Синтез S- и N-содержащих тритерпеноидов на основе бетулина тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

ИНСТИТУТ ТЕХНИЧЕСКОЙ ХИМИИ УрО РАН

СИНТЕЗ Б- И ^СОДЕРЖАЩИХ ТРИТЕРПЕНОИДОВ НА ОСНОВЕ БЕТУЛИНА

Специальность 02.00.03. - Органическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

На правах рукописи

Воронова Любовь Николаевна

003491685

Пермь-2010

003491685

Работа выполнена в лаборатории химии биологически активных соединений ИТХ УрО РАН

Научный руководитель: Толмачева Ирина Анатольевна

доцент, кандидат химических наук, старший научный сотрудник

Официальные оппоненты: Масливец Андрей Николаевич

доктор химических наук, профессор кафедры органической химии Пермский государственный университет

Михайловский Александр Георгиевич

доктор фармацевтических наук, профессор, зав. кафедрой неорганической химии Пермская фармацевтическая академия

Ведущая организация: Уральский государственный

университет (УрГУ) г. Екатеринбург

Защита диссертации состоится 28 января 2010 г. в 15 часов на заседании диссертационного совета Д 004.016.01 в Институте технической химии УрО РАН по адресу: 614013, Россия, г. Пермь, ул. Академика Королёва, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИТХ УрО РАН.

Отзывы на автореферат просим направлять по адресу: 614013, г. Пермь, ул. Королёва, 3, ИТХ УрО РАН. Факс: +7(342) 237-82-62; e-mail: cheminst@mpm.ru

Автореферат разослан^ декабря 2009 г.

Автореферат размещен на сайте ИТХ УрО РАН http://itch.perm.ru/ 27 декабря 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Л /г^

к.х.н. S. Горбунов А. А.

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Работы в области синтетических трансформации природных веществ, биологическая активность которых достоверно установлена, в последние годы становятся все более значимыми. Наиболее ярким представителем группы пентациклических тритерпеноидов ряда лупана является бетулин, структурным модификациям и изучению свойств которого посвящена многочисленная литература. В связи с многообразием полезных фармакологических свойств бетулина, сочетающихся с практически неограниченной доступностью, целенаправленный поиск оригинальных лекарственных средств на основе его многочисленных производных остается важным научным направлением в течение нескольких последних десятилетий. Бетулиновая кислота, биосинтетическим предшественником которой является бетулин, признана перспективным противоопухолевым агентом с ингибирующей активностью, наиболее высокой в отношении клеток глиобластом, медулабластом и меланом. Кроме того, бетулиновая кислота и ее производные - новый класс ингибиторов вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-1), блокирующих стадию слияния вируса с клеткой. Несмотря на то, что синтезирован большой круг производных на основе бетулина и бетулиновой кислоты, синтетические возможности этих соединений далеко не исчерпаны, а их дальнейшая функционализация является перспективным подходом для создания новых эффективных полусинтетических фармакофоров, являющихся аналогами лекарственных препаратов. Наличие в нашей стране богатейшего растительного сырья для проведения исследований по целенаправленным трансформациям растительных метаболитов только подчеркивает их актуальность.

Исследование выполнено в соответствии с планом научно-исследовательских работ Института технической химии УрО РАН по теме: «Синтез оптически активных азот-, серосодержащих соединений и борорганических реагентов на основе химических трансформаций биогенных аминокислот и высших терпенов» (номер государственной регистрации 01200300765).

Работа осуществлялась при финансовой поддержке Российского Фонда Фундаментальных Исследований (гранты № 04-03-32063),

Авторы выражают глубокую благодарность член-корреспонденту РАН, профессору А. Г. Толстикову за плодотворную научную идею, положенную в основу научной работы.

гранта Президента РФ по государственной поддержке ведущих научных школ РФ (№ НШ-5812.2006.3), грантов Президента РФ на поддержку молодых учёных и ведущих научных школ (НШ-2020.2003.3), комплексной программы Президиума РАН "Направленный синтез веществ с заданными свойствами и создание функциональных материалов на их основе", гранта Целевой программы междисциплинарных проектов, выполняемых в содружестве учеными УрО и СО РАН.

Цель работы. Синтез новых 8- и Ы-содержащих производных бетулина с сульфидным, сульфоксидным, а- и р-енаминокарбонильными фрагментами с оценкой их биологической активности.

Научная новизна. Проведена модификация бетулина по положению С-30 с использованием реакций тиилирования и сульфоксидирования. Предложены способы введения а- и Р-енаминокетонных фрагментов в молекулы тритерпеноидов лупанового и олеананового рядов. Осуществлён направленный синтез симметричных р-енаминокетонов, содержащих два тритерпеновых каркаса. Впервые в ряду тритерпеноидов исследованы особенности протекания стереоселективной термической перегруппировки диастереомерных 3-ацетокси-(2,3),(19р,28)-диэпоксиолеананов

в 2-Р-ацетокси-19Р,28-эпоксиолеан-3-он.

Практическая значимость. Разработаны простые в осуществлении подходы к синтезу серо- и азотсодержащих лупановых и олеанановых тритерпеноидов, основанные на доступном исходном сырье.

Среди синтезированных соединений обнаружены вещества, обладающие противовоспалительной и иммунотропной активностью. Среди лупановых и олеанановых Р-енаминокетонов отобраны соединения с изопропильным заместителем, перспективные в качестве иммуносупрессоров гуморального и клеточного иммунитета, не обладающие общетоксическим действием на организм.

Апробация работы. Полученные результаты диссертационной работы представлялись на российских и международных научных конференциях: Международной технической конференции «Перспективы развития химии и практического применения алициклических соединений» (Самара, 2004 г.), Всероссийской и Международной конференциях «Техническая химия. Достижения и перспективы» (Пермь, 2006 г., Пермь, 2008 г.), Всероссийской научной конференции «Современные проблемы органической химии»

(Новосибирск, 2007 г.), IV Всероссийской конференции «Енамины в органическом синтезе» (Пермь, 2007 г.), VII, X, XI Молодежных школах-конференциях по органической химии (Екатеринбург, 2004 г., Уфа, 2007 г., Екатеринбург, 2008 г.), Международной конференции «Актуальные проблемы химии природных соединений» (Ташкент, 2009 г.).

Публикации. По материалу диссертационной работы опубликовано 4 статьи в рецензируемых журналах, 3 статьи в сборниках материалов конференций, 5 тезисов докладов на конференциях.

Структура и ofn,см диссертации. Диссертационная работа изложена на 138 страницах машинописного текста состоит из введения, трех глав, выводов, заключения и списка цитируемой литературы. Работа содержит 74 схемы, 16 таблиц и 14 рисунков. Список литературы включает 85 наименований. В первой главе представлен обзор литературных данных, посвященный синтезу и исследованию биологических свойств серо- и азотсодержащих производных бетулина. Во второй главе представлены результаты собственных исследований, где последовательно рассматриваются синтезы на основе бетулина его сульфидов и сульфоксидов, лупановых и олеанановых тритерпеноидов, содержащих енаминокарбонильные фрагменты. Приводятся доказательства строения полученных соединений физико-химическими методами, в том числе рентгсноструктурным анализом, а также результаты исследования биологической активности. Третья глава содержит экспериментальную часть работы. Далее идут выводы, заключение и список литературы.

Благодарность. Автор выражает глубокую благодарность сотруднику Института элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова РАН к.х.н. Супоницкому К. Ю. за проведение рентгеноструктурного анализа, д.х.н., проф., зав. кафедрой органической химии ПГУ Шурову С. Н. за выполнение расчетов полуэмпирическим методом ССП МО JIKAO в приближении MNDO РМЗ, сотрудникам лаборатории физико-химических методов исследования ИТХ УрО РАН Майоровой О. А., к.физ.-мат.н. Карманову В. И.за техническую помощь в записи 'Н, С ЯМР и ИК спектров, сотрудникам лаборатории биологически активных соединений ИТХ УрО РАН к.б.н. Аникиной Л. В., к.б.н. Вихареву Ю. Б. за проведение скрининга биологической активности ряда синтезированных соединений.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Нативные пентациклические тритерпеноиды представляют собой уникальную основу для проведения комбинаторного синтеза и формирования библиотек биологически активных соединений. В качестве базовых соединений в наших исследованиях использовались бетулин 1, полученный экстракцией берёзовой коры, и его полусинтетические производные аллобетулон 2 и метиловый эфир бетулоновой кислоты 3 (схема 1).

1.1. Синтез лупановых серосодержащих производных

Направление химической модификации природных соединений с целью синтеза новых практически значимых соединений наиболее эффективно реализуется в области синтеза азотсодержащих производных бетулиновой и бетулоновой кислот - соответствующих амидов, сложных эфиров, оксимов, гидразидов и гидразонов. В то же время при изучении свойств модифицированных тритерпеноидов лупанового ряда без должного внимания остались серосодержащие соединения.

Сульфанильные производные бетулина 5а-е (схема 2) синтезировали реакцией тиилирования 30-бром-3р,28-диацетоксилуп-20(29)-ена 4, полученного в две стадии: ацилированием бетулина 1 уксусным ангидридом, а затем бромированием диацильного производного Ы-бромсукцинимидом в СС14 в присутствии каталитических количеств перекиси бензоила. Этил-, //-бутил-, 2'-гидроксиэтил-, фенил-, бензил- и бензимидазолилтиоляты, образованные реакцией метилата натрия с меркаптанами, добавляли в смесь бромзамещённого соединения 4 и безводного ОМБО при комнатной температуре и перемешивании в течение 6 часов. Образовавшиеся 30-сульфанилзамещенные луп-20(29)-ен-3|3,28-диолы 5а-е после колоночной хроматографии выделяли с выходом от 50 до 70%. Строение сульфидов 5а-е подтверждено данными 'Н ЯМР спектроскопии.

Схема 1

п

Схема 2

Сульфиды 5а-е окисляли 30% Н2О2 в соответствующие сульфоксиды ба-е (схема 3) в среде ацетон : уксусная кислота (9:1) при температуре не выше 50°С. Выходы сульфоксидов после очистки методом колоночной хроматографии составили 50-65%. Схема 3

Образование сульфоксидов ба-е подтверждается данными ИК- и 'Н ЯМР спектроскопии. Следует отметить, что в спектре 'Н ЯМР фенилыюго сульфоксида 6г (рис. 1) регистрируется удвоение некоторых характеристичных сигналов. Использование метода двойного резонанса и различия в интегральной интенсивности позволили корректно отнести сигналы протонов при С-28 и С-30 для

каждого из изомеров сульфоксида 6г. Согласно относительным интегральным интенсивностям сигналов при 5.02 и 5.04 м.д. (каждый соответствует экзо-метиленовому протону СНа-29 одного из изомеров) соотношение изомеров составляет 1.00 : 0.82.

