.A.Lucy. Achieving rapid low-pressure ion chromatography separations on short silica-based monolithic columns. // J.Chromatogr.A. 2006. V.l 118. P.12-18.

46. P.Hatsis, C.A.Lucy. Improved sensitivity and characterization of high-speed ion chromatography of inorganic anions. // Anal.Chem. 2003. V.75. P.995-1001.

47. D.Connolly, D. Victory, B.Paull. Rapid, low pressure, and simultaneous ion chromatography of common inorganic anions and cations on short permanently coated monolithic columns // J.Sep.Sci. 2004. V.27. P.912-920.

48. K.M.Glenn, C.A.Lucy, P.R.Haddad. Ion chromatography on a latex-coated silica monolith column. // J.Chromatogr.A. 2007. V.l 155. P.8-14.

49. J.S.Fritz, Z.Yan, P.R.Haddad. Modification of ion chromatographic separations by ionic and nonionic surfactants // J.Chromatogr.A. 2003. V.997. P.21-31.

50. A.Suzuki, L.W.Lim, T.Takeuchi. Rapid separation of inorganic anions by capiilary ion chromatography using monolithic silica columns modified with dilauyldimethylammonium ion. // Anal.Sci. 2007. V.23. P. 1081-1084.

51. D.Connolly, B.Paull. Fast ion chromatography of common inorganic anions on a short ODS column permanently coated with didodecyldimethylammonium bromide. // J.Chromatogr.A. 2002. V.953. P.299-303.

52. Q.Xu, M.Mori, K.Tanaka, M.Ikedo, W.Hu. Dodecylsulfate-coated monolithic octadecyl-bonded silica stationary phase for high speed separation of hydrogen, magnesium and calcium in rainwater. // J.Chromatogr.A. 2004. V.l026. P. 191-194.

53. L.Barron, P.N.Nesterenko, D.Diamond, M.O'Toole. Low pressure ion chromatography with a low cost paired emitter-detector diode based detector for the determination of alkaline earth metals in water saples. // Anal.Chim.Acta. 2006. V.577. P.32-37.

54. P.Hatsis, C.A.Lucy. Ultra-fast HPLC separation of common anions using a monolithic stationary phase. // Analyst. 2002. V.127. P.451-454.

55. S.Gupta, E.Pfannkoch, F.E.Regnier. Hihg performance cation-exchange chromatography of proteins. //Anal.Biochem. 1983. V.128. P.196-201.

56. E.Munaf, R.Zein, T.Takeuchi, T. Miwa. Microcolumn ion chromatography of inorganic anions using bovine serum albumin stationary phase with indirect photometric detection. // Chromatographic 1996. V.43. P.304-308.

57. R.Zein, E.Munaf, T.Takeuchi, T. Miwa. Microcolumn ion chromatography of inorganic UV-absorbing anions using bovine serum albumin as stationary phases. // Anal.Chim.Acta. 1996. V.335. P.261-266.

58. Р.В.Копылов, П.Н.Нестеренко, А.А.Сердан, И.П.Тыленина. Синтез и изучение характеристик новых гетероповерхностных сорбентов. // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 1998. T.39.N.4. С.280-284.

59. A.M.Dolgonosov, A.N.Krachak. Highly selective ion chromatographic determination of ammonium ions in waters with a suppressor as postcolumn reactor. // J.Chromatogr.A. 1993. V.640. P.351-353.

60. A.M.Dolgonosov. Centrally localized ion exchangers as separating sorbents for ion chromatography. Theory and application. //J.Chromatogr.A. 1994. V.671. P.33-41.

61. H.Small. Twenty years of ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 1991. V.546. P.3-15.

62. H.G.Beere, P.Jones. Investigation of chromium(III) and chromium(VI) speciation in water by ion chromatography with chemiluminescence detection. // Anal.Chim.Acta. 1994. V.293. P.237-243.

63. S.Mou, H.Wang, Q.Sun. Simultaneous determination of the three main inorganic forms of nitrogen by ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 1993. V.640. P.161-165.

64. R.W.Slingsby, C.A.Pohl. Anion-exchange selectivity in latex-based columns for ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 1988. V.458. P.241-253.

65. C.A.Pohl, J.R.Stillian, P.E.Jackson. Factors controlling ion-exchange selectivity in suppressed ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 1997. V.789. P.24-41.

66. M.C.Bruzzoniti, E.Mentasti, C.Sarzanini. Determination of lanthanides by ion chromatography.Separation and retention mechanism. // Anal.Chim. Acta. 1997. V.353. P.239-244.

67. G.Revesz, P.Hajos, H.Csiszar. Mixed-mode liquid chromatography of carboxylic acids and inorganic anions on a latex-based pellicular stationary phase. // J.Chromatogr.A. 1996. V.753. P.253-260.

68. Q.Sun, H.Wang, S.Mou. Rapid determination of germanium and tin by ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 1995. V.708. P.99-104.

69. M.C.Bruzzoniti, E.Mentasti, C.Sarzanini, S.Cavalli. Behaviour of selenium and tellurium species and their determination by ion chromatography. // Chromatographia. 1997. V.46. P.49-56.

70. M.C.Bruzzoniti, E.Mentasti, C.Sarzanini, M.Braglia, G.Cocito, J.Kraus. Determination of rare earth elements by ion chromatography. Separation procedure optimization. // Anal.Chim.Acta. 1996. V.322. P.49-54.

71. P.Janvion, S.Motellier, H.Pitsch. Ion-exchange mechanisms of some transition metals on a mixed-bed resin with a complexing eluent. // J.Chromatogr.A. 1995. V.715. P.105-115.

72. S.Motellier, H.Pitsch. Simultaneous analysis of some transition metals at ultra-trace level by ion-exchange chromatography with on-line preconcentration. // J.Chromatogr.A. 1996. V.739. P.l19-130.

