Синтез мембранных зондов прямым введением меток в липиды тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

СИНТЕЗ МЕМБРАННЫХ ЗОНДОВ ПРЯМЫМ ВВЕДЕНИЕМ МЕТОК В ЛИПИДЫ"

02.00.10 - Биоорганическая химия, химия природных и физиологически активных веществ

Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук

Научный руководитель, доктор химических наук, профессор В.й. ШВЕЦ

Москва - 1964 г.

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ШТЕРАГОНЫЙ ОБЗОР.

2.1. Классификация модифицированных фосфолишдов и методов их получения.

2.2. Получение исходных соединений. Общие приемы синтеза модифицированных глицерофосфолипидов.

2.2.1. Методы синтеза модифицирующих исходных соединений.

2.2.1.1. Флуоресцентно-меченые жирные кислоты.

2.2.1.2. Спин-меченые жирные кислоты.

2.2.1.3. Фотореактивно-меченые жирные кислоты.

2.2.1.4. Жирные кислоты с радиоизотопными и ЯМР-метками.

2.2.1.5. Жирные кислоты с электронно-плотными метками.

2.2.1.6. Фотополимеризующиеся жирные кислоты.

2.2.1.7. Реагенты для модификации полярной части фосфо-липидов.

2.2.2. "Скелетные" исходные вещества и ключевая стадия получения модифицированных фосфолипидов.

2.2.2.1. Полусинтетические методы получения модифицированных фосфолипидов.

2.2.2.1.1. Ацилирование глицерофосфатов и лизофосфо-липидов.

2.2.2.1.2. Ацилирование гидроксильных групп в полярной головке фосфолипидов и в гидроксиацильных остатках фоефатидилхолинов.

2.2.2.1.3. Н-Ацилирование остатков этаноламина, серина и аминоацильннх остатков фосфолипидов.

2.2.2.1.4. Ы-Алкилирование остатков этаноламина, серина и аминоацильных остатков фосфолипидов.

2.2.2.1.5. Присоединение по С =С - связям ацильних остатков фосфолипидов.

2.2.2.1.6. Перефосфатидилирование фосфатидилхолинов фосфолипазой Б

2.2.2.1.7. Конденсация фосфатидных кислот с модифицированными спиртовшш компонентами.

2.2.2.2. Синтетические методы получения модифицированных фосфолипидов.

2.2.2.2.1. Синтез фосфолипидов - производных 2-глицеро-фосфата.

2.2.2.2.2. Синтез фосфолипидов, модифицированных по глицериновому остатку.

2.2.2.2.3. Синтез фосфолипидов, модифицированных по фосфоэфирной группе.

2.2.2.2.4. Синтез фосфолипидов, модифицированных по полярной компоненте.

2.2.2.3. Биологические методы получения модифицированных глицерофосфолипидов.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУДЦЕНИЕ.

3.1. Синтез и установление структуры антрил- и пиренилстеариновой кислот.

3.2. Синтез флуоресцентно-меченых глицерофосфолипидов.

3.2.1. Синтез фосфатидилхолинов, содержащих 9(10)-антрил- и 9(10)-(4-пиренил)стеариновую кислоты.

3.2.2. Синтез флуоресцентно-меченых фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилинозита и дифосфатидилглицерина прямым введением метки в природные липиды.

3.3. Спектральные характеристики флуоресцентно-меченых жирных кислот и фосфолипидов и их взаимодействие с модельными и биологическими мембранами.

4. ЖСПЕРШЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.<.

5. ВЫВОДЫ.

6. ЖТЕРШРА.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ДМАП - 4-Н,К-диметиламинопиридин дасо - диметилсульфоксид до - 5-диметиламинонафталин-1-сульфонил (данейл) да - дифосфатидилглицерин (кардиолипин) да - дициклогексилкарбодиимид

Ж - жирные кислоты вд 7-нитробензо-2-окса-1,3-диазол-4-ил

ТГФ - те трагидрофуран тс - 2,4, 6-триизопропилбензолсульфонилхлорид

- фосфатидилглицерин ш - фосфатидилинозит ж - фосфатидная кислота

Фл А2(С,Р) от фосфолипаза А2(С,0) аш - глицерофосфолипиды шс - фосфатидилсерин

§х - фосфатидилхолин т - фосфатидилэтанолашн

ТТ7ТФ ТГ 1 - цитидиндифоефат

Ас - ацетил

Шр - п-нитробензил

Bzl - бензил

ОЬ2 - карбобензокси

Et - этил

Ме - метил

МБ - метансульфонил

РИ - фенил

Pht - фталоил

Ъ - пиридин

Те - п-толуолсульфонил

-7В настоящее время: в исследованиях модельных и биологических мембран широко используются флуоресцентные зонды липидной природы. Однако, существующие препаративные методы получения флуоресцентно-меченых <Ш1 имеют ряд недостатков. В одну стадию удается получить только <Ш1, меченые по полярной части. Эта модификация приводит к изменению заряда полярной головки, и, следовательно, к изменению поведения всей молекулы ЗШ в целом. Синтез же ЗШ, меченых по гидрофобной части, даже в простейшем случае получения флуоресцентно-меченого Ш. включает несколько стадий: синтез флуоресцентно-меченой жирной кислоты, гидролиз Ш фосфо липаз ой Аг, и ацилирование полученного лизо-ФХ активированным производным меченой Ж. В случае других ©I синтез дополнительно осложняется необходимостью защищать функциональные группы в полярной части молекулы.

Многоетадийность синтеза большинства флуоресцентных липид-ных зондов ограничивает их использование, поэтому поиск универсального метода, позволяющего получать флуоресцентно-меченые по гидрофобной части липиды различных классов в одну стадию, является весьма актуальной задачей.

Целью настоящей работы является разработка метода прямого введения ароматических хромофоров - антрацена и пирена в молекулы природных глицерофосфолипидов различных классов и ненасыщенных жирных кислот и изучение свойств полученных веществ в качестве флуоресцентных мембранных зондов.