Образование изомеров регистрируется также в случае сульфоксидов с бутильным 66 (1.00:0.79) и бензильным 6д (1.00 : 0.92) заместителями. При записи ЯМР 'Н спектров искусственной смеси сульфоксида и (8)-а-метоксифенилуксусной кислоты в качестве хирального шифт-реагента, отмечается более значительное увеличение различий в химических сдвигах неэквивалентных протонов диастереоизомеров.

Й =СНа-29

СН2-30 - лзо.чер

Рис. 1. Фрагмент ЯМР 'Н спектра соединения 6г

2. Синтез лупановых и олеанановых азотсодержащих тритерпеноидов

2.1. Синтез а-енаминокетонов на основе 19р,28-эпоксиолеан-3-она

Действием уксусного ангидрида или изопропенилацетата на аллобетулон 2 в присутствии каталитических количеств концентрированной серной кислоты получен 3-ацетокси-19р,28-эпоксиолеан-2(3)-ен 7 (схема 4). Использование в качестве катализатора хлорной кислоты неожиданно приводит к раскрытию фуранового цикла аллобетулона и образованию 3,19,28-триацетоксиолеан-2(3)-ена 8.

В результате окисления енолацетата 7 л/-хлорнадбензойной кислотой в хлористом метилене при комнатной температуре образуется 3-ацетокси-(2,3),(19р,28)-диэпоксиолеанан в виде смеси диастереомеров 9а,б, что подтверждается наличием в ЯМР 'И спектре

удвоенных сигналов: протона при атоме С-2 в области 4.49 м.д. (96) и 5.56 м.д. (9а), протонов ацетильной группы при 2.03 м.д. (96) и 2.09 м.д. (9а). По интегральным интенсивностям указанных сигналов установлено, что синтезированные изомеры 9а и 96 находятся в соотношении 3:2.

Схема 4

я'я2 = -(СН2)5- (а); -(СН2),0(СН2)2- (6);

Я^ОДСНг-.Я^НСв);

К^ОДз-Д^НИ;

к'-ед.-.^щд)

Нагревание смеси эпоксидов 9а,б в алифатических аминах приводит к образованию азотсодержащих производных 11а-д, включающих фрагмент енамина в кольце А. Следует отметить, что при введении в данную реакцию органических растворителей, независимо от используемых амина и растворителя, реакция

протекает с образованием единственного продукта перегруппировки -ацетоксикетона 10.

Строение молекулы ацетоксикетона 10 предложено на основании спектральных данных ЯМР |3С и 'Н, которые интерпретированы с использованием методик двумерной ЯМР 'Н-'Н (COSY) и 13С-'Н (TOCSY, ROESY, HSQC, НМВС) спектроскопии. Так, по спектрам ЯМР 'Н и ЯМР 'Н-'Н (COSY) идентифицированы протоны при атомах С-28 (3.78 и 3.46 м.д.) и С-19 (3.54 м.д.). Спектр ЯМР 'Н-'Н (COSY) позволил идентифицировать сигналы протонов при атоме С-1 в кольце А с химическими сдвигами 2.20 м.д. и 1.67 м.д. по их корреляции с протоном при атоме С-2, который регистрируется в виде слабопольного дублета дублетов с химическим сдвигом 5.65 м.д. (Jaa = 11.5 Гц, Ле = 8.3 Гц). Характер расщепления сигнала протона Н-2, геминального по отношению к ацетоксизаместптелю, свидетельствует об экваториальной ориентации ацетоксигруппы, поскольку наблюдаемые величины КССВ типичны для аксиального протона циклогексильного кольца, имеющего конформацию ванны или слегка искаженной ванны. Абсолютная структура 2р-ацстокси-19р,28-эпоксиолеап-3-она 10 подтверждена методом РСА (рис. 2).

Рис. 2. Абсолютная структура 2р-ацетокси-19р,28-эпоксиолеан-3-она 10

В литературе описаны примеры кинетического разделения рацемических эпоксидов еноловых эфиров моноциклических соединений с образованием энантиомерно обогащенных а-ацилоксикетонов в присутствии хиральных кислот Льюиса. В нашем случае перегруппировка олеанановых производных 9а,б в

соответствующий ацетоксикетон 10 проходит в условиях нагревания. Данный процесс характеризуется высокой степенью стереоселективности. Из-за стерических затруднений, создаваемых геминальными метальными группами при С-4, в качестве конечного продукта регистрируется направленное образование 2р-ацетоксикетона 10. Наблюдаемый высокий (76%) химический выход соединения 10 свидетельствует об участии в процессе перегруппировки обоих диастереомерных эпоксидов 9а,б (схема 5). По-видимому, продукт с Р-ориеитированной ацетильной группой является более стабильным по сравнению с альтернативным а-производным, что также подтверждается расчетами пространственной структуры эпоксидов 9а,б полуэмпирическим методом ССП МО ЛКАО в приближении МКЮО РМЗ, которое дает хорошую сходимость геометрических характеристик с имеющимися данными РСА соединения 10.

Схема 5

и3

В результате кипячения ацетоксикетона 10 в морфолине получен 2-морфолино-19Р,28-эпоксиолеан-1-ен-3-он 116 с тем же химическим выходом, что и в реакции с эпоксидами 9а,б.

В случае, когда циклический или линейный амин используется одновременно в качестве реагента и растворителя, реакция с эпоксидами 9а,б при нагревании приводит к образованию енаминокетов ■ 11а-д (схема 4). Структура образующихся

енаминокетов подтверждена спектральными данными ИК и ЯМР 'Н, которые интерпретированы с помощью методик двумерной ЯМР 'Н-'Н (COSY) и 13С-'Н (HSQC, НМВС) спекроскопии на примере морфолинового производного 116.

Допустив, что взаимодействие эпоксидов 9а,б с более нуклеофильными алифатическими аминами также протекает через стадию образования продукта перегруппировки 10, мы провели синтез енамина 116, исходя из 2Р-ацетокси-19р,28-эпоксиолеан-3-она 10 (схема 4).

Схема 6

9а,б

10-

к'к2 = -(СН2)5- (11а); -(СН2)20(СН2)2- (116);

И1 = С6Н5 СН2-, Я2 = Н (Пв); Я1 = С6Н13-, Я2= Н (Пг);

Я1 =С6Н,1-,К2 = Н(Пд)

Можно предположить, что процесс синтеза азотсодержащих производных 11а-д (схема 6) на основе соединений 9а,б проходит по пути формирования из продукта перегруппировки 10 промежуточных интермедиатов И^, И4, И5 и включает стадию элиминирования уксусной кислоты с образованием олеанановых енаминокетонов 11а-д.

Схема 7

Для соединения 11а была проведена кватернизация атома

азота йодистым метилом (схема 7), в результате чего был получен К-метил-2-пиперидино-19р,28-эпоксиолеан-3-он иодид 12.

2.2. Синтез а-енаминокетона на основе 19р,28-эпоксиолеан-2-она

Представляло интерес получить структурный изомер аллобетулона 2 - 19р,28-эпоксиолеан-2-он 13 и исследовать его поведение в реакциях с ароматическими аминами. 19р,28-Эпокси-18а-олеан-2-он 13 получен при длительном кипячении аллобетулона в морфолине (24 часа) в присутствии 10-кратного избытка серы в результате перегруппировки Вильгеродта-Киндлера (схема 8).

Надо отметить, что в результате реакций кетона 13 с анилином, о-броманилином, и-нитроанилином удалось выделить только продукт взаимодействия с и-нитроанилином - соединение 14 (Схема 8). Реакцию проводили в безводном толуоле в присутствии каталитических количеств /7-толуолсульфокислоты. Выход 2-(4-нитрофениламино)-19р,28-эпоксиолеан-1-ен-3-она 14 составил 15 %. Использование в качестве катализатора ВР3'Е120 существенно не повлияло на выход а-енаминокетона 14.

Схема 8

|1-Л02С6Н(ЛН2

0

толуол,

п-СИзОдаОзН

13 14

Структура соединения 14 подтверждается спектральными данными и аналогична структуре енаминокетонов 11а-д. Известны примеры, когда енаминовые производные могут легко окисляться кислородом воздуха, что, по-видимому, и происходит в данном случае.

2.2. Синтез р-енаминокетонов на основе лупановых и олеанановых 2-гидроксиметиленпроизводных

Осуществлён синтез новых р-енаминокетонов исходя из 2-гидроксиметилен-19р,28-эпоксиолеан-3-она 15 и метилового эфира 2-гидроксиметилен-3-оксолуп-20(29)-ен-28-овоп кислоты 16.

Конденсацией аллобетулона 2 или метилового эфира бетулоновой кислоты 3 с этилформиатом получены

2-гидроксиметиленпроизводные 15 и 16 (схема 9). Взаимодействием снолкстонов 15 и 16 с аминами в присутствии ЛУУ'-дициклогсксилкарбодиимида синтезированы 2-алкиламино-метилен-19Р,28-эпоксиолеан-3-оны 17а-е и метиловые эфиры 2-алкиламинометилен-З -оксолуп-20(29)-ен-28-овых кислот 18а-е, выходы, которых после очистки колоночной хроматографией на силикагеле составили 38-65%.

Строение полученных р-енаминкетонов 17а-е и 18а-е установлено с использованием стандартных методов ИК-, 'Н и 13С ЯМР-спектроскопии. В спектрах !Н ЯМР Р-енаминкетонов 17а-е, 18а-е присутствуют характерные сигналы протонов винильной и аминогрупп. Для идентификации протонов цикла А использован метод двумерной спектроскопии ЯМР 'Н-'Н (COSY). Слабопольный сдвиг протона аминогруппы (10.23-10.47) свидетельствует об образовании внутримолекулярной водородной связи между аминогруппой и атомом кислорода кетонного карбонила в положении С-3.