73. P.L.Buldini, S.Cavalli, A.Mevoli, E.Milella. Application of ion chromatography to the analysis of high-purity CdTe. // J.Chromatogr.A. 1996. V.739. P.131-137.

74. T.Ikegami, J.Ichimaru, W.Kajiwara, N.Nagasawa, K.Iiosoya, N.Tanaka. Anion- and cation-exchange MicroHPLC utilising poly(methacrylates)-coated monolithic silica capillary columns. // Anal. Sci. 2007. V.23. P. 109-113.

75. O.V.Krokhin, A.D.Smolenkov, N.V.Svintsova, O.N. Obrezkov, O.A.Shpigun. Modified silica as a stationary phase for ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 1995. V.706. P.93-98.

76. A.V.Pirogov, N.V.Svintsova, O.V.Kuzina, O.V.Krokhin, M.M.Platonov, O.A.Shpigun. Silicas modified by polyelectrolyte complexes for the ion chromatography of cationic complexes of transition metals. //Fresenius J.Anal.Chem. 1998. V.361. P.288-293.

77. A.V.Pirogov, O.V.Krokhin, M.M.Platonov, Ya.I.Deryugina, O.A.Shpigun. Ion-chromatographic selectivity of polyelectrolyte sorbents based on some aliphatic and aromatic ionenes. // J.Chromatogr.A. 2000. V.884. P.31-39.

78. A.V.Pirogov, M.M.Platonov, O.A.Shpigun. Polyelectrolyte sorbents based on aliphatic ionenes for ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 1999. V.850. P.53-63.

79. T.Takeuchi, T.Miwa, Safni. Ion chromatography of anions on stationary phases modified with chondroitin sulfate. // J.Chromatogr.A. 1997. V.789. P.201-206.

80. T.Takeuchi, Safni, T.Miwa, Y.Hashimoto, H.Moriyama. Ion chromatography on anion exchangers modified with mucopolysaccharides. // J.Chromatogr.A. 1998. V.804. P.79-86.

81. Safni, T.Takeuchi, T. Miwa, Y.Hashimoto, H.Moriyama. Effect of eluent composition on retention behavior of anions in ion chromatography on anion-exchangers modified with heparin. // J.Chromatogr.A. 1999. V.850. P.65-72.

82. T.Takeuchi, Safni, T.Miwa, Y.Hashimoto, H.Moriyama. Ion chromatography using anion exchangers modified with heparin. // Analysis. 1998. V.26. P.61-64.

83. Safni, N.Ito, T.Takeuchi, T.Miwa. Separation of enantiomers on anion exchangers modified with heparin in liquid chromatography. // J.Chromatogr.A. 1999. V.864. P.25-30.

84. T.Takeuchi, Safni, T.Miwa, Y.Hashimoto, H.Moriyama. Ion chromatography using anion-exchangers modified with dextran sulfate. // Chromatographia. 1999. V.50. P.70-74.

85. Safni, T.Takeuchi, T.Miwa. Application of microcolumn ion chromatography using anion-exchangers modified with dextran sulphate for the determination of alkali and alkaline-earth metal ions. // J.Chromatogr.B. 2001. V.753. P.409-412.

86. T.Takeuchi, Safni, T.Miwa. Ion chromatography using anion exchangers modified with anionic polysaccharides. // LC-GC, 2000. V.18. P.418.

87. A.J.Alpert. Cation-exchange high-performance liquid chromatography of proteins on poly(aspartic acid) silica. // J.Chromatogr. 1983. V.266. P.23-37.

88. M.G.Kiseleva, P.A.Kebets, P.N.Nestcrcnko. Simultaneous ion chromatographic separation of anions and cations on poly(aspartic acid) functionalized silica. // Analyst. 2001. V.126 P.2119-2123.

89. P.A.Kebets, E.P.Nesterenko, P.N.Ncsterenko, A.J.Alpert. Ion-chromatography performance of poly(aspartic) acid bonded silica with various pore sizes at different ionic strengths and column temperatures. // Microchim.Acta. 2004. V.146. P.103-110.

90. P.A.Kebets, K.A.Kuz'mina, P.N.Nesterenko. The heats of adsorption of metal cations on silica gel with covalently fixed polyaspartic acid. // Russian J.Phys.Chem. 2002. V.76. P.1481-1484.

91. M.H.Yang, K.C.Chang, J.Y.Lin. Multifunctional ion-exchange stationary phases for high performance liquid chromatography. // J.Chromatogr.A. 1996. V.722. P.87-96.

92. L.W.Yu, R.A.Hartwick. Zwitterion stationary phases in HPLC. // J.Chromatogr.Sci. 1989. V.27. P.176-185.

93. K.Irgum, W.Jiang. Covalently bonded polymeric zwitterionic stationary phase for simultaneous separation of inorganic cations and anions // Anal.Chem. 1999. V.71. P.333-344.

94. A.I.Elefterov, M.G.Kolpachnikova, P.N.Nesterenko, O.A.Shpigun. Ion-exchange properties of glutamic acid-bonded silica. // J.Chromatogr.A. 1997. V.769. P.179-188.

95. Г.В.Лисичкин, Ф.Ю.Фадеев, А.А.Сердан, П.Н.Нестеренко, П.Г.Мингалев, Д.Б.Фурман. Химия привитых поверхностных соединений. Физматлит. Москва. 2003.

96. A.V.Gaida, V.A.Monastyrskii, Yu.V.Magerovskii, S.M.Staroverov, G.V.Lisichkin. Affinity chromatography of human thrombin on modified silica. // J.Chromatogr.B. 1988. V.424. P.385-391.