ЛИТЕРАТУРННЙ ОБЗОР

Бурное развитие биоорганической химии последних десятилетий привело к созданию препаративных методов синтеза практически всех основных классов веществ, составляющих живые организмы, в том числе »¡ФЛ Щ. Однако, задачи, стоящие перед исследователями, все чаще требуют использования модифицированных ФЛ.

Область использования модифицированных ФЛ обширна. Они являются инструментом для исследования: а) метаболизма отдельных представителей ФЛ [ 2]; б) молекулярной организации субмолекулярных структур, в состав которых входят ФЛ (мембран, яипопро-теинов плазмы крови и т.д.) и; процессов, происходящих в них [3 - 7], в) ферментов, для которых ФЛ являются: субстратами [812]; кроме этого, некоторые представители модифицированных ФЛ представляют интерес в качестве потенциальных терапевтических средств [13,14].

В принципе, для получения модифицированных ФЛ можно использовать традиционные методы синтеза ФЛ [I], однако, в большинстве случаев требуются специальные методики, учитывающие специфику как метки, так и метода их дальнейшего применения. Относительная труднодоступность большинства меток также накладывает отпечаток на стратегию синтеза. Предпочтительным считается введение метки на последних стадиях синтеза, что уменьшает возможность модификации метки (являющейся, как правило, лабильной) в процессе синтеза и позволяет экономно расходовать меченые полупродукты.

2.1. КЛАССИШКАЦИЯ МОДИШЩРОВАНШХ ФСШШЖВДОВ И МЕТОДОВ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ.

Термин модифицированные ФЛ объединяет многочисленную группу соединений с очень разнообразной структурой, поэтому прежде, чем рассматривать методы получения модифицированных ФЛ, необходимо остановиться на их классификации.

Классифицировать модифицированные ФЛ можно по разным признакам: по целям модификации ( и, следовательно, по способу их дальнейшего использования), по месту модификации и по виду модификации (по типу метки).

По целям модификации можно выделить два типа модифицированных ФЛ (рис. I): I - меченые ФЛ (как правило, ФЛ природной структуры, содержащие метку или репортерную группу; используются обычно в качестве липид-специфических зондов (или меток), близко имитирующих по своим свойствам соответствующие природные липиды) и П - структурные аналоги ФЛ ( ФЛ, в которых изменена структура гидрофобной или полярной частей молекулы и/или тип химической связи между ними с целью придания им свойств, отличных от природных ФЛ).

По месту модификации все модифицированные ФЛ делятся на два класса (рис. 2): I - производные, в которых сохранена природная З-зп-глицерофосфатная структура (в этот класс входят большинство меченых ФЛ) (рис. 3); 2 - ФЛ с измененным "скелетом". Перше, в свою очередь, подразделяются на ФЛ, модифицированные по гидрофобной или по полярной части, а вторые - на: производные 2-глицерофосфата [15]; ФЛ, модифицированные по глицериновому остатку (либо один из атомов кислорода глицеринового остатка замещен на другой гетероатом (N,5 ) [11,12,16-19], либо глицериновый остаток замещен на остаток другого полиола : ал-кантриола [17,20], алкандиола [ 17,21,22], 1,2,3-циклопентан-триола [23-26] или 1(2)-хлор(фтор)-пропан-2,3(1,3)-диола [14]) и ФЛ, модифицированные по фосфоэфирной группе (тион-ФЛ - аналоги, у которых фосфорильная группа Р=0 заменена на тиофосфориль-ную Р=Б [27-31], и ФЛ, содержащие С-Р- или С-Р-С- связи,- соответственно фосфоновые [32-39] и фосфиновые [38] аналоги ФЛ).

Рис.1. Классификация модифицированных ФЛ по целям модификации и по типу метки.

Рис.2, Классификация модифицированных ФЛ по месту модификации.

1 I

0-СН2 I

I ! 'г^-т-! I 10 I |

I , I 13I. 2. J г —--1 (----| I-----|

1+1 1+1 «+ 4.2 I

Н ; -СН2СН24Ше31 ; -СН2СН2гШ3 ¡; -Ш2-^Н+Ш3 у,

СОО" 2

---пго" I , Г н2-о-р-о-сн2

ГпП 0 -иППППТ)' сн,

Н-С4Ш НСОССЖ' I ь*л] I

-Ш2-СН-СН2 ; | НО4—^ | ; -СН2 СЯ20С(Ж

К] ¡-«„^

Рис. 3. Возможные места модификации <В1:

1 - гидрофобная часть (ацильные или алкильные остатки);

2 - глицериновый остаток;

3 - фосфоди- (или фосфомоно-) эфирная группа;

4 - полярная компонента;

4.1 - триметиламмониевая группа Ж;

4.2 - аминогруппы §Э и ШС;

4.3 - гидроксигруппы ФГ, ДФГ и ФИ.

Наиболее общим признаком, влияппрш на свойства модифицированных ФЛ, является место локализации метки (модифицированного фрагмента) - гидрофобная или полярная часть молекулы. Так как полярная часть молевулы, как правило, определяет свойства ФЛ, то ее модификация может существенным образом изменить поведение молекулы Ф1. Например, ацилирование по аминогруппе ФЭ (или ФС) [40-4б] изменяет заряд и размер полярной головки молекулы. Поэтому при получении меченых ФИ, которые по своим свойствам должны как можно ближе имитировать природные ФЛ, более целесообразна модификация жирнокислотной части ФЛ; это тем более оправдано, что указанная область имеет относительно большие размеры, поэтому такое введение метки вносит меньшее возмущение в поведение молекулы ФЛ. Классификация меченых ФЛ по месту модификации (по гидрофобной или по полярной части) удобна тем, что часто, независимо от типа метки, содержит информацию о методе получения (чего нельзя сказать о структурных аналогах ФЛ).