Схема 9

R = (СН3)2СН- (а); С6Н|3- (б); С8Н17- (в); С18Н37- (г); С6Н5СН2- (д); С6Н„- (е)

Нами рассмотрена возможность направленного синтеза симметричных азотсодержащих производных на основе енолкетонов 15 и 16 (схема 10). Следует отметить, что попытка получить симметричные продукты конденсации енолкетонов 15 и 16 с диаминами с использованием приведенного ранее метода (схема 9) не дала ожидаемых результатов. В данных условиях реакция приводит к образованию многокомпонентной трудноразделимой смеси,

содержащей лишь следовые количества моио- и димерных продуктов конденсации.

Взаимодействие енолкетонов 15 и 16 с о-фенилендиамином в соотношении реагентов 1:1 или 2:1 смеси ЕЮН-СбНб в присутствии каталитических количеств ледяной АсОН приводит к образованию единственных продуктов моноконденсации 21а и 24а. В дальнейшем с целью направленного синтеза симметричных азотсодержащих олеанановых димеров взаимодействие енолкетонов 15 и 16 с диаминами проводили при соотношении реагентов 2:1. Установлено, что практически все исследуемые диамины вступают в реакцию двойной конденсации с енолкетонами 15 и 16 с образованием соответствующих димерных продуктов 22а-з, 25а-з.

Схема 10

15,16

R(NH 2)2

R1 (15, 21а-в, 22а-з) =

СООМе

h2n nh2

-0~NH2(b)

- (а); -СН(СН3)СН2- (б);-^ (B);-<Q-(r); УсН2-<Омд); -\j>(e);

(ж); X>S02-O- ®

R = -С2Н4 /

С1.

Влияние пространственных факторов, препятствующих формированию димера в реакции конденсации, проявляется в образовании как моно-(21б,в), так и диконденсированных продуктов (226,в) для олеананового ряда в случае с м- и и-фенилендиаминами. Структура полученных соединений подтверждена данными ИК-, 'Н и 13С ЯМР-спектроскопии. Надо отметить, что аминогруппа и кетонный карбонил при атоме С-3 как у мономеров 21а-в,24, так и у димеров 22а-з, 25а-з вовлечены во внутримолекулярную водородную связь. При использовании несимметричного 1,2-диаминопропана в спектре

'Н ЯМР образующихся димеров 226 и 256 наблюдается удвоение сигналов некоторых протонов, что свидетельствует о существовании соединений 226 и 256 в виде смеси двух диастереомеров в соотношении 1:1.

3. Исследование биологической активности

В результате биологических исследований некоторых серосодержащих производных бетулина отобраны соединения 5е и бе, которые проявили выраженную противовоспалительную активность на уровне диклофенака натрия.

Среди тритерпеновых Р-енаминкетонов найдены соединения, проявляющие иммунотропную активность. В результате проведенного скрининга достоверное влияние на показатели системного иммунитета проявили соединения: 15, 18в - как иммуносупрессоры гуморального и клеточного иммунитета, не обладающие общетоксичсским действием на организм, соединение 18а - как вещество, проявляющее лимфотоксические свойства, и соединение 17а - как вещество, избирательно угнетающее клеточный иммунитет. В целом, тритерпеноиды олеананового ряда проявили более выраженное влияние на показатели иммунной системы по сравнению с группой лупановых производных.

Выводы:

1. Разработана схема синтеза новых 30-алкил(арил)сульфанил- и 30-алкил(арил)сульфинилпроизводных бетулина.

2. Изучены подходы к синтезу лупановых и олеанановых а- и Р-енаминокетонов на основе синтетических трансформаций алобетулона и метилбетулоната:

а) Установлено, что взаимодействие диастереомерных 3-ацетокси-(2,3),(19р,28)-диэпоксиолеананов с аминами протекает с образованием олеанановых С-2-замещенных а-енаминокетонов через стадию стере оселективной термической перегруппировки в промежуточный 2р-ацетоксикетон.

б) Обнаружено, что реакция 19р,28-эпоксиолеан-2-она с и-нитроанилином в условиях кислотного катализа приводит к образованию а-енаминокетона - 2-(4-нитрофениламино)-19р,28-эпоксиолеан-1 -ен-3 -она.

в) Показано, что С-2-конденсация олеанановых и лупановых 2-гидроксиметилен-З-оксопронзводных и аминов с образованием р-енаминокетонов эффективно протекает как в условиях нагревания, так и при комнатной температуре в условиях кислотного катализа, в то время как взаимодействие с диаминами приводит к образованию димерных продуктов исключительно в условиях кислотного катализа.

3. В ряду синтезированных серо- и азотсодержащих

тритерпеноидов лупанового и олеананового типа выявлены

соединения, обладающие противовоспалительной и иммунотропной активностью.

Основное содержание работы отображено в следующих

публикациях:

1. Шелепенькина (Воронова) J1. Н., Крохолева А. А., Толмачева И. А., Толстиков А. Г. Синтез серосодержащих производных бетулина. // Международная техническая конференция «Перспективы развития химии и практического применения алициклических соединений». Тезисы докладов. Самара. - 2004. - С. 265.

2. Шелепенькина (Воронова) JI. Н., Обухова А. С., Толмачева И. А., Толстиков А. Г. Эпоксидирование енолацетата аллобетулона с последующим раскрытием эпокснда под действием NH-нуклеофилов. // VII Молодежная школа-конференция по органической химии. Тезисы докладов. Екатеринбург. - 2004. - С. 231.

3. Толмачёва И. А., Шелепенькина (Воронова) Л. Н., Виха-рев 10. Б., Аникина Л. В., Гришко В. В., Толстиков А. Г. // Химия природных соединений. - 2005. - № 6. - С. 578-581.

4. Шелепенькина (Воронова) Л. Н., Толмачева И. А., Рожки-на И. Г. Синтез азотсодержащих производных на основе 2-гидроксиметилен-19р,28-эпоксиолеан-3-она // Всероссийская конференция «Техническая химия. Достижения и перспективы». Материалы докладов. Пермь. - 2006. - Т.1. -С. 70-73.

5. Толмачева И.А., Шелепенькина (Воронова) Л. Н., Гришко В. В., Глушков В. А., Толстиков А. Г. Синтез Р-енаминокарбонильных производных олеананового типа // Всероссийская научная конференция «Современные проблемы

органической химии», посвященная 100-летию со дня рождения ак. Н. Н. Ворожцова. Тезисы докладов. Новосибирск. - 2007. - С. 32.

6. Толмачева И. А., Шелепенькина (Воронова) Л. Н., Игоше-ва Е. В., Гришко В. В., Толстиков А. Г. Синтез производных бетулоновой кислоты, содержащих фрагмент енамина. // IV Всероссийская конференция «Енамины в органическом синтезе». Материалы докладов. Пермь. - 2007. - С. 328-332.

7. Шелепенькина (Воронова) Л. Н., Игошева Е. В., Толмачева И. А. Синтез снаминов метилового эфира 2-оксолуп-20(29)-сн-28-овой кислоты. // X Молодежная школа-конференция по органической химии. Тезисы докладов. Уфа. - 2007. - С. 318.

8. Шелепенькина (Воронова) Л. Н., Толмачева И. А., Толстиков А. Г. Синтез К- и Б-содержащих производных на основе бетулина // XI Молодежная школа-конференция по органической химии, посвященная 110-летию со дня рождения И.Я. Постовского. Материалы докладов. Екатеринбург. - 2008. - С. 558-559.

9. Толмачёва И. А., Шелепенькина (Воронова) Л. Н., Шаш-ков А. С., Гришко В. В., Глушков В. А., Толстиков А. Г. Особенности взаимодействия 3-ацетокси-(2,3),(19(3,28)-диэпоксиолеанана с циклическими и линейными аминами // Химия природных соединений. - 2007. - Т. 43. -№2.-С. 153-158.

10. Толмачёва И. А., Аникина Л. В., Вихарев Ю. Б., Шелепенькина (Воронова) Л. Н., Гришко В. В., Толстиков А. Г. Синтез и иммунотропная активность снаминов олеананового типа // Биоорганическая химия. - 2008. - Т. 34. - № 1. - С. 136-140.

11. Толмачёва И. А., Аникина Л. В., Вихарев Ю. Б., Игошева Е. В., Шелепенькина (Воронова) Л. Н., Гришко В. В., Толстиков А. Г. Синтез и иммунотропная активность метиловых эфиров 2-алкиламиномети-лен-3-оксолуп-20(29)-ен-28-овых кислот // Биоорганическая химия. - 2008. - Т. 34. - № 4. -С. 540-545.

12. Шелепенькина (Воронова) Л. Н., Толмачева И. А., Гришко В. В., Толстиков А. Г. Синтез димерных енаминов 19Р,28-эпокси-18а-олеананового типа // Международная конференция «Актуальные проблемы химии природных соединений». Тезисы докладов. Ташкент. - 2009. - С. 181.

Подписано в печать 18.12.2009 г. Формат 60x84/16 Усл. печ. л. 1,8 Тираж 100 экз. Заказ № 3706.

Типография ООО «Студия «ЗЁБРА». Адрес: 614990, г. Пермь, ул. Окулова, 80.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. Гетероатомные производные бетулина.

1.1.Синтез тритерпеновых азот- и серосодержащих эфиров.

1.2. Синтез тритерпеновых уреидо- и тиоуреидопроизводных.

1.3. Синтез тритерпеновых оксимов.

1.4. Синтез тритерпеноидов с гидразиновым и гидразоновым фрагментами.

1.5. Синтез тритерпеновых аминопроизводных.

1.6. Синтез тритерпеноидов с азот- и серосодержащими гетероциклическими фрагментами.

1.7. Синтез тритерпеновых амидов, пептидов.

2. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

2.1. Синтез серосодержащих производных на основе бетулина.

2.2. Синтез азотсодержащих тритерпеноидов.

2.2.1. Синтез тритерпеноидов с енаминокрбонильным фрагментом в цикле А.

2.2.1.1. Синтез а-енаминокетонов на основе 19р,28-эпокси-олеан-3-она.

2.2.1.2. Синтез а-енаминокетона на основе

19Р,28-эпоксиолеан-2-она.

2.2.2. Синтез р-енаминокетонов на основе лупановых и олеанановых 2-гидроксиметиленпроизводных.

2.2.2". Г.Синтез олеанановых р-енаминокетонов.

2.2.2.2.Синтез лупановых р-енаминокетонов.

2.2.3. Синтез димеров с Р-енаминокарбонильными фрагментами на основе лупанового и олеананового

2-гидроксиметилен-производных.

2.3.3.1. Синтез олеанановых димеров с p-енаминокарбонильными фрагментами.