97. V.A.Davankov, J.D.Navratil, H.F.Walton. Ligand exchange chromatography. CRC Press, БокаРатон. 1988.

98. P.N.Nesterenko, A.I.Elefterov, D.A.Tarasenko, O.A.Shpigun. Selectivity of chemically bonded zwitterion-exchange stationary phases in ion chromatography // J.Chromatogr.A. 1995. V.706. P.59-64.

99. P.N.Nesterenko. Application of amino-acid-bonded silicas as ion exchangers for the separation of anions by single-column ion chromatography // J.Chromatogr. 1992. V.605. P. 199204.

100. P.N.Nesterenko, Silica-bonded L-hydroxyproline and its application to the separation of inorganic anions. // J.High.Res.Chromatogr. 1991. V.14. P.767-768.

101. П.Н.Нестеренко, Р.В.Копылов, Д.А.Тарасенко, О.А.Шпигун, Ю.А.Золотов. Одновременное разделение анионов и катионов методом одноколоночной ионной хроматографии. //Докл.Акад.Наук СССР 1992. Т.326. С.838-841.

102. P.N.Nesterenko, D.A.Tarasenko, O.A.Shpigun. Simultaneous determination of anions and cations by ion chromatography. // J.Anal.Chem. 1994. V.49. P.222-233.

103. Нестеренко П.Н., Шпигун О.А., Золотов Ю.А. Биполярные ионообменники и новые перспективы в ионной хроматографии. // Докл. Акад. Наук. 1992. Т.324. С.107-110.

104. M.G.Kolpachnikova, N.A.Penner, P.N.Nesterenko. Effect of temperature on retention of alkali and alkaline-earth metal ions on some aminocarboxylic acid functionalised silica based ion exchangers. // J.Chromatogr.A. 1998. V.826. P.15-23.

105. P.N.Nesterenko, O.S.Zhukova, O.A.Shpigun, P.Jones. Synthesis and ion-exchange properties of silica chemically modified with aminophosphonic acid. // J.Chromatogr.A. 1998. V.813. P.47-53.

106. E.Sugrue, P.N.Nesterenko, B.Paull. Fast ion chromatography of inorganic anions and cations on a lysine bonded porous silica monolith. // J.Chromatogr.A. 2005. V.1075. P. 167-175.

107. A.I.Elefterov, P.N.Nesterenko, O.A.Shpigun. Simultaneous ion-chromatographic determination of alkali and alkaline-earth metals: Use of a cation exchanger with bonded diaminocarboxylic groups. // J.Anal.Chem. 1996. V.51. P.972-975.

108. P.N.Nesterenko, P.A.Kebets. Ion-exchange properties of silica gel with covalently bonded histidine. // J.Anal.Chem. 2007. V.62. P.2-7.

109. R.M.C.Dawson, D.C.Elliot, W.H.Elliot, K.M.Jones, Data for Biochemical Research. Clarendon Press. Оксфорд. 1986. 553 P.

110. L.W.Yu, T.R.Floyd, R.A.Hartwick. Synthesis and characterization of chemically bonded silica-based zwitterion exchangers for HPLC. //J.Chromatogr.Sci. 1986. V.24. P. 177-182.

111. W.Hu, P.R.Haddad. Electrostatic ion chromatography using dilute electrolytes as eluents: a new method for separation of anions. // Anal.Commun. 1998. V.35. P.317-320.

112. W.Hu, H.Haraguchi. Simultaneous determination of organic and inorganic ultra-violet-absorbing compounds in human saliva by electrostatic ion chromatography // Anal.Chim.Acta. 1994. V.285. P.335-341.

113. W.Hu, H.Tao, H.Haraguchi. Electrostatic ion chromatography. 2. Partitioning behaviors of analyte cations and anions // Anal.Chem. 1994. V.66. P.2514-2520.

114. W.Hu, Sh.Cao, M.Tominaga, A.Miyazaki. Direct determination of bromide ions in sea water by ion chromatography using water as the mobile phase // Anal.Chim.Acta. 1996. V.322. P.43-47.

115. W.Hu, P.-J.Yang, K.Hasebe, P.R.Haddad, K.Tanaka. Rapid and direct determination of iodide in seawater by electrostatic ion chromatography // J.Chromatogr.A. 2002. V.956. P. 103107.

116. W.Hu, K.Hasebe, K.Tanaka. Use of zwitterionic micelles in the eluent: a new approach for ion chromatographic (1С) analysis of ions in biological fluids with direct sample injection // Fresenius J.Anal.Chem. 2000. V.367. P.56-59.

117. E.Twohill, B.Paull. Zwitterionic ion chromatography using a dynamically coated column and mobile phase recycling // J.Chromatogr.A. 2002. V.973. P.103-113.

118. W.Hu, H.Haraguchi. Simultaneous separation of inorganic cations and anions by ion chromatography using a single column coated with weak/strong-charged zwitterionic bile salt nicelles //Anal.Chem. 1994. V.66. P.765-767.

119. C.O'Riordain, P.Nestcrcnko, B.Paull. Zwitterionic ion chromatography with carboxybetaine surfactant-coated particle packed and monolithic type columns // J.Chromatogr.A. 2005. V.1070.P.71-78.

120. B.Paull, C.O'Riordain, P.N.Nesterenko. Double gradient ion chromatography on a short carboxybetaine coated monolithic anion exchanger. // Chem.Commun. 2005. V.2. P.215-217.

121. W.Hu, P.R.Haddad, K.Tanaka, K.Hasebe. Modulation of the separation selectivity of inorganic anions in electrostatic ion chromatography using acidic eluents // Analyst 2000. V.125. P.241-244.

122. W.Hu, P.R.Haddad, K. Hasebe, K.Tanaka. Electrostatic ion chromatography using hydroxide solutions as mobile phase with suppressed conductivity detection. // Anal.Commun. 1999. V.36. P.309-312.

