Новый класс доноров монооксида азота: строение и свойства нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.04 ВАК РФ

На правах рукописи

Санина Наталия Алексеевна

НОВЫЙ КЛАСС ДОНОРОВ МОНООКСИДА АЗОТА: СТРОЕНИЕ И СВОЙСТВА НИТРОЗИЛЬНЫХ КОМПЛЕКСОВ ЖЕЛЕЗА С ФУНКЦИОНАЛЬНЫМИ СЕРОСОДЕРЖАЩИМИ ЛИГАНДАМИ

02.00.04 - физическая химия, химические науки

27

ЯНВ20П

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук

Черноголовка - 2010

4843223

Работа выполнена в Институте проблем химической физики Российской Академии Наук

Научный консультант: доктор химических наук, академик

Алдошии Сергей Михайлович

Официальные оппоненты: доктор химических наук, член-корреспондент РАН

Бачурин Сергей Олегович Институт физиологически активных веществ РАН, г. Черноголовка

доктор химических наук, член-корреспондент РАН Варфоломеев Сергей Дмитриевич Институт биохимической физики им. Н.М.Эм: ануэля РАН, г. Москва

доктор химических наук, профессор Милаева Елена Рудольфовна химический факультет Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова, г. Москва

Ведущая организация: Институт общей и неорганической химии

им. Н.С. Курнакова РАН, г. Москва

Защита состоится "16" февраля 2011 г. в И) час. 00 мин. на заседании диссертационного совета Д 002.082.02 при Институте проблем химической физики РАН по адресу: 142432, Московская область, г. Черноголовка, проспект Академика Семенова, д.1, корпус общего назначения Института проблем химической физики РАН (КОН).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИПХФ РАН г. Черноголовка, проспект академика Семенова, д. 1.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, 1

доктор химических наук '/ Т.С. Джабиев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одним из значительных достижений науки последних десятилетий, явилось открытие монооксида азота (N0) как важнейшего полифункционального регулятора многообразных физиологических процессов ш vivo, включая нейротрансмиссию, регуляцию иммунной системы, регуляцию кровяного давления, релаксацию гладких мышц, агрегацию тромбоцитов и цитоксическое действие макрофагов. Поиск и исследование новых соединений - доноров NO, необходимы для понимания действия N0 и его реакционных нитрозильных клеточных интермедиатов, а также для разработки терапевтических стратегий в лечении социально-значимых заболеваний. Нитрозильные комплексы железа с функциональными S-лигандами представляют особый интерес, т.к. они образуются в клетках живых организмов (бактерий, растений и млекопитающих) в результате воздействия эндогенного N0 на активные центры не гемовых железо-серных белков и, наряду с нитрозотиолами, являются биорезервуарами N0. Строение и свойства нитрозильных комплексов железа с S-лигандами мало изучены, что связано, с экспериментальными трудностями по их выделению в кристаллическом состоянии. Дизайн новых нитрозильных комплексов железа с функциональными S-лигандами является актуальной задачей, открывающей возможности фундаментального изучения механизмов действия NO и создания лекарственных препаратов с заданными биологическими свойствами, которые будут способствовать усилению эффекта, производимого полифункциональным регулятором-мессенджером — N0 и будут более эффективными средствами для лечения различных патологий, вызванных недостатком эндогенного N0.

Цель работы - разработка фундаментальных основ создания нового класса доноров монооксида азота - нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандам - структурных аналогов активных центров не гемовых железо-серных белков; исследование их строения, реакционной способности и фармакологической активности in vitro и in vivo для

изучения механизмов действия N0 и его интермедиатов и создания лекарственных препаратов нового поколения для лечения социально-значимых заболеваний.

Основньми задачами работы являются:

• Разработка удобных общих методов синтеза нитрозильных комплексов железа с серосодержащими функциональными лигандами;

• Экспериментальное исследование молекулярного и кристаллического строения синтезированных кристаллов комплексов методами рентгеноструктурного анализа;

• Теоретическое исследование строения нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами методами функционала плотности — метода ВЗЬУР с использованием б-31С* базиса и метода РВЕ с использованием расширенного базиса для псевдопотенциала БВК;

• Изучение физико-химических свойств нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами в твердой фазе и растворах методами ЯГР-, ИК-, ЭПР-, масс-спектроскопии и магнетометрии;

• Исследование ИО-донорной активности нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами в растворах методами амперометрии и спектрофотометрии в реакциях с гемовыми белками;

• Изучение биологической (кардиопротекторной и противоопухолевой) активности нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами на культурах клеток и экспериментальных моделях животных.

Научная новизна.

> Впервые систематически исследованы реакции координации атома железа Ре(ЫО)2 фрагмента Б-функциональными азагетероциклическими тиолами ряда триазола, тетразола, пиридина, пиримидина, имидазола и его бензпроизводных, а также алифатическими тиоаминами природного происхождения; разработаны

удобные методы получения нитрозильных [lFe-2S] и [2Fe-2S] комплексов в кристаллической форме.

> Впервые детально изучено молекулярное, кристаллическое и электронное строение синтезированных нитрозильных комплексов железа различных структурных типов, а также природа связей в фрагменте {S2Fe(NO)2}, что позволяет прогнозировать реакционную способность полученных соединений и предложить синтетические подходы к дизайну новых структур.

> Впервые установлено, что биядерные тетранитрозильные комплексы железа в протонных средах генерируют NO без дополнительной активации и образуют моноядерные динитрозильные тиолсодержащие интермедиаты - структурные и спектроскопические аналоги эндогенных динитрозильных комплексов железа (ДНИК).

> Определены количественные показатели NO-донирования синтезированных соединений в зависимости от концентрации используемого донора, температуры, рН среды в аэробных и анаэробных условиях электрохимическим методом и в реакциях с гемовыми белками. Изучены пути отрыва N0 групп в синтезированных нитрозильных комплексах железа методами квантовой химии с сопоставлением полученных данных с экспериментальными масс-спектральными данными продуктов их разложения в растворах, предложен механизм генерации N0.

> Исследованы некоторые механизмы цитотоксического действия выявленных нитрозильных комплексов железа на опухолевых клетках человека в культуре (индукция апоптоза, экспрессия алкилгуанинтрансферазы).

Практическая значимость.

> Созданы опытные образцы нового класса устойчивых кристаллических доноров N0 для биологических и медицинских применений.

> На моделях ишемического и реперфузионного повреждения миокарда in vitro и in vivo исследованы кардиопротекторные свойства анионных и катионных

[2Fe-2S] нитрозильных комплексов железа, способных предотвращать повышение тонуса коронарных сосудов и корректировать метаболизм ишемизированного сердца.

> Выявлена дифференциальная цитотоксическая активность нитрозильных комплексов железа к опухолевым клеткам человека различного генезиса: эритробластного миелолейкоза К562, карциномы толстой кишки LS174T, карциномы яичника SKOV3, карциномы молочной железы SKBR3, карциномы предстательной железы РСЗ, карциномы предстательной железы DU14, иммортализованных клеток почки А293, карциномы легкого А-549. Разработана модельная система скрининга противоопухолевых препаратов - доноров N0.

> Изучена противоопухолевая активность нитрозильных комплексов железа на перевиваемых опухолях мышей: меланоме В-16, эпидермоидной карциноме легкого Льюис (LLC), аденокарциноме молочной железы Са-755 и лимфоцитарной лейкемии Р-388. Выявлен высокий противоопухолевый эффект нитрозильного комплекса с цистеамином: на Са-755 торможение роста опухоли составило 76% при увеличении продолжительности жизни 66% и на LLC -86% при увеличение продолжительности жизни 7%.

Личный вклад автора.

В диссертации представлены результаты исследований, выполненных самим автором или под его руководством. Личный вклад автора состоит в постановке задач, разработке экспериментальных методик синтеза нитрозильных комплексов железа и методов обработки экспериментальных данных, непосредственном проведении большинства экспериментов, анализе, интерпретации и обобщении полученных результатов.

В работе принимали участие сотрудники ИПХФ РАН: к.ф.-м.".н. Г.В. Шилов, д.х.н. А.Ф. Шестаков, к.ф-м.н. Ю.М.Шульга, к.ф-м.н. Н.С. Ованесян, д.ф-м.н, Р.Б.Моргунов, д.х.н. Л.А.Сырцова, д.ф-м.н. A.B. Куликов. Особая благодарность -д.х.н. К.А. Лысенко (ИЭОС РАН), д.б.н. С.В. Васильевой (ИБХФ РАН им. Н.М.

Эммануэля), к.м.н. О.С. Жуковой и д.м.н. З.С. Смирновой (РОНЦ им. H.H. Блохина), а также - д.б.н. О.И. Писаренко (ФГУ РКНПК Росмедтехнологий).

Апробация работы.

Основные результаты работы докладывались и обсуждались на следующих симпозиумах и конференциях: 3-ем Международном INTAS симпозиуме (Москва, 2001), XXXV-ой Конференции по координационной химии (Хейдельберг, 2002), 2-ой (Прага, 2002), 5-ой (Брегенц, 2007) и 6-ой (Киото, 2010) Международных Конференциях "Биология, химия и терапевтические применения Оксида Азота" ; ХХ-ой (Ростов-на Дону, 2001), XXI (Киев, 2003), XXII (Кишинев, 2005), XXIII (Одесса, 2007) и XXIV (Санкт-Петербург, 2009) Международных Чугаевских конференциях по координационной химии; XVII-ом (Казань, 2003) и XVIII-om (Москва, 2007) Менделеевских съездах по общей и прикладной химии; 4-ой национальной научно-практической конференции, "Активные формы кислорода, оксид азота и здоровье человека" (Смоленск, 2005); Национальной кристаллохимической конференции (Черноголовка, 2006); 1-ом (Будапешт, 2006) 2-ом (Турин, 2008) и 3-ем (Нюрнберг, 2010) Европейских химических Конгрессах; Российском Национальном Конгрессе Кардиологов (Москва, 2007); IV Московском Международном Конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2007); Всероссийской научно-практическаой конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва, 2007); 1-ом Турецко-Российском Совещании по Органической и Медицинской химии (Анталья, 2009).

Публикации. Основное содержание работы опубликовано в 47 статьях в отечественных и зарубежных журналах, более 70 тезисов докладов на всероссийских и международных конференциях и 5 заявках на изобретение, получивших 1 диплом (II степени на 4-ом Московском Международном Конгрессе «БИОТЕХНОЛОГИЯ: СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ» в 2007) и 3 медали и Гран-при (2 золотых медали, специальный приз на X, XI,XII Международных Салонах промышленной собственности «АРХИМЕД» в 20075

2009 и 1 бронзовая медаль на VIII Московском международном салоне инноваций и инвестиций, 2008).

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 367 страницах машинописного текста и включает 65 таблиц, 146 рисунков. Диссертация состоит из введения, шести глав, списка литературы из 461 наименования и двух приложений.

Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (гранты 99-03-32484, 02-03-33344, 04-03-08108, 06-03-32381, 09-0312036), Совета по грантам Президента Российской федерации (программа поддержки ведущих научных школ, грант № НШ-4525.2006.3), ГК № 02.740.11.0263 ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы и Программ Президиума РАН "Фундаментальные науки - медицине" 2006-2010 гг.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Во введении обоснована актуальность темы и практическая значимость работы, сформулированы цель и задачи работы, приведены основные новые научные результаты.

В первой главе диссертационной работы представлен обзор литературы, касающейся физиологического значения N0 и его форм; химической биологии N0, роли N0 в сердечно-сосудистой системе и канцерогенезе, цитотоксических и защитных механизмов действия N0; а также основных классов экзогенных доноров N0, включая данные по синтезу и исследованию свойств нитрозильных [Fe-S] комплексов.

Во второй главе диссертации описаны физико-химические методы исследования: РСА, масс-; ИК-; ЭПР-, Мессбауэровская спектроскопия, СКВИД-магнетометрия; методики квантово-химических расчетов, электрохимического и спектрофотометрического определения N0, материалы и методики исследования биологической активности синтезированных в работе соединений in vitro и in vivo.

Третья глава посвящена синтезу (см. схемы 1-4) и исследованию строения более 25 новых нитрозильных комплексов железа с функциональными Б-лигандами - аналогами природных тиоаминов, гистидинов, пиридиновых и пуриновых оснований ДНК (рис.1), ц-Э и ц-Ы-С-Б структурных типов, кристаллографические параметры которых приведены в таблицах 1 и 2.

Схема 1.

1ЧН4ОН N3011 ГеЬОд + Ка1\02+(М14)23-»- КЦ^Бз^О),)-^ Ка2[Ре282(ГО)4]

| Q4NHal (04^)2[Ре152(КО)4], <2=п-Рг; п-Ви

Схема 2.

2Ре504 + 4№28203 + 4Ко|-*-1Ч'а2(Ре2(8203)2(1Ч0)4] +N828404 + 2№2804

(04^)2[Ре2(82Оз)2СЧО)4)

Схема 3.

+ 2 Ш»', пОН"

[Ге2(52Оз)2(КО)4]2" + 82032:—»> [Гс(5203)2(.\0)2]3" —- [FeJ(SR)2(NO)4]

- 282Оз2'

11=Агу1

Схема 4.

* +н+ 1 Ре504 + ЗЬ +N01-[Ре28Ь2(>'0)4]504Т , Ь=(СН)21\Н2 ;С5Н,0ЬО2

-ЬвН

Рис. 1 Структуры биологически активных серосодержащих лигандов.

СНзЫН, - .... -

I I «г Н II «2 I II

НМ—СН2СНъ НзС—С—СН 0=С—С —N—с—с -сн о

III I I

ян эн с=о

1 2 он

ын2 "г I ны—с—с -снг-с—с= о Н I

он

/=\ Г=\

"у

зн эй

и 12

¡н 7

нс=сн I \

•СНз 'т

БН

8 нм

/ \ / \

гн 13

вн 14

ян 15

гн 10

«=Л1

I \

.ы л

снз V* зн 16

1 -цистеамин

2 -пеницшшамин

3 -глютатион -2-меркаптопиримидин

5 -2-меркаптопиридин

6 -тиофенол

7 -2-меркаптобензтиазол

8 -2- меркапгобензимидазол

9 -2- меркаптобензоксазол

/О -5-метил-2-меркаптобензимидазол

11 -2-меркаптоимидазол

12 -/-метил-2-меркаптоимидазол

13 -2-меркаптоимидазолидин

14 -2-меркаггтотриазол

15 -2-меркапто-5-аминотриазол

16 -5-меркапто-1-метилтетразол

Рис.2 Строение моноаниона ВЯЯ-ШГ4: Ре(1) =Реа, Ре(2), Ре(3),Ре(4) =Реь.

Рис.3 Строение дианиона соли ЛЛ'Д-Сл'.

Таблица 1.Основные кристаллографические данные анионных и катионных комплексов железа ц-Б типа.

чо

Состав/ Обозначение Сингония Пр.ф. a, А b, А c, А а» Р." Z О, ГСМ"3 1», ж132 02(о)(1)

ИН4[Ре45з(М0)7]Н20 (ВБР-ЫН^ триклинная р 1 9.451(2) 10.000(2) 10.577(2) 59.02(3) 68.57(3) 79.05(3) 797.9(3) 2 2.353 0.0512

С52[Ре232(М04]-2Н20 (РБ^а) моноклинная Р2,/с 9.608(2) 11.402(2) 12.601(3) 90 107.13(3) 90 1319.2(5) 4 3.009 0.0394

(п-Рг4М)2[Ре232(НО)4] ((геР-Рг) моноклинная Р2,/п 10.455(2) 13.647(1) 12.504(3) 90 92.02(3) 90 1781.6(7) 2 1.246 0.036 0.089

Ма2[Ре2(5203)2(И0)4]-4Н20 (ТНЮК-Ыа) моноклинная Р2,/с 11.22(4) 10.44(4) 7,62(2) 92.2(2) 892(5) 2 2.11(2) 0.091 0.116

(Ме4И)2[Ре2(52О,)2(М0)ч] (ТНКЖ-Ме) триклинная Р 1 7.719(2) 12.272(2) 6.513(1) 83.78(3) 86.30(3) 73.48(3) 587.6(2) 1 1.708 0.116 0.265

(п-Ви4И)2[Ре2(320,)2(И0)4] (ТНКЖ-Ви) моноклинная Р2,/с 20.332(4) 13.070(3) 18.009(4) 90 91.07(3) 90 4785(2) 4 1.205 0.096 0.254

[Ре2(8(СН2)^Н3)2(М0)4]504-2.5Н20 (Суэ) триклинная Р 1 6.850(1) 10.575(2) 13.723(2) 90.884(3) 95.900(3) 90.635(3) 988.6(3) 2 1.771 0.1204 0.0548

[Ре2(8(С5Н,^02Ь(М)4]504-5Н20 (Реп) моноклинная Р2, 6.1878(4) 28.2739(17) 7.8615(5) 90 102.456(14) 90 1343.02(15) 2 1.771 0.0392 0.0811

Таблица 2. Основные кристаллографические данные нейтральных комплексов железа р-Б и. р-И-С-Б типов.

Состав/Обозначение Сингония Пр.гр. a, А b, А c, А а* Р.' Г." V, А3 г 0, г-см-® 1*1, м/Р2 1>2(<т)(1)

[Ре^НдНЫМО)«] <РУ) моноклинная С2/с 20.935(4) 7.964(2) 13.697(3) 90 132.65(3) 90 1679.6(6) 4 1.756 0.1316 0.2893

[Ре2(8 С4Н3М2)2(МО)4] (Рут) триклинная Р 1 6.4170(10) 7.6200(10) 8.348(2) 75.550(10) 80.800(10) 85.200(10) 397.3(1) 1 1.934 0.0356 0.0732

[Ре(5С2Н3Ыз)(5СгН2Ыз)(МО)2] •1/2Н20 (Тп'аг) моноклинная С2/с 18.789(4) 9.528(2) 13.623(3) 90 99.73(3) 90 2403.7(9) 8 1.802 0.0304 0.0806

[Ре2(5С2НзМ4)2(М0)4]-2Н20 (АтТпаг) триклинная р I 8.006(2) 7.809(2) 8.471(3) 64.42(3) 71.46(3) 67.01(3) 432.6(2) 1 1.912 0.0394 0.1023

[Ре2(5С,НзМ2)2(мЬ)4] (1т) моноклинная Р2(1)/п 7.473(1) 12.928(3) 8.173 (1) 90 105.35(3) 90 761.4(3) 2 1.85 0.0400

[Ре2(5С4Н5М2)2(МО)4] [М>ш| моноклинная С2/с 14.455(3) 9.848(2) 13.108(3) 116.36(3) 1671.9(6) 4 1.82 0.0408 0.0884

Р^вСзН^ЫМО)«] (1т!с1) триклинная р 1 6.422(2) 7.618(2) 8.194(2) 100.93(2) 100.93(2) 90.08(3) 386.2(2) 1 1.866 0.0321 0.0503

1Ре2(8С7Н5М2)г(Ы0)4]-2С3Н«0 (В1т) триклинная р 1 8.737(1) 9.072(1) 9.083(1) 74.82(1) 73.10(1) 86.62(1) 664.70(13) 1 1.615 0.0274 0.0722

[Ре2(ЗС2НзМ4)2(МО)4] (Те«гаг) моноклинная Р2(1 )/с 7.587(2) 13.347(3) 16.406(3) 103.25(3) 1671.1(6) 4 1.898 0.0863 0.2728

Рис.4. Молекулярная и кристаллическая структура ТНКЖ-Ш (¡и-Б тип).

Рис.6. Молекулярная и кристаллическая структура Те1гаг (^-N-0-5 тип).

Рис.5. Молекулярная и кристаллическая структура Рут (fj-S тип).

Рис. 7. Кристаллическая структура AmTriaz и Bim (fi-N-C-S тип).

PC исследования показали, что в анионе [Fe4S3(NO)7]' (рис. 2) существуют два типа контактов: 1) между апикальным атомом Fea и атомами основания тригональной пирамиды Feb и 2) между атомами основания пирамиды Feb, которые связаны мостиками из атомов серы Fea - S - Feb. Атомы серы этих мостиков образуют также связь с апикальным атомом железа Fea. Средние расстояния составляют величины Fea - S 2.205 и Feb - S 2.256 Á. Fea связан с одним лигандом N0 и тремя мостиковыми атомами S, в то время как каждый Feb координирован с двумя нитрозильными лигандами и двумя мостиковыми атомами S. Длина связи Fea -N 1.651 Á - короче, чем таковые для периферийных атомов Feb-N (1.661 - 1.675 Á). Углы Fe - N - О имеют близкое к линейному строение, различия в величинах углов, обусловлены образованием межмолекулярных водородных связей катиона комплекса с нитрозильными группами аниона. Комплексы с анионом [Fe4S3(NO)7]" устойчивы за счет образования мостиковыми атомами серы трехцентровых связей.

В анионе [Fe2S2(NO)4]2" (рис. 3) два атома железа связаны двумя мостиковыми атомами серы. Каждый атом железа тетраэдрически координирован с двумя атомами серы и двумя группами N0. Фрагменты Fe - N - О имеют линейное строение и совпадают с таковыми для значений Feb - N - О аниона [Fe4S3(NO)7]\ Средние межатомные расстояния в сульфидном анионе Fe-S (2,230 A), N-0 (1,170 A), Fe-N (1,659 A), Fe-Fe 2,702 А, угол Fe-N-0 164,6°.

В анионе [Fe2(S203)2(N0)4]2" каждый атом железа связан с другим атомом железа, с двумя ц-атомами серы и двумя атомами азота двух групп NO (рис. 4), а мостиковый атом серы связан с SO3 группой. Распределение длин связей в ряду комплексов с катионами Na+ и тетраалкильными катионами (Me4N+,n-Bu4N+) близко к распределению аналогичных длин связей в тетраядерных комплексах железа Feb. Средние длины связей Fe-S (2,256 A), N-0 (1,158 A), Fe-N (1,670 А), Fe-Fe 2,702 А, угол Fe-N-0 169,6°. Катионы располагаются в каналах блоков тиосульфатных анионов, образованных отрицательно заряженными атомами

кислорода S03 групп, Наличие у мостиковых атомов серы групп SO3, на которых локализован отрицательный заряд, приводит к перераспределению электронной плотности в тиосульфатных комплексах по сравнению с сульфидными [Fe2S2(NO),)]2\ Присутствие групп SO3 вызывает стерические затруднения для реакции превращения биядерного комплекса в тетраядерный [Fe4S3(NO)7]". Комплексы в твердофазном состоянии и в растворах более устойчивы, чем сульфидные, за счет образования мостиковыми атомами серы трехцентровых связей.