2.3.3.2. Синтез лупановых димеров с Р-енаминокарбонильными фрагментами.

2.3. Исследование биологической активности.

Работы в области синтетических трансформаций природных веществ, биологическая активность которых достоверно установлена, в последние годы становятся все более значимыми. Наиболее ярким представителем группы пентациклических тритерпеноидов ряда лупана является бетулин, структурным модификациям и изучению свойств которого посвящена многочисленная научная: литература. В связи с многообразием полезных фармакологических свойства бетулина,. сочетающихся с практически неограниченной доступностью, целенаправленный, поиск оригинальных лекарственных средств на основе его многочисленных производных остается-важным научным направлением.в течение нескольких последних десятилетий. Изучение ингибирующей активности соединений в широком спектре приобретает особую важность и ценность в связи с тем, что бетулиновая кислота, биосинтетическим предшественником которой является бетулин, признана перспективным противоопухолевым агентом, ингибирующая активность которого наиболее высока в отношении- клеток глиобластом, медулабластом и меланом. Кроме того, бетулиновая кислота и ее производные - новый класс ингибиторов вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-1), блокирующих стадию» слияния вируса с клеткой. Несмотря на то, что синтезирован большой объем соединений; полученных на основе бетулина и бетулиновой кислоты, синтетические возможности этих, соединений далеко не исчерпаны, а их дальнейшая функционализация является весьма перспективным направлением- в процессе создания новых, эффективных полусинтетических фармакофоров, являющихся аналогами* лекарственных препаратов. Наличие в нашей'стране богатейшего'растительного* сырья для. проведения- исследований" по целенаправленным. . трансформациям растительных метаболитов только подчеркивает их актуальность.

Цель» работы? Синтез новых S-' и N-содержащих производных с сульфидным, сульфоксидным,. а- и p-енаминокарбонильными. фрагментами на основе бетулина с оценкой их биологической активности.

Научная новизна. Проведена модификация бетулина по положению С-30 с использованием реакций тиилирования и сульфоксидирования. Предложены способы введения а- и Р-енаминокетонных фрагментов в молекулы тритерпеноидов лупанового и олеананового рядов. Осуществлён направленный синтез симметричных Р-енаминокетонов, содержащих два тритерпеновых каркаса. Впервые в ряду тритерпеноидов исследованы особенности протекания стереоселективной, термической, перегруппировки диастереомерных 3-ацетокси-(2,3),(19р,28)-диэпоксиолеананов в 2-0-ацетокси-190,2 8-эпоксиолеан-З -он.

Практинеская значимость. Разработаны простые в осуществлении подходы, к синтезу серо- и азотсодержащих лупановых и олеанановых тритерпеноидов, основанные на доступном исходном сырье.

Среди синтезированных соединений обнаружены вещества, обладающие противовоспалительной и иммунотропной- активностью. Среди лупановых и олеанановых р-енаминокетонов отобраны соединения с изопропильным заместителем, перспективные в качестве иммуносупрессоров гуморального и клеточного иммунитета, не обладающие общетоксическим действием на организм.

Апробация работы. Полученные результаты диссертационной работы представлялись на российских и международных научных конференциях: Международной технической конференции, «Перспективы.-развития химии и практического применения алициклических соединений» (Самара, 2004 г.), Всероссийской; (и Международной конференциях «Техническая., химия. Достижениями перспективы» (Пермь, 2006 г.; Пермь, 2008 г.), Всероссийской научной конференции, «Современные проблемы, органической химии» (Новосибирск;; 2007 г.), IV* Всероссийской конференции «Енамины. в органическом синтезе» (Пермь, 2007 г.),. VII, X, XI Молодежных школах-конференциях по органической, химии. (Екатеринбург, 2004 г.; Уфа,, 2007 г.; Екатеринбург, 2008 г.), Международной конференции «Актуальные проблемы химии природных соединений» (Ташкент, 2009 г.).

Публикации. По материалу диссертационной работы опубликовано 4 статьи в рецензируемых журналах, 3 статьи в сборниках материалов конференций, 5 тезисов докладов на конференциях.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав, выводов, заключения и списка цитируемой литературы. Работа содержит 74 схемы, 16 таблиц и 14 рисунков. Список литературы* включает 85 наименований. В первой» главе представлен обзор? литературных данных, посвященный синтезу и исследованию биологических свойств серо- и азотсодержащих производных бетулина. Во второй главе представлены результаты собственных исследований, где последовательно рассматриваются синтезы на основе бетулина его сульфидов и сульфоксидов, лупановых и олеанановых тритерпеноидов, содержащих енаминокарбонильные фрагменты. Приводятся доказательства строения, полученных соединений физико-химическими методами, в том числе рентгеноструктурным анализом, а также результаты исследования биологической активности. Третья глава содержит экспериментальную часть работы. Далее идут выводы, заключение и список литературы.

5. ВЫВОДЫ

1. Разработана схема синтеза новых 30-алкил(арил)сульфанил- и 30-алкил(арил)сульфинилпроизводных бетулина.

2. Изучены подходы к синтезу лупановых и олеанановых а- и р-енаминокетонов на основе синтетических трансформаций алобетулона и метилбетулоната: а) Установлено, что взаимодействие , диастереомерных 3-ацетокси-(2,3),(19[3,28)-диэпоксиолеананов с аминами - протекает с образованием олеанановых С-2-замещенных а-енаминокетонов ■ через стадию стереоселективной термической перегруппировки в промежуточный 2(3-ацетоксикетон. б) Обнаружено, что реакция 19(3,28-эпоксиолеан-2-она с я-нитроанилином в условиях кислотного катализа приводит к образованию а-енаминокетона - 2-(4-нитрофениламино)-19р,28-эпоксиолеан-1-ен-3-она. в) Показано, что С-2-конденсация олеанановых и лупановых 2-гидро-ксиметилен-3-оксопроизводных и аминов с образованием (3-енаминокетонов эффективно протекает как в условиях нагревания, так и при комнатной температуре в условиях кислотного катализа, в то время как взаимодействие с диаминами приводит к образованию димерных продуктов исключительно в условиях кислотного катализа.

3. В ряду, синтезированных серо- и азотсодержащих, тритерпеноидов лупанового • и олеананового типа- выявлены соединения, обладающие противовоспалительной и иммунотропной активностью. -:

6. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ИК спектры регистрировали на спектрофотометре UR-20 (Германия) (4; 5а-е; 6а,б,г-с; 7; 8; 9а,б; 10; 11а-д; 12; 13; 14; 15; 16; 17а-е; 18а-е), SPECORD М80 (Германия) (20; 21а-в; 22а-з; 24; 25а-з) в вазелиновом масле.

УФ спектры получали на спектрофотометре СФ-46 для растворов в EtOH (5а-г,е; 6а,б,г,е; 24; 25в-ж).

Спектры ЯМР 'Н записывали для растворов в cdci3 (4, 5а-д; 6а,б,г-е,и; 7; 8; 9а,б; 10; 11а-д; 12; 13; 14; 15; 16; 17а-е; 18а-е; 20;.21а-в; 22а-з; 24;„25а-з) или DMSO-d6 (Зе) на спектрометре «Varian Mercuryplus-ЗОО» (США) (рабочая частота прибора - 300 МГц, внутренний стандарт — ГМДС).

1 ^

Спектры ЯМР С регистрировали для растворов в CDC13 (14; 16; 18а-е; 20; 21а-в; 22а-з; 24; 25а-з) на спектрометре "Varian Mercury+" (США) при рабочей частоте прибора 75,5 МГц; внутренний стандарт - ГМДС.

Двумерные спектры ЯМР 'Н-'Н (COSY) и 13С-'Н (TOCSY, ROESY, HSQC, НМВС) для4 растворов в cdci3 (10- и 116) регистрировали на спектрометре «Bruker DRX-500» (рабочая частота прибора - 500 МГц, внутренний стандарт - ГМДС).

Температуру плавления измеряли на приборе для определения температуры плавления ПТП (Россия).

Величины удельного оптического вращения измеряли для растворов в СНС13 (4; 7, 8, 9а,б, 10, 11а-д; 14; 16; 18а-е; 20; 21а-в; 22а-з; 24; 25а-з) или ЕЮН (5а-е, 6а,б,г-е,и) на поляриметре фирмы «Perkin-Elmer» (США), модель-341 при длине волны 589 нм:

Рентгеноструктурный анализ, соединения: 10 проводили на автоматическом* 4-кружном ■ дифрактометре ' Syntex. P2i (А,(Мо-Ка). = 0.71073А, графитовый монохроматор,.0/2О-сканирование, 20<54°):

Элементный анализ (С, Н, N) выполняли , с помощью элементного анализатора Carlo Erba Model 1106' (116,в;д),. «Leco CHNS-9321P» (Нидерладны) (14; 16; 18а-е; 20; 21а-в; 22а-з; 24; 25а-з), данные элементного анализа соответствовали расчетным.

Колоночную хроматографию проводили на силикагеле марки «Мегск» (60-200 рт, Германия), соотношение вещества и сорбента « 1:20, элюент -гексан с добавкой от 10 до 50% эти л ацетата; (5а-е, 6а,б,г-е,и).

-соотношение веществами сорбента- к 1 : 50, элюент для; каждого соединения подбирали индивидуально (7, 8, 9а,б, 10, 11а-д, 12;: 20; 21а-в; 22а-з; 24; 25а-з), элюент;- гексан : этилацетат (5 : 1) (13-14;:15; 17а-*е):

Колоночную хроматографию проводилш на силикагеле: 60-200 рт «Lancaster» (Великобритания); соотношение вещества и сорбента « 1 : 50, элюент - гексан : этилацетат : хлороформ - (15 : 1 : 2) (16; 18а-е).

Для ТСХ применяли пластины "Sorbfil" (Россия), обнаружение веществ осуществляли опрыскиванием 20% раствором фосфорно-молибденовой кислоты в этаноле и последующим нагреванием при 100-120"С в течение 2-3 мин.