123. W.Hu, K.Hasebe, M.Y.Ding, K.Tanaka. Direct determination of nitrite traces in high ionic-strength samples by electrostatic ion chromatography using diluted acid solutions as eluent // Fresenius J.Anal.Chem. 2001. V.371 P. 1109-1112.

124. W.Hu, T.Takeuchi, H.Haraguchi. Electrostatic ion chromatography // Anal.Chem. 1993. V.65. P. 2204-2208.

125. W.Hu, K.Hasebe, D.M.Reynolds, H.Haraguchi. Separation of nucleosides and their bases by reversed-phase liquid chromatography using pure water as the mobile phase. // Anal.Chim.Acta. 1997. V.353. P. 143-149.

126. W.Hu, H.Tao, M.Tominaga, A.Miyazaki, H.Haraguchi. A new approach for the simultaneous determination of inorganic cations and anions using ion chromatography. // Anal.Chim.Acta. 1994. V.299. P. 249-256.

127. T.Umemura, S.Kamiya, H.Haraguchi. Characteristic conversion of ion pairs among anions and cations for determination of anions in electrostatic ion chromatography using water as a mobile phase. // Anal.Chim.Acta. 1999. V.379. P.23-32.

128. M.Macka, P.R.Haddad. Elution mechanism in electrostatic ion chromatography with histidine as an isoelectric ampholytic mobile phase // J.Chromatogr.A. 2000. V.884. P.287-296.

129. W.Hu, P.R.Haddad, K.Hasebe, K.Tanaka, P.Tong, Ch.Khoo. Direct determination of bromide, nitrate, and iodide in saline matrixes using electrostatic ion chromatography with an electrolyte as eluent. //Anal.Chem. 1999. V.71. P.l617-1620.

130. T.Umemura, R.Kitaguchi, H.Haraguchi. Counterionic detection by ICP-AES for determination of inorganic anions in water elution ion chromatography using a zwitterionic stationary phase. // Anal.Chem. 1998. V.70. P.936-942.

131. W.Hu, P.R.Haddad, K.Hasebe, K., K.Tanaka. Electrostatic ion chromatography of cations using an N-dodecylphosphocholine zwitterionic stationary phase and water as the mobile phase. // Anal.Commun. 1999. V.36. P.97-100.

132. W.Hu, P.R.Haddad, K.Tanaka, K.Hasebe. Electrostatic ion chromatography using a carboxybetaine-type zwitterionic surfactant as the stationary phase. // Anal.Bioanal.Chem. 2003. V.375. P.259-263.

133. C.O'Riordain, E.Gillespie, D.Connoly, P.N.Nesterenko, B.Paull. Capillary ion chromatography of inorganic anions on octadecyl silica monolith modified with an amphoteric surfactant. // J.Chromatogr.A. 2007. V. 1142. P. 185-193.

134. L.Barron, P.N.Nesterenko, P.Paull. Rapid online preconcentration and suppressed microbore ion chromatography of parts per trillion levels of perchlorate in rainwater samples. // Anal.Chim.Acta. 2006. V.567. P.127-134.

135. W.Hu, P.R.Haddad. Electrostatic ion chromatography // Trends Anal.Chem. 1998. V.17. P.7379.

136. J.S.Fritz. Factors affecting selectivity in ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 2005. V.1085. P.8-17.

137. W.Hu, P.Yang, K.Hasebe, P.R.Haddad, K.Tanaka. Rapid and direct determination of iodide in seawater by electrostatic ion chromatography // J.Chromatogr.A. 2002. V.956. P. 103107.

138. K.Hasebe, T.Sakuraba, W.Hu. Determination of inorganic anions by electrostatic ion chromatography with a cation exchange column as a pre-column for conversion of the cations into a common species. // J.Liq.Chrom.&Rel.Technol. 1999. V.22. P.561-596.

139. W.Hu, A.Miyazaki, H.Tao, A.Itoh, T.Umemura, H.Haraguchi. Direct determination of inorganic ions at sublppb levels by ion chromatography using water as a mobile phase. // Anal.Chem. 1995. V.67. P.3713-3716.

140. W.Hu, K.Tanaka, K.Hasebe. Determination of inorganic anions in biological fluids with direct sample injection by electrostatic ion chromatography using zwitterionic micelles in both stationary and mobile phases // Analyst. 2000. V.125. P.447-451.

141. W.Hu, A.Miyazaki, H.Haraguchi. New approach to the simultaneous separation of inorganic cations and anions by ion chromatography based on ion-exchange and electrostatic interactions. //Anal.Sci. 1995. V.l 1. P.999-1000.

142. W.Hu. Studies on behaviors of interactions between zwitterionic surfactants and inorganic ions by using an ion chromatographic technique // Langmuir. 1999. V.15. P.7168-7171.

143. T.Okada, J.M.Patil. Ion uptake by zwitterionic surfaces // Langmuir. 1998. V.14. P.6241-6248.

144. S.Manne, J.P.Cleveland, H.E.Gaub, G.D.Stucky, P.K.Hansma. Direct visualization of surfactant hemimicelles by force microscopy of the electrical double layer. // Langmuir. 1994. V.10. P.4409-4413.

145. H.N.Patrick, G.G.Warr, S.Manne, I.A.Aksay. Surface micellization patterns of quaternary ammonium surfactants on mica. // Langmuir. 1999. V.15. P.1685-1692.

146. V.Subramanian, W.A.Ducker. Counterion effects on adsorbed micellar shape: experimental study of the role of polarizability and charge. // Langmuir. 2000. V.l 6. P.4447-4454.

147. N.E.Baryla, J.E.Melanson, M.T.McDermott, C.A.Lucy. Characterization of surfactant coatings in capillary electrophoresis by atomic force microscopy. // Anal.Chem. 2001. V.73. P.4558-4565.

