Синтез ингибиторов сульфатазы эстрона тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

^ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

--"оаьь'9

ГЛУЗДИКОВ Иван Александрович СИНТЕЗ ИНГИБИТОРОВ СУЛЬФАТ АЗЫ ЭСТРОНА

Специальность 02.00.10 - биоорганичсская химия

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Санкт-Петербург 2007

003068669

Работа выполнена на кафедре химии природных соединений химического факультета Санкт-Петербургского государственного университета.

Научный руководитель:

доктор химических наук, профессор Шавва Александр Григорьевич

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, вед. н. с. Шеиин Юрий Дмитриевич доктор биологических наук, вед. н. с. Пиотровский Левон Борисович

Ведущая организация:

Институт биоорганичсской химии им. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова

Защита состоится 26 апреля 2007 г. в 15 часов на заседании диссертационного совета Д 212.232.28. по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: 199004, Санкт-Петербург, Средний пр., д. 41/43, (БХА).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского государственного университета (Санкт-Петербург, Университетская наб., д. 7/9).

Автореферат разослан марта 2007 г.

Ученый секретарь лд

Диссертационного совета / /А. Ф. Хлебников/

'' /

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Среди онкологических заболеваний рак молочной железы (РМЖ) является наиболее частой причиной смерти у женщин в западном полушарии. В одной трети случаев опухоли молочной железы демонстрируют эстрогенозависимый характер роста. Некоторые исследователи полагают, что не только развитие, но и возникновение злокачественных новообразований вызывается или опосредуется эстрогенами, а также их метаболитами. Анализ мировой научной периодики и патентной литературы позволяет сделать вывод о колоссальных усилиях, прилагаемых к разработке средств профилактики и лечения РМЖ.

Блокирование биосинтеза эстрогенов позволяет снизить их стимулирующее воздействие на опухоль. Однако такой подход имеет ряд существенных недостатков. Во-первых, значительное снижение гормонального уровня может привести к развитию различных дисфункций и заболеваний. Во-вторых, сложно добиться необходимого эффекта, учитывая, что внутритканевая (и внутриопухолевая в том числе) продукция и накопление стероидных гормонов меняются в широком диапазоне.

Альтернативный подход к решению проблемы заключается в разработке препаратов, ингибирующих отдельные стадии биосинтеза и метаболизма стероидов. Так, сульфатаза эстрона (Е-СТ) превращает гормонально неактивные сульфаты эстрогенов в активную свободную форму. Применение веществ, блокирующих этот процесс, способно замедлить рост опухоли, опосредуемый эстрогенами. В последние годы было опубликовано большое количество научных работ, посвященных поиску ингибиторов ЕСТ, и сообщалось о синтезе нескольких перспективных соединений. Основной трудностью при создании таких препаратов является достижение высокой ингибирукяцей активности при минимуме гормональной активности.

Мы обратили внимание на то, что подавляющее большинство известных ингибиторов Е-СТ принадлежат к природному ряду стероидных гормонов. Представители других стереохимических рядов, предположительно, могут обладать улучшенным соотношением биологических свойств, поэтому синтез ингибиторов Е-СТ на их основе представляет значительный интерес.

Целью диссертационной работы является синтез ингибиторов Е-СТ на основе аналогов стероидных эстрогенов с неприродным сочленением и/шти размером колец, обладающих пониженной утеротропной активностью по сравнению с природными эстрогенами. Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи исследования:

1. Синтезировать З-О-сулъфаматы 8ге-, /)-гомо-8а-, £>-гомо-В-кор-8а- и 6-окса-Д-гомо-8а-эстра-1,3,5(10)-триен-17(17а)-онов, а также производные Д-гомоэквиленина, и исследовать их ингибирующую активность по отношению к сульфатазе эстрона

2. Разработать способ синтеза производных £>-гомоэквиленина с различным сочленением колец и изучить их строение методами спектроскопии ЯМР и рентгеноструктурного аначиза.

3. Предложить критерии определения характера сочленения колец в анатогах й-гомоэквиленина на основании данных спектроскопии ЯМР.

Научная новизна. Синтезированы новые 3-0-сульфаматы 8а-, £>-гомо-8а-, £>-гомо-Я-нор-8а- и 6-окса-£>-гомо-8а-анатогов стероидных эстрогенов, получены данные об их ингибирующей активности по отношению к сульфатазе эстрона. Изучено стерическое направление реакции «торговских» 1)-гомоэстрапентаенов, содержащих мегильные группы при С-16, с никелем Ренея. Предложен способ синтеза аналогов £>-гомоэквиленина с различным сочленением колец. Проведено полное отнесение сигначов в спектрах ЯМР 'Н и 13С .О-гомоанаюгов эквиленина и выявлены критерии, позволяющие легко определять характер сочленения колец подобных соединений методом ЯМР-

спектроскопии. Исследованы особенности строения некоторых аналогов £)-гомо-13а-эквиленина в растворе и кристалле.

Практическая ценность. Синтезированные аналоги стероидных гормонов расширяют базу данных по связи структура - активность ингибиторов сульфатазы эстрона. Получены соединения, ингибирующие гидролиз сульфата эстрона в опытах на клетках хориокарциномы линии JEG-3. Учитывая, что исходные вещества для синтеза целевых ингибиторов обладают пониженной утеротропной активностью, такие препараты перспективны при поиске средств для лечения и профилактики РМЖ.

Положения и результаты, выносимые на защиту:

1. Синтез ингибиторов сульфатазы эстрона на основе аналогов стероидных эстрогенов с неприродным сочленением и/или размером колец, обладающих пониженной эстрогенной активностью по сравнению с природными эстрогенами.

2. Способ синтеза производных £>-гомоэквиленина с различным сочленением колец, приемлемый для решения поставленных задач.

3. Выявление критериев, позволяющих относить к тому или иному стереохимическому ряду аналоги D-гомоэквиленина по данным *Н и 11С ЯМР-спектроскопии.

4. Особенности строения 3-метокси-16,16-диметил-£>-гомо-13а-эстра-1,3,5(10),6,8-пентаен-17а-онаи метилового эфира 16,16-диметил-£>-гомо-В-нор-8а-эстрона в кристалле и растворе.

Апробация работы. По теме диссертации опубликовано 4 статьи. Результаты исследования представлены на III Национальной конференции РСНЭ (Москва, 21-25 мая 2001 г.), Ill Международной конференции молодых ученых «Органический синтез в новом столетии» (Санкт-Петербург, 24-27 июня 2002 г.), Международной конференции «Proceedings of Vll-th international workshop on magnetic resonance spectroscopy, tomography and ecology» (Rostov-on-Don, Russia, 10-16 September 2004), IV Международной конференции молодых ученых по органической химии «Современные тенденции в органическом синтезе и проблемы химического образования» (Санкт-Петербург, 27-30 июня 2005 г.).

Структггт и объем работы. Диссертация изложена на 211 стр. и состоит из обзора литературы, обсуждения полученных результатов, экспериментальной части, выводов, списка цитированной литературы и приложения.

В обзоре литературы рассмотрены наиболее важные работы, посвященные структуре и свойствам сульфатазы эстрона. Подробно обсуждаются предложенные ингибиторы Е-СТ, вероятные механизмы их действия, взаимосвязи структура -биологическая активность, побочные эффекты.

В главе «Обсуждение результатов» обоснован выбор целевых соединений, необходимых для решения поставленных задач, рассматриваются схемы их синтеза, обсуждаются данные по определению пространственного строения и биологической активности полученных веществ.

Диссертация содержит 7 схем, 25 рисунков и 6 таблиц, список литературы состоит из 224 наименований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

IПримечание: для удобства в автореферате нумерация соединений соответствует таковой в диссертации.

Чистоту определяли методом ВЭЖХ, для целезых веществ она составляла не менее 97%. Строение новых соединений было установлено на основании данных спектроскопии ЯМР 'Н и 13С, масс-спектрометрии и результатов элементного анализа.

1. Синтез ингибиторов Е-СТ на основе аналогов Р-гомоэквилешша

Мы синтезировали сульфаматы ряда £>-гомоэквиленина, учитывая, что |£эквиленин не обладает канцерогенными свойствами и предложен в качестве средства профилактики карциномы молочной железы.

Известно, что одновременное расширение кольца £> и введение метильных групп в положения 2, 16 или 17 стероидных эстрогенов приводит к снижению гормональной активности соединений, топология которых сходна с топологией природного гормона эстрадиола. Известно, что наличие мегильных групп может уменьшить риск метаболического гидроксилирования по указанным положениям, которое рассматривается многими исследователями как один из факторов возникновения и развития новообразований. Это определило выбор соединений 4 -7.

Синтез стероида 4 представлен на схеме 1.

СХЕМА 1.

Таблица 1

Ключевая стадия для получения аналогов £>-гомоэквиленина - взаимодействие «торговских» эстрапентаенов с никелем Ренея. Такой подход удовлетворяет требованию доступности исходных соединений и позволяет избежать применения дорогостоящих реактивов и аппаратуры. Реакцию проводили в апротонном растворителе, чтобы снизить вероятность гидрирования системы двойных связей. Выходы целевых соединений на стадии взаимодействия с никелем Ренея составляли 50 -75%.

Мы провели полное отнесение сигналов в спектрах ЯМР 'н и 13С соединения 26 (таблица 1), так как в литературе отсутствуют такие данные для производных .О-гомоэквиленина.

Сульфаматы аналогов стероидных гормонов получали по методу Окада, действуя сульфамоилхлоридом на соответствующие фенолы в Ы,К-диметилацетамиде (ДМАА). Стероид 4 был синтезирован с выходом 63%.