Безводные растворители; готовили стандартными методами? [80]. Бетулин 1 выделяли; из бересты; березы по известной- методике [81] и кристаллизовали из^пропанола, т. пл. 254-256°, [a]d"+20.1 (с 2.0; Ру) {лит. [82]: т. пл. 256-257°,. [a]D25 +19.0° (с 2.0; Ру)}. Аллобетулон 2 получали окислением аллобетулина [83, 84] стандартным реактивом Джонса [85] в ацетоне. Бетулоновую кислоту, получали окислением бетулина 1 [81] реактивом Джонса. Бетулоновую кислоту метилировали йодистым метилом в ацетоне [86] до соответствующего метилового эфира З:

4.1.Синте^серосодержащихпроизводных11аосновебегулина

30-Бр6мтЗр|28?ди-0-ацетилглупг20(29)"гён«41получалиа по: описанному методу [27]" Rf 0:4(гексан; : этилацетат - 5:1); т. пл.: 183-1859;:[сх]ь-2+8.0г(с 1.8;.CHG13)> {лит; [27]^т- пл. 185°;.[a]D25 +7.4° (с 0.49; <2Ш1з)}: ИК спектр:(у, см:1): 880J(=(Ж);; 1720=(CH3GOO>€пёктр;ЯМР 1Я (3ОО^МГц, eDGl3,l5, м.д., 1/Гц)-0:77, 0.92;:0.97 (3'хсЗЩ:Зс,;ЗеЩ);:0^78?(6Ы^ с, 2СЩ);:1.96^1F.99 (2 х ЗН;

2с, 2СН3СОО); 2.37 (1Н, тд, J = 10.8, 5.1, СН-19); 3.91 (2Н, с, СН2-30); 3.78, 4.19 (2Н, 2д, J = 11.10, СН2-28); 4.40 (1Н, дд, J = 9.8, 5.4, СН-3); 4.96, 5.07 (2Н, 2с, =СН2-29).

4.1.1. Синтез соединений 5а-е

К метанольному раствору метилата натрия; полученному при добавлении-1 г (43.5 ммоль) металлического натрия к 5 мл безводного МеОН; добавляли 1.7 ммоль соответствующего^ меркаптана и перемешивали при комнатной температуре 3 ч. Растворитель упаривали, к образовавшейся натриевой соли-меркаптана добавляли смесь 1.7 ммоль,3р,28-диацетокси-30-бромлуп-20(29)-ена 4 в 16 мл безводного DMSO и перемешивали при комнатной температуре 6 ч. Реакционную смесь разбавляли водой, выпавший осадок отфильтровывали, промывали водой, 5% раствором НС1 и вновь водой до- нейтральных значений рН смывных вод. Полученную смесь кристаллических продуктов разделяли методом-колоночной? хроматографии на Si02. После кристаллизации из EtOH получали сульфиды бетулина 5а-д в виде мелких кристаллов белого двета.

30-(Этилтио)луп-20(29)-ен-Зр,28-диол 5а. Выход 0.56 г (56%); Rf 0.4 (хлороформ: этилацетат- 10:1); т. пл. 190-193°; [a]D18 -0.2° (с 4.7; ЕЮН); УФ спектр (ЕЮН, Хтах, нм): 220 (lg s 1.604). Спектр ЯМР 'Н (300 МГц, GDC13, 5, м.д., J/Гц): 0.69, 0.75, 0.90, 0.92, 0.95 (5 х ЗН, 5с, 5СЩ); 1.33 (ЗН, т, J = 7.2, ch3-h2s-); 2.29 (1Н, тд,Л:= 11.1, 5.1, СН-19); 2.38 (2Н, к, J = 7.2; CH3CH2S-); 3.07 (2Н; с, СН2-30); 3.12 (1Н, дд, J =10.8, 5.1, СН-3); 3.24'и-3.73'(2Н; 2д,.1 = 11.1, СН2-28); 4.76-и-4.83 (2Н; 2с, =СН2-29).

30-(Бутилтио)луп-20(29)-ен-Зр,28-диол 56. Выход. 0,6, г (69%); Rf 0.5 (хлороформ : этилацетат:- 10:1); т. пл.Л44-146°; [a]D18 -12.5?. (с 3.0;^ ЕЮН); УФ-спектр (ЕЮН, А,тах, нм): 220; (lg в 0.764). Спектр ЯМР' 'Н (300'МГц, cdci3, 8, м.д., J/Гц): 0.69,„0.76, 0.90, 0.93, 0.96 (5 х ЗН;5с, 5СЩ);Л.19(ЗН, т, J = 7.2, CH3(CH2)2CH2S-); 2.30 (1Н, тд, J = 10.1, 5.4, СН-19);.2.35 (2Н,„т, J = 7.2,

CH3(CH2)2CH2S); 3.06 (2H, с, CH2-30); 3.12 (1Н, дд, J = 10.7, 5.1, СН-3); 3.26 и 3.73 (2Н, 2д, J = 10.8, СНо-28); 4.76 и 4.83 (2Н, 2с, =СН2-29).

30-(2-Гндроксиэтилтио)луп-20(29)-ен-3|3,28-диол 5в. Выход 0.5 г (57%); Rf 0.35 (этилацетат : гексан : дихлорметан - 5:2:3); т. пл. 182-183°; [ct]D18 -30.3° (с 2.7; ЕЮН); УФ спектр (ЕЮН, Хтхк, нм): 240^(lg s 2.828). СпектрЯМР 'Н (300 МГц, CDC13, 5, м.д., J/Гц): 0.70, 0.76, 0.91, 0.93, 0.96 (5 х ЗН, 5с, 5СН3); 2.30 (1Н; тд, J = 10.9, 5.4, СН-19); 2.59 (2Н, т, J = 6.0, HOGH2CH2S); 3.08 (2Н; с, СН2-30); 3.12 (1Н, дд, 1 = 10.5, 5.1, СН-3); 3.26 и 3.73 (2Н, 2д, J = 10.5, СН2-28); 3.66 (2Н, т, J = 6.0, HOCH2CH2S); 4.79 и 4.87 (2Н, 2с, =СН2-29).

30-(фенилтио)луп-20(29)-ен-3р,28-диол 5г. Выход 0.56 г (56%); Rf 0.3 (хлороформ : этилацетат - 10:1); т. пл. 168-170°; [a]D18 -25.5°; (с 2.9; ЕЮН); УФ спектр (ЕЮН, ^тах, нм): 230, 250 (lg s 2.657, 3.338). Спектр ЯМР 'Н (300 МГц, CDC13, 8, м.д., J/Гц): 0.69, 0:76, 0.95 (3 х ЗН, Зс, ЗСН3); 0.90 (6Н, с, 2СН3); 2.34 (1Н, тд, J = 10.9, 5.4, СН-19); 3.12 (1Н, дд, J = 10.7, 5.1, СН-3); 3.24 и 3:73 (2Н, 2д, J = 10.5, СН2-28); 3.51 (2Н, с, СН2-30); 4.84 и 4.89' (2Н, 2с, =СН2-29); 7.25 (5Н, м, аром.).

30-(Бензилтио)луп-20(29)-ен-Зр,28-диол 5д. Выход 0.30 г (45%); Rf 0.5 (хлороформ : метанол - 20:1); т. пл. 135-137°; [aJD18 -14.9°; (с 1.9; ЕЮН). Спектр ЯМР-'Н (300 МГц, CDG13,~5, м.д., J/Гц): 0.69, 0.75, 0.95 (3 х>ЗН, Зс, ЗСНз); 0.90 (6Н, с, 2СН3); 2.27 (1Н, тд, J = 11.0, 5.7, СН-19); 2.97 (2Н, с, СН2-30); 3.12 (1Н,,дд, J*= 10.1, 5.1, СН-3); 3.22-и 3.71 (2Н„2д,Л = 10.8, СН2-28); 3.56 (2Н, с, S-CH2-C6H5); 4.78 и 4.86 (2Н,.2с, =СН2-29); 7.24 (5Н; м, аром.):

30-(Бензимидазолилтио)луп-20(29)ен-3,28-диол 5е. Выход, 0.55 г (50%); Rf 0.3'(хлороформ»: метанол -г 20:1); т. пл. 174-176°; [a]D22 -38:4° (с 3.6; ЕЮН);~УФ- спектр (ЕЮН, A,nwx, нм): 230, 280 (lg s.2.931,'2.809). Спектр *Н ЯМР (300-МГц, DMSO-d6, 5, м.д., J/Гц): 0.65, 0.75/0:87,.0.92,<0.96 (5 х ЗН; 5с, 5СНз); 2.32 (1Н, м, СН-19); 2.97 (1Н, м, СН-3); 3.04 и 3.49 (2Н, 2 д, 1= 10.8,

СН2-28); 4.00 (2Н, с, СН2-30); 4.93 и 5.02 (2Н, 2 с, =СН2-29), 7.12 и 7.43 (4Н, 2 м, аром.).

4.1.2. Синтез соединений ба-е

Сульфид бетулина5а-е (0.5 ммоль) растворяли в 20 мл смеси ацетон-уксусная кислота (9:1), нагревали до 45-50°С, добавляли 0.5 мл 30%-ной Н202 и перемешивали на магнитной мешалке при комнатной'температуре" 2 ч. За ходом реакции следили с помощью ТСХ. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (3x20 мл), экстракт промывали 10%-ным. водным раствором NaHC03 до- нейтральных смывных вод, сушили- Na2S04. Растворитель упаривали, остаток разделяли на колонке с Si02. После кристаллизации из ЕЮН получали сульфоксиды бетулина ба-д в виде мелких кристаллов белого цвета.

30-(Этилсульфинил)луп-20(29)-ен-Зр,28-диол 6а. Выход 0.2 г (55%); Rf 0.3 (хлороформ : этилацетат - 10:1); т. пл. 170-172°; [a]D21 -15.4° (с 3.2; ЕЮН); УФ спектр (ЕЮН, Хтах, нм): 220 (lg в 1.288). Спектр ЯМР !Н (300 МГц, CDC13, 5, м.д., J/Гц): 0.70, 0.76, 0.90, 0.92, 0.95 (5 х ЗН, 5с, 5СН3); 1.34 (ЗН, т, J = 7.2, CH3CH2S-); 2.42 (1Н, тд, J = 10.2, 5.1, СН-19); 2.96 (2Н, к, J = 7.2, CH3CH2S-); 3.12 (1Н, дд, J = 10.8, 5.4, СН-3); 3.25 и 3.71 (2Н, 2д, J = 11.1, СН2-28); 3.58 и,3.67 (2Н, 2д,Л = 13.8, СН2-30); 5.10 и.5.20,(2Н, 2с, =СН2-29).