Меченые ФЛ можно подразделить по типу метки на радиоизотопно-меченые, спин-меченые (имеющие в своем составе стабильные радикалы), флуоресцентно-меченые, фотореактивно-меченые (содержат фотоактивируемые группы), ФЛ с ЯМР-метками (имеют ядра, наблюдаемые в ЯМР-спектроскопии) и ФЛ с электронно-плотными метками (рис. I).

В случае структурных аналогов ФЛ классификация по месау модификации обычно не содержит информации о методах их получения. Поэтому этот тип модифицированных ФЛ удобнее рассматривать по целям модификации. По этому признаку они подразделяются на: фотополимеризующиеся аналоги (содержат в жирнокислотной цепи сопряженные СэС и С=С - связи [47-48] или акрилоилокси-группу [49]), лиганды для получения биоспецифических сорбентов (содержат в гидрофобной части активные функциональные группы: СН [50,5l] или СОШ [50,52]), субстратные аналоги фосфолипаз (самая многочисленная и разнообразная группа, в которую входят ФЛ, модифицированные по ацильным остаткам [l7,53]; по глицериновому скелету: тиоэфирные [ll,12], ациламино-аналоги ФЛ [l7-19] и производные полиолов [17,20-22]; по фосфоэфирной группе [ll,17,38] и по полярной головке: аналоги природных ФЛ с различным расстоянием между атомами Р и Н [54-59]); и липофильные биологически активные вещества (антиоксиданты [60,6l], иммуноактивние вещества [б2], вещества, обладающие противоопухолевой активностью [13] - в эту группу входят, в основном, ©I, модифицированные по полярной группе).

Получение модифицированных ФЛ связано, по крайней мере, с 9 типами реакций (рис.3 ): I) присоединение по кратным связям Ж; 2) замещение атомов Н в ЖК; 3) конденсация с кетогруппами кетокислот; 4) О-ацилирование гидроксикислот, глицерина или миоинозита; 5) О-алкилирование гидроксикислот, глицерина или миоинозита; 6) Ш-ацилирование остатков этаноламина и серина; 7) Ы-алкилирование остатков этаноламина и серина; 8) образование фосфомоно- (или фосфоди-) эфирных связей (фосфорилирование); 9) реакции производных фосфора (Ш) (сульфуризация или алкили-рование по Арбузову).

И, наконец, по стратегии методы получения модифицированных ФЛ условно разделяют на синтетические (т.е. сборка молекулы из элементарных составных частей: глицерина, жирных кислот и т.д.); полусинтетические (исходными соединениями являются природные ФЛ, которые подвергаются модификации с помощью химических и ферментативных реакций); и биологические, в которых меченые ФЛ из меченых предшественников синтезируют живые системы (например, микроорганизмы).

внв оды

1. Разработан одностадийный метод получения флуоресцентно-меченых по гидрофобной части глицерофосфолипидов и жирных кислот с антрильной и пиренильной метками взаимодействием природных липидов и ненасыщенных жирных кислот с аренами в условиях реакции Фриделя-Крафтса.

2. Установлено строение продуктов взаимодействия олеиновой кислоты с антраценом и пиреном: в первом случае основными веществами являются 9(10)-(1-антрил)-, 9(10)-(2-антрил)- и 9(10)-(9-антрил)-стеариновые кислоты в соотношениях 58%, 22% и 20% соответственно, а во втором случае - 9(10)-(4-пиренил)-стеариновая кислота.

3. Показана зависимость степени модификации природных фосфолипидов от количества хлористого алюминия. Найдены оптимальные соотношения фосфолипид : катализатор, равные: для фосфатидилхолина - I : 5-5,5 , для фосфатидилэтаноламина -I : 4,5-5 , для фосфатидилинозита и дифосфатидилглицерина -I : 5-6.

4. Изучены спектральные свойства полученных флуоресцентно-меченых жирных кислот И' фосфолипидов, их взаимодействие с модельными и некоторыми биологическими мембранами. Показано, что они могут быть использованы в качестве мембранных флуоресцентных зондов.

1. Химия липидов/Евстигнеева Р.П., Звонкова Е.Н., Серебренникова Г.А., Швец В.И. - М.: Химия, 1983. - 296 с.

2. Brain P., Davison A., Natara^an V., Sastry P. Preparation of I-acyl-2-succinilglycero-3-pb.osphorylcholine and evidence against its imrolvment in succinate dehydrogenase action. -Chem. Phys. Lipids, 1976, v.17, H 4, p.407-4I5.

3. Stoffel , Michaelis G. bipid-lipid and lip id-protein interactions as studied with a novel type of fluorescent fatty acid and phospholipid probes. 2. Physiol. Chem., 1976, Bd. 357, IT I, S.21-33*

4. Stoffel Metz P. Covalent cross-linking of photosensitive phospholipids to human serum high density apolipoproteins (apoHEL). Z. Physiol. Chem., 1979, Bd.360, H 2, S.I97-206.

5. Galla H.-J"., Hartmann Ebccimer-forming lipids in membrane research. Chem. Phys. Lipids, 1980, v.27, H" 3» p.199-219.

6. Молотковский Юл. Г., Бергельсон Л.Д., Маневич Е.М. и др. Изучение липопротеинов высокой плотности с помощью липидспе-цифичных флуоресцентных зондов.-Биоорган, химия, 1981, т.7,1. Р 9, с. 1395-1403,

7. Молотковский Юл.Г., Маневич Е.М., Бабак В.И., Бергельсон Л.Д. Антрил- и периленоилмеченые липиды как мембранные зонды. -Биологич. мембраны, 1984, т.1, № I, с.33-43.

8. Суханов B.A., Оханов B.B., Швец В.И., Мирошников А.И. Взаимодействие фосфолипазы из яда кобры со спин-мечеными фосфолипи-дами. Молекулярная биология, 1980, т. 14, № 3, с.606-613.

9. Martin Т., Lagunoff D. Rat cell phospholipase k^i activity toward exogenous phosphatidyl serine and inhibition by K-(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)phosphatidylserine. Biochemistry, 1982, v• 21, N6, p. 125^-1260.