Синтез 3-0-сульфамоилокси-17,17-диметил-£)-гомоэстра-1,3,5(10),6,8-пентаен-17а-она 5 представлен на схеме 2.

Номер атома "С 'п.* ч„

! 124.18 7.75

2 128.08 - -

Л 156.05 - -

4 104.60 7.06

5 131.70 - 1 -

6 124.75 7.611

7 123.35 7.37

8 131.44 - -

9 129.22 - -

10 126.93 -

11 22.79 3.12 3.27

12 29.03 1.83 2.37

13 45.86 - -

14 46.36 2.94 -

15 23.58 1.89 2.51

16 25.46 1.90 2.33

17 36.75 2.38 2.80

17а 215.52 - -

18 15.60 1.05

2-Ме 17.10 2.44

-ОМс 54.99 3.95

Обработка соединения 33 йодистым метилом в присутствии гидрида натрия привела к образованию смеси стероидов 34 и 35 в соотношении 1 : 7.7, идентифицированных, на основании данных спектроскопии ЯМР 'Н. Такой результат можно объяснить атакой гидрид-лона по карбонильной группе и последующим метилированием образовавшегося алкоголята. Смена основания на трет-бутилат калия позволила получить соединение 36 с выходом 74 %.

Сульфамоилирование стероида 37 проводили в условиях, аналогичных получению соединения 4, выход соединения 5 - 67%.

Синтез 3-0-сульф&моилокси-16,16-диметил-£>-гомоэстра-1,3,5(10)Д8-пентаен-17а-она 6 и 3-0-сульфамоилокси-16,16-диметил-0-гомо-13а-эстра-1,3,5(10),6,8-пентаен-17а-она 7 представлен на схеме 3.

Восстановление кетогруппы эстрапентаенона 38 действием боргидрида натрия в диоксане привело к образованию смеси 17аР-спирта 39 и 17аа-спирта 40 в соотношении примерно 1.3:1. Отсутствие стереоселективности процесса вызвано н&чичием двух метальных групп при С-16, сильно экранирующих положение 17а. Полученные эпимерные спирты разделяли хроматографией на колонне с силикагелем.

Реакция никеля Ренея с эстрапентаеноном 38 приводит к соединениям природного (13р) ряда. Подобный результат наблюдается и в случае эстрапентаенов, не содержащих метальных групп при С-16 . Из соединения 41, имеющего экваториальную ацетильную группу, в аналогичных условиях образуется смесь эпимерных по атому С-13 стероидов в сопоставимых количествах.

В случае аксиачьного ацетата 42 реакция проходит стереоселективно, приводя к £>-гомо-13а-аналогу эквиленина 47.

Совокупность полученных результатов позволяет заключить, что стерическое направление реакции субстратов подобного строения с никелем Ренея определяется, в первую очередь, ориентацией заместителя при С-/7а, экранирующим а- или р-сторону молекулы.

Схема 3. он оас

Синтез и полное отнесение сигналов в спектрах ЯМР 'Н и 13С четырех изомерных ацетатов 16,16-диметил-£)-гомодигидроэквиленина позволило проБесги сравнение величин химических сдвигов сигналов протонов этих стероидов. Из данных,

представленных в таблице 2, видно, что для соединений, имеющих транс-сочленение колец СиВ (45 и 51_), сигнал атома водорода при С-7находится в области 7.40 - 7.50 м. д. (СОС13), а для /За-аналогов (46 и 47) в области 7.10 - 7.20 м. д. (СЭСЬ). В спектрах ЯМР 13С достоверная разница величин химических сдвигов (ХС) наблюдается для сигналов атомов С-7 и С-8, принадлежащих соединениям с различным сочленением колец. Это позволяет рекомендовать величины ХС указанных атомов в качестве критериев для определения характера сочленения колец в аналогах £>-гомоэквиленина по спектрам ЯМР 'Ни13С.

Таблица 2. X нмичбекие «дквгм ядер в еиямрахЯМР **С к *Н мед и не« и й 45,46. 47 и Я (8, м.д.)

45 4a i..... 4?

с \ II* H» с 11- ] H" 1 ïr* H' i t- H* II»

лкима \ \ |

I 7.SJ Ui3!i 7.S7 j 124.45 7SS j 124.64 7..QU

2 US.SÖ i 7.17 H -из 7.17 | 117JJ2 7.1Ö î 118.14 7.1Й

s 15Ö.79 i 1M.7B | 3SÖ.8.2 - § 1S3.79

4 Jl».» | 7.« 7. 12 \ IBüäS H j 1СВЛ4 u

*L 132.Ю 1 1Î3.1? S 1МЛ1 S 1.V5.S1

6 124.« I « 12S.lt гт j 125.ÎM 7S4 s 124 SS

~ . 1Й,53 Л »«Hi tîi>43 шттшШтж s 1Î9UI u 1 . 1

у Ш1Ш . IV "4

s 1XIÛS i 123,82 » j 12Mt> 1X140

M Ц1ЛЧ - J iZ'A? 4-v

и .22.85 S 1 24 3.13 22,57 i 'äs ! ъ v § 21.17 J.27 2 »5 i М.2Й J.ÎS Î.I3

11 XSS> i 1.<S5 3.05 г« .з: 2,15 1 1,<W S ÎO.Îô 2jl 1S1 i $L4« 2.0». IjSB

li 36SS l 34.74 | 315.77 S ÎS.47 ;

лл dn.J? 2.Ш j - î 4V7Î) Jii'» î X4.7Q S.2«

15 2 07. 46.20 1.Ö3 S | 45.34 1,41 1J5 S Э7Л7 2.D3 1Л9

.«О :«.№ S ? S »1.» î i JÎJ^^ ;

1- 38.Й5 I 1.59 1.54 Ss.lU i2B ! Ш | Sis 150 liâ i 37.S2 l.ÛS

171 77.S3 S 4.95 77,Ш ■• | 4.89 i 77JSÎ SOS ... S 77ЛВ » 4.S9

13 0,60 20.25 О.Ев j 22.43 )7 i 15 41 as4

IISJÏ-MB I.K TLVÏl пяя fiiM 1.17

löp-Me Sä.27 ^ 1.11 1 IS j îï^? lie i Î4.15 lûfî

-ООССН3 îlilj î 2.10 21.29; г. ю 21.20, гло ■ 21^3; 2Л7

î "n ^ ; ^ 170,41 j 17Ш50 :

-оси, SS-M j 55. Ю j 55.:я 30Î : 55.14 S.S>2

Анализ спектров ЯМР H соединения 46 при постепенном понижении температуры (от 293 К до 220 К) показала, что происходит изменение ширины многих сигналов и, как следствие, изменение констант спин-спинового взаимодействия (КССВ).

Из рис. 1 видно, что при 220 К сигнал протона при С-17а представляет собой триплет с КССВ равной 2.7 Гц, а при 293 К триплет с КССВ равной 3.4 Гц. Можно сделать вывод, что при понижении температуры доля конформера, в котором атом водорода при С]7а занимает экваториальное положение, растет, так как константа спин-спинового взаимодействии при этом уменьшается.

На рис. 2 изображено конформационное равновесие стероида 46 в расгворе хлороформа. Количество конформера В, оцененное путем сравнения интенсивности его сигнала с сигналом сателлита конформера А, составляет около 1.5% от основной. В сигнале С'7а-Н, конформера В можно выделить две КССВ с величинами, равными 5.7 Гц и 11.8 Гц. Следовательно, С/7я-Н в минорной форме занимает аксиальное положение. Таким образом, во время изменения конформации в стероиде 46 __

происходит инверсия кольца D. При этом 17аа-

ацетоксигруппа переходит из аксиатьного в „ , „..„ ,„

г / ->-, / J. Фраигмеш'сисктра ЯМР 41

экваториальное положение (рис. 2). r

г соединения а».

Полученные данные о возможности конформационных превращений в растворе могут иметь принципиальное значение для оценки сродства таких соединений к лиганд-связывающим участкам различных белковых молекул, опосредующих в организме биологическое действие природных гормонов и их синтетических аналогов.

Соединения 6 и 7 были получены в условиях, предложенных для синтеза соединения 4, с выходами 67 и 70% соотвегственно.

Поскольку для £>-гомо-13а-аналогов эквиленина в литературе отсутствуют данные по изучению его кристаллической структуры, был проведен рентгеноструктурный анализ (РСА) 16,16-диметил-3-метокси-Л-гомо-13а-эстра-1,3,5(10),6,8-пентаен-]7а-она 49 (рис. 3).

Согласно результатам РСА, угол между плоскостями циклов А и В составляет 0.4°. Углеродный атом метоксильной группы имеет транс-расположение относительно связи С"-С\ Атом кислорода и углеродный атом метоксильной группы при С3 находятся в плоскости кольца А. Кольцо С - практически правильное /За-полукресло, угол между плоскостями, образованными атомами Ся/С9/Сп/С'~/С14 и С,2/С' /С'4, являющихся, соответственно, сидением и спинкой полукресла, равен 140.5°. Кольцо О представляет собой правильное кресло. Молекула в целом является довольно плоской: г/лоскость циклов А и В составляет с плоскостью сидения полукресла в кольце С угол 7.6°. Расстояние между атомами кислорода при С-3 и С-/7, важное дня связывания с рецептором эстрогенов, равно 10.795(3) А.

Полученные данные РСА можно будет в дальнейшем использовать для оценки эффективности связывания 49 с различными белками, помещая, молекулу стероида, построенную на основе координат атомов, в лиганд-связывающую область соответствующего фермента.

А

8

Рис. 2. Коиформационное ряановесие соединения ¿в о растворе.