Геометрия нейтральных биядерных комплексов, например, Рут (рис.5) сходна с таковой для тиосульфатных комплексов. Средние длины связей Fe-S (2.265 Ä), Fe-N,1.663 А, N-0 1.162 А , угол Fe-N-0 170,0°, длина C-S составляет 1.805(5) А и свидетельствует о том, что ароматические тиолы координируют железо в тиольной форме. PC исследования анионных и нейтральных комплексов свидетельствуют о существенном разбросе длин связей в нитрозильных группах.

., Связывание гетероциклических лнгандов с атомами железа в нейтральных биядерных комплексах, например, в Tetraz (рис. 6) и Bim (рис.7) происходит мостиковым способом через атомы серы и азота (ц-S-C-N тип). Атомы железа имеют тетраэдрическую конфигурацию, но удалены друг от друга, в среднем, на расстояние ~4 А. Связь атома железа с атомом азота гетероциклического лиганда Fe-N(3) в парамагнитных биядерных сера-нитрозильных комплексах составляет 2.010 Ä, Fe-S -2.299 А. По данным РСА средние длины связей C-S гетероциклов 1.736 А, что превышает значение длины двойной связи C=S (1.684 А), т.е. распределение длин связей и углов в ароматических лигандах всех комплексов р-S-C-N типа в большей степени отвечает тиольной форме лиганда. Анализ длин связей в структурном фрагменте {Fe(NO)2} всех комплексов показал их незначительные различия. Считается, что в {Fe(NO)2} фрагменте возможно внутреннее диспропорционирование вплоть до полного

окисления/восстановления NO групп. Частичное окисление/восстановление в Fe-NO фрагменте возможно в силу легкого прямого dFe—»7t*No и обратного

13

донирования, которое сопровождается сокращением/удлинением Fe-N и удлинением/сокращением N-O связей. В комплексе Imid наблюдается тенденция к увеличению линейности Fe-N-O углов в сравнении с таковыми для Im и Mim. Наблюдаемое существенное уменьшение длины связи атома железа с атомом азота гетероцикла в комплексе Imid объясняет его большую устойчивость в протонных средах.

Рис.8. Молекулярная и кристаллическая структура Triaz.

В нейтральном моноядерном комплексе Triaz (рис.8) Fe характеризуется слабо искаженной тетраэдрической конфигурацией с углами 102.74(2)-119.79(3)°. N0 группы в Triaz слабо изогнуты (Fe-N-О углы составляют 169.02(7) -172.84(6)°). При сравнении геометрии A and В гетероциклов обнаруживается, что несмотря на протонирование, длины связей 5-членных циклах близки и различаются на 0.01 А. Длины связей C(2)-N(3) и C(4)-N(7) для протонированного и непротонированного атомов азота А и В циклов близки (1.3561(8) и 1.3585(8)А), что обусловлено короткими меж- и внутримолекулярными N(6)-H(6)...N(3) и N(7)-H(7)...N(5') расстояниями и укороченными внутримолекулярными N-

0(2)....С(1 А) (0(2)...С(2А) 2.995(1)Ä) и N-0(1)...N(6B), N-0(1)...N(8B)

(3.046(1)-3.047(1)А) контактами. Топологический анализ электронной плотности выявил, что оба 5-членных кольца имеют почти идентичные конфигурации, т.е.

химической связи и свободные электронные пары в окрестности атомов водорода и серы. Максимумы, соответствующие электронным парам, мало различаются для

практически сходные сосредоточение зарядовой плотности в области

S(l) и S(2) атомов, по-видимому, это происходит из-за координации с атомом металла. В двух плоскостях S(l)S(2)Fe (рис.9) и N(l)N(2)Fe (рис. 10) электронная плотность сосредоточена в окрестности Fe и характеризуется распределением поперечного ("cross") типа. В области Fe-NO взаимодействий максимумы на атомах азота ориентированы к обедненной электронной плотностью области вокруг Fe и, таким образом, эти связи можно описать как "peak-hole" тип взаимодействий. Наоборот, Fe-S и, в частности, Fe-S(2) связь относится к типу " peak-peak" взаимодействий. Fe-S(l) и Fe-S(2) взаимодействия похожи и не различаются по типу химической связи.

Рис. 9. Сечения ДЭП в плоскости Рис.10. Сечения ДЭП в плоскости FeS(l)S(2) в Triaz. Контуры FeN(l)N(2) в Triaz. Контуры проведены с шагом 0.1 еА'3. проведены с шагом 0.1 еА'3.

Отрицательные значения показаны прерывистой линией.

N0 группы имеют значительные отличия (рис.10). Для атомов азота циклов, атомов серы и кислородных атомов N0 лигандов наблюдаются отрицательные заряды. Следует отметить, что атомы азота нитрозилов почти нейтральны с общим зарядом на N(1)0(1) и N(2)0(2) группах, между -0.25 и -0.37е. Заряд на атомах S(l) и S(2) близок к значению такового (-0.20е) для экзоциклического атома серы в 1,2,3,4-триазол-5-тиолат анионе.

Молекула соли дикатиона [Fe2(S(CH)2NH3)2(NO)4j2+ в CysAra (рис.11) кристаллизуется с 2,5, а в Реп - с 5 молекулами воды. В дикатионах атомы железа связаны с двумя атомами азота нитрозильных лигандов и двумя атомами ц-S протонированных лигандов.

Рис. 11. Структура независимого дикатиона и проекция кристаллической упаковки в СувАт.

Атомы находятся в искаженной тетраэдрической конфигурации с максимальным отклонением угла ЫО-Ре-ЫО до 121.3(2)° железа, за исключением связи Ре(1)-Ре(1А). Хотя геометрия двух независимых дикатионов почти идентична, расстояние Ре...Ре в них отличаются: 2.672 (1)А и 2.682 (1) А. Структуры обоих комплексов схожи со структурой тиосульфатного аниона и относятся к структурному типу "эфиров красной соли Русена".

Методами функционала плотности ВЗЬУР и РВЕ рассчитана геометрическая и электронная структура нейтральных биядерных тетранитрозильных комплексов железа с ароматическими тиолилами ц-в типа -РЬ, Ру, Рут, комплексов АгаТпаг, 1т, Мдт и 1пи<1 с координацией мостиковых лигандов по ц-Ы-С-Б типу и моноядерного динитрозильного комплекса железа Тпаг в различных изомерных состояниях. Оба теоретических подхода дают хорошее соответствие геометрической структуры комплексов и экспериментальной со среднеквадратичным различием длин связи 0.02-0.04А и углов 2-3°. Установлено, что в комплексах ц-Б типа - РИ, Ру, Рут, основное состояние системы является диамагнитным. Оно реализуется при антипараллельной ориентации локальных спинов 1/2 фрагментов {Ре(ЫО)2}. Группа N0 несет небольшой отрицательный заряд, сосредоточенный, в основном, на атоме О, связь Ре-ЫО следует рассматривать как гомеополярную. Для

комплексов АгаТпаг, 1т, М1т и 1ппс1 координация по ц-Ы-С-Б типу является энергетически предпочтительнее по сравнению с координацией по ц-Б типу. Вследствие этого реализуются большие расстояния Ре...Бе, при которых величина внутримолекулярного обменного взаимодействия незначительна, и при Т-296К комплексы парамагнитны с цЭфф.=2.5ВМ. Взаимодействие спинов атомов Бе носит антиферромагнитный характер. Особенностью нейтрального моноядерного комплекса Тпаг является наличие внутримолекулярной водородной связи Ы-Н...Ы между А и В (рис.8) лигандами, которая приводит к выравниванию длин связей Ре-Б и Б-С. Основное состояние системы имеет спин 1/2. Каждая группа NО также несет небольшой отрицательный заряд на атоме О, связь Ре-ЫО близка к гомеополярной. Оптимизированная геометрия дикатиона СувАт в синглетном состоянии также хорошо согласуется с экспериментальными структурными данными. Типичные отклонения длин связей и углов не превышают 0.1 (ВЗЬУР) и 0.03 (РВЕ) А и 4 градусов, соответственно. На каждой группе Ре(ЫО)2 располагается по одному неспаренному электрону. Т.о., электронная конфигурация Ре(ЫО)2 узла с одним неспаренным электроном во всех типах комплексов, образуется при связывании спина 3/2 Бе с противоположно ориентированными спинами 1/2 двух N0 групп, что соответствует степени окисления Ре+| (с!7). Теоретические расчеты дают не только хорошее описание экспериментальной структуры комплексов, но также вполне удовлетворительно описывать их ИК спектры.

[М(Ы)+ - Ш+] о [Мп+ - N0] <-> [М(п+1)+ - N0] I II III

Как известно, тип I электронной плотности связи металл-МО характеризуется короткими длинами связей М-МО, высоким значением частот валентных колебаний МО-групп (1650-1985 см"1) в ИК спектрах и электрофильной активностью. Для типа III характерны удлинение связей М-МО, уменьшение значения частот валентных колебаний МО-групп (1525-1590 см"1) и нуклеофильная активность. Существует также и разнообразие геометрии связи М-МО (рис.12).

линейная $р 1650-

як» м=л/=о 1985

<11* --г к \ / ' \ — угловая V 15251690

а» А> о» _д ----' мостиковэя О зр' -1500

•«Д ! \ 1 II /

»_... м " " м но

• мО о«—о «М ф »мО 0 ^Р « 0 1 N-М \ «Р* -1330

Рис.12. Диаграмма молекулярной орбитали М— N0 и геометрия М-N0 связи.

По данным ИК-спектроскопии в исследованных нитрозильных комплексах частоты валентных колебаний МО-группы лежат в области 1657-1807 см"1. При этом, наиболее близкими к линейными являются связь и угол при апикальном атоме железа в тетраядерном анионе [Ре^Цз-Б^^О)?]" 1738,7-1725,3 см"1). Положения характеристических частот колебаний N0 в ИК спектрах комплексов с сульфидным анионом [Ре232(НО)4]2" составляют 1657,0-1719,0 см"1, а для солей с тиосульфатным анионом [Ре2(82Оз)2СМО)4]2" наблюдается различие между N0 группами: одна из групп оказывается менее, другая - более линейна (умо 1741,0 и 1794,0 см"1, соответственно). Такое различие, подтвержденное данными РСА, наблюдается также для нейтральных комплексов с ароматическими тиолилами ц-Б типа (уко 1723,0 - 1797,0 см"1) и ц-Ы-С-З типа (уцо 1725,0 - 1807,0 см"1) и катионных комплексов с аминотиолилами (умо 1723,0 - 1773,0 см"1).

По данным Мессбауэровской спектроскопии величины изомерного сдвига 8реа комплексов с анионом [РеДЫО^Зз]" близки к таковым в нейтральном комплексе "кубане" - ¡Те^О^,,] (рис.13). В солях с анионом [Ре282(ЫО)4]2_ роль катиона не сводится к простой компенсации отрицательного заряда

кластера: с ростом размера катиона АЕд существенно уменьшается, . т.е. суммарное распределение зарядов валентной оболочки железа и окружающих его атомов становится более симметричным. Заметно уменьшается и 5, что свидетельствует о возрастании Б-электронной плотности на ядрах Ре57 в ряду от А = Ыа+ до А = Ви4Ы+ и согласуется с уменьшением длин связей Ре - Б и Ре - Ре. Значения 5 в [Рег^Оэ^^О)^2" увеличиваются почти вдвое (рис.13) по сравнению с 8 в изоэлектронных комплексах с дианионом Р^О^О)^2". Этот факт свидетельствует об уменьшении 4б электронной плотности на атоме железа, вероятно, обусловленном электроноакцепторными свойствами групп 80з. В тиосульфатных комплексах наблюдается тенденция к увеличению длины связи Ре-Б, углов Р'еЬ'О, а также к укорочению связей N-0 по сравнению с таковыми в сульфидных комплексах. Формально можно считать заряд на N0 в тиосульфатном анионе более положительным, чем в сульфидном анионе. Параметры 6 нейтральных комплексов ц-8 типа незначительно (на 0.02 см"1) отличаются от таковых для тиосульфатных комплексов. По данным ЯГР значения 5 комплексов ц-Ы-С-Б типа увеличиваются (почти вдвое) по сравнению с таковыми для комплексов ц-Б типа, что свидетельствует об уменьшении 4в электронной плотности на атоме железа в комплексах этого типа. Анализ структурных фрагментов Ре-И-О ц-Ы-С-З комплексов по сравнению с таковыми в ц-8 комплексах также показал их "неэквивалентность": Ре-Ы(2)-0(2) фрагмент имеет более короткие N-0 и Ре-Ы связи: >1(2)-0(2) 1.169(7) А и Ре-N(2) 1.661(6) А и оказывается более линейным 171.5(6)°. Другой Ре-Ы(1)-0(1) фрагмент имеет более длинные связи: Ы(1)-0(1) 1.187(7) А и Ре-Ы(1) 1.681(5) А, а также угол 158.1(5)° - наименьший из всех ранее исследованных. При этом, различие в углах Ре-Ы-О фрагментов в комплексе составляет заметную величину - 13.5°, в отличие от р.-Я комплексов, в которых эта разность в среднем составляет 2-4°.

0.32 ^ 0.300.280.26-

[Ре^-И-С-ВНММОМ

(БАпиТпаг)'

[Рез84(НО),]- (МВи,Г [Рег^-БгОзЫКО),]'

(вРуп)"

[Рег^-вКМНО),)

(ЗТпа!)* . р=е(8ИЬР<ОЫ

8 0.08

(МЕМ4

(ЫМе«)' [Яегв2(ЫО),]:

0,06 0.04 0,02 0.00

(МРг^)'

С 5*

2.21 2,22 2.23 2,24 2.25 2,26 2,27 2,28 2,29 2,30 2,31

Рв-Б/А

Рис.13. Значения изомерного сдвига и длины связей /е-51 в нитрозильных комплексах железа с Б-функциональными лигандами.

Можно предположить, что такое различие в строении железо-нитрозильных фрагментов обусловлено перераспределением зарядов в (Х-И-С-Б комплексах железа, в результате которого одна из N0 групп становится более положительно заряженной. В ц-Ы-С-З комплексах связь Ре-К(2) 1.661(6) А значительно короче другой (1.681(5) А), и угол Ре-М(2)-0(2) приближается к линейному 171.5(6)°. Значения валентных колебаний нитрозильных групп в ИК спектрах комплексов этого типа высоки, при этом разность двух полос поглощения составляет 73 см"1, в то время как для ц-Б комплексов эта величина составляет 20-43 см"1. Наблюдаемое существенное расщепление полос, по всей видимости, также может быть связано с неэквивалентностью N0 групп в Ие-М-О фрагментах.

В нитрозильных катионных комплексах [Рс^^О^О)^^ значения изомерных сдвигов попадают в область, характерную анионных и нейтральных комплексов типа. При переходе от солей (ТегЗгСЫО)^2" с различными зарядово-компенсирующими катионами к нейтральным комплексам 8 претерпевает скачок приблизительно на 0.1 мм/с. Состояние окисления железа в нитрозильных комплексах определить сложно, ввиду малого различия энергий й-

орбиталей металла и я*-орбиталей N0. По этой причине можно принять в рассмотрение общее распределение заряда одного из двух эквивалентных фрагментов биядерного комплекса {Ре(К0)2}\ где х является суммой с1-электронов на металле и л*-электронов на N0. Следует отметить, что {Ре(Ж))2}-фрагмент димера содержит 9 валентных электронов, независимо от типа мостиковых лигандов - (Б)2", (8К)" или (БИ.)0. Тогда, без учета различий в геометрии Ре-ЫО связей (углы Ре-Ы-О в пределах 167-173°), электронное состояние железа должно было бы оставаться неизменным. Фактически, изменение формального заряда мостиковой серы от -2 до -1 приводит к возрастанию значения Ие-З в среднем на 0.03 А и, соответственно, к возрастанию изомерного сдвига. Поскольку положительно заряженные Л-заместители в этом ряду также являются акцепторами, то значения изомерных сдвигов попадают в область эфиров солей Руссена с (Б)" мостиком. Небольшое возрастание изомерного сдвига можно связать с увеличением акцепторной способности К. с увеличением его длины (при переходе от цистеамин к пеницилламину и глютатиону).

Глава 4 посвящена исследованию физико-химических свойств ннтрозильных комплексов железа с функциональными Б-лигандами в твердой фазе и в растворах.

Анализ масс-спектров газовой фазы при нагревании анионных и нейтральных комплексов при Т=25°С показывают, что они состоят из молекул воды, СО и С02, захваченных образцами из воздуха. При нагреве до 70 -120°С в спектрах появляются пики, отвечающие молекулярным ионам [ИО]+ (наиболее интенсивный), [СО]+, [Н20]+, [Ы]+, [С8]+ и продуктов разложения лигандов. Катиоиные комплексы - более устойчивы: нагревание до 70°С не инициирует их разложение, а в спектрах наблюдаются полосы, относящиеся к молекулярным ионам газов, входящих в состав воздуха.

Исследование магнитных свойств нитрозильных комплексов железа несет прямую информацию об их спиновом состоянии. На рисунке 14 приведены

зависимости эффективного магнитного момента цЭфф(Т) для нейтральных комплексов ц-Ы-С-Б типа. Зависимости магнитной восприимчивости х(Т) для комплексов имеют характерный для димеров максимум при температурах 63 и 83 К (рис.15).

1 « » ' '

е

I МЮ

т,к

Рис.14. Температурная Рис.15. Зависимости магнитной

зависимость эффективного воспримчивости от температуры для

магнитного момента комплексов комплексов Bim(a), Mim(b), lmid(c) и

AmTriaz (1), Im (2); Mim (3) в Im(d) a, b и d в постоянном

магнитном поле 5кОе. магнитном поле 1 кОе.

Наличие максимума зависимости х(Т) объясняется конкуренцией спиновой релаксации и обменного взаимодействия отрицательного знака. Для комплекса АтТпаг Цэфф практически постоянен до температур ~ 50 К, что связано с меньшей величиной внутримолекулярных обменных взаимодействий по сравнению с комплексами 1т и М!т. Кривые /д,фф(Т) для всех комплексов при высоких температурах стремятся к значению ~2.5 В.М., что указывает на наличие одного неспаренного электрона на каждом атом Ре, то есть каждый металлоцентр находится в низкоспиновом состоянии Б = 1/2, как и в моноядерном парамагнитном комплексе Тпаг. Теоретическое значение для этого случая невзаимодействующих спинов равно gV2S(S+l)=2.45 В.М. при §=2. При низких температурах наблюдается небольшое повышение магнитной восприимчивости, вызванное, по-видимому, наличием в образцах мономерных примесей. В результате Цэфф отлично от нуля при Т—>0. Теоретическое моделирование кривых

22

Х(Т) с помощью уравнения Блини-Бауэрса для димера с учетом обменных взаимодействий между димерами и наличия парамагнитной примеси позволяет удовлетворительно описать экспериментальные данные для комплексов Im, Mim и Imid. Для комплекса AmTriaz эта модель обладает меньшей степенью точности, по-видимому, из-за наличия спин-орбитального взаимодействия. Полученные оптимальные параметры данной модели представлены в табл. 4.

Таблица 4. Параметры обменных взаимодействий для комплексов ц-N-C-S

типа.

Комплекс

Характеристики Im Mim Imld

Э 2.09±0.05 2.19*0.12 2.03±0.01

J, К -50.6±0.8 -67±2 -36.0±0.01

zj\ К -14±8 -38±19 10±1

Р 0.0047±0.0С03 0.005±0.0004 0.017±0.0001

g - g-фактор иона железа, р - доля парамагнитной примеси.

В таблице 5 приведены рассчитанные константы сверхтонкого взаимодействия на атомах азота, входящих в координационную сферу атомов Ре и константы для ядер 170 нитрозилъных лигандов. Они оказываются

Таблица 5. Константы сверхтонкого взаимодействия по данным ВЗЬУР/б-311++С** расчета в эрстедах для комплексов АтТпаъ 1т, Мти1тЫ.

Комплекс "Nl "о, "N2 "o2 "N

AmTriaz 2.9 3.2 2.9 3.8 4.3

Im 2.9 3.7 2.9 3.7 4.6

Mim 2.8 3.7 2.9 3.4 4.7

Imid 3.0 3.7 3.0 3.8 4.8

такого же порядка, что и для атомов N. непосредственно связанных с атомами Ре. Экспериментальное наблюдение СТС для |70 представляется важным для понимания природы связывания N0 лигандов, так как эти величины непосредственно связаны с характером связывающей молекулярной орбитали фрагмента О-Ы-Ре. Моделирование спектров ЭПР с вычисленными константами СТС дает такую же ширину линий, которая наблюдается в экспериментальных спектрах порошков АтТпаг, 1т; М1т, 1гт'с1 с неразрешенной СТС.

Вычисленные малликеновские заряды на N0 группе составляют небольшую отрицательную величину, от -0.26 до -0.31. Знак заряда и понижение частоты N0 колебаний указывают, что ЫО-группы являются умеренными акцепторами. Однако практически линейная координация N0 лигандов указывает, что величина акцептируемой электронной плотности невелика, иначе реализовывалась бы нелинейная координация N0 групп.

Кристаллический комплекс Тпаг при Ткомн характеризовался сигналом ЭПР с центром при § = 2.04 и полушириной 1.7 мТ, имеющим лоренцову форму (рис.16). Растворение комплекса в метаноле приводило к появлению в центре этого сигнала ЭПР более узкого сигнала с центром при д = 2.35 и полушириной 0.7 мТ, интенсивность которого возрастала по мере растворения кристаллов до полного исчезновения более широкого сигнала. На рис.17 приведены спектры ЭПР монокристаллов и растворов нитрозильных комплексов |1-1Ч-С-8 типа с различными азагетероциклическими лигандами. Для растворов Те^аг наблюдалась сверхтонкая структура спектра (СТС) вследствие магнитных взаимодействий между спинами неспаренных электронов и протонов и ядер азота. Для поликристаллов СТС не наблюдается. Установлено, что спектр соответствует исходному комплексу Т&гаг. Одинаковые спектры ЭПР в разных растворителях свидетельствуют в пользу биядерной природы парамагнитной частицы, так как при диссоциации Т^гаг на два мономера у атома железа появляется координационная вакансия. Она заполняется молекулой растворителя, что должно влиять на характеристики спектра ЭПР. Кроме того, более медленное затухание сигнала ЭПР в ДМСО-растворах по сравнению со спиртовыми растворами Те^аг, которое коррелирует со значительным различием в стабильности Тс^ах в этих средах, также подтверждает данное отнесение. Уменьшение интенсивности спектра ЭПР растворов Те1гаг во времени указывает на то, что стабильные продукты его разложения диамагнитны, то есть в системе происходит быстрая трансформация первичных продуктов разложения комплекса с высвобождением N0.

е - 2.М 2.035

. - . ".........^........* ...

340 350

Рис. 16. ЭПР сигналы модельного Рис.17. Спектры ЭПР

Тпаг: (а)- кристаллического, (Ь)- .монокристаллов и растворов

частично растворенного в нитрозильных комплексов /¿-N-0-5

метаноле и (с)- полностью типа, растворенный в метаноле.