148. S.Manne, H.E.Gaub. Molecular organization of surfactants at solid-liquid interfaces. // Science. 1995. V.270. P.1480-1482.

149. P.F.Brode. Adsorption of ultra-long-chain zwitterionic surfactants on a polar solid. // Langmuir. 1988. V.4. 176-180.

150. I.Harwigsson, F.Tiberg, Y.Chevalier. Nature of the Adsorption of Zwitterionic Surfactants at Hydrophilic Surfaces // J.Colloid.Interface.Sci. V.183. V.380-387.

151. K.Iso, T.Okada. Evaluation of electrostatic potential induced by anion-dominated partition into zwitterionic micelles and origin of selectivity in anion uptake. // Langmuir. 2000. V.16. P.9199-9204.

152. K.Iso, T.Okada. Simultaneous control of electrostatic micellar partition and electroosmotic flow-rate by anion-dominated partition into zwitterionic micelles. // J.Chromatogr.A. 2001. V.920. P.317-323.

153. N.Kamenka, Y.Chevalier, M.Chorro, H.Levy, R.Zana. Aqueous solutions of zwitterionic surfactants with varying carbon number of the intercharge group. 2. Ion binding by the micelles. // Langmuir. 1995. V.l 1. V.4234-4240.

154. N.Kamenka, Y.Chevalier, R.Zana. Aqueous solutions of zwitterionic surfactants with varying carbon number of the intercharge group. 1. Micelle aggregation numbers. // Langmuir.1995. V.l l.P.3351-3355.

155. Y.Chevalier, N.Kamenka, M.Chorro, R.Zana. Aqueous solutions of zwitterionic surfactants with varying carbon number of the intercharge group.3. Intermicellar interactactions. // Langmuir.1996. V.12. P.3225-3232.

156. T.Masudo, T.Okada. Potentiometric and chromatographic evaluation of ion uptake by zwitterionic micelles. // Phys.Chem.Chem.Phys. 1999. V.l. P.3577-3582.

157. Y.Chevalier, Y.Storet, S.Pourchet, P.Le Perchec. Tensioactive properties of zwitterionic carboxybetaine amphiphiles // Langmuir. 1991. V.7. P.848-853.

158. H.A. Cook, W.Hu, J.S.Fritz, P.R.Haddad. A mechanism of separation in electrostatic ion chromatography // Anal.Chem. 2001. V.73. P.3022-3027.

159. H.A.Cook, G.W.Dicinoski, P.R.Haddad. Mechanistic studies on the separation of cations in zvvitterionic ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 2003. V.997. P. 13-20.

160. W.Hu, P.R.Haddad, K.Tanaka, K.Hasebe. Suppressed electrostatic ion chromatography with tetraborate as eluent and its application to the determination of inorganic anions in snow and rainwater. // J.Chromatogr.A. 2000. V.884. P. 161-165.

161. A.Stein, H.P.Gregor, P.Spoerri. Alkyl derivatives of iminodiacetic acid. // J.Am.Chem.Soc. 1955. V.77. P.191-192.

162. Ю.С.Никитин, Р.С.Петрова. Экспериментальные методы в адсорбции и молекулярной хроматографии. Московский Университет. Москва. 1990. 318с.

163. G.Hendricks, J.P.Franke, D.R.A.Uges. New practical algorithm for modelling retention times in gradient reversed-phase high-performance liquid chromatography. // J.Chromatogr.A.2005. V.1089. P. 193-202.

164. W.W.Fish. A method for the quantitation of 5'-mononucleotides in foods and food ingredients. // J.Agric.Food.Chem. 1991. V.39. P. 1098-1101.

165. C.Brenner, G.Jan, Y.Chevalier, H.Wroblewski. Evaluation of the efficacy of zvvitterionic dodecyl carboxybetaine surfactants for the extraction and the separation of mycoplasma membrane protein antigenes. //Anal.Biochem. 1995. V.224. P.515-523.

166. P.Hatsis, C.A.Lucy. Ultra-fast HPLC separation of common anions using a monolithic stationary phase. // Analyst. 2002. V.127. P.451-454.

167. P.Hatsis, C.A.Lucy. Improved sensitivity and characterization of high-speed ion chromatography of inorganic anions. // Anal.Chem. 2003. V.75. P.995-1001.

168. Калькулятор KowWin logP. Syracuse Research Corporation. Нью-Йорк. США. 1999.

169. F.Svec. Preparation and HPLC applications of rigid macroporous organic polymer monoliths. //J.Sep.Sci. 2004. V.27. P.747-766.

170. Y.Ueki, T.Umemura, J.Li, T.Odake, K.Tsunoda. Preparation and application of methacrylate-based cation-exchange monolithic columns for capillary ion chromatography. // Anal.Chem. 2004. V.76. P.7007-7012.

171. Q.C.Wang, F.Svec, J.M.J.Frechet. Macroporous polymeric stationary phase rod as continuous separation medium for reversed-phase chromatography. // Anal.Chem. 1993. V.65. P.2243-2248.

172. P.Zakaria, J.P.Hutchinson, N.Avdalovic, Y.Liu, P.R.Haddad, P. R. Latex-coated polymeric monolithic ion-exchange stationary phases.2.Miero-ion chromatography. // Anal.Chem. 2005. V.77. P.417-423.

173. Y.Wei, X.Huang, R.Liu, Y.Shen, X Geng. Preparation of a monolithic column for weak cation exchange chromatography and its application in the separation of biopolymers. // J.Sep.Sci.2006. V.29. P.5-13.

174. M.Zabka, M.Minceva, A.E.Rodrigues. Experimental characterization and modelling of analytical monolithic column. //J.Biochem.Biophys.Methods. 2006. V.70. P.95-105.

