Полярографическое исследование металлосодержащих лекарственных средств (тризанол, цисплатин, интропруссид натрия) тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

На правах рукописи

_ с <;»п

О пшЛ 1-5^7

Левнка

Виктория Исааковна

1 У

Лолярографическое исследование кеталлосодержаянх л«кярст«еш5гх средств <*р-.гагяол, 15истшат«н, кнтропруссвд ;татрия)

(Специальность 02.00.03 - органическая химия)

Автореферат диссертации на соисхание ученой степени кандидата химичесхнх наук

»

Москва 1997

Работа выполнена в Центре по химии лекарственных средств (ЦХЛС-ВНИХФИ)

Научные руководители: Доктор химических наук Н.Б.Григорьев Кандидат химических наук Е.В.Дегтерев

Официальные оппоненты: Доктор химических наук, профессор В.П.Гультяй Кандидат химических наук М.С.Гойзман

Ведущая организация: Московская Медицинская Академия им. И.М.Сеченова

Защита состоится 1997 года на заседании диссертационного

совета К.074.53.01 при Центре по химии лекарственных средств (ЦХЛС-ВНИХФИ) по адресу: Москва, Зубовская ул., д.7.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ЦХЛС-ВНИХФИ. Автореферат разослан к/ ¡Г(\ 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат химических наук

Л.А.Савельева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Хорошо известна чрезвычайно высокая значимость ионов некоторых металлов для процессов жизнедеятельности. Около 50% ферментог либо непосрелстэанно содержат металлы, либо металлы требуются для юс гхтивирования.1 Металлы содержатся также а других биологически .»ктивных веществах. Так, классическим примером является участие Мд, Со в качестве структурных эле-

ментов в состава гемоглобина, хлорофилла и витамина со-

ответственно. Существует множество мэтхЛпоферкентоз, таких, как Ре- содержавшие пероксидазы, гп-содержадае карбсангияразы, Мо-со-держатие ксамтикоксидазы и другие, з которых присутствие металла является определял®«« для протеханнд биологических процессов. Так как многие ферментативные реакции протекают именно благодаря металлу, диализ или добавление хелатсобразователей. часто ведет к потере активности, погорая восстанавливается при дальнейшем добавлении номов соответствукгцих металлов. Примерами могут служить 'активируемые магнием, кальцием и марганцем фосфорюттрансферазы, ахтивируемая медью полифенолоксидаза и цинком - щелочная фосфа-таза.

В биологических системах имеются и многочисленные комплексо-образоватеяи: аминокислоты, пептиды, белки, карбоновые кислоты, органические фосфаты, нуклеиновые кислоты и т.п. Таким образом, в биологических системах протекают разнообразные реакции хсмоле*со-образования и перехомплехсоааиия, часто связанные с изменением валентности участвующих з них металлических кснов, что обеспечивает металлолигандныЯ гомеостаз.

Механизм фармакологического действия вводимого в организм металлосодержаиего лекарственного средства может определяться либо функционированием содержащегося в нем иона металла ■ качестве координационного центра, связывающего лигаиды биологического

с

объекта,либо высвобождающимися собственными лигандами, которым ион-комгшексообразователь придает специфические свойства, не присущие этим ионам и молекулам, когда они находятся в свободном виде.

Данная работа объединяет исследование химических и электрохимических превращений трех металлосодерж.ащих препаратов: криза-нола, цисплатина и нитропруссида натрия, - с применением полярографических методов. Цисплатин и кризанол относятся к первому из вышеуказанных типов металлосодержащих препаратов. В отличие от них, комплексное соединение нитропруссид натрия (натрия нитро-зилпентацианоферроат Ыа2 [Ие(СЫ) 5Ш]) относится ко второму типу: оно обязано своим фармакологическим действием не хоиплексообразу-ющему иону Ре2 + , а лиганду ТО+, высвобождаемому в процессе метаболизма, причем ион Ре2+ обеспечивает стабильность нитрозоний-катиона в составе комплексного иона..

Исследование химических и электрохимических реакций перечисленных соединений представляет значительный научный интерес, как для аналитической химии, так и для развития представлений о механизме их фармакологического действия.