10. Cox J., Snyder W., Horrocks L. Synthesis of choline and ethanolamine phospholipids with thiophosphoester bonds as substrates for phospholipase C. Chem. Phys. Lipids, 1979» v.25, H4, p.369-380,

11. Cox J., Horrocks L. Preparation of thioester substrates and development of continuous spectrophotometric assays for phospholipase k^ and monoacylglycerol lipase. J. Lipid Res., 1981, v.22, N 3, p.496-505.

12. Turcotte ¿Г., Srivastava S., Meresak W. e.a. Cytotoxic lipo-nucleotide analogs. I.Chemical synthesis of С DP-diacyl glycerol analogs containing the cytosine arabinoside moiety, -Biochim. et biophys. acta, 1980, v.619, N 3» p.604-618.

13. Brachwitz H., Langen P., Hintsche R., Schildt J. Halo lipids. 5«Synthesis, nuclear magnetic resonance spectra and cytostatic properties of halo analogues of alkyllysophospholipids. Chem. Phys. Lipids, 1982, v.31» Я I, p.33-52.

14. Slotboom A,, Verheij H., De Haas G. Simplified pathways for the preparation of some well-defined phosphoglycerides. -Chem. Phys. Lipids, 1973, v.II, N 4, p.295-317.

15. Чупин B.B., Малина E.B., Ревенко И.В., Василенко И.А., Серебренникова Г.А., Евстигнеева Р.П. Синтез и использование тиофосфатидилхолина в исследовании мембран методом ^*Р-ЯМР. Биоорган, химия, 1984, т.Ю, Ш 7, с.970-974.

16. Bonsen P., Burbach-Westerhuis G., De Haas G., Van Deenen L. Chemical synthesis of some lecithin analogues potential inhibitors of phospholipase A. Chem. Phys. Lipids, 1972,v.8, БГ 3, p.199-220.

17. Chandrakumar Ж., Hajdu J. Synthesis of enzyme-inhibitory phospholipid analogues. Stereospecific synyhesis of 2-ami-dophosphatidylcholines and related derivatives. J. Org. Chenu, 1982, v.47, N II, p.2I44-2I47.

18. Chandrakumar N., Hajdu J. Stereospecific synthesis of ether phospholipids. Preparation of I-alkyl-2-.(acylamino)-2-de-oxyglycerophosphorylcholines. J. Org. Chem., 1983, v.48, N 8, p.1197-1202.

19. Безуглов B.B., Молотковекий Юл.Г., Бергельсон Л.Д. Синтез двух аналогов фосфатидилхолина. ЖОрХ, 1974, т.10, вып.7, с.1398-1402.

20. Eibl Н., Westphal О. Synthesen von cholinphosphatiden.5« Palmitoyl-propandiol-Cl, 3 )-phosphorylcholin (2-desoxylysole cithin) und cOjoA-alkandiol-analoga. biebigs Ann. Chem., 1967, B.709, S.244-247.

21. Никулина Л.Ф., Кожухов В.И., Молотковекий Юл.Г., Бергельсон Л.Д. Диольные липиды. Сообщение 23. Синтез ненасыщенных диольннх лецитинов. Изв. АН СССР. Сер. хим., 1973, Р 2, с.410-414.

22. Hancock A. Synthesis of cyclopentanoid analogs of diacyl-glycerophosphate. Methods Enzymol., 1981, v.72, Pt.D, p.640-672.

23. Hancock A. , Lister M., Sable H. Analogs of natural lipids. 7.Sunthesis of cyclopentanoid analogs of phosphatidylcholine. J. Lipid Res., 1982, v.23, ЕГ I, p.I83-I89.

24. Pajouhesh H., Hancock A. Synthesis of conformationally reatricted acidic lipids.I.Cyclopentanoid analogs of phosphatidyl serine. J. Lipid Res., 1983, v.24, N 3, p.645-651.

25. Pa^ouhesh H., Hancock A. Synthesis of polar head group homologs of all-trans-cyclopentano-phosphatidylcholine, phos-phatidyl-П, .$-dimethylethanol amine, and pho sphatidylethanol-amine. J. Lipid Res., I9S4, v.25, H 3, p.294-303.

26. Нифантьев Э.Е., Предводителев Д.А., Аларкон X.X. Синтез липидов и их моделей на основе алкиленфосфитов глицерина. П.Фосфатидилхолины и их аналоги. ЖОрХ, 1978, т. 14, вып.1, с.63-71.

27. Нифантьев Э.Е., Предводителев Д.А., Смирнова Л.И., Фурсенко И.В. Ацилирование ацеталей и кеталей глицеринов. Новый синтез 1,2- и 1,3-диацилбензилглицеринов и фосфатидных кислот. Биоорган, химия, 1980, т.б, № 9, с.1346-1354.

28. Предводителев Д.А., Щурсенко Й.В., Нифантьев Э.Е. Новый син< тез фосфатидных кислот, их тио- и селеноаналогов. Биоорган. химия, 1981, т.7, № 9, с.1426-1428.

29. Orr G., Brewer С., Heney G. Synthesis of the diastereomers of 1,2-dipalmLtoyl-sn-glycero-3-thiophosphorylethanolamine and their stereo specific hydrolysis Ъу phospholipases k^ and C.- Biochemistry, 1982, v.21, Ж 13, p.3202-3206.

30. Bruzik E., Jiang R.-T., Tsai M.-D. Phospholipids chiralat phosphorus. Preparation and spectral properties of chiral thiophospholipids. Biochemistry, 1983, v.22, IT 10, p.2478-2486.

31. Baer E., Basu H., Pal B.Phosphonolipids.X.A new synthesisof phosphonic acid analogues of L-c*-cephalins. Can, J. Biochem., 1976, v.45, IT 8, p. 1467-1468.

32. Ваег E., Rao K. Phosphonolipids.XXI. Synthesis of phospho-nic acid analogues of diether b-o6-(H,H-dimethyl)cephalins.- Can. J. Biochem., 1970, v.48, Ж 2, p. 184-186.