Рис. 3. Молекулярная структура 3-меток.си-1б,1б-диметия-0-гомо-13и' эстра-1.3,5(10),б „8-петггаен-17а-она 48 по данным РСА.

2. Синтез ингибиторов Е-СТпа основе 8а- и Р-гомо-8а-апалогов эстрогенов

Мы решили оценить возможность использования в качестве ингибиторов Е-СТ 8а-аналоги стероидных эстрогенов, так как для этого стереохимического ряда показана возможность получения препаратов с пониженной утеротропной активностью. 8а-Эстрадиол обладаег частичным антиэстрогенным действием - наличие таких свойств является дополнительным преимуществом при лечении эстрогенозависимых заболеваний. Выбор исходных стероидов для синтеза сульфаматов 9 - ¿3 был сделан на основании анализа взаимосвязей структура - активность в ряду 8а-эстрогенов. Так, расширение кольца О до шестичленного и введение метильных групп в положения 2 и 16 снижает утеротропное действие таких соединений. Кроме того, наличие заместителей в указанных положениях снижает риск метаболического гидроксилирования. Этоксильная группа соединения 62 не препятствует проявлению остеопротекторной и гипохолесгеринемической активности. Это побудило нас включить в состав целевых соединений стероид 13.

Синтез аналогов 9-13 (схема 4) проводили, используя стандартные реактивы и методы, полученные образцы очищали флэш-хроматографией.

3. Cu lime i ингибиторов Е-СТ на основе Р-гомо-К-нор-8а-аиалогов эстрогенов

£>-Гомо-/?-нор-8а-аналоги могут обладать очень низкой гормональной активностью при сохранении полезных биологические свойств, присущих природным эстрогенам. Конкретные модификации при выборе соединений 14 - 1_6 продиктованы теми же соображениями, что и в случае сульфаматов 8а-ряда. Синтез сульфаматов 14 - 16 представлен на схеме 5.

Путь синтеза целевого стероида 17 показан на схеме 6. Гидрирование эстрапентаенона 67 проводили на никеле Ренея в бензоле при повышенном давлении. Продукт реакции подвергли окислению действием реактива Саретта. В результате, с выходом 26% (в расчете на исходный эстрапентаенон 67), получили соединение 68. Дальнейшие превращения осуществлялись уже описанными методами. Отсутствие

у аналога 69 гормональной активности послужило основанием для детального анализа структуры его метилового эфира 68 в кристалле и растворе {¡тс. 4).

СХЕМА 6.

МеО

1 Н„ NL

2 СгОз;Ру 26 %

дмлл 66 %

Для изучения строения молекулы соединения 68 в кристалле было выполнено монокристальное рентгеноструктурное исследование. Молекулярная структура стероида 68, полученная на основе данных рентгеноструктурного анализа, приведена на рис. 4 А. Кольцо А плоское, кольцо В - 8а-конверт, кольца СиО имеют конформацию кресла. Метальная группа при С-13 расположена в р-области молекулы, атомы водорода при С", С-9 и С-14 - в а-области. Сужение кольца В до пятичленного приводит к тому, что конформация изученного соединения весьма значительно отличается от таковой аналога с шестичленным кольцом В. В частности, расстояние между атомами кислорода при С-3 и С- 17а, важное для связывания с РЭа, составляет 10.207(4) А, тогда как у стероидов с шестичленным кольцом В эта величина значительно больше, порядка 10.5-10.6 А. Молекулярное моделирование продемонстрировато, что 16,16-диметнл-£>-гомо-/?-нор-8а-эстрон 69 не способен образовывать продуктивный комплекс с РЭа. Указанные обстоятельства, вероятно, служат причиной резкого снижения гормональной активности соединений 68 и 69.

Использз'я методы корреляционной ЯМР спектроскопии, нами было проведено полное отнесение всех сигналов в спектрах 'н и 3С стероида 68 и установлено пространственное строение этого соединения в растворе, результаты представлены на рис. 4 Б.Результаты исследования демонстрируют значительное сходство конформаций в растворе и кристалле.

4.Синпип ингибиторов В-СТ па основе Р-гомо-б-окса-На-анапогов

17аР-Ацетокси-7Р-метил-3-метокси-6-окса-0-гомо-8а-эстра-1,3,5(10)-триен не обладает утеротропной и иммуносупрес-сивной активностью, но проявляет гипохолестеринемическое действие. Такой набор биологических характеристик желателен в случае долговременного применения

лекарственных средств. Можно ожидать, что эти свойства сохранятся и у стероида 70, а также сульфамата, полученного на его основе. Метиловый эфир 8а, 14р-аналога 21 обладает уникальной конформационной подвижностью (конформационная перестройка происходит одновременно в кольцах В, С и £>). Изучение биологических свойств таких соединений представляет значительный интерес с точки зрения создания на их основе потенциальных модуляторов различных ферментов, участвующих в метаболизме стероидных эстрогенов. Следует также принять

эстрогенов СХЕМА 7.

во внимание, что стероиды 20 и 21 - изомеры. Исследование ингибирующей активности по отношению к Е-СТ таких лигандов может предоставить важную информацию о субстратной специфичности фермента. Все это послужило основанием для синтеза соединений 20 и 21. (схема 7).

5. Исследование ингибирующей активности целевых соединений по отношению к сульфапипе эстрона

В таблице 3 приведены результаты тестирования синтезированных соединений. Исследование проводилось на клетках хориокарциномы человека, линии .ШО-З, в которых показана высокая активность Е-СТ. Инкубирование в присутствии [6,7-3Н] сульфата эстрона продолжали в течении 1 часа, после чего измеряли количество свободного эстрона. Активность выражали в ГС50.

Первый высокоактивный, необратимый ингибитор Е-СТ, описанный в литературе -З-О-сульфамат эстрона, в эксперименте с использованием той же клеточной линии, обладает Ю50 = 3.2 пМ. Этот препарат часто используют в качестве положительного контроля в работах по поиску ингибиторов Е-СТ. Однако, из-за различного времени инкубирования (4 часа в случае З-О-сульфамата эстрона), мы считаем возможным сравнивать активности синтезированных в этой работе соединений только между собой. Следует также учитывать, что тестирование проводилось на рацемических образцах, тогда как ингибирующей активностью может обладать лишь один энантиомер. В тоже время, полный синтез рацемических стероидов значительно проще и дешевле в исполнении, поэтому мы считаем оправданным, для первичной оценки, проводить исследование ингибирующей активности таких аналогов стероидных гормонов.

Из приведенных данных видно, что все целевые соединения ингибируют Е-СТ, при этом, величины 1Сзо отличаются даже для соединений очень близкого строения. На данном этапе нам кажется невозможным дать исчерпывающее объяснение этому в каждом конкретном случае, принимая во внимание небольшое количество исследованных ингибиторов и практически полное отсутствие литературных данных об ингибиторах подобной стереохимии. Все изложенные ниже предположения имеют предварительный характер и, чтобы их подтвердить или опровергнуть, необходимы дополнительные исследования.

Ингибитор 9 структурно наиболее близок к сульфамату эстрона, и его удобно использовать в качестве соединения сравнения в этой работе. Введение метальной группы в кольцо А (соединение 10) снижает активность препарата в 20 - 25 раз. Аналогичная модификация в природном ряду также приводит к значительному снижению ингибирующей активности.

Расширение кольца О до шестичленного (соединение Ц) не увинчивает, а даже несколько снижает 1С50. Такая модификация кажется нам особенно перспективной, учитывая, что она же снижает утеротропную активность. Введение дополнительных метальных групп (анатог 1_2) или аткоксильной группы при С- 17а (стероид 13) резко снижает активность. В последнем случае это может быть связано с неспособностью образовывать эффективную водородную связь между атомом кислорода в кольце £> молекулы ингибитора и боковыми функциями аминокислот, входящих в активный центр Е-СТ.'

Среди синтезированных ингибиторов £>-гомо-#-нор-8а- ряда, лишь 3-0-сульфамат 0-гомо-й-нор-8а-эстрона Ы обладает активностью, сравнимой с таковой для соединений 9 и .П. Это может указывать на относительную гибкость субстрат-связывающего участка, его способность «адаптироваться» к молекуле, расстояние между атомами кислорода которой меньше, чем у сульфата эстрона. Все предпринятые в этом ряду попытки по введению дополнительных заместителей приводят к увеличению Ю50 в 30 и более раз.

Таблица 3. Ингибирующая активность полученных соединений.

Соединение 1С50 (пМ) Соединение 1С5о (пМ)

° II тГ н^-^-о о 4 1000±10 ОЕ1 О 1| Т^ 2 II ° 13 >10000 28.7 % при 10 цМ

о 11 ¡Г 1н 0 5 40 ± 10 о о Х^Трг о о 14 300 ± 200

о || * 6 150 ± 10 о || [н ° 15 >10000 31.4% при 10 |хМ

0 н 7 300± 10 о о || |н '" ° 1В >10000 14.9 % при 10 цМ

0 О | 1 нТй ° 9 250 ±50 200 ± 10 (повтор) о \ |н '* й 17 > 10000 35.8 % при 10 цМ

о ИГ"]н 0 10 5000 ± 2000 о (Г ° 20 35 ±5

0 || Н^-Б-О^^^"^---- 0 ^ 150 ±50 о [Г о 21 >10000 43.6 % при 10 цМ

0 0 ([ "Т" Н^-^-О^^Г1*^--- о 12 > 10000 18.1 % при 10 цМ

Так, ингибиторы Í6 и 12 имеют одинаковый набор заместителей и близкие значения ингибирующей активности. В то же время «удаление» метальной группы при С-2 (стероид 17) приводит к росту активности всего в два с небольшим раза, что значительно меньше наблюдавшегося на примере соединений 9 и lj). Соединение 15 также обладает невысокой ингибирующей активностью. Возможно, что сужение кольца В до пятичленного изменяет характер связывания лиганда в субстрат-связывающей области Е-СТ.