Реакция расщепления связи Аа-Б- в анионе (2-гидрокси-З-мер-каптопропан-1-сульфонато)-аурата положена в основу чувствительного и селективного полярографического метода определения содержания основного вещества в кризаиоле, а также определения содер-

яания золота > субстанции и лекформе этого препарата,' представляющего совой смесь (2-гидрокси-3-меркаптопропан-1-сулъфонато)-аурата кальция и глхжоната кальция. Разработанный метод анализа может быть распространен на другие препараты золота, содержащие связь Au-S-: мнокризкн (тномалат дииатрия-золота), солганол (эу-ротиоглюкоза), а также некоторые комплексы золота с третичными фссфинами, применяемые в качестве противоартритных средств.

Исследование каталитического выделения водорода на ртутном капапчем электроде в растворах препарата цисплатин позволило надежно определять в субстанции и лекформе этого препарата токснч-куя гтримесь транс-днакмкнянхлорплатикы. С использованием реакций превращения икс - н транс-днамминдихлорплатины в тетрамминплато-хлорид также оказалось возмозаоа* огреаелять полярографичесхи каждый из изомеров при их совместном' присутствии. Кроме того, имеется возможность полярографического определения обцего содержания платины в препарате. Получены данные, позволяющие распространить методы, разработанные для цисплатина, на другие цитостатические препарате, являющиеся комплексами двухвалентной платины с органическими моно- и бидентатными лигандами.

Нитропруссид натрия Является сильнодействующим гипотензивным средством, оказывагацим• эффект периферической вазодияатации благодаря высвобождению МО (точнее, НО"*). Кроме того, это соединение широко применяется как аналитический реагент.

Принципиально новое использование нитропруссида натрия как аналитического реагента состоит в ток, что разработаны методы определения нитроглицерина и нитрит-аниона по стандарту нитропруссида натрия, а также яитропруссид-аннона по стандарту нитрита

натрия.

состояла в изучении поведения на ртутном хапапцем электроде аниона (2-гидрокси-3-меркаптопропан-1-сульфонато)-аурата (входящего в состав препарата хризанол); цис-диамминдихлорплатины (цисплатина) и ее транс-изомера; нитропруссида натрия (натрия пентацнанонитрозоферроата (II) и некоторых антигипертензивных лекарственных средств и вазодилататоров, фармакологическое действие которых обусловлено генерированием охсида азота по восстановительному механизму.

Для достижения поставленной цели работы регзались следующие задачи:

-изучить способность аниона (2-гидрокси-3-меркаптопропан-1- • сульфонато)-аурата к химическому и катодному (на ртути) восстановлению б различных условиях;

-изучить каталитические токи, возникающие при полярографическом восстановлении цис- и транс- диамминдихлорплатины в различных фоновых электролитах;

-найти условия количественного протекания реакции нитрита натрия и ферроцианида калия с образованием нитропруссид - аниона

-изучить реакции восстановления ряда N0-генерирующих соединений ферроцианилск.

Научная новизна. Впервые показана возможность химического и электрохимического восстановления аниона (2-гидрокси-З-меркапто--пропан-1-сульфонато)-аурата с образованием в первом случае хол-лоидного золота, а во втором - амальгамы золота. На основании этих реакций разработаны методики идентификации и количественного

определения кркэанола.

Впервые обнаружено, что в ряде кислых буферных растворов величины хаталитических токов восстановления водорода на ртутном хапахжцем злактрода г присутствии цнс- и трзчс- лиамммняихлорпла-тилы различаются на два порядка. Показана возможность использования этого свойства каталитических токов для количественного определения транс - диамминдихлорплатшгы и цис-диакминдихлорплатикы при совместном присутствии этих изонаров в соотнесении 1:500.

Впервые найдены условия количественного образования нитро-ггруссид-акион* при реакции нитрита натрия с ферроцианидом калия. Установлена также возможность образования нитроггруссид- аниона при восстановлении нитроэфироз и Я-иитропиразолов ферроцнзнидом калия. Для нитроглицерина получены количествен:!!:« результаты.