Анализ изотопных распределений полученных ионных пиков и измерение значений точных масс ионов позволили идентифицировать все основные зарегистрированные ионы в растворах исследованных комплексов.

В масс-спектрах растворов Тегга/ и других нейтральных комплексов обнаружены ионы моноядерных нитрозильных интермедиатов (таблица 6). Установлено, что в ДМСО стабильность комплексов существенно выше, чем в метаноле. Малое число спинов на комплекс во всех растворах указывает на то, что и моноядерные комплексы далее разлагаются с высвобождением N0 и других продуктов. Наиболее устойчивы в растворах катионные комплексы, но устойчивость в ряду Су$>Реп>С1и убывает.

В главе 5 представлены данные по изучению ЫО-донорной активности нитрозильных комплексов с помощью сенсорного электрода агшМ0700. Через несколько секунд после растворения нейтральных комплексов в аэробных водных растворах количество выделившегося N О на значительно превышает таковое для донора сравнения - ЫО-ата (рис. 18 (а)) и анионных сульфидных комплексов. Катионные комплексы выделяют N0 более пролонгировано (рис. 18(6)).

Таблица 6. Данные масс-спектрометрии растворов нитрозильных комплексов железа.

Комплекс Лиганд ион интесивность

Na2[Fe2S2(NO)4] -8Н20 - [Fe4S4(NO),J- 0.16

(RSR-Na) [Fe2S2(N0)4+H]- 0.25

[Fe2S2(NO)4+Na]- 0.04

[Fe4S3(NOh]' 1.00

[Fe,S4(NO)j+Hr 0.07

[Fe4S4(NO)»+Na]' 0.01

[FesS4(NO),]' 0.22

Na2[Fe2(S203)2(N0)4) *4Н20 SjOJ' [Fe(S20J)(N0)2J-, 1.00

(ТНКЖ-Na) [Fe(S2Oj)(NO)r 0.47

[Fe(S203)r 0.16

Fe2(SC,H4Nb(NO)4 SC5H4N- [FeOj]" 0.37

(РУ) [SC5H4N]" 0.02

[FeO,+2(NO)+NOJ 0.38

[FeOj+NjOsf 0.53

[Fe0j+3(N02)]- 1.00

[Fe(SC5H4NWNO)2J- 0.25

tFe4S,(NO)7]" 0.55

Fe2(SC,H5)2(NO)4 SCtHi" [FeOtf 0.33

(Ph) [SC«Hsr 0.01

[FeOi+3(NO)]' 0.91

IFeOr^fNO)]' 0.69

[Fe(SC«Hs)(NO)2+ NOJ- 0.13

[Fe(SC«H8)2NOr 0.25

[Fe(SC,H5)2(NO)2]- 1.00

Fej(SC<H!N2)2(NO)4 SC„HsNj' [NO,]' 1.00

(Рут) [SCiHsNj]" 0.34

[Fe(SC4HsN2)(NO)2r 0.10

[Fe(SC4H,N2)2(NO)2]- 0.65

IFej(SC2H,N4b(N0)J-2H20 SC2H3N4" l(SC2H3N4)-Hr 0.02

(AmTriaz) [SCjHjNi]" 0.07

[(SC2HlN4)2-H]' 0.31

[(SC2H3N4)2+N03r 0.65

r(SC2H3N4)4-Hl* 1.00

Fe2(SC2H3N4)2(NOW SCaHiN«' [SCjHsN,]- 1.00

(Tetraz) Fe(SC2H3N4)2(NO)r 0.05

tFe(SC2H3N4)2(NO)2]- 0.44

[Fe(SC2H3N4)3r 0.35

rFe4S3(NO)7]- 0.92

Fe2(SCjHiN2WNO)4 SCJHJN/ [SC3H3N2]- 0.09

(Im) [Fe(SC3H3N3)(NO)]' 0.29

[FeOj+3(NO)r 0.25

[(SC3H3N2)2-H]" 0.15

[Fe2(SC3H3N2)2(NO)4-H]- 0.30

[Fe2(SC3H3N,)2(NO)4tNOJ- 0.05

[Fe2(SC3H3N2)3(NO)4r 0.30

313.928 (2Fe) ? 1.00

Fe2(SCjH5Nj)j(NO)4 SCjH5N2- [(SC3HsN2)-H+2(NO)]" 0.17

(Mlm) 445.973 (Fe03+X) (3S) ? 0.33

[F«4Sj(N0)7]- 1.00

Fe(SC2H2N3)2 (NO)a-1/2HjO SC2H2Ni' [(SC2H2N3) -H]" 0.06

(Triai) [SC2H2N3]" 0.09

l(SC2H2N3)+03]- 0.23

[Fe02+( SC2H2N3)]" 0.40

[(SC2H2N3)2-HJ- 1.00

[(SC2H2N3)+S203r 0.35

[(SC2HjN3)2+N03]' 0.99

[Fe(SC2HïN3)2(NO)2]" 0.34

[F»i(S(CH2)2NHI)i(NO)4]S04-2,5H20 S(CH2)2NH3" [Fe(S(CH2)2NH3)(NO)2r 0.003

tFe2(S(CH2)2NH3)2(NO)4-2H-2NOJ* 0.014

[Fe2(S(CH2)2NH3)2(NO)4-H-NOr 0.022

[Fe2(S(CH2)2NH3)2(NO),-H]* 1.000

а б

Рис.18. Зависимости количества N0, генерируемого нейтральными нитрозшъными комплексами железа (0.4-11/5 М) в 1% водном растворе ДМСО при рН 7,00 и Г= 25° С от времени в аэробных условиях.

Для всех исследуемых комплексов на кинетических зависимостях обнаруживаются максимумы, появление которых можно связать с дальнейшим превращением генерированного N0:

Комплекс —РеЬ + N0, где I. = [Ре^ИЫМОЬГ (1)

N0 > Продукты (2)

Этой схеме превращений соответствует следующая функциональная зависимость концентрации N0 от времени вида:

[N0] = сЫехр{-ад - ехр(-А, ()]/(* - кг) (3)

где константа с имеет физический смысл предельной концентрации N0, которая реализовалась бы в отсутствие дальнейшей трансформации N0. Известно, что в растворах динитрозильных комплексов железа конечным продуктом трансформации N0 является М20 . В качестве восстановителя для перевода N0 в анион N0" выступает, по-видимому, образующийся при диссоциации связи Ре— N0 нитрозильный железосодержащий интермедиат и координации молекулы воды по свободному координационному месту. Усиление восстановительных свойств интермедиата по сравнению с исходным комплексом обусловлено увеличением электронной плотности на атоме Бе вследствие координации молекулы воды. При разложении нитрозильных комплексов в аэробных условиях наблюдается возрастание в несколько раз (по сравнению с процессами в анаэробных условиях) количества выделяющегося N0, что можно объяснить

более быстрым переносом электрона на молекулу кислорода от восстановленного комплекса. В результате этого конкурирующего редокс-процесса уменьшается доля восстановленных молекул N0, которые претерпевают превращения в последующих реакциях, и таким образом возрастает регистрируемая концентрация N0. С другой стороны, как и для ЫО-ата, возможно прямое взаимодействие N0 из раствора с отрицательно заряженным лигандом N0" нитрозильного комплекса железа, в результате чего образуется гипонитритный лиганд в координационной сфере. В этом процессе фактически также происходит перенос электрона на N0, но без выхода его из координационной сферы. Очевидно, что реализация этого механизма в случае достаточно быстрых реакций образования шпонитритного лиганда приведет к уменьшению константы с -предельного количество молекул N0.

С помощью квантово-химического моделирования с использованием методов функционала плотности была изучена энергетика реакций диссоциации Ре-Ж) связи и замещения N0 на аква-лиганд в комплексах Рут и РЬ. Проведенное теоретическое рассмотрение показывает, что наблюдаемый эффект рН (рис.19) можно связать с диссоциацией комплекса на два моноядерных в кислой среде под действием электрофильной атаки протона на атом 8 и ассоциативным механизмом замещения N0 на ОН" ион в щелочной среде. Более подробное рассмотрение вопроса с анализом других альтернатив требует дальнейших исследований.

Рис.19. Зависимости концентрации N0, генерируемого комплексом Рут (0.4-10~5М) от времени при различных значениях рН среды для водных растворов в анаэробных условиях при температуре 25 °С: кривая I — рН 6.00; кривая II - рН 7.43; кривая III-рН 7.00.

В работе также исследованы реакции нитрозильных комплексов железа с гемоглобином (НЬ). НЬ при взаимодействии с N0 образует НЬЫО. При этом, спектр поглощения НЬ, имеющий характерную полосу в видимой области Хп,ак = 556 нм (е =12,5 мМ"'-см"') переходит в спектр >„тах = 545 нм, с (е =12,6 мМГ'-см"1) и ^тах = 575 нм с (е=13,0 мМ"'-см ').На рис. 20 приведено изменение разностных спектров поглощения во времени при взаимодействии комплекса Те^аг с НЬ. На рис. 21 приведены данные по кинетике взаимодействия комплекса Те1гаг с НЬ. Экспериментальные точки были получены по данным рис.20 методом наименьших квадратов. В аналогичных условиях было исследовано взаимодействие всех комплексов с НЬ.

Рис.20. Изменение разностных Рис.21. Кинетика образования HbNO спектров поглощения во времени при взаимодействии комплекса Tetraz при взаимодействии комплекса (2-Iff4 М) с НЬ (7,5-Iff6 М). Tetraz (2-lff4 М) с НЬ (7,5-lff6 М). Сплошная линия - теоретическая Растворитель — 0,05 М одноэкспонещиальная кривая,

фосфатный буфер рН 7.0, соответствующая указанным

содержащий 3,3%ДМСО,Т-25"С. экспериментальным точкам.

Все кинетические зависимости, полученные для взаимодействия комплексов с НЬ, хорошо описываются в рамках формализма реакций псевдопервого порядка. С помощью компьютерной программы "Origin" были построены теоретические одноэкспоненциальные кривые с использованием функции у = afl-e'1"), где к -эффективная константа скорости первого порядка, а - конечная концентрация HbNO. Процесс образования HbNO можно описать двумя последовательными

реакциями. Первая реакция - это распад комплекса с выделением N0 по схеме:

комплекс —N0 (4)

с константой скорости реакции ка является необратимой реакцией первого порядка, и увеличений концентрации N0 протекает по экспоненциальному закону: [Ы0] = [И01{\-е-^)

Вторая реакция - это образование НЫЯО по схеме:

НЬ + N0 — ИМО (5)

с эффективной константой скорости реакции псевдопервого порядка кь.. Для используемой концентрации НЬ величина кь в 107 раз превышает полученные в эксперименте константы скорости реакции образования НЬЖ). Для последовательных реакций накопление конечного продукта (в данном случае -НЪГТО) описывается уравнением:

При значениях кь »£„,, второй частью уравнения (6) из-за малой величины можно пренебречь, и накопление конечного продукта происходит с константой скорости первого процесса, ка по уравнению:

\HbNO] = [ИЬЫО\ (1 - е1-' ) (7)

Таким образом, НЬКГО образуется с такой же скоростью, с какой выделяется N0 в раствор. Конечная концентрация №N0 в экспериментах определяется исходной концентрацией НЬ, поскольку константа связывания НЬ с N0 составляет 3-1010 моль"'-л. Поскольку скорость взаимодействия НЬ с N0 близка к диффузионной (константа скорости реакции второго порядка к2 = 1.02 -108 моль" '•Л'с'1), полученные экспериментальные величины констант к (Табл.7) свидетельствуют о том, что скорость образования НЬЖ) в экспериментах определяется стадией выделения N0 в раствор из комплексов.

Разложение комплексов В™, Ру и Руга в растворах, содержащих НЬ, происходит с меньшей (на порядок) скоростью, чем остальных, т.е. комплексы генерируют N0 в раствор более пролонгировано, что связано с эффектом стабилизации их гемоглобином, который объясняется различной основностью Б-

30

лигандов в исследуемых комплексах. Скорость реакции N0, генерируемого

анионным комплексом ШЖ^а почти на два порядка меньше, чем всех других

комплексов, и определяется, вероятно, с переходом "красной соли" Русена в

"черную соль" Русена в растворе; которая является устойчивой в протонных средах

и для генерации N0 требует дополнительной активации (фото-, термо- и др.).

Таблица 7. Эффективные константы скорости первого порядка (к) взаимодействия нитрозильных комплексов железа с НЬ.

N9 Комплекс кх 103, с'1 № Комплекс кхЮ'.с"1

1 ТНКЖ 4,5 ± 0,45 9 В1т 0.16 ±0,16

2 КБСг-Иа 0,061 1 0,006 10 ВИ 0.33 ± 0,3

3 АтТпа! 1,72 ± 0,17 11 Ру 0.621 0.06

4 Теьга! 7,4 ± 0,74 12 Рут 0.37 ± 0.03

5 1т 8,85 ± 0,9 13 Реп 3.30 ± 0.3

6 М[гл 3,46 ± 0,35 14 Су9 28.61 0.3

7 Тг1а1 1,84 ± 0,18 15 МОЫО-ат 0.08 10.08

8 МВ1т 0.1210,12

В работе также изучено взаимодействие НЬ, оксигенированного гемоглобина (НЬ02) и метгемоглобина (тйНЬ) с Рут с образованием нитрозотиолов по свободной БН-группе р 93-цистеина. Установлено, что НЬ02 реагирует с N0, выделяющимся из Рут, с образованием теШЬ. Рут восстанавливает теШЬ с большой скоростью в НЬ (к= 6.7-10"3 с"1) с последующим образованием №N0 (к = 6.5-10"3 с'1). Окисленный комплекс Рут выделяет N0 с большей скоростью, чем исходный комплекс. НЪОг и теШЬ (0.02-ммоль-л"1) образуют при взаимодействии с Рут нитрозотиолы в микромолярных концентрациях за 5 мин взаимодействия. Установлено, что НЬ не образует нитрозотиола при взаимодействии с Рут.

В главе 6 представлены данные проведенных исследований биологической активности нитрозильных комплексов железа с S-лигандами. Исследование кардиотропной активности анионных и катионных нитрозилов выполнено на моделях ишемического и реперфузионного повреждения миокарда in vitro и in vivo. На изолированном сердце крыс Wistar, перфузируемом раствором Кребса при постоянном коронарном потоке изучено действие болюсного введения в аорту ТНКЖ-Na, Реп и NO -доноров сравнения - нитропруссида натрия и нитроглицерина.

Рис. 22. Сопоставление влияния Рис- 23- ВРемя окончательного

эквимолярных концентраций восстановления исходного

нитрозильных комтексов железа на артериального давления после

артериальное давление. введения Реп и нитроглицерина.

Для ТНКЖ-Na и Реп выявлено дозо-зависимое влияние на снижение аортального давления. Сопоставление близких действующих концентраций ЗмкМ) доноров N0 показало, что их вазодилататорная способность увеличивается в ряду нитропруссид натрия<Реп<ТНКЖ-Ка (рис.22). 5-минутная инфузия 3.7Т0"5 М юггропруссидом и ТНКЖ-Na показала, что показатели восстановления коронарного потока, сократительной функции и насосной функции минутного объема после окклюзии аорты были более эффективны после инфузии ТНКЖ-Na. Реп у наркотизированных крыс in vivo вызывает дозо-зависимое снижение АД (рис.23).

В работе выполнены комплексные исследования противоопухолевой активности всех синтезированных нитрозильных комплексов in vitro и in vivo. Из 15 комплексов, тестированных на 4-х линиях опухолевых клеток человека

нигрол руссид

3500

■ Реп

10-5 5*10-6 10-6 5ЧО-7 10-7 До*а. моль «г массы крысы

(раке яичника линии SK0V-3, раке молочной железы линии MCF-7, немелкоклеточном раке легкого линии А549 и клетках миелобластного лейкоза линии К562) выявлено 4 активных соединения - Im; Btz; RSR-Na и CysAm (% ингибирования роста опухолевых клеток 75-92). Для CysAm выявлены наиболее высокие уровни цитотоксической активности на 4-х клеточных линиях (GI50: К562=17 мкМ, SKOV-3 =43 мкМ, MCF-7=20 мкМ, А549=90 мкМ). CysAm как соединение устойчивое при хранении, хорошо растворимое в воде, пролонгировано генерирующее N0 в растворах и не имеющее цитотоксичности у компонентов, его образующих было исследовано детально - на 9 линиях клеток различного гистогенеза (на клетках миелолекоза К562, рака молочной железы SKBR-3, рака молочной железы MCF-7, иммортализованных клеток рака почки А293, рака яичников SKOV-3; рака толстой кишки LS174T, рака предстательной железы DU145, рака предстательной железы РС-3 и немелкоклеточного рака легкого А549). Максимальную чувствительность к CysAm проявили линии клеток рака молочной железы. Действие CysAm на распределение клеток К562 по фазам клеточного цикла, проведенное методом проточной цитометрии на основании плоидности ДНК показало, что CysAm вызывал увеличение содержания клеток в S-фазе на 16%, уменьшение в Gl-фазе на 8% и на 8% - в 02/М-фазе. Обнаружено также, что комплекс CysAm является индуктором апоптоза в клетках миелолейкоза К562 и в клетках рака толстой кишки LS174T. Комплексы Btz и Ph также инициировали активность каспаз 3 и 7 К562. Для комплекса Btz показана зависимость количества клеток в апоптозе от концентрации. Способность комплекса Ph в той же концентрации индуцировать апоптоз была ниже (23%) по сравнению с комплексами Btz и CysAm.

Испытания противоопухолевой активности нитрознльных комплексов железа /я vivo изучали на 4-х моделях опухолей мышей, входящих в число обязательных опухолей животных используемых при отборе новых противоопухолевых веществ: меланоме В-16, эпидермоидной карциноме легкого Льюис (LLC), аденокарциноме молочной железы Са-755 и лимфоцитарной

лейкемии Р-388. Критериями оценки противоопухолевого эффекта служили торможение роста опухоли ТРО (%) и увеличение продолжительности жизни УПЖ (%). Исследования проведены на активных соединениях - Im, Btz, RSR-Na и CysAm, выявленных по данным исследований in vitro. Установлено, что соединения Ira и Btz обладают кратковременным противоопухолевым действием после ежедневного внутрибрюшинного введения в течение 5-ти дней. Комплекс RSR - Na оказывал противоопухолевое действие, соответствующее критериям эффективности оригинальных веществ нового класса: на меланоме В-16 в течение 10-ти дней: ТРО= 70-66-74, УПЖ=28%, на LLC в течение 15-ти дней: ТРО= 83-63-69-65, УПЖ=27%. Комплекс CysAm также оказывал противоопухолевое действие, соответствующее критериям эффективности оригинальных веществ нового класса: на Са-755 в течение 9 дней: ТРО=71-76-63-64% и УПЖ = 66% ; на LLC в течение 10 дней : ТРО = 86-67-61%, УПЖ=7%. Предклинические исследования продолжены с CysAm.

ВЫВОДЫ:

1. Создан новый класс соединений - доноров NO - синтетических моделей активных центров нитрозильных [2Fe-2S] и [lFe-2S] белков. Впервые выделены в кристаллическом состоянии и исследованы нитрозильные комплексы железа с функциональными S-лигандами: алифатическими и азагетероциклические тиолилами - аналогами природных тиоаминов, гистидинов, пиридиновых и пуриновых оснований ДНК.

2. Методами РСА, ИК- и Мессбауэровской спектроскопии впервые определено молекулярное и кристаллическое строение синтезированных соединений различных структурных типов. Установлено, что атомы железа в комплексах находятся в тетраэдрической координации и связаны друг с другом посредством мостика S или N-C-S функционального лиганда. Показано, что S-лиганды в реакциях комплексования железа в присутствии N0 координируют атом металла в форме тиола. Прецизионные PC исследования показали

идентичность Fe-S связей и могут быть описаны как межатомные взаимодействия "peak-peak" типа, а связи Fe-NO - как взаимодействия "peak-hole" типа.

3. Впервые методами функционала плотности B3LYP и РВЕ рассчитаны геометрические и электронные структуры нейтральных нитрозильных комплексов железа в различных изомерных состояниях. Установлено, что координация лиганда по ц-N-C-S типу является энергетически предпочтительной по сравнению с координацией по ц-S типу. Вследствие этого реализуется большие расстояния Fe...Fe, при которых величина внутримолекулярного обменного взаимодействия оказывается незначительной, и при комнатной температуре комплексы оказываются парамагнитными с эффективным магнитным моментом -2.5В.М. Обменное взаимодействие спинов атомов Fe носит антиферромагнитный характер. Для комплексов ц-S типа основное состояние системы является диамагнитным. Установлено также, что группа N0 в синтезированных комплексах несет небольшой отрицательный заряд, сосредоточенный, на атоме О, а связь Fe-NO следует рассматривать как гомеополярную. Электронная конфигурация Fe(NO)2 узла с одним неспаренным электроном в комплексах образуется при связывании спина 3/2 центра Fe+d7 с противоположно ориентированными спинами 1/2 двух N0 групп.

4. Методом электрохимического анализа водных растворов нитрозильных комплексов железа установлено, что синтезированные соединения генерируют NO в прогонных средах без дополнительной активации. Количество N0 и скорость его генерации значительно (на порядок) превышает таковые для N0-атов. Предложен механизм отрыва NO-групп в нитрозильных комплексах железа в условиях гидролитической деструкции. Методами ЭПР и масс-спектрального анализа установлено строение моноядерных динитрозильных комплексов железа и других реакционно-способных интермедиатов, образующихся при разложении комплексов в протонных растворителях.

5. Исследованы реакции гемовых белков с синтезированными комплексами в водных растворах. Установлено, что эффективные константы скоростей реакций

первого порядка на 2-3 порядка выше, чем таковые у NO-доноров сравнения. Обнаружена взаимосвязь строения комплексов с эффектом стабилизации их гемоглобином, который объясняется различной основностью S-лигандов в исследуемых соединениях.

6. Впервые обнаружена кардиотропная активность нитрозильных комплексов железа анионного и катионного структурных типов на моделях ишемического и реперфузионного повреждения миокарда in vitro и in vivo. Установлено более эффективное влияние исследуемых соединений на вазорелаксацию, чем у NO-доноров сравнения нитроглицерина и нитропруссида натрия.

7. Впервые установлена дифференциальная чувствительность 9 линий опухолевых клеток человека различного генеза к нитрозильным комплексам железа различных структурных типов. Показано, что комплексы проявили способность индуцировать апоптоз в опухолевых клетках человека линий К562 и LS174T. Установлены зависимости количества опухолевых клеток в апоптозе от концентрации комплекса-индуктора.