Наиболее драматическое изменение ингибирующей активности наблюдается у эпимеров с метальной группой при С-7 - 20 и 21. Рост величины IC50 более чем в 300 раз при переходе от 7р-метил аналога 20 к 7а- производному с цис- сочленением колец С и D стероида 21. можно объяснить его неспособностью эффективно связываться в активном центре Е-СТ из-за значительного изменения геометрии молекулы ингибитора по сравнению с нативным субстратом.

Более высокая ингибирующая активность аналога 20, по сравнению с соединением 11. вероятно, объясняется действием двух факторов. Во-первых, наличие электроно-акцептороного заместителя в кольце А (атома кислорода) рассматривается многими авторами как модификация повышающая активность ингибиторов Е-СТ. Во-вторых, метальная группа при С-7 находится в [V области молекулы и занимает аксиальное положение, поэтому возможно, что в этом районе субстратсвязывающего участка Е-СТ находится гидрофобная полость.

Сульфаматы D-гомоэквиленинового ряда 4 — 7 демонстрируют активность в среднем выше, чем синтезированные анатоги других рядов. Это может объясняться большей планарностью соединений с ароматическим кольцом В. Негативный вклад метальной группы при С-2 кажется несколько меньшим, но сравнимым с аналогичной модификацией в ряду 8а-аналогов, Так, IC50 соединения 4 в 5 раз ниже, чем у аналога HI, и в 6 раз выше, чем IC50 З-О-сульфамата ¿)-гомо-8а-эстрона И.. Наиболее активно в этой серии 17,17-диметилпроизводное 5 с IC50 = 40 ± 10 нМ. «Смещение» диметильной группировки на один атом (соединение 6) приводит к падению активности в 3 раза, но все же она остается того же порядка, что и для лишенных дополнительных метальных групп соединений 9, 11. и 14. Интересно, что изменение сочленения колец С и D с транс- на цис-(соединение 2), приводит к снижению IC50 всего в 2 раза, тогда как в случае пары 20 и 21 на три порядка.

Исследование биологических свойств соединений 49 и 52 (метиловых эфиров фенолов, соответствующих соединениям 6 и 2) в опытах на крысах показало, что в дозе 3 мг/кг веса тела в день эти стероиды не обладают эстрогенным действием (нет влияния на вес матки, индукцию рецепторов прогестерона, вес тела).

Отсутствие утеротропных свойств, наряд)' с высокой ингибирующей активностью по отношению к Е-СТ, демонстрирует потенциал аналогов эстрогенов неприродной стереохимии и, в особенности, производных эквиленина, для создания на их основе

препаратов, регулирующих метаболизм стероидных гормонов.

***

Съемка спектров ЯМР осуществлена к.х.н., доцентом С. И. Селивановым. Рентгеноструктурное исследование кристаллов выполнено к. геол.-мин. н., доцентом Г. Л. Старовой. Исследование ингибирующей активности по отношению к Е-СТ было проведено в St Mary's Hospital Medical School, Imperial College of Science, Technology and Medicine (London, U. К.), под руководством профессора M. Дж. Рида.

выводы

1. Установлено, что стерическое направление реакции «торговских» D-гомоэстрапентаенов, содержащих метальные группы при С-16, с никелем Ренея определяется ориентацией заместителя при С-17а. Предложен способ синтеза аналогов D-гомоэквиленина с различным сочленением колец.

2. Исследованы спектры ЯМР ' Н и ' -'с аналогов D-гомоэквиленина и выявлены критерии, позволяющие легко определять характер сочленения колец подобных соединений.

3. Изучены особенности строения некоторых аналогов £)-гомо-13а-эквиленина в растворе и кристалле.

4. Получены ингибиторы Е-СТ на основе аналогов стероидных эстрогенов с неприродным сочленением и/или размером колец, обладающих пониженной эстрогенчой активностью по сравнению с природными эстрогенами.

Основное содержание работы тложено в следующих публикациях:

1. Шавва А.Г., Селиванов С.И., Старова Г.Л., Бороноева Т.Р., Ищенко И.В., Глуздиков И.А., Шарецкий А.Н., Исаева В.Г., Суринов Б.П. // Синтез и исследование В-нор-8-изоаналогов стероидных эстрогенов. Биоорганическая химия. 2002. Т. 28. N 3 С. 242-251

2. Абусалимов Ш.Н., Елисеев И.И., Гриненко Е.В., Глуздиков И.А., Марченко Е.М., Селиванов С.И., Шавва А.Г. // Синтез эстра-1,3,5(10),8,14-пентаенов, содержащих метальную группу в кольце А. Вестник СПбГУ. Сер. 4. 2003. вып. 4 (№28). С. 119-122.

3. Урусова Е.А., Глуздиков И.А., Селиванов С.И., Старова Г.Л., Николаев С.В., Шавва А.Г. // Синтез и исследование производных эквиленина и его модифицированных аналогов. ЖОрХ. 2004. Т. 40. Вып. 4. С. 506-512.

4. Глуздиков И.А., Егоров М.С., Селиванов С.И., Старова Г.Л., Шавва А.Г. // Новые аналоги Л-гомоэквиленина содержащие заместители в кольце D. ЖОрХ. 2006. Т. 42. Вып. 11. С. 1687-94.

5. Глуздиков И.А., Старова Г.Л., Шавва А.Г. // Молекулярная структура 16,1 б-диметил-D-гомо-В-нор-8-изоэстрона. Тезисы докладов III Национальной конференции РСНЭ. Москва, 21-25 мая 2001 г. С. 60.

6. Марченко Е. М., Глуздиков И.А., Шавва А.Г. // Синтез метилового эфира 16,16-димегилэквиленина и его 13а-аналога. Тезисы докладов IV Международной конференции молодых ученых по органической химии «Современные тенденции в органическом синтезе и проблемы химического образования». Санкт-Петербург, 27-30 июня 2005 г. С. 293.

7. Марченко Е.М., Баскакова А.В., Никольская С.К., Глуздиков И.А. // Синтез 16,16 диметил-З-метоксиэстра-1,3,5(10),8,14-пентаен-17-она. Тезисы докладов IV Международной конференции молодых ученых по органической химии «Современные тенденции в органическом синтезе и проблемы химического образования». Санкт-Петербург, 27-30 июня 2004 г. С. 115.

8. Gluzdikov I.A., Selivanov S.I., Shawa A.G. // Studyng of fast conformational exchange in 17a[i-acetoxy-16,16-dimethyl-D-homo-14-isocstra-1,3,5(10),6,8-pentacna by NOESY experiment. In «Proceedings of VH-th international workshop on magnetic resonance spectroscopy, tomography and ccology». Rostov-on-Don, Russia, 10-16 September 2004. P. 104-106.

Подписано в печать 14.03.2007. Формат бумаги 60 х 84 1/16. Бумага офсетная. Печать ризографическая. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 3943.

Отпечатано в отделе оперативной полиграфии НИИХ СПбГУ. 198504, Санкт-Петербург, Старый Петергоф, Университетский пр.26

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ВЫВОДЫ.

выводы

1. Установлено, что стерическое направление реакции «торговских» Л-гомоэстрапентаенов, содержащих метальные г группы при С-16, с никелем Ренея, определяется ориентацией заместителя при С-17а. Предложен способ синтеза аналогов Э-гомоэквиленина с различным сочленением колец.

2.- Исследованы спектры ЯМР ^Н и аналогов Б-гомоэквиленина и выявлены критерии позволяющие легко определять характер сочленения колец подобных соединений.

3. Изучены особенности строения некоторых аналогов £)-гомо-13а-эквиленина в растворе и кристалле.

4. Получены ингибиторы Е-СТ на основе аналогов стероидных эстрогенов с неприродным сочленением и/или размером колец, обладающих пониженной эстрогенной активностью по сравнению с природными эстрогенами.

1. McPherson K., Steel C. M.,Dixon J. M.// Breast cancer - epidemiology, risk factors and genetics. Br. Med. J. 1994. V. 309. pp. 1003-1006.

2. Beatson G. T.//On the treatment of unoperable cases of carcinoma of the mamma: suggestions for a new method of treatment with illustrative cases. Lancet 1896. V. 2. pp. 104-107.

3. Lippman M. E., Dickson R.B., Bates S., Knabbe C., Huff K., Swain S., McManaway M., Bronzert D., Kasid A., Gelmann A.//Autocrine and paracrine growth regulation of human breast cancer. Breast Cancer Res. Treat. 1986. V. 7. pp. 59-70.

4. Henderson B. E., Ross R., Bernstein L.//Estrogens as a cause of a human cancer: the Richard and Hinda Rosenthal Foundation Award lecture. Cancer Res. 1988. V. 48. pp. 246-253.

5. Noel C.T., Reed M.J., Jacobs H.S., James V.H.T. // Jhe plasma concentration of estrone sulphate in postmenopausal women: lack of diurnal variation, effect of ovariectomy, age and weight. J. Steroid Biochem. 1981. V. 14. pp. 1101-1105.

6. PCT Int. Appl. WO 99/27935.

7. Clarke R., Hilakivi-Clarke L. A., Cho E., James M.R., Leonessa F. // Estrogens, phitoestrogens and breast cancer. Adv. Exp. Biol. Med. 1996. V. 401. pp. 63-86.