Впервые показана возможность доказательства восстановитель -ного характера биотрансформации некоторых из веществ-вазсдилата-торов, действие которых основано на высвобождении N0, на основании регистрации образования нитропрусеид-аниона при их реакции с ферроцианидом калия.

Практическая значимость. На основании полученных результатов разработаны методика идентификации кризанола в субстанции и методики его количественного определения в субстанции и лекформе; разработаны методики количественного определения примеси транс-диамминдихлорплатины в субстанции и лекформе цисплатина, в том числе - не требующие применения стандартов. Данные методики отличаются значительно меньшей трудоемкостью по сравнению с общепринятыми при сохранении необхогнмой селективности и воспроизводи-

е

мости.

Разработанные методики количественного определения нитроглицерина, с применением и без применения стандарта, пригодны для анализа лекарственных форм.

Количественная реакция нитрит-аниона с ферроцианидом калия может быть использована для количественного определения нитрит-и нитропруссид-аниона без использования стандарта.

Внедрениев практику. Все разработанные методики анализа вышеназванных препаратов внедрены в аналитическом отделе ЦХЛС-ВНИХФИ. Методики определения подлинности и количественного определения кризанола в субстанции введены в нормативную документацию (Фармакопейная статья ФС-42-2338-91. Кризанол.).

Апробация работы. Результаты исследования доложены на Мос-, ковском семинаре по органическому анализу (ИНЭОС) в 1994г., на международном симпозиуме по электрохимии (Москва, 1995г.), и на коллоквиумах ЦХЛС-ВНИХФИ.

Цубликачии. По материалам работы опубликовано пять статей. Опубликованы также тезисы докладов на международном симпозиуме по электрохимии (Москва, 1995), на международном конгрессе по фармацевтической химии (Иерусалим, 1996), а также реферат доклада на Московском, семинаре по органическому анализу. Получено авторское свидетельство на анализ кризанола.

Положения, выносимые на защиту: '

-результаты исследования восстановления кризанола химическим и электрохимическим методами;

-методики качественного и количественного анализа кризанола;

-результаты исследований каталитических токов выделения водорода на ртутной капающем электроде в присутствии изомеров диаммин-дихлорплатины в различных фоновых электролитах;

-методики количественного определения примеси транс-диамминди-хлорплатикы а цнсплатине по каталитическому току выделения водорода -результаты исследований реакции нитрита натрия с ферроциани-дом калия;

-иетодихи количественного полярографического определения нитрит-аниона, нитропруссид-аниона, а также нитроглицерина без использования стандартов;

-результаты исследования реакции ферроцианида калия с некоторыми производными N-иитропкразолов.

Материалы и методы исследования. Использовались субстанции и лекарственные формы кризанола, цисплатина, нитроглицерина, изосор-бида мононитрата и нитроссрбида (1,4,3,6-днангидро-0-сор5ита-5-мо-нонитрата и 2,5-динитрата соответственно), отвечающие требованиям НТД, а тахже химичесхие реактивы марки х.ч. Образцы 1-нитропиразо-лов были синтезированы в ИОХ РАН. Постояннотоковые полярогракмы снимались на полярог-рафах Radelkis ОН-105 и PAR-170, дифференци-альноимпульсные - на полярографах PAR-170 и ПУ-1.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, четырех глав, содержащих описание методов эксперимента, обзор литературы, изложение экспериментальных результатов, их обсуждение, описание разработанных методик анализа, и выводов.

Объем работы - страниц машинописного текста; рисунков -

30, таблиц - 11 , библиография аклочает 198 наименований.

аниона 12 -гидрокси-1-меркагстопропаи-1-еульфондто>- аурата и

Отечественный препарат хризанол, предназначенный для лечения ревматоидного артрита, представляет собой смесь 70% кальция (2-гидрокси-3-меркаптопропан-1-сульфонато)-аурата (I) и 30% кальция глюконата.

В данной работе для количественного определения (I), как в субстанции, так и в лекарственной форме кризанола, предложен метод постояннотоковой полярографии, котсрый введен, наряду с гравиметрическим методом, в действующую фармакопейную статью ФС-42-2338-91. Предложенный метод строго специфичен.