33. Ваег В., Pavanaram S. Phosphonolipids.XXIII.Synthesis of phosphonic acid analogues of b-ot-CF-methyl)cephalins. -Can. J. Biochem., 1970, v.48, Ж 9, p.979-987.

34. Rosenthal A. Chemical synthesis of phospholipids and analogues of phospholipids containing Carbon-Phosphorus bonds,- Methods Enzymol., 1975, v.35»Pt.B, p.429-529*

35. Аларкон X.X., Предводителев Д.А., Нифантьев Э.Е. Синтез липидов и их моделей на основе алкиленфосфитов.Ш.Метилфос-фоновые аналоги фосфатидилхолинов и НД-диметилфосфатидил-этаноламинов. Биоорган, химия, 1978, т.4, № II, с.1513-1519.

36. Faqvi E., Behr J.-P., Chapman D. Methods for probing lateral diffusion of membrane components. Triplet-triplet annihilation and triplet-triplet energy transfer. Chem. Phys. Lett., 1974, v.26, Ж 3, p.440-444.

37. Chakrabarti P., Khorana H. A new approach to the study ofphospholipid-protein interactions in biological membranes. Synthesis of fatty acids and phospholipids containing photosensitive groups. Biochemistry, 1975» v.14, H 23, p. 5021-5033.

38. Harris W. Interactions between fluorescent labeled phosphatidyl serine and cations. Chem. Phys. Lipids, 1977» v.I9, H" 3, p.243-254.

39. Megli P., Landriscina C., Kuggiero F., Quagliariello E. Applications of 2,2,5,5-tetramethylpyrroline-F-oxide-3-carbonyl chloride to phospholipid polar head spin labeling. Chem. Phys. Lipids, 1978, v.22, H 2, p.89-96«

40. Owen C. A membrane bound fluorescent probe to detect phospholipid vesicle-cell fusion. J. Membrane Biol., 1980, v.54, IT I, p. 13-20.

41. Huang K.-S., Law J. Photoaffinity labeling of Crotalus atrox phospholipase A^ by a substrate analogue. Biochemistry, 1981, v.20, EI, p.I8I-I87.

42. Johnston D., Sanghera S., Pons M., Chapman D. Phospholipid polimers synthesis and spectral characteristics. -Biochim. et biopys. acta, 1980, v.602, N I, p.57-69.

43. Евстратова H.Г., Василенко И.А., Попова Т.П., Серебренникова Г.А., Евстигнеева Р.П. Синтез модифицированных фосфоли-пидов. Биоорган, химия, 1979, т.5, № 8, с.1140-1145.

44. Евстратова Н.Г., Позмогова Г.Е., Серпухова Е.М., Василенко

45. И.А., Серебренникова Г.А,, Евстигнеева Р.П. Синтез липидннх лигандов для биоспецифичкской хроматографии. Биоорган, химия, 1982, т.8, Р 7, с.998-1003.

46. Berchtold R. Synthesis of carboxyphosphospholipids. Chem. Phys. Lipids, 1981, v.28, N I, p.55-60.

47. Criipta 0. Bali A. Carbamyl analogs of phosphatidylcholines. Synthesis, interaction with phospholipases and permiabi-lity behavior of their liposomes. Biochim. et biophys. acta, 1981« v.663, N2, p.506-515.

48. Muramatsu 5?., Нага I. Synthese de D,L-phosphatidylpropa-nolamine .1. Dip almitoyl-D, L-glyceryl-I-pho sphoryl-3-0-amino-I-propanol-3. Bull. Soc. Chim. I*., 1971» И 9, P.3335-3338.

49. Muramatsu Т., Нага I. Synthese de D,L-phosphatidylpropanol-amine . II. Dip almitoyl-D, L-glyceryl-I-pho srphoryl-2-0-D, L-amino-I-iso-propanol. Bull. Soc. Chim. Sr., 1971, H 9» P.3338-3340.

50. Eibl H. An efficient synthesis of minced acid phospholipids using I-palmitoyl-sn-glycerol-3-phosphoric acid bromoal-kyl esters. Chem. Phys. Lipids, 1980, v.26, N 3, p.239-247.

51. Kumar A., Gupta C. Effect of altered polar headgroup of phosphatidylethanolamines on transbilayer aminophospholipid distribution in sonicated vesicles, Biochim. et bio-phys. acta, 1983, v.730, MI, p.1-9.

52. Нифантьев Э.Е., Предводителев Д.А., Золотов М.А. Синтез фосфатидилионолов. Биоорган, химия, 1981, т.7, Р 7, с. II00-II06.

53. Нифантьев Э.Е., Предводителев Д.А., Золотов М.А. Синтез фосфатидилгидрохинонов. Биоорган, химия, 1982, т.8, № 9, с.1263-1268.

54. Sklar L., Hudson B., Simoni R. Conjugated polyene fatty acids as fluorescent probes: Synthetic phospholipid membrane studies. Biochemistry, 1977» v.I6, N 5, p.819-828,

55. Somerharju P., Wirtz K. Semisynthesis and properties of a fluorescent phosphatidylinositol analogue containing a cis-parinaroyl moiety. Chem. Phys. Lipids, 1982, v.30, N I, p.81-91.

56. Berkhout T., Visser A., Wirtz K. Static and time-resolved fluorescence studies of fluorescent phosphatidylcholine bound to pho sphat idyl choline transfer protein of bovine liver. Biochemistry, 1984, v.23, H 7, p.I505-I5I3.

57. Schmitz В., Egge H. I-trans-Parinaroylphospholipids: Synthesis and fast atom bombardment/electron impact mass spectrometric characterization. Chem. Phys. Lipids, 1984, v.34, H 2, p.139-151.