8. Pasqualini J.R., Gelly C., Nguyen B.-L., Vella C. // Importance of oestrogensulphates in breast cancer. J. Steroid Biochem. 1989. V. 34. pp. 155-163,f

9. Simpson E. R. // Role of aromatase in sex steroid action. J. Mol. Endocrinology 2000. V. 25. pp. 149-156.

10. Purohit A., Reed M. J. // Regulation of estrogen synthesis in postmenopausal women. Steroids. 2002. V. 67. pp. 979-983.

11. Reed M. J., Coldham N. G., Patel S.R., Ghilchik M. W., James V. H. T. // Interleukin-1 and interleukin-6 in breast cyst fluid: their role in regulating aromatase activity in breast cancer cells. J Endocrinol. 1992. V. 132. pp. R5-R8.

12. Miller W.R., O'Neill J. S. // The importance of local synthesis of estrogen within the breast. Steroids. 1987. V. 50. pp. 537-547.

13. Castiglionr-Gertsch M.// New aromatase inhibitors: more selectivity, less toxicity, unfortunately, the same activity. Eur. J. Cancer. 1996. V. 32A. pp.393-395.

14. Pasqualini J. R., Chetrite G. // Estrone sulfatase versus estrone sulfotransferase in human breast cancer: potential clinical applications. J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 1999. V. 69. pp. 287-292.

15. Maggiolini M., Donze O., Jeannin E., Ando S., Picard D. // Adrenal androgens stimulate the proliferation of breast cancer cells as direct activators of estrogen receptor a. Cancer Res. 1999. V. 59. pp. 4864-4869.

16. Santner S. J., Feil P. D., Santen R. J. // In situ estrogen productions via the estrone sulfatase pathway in breast tumors: relative importance vs the aromatase pathway. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1984. V. 59.pp. 29-33.

17. Le Bail J. C., Marre-Fournier F., Nicolas J. K., Habrioux G. // C19 Steroid estrogenic activity in human breast cancer cell lines: importance of dehydroepiandrosterone sulfate at physiological plasma concentrations. Steroids. 1998. V. 63. pp. 678-683.

18. Dauvois S, Labrie F. // Androstendione androst-5-ene-3p,17J3-diol stimulate DMBA-induced mammary tumors role of aromatase. Breast Cancer Res. Treat. 1989. V. 13. pp. 61-69.

19. Poortman J., Andriesse R., Agema A., Donker G. H., Schwarz F., Thijssen J. H. H. In Adrenal Androgens; Genazzani A. R., Thijssen J. H. H., Siitery P. K., Eds.; Raven Press: New York. 1980. pp. 219-240.

20. PCT Int. Appl. WO 01/44268.

21. Yanaiharaa A., Yanaiharaa T., Tomaa Y., Shimizua Y., Saitoa H., Okaia T., Higashiyamab T., Osawab Y. // Localization and expression of steroid sulfatase in human fallopian tubes. Steroids 2001. V. 66. pp. 87-91.

22. Reed M. J., Purohit A. // Breast Cancer and the Role of Cytokines in regulating Estrogen Synthesis: An Emerging Hypothesis. Endocrine Rev. 1997. V. 18(5). pp. 701-715/

23. Prost 0., Ottignon Y., Remy-Martin A., Vuitton D., Miguet J.-P., Adessi G. L. // Steroid sulfatase activities in normal and cirrhotic livers and plasma levels of estrone sulfate, estrone and estradiol-17(5 in men. Steroids. 1984. V. 43(2). pp. 189-200.

24. Stein C., Hille A., Seidel J., Rijnbout S., Waheed A., Schmidt B., Geuze H., Figura K. V. // Cloning and expression of human steroid-sulfatase. J. Biol. Chem. 1989. V. 264. pp. 13865-13872.

25. Hernandez-Guzman F. G., Higashiyama N., Pangborn W., Osawa Y., Ghosh D. // Structure of Human Estrone Sulfatase Suggests Functional Rolés of Membrane Association. J. Biol. Chem. 2003. V. 278(25). pp. 22989-22997.

26. Zhu B. T., Fu J.-H., Xu S„ Kauffman F. C., Conney A. H. // Different biochemical properties of nuclear and microsomal estrone-3-sulfatases: evidence for the presents of a nuclear isoenzyme. Biochem. Diophys. Res. Comm. 1998. V. 246. pp. 45-49.

27. Dibbelt L., Kuss E. // Human placental steryl-sulfatase: enzyme purification,production of antisera, and immunoblotting reactions with normal and sulfatase-deficient placentas. Biol. Chem. Hoppe-Seyler. 1986. V. 367. pp. 1223-1229.f

28. Vaccaro A.M., Salvioli R., Muscillo M., Renola L. // Purification and properties of arylsulfatase C from human placenta. Enzyme. 1987. V. 37. pp. 115-126.

29. Noel H., Plante L., Bleau G., Chapdelaine A., Roberts K.D. // Human placental steroid sulfatase: purification and properties. J.Steroid Biochem. 1983. V. 19. pp. 1591-1598.

30. Burns G.R.J. // Purification and partial characterization of arylsulphatase C from human placental microsomes. Biochim. Biophys. Acta 1983. V. 759. pp. 199-204.

31. Purohit A., Potter B. V. L., Parker M. G., Reed M. J. // Steroid sulphatase: expression, isolation and inhibition for active-site identification studies. Chem.-Biol. Interact. 1998. V. 109. pp. 183-193.

32. Bond C. S., Clements P. R., Ashby S. J., Collyer C. A., Harrop S. J., Hopwood J. J., and Guss J. M. // Structure of a human lysosomal sulfatase Structure 1997. V. 5. pp. 277-289.

33. Schirmer A., Kolter R. // Computational analysis of bacterial sulfatases and their modifying enzymes. Chemistry & Biology 1998. V. 5. pp. R181-R186.

34. Purohit A., Duncan L.J., Wang D.Y., Coldham N.G., Ghilchik M.W., Reed M.J. // Paracrine control of oestrogen production in breast cancer. Endocr.-Rel. Cancer 1997. V. 4. pp. 323-330.

35. Newman S.P., Purohit A., Ghilchik M.W., Potter B.V.L., Reed M.J. // Regulation of steroid sulphatase expression and activity in breast cancer.J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2000. V. 75. pp. 259-264.

36. Utsumi T., Yoshimura N., Takeuchi S., Maruta M., Maeda K., Harada N. // Elevated steroid sulfatase expression in breast cancer. J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 2000. V. 73. pp. 141-145.

37. Schmidt B., Selmer T., Ingendoh A., von Figura K.// A novel amino acid modification in sulfatases that in defective in multiple sulphatase deficiency. Cell 1995. V. 82. pp. 271-278.

38. Evans T.R.J., Rowlands M.G., Jarman M., Coombes R.C. // Inhibition of oestrone sulphatase enzyme in human placenta and human breast carcinoma. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1991. V. 39. pp. 493-499.

39. Birnbock H., von Angerer E. // Sulphate derivatives of 2-phenyl-indoles as novel steroid sulphatase inhibitors, Biochem. Pharmacol. 1990. V. 39. pp. 1709-1713.

40. Duncan L.J., Purohit A., Howarth N.M., Potter B.V.L., Reed M.J. // Inhibition of oestrone sulphatase activity by estrone-3-0-methylthiophosphonate: a potential therapeutic agent in breast cancer. Cancer Res. 1993. V. 53. pp. 298-303.

41. Howarth N.M., Purohit A., Robinson J. J., Vicker N., Reed M.J., Potter B.V.L. // Estrone 3-sulfate mimics, inhibitors of estrone sulfatase activity: homology model construction and doking studies. Biochemistry 2002. V. 41. pp. 14801-14814.

42. Townsley J. D., Schul D. A., Rubin e. J. // Inhibition of steroid 3-sulfatase by endogenous steroids. A possible mechanism controlling placental estrogen synthesis from conjugated precursors. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1970. V.31.pp. 670-678.

43. Santner S. J., Santen R. J. // Inhibition of estrone sulfatase and 170-hydroxysteroid dehydrogenase by antiestrogens. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1993. V. 45. pp. 383-390.

44. Carlstrom K., Doberi A., Pousette A., Rannevik G., Wilking N. // Inhibition of steroid sulfatase activity by danazol. Acta Obstet. Ginaec. Scand. 1984. V. 123 (Suppl.). pp. 107-111.

45. Li P. K., Pillai R., Dibbelt L. // Estrone sulfate analogs as estrone sulfatase inhibitors. Steroids. 1995. V. 60. pp. 299-306.

46. Anderson C., Freeman J., Lucas L., Farley M. Dalhoumi H., Windansky T. S. // Estrone sulfanase: probing structural requirements for substrate and inhibitor recognition. Biochemistry 1997. V. 36. pp. 2586-2594.

47. Ahmed S., James K., Owen C. P., Patel C. K. // Synthesis and biochemical evaluation of novel and potent inhibitors of the enzyme oestrone sulphatase (ES). J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2002. V. 80. pp. 419-427.'

48. Ahmed S., James K., Owen C. P. // The design, synthesis, and biochemical evaluation of derivatives of biphenyl sulfamate-based compounds as novel inhibitors of estrone sulfatase. Biochem. and Biophys. Res. Comm. 2002. V. 294.pp. 180-183.

49. Howarth N. M., Purohit A., Reed M. J. and Potter B. V. L. // Estrone sulfamates: potent inhibitors of estrone sulfatase with therapeutic potential, J. Med. Chem. 1994. V. 37. pp. 219-221.59. .US Patent № 6,011,024 (2000).

50. Purohit A., Williams G. J., Howarth N. M., Potter B. V. L. Reed M. J. // Inactivation of steroid sulfatase by an active site-directed inhibitor, estrone 3-O-sulfamate. Biochemistry 1995. V. 34. pp. 11508-11514.