8. Впервые изучена противоопухолевая активность 4-х нитрозильных

комплексов железа различных структурных типов на перевиваемых опухолях

мышей: меланоме В-16, эпидермоидной карциноме легкого Льюис (LLC),

аденокарциноме молочной железы Са-755 и лимфоцитарной лейкемии Р-388.

Установлено, что соединение CysAm оказывает высокий противоопухолевый

эффект на экспериментальных моделях Са-755 и LLC и предложено для

проведения детальнейших предклинических исследований.

Основное содержание диссертации опубликовано в 47 статьях и 5 заявках на изобретение.

Статьи:

1. Санина H.A. Синтез, кристаллическая структура, мессбауэровские спектры и редокс-свойства биядерных и тетраядерных железо-серанитрозильных кластеров/ H.A. Санина, И.И. Чуев, С.М. Алдошин, Н.С. Ованесян, В.В. Стрелец, Ю.В. Гелетий// Изв.АН. Сер. хим.- 2000,- № 3,- С.443-450.

2. Санина Н.Л. Влияние катиона на свойства биядерных нитрозильных комплексов. Синтез и кристаллическая структура [Pr"4N][Fe2S2(NO)4]/ Н.А. Санина, О.С. Филипенко, С.М. Алдошин, Н.С. Ованесян// Изв. АН. Серия химическая,- 2000,- № 6,- Р. 1115-1118.

3. Сашша Н.А. Синтез, рентгеноструктурное и спектральное исследование соединений [Q4N][Fe2(S203)2(N0)4] (Q=Me,Et, n-Pr, n-Bu) /Н.А. Санина, О.А. Ракова, С.М. Алдошин, И.И. Чуев, Л.О. Атовмян, Н.С. Ованесян// Коорд. хим.-

2001.- V.27.- № 3.- Р. 198-202.

4. Ракова О. А. Синтез, структура, редокс-свойства и ЭПР исследование комплекса [Bu4N]2Fe2(n-S203)2(N0)4 / О. А. Ракова, Н. А. Санина, Г. В. Шилов, В. В, Стрелец, А. В. Куликов, С. М. Алдошин// Коорд. хим.- 2001,- Т.27,- № 9.- С. 698-704.

5. Rakova О.А. Novel "Roussin esters" [Fe2(n2-SR)2(NO)4] as NO donors: synthesis, structural and spectroscopic characterization/ O. A. Rakova, N. A. Sanina, Yu. M. Shulga, A. V. Kulikov, S. M. Aldoshin //J. Inorg. Biochem.-2001.- V.85.-P.390.

6. Ракова О. А. Выделение закиси азота при УФ-облучении биядерных серусодержащих нитрозильных комплексов железа/ О. А. Ракова, Н. А. Санииа, Ю. М. Шульга, В. М. Мартыненко, Н. С. Ованесян, С. М. Алдошин //ДАН,- 2002.Т. 383,- №3.- С. 350-353.

7. Ракова О.А. Новый NO донор: синтез, структура и некоторые свойства комплекса [Fe2(|i-SC5H4N)2(NO)4]/ О. А. Ракова, Н. А. Санина, Г. В. Шилов, Ю. М. Шульга, В. М. Мартыненко, Н. С. Ованесян, С. М. Алдошин. // Коорд. хим,-

2002,- Т. 28.- №5.- С. 364-369.

8. Rakova О.А. Synthesis and characterization of potential NO donors:novel iron-sulfur nitrosyls containing the //-N-C-S skeleton / O.A. Rakova, N.A. Sanina, S.M. Aldoshin, N.A. Goncharova, G.V.Shilov, Yu.M.Shulga, N.S. Ovanesyan // Inorg. Chem. Comm.- 2003,- №6,- P.145-148.

9. Аддошин С. М. Новый класс нейтральных парамагнитных биядерных нитрозильных серосодержащих комплексов железа/ С. М. Алдошин, Н. А. Санина, О. А. Ракова, Г. В. Шилов, А. В Куликов, Ю. М. Шульга, Н. С. Ованесян // Изв. АН. Сер. хим.- 2003,- №8,- С.1614-1620.

10. Sanina N.A. Structure of the neutral mononuclear dinitrosyl iron complex with 1,2,4-triazole-3-thione [Fe(SC2H3N3)(SC2H2N3)(NO)2]-0.5 H20/ N.A. Sanina, O.A. Rakova, S.M. Aldoshin, G.V.Shilov, Yu.M. Shulga, A.V. Kulikov, N.S. Ovanesyan// Mend.Comm.- 2004,- №1,- P.9-10.

11. Shestakov A.F. Theoretical Analysis of the Mechanism of nitrous oxide release upon the UV-irradiation of binuclear sulfur-containing nitrosyl iron complexes/ A.F. Shestakov, S.M. Aldoshin, N.A. Sanina, Yu. M. Shul'ga //Mend.Comm.-2004.- №1,-C.7-8.

12. Васильева C.B. Трансдукция генетического сигнала нитрозильными комплексами железа/ С.В. Васильева, Е.Ю. Мошковская, Н.А. Санина, С.М. Алдошин, Ванин А.Ф.// Биохимия,- 2004.-Т. 69,- №8.- С. 1088-1095.

13. Санина Н.А. Синтез, строение и свойства моделей нитрозильных [2Fe-2S], [lFe-2S] протеинов и перспективы применения их в биологии и медицине / Н.А. Санина, С.М. Алдошин//Росс. хим. Журн.-2004.-Т.48,- №4,- С.12-19.

14. Санина Н.А. Функциональные модели нитрозильных [Fe-S] протеинов/ Н.А. Санина, С.М. Алдошин//Изв.АН.Сер.хим,- 2004,- № П.- С. 2326-2345.

15. Санина Н.А. Синтез, структура и твердофазные превращения нитрозильного комплекса железа Na2[Fe2(S203)2(N0)4]-4H20/ Н.А. Санина, С.М. Алдошин, Т.Н. Руднева, Н.И. Головина, Г.В. Шилов, Ю.М. Шульга, В.М. Мартыненко, Н.С. Ованесян// Коорд. хим.-2005.- Т.31,- №5,- С.301-306.

16. Sanina N.A. Bi-Nuclear nitrosyl iron complex with 2-mercaptoimidasolyl: synthesis, structure and magnetic properties/ N.A. Sanina, S.M. Aldoshin , T.N. Rudneva , N.I. Golovina , G.V. Shilov, Y.M. Shul'ga, N.S. Ovanesyan, V.N. Ikorskii, V.I. Ovcharenko// J.Mol.Structure.- 2005,- V.752.- №l-3.-P. 110-114.

17. Васильева С.В. Формирование динитрозильного комплекса железа -необходимый этап в реализации генетической активности Na2[Fe2(S203)2(N0)4]/ С.В. Васильева, Е.Ю. Мошковская, Н.А. Санина, Т.Н. Руднева, А.В. Куликов,

C.М. Алдошин //ДАН,- 2005.- Т.402.- №5,- С.705-708.

18. Санина Н.А. Синтез, структура и твердофазные превращения нитрозильного комплекса железа Na2[Fe2(S203)2(N0)4] 4Н20 / Н.А. Санина, С.М. АЛДОШ1Ш, Т.Н. Руднева, Н.И. Головина, Г.В. Шилов, Ю.М. Шульга, В.М. Мартыненко, Н.С. Ованесян // Коорд. хим. - 2005. - Том 31. - № 5. - С.323-328.

19. Sanina N.A. Influence of СНЗ group in l-methil-imidazole-2-yl on the properties of binuclear sulfure-nitrosyl iron complex with the ligand of ц-N-C-S type/ N.A. Sanina, T.N. Rudneva, S.M. Aldoshin, G.V. Shilov, D.V. Korchagin, Yu.M. Shul'ga, V.M. Martinenko, N.S. Ovanesyan//Inorg. Chim. Acta.- 2006.- V.359.- №2.- P.570-576.

20. Жукова О.С. Цитотоксический эффект нитрозильных комплексов железа на опухолевые клетки человека in vitro/ О.С. Жукова, Н.А. Санина, JI.B. Фетисова, Г.К. Герасимова//Росс. биотер. Журн.- 2006.- Т.5.- № 1,- Р. 14.

21. Васильева С.В. Генетическая активность NO-содержащих соединений определяется комплексообразованием N0 с клеточным железом / С.В. Васильева, Е.Ю. Мошковская, А.С. Терехов, Н.А. Санина, С.М. Алдошин // Генетика. - 2006. - Том 42. - №7. - Р.904-911.

22. Шестаков А.Ф. Экспериментальное и теоретическое исследование строения и ИК-спектров нейтральных диамагнитных биядерных нитрозильных комплексов железа [Fe2(|i-SC6_nH5.nNn)2(NO)4], n=0, 1, 2/ А.Ф. Шестаков, Ю.Н. Шульга, Н.С. Емельянова, Н.А. Санина, С.М. Алдошин // Изв. АН. Сер. Хим.- 2006,- №12.- С. 2053-2062.

23. Vanin A.F. Dinitrosyl-iron complexes with thiol-containing ligands:Spatial and electronic structures /A.F.Vanin, N.A. Sanina, V.A. Serezhenkov,

D.Sh.Burbaev, V.I. Lozinsky and S. M. Aldoshin //Nitric oxide: biology & chemistry.- 2007,- №16,- P.82-93.

24. Sanina N.A. Reactions of sulfur-nitrosyl iron complexes of "g=2.03" family with hemoglobin (Hb): kinetics ofHb-NO formation in aqueous solutions/N.A. Sanina, L.A. Syrtsova, N.I. Shkondina, T.N. Rudneva, E.S. Malkova, T.A. Bazanov, A.I. Kotel'nikov, S.M. AIdoshin//Nitric oxide: biology & chemistry.- 2007,- №16.- P. 181188.

25. Timoshin A. A. Protein-bound dinitrosyl-iron complexes in blood of rabbit added with a low-molecular dinitrosyl-iron complex: EPR studies/ A.A. Timoshin, A.F. Vanin, Ts.R. Orlova, N.A. Sanina, E.K. Ruuge, S.M. Aldoshin, E.I. Chazov, //Nitric oxide: biology & chemistry.- №16,- 2007.- P.286-293.

26. Тимошин A.A. Динитрозильные комплексы железа - новый тип гипотензивных препаратов/ А.А. Тимошин, Ц.Р. Орлова, А.Ф. Ванин, Н.А. Санина, Э.К. Рууге, С.М. Алдошин, Е.И. Чазов //Росс. хим. Журн,- 2007,- T.LI.-№1.- С.88-92.

27. Васильева С.В. Формирование двунитевых разрывов ДНК в лейкоцитах крови мышей при обработке клеток нитрозильными комплексами железа / С.В. Васильева, А.Н. Осипов, Н.А. Санина, С.М. Алдошин//ДАН,- 2007,- Т. 414.- №2,-С. 259-262.

28. Санина Н.А. Синтез, строение и NO-донорная активность парамагнитного комплекса [Fe2(SC3H5N2)2(NO)4] как модели нитрозильных [2Fe-2S] белков/ Н.А. Санина, Т.Н. Руднева, С. М. Алдошин, А. Н. Чехлов, Р. Б. Моргунов, Е. В. Курганова, Н. С. Ованесян // Изв.АН.Сер. хим.- 2007,- № 1.- С. 28-34.

29. Санина Н.А. Стабилизация гемоглобином тетранитрозильного биядерного комплекса железа с пиридин-2-тиолилом в водных растворах/Н.А. Санина, JI.A. Сырцова, Н.И. Шкондина, Е.С. Малкова, А.И. Котельников, С.М. Алдошин//Изв. РАН. Сер. хим. -2007. - № 4. - Стр. 732-736.

30. Шестаков А.Ф. Теоретическое изучение строения, электронной структуры и ИК-спектров моноядерного динитрозильного комплекса железа [Fe(SC2H3N3)(SC2H2N3)(NO)2] / А.Ф. Шестаков, Ю.М. Шульга, Н.С. Емельянова, Н.А. Санина, С.М. Алдошин //Изв. РАН. Сер. хим. -2007. - № 7. - Стр. 1244-1252.

31. Aldoshin S. M. Precision X-ray study of mononuclear dinitrosyl iron complex [Fe(SC2H3N3)(SC2H2N3)(NO)2]-0.5H20 at low temperatures/ S. M. Aldoshin, K. A. Lysenko, M. Yu. Antipin, N. A. Sanina, V. V. Gritsenko //J. Mol. Structure.- 2008,-V.875.- P.309-315.

32. Санина H.A. Противоопухолевая активность нитрозильных комплексов железа- нового класса доноров монооксида азота// Н.А. Санина, О.С. Жукова, З.С. Смирнова, Л.М. Борисова, М.П. Киселева, С.М. Алдошин //Росс.биотер. журн.-2008,- №1,- С.52.

33. Sanina N. Nitrosyl iron complexes with azageterocyclic thiolyl ligands:synthesis, structure and properties new NO-donors/' N. Sanina //Nitric oxide: biology & chemistry.-2008,-№19.- S.43.

34. Roudneva T. Stabilization of tetranitrosyl thiosulfate iron complex by albumin/ T. Roudneva, N. Sanina, D. Mischenko, E. Frog, R. Kotel'nikova, S. Aldoshin//Nitric oxide: biology & chemistry.- 2008,- №19, S.43.

35. Sanina N. Structure and Properties of Binuclear Nitrosyl Iron Complex with Benzimidazole-2-Thiolyl / N. Sanina, T. Roudneva, G. Shilov, R. Morgunov, N. Ovanesyan, S. Aldoshin// Dalt. Trans.-2009.- P.1703-1706.

36. Санина H.A. Формирование моноядерных нитрозильных интермедиатов при гидролизе - донора монооксида азота Na2[Fe2(|i-S203)2(N0)4]-4H20/ Н.А. Санина, И.В. Сулименков, Т.Н.Руднева, С.М. Алдошин// ДАН,- 2009,- Т.425,-№2,- С.187-191.

37. Сырцова JI.A. Образование S-нитрозотиолов при взаимодействии различных форм гемоглобина с (тетракитрозил)бис(пиримидин-2-илтио)дижелезом/ J1.A. Сырцова, Н.А. Санина, Н.И. Шкондина, Е.С. Чудинова, Н.С. Емельянова, А.И. Котельников, С.М. Алдошин// Изв. АН. Сер.хим,- 2009,- №1.-С. 64-70.

38. Shestakov A.F. Experimental and theoretical study of the arrangement, electronic structure and properties of neutral paramagnetic binuclear nitrosyl iron complexes with azaheterocyclic thyolyls having "S-C-N type" coordination of bridging ligands/ A.F. Shestakov, Yu.M. Shul'ga, N. S. Emel'yanova, N.A. Sanina, T.N. Roudneva, S.M.

Aldoshin, V.N. Ikorskii, V.l. Ovcharenkö// Inorg. Chim.Acta.- 2009,- V.362.- P.2499-2504.

39. Санина H.A. Противоопухолевая активность нитрозильных комплексов железа - новых доноров оксида азота/ H.A. Санина, Т.Н.Руднева, И.В. Сулименков, Н.П. Коновалова, Т.Е.Сашенкова, С.М. Алдошин//Росс. хим. Журн,-

• 2009.- Т. LIIL- №1,- С.164-171.

40. Васильева C.B. Сенсибилизация оксидом азота клеток E.Coli к УФ-излучению в условиях гипоксии/ С.В.Васильева, Е.Ю. Мошковская, Д.А. Стрельцова, Н.В. Андреева, H.A. Санина, Т.Н. Руднева, С.М. Алдошин// ДАН.-2009.-Т.425,-№5, с.701-704.

41. Санина H.A. Закономерности в стабилизации гемоглобином биядерных комплексов железа [Fe2(n-N-C-SR)2(NO)4], с К=бензпроизводными имидазола и тиазола в водных растворах/ H.A. Санина, JI.A. Сырцова, Е.С. Чудинова, Н.И. Шкондина, Т.Н. Руднева, А.И. Котельников, С.М. Алдошин // Изв.АН.Сер. хим,-2009,- №3.- С.554-559.

42. Санина H.A. Строение биядерного тетранитрозильного комплекса железа с пиримидин-2-илом "H2-S типа" и влияние pH на его NO-донирующую способность в водных растворах / H.A. Санина, Г.В. Шилов, С.М. Алдошин, А.Ф. Шестаков, JI.A. Сырцова, Н.С. Ованесян, Е.С.Чудинова, Н.И. Шкондина, Н.С. Емельянова, А.И. Котельников// Изв.АН.Сер. хим.- 2009.- №3.- С. 560-571.

43. Татьяненко Л.В. Влияние нитрозильных железо-серных комплексов на активность гидролитических ферментов/ JI.B. Татьяненко, А.И.Котельников, О.В. Доброхотова, Е.А. Саратовских, Руднева Т.Н., H.A. Санина, С.М. Адцошин// Химико-фарм. журн.- 2009,- Т.43, №9.- С.45-49.

44. Rudneva T.N. Synthesis and structure of water-soluble nitrosyl iron complex with cysteinamine iigand [Fe2(S(CH)2NH3)2(N0)4]S04 ■ 2.5H20 / T.N. Rudneva, N.A. Sanina, K.A. Lysenko, S.M. Aldoshin, M.Y. Antipin, N.S. Ovanesyan // Mend.Comm.-2009.-V.19.- P. 253-255.

45. Санина H.A. Строение и свойства //г5'-[Бис(фенилтиолато)тетра нитрозил дижелеза]/ H.A. Санина, Н.С. Емельянова, А.Н.Чехлов, А.Ф. Шестаков, И.В. Сулименков, С.М. Алдошин // Изв.АН.Сер. хим.- 2010,- №6.- С.1104-1114.

46. Санина H.A. Взаимодействие феррицитохрома С с нитрозильным комплексом железа {Fe2[S(CH2)2NH3]2(N0)4}S04 • 2,5Н20/ H.A. Санина, JI.A. Сырцова, Н.И. Шкондина, Т.Н. Руднева, А.И. Котельников, С.М. Алдошин // Изв.АН.Сер. ХИМ.-2010.- №8,- С.1528-1534.

47. Санина H.A. Строение бис(1-метил-тетразол-5-тиолат)тетранитрозил дижелеза и его интермедиатов в растворах/ H.A. Санина, Д.В. Корчагин, Г.В. Шилов, A.B. Куликов, А.Ф. Шестаков, И.В. Сулименков, С.М. Алдошин// Коорд. Хим.- 2010,- Т.36,- №12,- С.888-898.

Заявки на изобретения:

1. Санина H.A. Биядерные нитрозильные комплексы железа с бензазагетероциклическими производными, способ их получения, донор монооксида азота, фармацевтическая композиция, содержащая их и их применение в качестве противоопухолевых лекарственных средств/ H.A. Санина, О.С. Жукова, З.С. Смирнова, Т.Н. Руднева, Г.В. Шилов, С.М. Алдошин//-№ PCT/RU2007/000286 от 30.05.2007.

2. Санина H.A. Применение тетранитрозильного комплекса железа с тиофенолом в качестве противоопухолевого лекарственного средства и фармацевтические композиции и наборы, содержащий этот комплекс/ H.A. Санина, О.С. Жукова, С.М. Алдошин, Н.С. Емельянова, Г.К. Герасимова// - № PCT/RU2007000285 от 30.05.2007.

3. Санина H.A. Водорастворимые биядерные катионные нитрозильные комплексы железа с природными алифатическими тиолилами, обладающие цитотоксической, апоптотической и NO-донорной активностью/ H.A. Санина, Т.Н. Руднева, К.А. Лысенко, О.С. Жукова, Н.С. Емельянова, С.М. Алдошин// - № PCT/RU2008/000338 от 02.06.2008;

4. Санина H.A. Применение биядерного сера-нитрозильного комплекса железа катионного типа в качестве вазодилататорного лекарственного средства/ Санина H.A., Серебрякова Л.И., Шульженко B.C., Писаренко О.И., Руднева Т.Н., Алдошин С.М.//-№ 2010112814 от 05.04.2010.

5. Санина H.A. Применение биядерного сера-нитрозильного комплекса железа анионного типа в качестве вазодилататорного лекарственного средства/ Санина H.A., Серебрякова Л.И., Шульженко B.C., Писаренко О.И., Руднева Т.Н., Алдошин С.М.// - № 2010112813 от 05.04.2010.

Сдано в печать 25.10.10. Подписано в печать 17.11.10. Формат 60x90 1/16 Объем 2,75 п.л. Заказ 291. Тираж 100

Отпечатано в типографии ИПХФ РАН 142432, Московская обл., г. Черноголовка, пр-т ак. Семенова, 5 Тел.: 8(49652)2-19-38

Введение

Глава 1. 1.1. 1.2. 1.3.

1.3.1.

1.3.2.

Глава 2. 2.1.

Глава 3.

3.2.1.

3.2.2.

Литературный обзор.

Физиологическое значение моноксида азота (N0) и его форм. Химическая биология N0. Экзогенные доноры N0. Основные классы органических и неорганических экзогенных 72 доноров N0.

Железо-сера-нитрозильные комплексы - перспективные доноры 74 N0.

Экспериментальная часть.

Синтез нитрозильных комплексов железа с серосодержащими функциональными лигандами.

Физико-химические методы исследования нитрозильных комплексов железа с серосодержащими функциональными 97 лигандами.

Экспериментальное и теоретическое исследование строения нитрозильных комплексов железа с функциональными 117 серосодержащими лигандами.

Синтез нитрозильных комплексов железа с серосодержащими функциональными лигандами.

Рентгеноструктурное исследование сера-нитрозильных 123 комплексов железа

Молекулярное и кристаллическое строение анионных нитрозильных комплексов железа.

Молекулярное и кристаллическое строение нейтральных биядерных нитрозильных комплексов железа с ароматическими серосодержащими лигандами ((1-8 тип).

3.2.3. Молекулярное и кристаллическое строение нейтральных биядерных нитрозильных комплексов железа с азагетероциклическими серосодержащими лигандами (ц-]М-С-8 134 тип).

3.2.3.1. Молекулярное и кристаллическое строение моноядерного нитрозильного комплекса железа с 3-меркапто-1,2,4-триазол- 134 илом.

3.2.3.2. Молекулярное и кристаллическое строение биядерных нитрозильных комплексов железа с азагетероциклическими 139 серосодержащими лигандами.

3.2.4. Молекулярное и кристаллическое строение катионных сера-нитрозильных комплексов железа типа.

3.3. Теоретическое исследование нитрозильных комплексов железа с функциональными 8-лигандами.

3.4. Спектроскопия нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами.

3.4.1 ИК-спектроскопия нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами.

3.4.2. ЯГР-спектроскопия нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами.

Глава 4. Исследование физико-химических свойств нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами в твердой фазе и в растворах.

4.1. Магнитные свойства биядерных нитрозильных комплексов железа {¿-N-0-8 типа.

4.2. Масс-спектроскопия газовой фазы при разложении поликристаллов нитрозильных комплексов железа с

Глава 5.