30-(Бутилсульфинил)лупг20(29)-ен-Зр,28-диол 66. Выход 0:3 г (58%); Rf 0.25-(хлороформ-::этилацетат- — 10:1); т. пл.г171-173°; [a]D18 -11.4° (с 3.3; EtOH);. УФ * спектр-(ЕЮН, А,тах, нм): 220 (lg е. 0.324). Спектра ЯМР 'Н (300» МГц, CDC13, 8, м.д., J ГГц): 0.69, 0.76^ 0.90; 0.92, 0.95 (5 х ЗН, 5с, 5СН3); 1.19 (ЗН; т, J = 7.2, CH3(CH2)2CH2S); 2.30 (1Н,/м, СН-19); 2.64 (2Н, т, J = 7.5; CH3(CH2)iCH2S); 3.12'(1Н, дд,Л = 10.5,.5:1, СШЗ);.3.23 и 3.72 (2Н; 2д,Л.= 10.8, СНо-28); 3.30 и 3.39'(2Н;.2д,Л = 12.9, СН2-30); 4,93 (0.44Н, с, =СНа-29 -изомер'А); 4,95 (0.56Н, с, =СНа-29 - изомер Б); 5.03 (1Н, с; =СНб-29).

30-(фенилсульфинил)луп-20(29)-ен-3р,28-диол; 6г. Выход 0.25 г (50%); Rf 0.4 (хлороформ : метанол - 20:1); т. пл. 127-129°; [a]D18 -2.7° (с 2.9; ЕЮН); УФ спектр (EtOH, А,шх, нм): 230 (lg s 2.689). Спектр ЯМР *Н (300 МГц, CDC13, 8, м.д., J/Гц): 0.69, 0.75, 0.95 (3 х ЗН, Зс, ЗСН3); 0.90 (6Н, с, 2СН3);2.32 (1Н, м, СН-19); 3.12 (1Н, дд, J = 11.3; 5.1, С№3); 3,22 (0.45Н, д, J =■ 10.2, СН-28а - изомер А); 3,24 (0.55Н, д, J = 11.1, СН-28а - изомер Б); 3.32 и 3.50 (0.9I-I, 2д, J = 1З.2; СН2-30 - изомер А); 3:33 и 3.40 (1.1Н, 2д, J = 13.2, СН2-30 -изомер Б); 3:73 (1Н; д, J = 10.8, СНб-28); 4.87 (111, с, =СНа-29); 5.02 (0.451-1, с, =СНб-29 - изомер А); 5.04 (0.55Н, с, =СНб-29 - изомер Б); 7.46 и 7.59 (511, 2м, аром.).

30-(Бензилсульфинил)луп-20(29)-ен-ЗР£8-диол 6д. Выход 0.15 г (50%); Rf 0.3 (хлороформ : метанол - 20:1); т. пл. 116-118°; [a]D21 -12.7°; (с 2.6; ЕЮН). Спектр ЯМР 'Н (300 МГц, CDC13, 5, м.д., J/Гц): 0.69, 0.74, 0.90; 0.93 (4 х ЗН, 4с, 4СН3); 0.82 (3.12Н, с, СН3 - изомер Б); и 0.84 (2.88Н, с, СН3-изомер А); 2.28 (111, тд, J = 11.1, 5:6, СН-19); 3.12 (1Н, дц, J.= 10:1, 4.8, СН-3); 3:17 шЗ:68 (2Щ 2д, J = 10:8, СН2-28);.3:27 и.3.36 (2Н; 2д, J = 13;2, СН2-30); 3:96 (2Н, с, S-СНг-СбЩ); 4,98; и 5.04 (2Н, 2с, =СН2-29); 7.24-7:33 (5Н, м, аром.).

30-(Бензимидазолилсульфинил)луп-20(29)ен-Зр,28-диол бе. Выход 0.3 г (65%); Rf 0.25: (хлороформ : метанол - 20:1); т. пл. 170-172°; [a]D22 -12:4° (с 5:1; EtOH); УФхпектр (ШЩ %тах, HM)::260*(lg 8;ЗЛ99): ;Спектр;ЯМР5 •Н (300 МГц, CDC13, :8, м.д:,:Л/Гц)-г 0:69-0.74,; 0.88, 0.90, 0.92 (5 х< ЗН; 5с, 5СНз); 233*(}1Щ м, СЖ19); 3U2 (Щ.м,.СНгЗ); 10:5;

СЩ-28); 3.94(2Н, с, СН2.30);4:93ш5:02:(2Щ.2с,;^ 2м, аром:).

Стереоселективное окисление сулвфидагбдг .

К перемешиваемому раствору 4 мг ацетилацетоната ванадила и 6 мг лиганда 1>ж, L3 или L,, в 5 мл хлороформа при 20°С добавили. 0,1 г 30бензилтио)луп-20(29)-ен-ЗР-диола 5д. Затем 0,1 мл 30%-ной Н202. Реакционную смесь перемешивали 2 ч., промыли водой (2x1 мл), органический слой отделили, сушили MgSO.|, упарили. Остаток хроматографировали (Si02, этилацетат : гексан (1:1)

30-(Бензилсульфинил)луп-20(29)-ен-Зр,28-диол* 6и. Выход 0.15 г (50%); Rf 0.3 (хлороформ : метанол - 20:1); т. пл. 116-118°; [a]D21 -12.7°; (с 2.6; ЕЮН). Спектр ЯМР !Н (300 МГц, CDC13, 8, м.д., J/Гц): 0.69, 0.74, 0.90, 0.93 (4 х ЗН; 4с, 4СН3); 0.82 (3.12Н, с, CHi - изомер А); и 0:84 (2.88Н, с, СН3 -изомер Б); 2.28 (1Н, тд, J = 11.1, 5.6, GH-19); 3.12 (1Н, дд, J = 10.1, 4.8, СН-3); 3.17 и 3.68 (2Н, 2д, J = 10.8, СН2-28); 3.27 и 3.36 (2Н; 2д, J = 13.2; СН2-30); 3.96 и 4.31 (0.56Н, 2д, J = 13.2, S-CH2-C6H5 - изомер А); 3.99 и 4.07 (0.44Н, 2д, J = 13.2, S-CH2-C6H5 - изомер Б); 4.98 и 5.04 (2Н, 2с, =СН2-29); 7.24-7.33 (5Н, м, аром.).

4.2: Синтез азотсодержащих тритерпеноидов

4.2.1. Синтез Р-енаминокетонов на основе 19{3;28-эпоксиолеан-3-она 3-Ацетокси-19Р,28-эпоксиолеаи-2-ен 7 получали: а) к раствору 2 г (4.5 ммоль) аллобетулона 2 в 50 мл безводного cci4 добавляли 2 мл уксусного ангидрида и 2 капли конц. H2S04. Смесь перемешивали при комнатной температуре. Реакцию' контролировали с помощью ~ метода ТСХ. Растворитель отгоняли в вакууме, ■> остаток перекристаллизовывали.из смеси этанол-хлороформ; Выход 1.4 г (70%). б) К раствору 2 г. (4.5 ммоль): аллобетулона= 2 в! 50 мл безводного ССЦ добавляли 4 мл изопропенилацетата' и 2 капли,, конц: H2S04. Смесь, перемешивали: приг комнатной' температуре^ Реакцию: контролировали: с помощью^- метода ТСХ. Растворитель отгоняли, в вакууме, остаток перекристаллизовывали - из смеси -этанол-хлороформгВыход 1.5 г. (73%); Rf 0.56 (гексан : этилацетат — 5:1); т. пл. 262-264° С (этанол : хлороформ); [а];;+56:2° (с 1.5, СНС13). ИК спектр (v, см"1): 1750 (ОСОСН3). Спектр ЯМР н (300 МГц, CDC13, 5, м.д., J/Гц): 0.74, 0.87, 0.90 (3 х ЗН, Зс, ЗСН3); 0.85, 0.94 (2 х 6Н, 2с, 4СН3); 2.08 (ЗН, с, ОСОСН3); 3.39 и 3.73 (2Н, 2д, J = 7.8, СН2-28); 3.48 (1Н, с, СН-19); 5.09 (1Н, дд, J, = 6.6, J2 - 1.8, =СН-2).

3,19,28-Триацетокси-19р,28-эпоксиолеан-2-ен 8. К раствору 2 г (4.5 ммоль) аллобетулона 5 в 50 мл безводного cci4 добавляли 4 мл изопропенилацетата и 2 капли конц. НСЮ4. Смесь перемешивали при комнатной» температуре. Реакцию контролировали с помощью метода ТСХ. Растворитель, отгоняли в вакууме, остаток перекристаллизовывали. из смеси этанол-хлороформ. Выход 1.4 г (70%); Rf 0.56 (гексан : этилацетат — 5:1); т. пл. 193-195° С (этанол - хлороформ); [а]"+56.2° (с 1.5, СНС13). ИК спектр*^, см"1): 1750 (ОСОСН3). Спектр ЯМР ]Н (300 МГц, CDC13, 5, м.д., J/Гц): 0.74, 0.87, 0.90 (3 х ЗН, Зс, ЗСН3); 0.85, 0.94 (2 х 6Н, 2с, 4СН3); 2.08 (ЗН, с, ОСОСНз); 3.39 и 3.73 (2Н, 2д, J = 7.8, СН2-28); 3.48 (1Н, с, СН-19); 5.09 (1Н, дд, J, = 6.6, J2 = 1.8, =СН-2).

3-Ацетокси-(2,3),(19Р;28)-диэпоксиолеанан 9а, б. К раствору 2.5 г (5.2 ммоль) енолацетата аллобетулона 7 в 30- мл дихлорметана при перемешивании на магнитной мешалке добавляли раствор 2.5 г (14.5 ммоль) ж-хлорнадбензойной кислоты в 20 мл диэтилового эфира. Реакционную смесь перемешивали 24 ч при комнатной температуре. Реакцию контролировали с помощью- метода ТСХ. После окончания- реакции реакционную» смесь промывали 10 % водным раствором, натриевой? щелочи для удаления- остатков* ти-хлорнадбензойной кислоты, органический- слой отделяли-и сушили над Na2S04,. растворитель, отгоняли в вакууме. .Очистку продукта осуществляли с помощью, колоночной* хроматографии,, в. качестве элюента"использовали смесь.гексан:этилацетат : хлороформ - 10:1:2. Выход 2 г (77%); Rf 0.4 (гексан : этилацетат : хлороформ"- 10:1:2); т. пл. 258-260° С (этанол - хлороформ); [а]'® +20,23° (с 1.7, СНС13). ИК спектр (v, см"1): 1750 (ОСОСНз). Спектр ЯМР 'Н (300-МГц, CDC13, 5, м.д:, J/Гц): 0.73, "0.83, 0.87,

0.97, 1.04 (5 х ЗН, 5с, 5СН3); 1.07 (1.8Н, с, СЩ-изомер 9а); 1.09 (1'.2Н,.с, СН3

102

-изомер 96); 1.13 (1.2Н, с, СН3 - изомер 96); 1.16 (1.8Н, OCOGH3 - изомер 9а); 2.26 (0.6II, дд, J, = 12.2, J2 = 6.0, СН-1 - изомер 9а); 2.46 (0.4Н, дд,-J, = 12.5, h = 6.6, СН-1 - изомер 96); 3.39 и 3.71 (2Н, 2д,Т = 7.8, СН2-28); 3.47 (1Н, с, СН-19); 4.49 (0.4Н, дд, J, = 12.3, J2 = 6.6, СН-2 - изомер 96), 5.56 (0.6Н, дд, J, = 13.2,.J2 = 6.0, СН-2 - изомер 9а).