Было установлено, что соединение (I) может быть восстановлено как химически, так и электрохимически на ртутном капающем электроде. Восстановление цинком происходит по схеме:

1/2 + Аи-3-СН2-СН(0Н)-сн2-303_ - Аи° +

+ 'б-сн2-сн(он)-сн2-зо3* + 1/2 гп2* (1)

Были подобраны оптимальные условия проведения данной реакции в кислой среде, что позволило включить ее как реакцию установления подлинннс^ти кризанола в "фармакопейную статью ФС-42-2338-91 (появление бурой окраски • выделяющегося коллоидного золота). В щелочной среде восстановление проходит количественно, и образующийся анион "тиола" может быть обнаружен по анодной полярограмме. Таким образом, показана возможность количественного опредс^-гния соединения (I) методом алодной полярографии.

Из экспериментальных данных следует, что электрохимический процесс состоит в необратимом расщеплении связи да-Э по схеме: Аи-3-СН2-СН(0Н)-СН2-303"+е-- Аи(Нд) + *3-СН2-СН(0Н)-СН2-303" (2)

Как видно из приведенной сэсеми реакции, на электроде разряжается отрицательно заряженная частица, поэтому при ее разряде наблюдались эффекты, связанные с электростатическим взаимодействием в двойном слое. В целок экспериментальные данные для соединения (I) находятся в качественном соответствии с теорией замедленного разряда для случая электровосстановления анионов: на полдрогракмах отмечаются "области торможения реакции восстановления (2), которое выражено тем сильнее, чем ниже концентрация фонового элехтролитз (рис.1) и чем меньше адсорбируемссть хатиона фона.

Рис.1. Влияние концентрации фонового электролита На торможение восстановления аниона (2-гидрохси-3-меркаптопропан-1-сульфонато)--аурата на ртутном капельном электроде: 1,2,3 - 0,ЗМ ацетатный буферный раствор, рН 4,7; 1',2',31 - ХМ ацетатный буферный раст5ср, рН 4,7. Концентрация аниона: 1,1' - 2-10"1М; 2,2' -4-10"4Ч; 3,3' - 8-10"4М.

0,6

(р -Е) в{насх,$.}

0> 2

Из вышеизложенного следует, что неискаженные полярограммы иогут быть получены лишь в достаточно концентрированных растворах фонового электролита. При разработке аналитической методики бьш выбран 1М ацетатный буферный раствор с рН 4,7, в котором торможение восстановления с ростом отрицательного потенциала выражено весьма слабо и предельный ток пропорционален концентрации деполяризатора в широкой области концентраций. Потенциал полуволны в этих условиях составляет -0,35В (нас.к.э.). Для повышения точности определения фиксируется высота волны при постоянном значении потенциала (-0,6В). Метрологические характеристики разработанной методики следующие: Зо=0,408 и=6,tp_0)95=2,57); г=0,9999; а=0,300; Ъ=1030; $х=4,234-Ю"4; х=0,054;

1,088-10

-3.

£=2,0%. Результаты количественного определения

содержания соединения (I) в пересчете на золото, проведенного весовым и полярографическим методами, даны в таблице 1.

Таблица 1

Сопоставление результатов полярографического и весового методов анализа кризанола.

N серии кризанола

Содержание соединения (I) в пересчете на золото(%),

найденное: весовым I полярографическим методом методом

Относительная ошибка полярографического

метода,%

,04.04.90

05.05.90

07.08.90

08.09.90

Соединение (X)

34,0 34, 0 33,6 34, 0

49,9

33, 5 34,0 33,5 33,8

50,0

1,47 0,0 0,29 0,59

0,2

Установлено, что лекарственная форма кризанола, представляющая собой 5% взвесь субстанции в персиковом масле, может быть проанализирована количественно тем же методом, что и субстанция. Для этого требуется лиэь предварительно перевести соединение (I) из масляной суспензии в водную фазу, а затем отделить водный раствор от масла. Для ускорения растворения в водную фазу добавляется 0,05% раствор трнлона Б. Данная методика была проверена на искусственных смесях кризанола со сливовым маслом, моделирующих состав лекарственной формы хрнзанола. Результаты этой проверки (э пересчете на золото) представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты полярографического анализа модельной смеси кризаиол-сливовое яасло (в пересчете на золото)