175. K.Cabrera, G.Wieland, D.Lubda, K.Nakanishi, N.Soga, H.Minakuchi, K.K.Unger. SilicaROD A new challenge in fast high-performance liquid chromatography separations. // Trends Anal.Chem. 1998. V.17. P.50-53.

176. K.Cabrera. Applications of silica-based monolithic ITPLC columns. // J.Sep.Sci. 2004. V.27. P.843-852.

177. S.Ghose, S.M.Cramer. Characterization and modeling of monolithic stationary phases:application to preparative chromatography. // J.Chromatogr.A. 2001. V.928. P.13-23.

178. N.Ishizuka, H.Kobayashi, H.Minakuchi, K.Nakanishi, K.Hirao, K.Hosoya, T.Ikegami, N.Tanaka. Monolithic silica columns for high-efficiency separations by high-perfprmance liquid chromatography. // J.Chromatogr.A. 2002. V.960. P.85-96.

179. N.Ishizuka, H.Minakuchi, K.Nakanishi, K.Hirao, N.Tanaka. Chromatographic characterization of macroporous monolithic silica prepared via sol-gel process. // Colloids and Surfaces A. 2001. V.187. P.273-279.

180. K.Nakanishi, H.Minakuchi, N.Soga, N.Tanaka. Double pore silica gel monolith applied to liquid chromatography. // J.Sol-Gel.Sci.Technol. 1997. V.8. P.547-552.

181. W.D.Ross, R.T.Jefferso. In-situ-formed open-pore polyurethane as chromatographic supports. //J.Chromatogr.Sci. 1970. V.8. P.386-390.

182. P.A.Bristow, J.H.Knox. Standardization of test conditions for high-performance liquid chromatographu columns. // Chromatographia 10(6), 279-289. 1977.

183. H.Minakuchi, K.Nakanishi, N.Soga, N.Ishizuka, N.Tanaka. Octadecylsilylated porous silica rods as separation media for reversed-phase liquid chromatography. // Anal.Chem. 1996. V.68. P.3498-3501.

184. H.Minakuchi, NIshizuka, K.Nakanishi, N.Soga, N.Tanaka. Performance of an octadecylsilylated continuous porous silica column in polypeptide separations. // J.Chromatogr.A. 1998. V.828.P.83-90.

185. D.Lubda, K.Cabrera, W.Kraas, C.Schaefer, D.Cunningham. New developments in the application of monolithic HPLC columns. // LC-GC Europe. 2001. V.14. P.2-5.

186. K.Nakanishi, N.Soga. Phase separation in gelling silica-organic polymer solution: systems containing poly(sodium styrenesulfonate). // J.Am.Ceram.Soc. 1991. V.74. P.2518-2530.

187. R.Asiaie, X.Huang, D.Farnan, C.Horvath. Sintered octadecylsilica as monolithic column packing in capillary electrochromatography and micro high-performance liquid chromatography. // J.Chromatogr.A. 1998. V.806. P.251-263.

188. B.Bidlingmaier, K.K.Unger, N.Doehren. Comparative study on the column performance of microparticulate 5-mm С -bonded and monolithic Cis -bonded reversed-phase columns in highperformance liquid chromatography. // J.Chromatogr.A. 1999. V.832. P. 11-16.

189. F.C.Leinweber, U.Tallarek. Chromatographic performance of monolithic and particulate stationary phases. Hydrodynamics and adsorption capacity. // J.Chromatogr.A. 2003. V.1006. P.207-228.

190. D.Connoly, D.Victory, B.Paull. Rapid, low pressure, and simultaneous ion chromatography of common inorganic anions and cations on short permanently coated monolithic columns. // J.Sep.Sci. 2004. V.27. P.912-920.

191. Q.Xu, K.Tanaka, M.Mori, M.I.H.Helaleh, W.Hu, K.Hasebe, H.Toada. Monolithic octadecyl-silica gel column for the high-speed ion chromatographic determination of acidity. // J.Chromatogr.A. 2003. V.997. P.183-190.

192. Q.Xu, M.Mori, K.Tanaka, M.Ikedo, W.Hu, P.R.Haddad. Ion chromatographic determination of hydroxide ion on monolithic reversed-phase silica gel columns coated with nonionic and cationic surfactants. // J.Chromatogr.A. 2004. V.1041. P.95-99.

193. Gemini Product Brochure. Phenomenex. Торранс. США. 2005.

194. M.D.Gil Garcia, M.M.Galera, R.Santiago Valverde. New method for the photo-chemiluminometric determination of benzoylurea based on acetonitrile chemiluminiscence. // Anal.Bioanal.Chem. 2007. V.387. P.1973-1981.

195. J.Zajac. Adsorption microcalorimetry used to study interfacial aggregation of quaternary ammonium surfactants (zwitterionic and cationic) on powdered silica supports in dilute aqueous solutions. // Colloids & surfaces A. 2000. V.167. P.3-19.

196. J.Zajac, C.Chorro, M.Lindheimer, S.Partyka. Thermodynamics of micellization and adsorption of zwitterionic surfactants in aqueous media. // Langmuir. 1997. V.13. P.1486-1495.

197. J.L.Wolgemuth, R.K.Workman, S.Manne. Surfactant aggregates at a flat, isotropic hydrophobic surface. // Langmuir. 2000. V.16. P.3077-3081.

198. L.M.Grant, W.A.Ducker. Effect of substrate hydrophobicity on surface-aggregate geometry: zwitterionic and nonionic surfactants. // J.Phys.Chem.B. 1997. V.101. P.5337-5345.

199. W.Hu, P.R.Haddad. Electrostatic ion chromatography. // Trends Anal.Chem. 1998. V.17. 73-79.

200. J.M.Patil, T.Okada. Anion-modulated switching of retention properties of a zwitterionic stationary phase // Anal.Commun. 1999. V.36. P.9-11.