2р-Ацетокеи-19Р;28-эпоксиолеангЗ-он 101 Смесь, 0.5 г (1 ммоль) 3-ацетокси-(2,3)(19р,28)-диэпоксиолеанана 9а,б и 0.1 мл (1.15 ммоль) морфолина в 50 мл бензола кипятили, с обратным холодильником: Реакцию контролировали с помощью- метода: ТСХ. Растворитель, отгоняли в вакууме; остаток кристаллизовали;из смеси этанол-хлороформлВыход 0.38 г (76%); Rf 0.25 (гексан : этилацетат — 5:1); т. пл. 284-286° С (этанол - хлороформ); [а];® +60:8° (с 1, СНС13). ИК спектр (v, см-1): 1700 (С=0), 1740 (ОСОСН3). Масс-спектр (ЭУ, 70 эВ), m/z, (lomiL, %): 498 (М+, 53), 456 (47), 438 (25), 427 (100), 205 (53), 204 (33), 191 (48), 190 (22), 189 (33),. 187 (41), 177 (44), 175 (30), 163'(31)- 161 (28),150 (20); 149(70); 147 (30), 137 (29)*.135 (55), 133 (35); 123 (34), 122 (21), 121(66),. 119 (41), 109 (58), 108 (23), 107 (64), 105 (34), 95 (84), 93 (46), 83 (30), 82 (28), 81 (81), 79 (26), 69 (91), 55 (57). Спектральные

1 1 л характеристики ЯМР Ни С соединения 9 приведены в таблице 16.

Общая методика получения соединений 11а-д. Эпоксид 9а,б в количестве 1 ммоль. добавляли к 30 ммоль амина и кипятили с обратным холодильником: в; течение? 16-20 ч. Реакцию контролировали с помощью-метода» ТСХ. Реакционную-, массу- разбавляли; водой:: Выпавший? осадок; отфильтровывали, сушили, очищали с. помощью колоночной хроматографии^ .' элюент; подбиралииндивидуально; для каждого соединения:' Полученные . 1фодуктъЕ.кристалт1зов^

2-Пйперидино-19(3;28-эпоксиолеан-1-ен-3-он'11а: Выход 0:25 г:(47%); Rf 0.15 (хлороформ;: этилацетат -т 10:1); т. пл. 79-81° С; [а]+147.41° (с 1.3, ' СНС13). ИК спектр (v, смТ1):" 1680 (С=0). Спектр ЯМР JH (300 МГц, CDC13, 8, м:д.,Л/Гц): 0.74, 0:88-0.89j:0;90, 0.96^0.98 1.08 (7 х ЗЩ7с, 7СН^);-2.39-2:47

103

2Н, м, (CH2)5N); 2.68-2.75 (2Н, м, (CH2)5N); 3.39 и 3.72 (2Н, 2д, J = 8.1, СН2-28); 3.49 (1Н, с, СН-19); 5.90 (1Н, с, =СН-1).

2-Морфолино-19р,28-эпоксиолеан-1-ен-3-он 116. Выход 0.35 г (62%); Rf 0.15 (гексан : этилацетат - 5:1); т. пл. 197-199° С; [а]1,* +118.47° (с 2.1, СНС13). Найдено, %: С 77.76; Н 10.87; N 2.37. С37Н54Ж)з. Вычислено, %: С 77.88; Н 10.30; N 2.67. ИК спектр (v, см"1): 1685 (С=0). Спектральные

1 И характеристики ЯМР Ни С соединения 10 б приведены в табл. 16.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Показано, что тиилирование 30-бромпроизводного бетулина тиолятами натрия приводит к соответствующим 30-сульфинилпроизводным бетулина, которые были окислены пероксидом водорода до соответствующих 30-сульфинилпроизводных. ►

Установлено, что- взаимодействие 3-ацетокси-19р;28-эпоксиолеан-2-ена с м-хлорнадбензойной кислотой приводит к смеси- диастереомерных 3-ацетокси-(2,3),(19|3,28)-диэпоксиолеананов, при", -нагревании которых в аминах, образуются^ тритерпеновые а-енаминокетоны. Обнаружено, что взаимодействие 19Р,28-эпоксиолеан-2-она с w-нитроанилином в условиях кислотного катализа приводит к аналогичному по структуре а-енаминокетону в результате окисления образующегося енамина кислородом воздуха.

Изучено взаимодействие смеси диастереомерных 3-ацетокси-(2,3),(19р,28)-диэпоксиолеананов с аминами при нагревании в среде органических растворителей. Установлено, что, независимо от используемых амина и растворителя в описанных условиях, реакцшг проходит через стадию стереоселективной термической перегруппировки с образованием единственного продукта - 2р-ацетокси-19Р,28-эпоксиолеан-3-она.

Показано, что С-2-конденсация олеанановых и лупановых 2-гидроксиметилен-3-оксопроизводных с аминами приводит к образованию тритерпеновых Р-енаминокетонов? и эффективно протекает как в условиях нагревания, так и при-комнатной, температуре-в условиях кислотного; катализа:.

При1 изучениис возможности; направленного, синтеза' симметричных. Ренаминокетонов;. содержащих, два тритерпеновых^.каркаса; выявлено, что взаимодействие 2-гидроксиметиленпроизводных.- с диаминами, проходит исключительно в условиях, кислотного катализа: Влияние пространственныхфакторов, препятствующих образованию димераг в реакции конденсации, проявляется в образовании как.ди-, так и минорных, моноконденсированных

92 продуктов в случае с м- и w-фенилендиаминами. В случае о-фенилендиамина независимо от соотношения реагентов реакция протекает с образованием единственного продукта моноконденсации. Использование несимметричного 1,2-диаминопропана приводит к смеси изомерных димерных продуктов.

В результате биотестирования выявлено, что 30-сульфанил- и 30-сульфинилбензимидазольные производные бетулина проявляют противовоспалительную активность, сравнимую с действием диклофенака натрия. При исследовании иммунотропного действия среди синтезированных лупановых и олеанановых (3-енаминокетонов отобраны соединения с изопропильным заместителем как иммуносупрессоры гуморального и клеточного иммунитета, не обладающие общетоксическим действием на организм. Установлено, что в проявлении биологической активности тритерпеновых производных значительную роль играет структура тритерпенового фрагмента, что проявляется в более высоком иммунотропном эффекте для олеанановых (3-енаминокетонов.

1. Г. А. Толстиков, Бетулин и его производные. Химия и биологическая активность. / О. Б. Флехтер, Э. Э. Шульц, Л. А. Балтина и т. д. // Химия в интересах устойчивого развития. 2005. - № 1. - С. 1-30.

2. P. A. Krasutsky, Birch bark research, and development.' // Natural product reports 2006. - Vol. 23. - № 6. - C. 919-421

3. S. Alakurtti, Pharmacological properties of the ubiquitous natural product betulin. / T. Makela, S. Koskimies and J. Yli-Kauhaluoma. // Europ. J. Pharm. Sciences. -2006. -Vol. 29. -№ l.-p. 1-13.

4. F. Z.Galin, Synthesis of the lupinine ester of betulonic acid. / V. G. Kartsev,

5. О. B. Flekhter, G. V. Giniyatullina and A. G. Tolstikov // Chem. of Natural Compounds. 2004. - Vol. 40. - № 6. - p. 596-570.

6. О. Б. Флехтер, Синтез и противовирусные свойства производных лупановых тритерпеноидов: / Е. И. Бореко, Л. Р. Нигматулина, Н. И. Павлова и т. д. // Хим.тфарм: журн. — 2004iТ. 38: № 7 - С. 10-13:,:.

7. О: Б. Флехтер;, Синтез- и, фармакологическая активность; диникотината бетулина: / Л." Т. Карачурина, Л. Р.,Нигматулина, Т. А. Сапожникова и т. д. // Биоорган.-химия.,- 2002. Т. 28. -. № 6: - С. 543-550:-:

8. L. .Huang, Synthesis, and; anti-HIV activity of bi-functional; betulinic" acid; derivatives. / P. Ho; K.-H. Lee.and G:-H. Chen // Bio'org. Med:'Chem: 2006: -Vol. 14.-p. 2279-2289:

9. М. Evers, Betulinic Acid Derivatives: A New Class of Human Immunodeficiency Virus Type 1 Specific Inhibitors with a New Mode of Action. / C. Poujade, F. Soler, Y. Ribeill, C. James, Y. LelieVre, J.-C. Gueguen,

10. D; Reisdorf, II Morize; R: Pauwels, E. De Glercq, Y. He'nin, A. Bousseau, J:-F. Mayaux, Ji-B. Le Pecq, and N. Dereu // J. Med. Chem. 1996. - Vol. 39. -p. 1056-1068.

11. Л. P. Нигматуллина, Синтез новых физиологически активных веществ на основе тритерпеноидов лупанового ряда: Автореф. дисс. на соискание ученой степени канд. хим. наук. Уфа: — 2002. - 24 с.

12. Ф. 3. Галин, Ф. С. Зарудий, Г. А. Толстиков // Хим.-фарм. журн. — 2004. -Т. 38. -№3. -С. 31-33.

13. J. Y. Kim, Development of C-20 Modified Betulinic Acid Derivatives as Antitumor Agents. / H.-M. Koo and Darrick S. H. L. Kim // Bioorg. Med. chem. -2001.-Vol. 11.-p. 2405-2408.