5.2.1.

5.2.2.

Глава 6. 6.1.

6.1.1.

6.1.2.

6.1.3.

6.2.1. функциональными серосодержащими лигандами.

ЭПР и масс-спектроскопия растворов нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами.

NO-донорная активность нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами.

Электро-химическое определение NO, генерируемого нитрозильными комплексами железа в растворах.

Реакции нитрозильных комплексов железа с гемовыми белками. 245 Реакции нитрозильных комплексов железа с гемоглобином.

Образование S-нитрозотиолов при взаимодействии различных форм гемоглобина с нитрозильными комплексами железа.

Биологическая активность нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами.

Исследование кардиотропной активности анионных и катионных нитрозильных комплексов железа с использованием моделей ишемического и реперфузионного повреждения миокарда in vitro и in vivo

Действие нитрозильных комплексов железа на аортальное давление изолированного сердца крысы.

Действие анионного нитрозильного комплекса железа с тиосульфатом на коронарную, сократительную и насосную функцию изолированного сердца крысы.

Влияние катионного комплекса железа с пеницилламином на артериальное давление у крыс in vivo.

Исследование противоопухолевой активности нитрозильных комплексов железа in vitro и in vivo.

Изучение цитотоксической активности нитрозильных комплексов железа на опухолевых клетках человека.

6.2.2. Исследование механизмов противоопухолевой активности НКЖ на опухолевых клетках человека.

6.2.3. , Испытания противоопухолевой активности нитрозильных комплексов железа in vivo.

Выводы.

Одним из значительных достижений науки последних десятилетий, привлекшим большое внимание исследователей в области химии, биологии и медицины, явилось открытие монооксида азота (NO) как важнейшего полифункционального регулятора многообразных физиологических процессов in vivo, включая нейротрансмиссию, регуляцию иммунной системы, регуляцию кровяного давления, релаксацию гладких мышц, агрегацию тромбоцитов и цитоксическое действие макрофагов. Активный поиск и исследование новых классов соединений, способных генерировать оксид азота, необходимы для выявления эффектов воздействия NO, фундаментального исследования механизмов действия N0 и его производных - высокореакционноспособных нитрозильных клеточных интермедиатов и разработки терапевтических стратегий в лечении социально-значимых заболеваний.

Актуальность проблемы. Анализ литературных данных показывает, что нитрозильные комплексы железа с серосодержащими лигандами представляют особый интерес. Эти соединения образуются в клетках живых организмов : бактерий, растений и млекопитающих, в результате воздействия эндогенно образованного NO как продукта различных N0 синтаз, на активные центры не гемовых железо-серных белков. Вместе с нитрозотиолами, нитрозильные комплексы железа с серосодержащими лигандами являются единственно возможными формами биорезервуаров N0 in vivo. Однако, в отличие от нитрозотиолов, строение и свойства нитрозильные комплексы железа с серосодержащими лигандами мало изучено, что связано, в основном, с экспериментальными трудностями по их выделению в кристаллическом состоянии.

Таким образом, поиск и исследование свойств новых серосодержащих нитрозильных комплексов железа является актуальной задачей, открывающей возможности исследования механизмов реакций NO и его высокореакционных интермедиатов in vivo. Одновременно открываются перспективы создания новых NO-доноров с заданными биологическими свойствами, которые могут способствовать усилению эффекта, производимого полифункциональным регулятором-мессенджером - NO, а следовательно, будут более эффективными препаратами для лечения различных патологий.

Исследованиями в области молекулярной кардиологии, например, показано, что недостаток образования NO приводит к развитию эндотелиальной дисфункции, вызывает повышение тонуса коронарных сосудов, увеличение агрегационной и адгезивной способности тромбоцитов. При ишемическом и реперфузионном повреждении сердца это способствует ухудшению кровотока и гибели кардиомиоцитов. NO доноры - органические нитраты и нитропруссид обладают рядом недостатков и побочных действий: i) нитратной толерантностьюи цианидным отравлением, ii) необходимостью дополнительной активации (термо-, фото- или ферментативной), что ограничивает их широкое применение.

Применение NO доноров как нового класса противоопухолевых агентов связано с важной ролью NO в процессе возникновения и развития злокачественных образований: NO изменяет уровень апоптоза опухолевых клеток, активность гена р53 и неоангиогенез, подавляет активность ключевого белка репарации 06-метил-гуанин-ДНК-метил-трансферазы млекопитающих и др. Известные синтетические NO-доноры (органические нитраты, диазониумдиолаты, нитрозотиолы и др.) применяются для усиления действия существующих химиотерапевтических средств или радиотерапии, то есть, в качестве хемосенсибилизаторов.

Таким образом, актуальность исследований по поиску и созданию новых классов доноров N0 не вызывает сомнений и является важной задачей как с фундаментальной, так и с практической точек зрения.

Цель диссертационной работы - разработка фундаментальных основ создания нового класса доноров монооксида азота - нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандам-структурных аналогов активных центров не гемовых железо-серных белков; исследование их строения, реакционной способности и фармакологической активности in vitro и in vivo для изучения механизмов действия NO его интермедиатов и создания лекарственных препаратов нового поколения для лечения социально-значимых заболеваний. Основными задачами работы являются:

• Разработка удобных общих методов синтеза нитрозильных комплексов железа с серосодержащими функциональными лигандами;

• Экспериментальное исследование молекулярного и кристаллического строения синтезированных кристаллов комплексов методами рентгеноструктурного анализа;

• Теоретическое исследование строения нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами методами функционала плотности - метода B3LYP с использованием 6-31G* базиса и метода РВЕ с использованием расширенного базиса для псевдопотенциала SBK;

• Изучение физико-химических свойств нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами в твердой фазе и в растворах методами ЯГР-, ИК-, ЭПР-, масс-спектроскопии и магнетометрии;

• Исследование NO-донорной активности нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами в растворах методами амперометрии и спектрофотометрии в реакциях с гемовыми белками;

• Изучение биологической (кардиопротекторной и противоопухолевой) активности / нитрозильных комплексов железа с функциональными серосодержащими лигандами на культурах клеток и экспериментальных моделях животных. Научная новизна.

• Впервые систематически исследованы реакции координации атома железа Ре(КО)2 фрагмента 8-функциональными азагетероциклическими тиолами ряда триазола, тетразола, пиридина, пиримидина, имидазола и его бензпроизводных, а также алифатическими тиоаминами природного происхождения; разработаны удобные методы получения нитрозильных [1Бе-28] и [2Бе-28] комплексов в кристаллической форме;

• Впервые детально изучено молекулярное, кристаллическое и электронное строение синтезированных нитрозильных комплексов железа различных 'структурных типов, а также природа связей в фрагменте {82Ре(МО)2}, что позволяет прогнозировать реакционную способность полученных соединений и предложить синтетические подходы к дизайну новых структур;

• Впервые установлено, что биядерные тетранитрозильные комплексы железа в протонных средах генерируют N0 без дополнительной активации и образуют моноядерные динитрозильные тиолсодержащие интермедиаты -структурные и спектроскопические аналоги эндогенных динитрозильных комплексов железа с 8-лигандами.

• Определены количественные показатели "МО-донирования синтезированных соединений в зависимости от концентрации используемого донора, температуры, рН среды в аэробных и анаэробных условиях электрохимическим методом. Изучены пути отрыва N0 групп в синтезированных нитрозильных комплексах железа методами квантовой химии с сопоставлением полученных данных с экспериментальными масс-спектральными данными продуктов их разложения в растворах, предложен механизм генерации NO.

• Исследованы некоторые механизмы цитотоксического действия выявленных книтрозильных комплексов железа на опухолевых клетках человека в культуре (индукция апоптоза, экспрессия алкилгуанинтрансферазы).

Практическая значимость и реализация результатов работы.

• Созданы опытные образцы нового класса устойчивых кристаллических доноров монооксида азота для биологических и медицинских применений.

• На моделях ишемического и реперфузионного повреждения миокарда in vitro и in vivo" исследованы кардиопротекторные свойства анионных и катионных [2Fe-2S] нитрозильных комплексов железа, способных предотвращать повышение тонуса коронарных сосудов и корректировать метаболизм ишемизированного сердца. Вазодилатационное (сосудорасширяющее) действие новых доноров NO отчетливо проявлялось на модели изолированного перфузируемого сердца крыс дозо-зависимым снижением аортального давления и у наркотизированных крыс in vivo при внутривенном введении комплексов. Результаты исследований стали основой разработки прототипов оригинальных лекарственных средств, обладающих гипотензивными свойствами и снижающих ишемические и реперфузионные повреждения миокарда.

• Исследована дифференциальная чувствительность опухолевых клеток человека различного генеза (8 линий: эритробластный миелолейкоз, карцинома толстой кишки LS174T К562, карцинома яичника SKOV3, карцинома молочной железы SKBR3, карцинома предстательной железы РСЗ, карцинома предстательной железы DU 14, иммортализованные клетки почки А293, карцинома легкого А-549) к нитрозильным комплексам железа различных структурных типов для разработки модельной системы скрининга противоопухолевых препаратов - доноров NO;

• Изучена противоопухолевая активность нитрозильных комплексов железа различных структурных типов на перевиваемых опухолях мышей: меланоме В-16, эпидермоидной карциноме легкого Льюис, аденокарциноме молочной железы Са-755 и лимфоцитарной лейкемии Р-388 . Выявлен высокий противоопухолевый эффект нитрозильного комплекса с цистеамином на Са-755: противоопухолевый эффект наблюдался в течение 9 дней после ежедневного внутрибрюшинного введения в течение 5-ти дней: ТРО=71-76-63-64% и УПЖ = 66%; на LLC был выявлен терапевтический эффект с 1-го по 10-й день после окончания лечения: ТРО = 86-67-61%, УПЖ = 7%.

Апробация работы. Основные результаты работы докладывались и обсуждались на следующих симпозиумах и конференциях: 3-ем Международном INTAS симпозиуме (Москва, 2001), XXXV-ой Конференции по координационной химии (Хейдельберг 2002), 2ой (Прага, 2002.), 5-ой (Брегенц, 2007) и 6-ой (Киото, 2010) Международных Конференциях "Биология, химия и терапевтические применения Оксида Азота" ; ХХ-ой (Ростов-на Дону,2001), XXI (Киев, 2003), ХХЩКишинев, 2005), ХХШ(Одесса,2007) и ХХ1У(Санкт-Петербург,2009) Международных Чугаевских конференциях по координационной химии; XVTI-OM (Казань, 2003) и XVIII-ом (Москва 2007) Менделеевских съездах по общей и прикладной химии; 4-ой национальной научно-практической конференции, "Активные формы кислорода, оксид азота и здоровье человека (Смоленск, 2005); Национальной кристаллохимической конференции,

Черноголовка, 2006); 1-ом (Будапешт, 2006) и 2-ом (Турин, 2008) Европейских химических Конгрессах; Российском Национальном Конгрессе Кардиологов ( Москва 2007); IV Московском Международном Конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2007); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва, 2007); 1-ом Турецко-Российском Совещании по Органической и Медицинской химии. (Анталья, 2009).

Дипломы и медали. ДИПЛОМ Четвертого Московского международного конгресса «БИОТЕХНОЛОГИЯ: СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ» Международная специализированная выставка «МИР БИОТЕХНОЛОГИИ'2007» за разработку «Модели нитрозильных |Те-8] белков — новый класс противоопухолевых соединений» II степень 2007г.; ДИПЛОМ X Международного салона промышленной собственности «АРХИМЕД-2007»; ЗОЛОТАЯ МЕДАЛЬ за изобретение «Новые доноры монооксида азота на основе сера-нитрозильных комплексов железа для биологии и медицины» 2007г.; Москва; ДИПЛОМ XI Международного салона промышленной собственности «АРХИМЕД-2008» ЗОЛОТАЯ МЕДАЛЬ за изобретение «Нитрозильные комплексы железа как основа лекарственных препаратов нового поколения для лечения онкологических заболеваний» 2008г.; Москва; БРОНЗОВАЯ МЕДАЛЬ VIII Московского международного салона инноваций и инвестиций за разработку «Модели нитрозильных [Бе-Б] белков - новый класс противоопухолевых соединений» 2008г.; ДИПЛОМ XII Международного салона промышленной собственности «АРХИМЕД-2009» и Специальный приз «Лучшее изобретение в интересах защиты и спасения человека» за разработку «Новое семейство противоопухолевых агентов для монотерапии онкологических заболеваний» 2009г., Москва.

Результаты диссертации опубликованы в 47 научных статьях в отечественных и зарубежных журналах, в 5 заявках на изобретение и 78 тезисах докладов на научных конференциях.

Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (гранты 99-03-32484, 02-03-33344, 04-03-08108, 06-03-32381, 09-03-12036), Совета по грантам Президента Российской федерации (программа поддержки ведущих научных школ, грант № НШ-4525.2006.3) и Программ Президиума РАН "Фундаментальные науки — медицине" 20062010 гг.

ВЫВОДЫ:

1. Создан новый класс соединений - доноров NO - синтетических моделей активных центров нитрозильных [2Fe-2S] и [lFe-2S] белков. Впервые выделены в кристаллическом состоянии и исследованы нитрозильные комплексы железа с функциональными S-лигандами: алифатическими и азагетероциклические тиолилами - аналогами природных тиоаминов, гистидинов, пиридиновых и пуриновых оснований ДНК.

2. Методами РСА, ИК- и Мессбауэровской спектроскопии впервые определено молекулярное и кристаллическое строение синтезированных соединений различных структурных типов. Установлено, что атомы железа в комплексах находятся в тетраэдрической координации и связаны друг с другом посредством мостика S или N-C-S функционального лиганда. Показано, что S-лиганды в реакциях комплексования железа в присутствии NO координируют атом металла в форме тиола. Прецизионные PC исследования показали идентичность Fe-S связей, которые могут быть описаны как межатомные взаимодействия "реак-реак"типа, а связи Fe-NO -как взаимодействия "peak-hole" типа.

3. Впервые методами функционала плотности B3LYP и РВЕ рассчитаны геометрические и электронные структуры нейтральных нитрозильных комплексов железа в различных изомерных состояниях. Установлено, что координация лиганда по ji-N-C-S типу является энергетически предпочтительной по сравнению с координацией по ji-S типу. Вследствие этого реализуется большие расстояния Fe.Fe, при которых величина внутримолекулярного обменного взаимодействия оказывается незначительной, и при комнатной температуре комплексы оказываются парамагнитными с эффективным магнитным моментом ~2.5В.М. Обменное взаимодействие спинов атомов Fe носит антиферромагнитный характер. Для комплексов (i-S типа основное состояние системы является диамагнитным. Установлено также, что группа NO в синтезированных комплексах несет небольшой отрицательный заряд, сосредоточенный, на атоме О, а связь Fe-NO следует рассматривать как гомеополярную. Электронная конфигурация Fe(NO)2 узла с одним неспаренным электроном в комплексах образуется при связывании спина 3/2 центра Fe+d7 с противоположно ориентированными спинами 1/2 двух N0 групп.

4. Методом электрохимического анализа водных растворов нитрозильных комплексов железа установлено, что синтезированные соединения генерируют NO в протонных средах без дополнительной активации. Количество NO и скорость его генерации значительно (на порядок) превышает таковые для NO-атов. Предложен механизм отрыва NO-групп в нитрозильных комплексах железа в условиях гидролитической деструкции. Методами ЭПР и масс-спектрального анализа установлено строение моноядерных динитрозильных комплексов железа и других реакционно-способных интермедиатов, образующихся при разложении комплексов в протонных растворителях.

5. Исследованы реакции гемовых белков с синтезированными комплексами в водных растворах. Установлено, что эффективные константы скоростей реакций первого порядка на 2-3 порядка выше, чем таковые у NO-доноров сравнения. Обнаружена взаимосвязь строения комплексов с эффектом стабилизации их гемоглобином, который объясняется различной основностью S-лигандов в исследуемых соединениях.

6. Впервые обнаружена кардиотропная активность нитрозильных комплексов железа анионного и катионного структурных типов на моделях ишемического и реперфузионного повреждения миокарда in vitro и in vivo. Установлено более эффективное влияние исследуемых соединений на вазорелаксацию, чем у NO-доноров сравнения нитроглицерина и нитропруссида натрия.

7. Впервые установлена дифференциальная чувствительность 9 линий опухолевых клеток человека различного генеза к нитрозильным комплексам железа различных структурных типов. Показано, что комплексы проявили способность индуцировать апоптоз в опухолевых клетках человека линий К562 и LS174T. Установлены зависимости количества опухолевых клеток в апоптозе от концентрации комплекса-индуктора.

8. Впервые изучена противоопухолевая активность 4-х нитрозильных комплексов железа различных структурных типов на перевиваемых опухолях мышей: меланоме В-16, эпидермоидной карциноме легкого Льюис (LLC), аденокарциноме молочной железы Са-755 и лимфоцитарной лейкемии Р-388. Установлено, что соединение CysAm оказывает высокий противоопухолевый эффект, на экспериментальных моделях Са-755 и LLC и предложено для проведения детальнейших предклинических исследований.

1. J.A. McCleverty, Chemistry of Nitric Oxide Relevant to Biology. Chem. Rev., 2004, 104 (2), pp. 403-418.

2. P.C. Ford, L.E. Laverman. Reaction mechanisms relevant to the formation of iron and ruthenium nitric oxide complexes. Coord.Chem.Rev., 2005, 249, Issues 3-4, 391-403.

3. N.M. Crawford. Mechanisms for nitric oxide synthesis in plants. J.Experim. Botany, 2006, 57(3): 471-478.

4. A.Butler, R. Nicholoson (Eds.), Life, Death and Nitric Oxide, The Royal Society of Chemistry, Cambridge, 2003.

5. L.J. Ignarro (Ed.), Nitric Oxide: Biology and Pathobiology, Academic Press, San Diego, 2000. ,

6. Ding H., Demple B. Direct nitric oxide signal transduction via nitrosylation of iron-sulfur centers in the SoxR transcription activator. Proc.Natl.Acad.Sci.USA,2000, 97(10), 5146-5150.

7. Bogdan C. Nitric oxide and the regulation of gene expression. Trends in Cell Biol.,2001, 11(2), 66-75.

8. Hemish J., Nakaya N., Mittal V., Enikolopov G. Nitric Oxide Activates Diverse Signaling Pathways to Regulate Gene Expression. J.Biol.Chem. (2003) 278, 42321-42329.

9. F. Murad. Discovery of Some of the Biological Effects of Nitric Oxide and Its Role in Cell Signaling (Nobel Lecture). Angew. Chem., Int. Ed. 1999, 38(13-14), 1856-1868.

10. R.F. Furchgott. Endothelium-Derived Relaxing Factor: Discovery, Early Studies, and Identifcation as Nitric Oxide (Nobel Lecture). Angew. Chem., Int. Ed. 1999, 38(13-14), 1870-1880.

11. L J. Ignarro. Nitric Oxide: A Unique Endogenous Signaling Molecule in Vascular Biology (Nobel Lecture). Angew. Chem., Int. Ed. 1999, 38(13-14), 1882-1892.

12. H. Prast, A. Philippu. Nitric oxide as modulator of neuronal function. Prog. Neurobiol. 2001, 64(1), 51-68.

13. J. Zhang, S.H. Snyder, Nitric Oxide in the Nervous System. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1995, 35, 213-233.

14. I. Severina. Role of Soluble Guanylate Cyclase in the Molecular Mechanism Underlying the Physiological Effects of Nitric Oxide. Biochemistry, 1998, 63(7), 794.

15. D.A. Wink and J.B Mitchell, Chemical biology of nitric oxide: insights into regulatory, cytotoxic, and cytoprotective mechanisms of nitric oxide. Free Radical Biology & Medicine, 1998, 25(4), 434-456.

16. P.C. Ford, J. Bourassa, K. Miranda, B. Lee, I. Lorkovic, S. Boggs, S. Kudo and L. Laverman. Photochemistry of metal nitrosyl complexes. Delivery of nitric oxide to biological targets. Coord.Chem.Rev., 1998,171, 185-202.

17. H.W. Schmidt and Ulrich Walter. NO at work. Cell, 1994 (78), 919-925.

18. D.A. Wink, Y. Vodovotz, J. Laval, F. Laval, M.W. Dewhirst, J.B. Mitchell. The multifaceted roles of nitric oxide in cancer. Carcinogenesis, 1998(19), 711-721.

19. A.A. Nedospasov. Competition Involving Biogenic NO. Biochemistry, 1998, 63(7), 744.

20. A.F. Vanin. Dinitrosyl Iron Complexes and S-Nitrosothiols Are Two Possible Forms for Stabilization and Transport of Nitric Oxide in Biological Systems. Biochemistry, 1998, 63(7), 782.

21. I.Yu. Malyshev and E. B. Manukhina. Stress, Adaptation, and Nitric Oxide.

22. Biochemistry, 1998, 63, 7, 840. 22.E.B. Menshikova , N.K. Zenkov, and V.P. Reutov. Nitric Oxide and NO-Synthases in Mammals in Different Functional States. Biochemistry, 2000, 65, 4, 409.

23. K. Szacilowski, A. Chmura, Z. Stasicka. Interplay between iron complexes, nitric oxide and sulfur ligands: structure, (photo) reactivity and biological importance, Coord.Chem.Rev. (2005), 249, pp. 2408-2436.

24. T. Ueno, Y. Suzuki and S. Fujii, A.F. Vanin, T. Yoshimura. In vivo nitric oxide transfer of a physiological NO carrier, dinitrosyl dithiolato iron complex, to target complex. Biochem. Pharmacol, 2002, 63(3), p. 485.

25. R. Butler and I.L. Megson. Non-Heme Iron Nitrosyls in Biology. Chem. Rev., 2002, 102(4), 1155-1166.

26. Simona Costanzo, Stephane Ménage, Roberto Purrello, Raffaele P. Bonomo, Marc Fontecave. Re-examination of the formation of dinitrosyl-iron complexes during reaction of S-nitrosothiols withFe(II). Inorg. Chim. Acta, 2001, 318(1-2), pp. 1-7.

27. Peng George Wang, Ming Xian, Xiaoping Tang, Xuejun Wu, Zhong Wen, Tingwei Cai, and Adam J. Janczuk. Nitric Oxide Donors: Chemical Activities and Biological Applications. Chem. Rev., 2002, 102(4), 1091-1134.

28. Zweier J.L., Wang P., Samuilov A., Kuppusamy P. Reply to "Enzymatic/non-enzymatic formation of nitric oxide". Nat. Med. 1995,1, pp. 1103-1104.

29. E.B. Menshikova, N.K.Zenkov, V.P. Reutov, Nitric Oxide and NO-Synthases in mammals in different functional states, Biochemistry(Moscow),2000 vol.65, No.4, pp.409-426.