58. Cadenhead D., Kellner В., Jacobson K., Papahadjopoulos D. Fluorescent probes in model membranes.I.Anthroyl fattyacid derivatives in monolayers and liposomes of dipalmi-toylphosphatidyl choline. Biochemistry, 1977, v.IS, If 24, p.5386-5392»

59. Waggoner A., Stryer L. Fluorescent probes of biological membranes. Proc. Hat. Acad. Sci. USA, 1970, v.67, H" 2, p.579-589.

60. Каплун А.П., Башарули B.A., Швец В.И. Синтез флуоресцентно-меченых фосфатидилхолинов с остатками П-(2-антроил)-ундекановой кислоты. Биоорган, химия, 1978, т.4, № II, с. 1567-1568.

61. Каплун А.П., Башарули В.А., Пекина Л.Г., Швец В.И. Синтез флуоресцентно-меченых жирных кислот с антроильной и ан-трильной группами. Биоорган, химия, 1979, т.5, IP 12,с.1826-1830.

62. Bony J., Tocanne J.-F. Synthesis and physical properties of phosphatidylcholine labeled with 9-(2-anthryl)потттю-ic acid, a new fluorescent probe. Chem. Phys. Lipids, 1983, v.32, H 2, p.105-121.

63. Waugh K., Berlin K. Studies in lipid mimics. Synthesis and carbon-13 relaxation time measurement (Tj values) of methyl esters of (2-anthryl)alkanoic acids. J. Org. Chem., 1984, v.49, N 5, p.873-878.

64. Stoffel W., Michaelis G. Chemical syntheses of novel fluorescent-labelled fatty acids, phosphatidylcholines, andcholesterol esters. Z. Physiol. Chem., 1976, Bd.357, H I, S.7-I9

65. Молотковский Юл.Г., Дмитриев П.И., Никулина Л.Ф., Бергельсон Л.Д. Синтез новых флуоресцентномеченых фосфатидилхоли-нов. Биоорган, химия, 1979, т.5, №4, с.588-594.

66. Galla Н., Theilen U., Hart ma rm W. Transversal mobility in bilayer membrane г vesicle si use of pyrene as optical probe. Chem. Phys. Lipids, 1979, v.23, И" 3, p.239-251.

67. Sunamoto ¿Г., Eondo H., Homura Т., Okamoto H Liposomal membranes. 2. Synthesis of a novel pyrene-labeled lecithin and structural studies on liposomal bilayers. J. Amer. Chem. Soc., 1980, v.102, К 3, p.1146-1152.

68. Thuren Т., Yirtanen J., Kinnunen P. Hydrolysis of 2-41.pyrenyl )butanoyl . -I-triacontanoyl-sn-glycero-3-pbo spho-choline by pancreatic phospholipase A^. Z. Physiol. Chem., 1982, Bd.363, H 9, S.996-997.

69. Thuren T., Yirtanen J., Tainio P., Kinnunen P. ^drolysis of I-triacontanoyl-2-(pyren-I-yl )hes:anoyl-sn-glycero-3-phosphocholine by human pancreatic phospholipase Ag. -Chem. Phys. Lipids, 1983, v.33, Я 3, p.283-292,

70. Молотковский Юл.Г., Бергельсон Л.Д. Периленоилмеченне ли-пидспецифические флуоресцентные, зонды. Биоорган, химия, 1982, т.8, Р 9, с.1256-1262.

71. Monti J., Christian S., Shaw W,, Unley W. Synthesis and properties of a fluorescent derivative of phosphatidylcholine. Life Sci., 1977, v.2I, IT 3, p.345-356.

72. Nichols J., Pagano E. Kinetics of soluble lipid monomer diffusion between vesioles. Biochemistry, 1981, v.20, N 10, p»2783-2789*

73. Молотковский Юл.Г., Дмитриев П.И., Молотковская Й.М., Бергельсон Л.Д., Маневич Е.М. Синтез новых флуоресцентномече-ных фосфолипидов и изучение их поведения в модельных мембранах. Биоорган, химия, 1981, т.7, № 4, с.586-600.

74. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: Наука, I960. -320 с.

75. Жданов Р.й. Парамагнитные модели биологически активных соединений. М.: Наука, 1981. - 280 с.

76. Lee Т., Birrell G., Keana J. A new series of minimum ste-ric perturbation nitroxide lipid spin labels. J. Amer. Chem. Soc., 1978, v. 100, N5, p.I6I8-I6I9.

77. Lee Т., Keana J. ITitroxides derived from 3»4-dihydro-2,5-dimethyl-2H-pyrrole-I-oxide: a new series of minimum ste-ric perturbation lipid spin labels. J. Org. Chem., 1978, v.43, К 21, p.4226-4231.

78. Борин М.Л., Кедик С.А., Володарский Л.Б., Швец В.И. Производные стеариновой кислоты с имидазолиновым нитроксильннм фрагментом. Биоорган, химия, 1984, т.10, Р 2, с.251-255.

79. Keana J., KLeur Ъ. Saturated and unsaturated lipid spin labels with terminally located nitroxLde groups. Chem. Phys. Lipids, 1979, v.23, N 3, p.253-266.

80. Gupta C., Radhakrishnan R., Khorana H. Glycerophospholipid synthesis: Improved general method and new analogs containing photo act ivable groups. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1977, v.74, N 3X3, p.4315-4319.

81. Вавер B.A., Ушаков A.H., Циренина M.JI. Изучение липид-липид-ных и липид-белковых взаимодействий в мембранах с применением фосфолипидов, содержащих фотореактивны©: группировки.

82. Образование ковалентных липид-липидннх связей при облучении УФ-светом модельных мембран. Биоорган, химия, 1979, т.5, IP 10, с.1520-1529.

83. Moonen P., Haagsman Н., Van Deenen L., Wirtz К. Determination of the hydrophobic binding site of phosphatidylcholine exchange protein with photosensitive phosphatidylcholine. Eur. J. Biochem., 1979, v.99, N3, p.439-445.

84. Radliakrislman R., Robson R., Takagaki Y., Khorana H. Synthesis of modified fatty acids and glycerophospholipid analogs. Methods Enzymol., 1981, v.72, Pfc.D, p.408-433.