201. S.W.Mayer, S.D.Schwartz. The Association of Cerous Ion with Iodide, Bromide and Fluoride Ions // J.Amer.Chem.Soc. 1951. V.73. P.222-224.

202. J.D.Lamb, R.A.Smith. A comparison of gradient capacity anion chromatography using macrocycles D-2.2.2 asd D-2.2.1 in constant and variable temperature mode. // Talanta 1992. V.39. P.923-930.

203. J.Stahlberg. Electrostatic retention model for ion-exchange chromatography. // Anal.Chem. 1994. V.66. P.440-449.

204. K.L.Ng, B.Paull, P.R.Haddad, K.Tanaka. Retention modelling of electrostatic and absorption effects of aliphatic and aromatic carboxylic acids in ion-exchange chromatography. // J.Chromatogr.A. 1999. V.850. P. 17-27.

205. T.J.Bahowick, R.E.Synovec. Correlation of quantitative analysis precision to retention time precision and chromatographic resolution for rapid, short column analysis. // Anal.Chem. 1995. V.67. P.631-640.

206. D.Connoly, B.Paull. Fast ion chromatography of common inorganic anions on a short ODS column permanently coated with didodecyldimethylammonium bromide. // J.Chromatogr.A. 2002. V.953. P.299.

207. I.Chappell, R.J.Weigand, T.J.Zuzelski, C.Jersild. LC-GC. 2001. V.18. P.35-40.

208. A.M.N.Nguyen, L.Tallieu, J.Plaizier-Vecammen, D.L.Massart, Y.Vander Heyden. Validation of an HPLC method on short columns to assay ketoconazole and formaldehyde in shampoo. // J.Pharm.Biomed.Anal. 2003. V.32. P. 1-19.

209. D.Victory, P.Nesterenko, B.Paull. Low-pressure gradient micro-ion chromatography with ultrashort monolithic anion exchange column. // Analyst. 2004. V.129. P.700-701.

210. L.A.Romanyshyn, P.R.Teller. Ultra-short columns and ballistic gradients: considerations for ultra-fast chromatographic liquid chromatographic-tandem mass spectrometric analysis. // J.Chromatogr.A. 2001. V.928. P.41-51.

211. P.N.Nesterenko, M.A.Rybalko. The use of continuous flow gradient for the separation of inorganic anions on a monolithic disk//Mendeleev.Commun. 2004. V.14. P.121-122.

212. Z.Yan, P.R.Haddad, J.S.Fritz. Ion chromatography on reversed-phase materials coated with mixed cationic and nonionic surfactants. // J.Chromatogr.A. 2003. V.985. P.359-363.

213. J.S.Rohrer. Int.Lab.News Edition 1999. V.29. P.15.

214. B.Lopez-Ruiz. Advances in the determination of inorganic anions by ion chromatography. //J.Chromatogr.A. 2000. V.881. P.607-627.

215. N.P.Barkley, G.L.Contner, M.Malanchuck. Ion chromatographic analysis of environmental pollutants. Ann Arbor Science. Мичиган. США. 1979.

216. S.Matsushita. Simultaneous determination of anions and metal cations by single column ion chromatography with ethylenediaminetetraacetate as eluent and conductivity and ultra-violet detection. // J.Chromatogr. 1984. V.312. P.327-336.

217. M.Yamamoto, H.Yamamoto, Y.Yamamoto, S.Matsushita, N.Baba, T.Ikushige. Simultaneous determination of inorganic anions and cations by ion chromatography with ethylenediaminetetraacetic acid as eluent. // Anal.Chem. 1984. V.56. P.832-834.

218. D.Yan, G.Schwedt. Simultaneous ion chromatography of inorganic anions together with some organic anions and alkaline earth metal cations using chelating agents as eluents. // J.Chromatogr. 1990. V.516. P.383-393.

219. G.Schwedt, B.Kondratjonok. Simultane ionen-chromatographie von kationen und anionen mit komplexonen als elutionsmittel und selektiver UV-detektion. // Fresenius.Z.Anal.Chem. 1989. V.332. P.855-861.

220. E.A.Gautier, R.T.Gettar, R.E.Servant, D.A.Batistoni. Evaluation of 1,2-diaminocyclohexanetetraacetic acid as eluent in the determination of inorganic anions and cations by ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 1995. V.706. P. 115-119.

221. R.N.Collins, B.C.Onisko, M.J.McLauglin, G.Merrington. Determination of metal-EDTA complexes in soil solution and plant xylem by ion chromatography-electrospray mass spectrometry. // Environ.Sci.Technol. 2001. V.35. P.2589-2593.

222. L.Ye, C.A.Lucy. Chromatographic determination of metal-EDTA complexes with postcolumn detection using fluorescent ternary complexes. // Anal.Chem. 1995. V.67. P.2534-2538.

223. I.N.Voloschik, M.L.Litvina, B.A.Rudenko. Determination of carbonate, inorganic anions and anionic metal-complexes by single-column ioni-exchange chromatography with conductometric and UV detection. //J.Chromatogr.A. 1994. V.671. P.249-252.

224. R.Garcia-Fernandez, J.I.Garcia-Alonso, A.Sanz-Medel, A. Simultaneous determination of inorganic anions, calcium and magnesium by suppressed ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 2004. V.1033. P.127-133.

225. P.Hajos, G.Revesz, C.Sarzanini, G.Sacchero, E.Mentasti. Retention model for the separation of anionic metal-EDTA complexes in ion chromatography. // J.Chromatogr. 1993. V.640. P.15-25.

226. C.Sarzanini, G.Sacchero, E.Mentasti, P.Hajos. Studies on the retention behaviour of metal-EDTA complexes in cation chromatography. // J.Chromatogr.A. 1995. V.706. P. 141-147.

227. P.Janos. Retention models for the ion chromatographic separations of metals in the presence of complexing agents. // J.Chromatogr.A. 1996. V.737. P. 129-138.