30. Kozlov A.V., Staniek K., Nohl H., Nitrite reductase activity is a novel function of mammalian mitochondria. FEBS Lett., vol. 454(iss.l-2), pp. 127-130.

31. V.P.Reutov, Nitric Oxide cycle in mammals and cyclicity principle, Biochemistry (Moscow),2002 vol.67, No.3, pp.293-311.

32. G.M.Tozer, S.A.Everett, Nitric Oxide in Tumour biology and cancer therapy. Part 1, Physiological aspects, Clinical Oncology (1997) 9, 282-293.

33. S.Mocellin, V. Bronte, D.Nitti, Nitric Oxide, a double edged sword in cancer biology: searching for therapeutic opportunities, Medicinal Reserch Reviews (2007) 27, 3,317-352.

34. Ganster R.W., Taylor В.S., Shao L., Geller D.A., Complex regulation of human inducible nitric oxide synthase gene transcription by Stat 1 and NF-kappa B. Proc.Natl.Acad.Sci.USA (2001) 98(15):8638-8643.

35. Prasad S.J., Farrand К J., Matthews S.A., Chang J.H., McHugh R.S., Ronchese F., Dendritic cells loaded with stressed tumor cells elicit long-lasting protective tumor immunity in mice depleted of CD4+CD25+regulatory Tcells, J.Immunol. (2005).174, 90-98.

36. Moore A.C., Gallimore A., Draper S.J., Watkins K.R., Gilbertt S.C., Hill A.V., Anti-CD-25 antibody enhancement of vaccine-induced immunogenicity: Incresed durable cellular immunity with reduced immunodominance, J. Immunol. (2005)175, 7264-7273.

37. Murphy J.R., vanderSpek J.C., Targeting diphtheria toxin to growth factor receptors. Semin Cancer Biol (1995) 6, 6259-6267.

38. В.Г. Гранин, Н.Б. Григорьев. Эндогенные доноры оксида азота (химический аспект). Изв.АН. Сер.хим., 2002, 8, 1268-13'l3.

39. W. Macyk, A. Franke, G. Stochel. Metal compounds and small molecules activation case studies. Coord.Chem.Rev. (2005) 249, 2437-2457.

40. Waldman S.A., Murad F., Cyclic GMP synthesis and function., Pharmacol Rev. (1987), 39, 163-196.

41. Davis K.L., Martin E., Turko I.V., Murad F., Novel effects of nitric oxide. Annu.Rev.Pharmacol. Toxicol, 2001, 41, 203-236.

42. P.A. Brennan, LP. Downie, J.D. Langdon, G.A. Zaki. Emerging role of nitric oxide in cancer. British Journal of Oral and Maxillofacial surgery. (1999), 37, pp. 370-373.

43. H. Ohshima, H. Bartsch. Chronic infections and inflammatory processes as cancer risk factors: possible role of nitric oxide in carcinogenesis. / Mutation Research, 305, (1994), pp. 253-264.

44. V.J.S. Chhatwal, S.M. Moochhala, S.T.F. Chan and S.S. Ngoi. Nitric Oxide and Cancer. / Medical Hypotheses, (1996), 46, pp. 21-24.

45. D.A. Wink, Y. Vodovotz, J.A. Cook, M.C. Krishna, S. Kim, D. Coffin, W. DeGraff, A.M. Deluca, J. Liebmann, and J.B. Mitchell. The Role of Nitric Oxide Chemistry in Cancer Treatment. / Biokhimiya, 1998, vol. 63, 1-13.

46. G.M. Tozer and S.A. Everett. Nitric Oxide in Tumour Biology and Cancer Therapy. Part 2: Therapeutic Implications. / Clinical Oncology (1997), 9, 357364.

47. Kanner J., Harel S., Granit R. Nitric oxide as an antioxidant., Arch.Biochem.Biophys., 1991,289, 130-136.

48. Bohlinger, I.; Leist, M.; Barsig, J.; Uhlig, S.; Tiegs, G.; Wendel, A. Interleukin-1 and nitric oxide protect against tumor necrosis factor alpha-induced liver injury through distinct pathways. Hepatology 1995, 22, 1829-1837.

49. Mannick, J.B., Asano, K., Izumi, K., Kieff, E., Stamler, J.S. Nitric oxide produced by human B Lymphocytes inhibits apoptosis and Epstein-Barr virus reactivation. Cell. 1994; 79, 1137-1146.

50. Genaro, A.M., Hortelano, S., Alvarez, A., Martinez, C., Bosca, L. Splenic B lymphocyte programmed cell death is prevented by nitric oxide release through mechanisms involving sustained Bcl-2 levels. J.Clin.Invest. 1995; 95, pp. 18841890.

51. Le, W.D.; Colom, L.V.; Xie, W.J.; Smith, R.G.; Alexianu, M.;Appel, S.H. Cell death induced by beta-amyloid 1-40 in MES 23.5 hybrid clone: the role of nitric oxide and NMDA-gated channel avtivation leading to apoptosis. Brain Res. 1995; 686, pp. 49-60.

52. Blanco, F.J.; Ochs, R.L.; Schwarz, H.; Lotz, M. Chondrocyte apoptosis induced by nitric oxide. Am J.Pathol. 1995; 146, pp. 75-85.

53. Fehsel, K.; Kroncke, K.D.; Meyer, K.L.; Huber, H.; Wahn, V.; Kolb-Bachofen, V. Nitric oxide induces apoptosis in mouse thymocytes. J.lmmunol. 1995, 155, pp. 2858-2865.

54. Shimaoka, M.; Iida, T.; Ohara, A.; Taenaka, N.; Mashimo, T.; Honda, T.; Yoshiya, I. NOC, a nitric-oxide-releasing compound, induces dose dependent apoptosis in macrophages. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995; 209, pp. 519-526.

55. Messmer, U. K.; Lapetina, E. G.; Bruñe, B. Nitric oxide-induced apoptosis in RAW 264.7 macrophages is antagonized by protein kinase C- and protein kinase A-activating compounds. Mol. Pharmacol. 1995; 47, pp. 757-765.

56. Messmer, U. K.; Ankarcrona, M.; Nicotera, P.; Brune, B. p53 Expression in nitric oxide-induced apoptosis. FEBS Lett. 1994, 355, pp. 23-26.

57. Cui, S.; Reichner, J.S.; Mateo, Kio B.; Albina, J.E. Activated murine macrophages induce apoptosis in tumor cells through nitric oxide-dependent or-independent mechanisms. Cancer Res. 1994; 54, pp. 2462-2467.

58. Beauvais, F.; Michel, L.; Dubertret, L. The nitric oxide donors, azide and hydroxylamine, inhibit the programmed cell death of cytokine- deprived human eosinophils. FEBS Lett, 361, pp. 229-232.

59. Harris, C.C. 1995 Deichmann Lecture-p53 tumor suppressor gene: at the crossroads of molecular carcinogenesis, molecular epidemiology and cancer risk assessment. Toxicol. Lett 1995, 82/83, pp. 1-7.

60. Brune, B.; MeBmr, K.; Sandau, K. The role of nitric oxide in cell injury. Toxicol. Lett. 1995, 82/83, pp. 233-237.

61. Thomsen L.L., Miles D.W., Happerfield L., Bobrow L.G., Knowles R.G., Moncada S. Nitric oxide synthase activity in human breast cancer. Br. J. Cancer. 1995; 72(1), pp. 41-44.

62. Vakkala M., Kahlos K., Lakari E., Paakko P., Kinnula V., Soini Y. Inducible nitric oxide synthase expression, apoptosis, and angiogenesis in situ and invasive breast carcinomas. Clin Cancer Res 2000; 6(6):2408-2416.

63. Nosho K., Yamamoto H., Adachi Y., Endo T., Hinoda Y., Imai K. Gene expression profiling of colorectal adenomas and early invasive carcinomas by cDNA array analysis. Br. J. Cancer. 2005; 92(7): 1193-1200.

64. Thomsen L.L., Lawton F.G., Knowles R.G., Beesley J.E., Riveros-Moreno V., Moncada S. Nitric oxide synthase activity in human gynecological cancer. Cancer. Res. 1994; 54(5):1352-1354.

65. Massi D., Franchi A., Sardi I., Magnelli L., Paglierani L., Borgognoni L., Maria Reali U., Santucci M. Inducible nitric oxide synthase expression in benign and malignant cutaneous melanocytic lesions. J. Pathol. 2001; 194(2): 194-200.

66. Park S.W., Lee S.G., Song S.H., Heo D.S., Park B.J., Lee D.W., Kim K.H., Sung M.W. The effect of nitric oxide on cyclooxygenase-2 (COX-2) overexpression in head and neck cancer cell lines. Int. J. Cancer. 2003; 107(5):729-738.

67. Wilson K.T., Fu S., Ramanujam K.S., Meltzer S.J. Increased expression of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 in Barrett's esophagus and associated adenocarcinomas. Cancer Res 1998; 58(14):2929-2934.

68. Ambs S., Bennett W.P., Merriam W.G., Ogunfusika M.O., Oser S.M., Khan M.A., Jones R.T., Harris C.C. Vascular endothelial growth factor and nitric oxide synthase expression in human lung cancer and the relation to p53. Br J Cancer 1998; 78(2):233-239.

69. Klotz T., Bloch W., Volberg C., Engelmann U., Addicks K. Selective expression of inducible nitric oxide synthase in human prostate carcinoma. Cancer 1998; 82(10):1897-1903.

70. Swana H.S., Smith S.D., Perrotta P.L., Saito N., Wheeler M.A., Weiss R.M. Inducible nitric oxide synthase with transitional cell carcinoma of the bladder. J Urol 1999; 161(2):630-634.

71. Hajri A., Metzger E., Vallat F., Coffy S., Flatter E., Evrard S., Marescaus J., Aprahamian M. Role of nitric oxide in pancreatic tumour growth: In vivo and in vitro studies. Br J Cancer 1998; 78(7):841-849.

72. Cobbs C.S., Brenman J.E., Aldape K.D., Bredt D.S., Israel M.A. Expression of nitric oxide synthase in human central nervous system tumors. Cancer Res 1995; 55(4):727-730.

73. Weninger W., Rendl M., Pammer J., Mildner M., Tshugguel W., Schneeberger C., Sturzl M., Tschachler E. Nitric oxide synthases in Kaposi's sarcoma are expressed predominantly by vessels and tissue macrophages. Lab Invest 1998; 78(8):949-955.

74. Mendes R.V., Martins A.R., de Nucci G., Murad F., Soares F.A. Expression of nitric oxide synthase isoforms and nitrotyrosine immunoreactivity by B-cell non-Hodgkin's lymphomas andmultiple myeloma. Histopathology 2001; 39(2): 172178.

75. Roman V., Zhao H., Fourneau J.M., Marconi A., Dugas N., Dugas B., Sigaux F., Kolb J.P. Expression of a functional inducible nitric oxide synthase in hairy cell leukaemia and ESKOL cell line. Leukemia 2000; 14(4):696-705.

76. Ekmekcioglu S., Ellerhorst J., Smid C.M., Prieto V.G., Munsell M., Buzaid A.C., Grimm E.A. Inducible nitric oxide synthase and nitrotyrosine in human metastatic melanoma tumors correlate with poor survival. Clin. Cancer. Res. 2000; 6(12):4768-4775.

77. Loibl S., Buck A., Strank C., von Minckwitz G., Roller M., Sinn H.P., Schini-Kerth V., Solbach C., Strebhardt K., Kaufinann M. The role of early expression of inducible nitric oxide synthase in human breast cancer. Eur.J.Cancer.2005;41(2):265-271.

78. Rasspollini M.R., Amunni G., Villanucci A., Boddi V., Baroni G., Taddei A., Taddei G.L. Expression of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2in ovarian cancer: Correlation with clinical outcome. Gynecol. Oncol. 2004; 92(3):806-812.

79. Gallo O., Masini E., Morbidelli L., Franchi a., Fini-Storchi I., Yergari W.A., Ziche

80. M. Role of nitric oxide in angiogenesis and tumor progression in head and neck cancer. J.Natl.Cancer Inst. 1998; 90(8):587-596.

81. Nozoe T., Yasuda M., Honda M., Inutsuka S., Korenaga D. Immunohistochemical expression of cytokine induced nitric oxide synthase in colorectal carcinoma. Oncol.Rep.2002; 9(3):521-524.

82. Sirica A.E. . Cholangiocarcinoma: Molecular targeting strategies for chemoprevention and therapy. Hepatology 2005; 41(1):5-15.

83. Losser M.R., Payen B. Mechanisms of liver damage. Semin Liver Dis 1996; 16(4): 357-367.

84. Witherell H.L., Hiatt R.A., Replogle M., Parsonnet J. Helicobacter pylori infection and urinary excretion of 8-hydroxy-2-deoxyguanosine, an oxidative DNA adduct. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 1998;7(2):91-96.

85. Ricciardolo F.L., Sterk P.J., Gaston B., Folkerts G. Nitric oxide in health and disease of the respiratory system. Physiol. Rev.2004;84(3):731-765.

86. Gow A.J., Farkouh C.R., Munson D.A., Posencheg M.A., Ischiropoulos H. Biological significance of nitric oxide-madiated protein modifications. Am. J. Physiol. Lung. Cell. Mol. Physiol.2004;287(2):L262-L268.

87. Thomas DD, Espey MG, Vitek MP, Miranda KM, Wink DA. Protein nitration is mediated by heme and free metals through Fenton-type chemistry: An alternative to the NO/02-reaction. Proc. Natl. Acad. Sci USA 2002; 99(20): 12691-12696.

88. Matsumoto A, Comatas KE, Liu L, Stamler JS. Screening for nitric oxide-dependent protein-protein interactions. Science 2003; 301(5633):657-661.

89. Mannick JB, Schonhoff C, Papeta N, Ghafourifar P, Szibor M, Fang K, Gaston B. S-Nitrosylation of mitochondrial caspases. Cell. Biol. 2001; 154(6):1111-1116.

90. Rohn T.T., Quinn M.T. Inhibition of peroxynitrite-mediated tyrosine nitration by a novel pyrrolopyrimidine antioxidant. Eur.J.Pharmacol. 1998;353(2-3):329-336.

91. Kai H, Ito M, Kitadai Y, Tanaka S, Haruma K, Chayama K. Chronic gastritis with expression of inducible nitric oxide synthase is associated with high expression of interleukin-6 and hypergastrinaemia. Aliment. Pharmacol. Ther. 2004; 19(12): 1309-1314.

92. Jaiswal M, LaRusso N.F., Burgart L.J., Gores G.J, Inflammatory cytokines induce DNA damage and inhibit DNA repair in cholangio carcinoma cells by a nitric oxide-dependent mechanism. Cancer Res.2000;60(l): 184-190.

93. Kato H., Miyazaki T., Yoshikawa M., Nakajima M., Fukai Y., Tajima K., Masuda N., Tsutsumi S., Tsukada K., Nakajima T., Kuwano H. Nitrotyrosine in esophageal sguamous cell carcinoma and relevance to p53 expression. Cancer Lett.2000;153(l-2): 121-127.

94. Kisley L.R., Barrett B.S., Bauer A.K., Dwyer-Nield L.D., Barthel B., Meyer A.M., Thompson D.S., Malkinson A.M. Genetic ablation of inducible nitric oxide synthase decreases mouse lung tumorigenesis. Cancer Res.2002;62(23):6850-6856.

95. Radisavljevic Z. Inactivated tumor suppressor Rb by nitric oxide promotes mitosis in human breast cancer cells. J.Cell.Biochem.2004;92(l):l-5.

96. Wang x., Zalcenstein A., Oren M. Nitric oxide promotes p53 nuclear retention and sensitizes neuroblastoma cells to apoptosis by ionizing radiation. Cell.Death.Differ.2003; 10(4):468-476.

97. Li L., Feng Z., Porter A.G. JNK-dependent phosphorylation of c-Jun on serine 63 mediates nitric oxide-induced apoptosis of neuroblastoma cells. J.Biol.Chem.2004;279(6):4058-4065.

98. Kroncke K.D. Nitrosative stress and transcription. Biol.Chem.2003; 384(10-11):1365-1377.

99. Park S.W., Wei L.N. Regulation of c-myc gene by nitric oxide via inactivating NF-kappa B complex in PI 9 mouse embryonal carcinoma cells. J.Biol.Chem.2003;278(32):29776-29782.

100. Sancar A., Lindsey-Boltz L.A. Unsal-Kacmaz K., Linn S. Molecular mechanisms of mammalian DNA repair and the DNA demage checkpoints. Armu.Rev.Biochem.2004;73:39-85.

101. Pieper A.A., Verma A., Zhang J., Snyder S.H. Poly (ADP-ribose) polymerase, nitric oxide and cell death. Trends Pharmacol. Sci.l999;20(4):171-181.

102. Xu W., Liu L., Smith G.C., Charles G. Nitric oxide upregulates expression of DNA-Pkcs to protect cells from DNA-damaging anti-tumour agents. Nat.Cell.Biol.2000;2(6):339-345.

103. Morita E.H., Ohcubo T., Kuraoka I., Shirakawa M., Tanaka K., Morikawa K. Implications of the zinc-finger motif found in the DNA-binding domain of the human XPA protein. Genes.Cells.l996;l(5):437-442. ■

104. Jaiswal M., LaRusso N.F., Nishioka N., Nakabeppu Y., Gores G.J. Human Oggl, a protein involved in the repair of 8-oxoguanine, is inhibited by nitric oxide. Cancer Res.2001;61(17):6388-6393.

105. Ohshima H., Tatemichi M., Sawa T. Chemical basis of inflammation-induced carcinogenesis. Arch. Biochem.Biophys.2003;417(l):3-ll.

106. Jaiswal M., LaRusso N.F., Shapiro R.A., Billiar T.R., Gores G.J. Nitric oxidemediated inhibition of DNA repair potentiates oxidative DNA damage in cholangiocytes. Gastroenterology,2001 ; 120(1): 190-199.

107. Macarthur M., Hold G.L., El-Omar E.M. Inflammation and cancer II. Role of chronic inflammation and cytokine gene polymorphisms in the pathogenesis of gastrointestinalmalignancy,Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver.Physiol.2004;286(4): G515-G520.

108. Malaguarnera L. Implications of apoptosis regulators in tumorigenesis. Cancer. Metastasis. Rev. 2004; 23(3-4):367-387.

109. Bernstein C., Bernstein H., Payne C.M., Garewal H. DNA repair/pro-apoptotic dual-role proteins in five major DNA repair pathways: Fail-safe protection against carcinogenesis. Mutat.Res.2002;511(2):145-178.

110. Ahmed S., Alpi A., Hengartner M.O., Gartner A., C.elegans RAD-5/CLK-2 defines a new DNA damage checkpoint protein.Curr.Biol.,2001, N11, p.1934-1944.

111. Dimmeler S., Haendeler J., Nehls M., Zeiher A.M. Suppression of apoptosis by nitric oxide via inhibition of interleukin-1 beta-converting enzyme (ICE)-like and cysteine protease protein (CPP)-32-like proteases. J.Exp.Med.l997;185(4):601-607.

112. Torok N .J., Higuchi H., Bronk S., Gores GJ. Nitric oxide inhibits apoptosis downstream of cytochrome C release by nitrosylating caspase 9. Cancer.Res.2002;62(6): 1648-1653.

113. Kim J.E., Tannenbaum S.R. S-Nitrosation regulates the activation of endogenous procaspase-9 in HT-29 human colon carcinoma cells. J.Biol.Chem.2004;279(ll):9758-9764.

114. Salvucci O., Carsana M., Bersani I., Tragni G., Anichini A. Antiapoptotic role of endogenous nitric oxide in human melanoma cells. Cancer.Res.2001;61(1 ):318-326.

115. Park H.S., Yu J.W., Cho J.H., Kim M.S., Huh S.H., Ryoo K., Choi E.J. Inhibition of apoptosis signal-regulating kinase 1 by nitric oxide through a thiol redox mechanism. J.Biol.Chem.2004;279(9):7584-7590.

116. Wenzel U., Kuntz S., De Sousa U.J., Daniel H. Nitric oxide suppresses apoptosis in human colon cancer cells by scavenging mitochondrial superoxide anions. Int.J.Cancer.2003;106(5):666-675.

117. Dhakshinamoorthy S., Porter A.G. Nitric oxide-induced transcriptional up-regulation of protective genes by Tica2 via the antioxidant response element counteracts apoptosis of neuroblastoma cells. J.Biol.Chem.2004;279(19):20096-20107.

118. Brune B. Nitric oxide: NO apoptosis of turning it ON? Cell.Death.Differ.2003;10(8):864-869.

119. Bullock A.N., Fersht A.R. Rescuing the function of mutant p53. Nat.Rev.Cancer.2001:1 (l):68-76.

120. Hussain S.P., Hofseth L.J., Harris C.C. Radical causes of cancer. Nat.Rev.Cancer.2003;3 (4):276-285.

121. Ambs S., Ogunfusika M.O., Merriam W.G., Bennett W.P., Billiar T.R., Harris C.C. Up-regulation of inducible nitric oxide synthase expression in cancer-prone p53 knockout mice. Proc Natl Acad Sci USA 1998; 95(15):8823-8828.

122. Gallo O., Schiavone N., Papucci L., Sardi I., Magnelli L., Franchi A., Masini E., Capaccioli S. Down-regulation of nitric oxide synthase-2 and cyclooxygenase-2 pathways by p53 in squamous cell carcinoma. Am.J.Pathol.2003;163(2):723-732.

123. Pfeifer G.P. p53 mutational spectra and the role of methylated CpG sequences. Mutat.Res.2000;450(l -2): 155-166.

124. Schneiderhan N., Budde A., Zhang Y., Brune B. Nitric oxide induces phosphorylation of p53 and impairs nuclear export. 0ncogene.2003;22(19):2857-2868.

125. Cobbs C.S., Whisenhunt T.R., Wesemann D.R., Harkins L.E., Van Meir E.G., SamantaM. Inactivation of wild-type p53 protein function by reactive oxygen and nitrogen specie in malignant glioma cells. Cancer.Res.2003;63(24) :8670-8673.

126. Marshall H.E., Stamler J.S. Inhibition of NF-kappa H by S-nitrosylation. Biochemistiy. 2001; 40(6): 1688-1693.

127. Reynaert N.L., Ckless K., Korn S.H., Vos. N., Guala A.S., Wouters E.F., van der Vliet A., Janssen-Heininger Y.M. Nitric oxide represses inhibitory kappaB kinase through S-nitrosylation. Proc.Natl.Acad.Sci USA.2004;101(24):8945-8950.

128. Chao J.L., Kuo P.C, Hsu T.S. Down-regulation of surviving in nitric oxide-induced cell growth inhibition and apoptosis of the human lung carcinoma cells .J.Biol.Chem.2004;279(19):20267-20276.