51. Ahmed S., Owen C. P., James K., Patel C. K., Sampson L.// Evidence for the mechanism of the irreversible inhibition of oestrone sulphatase (ES) by aminosulphonate based compounds. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2002. V. 80. pp. 429-440.

52. Woo L.W.L., Purohit A., Malini B., Reed M.J., Potter B.V.L. // Potent active site-directed inhibition of steroid sulphatase by tricyclic coumarin-based sulphamates. Chem. Biol. 2000. V. 7. pp. 773-791.

53. Ahmed S., James K., Owen C. P., Patel C. K. // Design, synthesis and biochemical evaluation of AC ring Mimics as novel inhibitors of the enzyme estrone sulfatase (ES). Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002. V. 12. pp. 13431346.

54. Ahmed S., Owen C. P., James K., Patel C. K., Patel M. // Acid dissociation constant, a potential physicochemical factor in the inhibition of the enzyme estrone sulfatase (ES). Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001. V. 11. pp. 899-902.

55. Ahmed S., James K., Owen C. P. // Inhibition of the estrone sulfatase (ES) by derivatives of 4-(aminosulfonyl)oxy. benzoic acid. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002. V. 12. pp. 2391-2394.

56. Chen, M.-J., Taylor, S. D. // Synthesis of estrone-3-sulfate analogues bearing novel non-hydrolyzable sulfate mimetics. Tetrahedron Lett. 1999. V. 40. pp. 4149-4152.

57. Dibbelt L., Li P.-K., Pillai R., Knuppen R. // Inhibition of human placental sterylsulfatase by synthetic analogs of estrone sulfate. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1995. V. 52. pp. 281-286.

58. US Patent №5,616,574 (1997).

59. Hobkirk R. // Steroid sulfation: current concepts. ТЕМ 1993. 4. pp. 69-74. Цитировано no: Elger W., Schwarz S., Hedden A., Reddersen G.,

60. Schneider B. // Sulphamates of various oestrogens are prodrugs withfincreased systemic and reduced hepatic oestrogenicity at oral applications. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1995. V. 55. pp. 395-403.

61. Woo L.W.L., Howarth N.M., Purohit A., Hejaz H.A.M., Reed M.J., Potter B.V.L. // Steroidal and nonsteroidal sulfamates as potent inhibitors of steroid sulfatase. J. Med. Chem. 1998. V. 41. pp. 1068-1083.

62. Elger W., Schwarz S., Hedden A., Reddersen G., Schneider B. // Sulphamates of various oestrogens are prodrugs with increased systemic and reduced hepatic oestrogenicity at oral applications. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1995. V. 55. pp. 395-403.

63. Elger W., Palme H.-J., Schwarz S.// Novel oestrogen sulfamates: a new approach to oral hormone therapy. Exp. Opin. Invest. Drugs. 1998. V. 7. pp. 575-589.

64. Purohit A., Woo L.W.L., Chander S.K., Newmana S.P., Ireson C., Hoa Y., Grasso A., Leese M.P., Potter B.V.L., Reed M.J. // Steroid sulphatase inhibitors for breast cancer therapy. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2003. V. 86. pp. 423-432.

65. Vicker N., Ho Y., Robinson J., Woo L.W.L., Purohit A., Reed M.J., Potter B.V.L. // Docking Studies of Sulphamate Inhibitors of Estrone Sulphatase in Human Carbonic Anhydrase II. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. V. 13. pp. 863-865.

66. Stoelzner W., Oettel M. // Untersuchungen zur Dissoziation zwischen antigonadotropen und interzeptiven Aktivitaeten ans-gewaehlter

67. Hedden A., Jensen E.V., Palme H.J., Schwarz S., Elger W. // Analysis of pro-drug nature of oestradiol sulfamate (ES) J995: study of oestrogen receptor (ER) binding and induction of ER synthesis in MCF-7-cells. Exp. Clin. Endocrinol. 1998. V. 106. S51.

68. Johnson D.A., Rhodes M.E., Boni R., Li P.-K. // Chronic steroid sulfatase inhibition by (p-O-sulfamoyl)-N-tetradecanoyl tyramine increases dehydroepiandrosterone sulfate in whole brain. Life Sci. 1997. V. 61. PL355-PL359.

69. Johnson D.A., Wu T.-H., Li P.-K., Maher T. J. // The effect of steroid sulfatase inhibition on learning and spatial memory. Brain Res. 2000. V. 865. pp. 286-290.

70. US Patent № 5,556,847 (1996).

71. PCT Int. Appl. WO 98/24802.

72. US Patent № 6,159,960 (2000).

73. Patton T.L., Dmochowski L. // Estrogens. V. studies on the relationship ofestrogenic activity and molecular structure. Arch. Biochem. Biophys. 1963.

74. V. 101. pp. 181-185. Цитировано no: Purohit A., Hejaz H. A. M., Woo

75. W.L., van Striena A.E., Potter B.V.L., Reed M.J. // Recent advances in thefdevelopment of steroid sulphatase inhibitors. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1999. V. 69. pp. 227-238.

76. Lippert С., Seeger H., Mueck A.O. // The effect of endogenous estradiol metabolites on the proliferation of human breast cancer cells. Life Sci. 2003. V. 72. pp. 877- 883.

77. Pasqualini J. R. // The selective estrogen enzyme modulators in breast cancer: a review. Biochim. Biophys. Acta 2004. V. 1654. pp. 123- 143.

78. Rao P. N., Cessac J.W., Tinley T. L., Mooberry S. L. // Synthesis and antimitotic activity of novel 2-methoxyestradiol analogs. Steroids 2002. V. 67. pp. 1079-1089.

79. PCT Int. Appl. WO 01/44268.

80. Reed J. E., Woo L.W.L., Robinson J.J., Leblond В., Leese M.P., Purohit A., Reed M.J., Potter B.V.L. // 2-Difluoromethyloestrone 3-O-sulphamate, a highly potent steroid sulphatase inhibitor. Biochem. Biophys. Res. Comm. 2004. V. 317. pp. 169-175.

81. Dorfman R.I., Kind F.A. // Uterotrophic activity of various phenolic steroids. Acta Endocrinol. 1966. V. 52. pp. 619-626. Цитировано no: Purohit A., Hejaz H.A.M., Woo L.W.L., van Strien A.E., Potter B.V.L.,

82. Reed M.J. // Recent advances in the development of steroid sulphatase inhibitors. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1999. V. 69. pp. 227-238.

83. Purohit A., Hejaz H.A.M., Woo L.W.L., van Strien A.E., Potter B.V.L., Reed M.J. // Recent advances in the development of steroid sulphatase inhibitors. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1999. V. 69. pp. 227-238.

84. Boivin R.P., Labrie F., Poirier D. // 17-Alpha-alkan (or alkyn) amide derivatives of estradiol as inhibitors of steroid-sulfatase activity. Steroids 1999. V. 64 pp. 825-833.

85. Boivin R.P., Luu-The V., Lachance R., Labrie F., Poirier D. // Structure-activity relationships of 17-alpha-derivatives of estradiol as inhibitors of steroid sulfatase. J. Med. Chem. 2000. V. 43. pp. 4465-4478.

86. Poirier D., Boivin R.P. // Nonsteroidal compounds designed to mimic potent steroid sulfatase inhibitors. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2002. V. 80. pp. 339-353.

87. Poirier D., Boivin R.P. // 17a-Alkyl- or 17a-substituted benzyl-17hestradiols: a new family of estrone-sulfatase inhibitors. Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. V. 8. pp. 1891-1896.

88. Mouridsen H. T., Rose C., Brodie A. H., Smith I. E. // Challenges in endocrine management of breast cancer. The breast. 2003. Suppl. 2. S2-S19.

89. Hinson J. P., Raven P. W. // DHEA deficiency syndrome: a new term for old age? Endocrinol. 1999. V. 163. pp. 1-5.

90. PCT Int. Appl. WO 99/33858.

91. PCT Int. Appl. WO 99/27935.

92. Fischer D. S., Woo L. W. L., Mahon M. F., Purohit A., Reed M. J., Potter B. V. L. // D-Ring modifed estrone derivatives as novel potent nhibitors of steroid sulfatase. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. V. 11. pp. 1685-1700.

93. Golob T., Liebl R., von Angerer E. // Sulphamoyloxy-substituted 2-phenyl-indoles: antiestrogen based inhibitors of the steroid sulphatase in human breast cancer cells. Bioorg. Med. Chem. 2002. V. 10. pp. 3941-3953.

94. Li P. K., Chu G.-H., Guo J. P., Peters A., Selcer K. W. // Development of potent non-estrogenic estrone sulfatase inhibitors. Steroids. 1998. V. 63. pp. 425-432.

95. PCT Int. Appl. WO 00/43408.

96. Peters R. H., Chao W.-R., Sato B., Shigeno K., Zaveri N. T., Tanabe M. // Steroidal oxathiazine inhibitors of estrone sulfatase. Steroids. 2003. V. 68. pp. 97-110.

97. Kolli A., Chu G.-H., Rhodes M. E., Inoue K., Selcer K. W., Li P.-K. // Development of (p-O-sulfamoyl)-TV-alkanoyl-phenylalkyl amines as non steroidal estrone sulfatase inhibitors. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1999. V. 68. pp. 31-40.

98. PCT Int. Appl. WO 01/36398.

99. Jutten P., Schumann W., Hartl A., Heinisch L., Grafe U., Werner W., Ulbricht H. // A novel type of non-steroidal estrone sulfatase inhibitors. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002. V. 12. pp. 1339-1342.