85. Radhakr ishnan R., Gostello C., Khorana H. Sites of photo-lytic intermolecular cross-linking between fatty acyl chains in phospholipids carrying a photoactivable carbene-precursor. J. Amer. Chem. Soc., 1982, v.104, N 14, p. 3990-3997.

86. Stoffel W., Dfirr W., Salm K. Chemical proof of lipid-pro-tein interactions by crosslinking photosensitive lipids to apoproteins. Z. Physiol. Chem., 1977, Bd.358, Ж 4, S.453-462.

87. Stoffel W. Chemical synthesis of ^H- and ^C-labeled polyunsaturated fatty acids. J, Amer. Oil Chem. Soc., 1965, v.42, Ж 7, p.583-587.

88. Dinh-Nguyen Ж., Stenhagen 3D. A convenient process for the synthesis of organic compounds of high deuterium content. Acta Ohem. Scand., 1966, v.20, 1T5, p.I423-I424.

89. Kingsley P., Feigenson G. The synthesis of a perdeutera-ted phospholipid! I,2-dimiristoyl-sn-glycero-3-phospho-choline-dr;2. Ohem. Phys. Lipids, 1979» ET 2, p.135-147.

90. Patel K., Pownall H., Morrisett J., Sparrow J. An improved synthesis of methyl-labelled fatty acids. Tetrahedron Lett., 1976, IT 45, p.4015-4018.

91. HI. Das Gupta S., Rice D., Griffin R. Synthesis of isotopi-cally labeled saturated fatty acids. J. Lipid Res., 1982, v. 23, Ж I, p. 197-200.

92. Bbwton D., Davis R., Hevenzel J. Decarboxylation and reconstitution of linoleic acid. J. Mer. Ohem. Soc., 1952, v.74, p.1109.

93. Stoffel W. Synthese von l-^c.-markierten all^cis^poly-enfetts&uren. Liebigs Ann. Ohem., 1964, Bd.673, S.26-36.

94. Tulloch A. Synthesis of 2S-2-%.- and [2R-2-2H]-hexadecanoic acids. Chem. Phys. Lipids, 1982, v.30, N p. 325-335.

95. Longmuir K., Da hi qui st F. Direct spectroscopic observation of inner and outer hydrocarbon chains of lipid bi-layer vesicles. Proc. Hat. Acad. Sci. USA, 1976, v.73» 18, p.2716-2719.

96. Andrews S., Jailer J., Barrnett R., Mizuhira V. Organo-metallic fatty acid and phospholipid analogs. Synthesis and incorporation and detection in model membranes and biomembranes. Biochim. et biophys. acta, 1978, v. 506, H I, p.I-17.

97. Левченко Л.А., Лихтенштейн Г.И., Раевский А.В., Салитра И.О. Применение меркарбидных меток новый подход в электронной микроскопии белков и мембран. - Успехи биол. химии, 1979, т.20, с.257-274.

98. ALbrecht О., Johnston D., Yillaverde С., Chapman D. Stable biomembrane surfaces formed by phospholipid polymers. -Biochim. et biophys. acta, 1982, v.687, Я 2, p.165-169.

99. Juliano R., Hsu M., Regen S., Singh M. Photopolymerized phospholipid vesicles. Stability and retention of hydro -philic and hydrophobic marker substanses. Biochim. et biophys. acta, 1984, v.770, H 2, p.I09-II4.

100. Monti 3., Christian S., Shaw 1. Synthesis and properties of a highly fluorescent derivative of phosphatidylethnnol-amine. J. Lipid Res., 1978, v. 19, H" 2, p.222-228.

101. Куликов A.B., Кисель M.A. , Зырянов B.B., Лихтенштейн Г.И. Исследование поверхности фосфолипидных бислоев методом спиновых меток. Молекулярная биология, 1978, т. 12, № 3, с.580-586.

102. Chang В., Huang L. Synthesis and characterization of a newfluorescent phospholipid. Biochim. et biophys. acta, 1979, v.556, U I, p.52-60.

103. Landriscina G., Megli P., Quagliariello E. A general method for phospholipid polar head spin labeling. Synthesis of dipho sphatidylglycerol-2-(2',2*,5*,5'-tetramethylpyrro-line-H-oxide)carboxylate. Anal. Biochem., 1976, v.76,1. I, p.292-299.

104. Tanaka K., Ohnishi S. Heterogeneity in the fluidity of ixb-tact erythrocyte membrane and its bomogenization upon, hemolysis. Biochim. et biophys. acta, 1976, v.426, N 2,p.218-231.

105. Stoffel V. Chemical synthesis of choline-labeled lecithins and sphingomyelins. Methods Enzymol., 1975» v.35 ,Pfe.B, p.533-541.

106. Препаративная биохимия липидов/Л.Д. Бергельсон, Э.В. Дят-ловицкая, Юл.Г. Молотковекий и др.-М.: Наука, 1981.- 256 с.

107. Cable М., Jacobus J., Powell G. Cardiolipint A stereospe-cifically spin-labeled analogue and its specific enzymic hydrolysis. Proc. Fat. Acad. Sci. USA, 1978, v.75» И 3» p.1227-1231.2+

108. Ito Т., Ohnishi S. Ca -Induced lateral phase separations inphosphatidie acid-phosphatidylcholine membranes. Biochim. et biophys. acta, 1974, v.352,IT I, p.29-37.

109. Ito Т., Ohnishi £., Ishinaga M., Kit о M. Synthesis of a new pho sphat idyl serine spin-label and calcium-induced lateral phase separation in phosphatidyl serine-phosphatidylcholine membranes. Biochemistry, 1975, v. 14, N 14, p. 3064-3069.

110. Schroit A., Madsen J". Synthesis and properties of radio-iodinated phospholipid analogues that spontaneously undergo vesicle-vesicle and vesicle-cell transfer. .- Biochemistry, 1983, v.22, Ш 15, p.3617-3623.