129. Heigold S., Sers C., Bechtel W., Ivanovas B., Schafer R., Bauer G. Nitric oxide mediates apoptosis induction selectively in transformed fibroblasts compared to nontransformed fibroblasts. Carcinogenesis.2002;23(6):929-941.

130. Bing R.J., Miyataka M., Rich K.A., Hanson N., Wang X., Slosser H.D., Shi S.R. Nitric oxide, prostanoids, cyclooxygenase, and angiogensis in colon and breast cancer. Clin. Cancer. Res. 2001; 7(ll):3385-3392.

131. Morbidelli L., Donnini S., Ziche M. Role of nitric oxide in tumor angiogenesis. Cancer. Treat. Res. 2004;117:155-167.

132. Bergers G., Benjamin L.E. Tumorigenesis and the angiogenic switch. Nat.Rev.Cancer.2003;3(6):401-410.

133. Park I.S., Kang S.W., Shin Y.J., Chae K.Y., Park M.O., Kim M.Y., Wheatley D.N., Min B.H. Arginine deiminase: A potential inhibitor of angiogenesis and tumour growth. Br.J.Cancer.2003;89(5):907-914.

134. Mocellin S., Lise M., Nitti D. Targeted therapy for colorectal cancer: Mapping the way. Trends.Mol.Med.2005;ll(7):327-335.

135. Wang Y., Fei D., Vanderlaan M., Song A. Biological activity of bevacizumab, a humanized anti-VEGF antibody in vitro. Angiogenesis.2004;7(4):335-345.

136. Mollace V., Muscoli C., Masini E., Cuzzocrea S., Salvemini D. Modulation of prostaglandin biosynthesis by nitric oxide and nitric oxide donors. Pharmacol.Rev.2005;57(2):217-252.

137. Thun M.J., Henley S.J., Patrono C. Nonsteroidal anti-inflammatoiy drugs as anticancer agents: Mechanistic, pharmacologic, and clinical issues. J.Natl.cancer.Ins.2002;94(4):252-266.

138. Semenza G.L. HIF-1 and mechanisms of hypoxia sensing. Curr.Opin.Cell.Biol.2001 ; 13(2): 167-171.

139. Kook H., Ahn K.Y., Lee S.E., Na H.S., Kim K.K. Nitric oxide-dependent cytoskeletal changes and inhibition of endothelial cell migration contribute to the suppression of angiogenesis by RAD50 gene transfer. FEBS Lett 2003; 553(1-2):56-62.

140. Prostovit L.M., Adams M.A., Lash G.E., Heaton J.P., Graham C.H. Oxygen-mediated regulation of tumor cell invasiveness. Involvement of a nitric oxide signaling pathway. J Biol Chem 2002; 277(38):35730-35737.

141. Deininger M.H., Wybranietz W.A., Graepler F.T., Lauer U.M., Meyermann R., Schluesener H.J. Endothelial endostatin release is induced by general cell stress and modulated by the nitric oxide/cGMP pathway.Faseb J 2003 ; 17(10): 12671276.

142. Coussens L.M., Werb Z. Inflammation and cancer. Nature 2002; 420(6917):860-867.

143. Clevers H. At the crossroads of inflammation and cancer. Cell 2004;118(6):671-674.

144. Ricchi P., Zarrilli R., Di Palma A., Acguaviva A.M. Nonsteroidal antiinflammatory drugs in colorectal cancer: From prevention to therapy. Br J Cancer 2003; 88(6):803-807. '

145. Rao C.V. Nitric oxide signaling in colon cancer chemoprevention. Mutat Res 2004; 555(1-2):107-119.

146. Nathan C., Shiloh M.U. Reactive oxygen and nitrogen intermediates in the relationship between mammalian hosts and microbial pathogens. Proc Natl Acad Sci USA 2009; 97(16):8841-8848.

147. Hu D.E., Dyke S.O., Moore A.M., Thomsen L.L., Brindle K.M., Tumor cell-derived nitric oxide is involved in the immune-rejection of an immunogenic murine lymphoma. Cancer Res 2004; 64(1): 152-161.

148. MacMicking J., Xie Q.W., Nathan C. Nitric oxide and macrophage function. Annu Кум Immunol 1997; 15:323-350.

149. Klimp A.N., de Vries E.G., Scherphof G.L., Daemen T. A potential role of macrophage activation in the treatment of cancer. Crit Кум Oncol Hematol 2002; 44(2):143-161.

150. Shi .Q., Xiong Q., Wang В., Le X., Khan N.A., Xie K. Influence of nitric oxide synthase II gene disruption on tumor growth and metastasis. Cancer Res 2000; 60(10):2579-2583.

151. Whitmore M.M., DeVeer M.J., Edling A., Oates R.K., Simons В., Lindner D., Williams B.R. Synergistic activation of innate immunity by double-stranded RNA and CpG DNA promotes enhanced antitumor activity. Cancer Res 2004; 64(16):5850-5860.

152. Kawakami K., Kawakami M., Husain S.R., Puri R.K. Potentantitumor activity of IL-13 cytotoxin in human pancreatic tumors engineered to express IL-13 receptor alpha2 chain in vivo. Gene Ther 2003; 10(13): 1116-1128.

153. Xu L., Xie K., Fidler I J. Therapy of human ovarian cancer by transfection with the murine interferon beta gene: Role of macrophage-inducible nitric oxide synthase. Hum Gene Ther 1998; 9(18):2699-2708.

154. Zhang X., Chen Z., Huang H., Gordon J.R., Xiang J. DNA microarray analysis of the gene expression profiles of naive versus activated tumor-specific T cells. Life Sci 2002; 71(25):3005-3017.

155. Cancer.Gene.Ther.2001 ;8(3): 193-202.

156. Albina J.E., Reichner J.S. Role of nitric oxide in mediation of macrophage cytotoxicity and apoptosis. Cancer.Metastasis.Rev.l998;17(l):39-53.

157. Xu W., Liu L., Charles I.G., Moncada S. Nitric oxide induces coupling of mitochondrial with the endoplasmic reticulum stress response. Nat.Cell.Biol.2004;6(l 1):1129-1134.

158. Davel L.E., Jasnis M.A., de la Torre E., Gotoh T., Diament M., Magenta G., Sacerdote de Lustig E., Sales M.E. Arginine metabolic pathways involved in the modulation of tumor-induced angiogenesis bymarcophages. FEBS Lett.2002;532(l-2):216-220.

159. Hegardt P., Widegren B., Sjogren H.O. Nitric-oxide-dependent systemic immunosuppression in animals with progressively growing malignant gliomas. Cell. Immunol. 2000;200(2):116-127.

160. Rivoltini L., carraba M., Huber V., castelli C., Novellino L., Dalerba P., Mortarini R., Arancia G., Anichini A., Fais S., Parmiani G. Immunity to cancer: Attack and escape in T lvmphocyte-tumor cell interaction. Immunol.Rev.2002; 188(1 ):97-113.

161. Hofseth L.J., Hussain S.P., Wogan G.N., Harris C.C. Nitric oxide in cancer and chemoprevention. Free Radic Biol Med 2003; 34(8): 955-968.

162. Hobbs A.J., Higgs a., Moncada S. Inhibition of nitric oxide synthase as a potential therapeutic target. Annu.Rev.Pharmacol.oxicol.l999;39:191-220.

163. Wu J., Akaike T., Maeda H. Modulation of enhanced vascular permeability in tumors by a bradykinin antagonist, a cyclooxygenase inhibitor, and a nitric oxide scavenger. Cancer.Res.l998;58(l):159-165.

164. Duvoix A., Blasius R., Delhalle S., Schnekenburger M., Moceau F., Henry E., Dicato M., Diederich M. chemopreventive and therapeutic effects of carcumin. Cancer.Lett.2005;223(2): 181-190.

165. Rao C.V., Kawamori T., Hamid R., Reddy B.S. Chemoprevention of colonic aberrant crypt foci by an inducible nitric oxide synthase-selective inhibitor. Carcinogenesis. 1999;20(4):641 -644.

166. Lu W., Schroit A.J., Vascularization of melanoma by mobilization and remodeling of preexisting latent vessels to patency. Cancer.Res.2005;65(3):913-918.

167. Jadeski L.C., Hum K.O., Chakraborty C., Lala P.K. Nitric oxide promotes murine mammaiy tumour growth and metastasis by stimulating tumour cell migration, invasiveness and angiogenesis. Int.J.Cancer.2000;86(l):30-39.

168. Jadeski L.C., Lala P.K. Nitric oxide synthase inhibition by N(G)-nitro-L-arginine methyl ester inhibits tumor-induced angiogenesis in mammary tumors. Am J.Pathol. 1999; 155(4): 1381 -1390.

169. Thomsen L.L., Miles D.W. Role of nitric oxide in tumour progression:Lessons from human tumoers. Cancer.Metastasis.Rev.l998;17(l):107-118.

170. Chen T., Nines R.G., Perchke S.M., Kresty L.A., Stoner G.D. chemopreventive effects of a selective nitric oxide synthase inhibitor on carcinogen-induced rat esophageal tumorigenesis. Cancer.Res.2004;64(10):3714-3717.

171. D.A. Wink, G. Sharon, S. Christofer, R. Lisa, A.Stefan, Passways associate Nitric Oxide Synthase and CycIoxygenase-2 that lead to poor prognosis in brest cancer, Nitric oxide: biology & chemistry, 2010, 22, s.17.

172. E.Okada, A role of nitric oxide in conversion of human colonic adenoma cell line accelerated by chronic inflammation, Nitric oxide: biology & chemistry, 2010, 22, s.19.

173. Ahn B., Ohshima H. Suppression of intestinal polyposis in Apc(Min/+) mice by inhibiting nitric oxide production. Cancer.Res.2001;61(23):8357-8360.

174. Tang C.H., Grimm E.A. Depletion of endogenous nitric oxide enhances cisplatin-induced apoptosis in a p53-dependent manner in melanoma cell lines. J.Biol.Chem.2004;279(l):288-298.

175. Moccelin S., Rossi C.R., Pilati P., Nitti D. Tumor necrosis factor, cancer and anticancer therapy. Cytokine Gtowth Factor Rev.2005;16(l):35-53.

176. Korbelik M., Parkins C.S., Shibuya H., Cecic I., Stratford M.R., chaplin D.J. Nitric oxide production by tumour tissue: Impact on the response to photodynamic therapy. Br.J.Cancer.2000;82(l 1):1835-1843.

177. Tlimas W.J., Thomas D.L., Knezetic J.A., Adrian T.E. The role of oxygen-derived free radicals and nitric oxide in cytokine-induced antiproferation of pancreatic cancer cells. Pancreas.2002;24(2):161-168.

178. Sonveaux P., Brouet A., Havaux X., Gregoire V., Dessy C., Balligand J.L., Feron O. Irradiation-induced angiogenesis through the up-regulation of the nitric oxide pathway: Implications for tumor radiotherapy. Cancer.Res.2003;63(5): 1012-1019.

179. Wachsberger P.R., Burd R., Marrero N., Daskalakis C., Ryan A., McCue P., Dicker A.P. Effect of the tumor vascular-damaging agent, ZD6126, on the radioresponse ofU87 glioblastoma. Clin.cancer.Res.2005;ll(2 Pt l):835-842.

180. Xie K., Huang S. Contribution of nitric oxide-mediated apoptosis to cancer metastasis inefficiency. Free Radic.Biol.Med.2003;34(8):969-986.

181. Garban H.J., Bonavida H. Nitric oxide disrupts H202-dependent activation of nuclear factor kappa. Role in sensitization of human tumor cells to tumor necrosis factor-alpha-induced cyotoxicity. J.Biol.Chem.2001; 276(12): 8918-8923.

182. Millet a., Bettaied A., Renaud F., Prevolat L., Hammann A., Solary E., Mignotte B., Jeannin J.F. Influence of the nitric oxide donor glyceryl trinitrate on apoptotic pathways in human colon cancer cells. Gastroenterology.2002;123(l):235-246.

183. Dhar A., Brindley J.M., Stark C., Citro M.L., Keefer L.K., colburn TioPio Nitric oxide does not mediate but inhibits transformation and tumor phenotype. Mol.Cancer.Ther.2003 ;2(12): 1285-1293.

184. Postovit L.M., Adams M.A., Lash G.E., Heaton J.P., Graham CioPio Nitric oxide-mediated regulation of hypoxia-induced B16F10 melanoma metastasis. InU.Cancer.2004; 108( 1):47-53.

185. Findlay V.J., Townsend D.M., Saavedra J.E., Buzard G.S., Citro M.L., Keefer L.K., Ji X., Tew K.D. Tumor cell responses to a novel glutathione S-transferase-activated nitric oxide-releasing prodrug. Mol.Pharmacol.2004;65(5):1070-1079.

186. Yeo E.J., Chun Y.S., Cho Y.S., Kim J., Lee J.C., Kim M.S., Park J.W. YC-1: A potential anticancer drug targeting hypoxia-inducible factor 1. J.Natl.Cancer.Inst.2003;95(7):516-525.

187. Liu L., Li H., Underwood T., Lloyd M., David M., Sperl G., Pamukcu R., Thompson W.J. Cyclic GMP-dependent protein kinase activation and induction by exisuling and CP461 in colon tumor cells. J.Pharmacol.Exp.Ther.2001;299(2):583-592.

188. Rigas B., Kashfi K. Nitric-oxide-donating NSAIDs as agents for cancer prevention. Trends.Mol.Med.2004;10(7):324-330.

189. K.E. Torfgard and J. Ahlner, Mechanisms of Action of Nitrates. Cardiovasc. Drugs Ther., 1994, 8, 701-714.

190. С.Я. Проскуряков, А.Г. Коноплянников, А.И. Иванников, В.Г. Скворцов, А.Ф. Цыб. Оксид азота и терапия злокачественных новообразований. Росс, онкологический журн., 2000, 3, 41.

191. R. Morphy, C. Kay and Z. Rankovic. From magic bullets to designed multiple ligands. Drug Discovery Today, 2004, 9(15), 641-651.

192. K. Kashfi, S. Borgo, J.L. Williams, J. Chen et. al. Positional Isomerism Markedly Affects the Growth Inhibition of Colon Cancer Cells by Nitric Oxide-Donating Aspirin in Vitro and in Vivo. J.Pharm.Exp.Ther., 2005, v. 312, iss. 3, pp. 978-988.

193. F. Rosetti, A. Tesei, P. Ulivi et. al. Molecular characterization of cytotoxic and resistance mechanisms induced by NCX 4040, a novel NO-NSAID, in pancreatic cancer cell lines. Apoptosis, 2006, 11(8), pp. 1321-1330.

194. L.K. Keefer, R.N. Nims, K.M. Davies and D.A. Wink. "NONOates" (1-substituted diazen-l-ium-l,2-diolates) as nitric oxide donors: Convenient nitric oxide dosage forms. Metods Enzymol. 1996, 268, pp. 281-293.

195. A.L. Fitzhugh and L.K. Keefer, Diazeniumdiolates: Pro- and antioxidant applications of the "NONOates". Free Rad.Biol.Med., 2000, 28(10), 1463-1469.

196. E. Noack and M. Feelisch. Molecular Aspects Underlying the Vasodilator Action of Molsidomine. J.Cardiovasc.Pharmacol., 1989, vol. 14, suppl. 11, pp. S1-S5.

197. M. Feelisch, J. Ostrowski and E. Noack. On the Mechanism of NO Release from Sydnonimines. J.Cardiovasc.Pharmacol., 1989, 14, p. 13.

198. A R. Anthony, P. Rhodes. Chemistry, Analysis, and Biological Roles of S-Nitrosothiols. Anal. Biochem., 1997, v. 249, is.l, pp. 1-9.

199. B. Gaston. Nitric oxide and thiol groups. Biochim. Biophys. Acta, 1999, v. 1411, is. 2-3, pp. 323-333.

200. J. Oszajca, G. Stochel, E. Wasielewska, Z. Stasicka, R. J. Gryglewski, A. Jakubowski and K. Gieslik. Cyanonitrosylmetallates as potential NO-donors. J.Inorg.Biochem., 1998, 69, 121-127.

201. S. Bian and J. A. Cowan. Protein-bound iron-sulfur centers. Form, function, and assembly. Coord.Chem.Rev.,1999, v. 190, pp. 1049-1066.

202. S.G. Lloyd, R. Franco, J.J.G. Moura, I. Moura, G.C. Ferreira, B.H. Huynh. Functional Necessity and Physicochemical Characteristics of the 2Fe-2S. Cluster in Mammalian Ferrochelatase. J.Am.Chem.Soc., 1996, v. 118, iss. 41, pp. 98929900.

203. D'Autreaux B, Touati D, Bersch B, Latour J.M., Michaud-Soret I Direct inhibition by nitric oxide of the transcriptional ferric uptake regulation protein via nitrosylation of the iron. Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 2002, 99(26), 16619-24.

204. Mi-Sun Koo, Joon-Hee Lee, So-Yeon Rah, Won-Sik Yeo, Jin-Won Lee, Kang-Lok Lee, Young-Sang Koh, Sa-Ouk Kang and Jung-Hye Roe. A reducing system of the superoxide sensor SoxR in Escherichia coli. EMBO J., 2003, v. 22, iss. 11, pp. 2614-2622.

205. M. Fontecave, Iron-sulfur clusters: ever-expanding roles. Nature Chemical Biology, 2006, V.2, iss. 4, pp. 171-174.

206. Sh. Wu and J.A. Cowan. Iron-sulfur cluster stability. Kinetics and mechanism of ligand-promoted cluster degradation. Chem. Commun. (2007) pp. 82-84.

207. E.Soum, J.-C. Drapier. Nitric oxide and peroxynitrite promote complete disruption of the 4Fe-4S. cluster of recombinant iron regulatory protein 1. J. Biol. Inorg. Chem. (2003), 8, pp. 226-232.

208. K. P. Jensen. Computational studies of modified Fe3S4. clusters: Why iron is optimal. J. of Inorganic Biochemistry, 102 (2008), pp. 87-100.

209. H. Beinert, R. H. Holm, E. Miinck. Iron-Sulfur Clusters: Nature's Modular, Multipurpose Structures. Science, vol. 277, pp. 653-659.

210. J.-C. Drapier. Interplay between NO and Fe-S. Clusters: Relevance to Biological Systems. Methods: A. Companion to Methods in Enzymology, (1997), 11, pp. 319-329.

211. Y. Liu and J.A. Cowan. Iron sulfur cluster biosynthesis. Human NFU mediates sulfide delivery to ISU in the final step of 2Fe-2S. cluster assembly. Chem. Commun., 2007, pp. 3192 3194.

212. G.-M. Rinanese, F. De Angelis, S. Melchionna and A. De Vita. Glutathione Transferase: A First-Principles Study of the Active Site. J.Am.Chem.Soc., 2000, v. 122, iss. 48, pp. 11963-11970.

213. Constanco, S.; Menage, S.; Purrello, R.; Bonomo, R.P.; Fontecave, M. Reexamination of the formation of dinitrosyl-iron complexes during reaction of S-nitrosothiols withFe(II). Inorg. Chim. Acta, 2001, v. 318, iss. 1-2, pp. 1-7.

214. A. F. Vanin, V. A. Serezhenkov, V. D. Mikoyan and M. V. Genkin. The 2.03 Signal as an Indicator of Dinitrosyl-Iron Complexes with Thiol-Containing Ligands. Nitric oxide. 1998. V. 2, iss. 4, pp. 224-234.

215. J.R. Lancaster, Ir, Metal-Catalyzed Nitric Oxide Nitrozo interconversions and biological signaling, Nitric oxide: biology & chemistry,2010, v. 22, s.13.

216. R. Basosi, E. Gaggelli and E. Tiezzi. Nitrosyliron complexes with mercapto-purines and pyrimidines studied by nuclear magnetic and electron spin resonance spectroscopy. J. Chem. Sos. Perkin Trans.2, 1975, iss. 5, pp. 423-428.

217. P.K. Mascharak. Structural and functional models of nitrile hydratase. Coord.Chem. Rev., 2002, v. 225, iss. 1-2, pp. 201-214.

218. S. Nagashima, M. Nakasako, N. Dohmae, M. Tsujimura, K. Talcio, M. Odaka, M. Yohda, N. Kamiya, I. Endo. Novel non-heme iron center of nitrile hydratase with a claw setting of oxygen atoms. Nat.Struct. Biol., 1998, v. 5, №5, pp. 347-351.

219. Yang, W., Rogers P. A., Ding H., Repair of Nitric Oxide-modified Ferredoxin 2Fe-2S. Cluster by Cysteine Desulfurase (IscS). J. Biol. Chem., 2002, v. 277, iss. 15, pp. 12868-12873.

220. Cruz-Ramos H., Crack J. et. al., NO sensing by FNR: regulation of the Escherichia coli NO-detoxifying flavohaemoglobin, Hmp. EMBO J., 2002, v. 21, N 13, pp. 3235-3244.

221. А.Ф. Ванин, Оксид азота и его обнаружение в биосистемах методом электронного парамагнитного резонанса, Успехи физических наук (2000), 179, 4, 455-458.

222. A. R. Butler, S. Elkins-Daukes, D. Parkin, D. Lyn and H. Williams. Direct NO group transfer from S-nitrosothiols to iron centres. Chem. Commun., 2001, iss. 18, pp. 1732-1733.

223. M. Feelisch, The use of nitric oxide donors in pharmacological studies. Naunyn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol, 1998, v. 358, N 1, pp. 113-122.

224. J.-L. Burgaud, E. Ongini and P. Del Soldato. Nitric Oxide-Releasing Drugs. A Novel Class of Effective and Safe Therapeutic Agents. Ann. N. Y. Acad. Sci., -2002, v. 962, 360-371.

225. A.L. Kleschov, G. Hubert, T. Munzel, C. Stoclet, and B. Bucher, Low molecular mass dinitrosyl nonheme-iron complexes up-regulate noradrenaline release in the rat tail artery. BMC Pharmacl., 2002, v. 2, N3.

226. Y.M. Kim, H.T. Chung, R.L. Simmons and T.R. Billar, Cellular Non-heme Iron Content Is a Determinant of Nitric Oxide-mediated Apoptosis, Necrosis, and Caspase Inhibition. J. Biol. Chem., 2000, v. 275, N15, pp. 10954-10961.

227. T.R. Bryar and D.R. Eaton, Electronic configuration and structure of paramagnetic iron dinitrosyl complexes. Can. J. Chem., 1992, v. 70, N7, pp. 19171926.

228. D.A. Wink, Y. Vodovotz, J.A. Cook, M.C. Krishna , S. Kim, D. Coffin, W. DeGraff, A.M. Deluca, J. Liebmann, and J.B. Mitchell. The Role of Nitric Oxide Chemistry in Cancer Treatment. Biochemistry, 1998, v. 63, N. 7, p. 802.