228. K.Ohta, K.Tanaka, J.S.Fritz. Non-suppressed ion chromatography of inorganic anions, magnesium and calcium ions using a pyromellitate eluent and its application in evaluating environmental water quality. // J.Chromatogr.A. 1996. V.731. P.179-186.

229. Z.L.Chen, M.A.Adams. 2,6-Pyridinediearboxylic acid as an eluent for UV and conductivity detection of inorganic anions, magnesium and calcium in water by ion chromatography. // Chromatographia. 1999. V.49. P.496-502.

230. P.R.Haddad, P.W.Alexander, M.Trojanowicz. Application of indirect potentiometric detection with a metallic copper electrode to ion chromatography of transition metal ions. // J.Chromatogr. 1985. V.324. P.319-332.

231. F.W.Cornish, G.Phillips, A.Thomas. Ethylenediaminetetraacetic acid and citric acid as eluents in ion exchange separation of rare earths'. // Canadian J.Chem. 1956. V.34. P.1471-1482.

232. W.Zeng, Y.Chen, H.Cui, F.Wu, Y.Zhu, J.S.Fritz. Single-column method of ion chromatography for the determination of common cations and some transition metals. // J.Chromatogr.A. 2006. V. 1118. P.68-72.

233. База данных NIST Critically Selected Stability Constants of Metal Complexes. (8.0). NIST, Гатерсбург. США. 2007.

234. V.Gallagher, P.O'Connor. The Avoca mine site. // Biology and Environment 1999. V.99B. P.43-57.

235. J.H.Knox, J.Jurand. Zwitterion-pair chromatography of nucleotides and related species. // J.Chromatogr. 1981. V.203. P.85-92.

236. Y.Zhu, P.S.H.Wong, Q.Zhou, H.Sotoyama, P.T.Kissinger. Identification and determination of nucleosides in rat brain microdialysates by liquid chromatography/electrospray tandem mass spectrometry. // J.Pharm.Biomed.Anal. 2001. V.26. P.967-973.

237. M.Biesaga, F.Kilar, N.Hartvig, M.Trojanowicz. Application of tetraphenylporphyrin stationary phases in HPLC of nucleotides and nucleosides. // Chromatographia. 20001. V.54. P.619-623.

238. K.Takei, T.Yamaya, H.Sakakibara. A method for separation and determination of cytokinin nucleotides from plant tissues. // J.Plant.Res. 2003. V.l 16. P.265-269.

239. J.Zhao, G.H.Fleet. Separation of twenty isomers of ribonucleotides and deoxyribonucleotides by reversed-phase ion-pairing high-performance ion chromatography. // J.Chromatogr.A. 1996. V.732. P.271-275.

240. M.Cichna, H.Daxecker, M.Raab. Determination of 18 nucleotides, nucleosides and nucleobases in human peripheral blood mononuclear cells by isocratic solvent-generated ion-pair chromatography.//Anal.Chim.Acta. 2003. V.481. P.245-253.

241. S.L.B.Lopez, J.Moal, F.S.J.Serrano. Development of a method for the analysis of nucleotides from the mantle tissue of the mussel Mytilus galloprovincialis. // J.Chromatogr.A. 2000. V.891.P.99-107.

242. D.Huang, Y.Zhang, X.Chen. Analysis of intracellular nucleoside triphosphate levels in normal and tumor cell lines by high-performance liquid chromatography. // J.Chromatogr.B. 2003. V.784. P.101-109.

243. M.G.Volonte, G.Yuln, P.Quiroga, A.E.Consolini. Development of an HPLC method for determination of metabolic compounds in myocardial tissue. // J.Pharm.Biomed.Anal. 2004. V.35. P.647-653.

244. Gill, B. D. and Indyk, H. E. Development and application of a liquid chromatographic method for analysis of nucleotides and nucleosides in milk and infant formulas. // Int. Dairy Journal. 2007.

245. N.Felitsyn, F.F.Cantwell. Effect of stationary-phase sorption of organic modifier from a water-rich mobile phase on solute retention by an ODS bonded phase. // Anal.Chem. 1999. V.71. P.1862-1869.

246. A.Pappa-Louisi, X.Portokalidou. Study of reversed-phase HPLC retention and detection of adenosine and related compounds as a function of pH and solvent composition. // J.Liq.Chrom.&Rel.Technol. 2000. V.23. P.505-521.

247. T.Uesugi, K.Sano, Y.Uesawa, Y.Ikegami, K.Mohri. Ion-pair reversed-phase highperformance liquid chromatography of adenine nucleotides and nucleoside using triethylamine as counterion. // J.Chromatogr.B 703 (1997) 63-74.

248. H.Kazoka. Analysis of purines and pyrimidines by mixed partition-adsorption normalphase high-performance liquid chromatography. // J.Chromatogr.A. 2002. V.942. P. 1-10.

249. W.Hu, K.Hasebe, D.M.Reynolds, H.Haraguchi. Separation of nucleosides and their bases by reversed-phase liquid chromatography using pure water as the mobile phase. // Anal.Chim.Acta. 1997. V.353. P.143-149.

250. X.Cahours, P.Morin, M.Dreux. Sub-minute separation of nucleoside-5'-triphosphates with co-electroosmotic capillary electrophoresis. // J.Liq.Chrom.Rel.Technol. 1999. V.22. P.2389-2401.

251. I.Mihelic, D.Nemec, A.Podgornic, T.Koloni. Pressure drop in CIM disk monolithic columns // J.Chromatogr.A. 2005. V.1065. P.59-67.

252. A.Podgornic, M.Barut, J.Jancar, A.Strancar. Isocratic separation on thin glycidyl methacrylate-ethylenedimethacrylate monoliths. // J.Chromatogr.A. V.848. P51-60.