Введено соединения (I) IНайдено соединения (I)[Относительная

а составе кризанола, г | г |опибха, %

0,01294 0,01260 2,6

0,02584 0,02573 0,4

0,03381 0,03828 1,4

0,04203 0,04171 • 0,8

0,05175 0,05186 0,2

Данные таблиц 1, 2 показывают, что предлагаемая полярогра-ическая методика может с успехом конкурировать с весовым методом пределения золота в случае субстанции и со спектрсфотсметри-еским в случае лекарственной форма.

Разработка метода количественного определения примеси транс-диамминдихлорплатины в иис-дидмминдихлорплатине на основе измерения каталитических токов выделения водорода В противоопухолевом препарате цисплатине - цис-диаммкндихлор-платине (цис-ДДП) регламентируется содержание примеси транс- изомера - более токсичной и цитостатичесхи неактивной транс-диамминдихлорплатины (транс-ДДП), появляющейся в преперате в результате фотохимической изомеризации при несоблюдении технологии производства или условий хранения,

Основное внимание в настоящей работе уделено исследованию полярографического поведения цис-ДДП и транс-ДДП в области потенциалов каталитического выделения водорода на предельном токе разряда платины (II) с целью определения возможности применения постояннотоковой полярографии для количественного определения примеси транс-ДДП в цис-ДДП при содержании первой менее 1 % .

Оказалось, что в слабокислых буферных системах, таких, как ацетатные и цитратно-фосфатные (при рН 4-5), оба изомера в одной и той же области потенциалов (от -1,2 до -1,7 В отн. нас.к.э.) дают каталитические волны, для которых потенциал полуволны на 300-400 м! положительнее потенциала разряда фонового электролита, причем токи, возникающие в растворах транс-ДДП, превосходят токи, возникающие в растворах цис-ДДП той же концентрации, не менее, чем на 2 порядка. Наиболее удобные для аналитических целей и соизмеримые величины каталитических токов обеспечиваются в 1 М ацетатном буферном растворе при концентрации 10~6 - 10~5 М цис-ДДП и 10'8 - Ю"7 М транс-ДДП.

Каталитические токи для обоих веществ в указанных условиях не выходят на предельные значения, однако в присутствии транс-ДДП наблюдается максимум при потенциале около -1,65 В (нас.к.э.). Именно измерение токов при потенциале указанного максимума транс-ДДП удобно использовать для аналитических целей.

Было установлено, что в широких интервалах концентраций токи для обоих изомеров являются диффузионными и линейно зависят от концентрации, суммарный ток 1 равен сумме токов а растворах индивидуальных изомеров (3.1^+12).

Наблюдавшиеся величины каталитических токов не определяются однозначно значениями рН растворов, а зависят от анионного состава и ионной силы. Токи растут как с уменьшением рН, так и с ростом концентрации электролита фона.

Благодаря тому, что выполняется условие аддитивности каталитических токов обоих изомерсз, возможно их раздельное определение, несмотря на совпадение интервалов потенциалов, при которых эти токи наблюдаются. Исходя из указаннчного условия, получены формулы:

X = (Ъ-Ъ2) / <Ъ1-Ь2> (1) и х-1Ь-Ь2> /К^ (2),

где х- доля в смеси транс-ДДТ, величины Ь^ и Ь2 характеризуют линейные зависимости тока от концентрации для транс-ДДП и цис-ДДП, соответственно, К1=Ь1/Ь2. Величина Ь характеризует линейную зависимость предельного тока, наблюдаемого в смеси, от ее концентрации (1=Ъ-С), и может быть определена графическим путем, аналогично Ь^ и Ь2, посредством измерения предельного тока при нескольких разбавлениях смеси (рис. 2).

Рис.2. Семейство калибровочных графиков, рассчитанных для капилляра с параметрами ш»0,48мг/с, х «0,27с, в зависимости от поли транс- ДЦП, находящейся в смеси с цис-ДДП. Засггрихована область наклонов, соответств'уючих допустимому содержанию транс-ДДП в цисплатине.

Использование формулы (1) требует наличия стандартов обоих изомеров, а формулы (2) - лишь одного из них, так как ввиду независимости отношений диффузионных токов от параметров капилляра величина К^- постоянная, приблизительно равная 150. Результаты определений по формуле (1) с использованием двух стандартов представлены в таблице 3, а результаты определений по форяуг.а (2) с использованием одного стандарта - в таблице 4.

Таблица 3

Результаты определения содержания транс-ДДП в цис-ДДП по двум

стандартам

Введено транс-ДДП (%) Кол-во определений , п Среднее значение х (V) Стандартное отклонение единичного определения Э

1,96 6 1,98 0, 049

1, 57 7 1,57 0, 034

1,19 7 1.19 0, 028

0, 794 7 0,80 0, 036

0,398 7 0, 40 0,029

0, 200 7 0,20 0,025

Таблица 4

Результаты определения содержания транс-ДЦП в цис-ДДП по одному

стандарту

Введено транс-ДДП (%)

Кол-во определений, п.

Среднее значение х (%)

Стандартное отклонение единичного определения

1,96 1,57 1,19 0,794 0,398 0,200

1,91 1,55 . 1,16 0,79 0,39 0,19

0,095 0,076 0, 075 0,056 0,031 0,023

При растворении обоих изомеров в концентрированном растворе аммиака образуется один и тот хе продукт- тетрамминплатохлорнл tPt (1Ш3) 4]С12, (ТАПХ) , также дающий каталитические волны в«;;-?ле-ния водорода, сбладаяциэ теми же свойствами, что и каталитичггт-

кие волны в растворах цис- и транс-ДДП. Установлена возможность применения растворов ТАПХ в качестве стандарта для полярографического определения примеси транс-ДДП в цнсплатине с применением формулы: х»(К2-Ь3/Ь) / (Кд^Ъз/Ъ) (3), где К2сЬз/ь2' ^3" за" висимость тока от концентрации в растворах ТАПХ, а остальные обозначения имеют прежние значения. Х2 приблизительно равна 36. Результаты определений по формуле (3) даны в таблице 5.

Таблица 5

Результаты определения транс-ДДП в цис-ДДП с использованием в качестве стандарта раствора ТАПХ

Введено транс-ДДП

Кол-во опред.

Средкео значение х (%)

Стандартное отклонение единичного определения

1,96 1,57 1.19

0,794 0,398 0,20

2,12 1,72 1,31 0,910 0,472 0,26

0,175 0,11 0,077 0,065 0,053 0,046

Разработанные четыре методики пригодны для определения транс-ДДП в присутствии цис-ЯДП, в том числе в лекарственной форме цисплатина, при минимальном соотношении первого и второго 1:500.

Кроме того, применение в качестве стандарта растворов ТАПХ позволяет определить содержание в препарате "общей' платины, вне зависимости от содержания транс- изомера.

В данной работе подобраны условия проведения двух реакций, которые могут быть использованы для количественного определения нитроэфиров, иитрит-аниона, нитропруссил-аинона, а также зля прогнозирования биологической активности к^иоторых потенциальных вазсаилататоров, генерирующих НО при восстановлении.

В слабокислых иебуфериых растворах (1-5'10'^М хлористоводородной ккс.'.оты) на подпрограммах нитроэфиров, хроме основной в олкы 1

R0W02 + 2е" + н20 ROH + ОН- + N02", (3),

обнаруживается вторая одноэлектронная необратимая золна, соответствующая восстановлению нитрит-аниона, образующегося на первой стадии восстановления нитроэфира (рис.3):

ко2" + 2Н + + е" -»-КО + н20 (4)

Эта волна может быть осно:"'"' для количественного определения нитроэфиров по стандарту нитрита натрия с учетом различия з коэффициентах диффузии соответствующего эфира и нитрит-аниона (азотистой кислоты). Однако, на точность- определения влияют побочная реакция диспрспорционирования:

ЗНЖ>2 2N0 + HNO^ + Н20, (5)

а также примеси. Например, а присутствии многовалентных катионов происходит изменение механизма реакции, и нитрит восстанавливается до гидроксиламина. Тем не менее, реахция (4) может быть использована для доказательства деструктивного восстановления кит-

рогруппы в соединениях вида R-ON02, RNNOj и RC-N02.

Второй способ анализа и исследования N0-генерирующих вазоди-лататоров основан на обнаружении возможности количественного протекания реакции ферроцианида калия с нитрит-анионом по схеме: НШ2 + tPe(CN)6]4" --> {Fe(CN)sN0J2~ + СИ" + ОН". (6). По количеству электрохимически активного нитропруссид-анио-на, образующегося в данной реакции, возможно количественное полярографическое определение ках нитрита, так и нитропруссида натрия без использования стандартов данных веществ.

Установлено, что нитроэфиры (нитроглицерин, эринит, 1,4,3,6-диангидро-D-сорбита 5-мононитрат, 1,4,3,б-диангидро-О-сорбита 2,5-динитрат, ) также реагируют с ферроцнанндом калия, восстанавливаюсь до нитрит-аниона:

RONOj + [Fe(CN)6]4" + H+-->R0H + HN02 ♦ [Fe(CN)6]3" (7), и далее протекает реакция (6).

В случае нитроглицерина реакция (7) протекает количественно, и процесс, описываемый реакциями (7,6), может Быть применен для количественного определения, с использованием в качестве стандарта нитропруссида или нитрита натрия (рис.3).

Кроме аналитического применения, . реакции (3,4,6,7) могут быть использованы для прогнозирования in vitro биологической активности потенциальных вазодилататоров.

Данные методы были проверены на примере класса 1-нитропнра-золов. Показано, что на полярограимах 1-нитропиразола, 1-нитро-З-метилпиразола и 1-китро-З,5-дин&тилпиразолг икается волна, совпадающая по величине Ejy2 с волной шггрнт-алиона, а при реакции с

_I_I_i_I_i_

0 Op ot$

-£, В (наскэ)

Рис.3.Дифференциально-импульсные полярограммы в. цитратно-фосфатном буферном растворе: 1 - нитропруссида натрия (10~'М), 2 нитроглицерина (1,1-10"4М), 3 - нитроглицерина (3,7-10 М) после прогрева с ферроцианидом калия (2'10'^М) .

ферроцианидом калия образуется нитропруссид-анион. При этом по величине рН, необходимого для протекания реакции, и количеству образующегося нитропруссида можно судить о сравнительной активности исследуемых соединений как источников N0. Установлено, что наиболее активным из исследованных соединений является 1-нитро--3, 5-диметилпиразол,- Показано, что 1-китропиразолы, подобно нитроглицерину, реагируют с цистеином, восстанавливая его до цисти-на; при этом максимальная скорость реакции тахже наблюдалась для 1-нитро-З,5-диметилпиразола.

Совокупность полученных данных указывает на сходство в химическом поведении 1-нитропиразолов и эфиров азотной кислоты. Это позволяет сделать вывод о перспективности поиска антигипертензив-ных лекарственных средств в ряду 1-ннтропиразолов. Зто подтверждается также Ьиохимичесхики и фармакологическими данными: 1-нит-ро-3,5-диметилпиразол активирует фермент растворимую гуанилатцик-лазу (биохимические исследования проведены в Институте медицинской и биологической химии про£. К.С.Севериной!, и, кроме того, обладает спазмолитической активностью (установлено в лаборатории фармакологии ВНИХФИ).

ВЫВОДЫ

1.Установлено, что при химическом и электрохимическом восстановлении аниона (2-гидроксн-3-мерхаптогфопан-1-сульфо;1ато)-ау-рата (I) происходит разрыв связи Аи-Э с образованием в первом случае коллоидного золота, а во втором - амальгамы зелота.

2.На основании исследования механизма электрохимического восстановления (I) разработаны прямые полярографические методики определения (I) как в субстанции, так и в лекарственной форме кризанола.

3.Показано, что в ацетатных буферных растворах, содержащих цис- и транс-диамминдихлорплатину., наблюдаются каталитические токи водорода I рода, причем величины токов для исследованных изомеров различается на даа порядка. разработаны методики определения пригаси транс-вианмккдихлорплати в субстанции и лекформе цисплатина при соотношении содержание изомеров 1:500.

'4.разработала метевнха количественного определения транс-ди-амкиндшиюрплзтхгси в субстанция к лекформе цкеппатина без пркке-

нения стандартов изомеров, с использованием в качестве стандарта получаемых растворов тетрамминплатохлорида, при соотношении содержания изомеров 1:500.

5.Предложены методики количественного определения нитрит-аниона и нитроглицерина с использованием в качестве стандарта ни-тропруссида натрия, а также методика количественного определения нитропруссидвниона с использованием в качестве стандарта нитрита натрия.

6.На основании изучения реакций электровосстансгления нитро-эфиров и их восстановления ферроцианидсм калия предложен метод прогнозирования биологической активности НО-генерирукцих органических соединений, биотрансформация которых с выделением N0 основана на химичосхсм или биохимическом восстановлении. Предложенный метод получил оппонирование на примере трех производных 1-нитро-пнразолов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.Левина В.И., Григорьев Н.Б., Дегтерев З.В. Количественное определение кальция(2-гидрой.и-З-меркаптопропан-1-сульфснато)-ау-рата в хризаноле полярографическим методом // Хим.-фарм. журнал. - 1994.-Т.28.- N 4. - С.58-61.

2.Левина В.И., Григорьев Н.Б., Дегтерев Е.В. Полярографическое определение примеси транс-дихлордиакминплатнны в цисплатине с использованием каталитических токов водорода на ртути и стандартных растворов// Хим. -фарм. журнал. - 1995.-Т.29.-N6. - С.47-50.

3.Левина В.И., Григорьев Н.Б., Дегтероэ Е.В. Полярографическое определение примеси транс-дихлорди»кминллатины в цисплатине с

использованием каталитических токо» водорода на ртути и без применения стандартов//Хим.-фарк.журнал.-19S5.-Т 29.-N 6.- С.50-51.

4.Левина В.И., Григорьев Д.А., Григорьев Н.Б. Использование реакции образования иитропруссид-кона для непрямого полярографического детектирования соединений, генерирующих окись азота // Хим.-фарм. журнал. - 199S. - Т.29.- Кв. - С.56-59.

5.M.B.Grigoryev, V.I.Levina, S.A.Shevelev, I.L.Dalinger, V.G.Granik. N-nirtopyrazoles, a new source of nitrogen monoxide. // Mendeleev communications. - 1996. - N1. - p.11-12.

6.Авторское свидетельство И 1821722. 1992г.В.И.Левина, Н.Б.Григорьев. Е.В.Дегтерев, И.К.Полиевктоа. "Способ количественного определения кальция(2-гидрокси-3-меркаптопропаи- 1-сульфона-то)-аурата".

7.Фармакопейная статья ФС-42-2338-91. Кризанол.

8.N.B.Grigoryev, V.I.Levina. Estimation of biological activity of NO-generating substances using electrochemical methods.// 6 th International Frurekin Symposium • Fundamental aspects of electrochemistry". Abstracts. Moscow. -1995.- p,176.

9.Григорьев Н.Б., Левина B.H. Оксид азота(И) в организме: аналитическое определение". Реферат доклада на Московском семинаре по органическому анализу.//ЖАХ.-1995. - Т.50. N8. - С.895-896.

10.N.B.Grigoryev, V.I.Levina, В.V.Degterev, A.P.Arzamastsev. Polarographic assay of cis-, trans-dianainedichloroplatinvoa and total Pt in cisplatin. // World congress of Phanaacy'96. Jerusalem.-1996.-p.172.

Отпечатено: БШЯ Cikir зах. 14 тир. ЗОэкз.