229. K. Lala, Significance of nitric oxide in carcinogenesis, tumor progression and cancer therapy. Cancer and Metastasis Rev., 1998, v. 17, is. 1, pp. 1-6.

230. К. Кабисов, B.B. Соколов, А.Б. Шехтер, A.B. Пекшев, M.B. Манейлова. Первый опыт применения экзогенной NO-терапии для лечения послеоперационных ран и лучевых реакций у онкологических больных. Росс, онкологический журн., 2000, №1, с. 24-28.

231. A. Janczyk, A. Wolnicka-Glubisz, A. Chmura, М. Elas, Z. Matuszak, G. Stochel and K.Urbanska, NO-dependent phototoxicity of Roussin's black salt against cancer cells. Nitric Oxide, 2004, v. 10, iss. 1, pp. 42-50.

232. O. Siri, A. Tabard, P. Pullumbi and R. Guilard. Iron complexes acting as nitric oxide carriers. Inorg. Chemica Acta, 2003, v. 350, pp. 633-640.

233. Проскуряков С.Я., Бикетов С.И., Иванников А.И., Скворцов В.Г. Оксид азота в механизмах патогенеза внутриклеточных инфекций. Иммунология, 2000, № 4, стр. 9-20.

234. Vanin A.F., Stukan R.A., Manukhina E.B. Physical properties of dinitrosyl iron complexes in relation with their vasodilator activity. Biochim. Biophys. Acta. 1996; 1295: 5-12.

235. H. Preiser. Role of Nitric Oxide in Cardiovascular Alterations. Sepsis, 2000, vol. 4, N. 2, pp. 99-109.

236. M. Jaworska, Z. Stasika. Structure and UV- Vis spectroscopy of the iron-sulfur dinuclear nitrosyl complexes Fe2(SR)2(NO)4. / New J. Chem., 2005, v. 29, iss. 4, pp. 604-612.

237. J.T. Thomas, J.H. Robertson and E.G. Cox. The crystal structure of Roussin's red ethyl ester. Acta Crystallogr, 1958, v. 11, pp. 599-604.

238. A.R. Butler, C. Glidewell, A.R. Hyde, and J. McGinnis. Nitrogen-15 and carbon-13 NMR study of Roussin salts and esters and of pentacyanoferrate complexes. Inorg.Chem., 1985, v. 24, iss. 19, pp. 2931-2934.

239. S.S. Sung, C. Glidewell, A.R. Butler and R. Hoffman. Bonding in nitrosylated iron-sulfur clusters. Inorg.Chem., 1985, v. 24, iss. 23, pp. 3856-3859.

240. A.R. Butler, C. Glidewell and S. Glidewell, Formation of the heptanitrosyltri-(i3-thioxotetraferrate(l -) anion, Fe4S3(NO)7.~ by capture of biological sulphur in reactio. Polyhedron, 1990, v. 9, iss. 19, pp. 2399-2405.

241. K.A. Hofmann and O.F. Wiede, Weitere Mitteilungen über Nitrosoverbindungen des Eisens. Z. Anorg. Allg. Chem. (Zeitschrift für anorganische Chemie), 1985, v. 9, iss. l,pp. 295-303.

242. G. Brauer, Handbook on preparative inorganic chemistry, M.: IL, 1956, p. 838.

243. A.F. Vanin, B. Muller, J.L. Alencar, I.I. Lobysheva, F. Nepveu and J.-C. Stoclet. Evidence that intrinsic iron but not intrinsic copper determines S-nitrosocysteine decomposition in buffer solution. Nitric Oxide, 2002, v. 7, iss. 3, pp. 194-209.

244. A.F. Vanin, B. Muller, J.L. Alencar, I.I. Lobysheva, F. Nepveu and J.-C. Stoclet, Influence of transition metals on stability of various S-nitrosothiols. Curr. Top. Biophys., 2002, v. 26, iss. 1, pp. 101-113.

245. L. Li, J.R. Morton and K.F. Preston. Magnet Reson.Chem. EPR study of iron-nitrosyl clusters in the oxidation of Fe(NO)2(CO)2. 1995, v. 33, pp. S14-S19.

246. A.F. Vanin, Dinitrosyl iron complexes with thiolate ligands: Physico-chemistry, biochemistry and physiology. Nitric Oxide, 2009, 21, iss. 1, pp. 1-13.

247. L. Li. Some Coordination Chemistry of Non-heme Iron Nitrosyl Complexes.

248. M.V. Stupakova, I.I. Lobysheva, V.D. Mikojan, A.F. Vanin and S.V. Vasil'eva.

249. A Role of Iron Ions in the SOS DNA Repair Response Induced by Nitric Oxide in Escherichia coli. Biochemistry, 2000, v. 65, N6, p. 690.

250. A.L. Kleschyov, S. Strand, S. Schmitt, D. Gottfried, M. Skatchkov, N. Sjakste, A. Daiber, V. Umansky, T. Munzel. Dinitrosyl-iron triggers apoptosis in Jurkat cells despite overexpression of Bcl-2. / Free Radical Biology & Medicine 40 (2006) 1340-1348.

251. Ванин А.Ф., Лозинский В.И. Капелько В.И., Полимерная композиция для получения стабилизированной формы динитрозильного комплекса железа и способ получения указанной формы комплекса, Патент RU 2291880 С1.

252. SCH2CH2NMeCH2CH2CH2NMeCH2CH2S-). Inorg.Chem., 1980, v. 19, iss. 9, pp. 2627-2632.

253. Strasdeit, B. Krebs and G. Henkel. Synthese und Struktur von Fe(SPh)2(NO)2." , dem "Monomeren" des Roussinschen Phenylesters. Z. Naturforsch., 1986, 4 IB, pp. 1357-1362.

254. M.W. Foster, J.A. Cowan. Chemistry of Nitric Oxide with Protein-Bound Iron Sulfur Centers. Insights on Physiological Reactivity. JACS, 1999, v. 121, iss. 17, pp. 4093-4100.

255. R.H. Morse, S.I. Chan. Electron paramagnetic resonance studies of nitrosyl ferrous heme complexes. Determination of an equilibrium between two conformations. J.Biol.Chem., 1980, v. 255, iss. 16, pp. 7876-7882.

256. C.E. Cooper. Nitric oxide and iron proteins. Biochim.Biophys.Acta, 1999, v. 1411,290-309.

257. Enemark, J.H., Feltham, R.D. Principles of structure, bonding, and reactivity for metal nitrosyl complexes. Coord. Chem. Rev. 1974, v. 13, iss. 4, pp. 339-406.

258. Franz, K.J., Lippard, S.J. NO Disproportionation Reactivity of Fe Tropocoronand Complexes. J. Am. Chem. Soc. 1999, v. 121, iss. 45, pp. 1050410512.

259. Laverman, L.E.; Wanat, A.; Oszajca, J.; Stochel, G.; Ford, P.C.; van Eldik, R. Mechanistic Studies on the Reversible Binding of Nitric Oxide to Metmyoglobin. J. Am. Chem. Soc. 2001, v. 123, iss. 2, pp. 285-293.

260. A.F. Vanin, R.A. Stukan and Y.B. Manukhina. DIMER AND MONOMER FORMS OF DINITROSYL IRON COMPLEXES WITH THIOL-CONTAININGLIGANDS : PHYSICOCHEMICAL PROPERTIES AND vASODILATATORY ACTIVITY. Biophysics, 1997, v. 42, No. 1, pp. 7-18.

261. S.V. Vasil'eva, M.V. Stupakova, I.I. Lobysheva, V.D. Mikoyan, and A.F. Vanin. Activation of the Escherichia coli SbxRS-Regulon by Nitric Oxide and Its Physiological Donors. BiocheniisVy, 2001, v. 66, No. 9, p. 984.

262. И.В. Серков, B.B. Безуглов. Многофункциональные соединения, содержащие органические нитраты, — прототипы гибридных лекарственных препаратов. Успехи химии, 2009, т. 78, вып. 5, стр. 442-465.

263. E.S. Râper. Complexes of heterocyclic thionates Part 2: complexes of bridging ligands. Coord. Chem. Rev., 1997, v. 165, pp. 475-567.

264. E.S. Raper. Complexes of heterocyclic thione donors. Coord. Chem. Rev., 1985, v. 61, 115-184.

265. P.D. Akrivos. Recent studies in the coordination chemistry of heterocyclic thiones and thionates. Coord. Chem. Rev., 2001, v. 213, iss. 1, pp. 181-210.

266. T.D. Bradshaw, S. Wrigley, D.-F.Shi, R. J. Schultz, K. D. Paul and M. F. G. Stevens. 2-(4-Aminophenyl)benzothiazoles: novel agents with selective profiles of in vitro anti-tumour activity. British J. Cancer, 1998, v. 77, iss. 5, pp. 745-752.

267. A.K. Zhanataev, A.D. Durnev and S.B. Seredin. Antimutagenic activity of afobazole in various regimens of treatment. Bull. Exp. Biol.& Med., 2000, v. 130, iss. 11, pp. 1077-1079.

268. R.W. Klark, P.J. Squattrito, A.K. Sen and S.N. Dubey. Structural trends in a series of divalent transition metal triazole complexes. Inorg.Chim.Acta, 1999, v. 293, iss. 1, pp. 61-69.

269. G. Cervantes, S. Marchal and M. Prieto J. DNA interaction and antitumor activity of aPt(III) derivative of 2-mercaptopyridine. J. Inorg. Biochem., 1999, v. 77, iss. 3-4, pp. 197-203.

270. J. A. Montgomery, Studies on the Biologic Activity of Purine and Pyrimidine Analogs, Medicinal Research Reviews, 1982, V. 2, No. 3, p. 271-308.

271. V.M. Gonzalez, M.A. Fuertes, M.J. Perez-Alvarez, G. Cervantes, V. Moreno, C. Alonso and J.M. Perez. Induction of apoptosis by the bis-Pt(III) complex Pt2(2-mercaptopyrimidine)4Cl2. Biochem. Pharmacol, 2000, v. 60, iss. 3, pp. 371-379.

272. T.P. Holler, P.B. Hopkins. Ovothiols as free-radical scavengers and the mechanism of ovothiol-promoted NAD(P)H-02 oxidoreductase activity. Biochemistry, 1990, v. 29, iss. 7, pp. 1953-1961.

273. T.P. Holler, P.B. Hopkins. Ovothiols as biological antioxidants. The thiol groups of ovothiol and glutathione are chemically distinct. J.Am.Chem. Soc., 1988, v. 110, iss. 14, pp. 4837-4838.

274. B. Marjanovic, M.G. Simic, S.V. Jovanovic. Heterocyclic thiols as antioxidants: Why Ovothiol C is a better antioxidant than ergothioneine. Free Rad. Biol. Med., 1995, v. 18, iss. 4, pp. 679-685.

275. E. Turner, R. Klevit, L. Hager, B.M. Shapiro. Ovothiol replaces glutathione peroxidase as a hydrogen peroxide scavenger in sea urchin eggs. Science, 1988, v. 242, iss. 4880, pp. 939-941.

276. RN. Vogt, H.S.C. Spies, D.J. Steenkamp. The biosynthesis of ovothiol A (Nl-methyl-4-mercaptohistidine). Eur. J. Biochem., 2001, v. 268, No. 20, pp. 52295241.

277. G.R. Hoffmann and L.G. Littlefield. Enhancement of the activity of bleomycin by cysteamine in a micronucleus assay in Go human lymphocytes. Toxicol. Lett., 1995, v. 78, iss. 2, pp. 147-151.

278. О. А. Ракова, H. А. Санина, Г. В. Шилов, Ю. М. Шульга, В. М. Мартыненко, Н. С. Ованесян, С. М. Алдошин, Новый NO донор: синтез, структура и некоторые свойства комплекса Fe2([a-SC5H4N)2(NO)4.// Коорд. Химия,2002. том. 28, N5, с. 364-369.

279. H.A. Санина, C.M. Алдошин, Т.Н. Руднева, Н.И. Головина, Г.В. Шилов, Ю.М. Шульга, В.М. Мартыненко, Н.С. Ованесян,Синтез, структура и твердофазные превращения нитрозильного комплекса железа

280. Na2Fe2(S203)2(N0)4.-4H20// Координационная Химия, 2005, том 31, N 5, с.301-306.

281. N. Sanina, T: Roudneva, G. Shilov, R. Morgunov, N. Ovanesyan, S. Aldoshin, Structure and Properties of Binuclear Nitrosyl Iron Complex with Benzimidazole-2-Thiolyl//DaltonTransactions,2009, p. 1703-1706.

282. Н.А. Санина, Н.С. Емельянова, А.Н. Чехлов, А.Ф. Шестаков, И.В. Сулименков, С.М. Алдошин,Строение и свойства pi2-S-Бис(фенилтиолато)тетранитрозил дижелеза.//Известия АН. Сер.хим., 2010, N6, с.1104-1114.

283. S.M. Aldoshin, K.A. Lysenko, M.Yu. Antipin, N.A. Sanina, V.V. Gritsenko, Precision X-ray study of mononuclear dinitrosyl iron complex Fe(SC2H3N3)(SC2H2N3)(NO)2.-0.5H20 at low temperatures". J. Mol. Structure. 875(2008), 309-315.

284. B.A. Климова, Основные микрометоды анализа органических соединений, Химия, Москва, 1975, с. 21.

285. Dodonov A.F., Kozlovski V.l., Soulimenkov I.V., Raznikov V.V., Loboda A.V., Zhou Z., Horvath Т., WollnikH., Eur. J. Mass Spectrom., 2000, v. 6, № 6, p. 481-490.

286. Р.Б. Моргунов, E.B. Курганова, C.M. Алдошин, H.A. Санина, Т.Н. Руднева, Магнитные свойства биядерного тетранитрозильного комплекс а железа Fe2(SC3H6N2)2(NO)4, Физика твердого тела ,2007, том 49, вып. 9, с.1644-1650.

287. А. Weissberger, Е. Proskauer, J.A. Riddick, Е.Е. Toops, Organic solvents: physical properties and methods of purification, 1955.

288. Gaussian 98, Revision A.7, M. J. Frisch, G. W. Trucks, H. B. Schlegel et. al., Gaussian, Inc., Pittsburgh PA, 1998.

289. Краткий справочник химика" ред. В.И. Перельман, Москва, 1963, 467.

290. Е. Antonini, М. Brunori, Hemoglobin and myoglobin in the reactions with ligands, in: A. Neuberger, E.L. Tatum (Eds.) North-Holland research monographs. Fronties of biology. Vol. 21, North-Holland Publishing company, AmsterdamLondon, 21 (1971)276.

291. О.С.Жукова, Модели in vitro для скрининга противоопухолевых соединений различной природы, Росс. Биотерапевтический журнал, 2004, N3,c.l2-18.

292. N.B. Okulik, А.Н. Jubert, Е.А. Castro. Study of the Topological Properties of Some Pseudohalides. J. Chem. Theory Comput., 2006, v. 2, iss. 5, pp. 1335-1341.

293. E. König and K.J. Watson. The Fe—N bond lengths, the "ionic radii" of iron (II), and the ciystal field parameters (10Dq) in a high-spin and low-spin Fen-N6. complex. Chem. Phys. Lett., 1970, v. 6, iss. 5, pp. 457-459.

294. M. Jaworska and Z. Stazicki. Structure and UV-Vis spectroscopy of nitrosylthiolatoferrate mononuclear complexes. J. Organomet. Chem., 2004, v. 689, iss. 9, pp. 1702-1713.

295. A.F. Shestakov, Yu.M. Shul'ga, N. S. Emel'yanova, N.A. Sanina, T.N.

296. Bleaney B., Bowers K.D. Prog.Roy.Soc. (London), 1952, v.25, p.29.

297. N.A. Sanina, I.V. Sulimenkov, A.V. Kulikov, S.M Aldoshin, VII Voevodsky Conference Physics and Chemistry of Elementary Chemical Processes, June 2528, 2007, Chernogolovka, Russia, 260.

298. T.N. Rudneva, N.A. Sanina, K.A. Lysenko, S.M. Aldoshin, M.Y. Antipin, N.S.t

299. Ovanesyan. Synthesis and structure of water-soluble nitrosyl iron complex with cysteinamine ligand Fe2(S(CH)2NH3)2(N0)4.S04 • 2.5H20, Mend.Comm.,2009, v.19, p.253-255.

300. L. Andrew and A. Citra. Infrared Spectra and Density Functional Theoiy Calculations on Transition Metal Nitrosyls. Vibrational Frequencies of Unsaturated Transition Metal Nitrosyls, Chem.Rev., 2002, v. 102, p.885.

301. Алдошин C.M., Фельдман Э.Б., Юрищев M.A. Квантовая запутанность в нитрозильных комплексах железа. ЖЭТФ, 2008, т. 134, вып. 5, N 11, с. 940948.

302. P.W. Anderson, P.R.Weiss, Exchange narrowing in paramagnetic resonance , Review of Modern Physics, 1953, vol. 25, p. 269-276.

303. A. F.Vanin, N.A. Sanina, V. A. Serezhenkov, D. Sh.Burbaev, V. I. Lozinsky and S. M. Aldoshin, Dinitrosyl-iron complexes with thiol-containing ligands:Spatial and electronic structures, Nitric oxide: biology & chemistry, 2007, N16, p. 82-93.

304. Васильева C.B., Санина H.A., Мошковская Е.Ю. и др. Формирование динитрозильного комплекса железа необходимый этап в реализации генетической активности Na2Fe2(S203)2(N0)4., ДАН, 2005, т. 402, № 5, с. 705-708.

305. Persall К.А., Boner F.T. Aqueous nitrosyliron(II) chemistry. Kinetics and mechanism of nitric oxide reduction. The dinitrosyl complex. Inorg.Chem.,1982, v. 21, iss. 5, p. 1978-1985.

306. Lymar S.V., Shafirovich V., Poskrebyshev G.A. One-Electron Reduction of Aqueous Nitric Oxide: A Mechanistic Revision. Inorganic Chemistry, 2005, v. 44, iss. 15, pp. 5212-5221.

307. Poskrebyshev G.A., Shafirovich V., Lymar S.V. Hyponitrite Radical, a Stable Adduct of Nitric Oxide and Nitroxyl, Journal of the American Chemical Society, 2004, v. 126, iss. 3, p. 891-899.

308. Bartberger M.D., Liu W., Ford E., Miranda K.M., Switzer C., Fukuto J.M., Farmer P.J., Wink D.A. Houk KN PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA, 99: 17, 10958.

309. A.F. Shestakov, S.M. Aldoshin, N.A. Sanina, Yu.M. Shul'ga, Theoretical analysis of the mechanism of nitrous oxide release upon the UV irradiation of binuclear sulfur-containing nitrosyl iron complexes, Mendeleev Comm., 2004, № N 1, p.9-10.

310. E. Antonini, M. Brunori, Hemoglobin and myoglobin in the reactions with ligands, in: A. Neuberger, E.L. Tatum (Eds.) North-Holland research monographs. Fronties of biology. North-Holland Publishing company, Amsterdam-London, v.21,1971, p. 276.

311. T.M. Millar, C.R. Stevens, N. Benjamin, R. Eisenthal, R. Harrison, and D.R. Blake, Xanthine oxidoreductase catalyses the reduction of nitrates and nitrite to nitric oxide under hypoxic conditions. FEBS Letters, 1998, v. 427, iss. 2, p. 225228.

312. J.J. Doel, B.L.J. Godber, R. Eisenthal, and R. Harrison ,Reduction of organic nitrates catalysed by xanthine oxidoreductase under anaerobic conditions, Biochim. et Biophys. Acta, 2001, v. 1527, iss. 1-2, p. 81-87.

313. Гетероциклические соединения (ред. P. Эльдерфильд). Ин.Лит.,М., 1961, N 5, р.395.

314. Л.А. Блюменфельд, Соросовский образовательный журнал, 1998, №4, 33.

315. B.B. Зинчук. Участие оксида азота в формировании кислородсвязывающих свойств гемоглобина, Успехи физиол. наук, 2003, т. 34, №2, с. 33-45.

316. M.F. Perutz, Taking the pressure off. Nature, 1996, v. 380, p. 205-206.

317. K.P. Moore and A.R. Mani, Measurement of protein nitration and S-nitrosothiol formation in biology and medicine, Methods in Enzymol., 2002, v. 359, p. 256268.

318. D.L.H. Williams,»S-Nitrosothiols and role of metal ions in decomposition to nitric oxide, Methods Enzymol, 1996, v. 268, p. 299-308.

319. S. Yamada, K. Suruga, M. Ogava, T. Hama, T. Satoh, R. Kawachi, T. Nishio, and T. Oku, Biosci, Appearance of Nitrite Reducing Activity of Cytochrome с upon Heat Denaturation, Biotechnol. Biochem., 2002, v. 66, No. 10, p. 2044-2051.

320. Jones S.P., Bolli R., The ubiquitous role of nitric oxide in cardioprotection, J Mol. Cell. Cardiol, 2006; 40, N 1, p. 16-23.

321. Jugdutt B.I., Nitric oxide and cardioprotection during ischemia-reperfusion, Heart Fail Rev., 2002; 7, N 4, p.391-405.

322. Brune В., Scheneiderhan N, Nitric oxide evoked p53-accumulation and apoptosis, Toxicol Letters, 2003, v. 193, N 2, p. 19-23.

323. H.B. Беда, Т.П. Пименова (Сунцова), А.А. Недоспасов, Проблемы и песпективы молекулярной генетики, Москва: Наука, 2004, N 2, с.237-310.

324. L. Liu, М. Hu-Welliver, S. Kanagula, Н.Е. Pegg, Canser.Res.,2002, v.62, p.30-37.

325. V. Yermilov, G. Rubio, M. Becche, M.D. Freezen, B. Bignatelli, H. Osima, Cancerogenesis, 1995, N16, p.20-45.

326. C.B. Васильева, Е.Ю. Мошковская, H.A. Санина, C.M. Алдошин, Ванин А.Ф.,Трансдукция генетического сигнала нитрозильными комплексами железа. Биохимия, 2004, т.69, N 8, с.1088-1095.

327. S.V. Vasilieva, EJu. Moschkovskaya, A.S. Terekhov, N.A. Sanina, S.M. Aldoshin. «Intracellular iron ions regulate the genetic activity of NO-donating agents». Russian Journal of Genetics, 2006, No.7, 737-743.

328. Васильева C.B., Осипов A.H., Санина H.A., Алдошин С.М., Формирование двунитевых разрывов ДНК в лейкоцитах крови мышей при обработке клеток нитрозильными комплексами железа. Доклады Академии наук, 2007, т. 414. №2, с. 259-262.

329. Olive P.L., Banath J.P,Detection of DNA double strand breaks through the cell cycle after exposure to X - rays, bleomycin, etoposide and 1251 dUrd. Int. J. Radiat. Biol., 1993, v. 64, p. 349 - 358.