100. Chu G.-H., Peters A.1, Selcer K. W., Li P.-K. // Synthesis and sulfatase inhibitory activities of (E)- and (Z)-4-yedroxytamoxifen sulfamates. Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999. V. 9. pp. 141-144.

101. PCT Int. Appl. WO 00/18397.

102. Malini B., Purohit A., Ganeshapillai D., Woo L.W.L., Potter B.V.L., Reed M.J. // Inhibition of steroid sulphatase activity by tricyclic coumarin sulphamates. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2000. V. 75. pp. 253-258.

103. Purohit A., Woo L.W.L., Barrow D., Hejaz H. A. M., Nicholson R. I., Potter B.V.L., Reed M.J. // Non-steroidal and steroidal sulfamates : new drugs for cancer therapy. Mol. Cell. Endocrinol. 2001. V. 171. pp. 129-135.

104. Purohit A., Woo L.W.L., Potter B.V.L., Reed M.J. // In vivo inhibition of estrone sulfatase activity growth of nitrosomethylurea-induced mammary tumors by 667 COUMATE. Cancer Res. 2000. V. 60. pp. 3394-3396.

105. US Patent № 6,011,024 (2000).

106. Barret-Connor E. // Risks And Benefits Of Replacement Estrogen. Annu. Rev. Med. 1992. V. 43. pp. 239-251.

107. J. E. Compston. 11 Selective oestrogen receptor modulators: potential therapeutic applications. Clinical Endocrinol. 1998. V. 48. pp. 389-391.

108. Wiese Т. Е., Polin L. A., Palomino Е., Brooks S. С. // Induction of the Estrogen Specific Mitogenic Response of MCF-7-Cells by Selected Analogues of Estradiol-17(3: A 3D QSAR Study. J. Med. Chem. 1997. V. 40. N22. pp. 3659-3669.

109. Schafer J. I. M., Liu H., Tonetti D. A., Jordan V. C. // The interaction of raloxifene and the active metabolite of the antiestrogen EM-800 (SC 5705) with the human estrogen receptor. Cancer Res. 1999. V. 59. pp. 4308-4313.

110. Lewis J. S., Thomas T. J., Kling С. M., Gallo M. A., Thomas T. // Regulation of Cell Cycle and Cyclins by 2-Hydroxyestrone in MCF-7 Breast Cancer Cell. J. Mol. Endocrinol. 2001. V. 27. pp. 293-307.

111. Gonzalez F. В., Neef G., Eder U., Wiechert R., Schillinger E., Nishino Y. // Synthesis and pharmacological evaluation of 8a-estradiol; derivatives Steroids. 1982. V. 40. N 2. pp. 171-187.

112. Урусова E.A., Глуздиков И.А., Селиванов С.И., Старова Г.Л., Николаев С.В., Шавва А.Г. // Синтез и исследование производных эквиленина и его модифицированных аналогов. ЖОрХ. 2004. Т. 40. Вып. 4. С. 506512.

113. Anstead G. М., Carlson К. Е., Katzenellenbogen J. А. // The Estradiol Pharmacophore: Ligand Structure-estrogen Receptor Binding Affinity Relationships and a Model for Receptor Binding Site. Steroids. 1997. V. 62. N. 3. pp. 269-303.

114. Шавва А. Г. // Синтез аналогов стероидных эстрогенов с избирательным биологическим действием. Диссертация на соискание ученой степени доктора химических наук. Д., ЛГУ, 1987.365 с.

115. Берштейн JI. М. Внегонадная продукция эстрогенов (роль в физиологии и патологии). 1998. СПб. «Наука». 171 С.f

116. Берштейн JI. М. Онкоэндокринология. Традиции, современность и перспективы. 2004. СПб. «Наука». 340 С.

117. Shull J. D. // Hormonal carcinogenesis. Encyclopedia of cancer. Elsevier. 2002. V. 2. pp. 417-428.

118. Van Poznak C., Seidman A. D. // Breast cancer. Encyclopedia of cancer. Elsevier. 2002. V. 2. pp. 287-299.

119. Römer W., Oettel M., Schwarz S. // Scavestrogen sulfamates: correlation between estrone sulfatase inhibiting and anyioxodants effects. Can. J. Physiol. Pharmacol. 1998. V. 76. pp 99-109.

120. Пат. Германии DE 44 47 714 C2.

121. Oshiro Y., Balwierz P.S., Piper C.E. // Absence of a genotoxic responce arom steroids in the rat primary hepatocyte unscheduled DNA synthesis assay. Environ Mutagen. 1986. V. 8. pp. 461.

122. Lemon H.M. Patent 49372398. (1990) USA. РЖХим. 1991,210261П

123. Lippert Т. H., Seeger H., Mueck A. O. // The impact of endogenous estradiol metabolites on carcinogenesis. Steroids. 2000. V. 65. pp. 357-369.

124. Gao H., Katzenellenbogen J.A., Garg R., Hansch C. // Comparative QSAR analysis of estrogen receptor ligands. Chem. Rev. 1999. P. 723.

125. Шавва А. Г., Власова К. В., Цогоева С. Б., Егоров М. С., Якуцени П. П. // Изучение связывания эстрадиола и 8-изоэстрадиола с рецепторомэстрогенов а с помощью молекулярного моделирования. Биоорг. Химия. 2002 Т. 28 N. 3. С. 236-241.

126. Brzozowski А. М., Pike А. С. W., Dauter Z., Hubbard R. Е., Bonn Т., Engstrom О., Ohman L., Greene G. L., Gustafsson J.-A., Carlquist M. // Molecular basis of agonism and antagonism in the oestrogen receptor. Nature 1997. V. 389. pp. 753-758.

127. Розен В. Б., Смирнов А. Н. // Рецепторы и стероидные гормоны. 1981. М. МГУ. 310 С.

128. Bachmann, W. Е.; Cole, W.; Wilds, A. L. // The total synthesis of the sex hormone equilenin and its stereoisomers. J. Am. Chem. Soc. 1940. V. 62. pp. 824- 839.

129. Zhang F., Bolton J. L. // Synthesis of the Equine Estrogen Metabolites 2-Hydroxyequilin and 2-Hydroxyequilenin. Chem. Res. Toxicol. 1999. V. 12. pp 200-203.

130. Schering A.-G., Germany. Ger. Offen. 19917930 (2000). BRD. C.A. 2000, 133,296594x.

131. PCT Int. Appl. WO 01 10430. C.A. 2001, 134,158108m.

132. Greens P.S., Yang S.-H., Nilsson K.R., Kumar A.S., Covey D.F., Simpkins J.W. // The Nonfeminizing Enantiomer of 1713-Estradiol Exerts Protective Effects in Neuronal Cultures and a Rat Model of Cerebral Ischemia. Endocrinol. 2001. V. 142. pp. 400-406.

133. Цогоева С. Б. // Синтез модифицированных аналогов стероидных эстрогенов. Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук. СПб., СПбГУ, 1998.166 с.

134. Bolton J. L. // Quinoids, quinoid radicals, and phenoxyl radicals formed from estrogens and antiestrogens. Toxicology 2002. V. 177. pp. 55-65.

135. Joosten H. F. P., van Acker F. A. A., van den Dobbelsteen D. J., Horbach G. J. M. J., Krajnc E. I. // Genotoxicity of hormonal steroids. Toxicol. Lett. 2004. V. 151 (1). pp. 113-134.

136. Ахрем А. А., Титов Ю. А. // Полный синтез стероидов. 1967. М. «Наука». 322 С.

137. Физер Л., Физер М. // Стероиды. 1964. М. «Мир». 982 С.

138. Yoshida M. // Development of novel type of transition metal-catalyzed cascade reactions utilizing small ring systems and the applications. Yakugaku Zasshi. 2004. V. 124 (7). pp. 425-35.

139. Ананченко С. H., Торгов И. В. // Новый путь синтеза стероидных соединений. Синтез D-гомоэквиленина и D-гомоизоэквиленина. ДАН СССР. 1959. Т. 127 (3). С. 553-556.

140. Кио С. Н., Taub D., Wendler N. L. // A synthesis of estrone via novel intermediates. Mechanism of the coupling reaction of a vinyl carbinols with a 1,3-diketones. J. Org. Chem. 1968. V. 33 (8). pp. 3126-3132.

141. Пат. 14891 Япония. 1971. C.A. 1971.75.49434g.

142. Ger. Offen 2705927 BRD. 1979. РЖХим. 1980,30188П.

143. Абусалимов Ш.Н., Елисеев И.И., Гриненко Е.В., Глуздиков И.А., Марченко Е.М., Селиванов С.И., Шавва А.Г. // Синтез эстра-1,3,5(10),8,14-пентаенов, содержащих метальную группу в кольце А. Вестник СПбГУ Сер. 4.2003. вып. 4 (№28). С. -119-122.

144. Appel R., Berger G. // Uber das Hydrazidosulfamid. Chem. Ber. 1958. V. 91. pp. 1339-1341.

145. Sigfrid, S.; Ina, Т.; Margit, R.; Bernd, U.; Harry, H.; Walter, E. // Synthesis of estrogen sulfamates: Compounds with a novel endocrinological profile. Steroids. 1996. V. 61. pp. 710-717.

146. Okada M., Iwashita S., Koizumi N. // Effcient general method for sulfamoylation of a hydroxyl group. Tetrahedron Letters. 2000. V. 41. pp. 7047-7051.

147. Ananchenko S. N., Limanov V. Yu., Leonov V. N., Torgov I. V. // Synthesis of derivatives of oestrane and 19-norsteroids from 6-methoxytetralone and 6-xydroxytetralone. Tetrahedron. 1962. V. 18. pp. 1355-1367.

148. Ананченко С. H., Платонова А. В., Леонов В. Н., Торгов И. В. // Синтез19.норстероидов на основе З-метокси-Д1'3'5^'8'!4-/)tгомоэстрапентаенона-17а. Изв. АНСССР. Сер. Хим. 1961. № 6. С. 10741080.

149. Wolfing J., Schneider G., Dombi G. // Steroids 36: Synthesis of 16,16-dimethyl-17-ketosteroids and 16,16-dimethyl-17p-hydroxysteroids. Steroids. 1988. V. 51(3-4). pp. 329-335.

150. Singh A., Purohit A., Hejaz H.A.M., Potter B.V.L., Reed M.J. // Inhibition of deoxyglucose uptake in MCF-7 breast cancer cells by 2-methoxyestrone and 2-methoxyestrone-3-(9-sulfamate. Molec. Cell. Endocrinol. 2000. V. 160. pp. 61-66.

151. Kloosterboer H.J. // Tissue-selective effects of tibolone on the breast. Maturitas 2004. V. 49. S5-S15.

152. Reed M.J. // Role of enzymes and tissue-specific actions of steroids. Maturitas 2004. V. 49. S18-S23.

153. Schreiner E. P., Wolff В., Winiski A. P., Billich A. // 6-(2-adamantan-2-ylidene-hydroxybenzoxazole)-0-sulfamate: a potent non-steroidal irreversible inhibitor of human steroid sulfatase. Bioorg Med Chem Lett. 2003. V. 13(24). pp.4313-4316.

154. Hejaz H. A. M., Woo L. W. L., Purohit A., Reed M. J., Potter B. V. L. // Synthesis, in vitro and in vivo activity of benzophenone-based inhibitors of steroid sulfatase. Bioorg. Med. Chem. 2004. V. 12. pp. 2759-2772.

155. Chander S. K., Purohit A., Woo L. W. L., Potter B. V. L., Reed M. J. // The role of steroid sulphatase in regulating the oestrogenicity of oestrogen sulphamates. Biochem. Biophys. Res. Comm. 2004. V. 322. pp. 217-222.

156. Duax W. L., Ghosh D, Pletnev V. // Steroid Dehydrogenase Structures, Mechanism of Action, and Disease. Vitamins And Hormones. 2000. V. 58. pp. 121-148.

157. Allan G. M., Bubert C., Vicker N., Smith A., Tutill H. J., Purohit A., Reed M. J., Potter В. V. L. // Novel, potent inhibitors of 17ß-hydroxysteroid dehydrogenase type 1. Mol. and Cell. Endocrinol. 2006. V. 248. pp. 204207.

158. Аль Сафар, Захарычев А. В., Ананченко С. Н., Торгов И. В. // Синтезгнекоторых 16,16-диметил-О-гомостероидов. Изв. АН СССР. Сер. Хим. 1968. №10. С. 2326-2332.

159. Зарецкий В. И., Вульфсон Н. С., Садовская В. Л., Ананченко С. Н., Торгов И. В. // Масс-спектрометрическое исследование D-гомоэквиленина, D-гомоэстрона и их стереоизомеров. Докл. АН СССР. 1964. Т. 158. №2. С. 385-388.

160. Aue W. Р., Bartholdi Е., Ernst R.R. // Two-dimensional spectroscopy. Application to nuclear magnetic resonance. J. Chem. Phys. 1976. V. 64 (5). pp 2229-2246.

161. Jenner J., Meier В., H., Bachmann P., Ernst R. R. // Investigation of exchange processes by two-dimensional NMR spectroscopy. J. Chem. Phys. 1979. V. 71 (11). pp 4546-4553.

162. Neuhaus D., Williamson M. P. // The Nuclear Overhauser Effect in Structural and Conformational Analysis. N. Y.: VCH Publishers, Inc., 1989. 541 p.

163. Bax A., Morris J. А. // An improved method for heteronuclear chemical shift correlation by two-dimensional NMR. J. Magn. Res. 1981. V. 42 (3). ppr501.505.

164. Ikegawa S., Kurosawa Т., Tahma M. // Syntesis of C-2 catehol equilin and equilenin derivatives for use in metabolic studies. Chem. Farm. Bull. 1988. V. 36(8). pp. 2993-2998.

165. Acselrud L.G., Griun Yu.N., Zavalii P.Yu., Pehsky V.K., Fundamentsky V.S. Collect. Abstr. XII Europ. Crystallogr. Meet. M. : Nauka; 1989. V. 3. pp. 155.

166. Sheldric G.M. SHELXL 97.1997. University of Gottingen, Germany.

167. Busetta В., Hospital M.// Structure crystalline et moleculaire de l'oestradiol hemihydrate. Acta Crystallogr. 1972. B28. pp. 560-567.

168. Егоров M. С. // Синтез и свойства модифицированных эстренов. Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук. СПб., СпбГУ. 2002.194 с.

169. Вульфсон Н. С., Зарецкий В. И., Заикин В. Г. // Масс-спектрометрическое определение конфигурации стероидных спиртов. Усп. хим. 1972. Т. 41. № 2. С. 272-286.

170. Крылова Е. Б., Мартынов В. Ф., Шавва А. Г. // Синтез метиловых эфиров В-нор-0-гомо-8-изоэстрона и В-нор-0-гомо-9-изоэстрона. ЖОрХ. 1978. Т. 14. Вып. 12. С. 2518-2523.

171. Shull J. D. // Hormonal Carcinogenesis. Encyclopedia of Cancer. Second Edition. Elsevier Science. 2002. V. 2. pp. 417-427.

172. Shields-Botella J., Bonnet P., Due I., Duranti E., Meschi S., Cardinali S., Prouheze P., Chaigneau A. M., Duranti V., Gribaudo S., Riviere A., Mengual S., Carniato D., Cecchet L., Lafay J., Rondot В., Sandri J., Pascal

173. J. S., Delansorne R. // In vitro and in vivo models for the evaluation of new inhibitors of human steroid sulfatase, devoid of residual estrogenic activity. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2003. V. 84. pp. 327-335.

174. Ghosh D. // Three. Dimensional Structures of Sulfatases. Metods in enzymology. 2005. V. 400. pp. 273-293.

175. Морозкина С. H., Селиванов С. И.,Абусалимов Ш. Н., Шавва А. Г. //f

176. Синтез, исследование структуры и биологических свойств 17аа-ацетокси-7р-метил-3-метокси-6-окса-1)-гомо-8а-эстра-1,3,5(10)-триена. Материалы международной конференции по химии гетероциклических соединений «КОСТ-2005». С. 103.

177. Reed М. J., Purohit А., Woo L. W. L., Newman S. P., Potter В. V. L. // Steroid Sulfatase: Molecular Biology, Regulation, and Inhibition. Endocrine Reviews. 2005. V. 26(2). pp. 171-202.

178. Пат. ЮАР S. African 67 04 742 (1967). C. A. 1970. V. 70. № 68633j.

179. Бхакка H., Уильяме Д. //Применение ЯМР в органической химии. Пер. с англ.; под ред. Шейнкера Ю. Н. М., Мир. 1966.

180. Самитов 10. Ю. // Стереоспецифичность констант ядерного спин-спинового взаимодействия и конформационный анализ. Казань, 1990.

181. Karplus М. // Vicinal proton coupling in nuclear magnetic resonance. J. Am. Chem. Soc. 1963. V. 85. N 18. P. 2870-2871.

182. Бартошевич P., Мечниковска-Столярчик В., Опшондек Б. // Методы восстановления органических соединений. Пер. с польского Островского Я., Столярека Я. Иностранная литература. М. 1960.

183. Коган JI. М., Гулая В. Е.,Лакум Б., Торгов И. В. // Получение ацетата метилового эфира ^/-8,14-секо-£)-1,3,5(10),9(11)-эстратетраен-3,17ар-диол-14-она и его использование в синтезе ¿/,/-£>-гомоэстрона. Изв. АН СССР. Сер. Хим. 1970. № 6. С. 1356-1363.

184. Biellmann J.-F. // Enantiomeric steroids: synthesis, physical, and biological properties. Chem. Rev. 2003. V. 103. N. 5. pp. 2019-2033.

185. Peterson P. E., Chevli D. M. // Solvents of low nucleophilicity. XV. Effects of substituents at C-17 upon the rates of solvolysis of 3-tosyloxy steroids. J. Org. Chem. 1974. V. 39. N 25. pp. 3684-3691.

186. Egorova V. V., Zakharychev. A. V., Ananchenko S. N. // Structure and reactivity of steroids VI: Long-range effects in a series of д1,3,5(10) estratriene compounds. Tetrahedron. 1973. V. 29. pp. 301-307.

187. Dratch S., Charnikhova Т., Saraber F. С. E., Jansena B. J. M., de Groota A. // A new approach toward the synthesis of C,D-cis coupled steroid and C,D-cis coupled D-homosteroid skeletons. Tetrahedron. 2003. V. 59. pp. 42874295.

188. Wolfling J., Mernyak E., Frank E., Falkay G., Marki A., Minorics R., Schneider G. // Synthesis and receptor-binding examinations of the normal and 13-e/>/-D-homoestrones and their 3-methyl ethers. Steroids. 2003. V. 68 (3). pp. 277-288.

189. Mueck A. O., Seeger H., Lippert Т. H. // Estradiol metabolism and malignant disease. Maturitas. 2002. V. 43. pp. 1-10.

190. Глуздиков И.А., Егоров M.C., Селиванов С.И., Старова Г.Л., Шавва А.Г. // Новые аналоги D-гомоэквиленина содержащие заместители в кольце D. ЖорХ. 2006. Т. 42. Вып. 11. С. 1687-94.