111. Pugh E., Eates M. A simpified procedure for synthesis of di-I4c.acyl-labeled lecithins. J. Lipid Bes., 1975, v.L6, N 5, p.392-394.

112. Davi&owiez E., Bohtman J. Fusion and protein-mediated phospholipid exchange studed with single bilayer phosphatidylcholine vesicles of different density. -Biochim. et biophys. acta, 1976, v.455, Ж 3, p.621-630.

113. Молотковский Юл.Г., Унковский В.И., Бергельсон Л.Д. Ферментативный синтез флуоресцентного фосфатидилэтаноламина. Биоорган, химия, 1980, т.6, IP I, с.144-145.

114. Симонова Т.Н., Вавер В.А. Синтез фосфатидилглицеринов с фотореактивными грушами в полярной части молекулы.

115. В кн.: Тезисы Ш Всесоюзного симпозиума "Структура, биосинтез и превращение липидов в организме животного и человека". Л.: Наука, 1978, с.74-75.

116. Каплун А.П., Шрагин А.С., Лютик А.й., Швец.В.И., Евстигнеева Р.П. Синтез флуоресцентно-меченого фосфатидилмиоино-зита с использованием- фосфолипазы D. Докл. АН СССР, 1983, т.2те, № 2, с.350-351.

117. Martin Т., Lagunoff D., Activation of histamine secretion from rat mast cells by aqueous dispersions of phosphatidyl serine. Biochemistry, 1980, v.I9, Ж 13, p.3106-3113.

118. Aneja H., Davies A. The synthesis of a spin-labelled gly-cerophospholipid. Chem. Phys. Lipids, 1970, v.4, H I, p.60-71.

119. Eertscher P., Buger H.-J., Gawrisch K. e.a. Synthesis of some spin-labelled glycerophospholipids. Pharmazie,1980, Bd.35, Ж It S.10-14.

120. Kbrnberg К., HcCormell H. Inside-out side transitions of phospholipids in vesicle membranes. Biochemistry, 1971» v.IO, U 7, р.НП-1120.

121. Roux M., Huynh-Dinh T., Prigent Y, Simple preparation of I,2-dipalmitoyl-sn^glycero-3-phosphoric acid and deutera-ted choline derivatives. Chem. Phys. Lipids, 1983» v. 33, Ж I, p.41-45»

122. Browning J., Seelig J. Synthesis of specifically deutera-ted saturated and unsaturated phosphatidylserines. Chem. Phys. Lipids, 1979, v.24, N 2, p.I03-II8.

123. Billimoria ¿Г., Owen J., Scott G. Synthesis of radioisoto-pically labelled pho sphatidylethanol amine s. Chem. Phys. Lipids, 1974, v.I2, H 4, p.327-343.14

124. Rehbinder D., Greehberg D. Synthese von C-markierten phospholipiden. Ann., 1965, Bd.68I, S. 182-187.

125. Stoffel W., Michaelis G. Biosynthetic labelling of membrane lipids of eukaryotic cells in tissue culture by a novel type of fluorescent fatty acids. Z. Physiol. Chem., 1976, Bd.357, N 7, S.925-935.

126. Welby M., To canne J.-P. Evidence for the incorporation of a fluorescent anthracene fatty acid into the membranelipids of Micrococcus luteus. Biochim. et biophys. acta, 1982, v.689, H I, p.173-^76.

127. Keith A., Waggoner A., Griffith 0. Spin-labeled mitochondrial lipids in Heurospora crassa. Proc. Hat. Acad. Sci. USA, 1968, v.6I, H 3, P.819-826.

128. Stoffel W., Salm K., Eb'rkemeier U. Biosynthetic incorporation of fatty acids with photosensitive groups into membrane lipids of cells in tissue culture. Z. Physiol. Ohem., 1978, Bd.357, S.917-924.

129. Greenberg G., Chekrabarti P., Khorana H. Incorporationof fatty acids containing photosensitive groups into phospholipids of Escherichia coli.Proc. Hat. Acad. Sci. USA, 1976, v.73, H I, p.86-90.

130. Graff G., Harlan J., Hahas H. Preparation of phosphatidyl2.%.-inositol from yeast grown in medium containing myo 2-%]inositol. Prep. Biochem., 1982, v. 12, H 2, p.175-195.

131. Тютюнников Б.Н. Химия жиров. Изд. 2-е, перераб. и доп.

132. М.: Пищевая пром-ть, 1974. 446 с. 155« KLemm L., Reed D., Miller Ь., Но В. Chemical structure and chromatographic adsorbability of aromatic hydrocarbons onaluminia. - J. Org Chem., 1959» v.24, H 10, p.1468-1477»

133. Gore P. Abnormal substitution of anthracene and phenan-threne. J. Org. Chem., 1957, v.22, К 2, p.135-138.

134. Общая органическая химия/Под общ. ред. Д. Бартона и У.Д. Оллиса. T.I. Стереохимия, углеводороды, галогенсодержащие соединения/Под ред. Дж.Ф. Стоддарта. Пер. с англ./Под ред. Н.К. Кочеткова. - М.: Химия, 1961. - 736 с.

135. Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам/Под ред. 0. Микеша. Пер. с англ./Под ред. В.Г. Березкина. - М.: Мир, 1982. - Ч.П. 381 с.

136. Schlenk Н., Holman R. Separation and stabilization of fatty acids by urea complexes. J. Amer. Chem. Soc., 1950, v.72, Iff II, p.5001-5004.

137. Органикум. Практикум по органической химии/Г. Беккер, В. Бергер, Г. Домшке и др. Пер. с нем. В.М. Потапова и

138. С.В. Пономарева. М.: Мир, 1979. - Т.П. 442 с.

139. Кейтс М. Техника липидологии. Выделение, анализ и идентификация липидов. Пер. с англ. В.А. Вавера. - М.: Мир, 1975. - 322 с.1. НЕОБХОДИМ