14. J. Klinot // Collect. Czech:,Chem. Commun. 1962. - Vol. 27. - p. 377.

15. R. P. Reddy, V. R. N. Reddy, A. Ravindranath; .T. S. Ramiach-.// Indian, J. Chem. Soc. -1989: 28B. - p. 850'

16. K. L. Rao, S. K. Ramraj, T. Sundararmaiah // J. Indian Chem: Soc. 1980. -57.-p. 833.

17. О. В. Kazakova, Synthesis and modification of triterpenoids with two lupan backbones. / G. V. Giniyatullina, G. A. Tolstikov, V. E. Kataev, and R. Z. Mu-sin // Russian Journal of Bioorganic Chemistry. 2009. - V. 35. - № 5. -p. 645-650.

18. D. D. Nekrasov, Benzoilacetylation of Allobetulin and Allobetulon Oxime by Benzoylketene Generated in situ During Thermolysis of 5-phenyl-2,3-dihydro-furan-2,3-dion. / A. S. Obukhova // Chem. Het. Сотр. 2005. - Vol. 41. -№ 11.-p. 1426-1427.

19. R. Mukherjee, Betulinic acid, and; its derivatives as anti-angiogenic agents. / M: Jaggi, P. Rajendran, M: J. A. Siddiqui, S. K. Sriva-stava, A. Vardhanb and-A. C. Burman //Bioorg. Med. Chem. 2004. - Vol: 14. -p. 2181-2184.

20. К. X. Ок, Конденсация 3-кетотритерпенов со сложными эфирами и синтез С-замещённых тритерпенойдных азолов. / Г. А. Толстиков, В. С. Базалицкая // Ж. общ. химии. 1970. - Т. 40. - С. 492-496.

21. Y.-J. You, Synthesis and Cytotoxic Activity of A-ring Modified Betulinic Acid Derivatives. / Y. Kim, N.-H. Nam and B.-Z. Ahn // Bioorg. Med. Chem. -2003.-Vol. 13. -p: 3137-3140.

22. К. X. Ок, Об изомерии тритерпеновых. азолов. / Г. А. Толстиков, М. И. Роряев.// Известия АН-Каз. ССР. Сер. хим: - № 6 - 1970. - С. 49-54.

23. М. Endova, Preparation of 2,3-secodiacids of the lupane series. / E. Klinotova,v

24. J. SejBal, B. Maca, Jf. Kliunot and J. Protiva // Collect. Czech. Chem. Commun. 1994'. - Vol. 59. - № 6. - p. 1420-1429.

25. J.-M. Lehn, Syntheses dans la serie du lupane / G. Ourisson // Bull. Soc. Chim. France. 1962. - Vol. 6. - p. 1133-&.

26. F. N. Lugemwa, A Heliothis zea Antifeedant from* the Abundant Birchbark Triterpene Betulin. / F.-Y. Huang, M. D. Bentley, M. J. Mendel; and

27. A. R. Alford // J. Agric: Food Chem. 1990. - Vol. 38. - p. 493-496.

28. В. P: Pradhan, P. Ghosh // Indian J. Chem. 1993. - 32B. - p. 920.

29. J. Sejbal, Reactions of triterpenoid ketoes with sulfur and morpholine under the conditions of Willgerodt-Kindler reaction. / J. Klinot, J. Protiva, A. Vystrcil // Collect. Czech. Chem. Commun. 1986. - Vol. 51. - p. 118-127.

30. А. В." Коровин, Синтез хиноксалинов, конденсированных с тритерпенами, производных урсоловой кислоты и-бетулина. / А. В. Ткачев // Изв. АН, сер? хим. 2001. - № 2. - С. 292-297.

31. ФлехтерО.Б.,. Синтезг терпеновых 1,2,Згтиадиазолов.! на основе цикло-пентанонпимаровой' и бетулоновой* кислот. / Е. В. Третьякова; Н.„ И. Медведева, JI. А. Балтина, Ф. ,3. Галин; Г. А. Толстиков;

32. B. А. Бакулев7/ Журнг Орг. химии: 2004. - Т. 40: - №4. - С. 99-101.

33. Y. Kashiwada, Производные бетулоновой кислоты и дегидробетулоновой кислоты в качестве потенциальных Анти-ВИЧ агентов. / F. Hashimoto, L. М. Cosentino С.-Н. Chen, P. Е. Garret, К.-Н. Lee // J. Med. Chem. 1996. -Vol. 39.-p. 1016-1017.

34. А. В. Shintyapina, Effect of Nitrogen-Containing Derivatives- of the Plant"

35. Triterpenes Betulin and Gly cyrrhetic Acidt on the Growth■ of MT-4; MOLT-4,

36. CEM, "and-Hep G2'Tumor Cells / E. E. Shults, N. I. Petrenko, N. V. Uzenkova,

37. G. A. Tolstikov, N. V. Pronkina, V. S. Kozhevnikov, and. A. G. Pokrovsky132

38. Russian Journal of Bioorganic Chemistry. 2007. - V. 33. - № 6. -p. 579-583.

39. H.-J. Jeong, Preparation of amino acid conjugates of betulinic acid with activity against human melanoma. / H.-B. Chai, S.-Y. Park, and Darrick S. H. L. Kim // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999. - Vol. 9. - p. 1201-1204.

40. Н. И. Петренко, Синтез производных бетулоновой кислоты, содержащих аминокислотные'фрагменты. / Н. В. Еланцева, Э. Э. Шульц, М. М. Шаки-ров, Г. А. Толстиков. // Химия природ, соедин. 2002. - № 4. - С. 276-283.

41. N. Dereu, Novel Lupane Derivatives, Their Preparation And, Pharmaceuticals Compositions* Containing Same: / M. Evers,rC. Poujade,. E. Soler. // W09426725 (Al). - 1994.11.24.

42. G. V. Giniyatullina, Synthesis.of squalamine analogues,on tHe,basis of lupane triterpenoids. / О: B. Flekhter and ,G. A. Tolstikov.// Mendeleev, Commun. -2009.4 — Vol. 19.-p. 32-33.

43. В. А. Стоник, Фундаментальные исследования в интересах, медицины в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН и их прикладные результаты // Вестник ДВО РАН. 2004. - № 3. - С. 11-23.

44. С. Fimognari, Apoptosis induction by sulfur-containing compounds in malignant and nonmalignant human cells. / M. Lenzi, P. Hrelia // Environmental and MolecularMutagenesis. 2009; - Vol. 50: - № 3; - p. 171-189.

45. А. Г. Толстиков, Современные проблемы асимметрического синтеза / Г. А. Толстиков, И; Б. Ившина, В. В: Гришко, О: В: Толстикова, В: А. Глушков, Т. Б; Хлебникова, Н. Ф: Салахутдинов, К. П. Волчо. Екатеринбург: УрОХРАН: 2003. - 208?с: - С. 165:.

46. HI НС. Суворов, О?- селективном^ восстановлении^ прегнантрионатЗ; 11,201 борогидридомшатрия!Вширидине / 3. А. Ярославцева^// Ж. общ. химии. — 1959:-- Т. ХХШ № 9^ - Ci 2889-28931

47. W. RL Bucktt, .Pancuronium:; Bromide : andt Offier rSteroidaENeuromuscular: Blocking Agents Containing Acetylcholine Fragments . / C. L. Hewett, D: S. Savage //J: Med: ,Chem:- 1973: VoK 16. - № 10: -,p; 1116-1124:.

48. U. Burkert, Molecular Mechanics / N. L. Allinger // ACS Monograph 177, American Chemical Society. Washington. D:C. 1982. -339 p.

49. M. Askari, Conformational analysis of some trans-2-decalone systems by combined molecular mechanics and ab initio calculations. / N. S. Ostlund, L. J. Schaefer // Am. Chem. Soc. 1977. - Vol. 99. - № 16 - p. 5246-5248.

50. F. H. Allen, Tables of bond lengths determined by X-ray and neutron diffraction. Part 1. Bond lengths in organic compounds. / O. Kennard, D. G. Watson, L. Brammer, A. G. Orpen, R. Taylor // J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1987. -II. - S1-S19.

51. F. H. Allen; 3D search and research using the Cambridge.Structural Database. / O. Kennard // Chem. Des. Auto. News. 1993. - Vol. 8. - p. 31-37.

52. Cambridge Structural Database. Version 5.26. 2004. - November.

53. G. M. Sheldrick, SHELXTL-97 Program for Solution and Refinement of Crystal Structure. Bruker AXS Inc. Madison. WI-53719. USA. 1997.

54. Yu. V. Shklyaev, A new Approach.to Synthesis of 3,3-Dialkyl-3,4-dihydro-isoquinoline Derivatives. / M. A. Yeltsov., Yu. S. Rozhkova, A. G. Tolstikov, V. M. Dembitsky // Heteroatom Chem. 2004. - Vol. 15. - № 7. - p. 486-493.

55. J. Klinot, Prearation of 2-Methyl-3-oxo Triterpenoids. / J. Svetly, D. Kud-lackova, M. Budesinsky, A. Vystrcil // Collect. Czech. Chem. Commun. -1979.-Vol. 44. p. 211-225.

56. O. Shirota, Nine Regioisomeric and Stereoisomeric Triterpene Dimers from Maytenus chuchuhuasca. / S. Sekita, M. Satake, H.Morita, К. Takeya, H. Ito-kawa // Chem. Pharm. Bull. 2004. - V. 52. - p. 739-746.

57. M. Shakir, Metal-ion-directed,synthesis of 16-membered tetraazamacrocyclic complexes and their physico-chemical studies. / Hamida-Tun-Nisa Chishti, P. Chingsubam // Spectrochimica Acta. 2006. - Part A. - Vol. 64. - p. 512-517.

58. Лабораторная техника органической химии, под. ред. Б. Кейла. М.: Мир. 1966.-591 с.

59. Н. Schulze, Н. Pieron // Вег. 1922. - II. - р. 2332.

60. J. Klinot, Stereochemistry of 2-bromo derivatives of allobetuline and alloheterobetuline. / A. Vystrcil // Collect. Czech. Chem. Commun. 1966. -Vol. 31.-p. 1079-1091.

61. Л. Физер, Реагенты для органического синтеза. / М. Физер.М.: Мир. -1971.- Т. IV. 176 с:

62. Вейганд-Хильгетаг. Методы эксперимента* в органической, химии. М.: Химия. - 1968.' - 348 с: