Структурно-функциональная общность антагонистов кальция и других ксенобиотиков, сходно влияющих на сигнальные системы клетки тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНЫ Институт биоорганической химии и нефтехимии

На правах рукописи

ДЕГТЯРЬ В ад км Евгеньевич

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОБЩНОСТЬ АНТАГОНИСТОВ КАЛЬЦИЯ И ДРУГИХ КСЕНОБИОТИКОВ, СХОДНО ВЛИЯЮЩИХ НА СИГНАЛЬНЫЕ СИСТЕМЫ КЛЕТКИ

02.00.10 — Биоорганическая химия, химия природных и физиологически активных веществ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

киев— 1992

Работа выполнена в Институте биоорганической химии и нефтехимии АН Украины.

Научный руководитель — доктор медицинских наук, профессор

A. И. Луйк.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

B. К. Рыбальченко; кандидат фИЗ. ~МаТ. НЭУК Н. И. МИШеНКО Ведущая организация — Киевский НИИ фармакологии и токсикологии МЗ Украины. м

Защита состоится « 2-У » 1992 г. в_ час.

на заседании специализированного совета Д-016.65.01 в Институте биоорганической химии и нефтехимии АН Украины по адресу: 253160, Киев, Харьковское шоссе, 50.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биоорганической химии и нефтехимии АН Украины.

Автореферат разослан «_»__ "л 661

Ученый секретарь специализированного совета

Д. М. ФЕДОРЯК

ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМ

Шруэекие регуляции внутриклеточного гокеостааа калыц'я является важным звеноц в патогенезе многих заболеваний. Благодаря эф-■ фекгавнсоти блокатороз кальциевых каналов s ккпшчес-кой практике, их число быстро увелгсявается. Спи га'роко кслользутеся для терапии аритмии сердечных ссгсраданяй, стенокардии, гкпертензии и болыпого числа других патологических состояний.

Еяокагоры ¡салъцкеаых каналов обычно рассматриваются irsjc от. дельная группа достаточно специЗячэсках фармакологических средств.

Однако, в соответствии с представлениям, раавшяенш.« в Институте . БОНХ АН Украккы' цоследнке годы, кальциевые антагонисты могут б^гть отнесены к Солыюьу классу физиологически активны* вепэств со сго-рьотияом действия I+/II-, т.е. штш;фухтх адеиилатциклазну» ( I+) . к тормозяизяс Еолифос^стюзитиднув (II-) системы: Дгя такого нодхо-■ да есть глуботае основания. Различные типы кальциевых антгтонистов обгаруживаюг болъпуа стелен; обздюети в действии на различимо ми-Евви, как в рамках регуляции кальций-зависимых процессов, так и в действзм яа разные кдеточяш функции, регулируете основными сиг-яадьяши системам». Так, известно, что.блокатсрц кальциевых каналов способны блокировать различные рецепторы (пит&чиновые, а-ад-•репалиновыз, . Ей-дофаминовые, М-холинорецэпторы и другие), фермзн-, ты, . участвувщие е передаче сигналов С кальмодулют, фосфодиэстерагу цАМЗ) и фосфолйпкдзависимое фосфэрилирогание, креке того, обнаружено, что некоторые кальциевые Олокаторы, подобно (5-адреаомимоти-yau, акт!Ширу£Л' цАИ5-зависимое фосфзрилирозакие кемирац. Причем данямз эффэкты обусловлены прямьм взаимодействием кальциевых антагонистов с перечисленными субстратам, что подтверждается ж;; -курэнцией со саецифичоскими лигачдаш. Это позволяет предполодать наличие; определенной обцносг.я в действии и структуре молекул бло-ютсров кальцкевнг каналов, и других не ¡яств, влингатх на соответствующие рецепторы и фериентм.

Для сужения о природе этого явления представляло интерн* проследить вогмо.тнооть обратного влияния лигандов stux рсцептс-ро'.-и Ферментов ya штекдалуправдяеыыг кадьц»гьыг: каналы. lía отдельных о бю! trait ранее было показало, что бдокаторы НТ2-серотониновых и а-эдреяорецет-ороз, биоулг.сри фосЗодизстеразы ii/Ш', ' wt-eyhy? анестетики и некоторые другие препарат« о указанны* ск-реотж-м лейстгия Олскируят потенциа/гуправляеш^ хальциезнй ток. ntnpaEX-îHiibix исследований влияния ría каяьциеянЯ тог. paa,«№î,v: групп йжгшлогичгокч эдаввьтк «юдога, оОлйдгагсда сбщад стерооти

- г-

памп действия на клеточные сигнальные системы, • до настсл^гго времени не проводилось. Такое исследование позволяло надеяться на получение новых важных результатов, существенно распиряэдих представление о стереотипном характера действия биорегуляторов.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ.

Целью настоящей работы являлось изучение влияния на потенциал ¿управляемый кадмиевый тон фармакологических препаратов, обладающих общим с б£окатора:,ш кальциевых каналов стереотипом действия 1-е/II- ка клеточные сигнальные системы, и сравнение с действием веш<эств обратного стереотипа I-/IH-.

ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ.

1. Исследовать влияние ка потекциалуправляшй кальциевый ток нейрокальной мзьйраны препаратов со стереотипом 1+/II-, а и>.:е;шо: муекариновых холинояитиков, Ш-гистаминовых блокаторов, блокаторов кальмодулина и противоопухолевых агентов, относящихся к ингибиторам полпфосфошозигидной системы, а также Ей-допаминовых блокаторов, психомоторных стимуляторов и блокаторов фосфодизстеразы цАМФ, Ol носящихся к активаторам еденшштциклазной системы.

2. Исследовать влияние на кальциевый ток препаратов с проти- ; юполгтешм стереотипом действия - агокисгов яолкфосфоишзитидной системы: форбодового эфира, шкуноетулирущих агентов, а тага» синтезирозанщас б Институте лейкотриена С4 к олеоилацетихглицеро-ла.

3. Провести сравнительный анализ строения молекул Еещэств, имеющих обзуость е действии на кальциевые ток и другие мушэни в пределах сигнальных систем.

НАУЧНАЯ ЯОВ513НА.

1. Обнаружено, что мускариновый холкнолитик ачизид, нейролептики пропазин и D2-дофаминовый блокатор галоперидол, а также Hi-гиетамияовые блокаторы супрастин, дипразин и димедрол обратимо k блокирует потендаалуправляешй кальциевый ток нейронов виноградной улитки; по действующ«! концентрациям, характеру зависимости "до-Ь'а-пйект", а также кинетике блокирования токов перечисленные препараты сходны е верапашлом.

2. Показала общность верапамила и всех других исследования препаратов со стереотипом действия I+/II- в характере зависимости блокирования кальциевого тока от потенциала и способа приложения в

что свидетельству зт об общности механизма их действия и ':c«u«v щяиогекка на мегйрангж структурах.

3. Ш норвиых клетгах виноградной улитки подтвержден тот* üir, что чуастыгпелыше к. коклжшному токсину G-белки не влияет на

функционирование кальциевых каналог до того, как агонист свяжется с рецептором; не подтверждена модуляция S-белкаыи фармакологических воздействий на кальциевые каналы, обнаруженная ранее на нервных клетках млекопитающих.

4. Обнаружено, что агонист полифосфоянозитидной системы -лейкотриен С4 способен модулировать кальциевые токи нейрональнсй мембраны, увелр-авая амплитуду и сдвигал активационную характеристику тока к более отрицательным потенциалам.

5. Выявлены обще элементы структуры различных веществ, обладавших способностью блокировать кальциевый ток.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ И РЕАЛИЗАЦИЯ ЕБ РЕЗУЛЬТАТОЕ

Полученные результаты представляют, прежде всего, Фундаментальный интерес, поскольку позволяю существенно расширить сув/эст-вук«цие представления о молекулярных механизмах действия различных физиологически активных веществ, в том числе широко применяющихся лекарственных препаратов. Полученные данные способст: угт развитию общэй концепции биорегуляторных стереотипов и были кспо.-лзованы в монографии "йшия биорегуляторных стереотипов", В. Е Кухарь, А.ЯДуйк (ред.), (Киев: Еаукова думка, 1991, 368 е.), являпдейся новый разделом биоорганической химии.

Изучение обвдости в действии препаратов нашло применение при разработке новых схем терапии ишеиической болезтя сердца, острых панкреатитов, псориаза, зегетодистоничесгсого синдрому при дучевой болезни, предусматривающих применение ряда известных препаратов по новому назначение, йэвые схемы лечения бьш разработаны и внедрены в клиническую практику в 1988-1990 гг.

Данные об общих элементах структуры вецеств, блокирующих кальциевые каналы, могут Сыть использованы при еоздрлии новых фармакологически препаратов этого типа действия.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Основные материалы диссертации докладывались и обсухданис;: на заседаниях Ученого совета'Института бисоргакической хнжи и пефге-хииии АН Украины, на ежегодных научных конференциях 5^0КХ АЛ Укр кна, на научных семинарах отдела медико-биологических яеолодова-аий, на IV симпозиуме СОСР-ФРГ "Рецепторы и иоиныв кана-ш" üfcom, 16-21. сентября 1991;, на IV симпозиуме СССР-ФРГ "Всзбудкмцг жщл-ьы" (Киев, 1-4 октября 1991), на I и Ш Всесоюзных конференциях по нейронаукам (Киез, д»..«абрь 1986, декабрь 1990), на наушол тн-ференции Яизико-химического института 'ч^Е Богатркэго Д/i Укгаки!,: (Одесса,.лай 1989), на IV конференции молодых улньк г. Киев^ "Актуальные вопросы фармакологии и токсикологии (1987), на пагмх

сеыыарах Института физиологии км. А. А. Богомольца АН Украины.

Работа Калаяниковой Л. Е., Дегтяря В. Е., Поды- Г. II "Стереотип? hug механизмы действия физиологически активных веп^етв в пределах универсальных с истей восприятия, проведен иг и реализации внепнит сигналов клеткой" заняла второе место во Всесоюзной смотре-конкурсе среди молодых ученых и специалистов в области фармакологии в 1988 году.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация изложена ка 157 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, состоящего из 3-х разделов, описания методик исследований из 5-ти разделов, результатов' исследований, состоящих из 5-ти разделов, обсуждения из 5-ти разделов, выводов и списка литература. Ряд разделов диссертации включает от 2 до 4 подразделов. Список литературы содержит 24 отечественных и 115 зарубежных источника. Работа иллюстрирована 61 рисунком и 3 таблицами. .

По материалам диссертации опубликовано 13 работ.

ЬЕТОДИНА■ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проводились на неидентифицйроЕанных изолированных неронах виноградной улитки Helix pcrratia Для получения изолированных клеток применяли традиционный метод ферментативной обработки протео-т-етическими ферментами.

В исследованиях применялся метод внутриклеточной перфузии, разработанный для исследования ионной проводимости плазматических мембран нейронов моллюсков СКосткк, Крьтгталь, Пэдопличко, 19773, базирующийся на применении пластиковых пшеток для регистрации трансмембранных токов.

Для проведения экспериментов была создана система автоматизированного проведения экспериментов на базе IBM РС/ХГ-совместимого компьютера. Система представляет собой контроллер аналого-цифрового и цифро-аналогового преобразователей, устанавливаемый на сис-тем"ую пину компьютера. Проведение эксперимента осуществлялось программой, которая контролирует время подачи на мембрану серий деполяризующих импульсов, частоту оцифровки регистрируемых токов и згшись регистрация в файл.

Записаинь» ъ файле оцифрованный токи обрабатывались другой программой, вычитающей емкостные токи и нескомпенсированные токи утечки, и определявшей максимальную амплитуду тока, время активации, скорость инактивации тока, амплитуду и характерное время тска лежгиваш, протлсахщ?гс при реяслярязащщ иехвраш зги пзраае?-

рц токоз всех сер;® при Есех потенциалах записываются вместе с соотзетстзувдгд! временам:! и потенциалами в файл-таблииу результатов обработки эксперимента. Соответствуйте столбцы или строки этой. таблицы используются затем графическим редактором "CGPLOT" для лострсе.гкя графиков временной зависимости изменения токоз под действие« цоследоваЕЕгхся веществ, зольт-ашерйых характеристик тскз в разные иомекты времени, относительных изменений TOita под действием препаратов прз; разных потенциалах и других зависимостей.

В работе использоеэлись растворы следующего состава (в мМ): раствор ?ингера: КаС1 - 87, СаС12 - 7. MgC12 - 4, КС1 - 4, глюкоза - 10,- Трас-НС1 - 15 (рН- 7.55); внеклеточный раствор для регистрации кальциевых токоз: СсС 12 - 20, - 4, ?ркс-НС1 - 20 (рН -7.55); внутриклеточный перфузируюадй раствор: EGTA - i, CsCI - 50, í.'gC12 - 3, АТР-На2 - 2, Трио-Аспартаг - 70 (рН - 7.5). Исследуете вещэства, перечисляются в соответствующих разделах автореферата

Для анализа пространственного строения молекул исследуемых веществ были использованы их додели, построенные при помок?! пакета кзаятовохимичесютг программ МЗРАС, Version 3.10 методами иоле.су-ляркой неханики в параметризации Ш СЭалиидзэр, 1986] с оптимизацией координат атомов до достижения глобального киника на поверхности потенциальной энергии молекула Рассмотрение и сравнение построенных моделей осуществлялось при помощи программ PC-DISPLAY (1.0) и PCf.DDEL (88.0) из этого пакета nporpavot.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТОВ СО СТЕРЕОТИПОМ ДЕЙСТВИЯ НА СИГНАЛЬИЕ СИСТЕМЫ I+/II- )!A ТРАНСМЕМБРАННЫЯ КАЛЫЩЕШй ТОК Для исследования были отобрали М-холинолитики: aiiirani, глипни и атропин, блокаторы Ш-гнсташновых рецепторов: димедрол, суп-растин и прометазин, нейролептики - блокатори кальыодулина пропа-зин, аминазин и трифтазин, нейролептик 02-до'![дминовил блокатор га-лоперидол, противоопухолевый анкилирухщ.чй препарат омбихин, а также психомоторике стимуляторы - фснилалкилашн фзнамнч и бл'::г торы цАШ-фосфодизстерази кофеин и теофмшн. Дейетя ивуло:-.к ео'.-ди-нений сравнивалось с действием "классического" блоклторц kcw.í.u»í . • вых каналов - верапамила.

Обнаружено, что все исследованнш вещества со егерео:л:: • действия I+/II-T при внеклеточном приложении обрат-кло блокдру*'. ■ тенциалуправляекый кальциевый ток. По способности сл-л:," . калыиевкй ток на вкбраикоЯ «одели з?я се&стза юыъ ;

две подгруппы (табл. 1). В первой подгруппе отнс тгся М-холиноли-тик амизил, нейролептики: производные фенотиазина - блокаторы кальмодуллика и Б2- дофаминовый блокатор галоперидол, а тают-Ш-гистаминовые блокаторы. Они блокируют кальциевый ток в тех же концентрационных пределах, что и верапамил. График доза-аффект имеет крутую зависимость от концентрации блокаторов, соответствующую бимолекулярному связьташп или реакции более высокого порядка.

Таблица 1. ЕС50 блокирования кальциевого тока веществами со стереотипом действия на сигнальные систеш 1+/П-

верапам!^

ашзил

7+3*10

5+2*10

-5

глишш атропин

6+2*10 16+4*10

супрастин

дипразин

димедрол

10+3*10 10+3*10' 20+3*10

-5

.-5 -5

ЭЫбИХИН

>1*10

пропазин аминазин

-5

5+2*10 6+Г*10

-5

теофиллин кофеин

>1*10 >1*10'

-з

галоперидол

14+4*10

-5

фенамин

хОн *10

Максю/ льное блокирование наступает через десятки секунд -минуты после приложения ведаств(быстрее при больших концентрациях) , восстановление токов при отмывании препаратов из наружного раствора происходит несколько медленнее и не всегда до' исходного уровня, при этом блокада при низких концентрациях., как правило, полностью обратима (с учетом "гип-с1оотГ), а при высоких блокирующих концентрациях появляется и необрзтишй компонент.

Значительных изменений кинетики активации, инактивации и деактивации у неполностью заблокированного кальциевого тока при действа этих вепрств не наблюдается.

Другая подгуппа веществ со стереотипом 1ействия 1+/П- - это психомоторные стимуляторы фенамин и блокаторы цАЩ>-фосфодизстера-зы кофеин и теофиллин, а также противоопухолевый алкщшрущий агент эыбнхин, которые блокируют кальциевый ток в миллимолярых концентрациях. Зависимость блокирования от концентрации этих препаратов соответствует мономолекулярному связыванию или реакции меньшего порядка.

Наряду с умгньптэкиэи амплитуды при действг- зтих вес^стз происходят некоторые.',*:.,.мнения кинетических характеристик токоч, в ЧЗСТН0СГ7, ус. .зрение кажущейся иншстивации тока при дейетЕ л кофеина г замедление илрчтизации при действии фекагяша и зьйиху.иа.

Пр>; гтыьвке- б-скзторсв цА1Ф-фэсфоднзстеразы и (^нг&аша из внеклеточного р^сгкорг в рт'в случаев происходи?'пе только восстановление, ко вре!:егг"зе увелггчеьао амплитуды кальциевого го: а выше исходного уровня. В ыэньаей степени это было характерно и для блокатороа 1 ляьюдултаа.

Вахго огметать, что с;епень блокирования тока всеми исследо-а. лла.51 препарата,'.!:! е.- стереотипом действия 1+/П- существенно зависит от тестирувгэго потенциала. При малых коягчгграциях пепара-тов, блокируется только ток, развивающийся в ответ на сильную деполяг'гаацзяо мембраны, соответствующую максимуму вольт-амперной характеристики и вызе. При использовании больших концентраций ге-щес-.з кальциевый блокируется и при более низких потенциалах, однако слабее, чем при высоких потенциалах (рис. 1).

Аналогично действию "класси- ..Сгои" блокаторов кальциевых каналов на выбранной объекте блокирующее действие наблюдается жиь пп наружном г.'нлойгшга веизств. При вну4 риклеточном введении }.Ьхолж;олет,:1'л ауизила, нейролептика пропазина, Ж -гисташнового 1Нтагопяста супрастг :а и ингибитора цИЮ-фосфодиэстеразы теофилли-на Са-ток па б^окиргчался.

Бее рецепторы, б локаторы которых. изучались наш в действии на

Рис. 1. Блокирование тока при внеклеточной аппликации галспервдо^а. Вольт-амперные характеристики тска в контроле (1), при гнй-стрта 130 мкМ (2), 300 мкМ (3) и после отмь-вки галоглрл¿ъл^

о

20 40

кальциевые токи, в значительной мэре либо полностью еопряя^.-ш с субшмбранныш элвыг-тами сигнальных каскадов с поыощью е-белков, чувствительных д кокллшоцу токсину. Важно О^ло выяснить возможное участие в-белков в реализации описании:-; эффектов

Эксперимента с внеклеточный прклолвниеы до 6*10-8 юль/л (7 «Г/л) в течени : 30 «лн и внутренний введением 1,6*10-8 !.' коклюшного токсгаа в ходе внутриклеточного диализа пока-элк, что кальциевый ток при этой заметно не изменяется.

Оказалось также, что у клеток, инкубкрованньг* с 1,2*10-8 11 коклюшного токсина при 36 С в течении 1 часа, регистрируется таске жр кальциевые тога:, как у некнкубкрсванных. На этих клетках таю& исследовалось действие блокатора кальциевых каналов верапгмила, И-холинолитика ашгаила, Ш-гистамкновнх блокаторов димедрола и дипразина, нейролептикив - блокатора кальмэдулинс пролазила и 02-дсфаыинового блокатора галолеридол-. а также психостимулятора фенамина Предобработка коклюшным токсином не лр.дотврагрчт инги-бирующзго действия этих соединений и, возможно, даже несколько по-тенциирует ( для всех исследованных вэирств блокирование наступало при меньших, по сранению с усредненными, концентрациях, однако разница незначительно превосходит среднее отклонение).

Эти данные свидетельствует о той, что в блокировании не приникает "частие рецепторы, опосредщие передачу сигнала ка ионные каналы или внутриклеточные сигнальные система через (3-белхи, чувствительные к коклюшному токсину.

Результаты приведенной серии экспериментов показали, что столь разнороднда препараты проявляют обшцость в действии на по-текцкалулравляемый кальциевый ток. Это подтверждает концепцию о стереотипном характере действия физиологически активных вешзств в рамках каждой на сигнальных систем, управляющих клеточными функциями [Луйк и др., 1988-19911. В отношении кальциевых каналов -?ейро-нальной мембраны стереотипным является непосредственное влияние на каналы, предположительно связанное с рецепторами кальциевых антагонистов, без вовлечения внутриклеточных сигнальных систем

МОДУЛЯЦИЯ КАЛЬЦИЕВЫХ ТОКОВ НЕЙРОНОВ ЛКТИЕАТОРАШ

1КШ«ХКЮИН03ИТИДШЙ СИСТЕМЫ

Механизмы регуляции кальциевой проводимости мембраны основтак сигнальными системами остаются предметом исследований. В настоящее время известно много примеров, как активирующего, тек и ингибирую-сгго действия агентов, активкрущих полифосфотозитидный каскад, ка потешв'лгуправляеыый кальциевый ток разных сб^кгов в различных

экспериментальных услозиях. Это свидетельствует о сусрствовгнии нескольких механизм:?,, евязквгзда &-газ!онкро8ая>5е кальциевых каналов с "ктивьоэтья указанкоп еигназыюй chcïl'îs.

*£я сравнена с действием препаратов со стереотипом I+/II-, нами било 'фогед-зяо исследование влияния на поте:щйалутфазляоиый гсальциевьй ток пегестз с прогавогоэмкм стереотипом действия sa ушгверсадькке 'тагочи:'".' сигнальные системы, а кмэнно - агоиистсв пояфсфоиксситидгтого каскада форболозсго эфира, ю,мукостж4улиру»-е;н агентов, а так:.з счятезирозэЕногс з отделе тошсого органического синтез« нагего Института к. х. я. А. 3. Сорочхисгаш лэйкотркена С^ и с5!нтезиров2яного в лаборатории пептидного синтеза (ваз. к. х. н. В. 3. Gîuhii) слеоклацэтилглзщэрола.

Прокис? лтаоокекгеназиого метаболизма ерахидоковой кислоты лейгатг'сн С4 (ЛТС4) является характерным представителем атомистов полифзсфоинозигдаого каскада. Внеклеточная аппликация JÎÎC4 пр;гао-ди! л отличзкз?!«« на разных клетках эффектам, Во всех случаях ак-тивацпокпая характеристика гска сдвигается в сторону отрицательны? потенцйалов, одна«» з рядо слу'зев происходило таете увэлк.ени» амгип-ггуды тока в области максимума вольт-амперной характеристик» IP пределах СО з 40% при алплзтации 5*10-7 M ХГС4), максимальный оффёет развязался за 0.5-3 кануты. При зтом проксхг чит также замедление деактиваци" тиса при реполяризация мембраны: медленный его компонент удлиняется с 1.5 кс до 3-5 мс (при разных тестирующих потенциалах) и возрастает по амплитуде. Активированный при воздействии JTIC4 ток блокируется вераламилоы. Введение ЛГ Ч во внутрьклгточньы перз>уз;:рувдий раствор не изменяло регистрируемый ток. Вероятной причиной изме зния потенциалозазисн-ости и прог^о-а г^аетквацин кальциевого тока югат служить активация каналов другого типа, .соторые неходко были активяр-ваны незначительно.

1-Олеоил-2-яцртил-глицерол (ОАГ), широко используемый активатор потентат тзы-С аналог эндогенных диацилгяицеролов, в ряде з'-шершлентов не окзквал значительных изменений кальциевого тока Однако, в других экспериментах Оы' быс и необратимо блокировал каль—ie. Ж ток при наружной аппг'кации, причем на этих ж-' клерках его внутриклеточное введет не оказывало зг зтиого влияния.

Действие 4р-форбол-120-миристат~13а-ац€тага (РМД) на разных клетках в нааюс экспериментах было разнонаправленным. Наряду* с описанным рало [Дс,,оЕенко,Костюк, 1987j на нейронах Helix ¡xivrot/а з кат/тельным увеличением кальцие ^го тока, г.о многих эксп'-'ииеитах наблюдалось тают и некоторое пода те кие тока. Это подавление *»г.:ело вырахэгией зависимости от тестирую?!го потенциала. В ряд*--

случаев при аль-дасации РШ. значительных изменений тока не нас.ждалось, но при отиывкр агента с наружной поверхности ксьйракь: происходило увеличь нае тока.

Есеногенные иу^носгчаулирукцио агенты !-(?'-гк.,рокси) окс"п-ропил-2-М.Ы-диэтилаикноштан (KQDA) и НН4СЮ4, со наша.! данным, ув.личивают хгяж&.згическую подвижность полиьирфзядерньас лейкэци-тов, что позволяет отнести их к вел^эств&ч, " ак 'кеих ^ущим лоли-фосфоинозитидную систему.

Исследование влияния NH4CIO4 на нейрональный кальциевый ток иОказаЬо, что он дозозависиш в концентрациях 2-8 июль/л (ЕС«з -3 шоль/л) увеличивает ашлитуду тока в 1,5-5 раза и замедляет его инактивацию, причем увеличение тока л замедление инактивации происходят независимо. Ягненке тока имеет две фазы: быстрая 15-20 сек и медленная ■ - 3-5 шш. Возврат характеристик тока к исходным значениям при отмывке происходит значительно медленнее.

Действие NH4CIO4 полностью имитируется друг;::.: ксеногрцным иммуностимулятором - HODA. ЕС50 аггиваци кальциевого тога для H0DA составляет 2 м!£

Значительная активация тока под действие).: этих агонистов происходила ча всех исследованных неидентифицироважшх нейронах (п-8 для НЩ С10-1 и п-Ю для H0DA). Активированный ток блокируется ионами Сс!2+, пои отшвкз СИС12 вместе с акгавирухадими агентам! сначала происходит быстрое увеличение тока к уровни до действия Cd2+, а затеи медленное возвращение к исходному уровни токов.

Результаты настоящей серии экспериментов показывает, что аго-нисты полифосфоинозитидной сигнальной систеш способны мэдулиро-вать потенциалуправляеше кальциевые токи нейрональной мембраны. Однако величина и направленность эффектов различаются на разных клетках. Такие различия в эффектах на нервных клетках виноградной улитки проявляется, как известно, и при действии агонистов адени-латциклазной системы. Это связано, по-видимому, с наличием нескольких иеханизшв сопряжения активности сигнальных систем и функционирования кальциевых каналов в нейронах, выполняющих различные функции. Кроме того, нельзя исключить и возможность воздействия исследуемых венретв без участия полифосфоинозитидного каскада. Однако, в любом случае, можно заключить, что влияние агонистов этой сигнальной системы на нейрональный кальциевый ток ке является однонаправленным.

АНАЛИЗ СТРОЕНИЯ ЫЭЛЕКУЛ КССЛЕДУЕШХ ПРЕПАРАТОВ"

Анализ строения шлекуд исследуемых вегцзст? проводился путей

- и -

срззиекиг их моделей, построенных методам», молекулярной механики. В молекулах большинства исследованных нами соединений из числа блок-лоров кальциевых каналов, ильмодулина, м. .'лринових и 02 до-фампювьгх реи°пгоров, бдоюторов фосфодизстеразы цАМФ и противоо-пухолошгх препаратов ;.хш!о выделить обиие структурные черты, которые были ранее {ЛуЛк и др., 1583] охарактеризованы, как универсальный фармзкс£ор Д"? веществ со стереотипом дейсчлия на сигнальные систем 1+/Ц-. Тагапд признаком является ' аличие 3-х донор/го--а'щэпто.^а центров, дособяых образовывать водородные или другие-свя"1! с перенооо" заряда при ; заимодействии молекулы с рецептором. Эти донорао-ааделторныо центры леяаг в вершинах треугольника со сторонами около 2.5-3 А, 4-5 А и о-б А и обязательно разделены гидрсфоЗкой частью молекулы (рис.2). Такими центрами являх/гся кар-боиилып. 1, эфирный либо гидроксилышй атом кислорода обязательно третичный атом азота с *- .Лвктивными зарядами 0,25-0,35 от заряда электрона. В то га время, среди исследованных препаратов присутствуют и такие вещгства, в мол^сулах кггорых имеются только дЕа до-норко-акцепторных центра.

Анализ структуры большего числа препаратов из тех фармакологических групп, для которых в .наших экспериментах или ранее обнаружена способность блокировать кальщг зые токи, в ^воляе? выделить общие черты строения з каддой отдельной группе более детально. Однако препараты этих група - кальциевые антагонисты (об"чно че из

&Ч УЛР

- о

¿1

Рис.2. Рассчитанные структуры молекул: атропин (а), амизил'(Ь), верапа>.б1Л (с), нкфед^шн (с!). Составляющие предполагаемой ф?.рцзкофор центру отмечены вдфрамл 1, 2, 3.

группы 1,4-дигидропиридшои), ая^ч'психотическцй препарат - блока-.оры кальшдулма и D2 дофаюшовых рсцснтороь, и-таи:о."«яики, Н1-гистамнновы&, а1Га-адрзкоблока?орь! к шаткие- акестеглки, ;:х;еьт значительное перекрывание в спектрах фармакологи- за-юЪ актезисети, которое опгаделяется какими-то общ;»« элемента«.:;! етру».гури. Другим oorsM признаком, ".оторыя проскегскается и кодекулзх всьх препаратов из уташнутых групп, яр-ляется н л® аре.\:зт"-:ес;к.!;;г колон. отделенных от аминогруплы треж-четырьш или более атомам:?. Более-э;1<1еьггпвньл-г,1 ок^здаг-йгея те произвздкьз, г; молекулах кот'рых присутствует более чем одно ароматическое кольцо отдел-.-нноо от ама-ногруппы несколькими атсами. Так, ы'шш: отличается от1 атропина наличием второго фенильного кольца, *ио уменьшат ¿логарушие концентрации в три раза. При налоаамш пс троенных модолей >.»д51г/д г южно заметил их совьэдденж по ароматическому кольну, одному ид протсн-аздепторных центров и тре""<чк^'<у атому азоть.

Среди исследованных веществ наибольшую актп-коеть в блога.^о-вччш кальциевых канялов проявляли те- пропараты, колекула которых обладают обоим: выделенными -ризначаж.

Можно полагать, что }а»нно этики обща ¡и эломек.гачк структуры о; еделяется обящостъ действия вецеегь 1^уппы 1+/П как па кальциевые каналы, так и на другие фармакологические мишени. Хотя представители этой широкой группы сщественно различайся во всех .ро-чих отношениях: как химичесет, так и по особенностям фармакологического действия б целостном организме.

ОБСЛЩЕНИЕ

Полученные дачные показывают, .что гее исследованные прцпараты, которые можно отнести к группе I+/1.-, т.е. блокирующих передачу сигнала посредством полифс .фоиногэткой «»темы, а таю© блокирующих шпчйировгние г. ".енклатцнклазной системы, являются потенциальчыьш кальциевыми (Са) антагонистах® - они обрати ) блокируют потенциалуп: вляеыъй Са-топ нейрональноП мемб} ты. Исследованные нами вещества, которые можно отнести к активаторам полифоо-фоинозитной системы, какой-либо общность» в действий на ovtok не cüj ^аот,' что согласуется к с данными литературы о дейо.внн аго-нистов этой сигнальной системы па па-токи д-тгих об-шег^в.

Среди исследованных препаратов со стереотипом I-í /II-, в сво:о очередь, mo-iko выдели'- Ы-хojgí: г<тяк ' шзш;, нейролептик! - п, э-изЕод-^га фегюпг иша - блоклторы кадьшдуллииа D2-дофаминовый ¿лоттоу галоперядсл, а тгкхг Ш-гиемаияак.» Слокаторь*. По ело-

ссбности 3<"окирэвагь Са-ток на выбранной модели эти вещества почти не уступаю?, г в ряде случаев - превосходят веоапамил. Они сходны и по хара'геру зависимости стег. ли блокированы от концентрации (соответствуг-рй бимолекулярному связывания), и по скорости развития зффегаа. а также по отсутх i-вип изменнпй кинетических характеристик тока. Ва:.ло, что в эт .1 подгруппе наблюдается тшж,- и широкое перекрывание спгтгров фармаколопгческой активности. Структура молекул этих препаратов имеет обяие черты как рн сравнении ;:ру" с другом, /ах и с блока; рами Са-каналов.

Препараты V'группы nci омоторных стимуляторов:- те-сфнллин, кофеин и фенамин, а raras противоопухолевый препарат эм^ихиа обладают более слабой способностью блокировать Са-токи.

Ранее показано, что Олосаторы фосфодиэстеразы циклических луклеот..дов папаверин, изобутилметилксантин, амринон и у.,.ж 'ли-кат, способны при пару, лой аппликации блокировать Са-токн различных объектов. Папаверин вызывает зависимое от деполяризации инги-Оирование Са-токов, а таюг калуг еся ускорение ингистивацин. Шесте с тем, некоторые 1,4-дигидроп"оиднны влияет непосредственно на фосфодизстерз"'/ дата более эффективно, чем на ее стимуляцию кальмодулином. Его тшскз подтверждает общность в действии блокато-ров Са-каналов и фосфодизстеразы цАШ

Препараты этой подгруппы (слабо блокирующие Са-ток) имеют за-висимасть доза-эф£о;сг, соответствующую моноиолекуляриому с -языва-нию, что отличает и? от первой подгуппы с резкой зависимостью второго порядка блок: .^звания от концентрации. При действии этих препзратов утут изм-.няться и кинетические характеристики тска (скорость активации, деактивации, инактивации). Все это говорит о, возможно, яругой, по сравнению с первой подгруппой, механизме действия психомоторных сгямуляхоров и эмбихина на Са-тски.

Аналогичная показанной на.'.® для действия препаратов со стереотипом I+/II- зависимость блокирования Са-тока от тестируемо потенциала наблюдалась■ и при действии верапамила, бровинкамина и винкшдоа на нейронах улики Achatina fullea Ferrusac. Такая sai.i-симость моглт бшь обусловлена разными причинами.

Возможно,. что как сам зеропамил, являющийся блокатором открытого канала, так и другие агенты, действующие ка на тот ъь участок связыгияя анугрк канала, действует наиболее эффективно при потен-:кзлах, при которых вероятность отрытая Са-каналов максимальна. Однако переход в состояние с болызей аффинностью при деполяризации мембраны должен происходить за определенное время. В каких экспериментах разница в блокирован^'! тока при разных деполяризу тих

- 14 -

смещениях потенциала видна через 1 -2 моек.

На клетках феохромацмгомы FC12 ранее было показано, что при деполяризация мембраны чувствительность Са-каа&гоз к дигиярс-нирл-дккам повышается в 5 - 8 раз за одну ¡.»кнуту. Бя-гарозание верл;&-милом тага® усиливалось в задерганной (через ¡ягнуты) фазе?, однако увеличение чувств1 елыюсти было только а 1.9 раза. ' Ег.склрзвапке ca-TOïta L-типа Fa клетках 6НЗ ди.. .•нял3ут!1глиг',рид1г.1зи тао-вдок усиливается как в результате длительной (0.5- сек) павторккл-эйся активации тока," так и при повышения пзддераиЕаешгг пс эицкэла, причем переход в состояние с больпой ги&инлг-здх) происходит ьа несколько кинут. Таки/ образом, Ш'ГепЦгШозазксимыэ изменения сродства Са-каналов к Слокаторам дог -аточно ыедлеппы, что свидетельствует о другой природе зависимости .локирования от тестирующего потенциал^ в наша экспериментах.

Известно, что Саток ¡.;ожзт перекосится одпспрсь^кко го каналам разных типов, которые ишот не .только раонуа потекциалозави^и-ы-iTb, но и фармакологическую чувствнтелькость. Еькокопороговый ток, переносим^ по каналам "-типа, кызет иорор азстквации И максимум при более низких потенциалах, по сравнение е током через кана-ль L-nmo. Bo3î.:osa:o, что высокопороговый Са-ток нейронов вкно.ргд-ной улитки такхе обусловлен активностью -аналов разных типов, тогда предпочтительное блокирование L-псдобаых кланов будет отражаться в в большом сншйнш тока при Солее высоких потенциалах, где эти каналы вносят больший вклад в су),марь ий тг-„ В пользу какого предположения свидетельствуют и следуют;;? факты.

"Run-dovm" (постепенный спад Са-тока в ходе внутриклеточной перфузии) в напих экспериментах происходил преиму^ествек о в области больших деполяризующих смещений потенциала, ' а при деполяризации < O.i,¡в ток уменьшался незначительно. Блокирование Са-то'<са дофамином на нейронах прудовик, более выраязко при большой депол--ризации. Доля подавляемого ?ШГ-аиэдоь-: -Са-тока' нейронов: Aplysia была неизменной при деполяризации выеэ 10 мВ, щ :: меньших прении-алах блокирование г. ка ослабевало и при -20 мВ подав;., ния кз Ото.

Вышеизложенное свидетельствует в пользу того,-'что выеокопоро-говый Са-ток нейронов улитки пререиосктся по канала« разнс о типа. Кои тепт тока, имеющий порог агагаации и ь'акеммальную а.\шл»гуду при несколысо более высоких потенциалах, в Г\яылей етег. ни регулируется исследованными фармакологическими препарата.'.«!.

Тот факт, что kccj дованные з®ч~еот1 блокировали Са-ток ко при гнекле'Ю" "ой аппликации, согласуется с данными СКоствк; AKaike, 1983] о том, что на нейронах виноградной улитки' верртаадл

и другие блокаторы действуй; эффективнее при наружном приложении. В то «г время на сердечных клетках было доказано, что фенилалкила-иины проникают через дипидный бислой мембраны и изнутри достигают соответствующий рецелторный участок Са-канала. Такие представления подтверждаются исследованием первичной структуры: в а1 субъединице Са-канала скелетной шзды идентифицировано место связывания фвни-лалкнламшгов, ' расположенное в конце трансмембраннсй спирали и начале внутриклеточного хвоста аминокислотной цепи.

Противоположная зависимость эффекта от стороны прчдо.тения на мембране нейронов улитки, возможно, связана с препятствиями в доступе к месту связывания с внутриклеточной стороны, или с различной локализацией мест связывания в Са-каналах разных объектов. Возможно, существует несколько мест связывания "*я одного блокатора.

Исследованные нейролептики, мускариновые и Ш-гисташновые блока-горы по своей структуре близки к Са-антагонистам типа дифени-лалкилаьшкоз или дифенилбутилпиперидинов. Возможно, что описанные зффэкты обусловлены действием на места связывания этих лигандов и доступ к ним более эффективен с наружной стороны меьйраны. <У утс-твие блокирования при внутриклеточной введении препаратов говорит о тоы, что оно не связано с непосредственны!/ влиянием на внутриклеточные процессы, а так«? об отсутствии воздействия, связанного с изменением структурно-функциональной организации мембран.

В любом случае, полученные данные свидетельству о том, что исследованные вепестд:а блокируют высокопороговый Ь- подобный Са-ток за счет взаимодействуя с какиа-то из иест связывания блокзторов Са -каналов, структурно подобному соответств'юдиы (мускариновых, гис-ташновых, дофзшновых, кадьмодулине) рецептора«, без вовлечения каких-либо внутриклеточных или швранных сигнальных процессов.

Одна из выделенных в анализируемых молекулах группы 1+/П- и часто совпадающая черта - это тройка электроотрицательных атомов, способных образовывать водородные связи при аллостерическом взаимодействии, с регуляторньаи центрами белков - эф|<екторов.

Примечательно, в этой связи, что в месте связывания фенилал-киламинов присутствует три отрицательно заряженных аспарагиновых кислоты, которые сохраняются неизменными во всех известных последовательностях а1 суСъединицы Са-канала В месте связывания фено-тиазинов с кальмодулином такиэ отмечают область, содержащую четыре отрицательно заряженные глутаминовые кислоты, участвующие во взаимодействии с антагонистами. Карбонильные атомы кислорода этих аминокислот способны образовывать водородные связи с соответствующей тройкой атомов донорно-акцепторных центров блокирующей молекулы, в

структуре всех пг-холинорецепторов гдэлтефицнрованны консервативные аспарагкновый и тирозюювьй а!.с;нокис.ютнш остатки, у^ствуйцяе во взаимодействии с антагонистами. Для т-ходкнолитп>м)е проиимадл-нового и дафенвдолыюго типа [Holtje и др. ,19893 расчнтызая корреляции между зарядам,; рецептороа4фшных струютурпих частей и экспериментальным! значениями сродстЕа к рецептору яодтзердаьт наличие ранее постулированных трех участков связывания.

Предлагаемая гипотеза о<> учазтни трех . доиорно-акцепторных центров в действии физиологически активных гевеств со стереотипом I+/II-, несомненно, не исключает участия прочих атомов и их сочетаний в реализации эффектов, t Holt je и др., 1S37] считал*, что общий 4api.ai-xj.icp для соединений ряда верапамига н дифеюшш-зшдаша. образуй? третичный д^протонировалкый г,то« азота, ароматическая система и штрильный остаток производного верапаиилз ил;: вторая ароматическая система диф&нилалккламина ¡¡а расстоянии.

Примечательно, что фарма!сологик Ca-каналов наиболее тесно пересекается с фершкиюгией кальмодудцеа. Действ не- 2£пьмэдулнка тага» блокируется теми классами рчеюсгп, для которых обнаружена способность блокировать Саг каналы. Это нейролептики - фенотиазкаи, D2-дофаминовые, alfa -адренобхокахорн, спазмолитики, местные анестетики, разные блокаторы Са-каналов, "vinca" алкалоида и другие противовоспалительные агенты, гиста>.шно£ые блоютсри, опиоидние пептиды, антидепрессанты и другие препараты. Рожества, связывающиеся с калькодулином, содержат большую гидрофобную область, состоя-ег-то, обычно, из двух или более ароматических колец, связывающуюся ■ с гидрофобиши аминокислотами кальыодулкна, и аминогруппу, отде-' ленную от феиильпых групп четырьмя ш более атомам:;. Эти oóicie черты йрссдеживаотся не только среда разных классов анткпеихоти-ческих веществ, не и в местных анестетиках, большинстве блокаторов Са-каналов, аптигистамилных, а1Га-здрепоблою:рущйх, расслабляющих "лздкие мыпцы препаратах.

Стругаурная общность этих веществ объясняет, по-видимому, не только их взаимодействие с кальмодуяинсм, но и перекрывание прочих звдов их фармакологической активности. Тут можно отметить, что фе-готиазиновые нейролептики наряду с антидофашновой и антикалъмоду-линовой активностью проявляют тагаэ протиъогкеташшнке, местноа-нэстезирующие, спазмолитические, а-адреноблоккрувдие и lí-холинолитические свойства. Свойства местных анестетиков проявляют многие нейролептики, холинолптики, ачтэдепресеанты, антигкета-миновые, антиарритиические препараты и блокаторы Са-каналов. М-хо-линолитжи проявляет в некоторой степени способность блокировать

гисгашновие, серотониковга и а-адренорецепторы. А антигистидгао-ЕЫ9 препарата и алтидепр-эзсанты, в своя очередь, проявляют У-холи-нолитические свойства Многие Ш-гистамииовые блокаторы об.п?цикгс, к тому гл. свойствами блокаторов а-адреналинових к серотонинових рецепторов. Примгря действия лигандов а-адреналиновых, серотсчшго-вых рецепторов и местных анестетиков на Са-каналы и,' наоборот, действия Са-блокаторов на различные мишени, рассматривались в обзоре литературы.

ООззюсть в структуре и фармакологической активности всех этих веществ свидетельствует о то», что различные биохимические ксюто-ненты клеточных сигнальных систем имеет сходно организованные "вя--гываюциз участки. Дяя различных рецепторов была установлена высокая степень гомологии их первичной структуры, особенно тех их трансмэмбранных сегментов, где происходит связывание лигандов. Причем наибольшая степень гомологии наблюдается для рецепторов, опосредующих передачу сигналов одной и той ж сигнальной системой. Ранее било известно, что дафенилалкиламины, некоторое . .ругие блокаторы Са-каналов и постные анестетика, блокируют и натриевые каналы, что свидетельствует о налички в их структуре сходных связывающих участков. После выделения канальных белков и анализа их первичной структуры выяснилась высокая степень гомологии а1Гг-субгедииицц Са- и Иа-каналов. В Са-канале присутствуют и участки, гомологичные местам связывания лигандов с калъмодулином.

Ез,е раз следуем подчеркнуть, что общность в действии препаратов уохет быть использована и уже находит применение в терапии нарушений, нмешзтх многофакторное происхождение, в направленном поиске и создании новых лекарств. Так, известно об успешной применении вераламила при шизофрении вместо традиционных антидофаминэрги-ческих препаратов. В таких примерах, как правило, вещества, ко;о-рые формально относят к разным классам препаратов (блокаторы различных рецепторов, ферментов и т.п.), но применяющиеся для терапии одного заболевания, либо для которых "побочную" активность считаю? неспецифической, обнаруживают определенное сходство в строении молекул. Сходство в действии препаратов на разные »лаени имеет стереотипный характер в пределах универсальных сигнальных систем и определяется, по-видимому, сходной организацией распознающих ре-цептсрных участков различных элементов сигнальных систем.

ЕЫЭОДЫ

1. В опытах на перфузируемых изолированных нейронах улитки ИеНх РотаНа исследовано влияние физиологически активных веществ, способных модулировать активность основных клеточных сигнальных систем, на трансмембранный потенциалуправляемый кальциевый ток.

2. М-холинолитик амиаил, 02-дофаминовый блокатср галоперидол, блокаторы кальмодулина пропазин, аминазин и трифга'}лн, Щ-гистами-новые блокаторы супрастик, димедрол и дилразин обратимо блокирует потенциалуправляемый кальциевый ток нейронов виноградной улитки в тех же концентрационных пределах, что и верапамил. Блокирование этими препаратами происходит без изменения кинетики тока, со сходной скоростью и сходной зависимостью от концентрации, соответствующей бимолекулярному связыванию;

3. Психомоторные стимуляторы - фенамин и * блокаторы цАКФ -фосфодиэстегшы кофеин и теофиллин, а также противоопухолевый ал-килирующий агент эмбихин блокируют кальциевый ток в миллимолярых концентрациях. Изменение кинетики токов и другая зависимость блокирования от концентрации свидетельствуют о вовлечении в действие этих веществ иных, по сравнению с предыдущей группой, механизмов.

4. Бтокирование кальциевого тока Исследуемыми веществами со стереотипом действия 1+/П-, также как и верапамилоы, происходит при приложении к наружной, но не внутриклеточной поверхности мембраны и не опосредовано Б-белками, чувствительными к коклюшному токсину, что свидетельствует о непосредственном действии препаратов на-кальциевый канал, не опосредованном сигнальными системах«.

5. Все исследуемые препараты со стереотипом £ейстзия 1+/П-обладаш значительной потенциалозависидастью блокирования - усиле • нкем степени кнгибирования при больших тестирующих потенциалах, 'что свидетельствует о предпочтительном .блокировании высскопорого-вых Ь-подобных кальциевых качалог.

6. Исследование агонистов полифосфошознтидной сигнальной системы - форбодового эфира, иммуностимулирующих агентов, а такое синтезированных в Институте лейкотркена С4 и одеоилацетилглицерола

• показало, что они способны модулировать кальциевые токи нейроиаль-- ной мембраны, однако величина и направленность эффектов этих веществ различны и варьируют на разных клетках.

7. В молекулах исследуемых веществ, обладающих общностью как в действии на потенциал управляемый кальциевый ток, так-, и в действии на клеточные сигнальные с .чечены со стереотипом 1+/1Ь, прослеживаются ебщиэ элементы структуры. &го подтверждает современную концепцию о идличт* универсальных фармакофорных признаков в широких классах лекарственных веществ и общих чертах строения их фармакологических мишеней на различных биосубстратах.

МАТЕРИАЛЫ ДИССЕРТАЦИИ СГОВЛИНОВАНЫ В СЛг;{УХ5ЦйХ ■

1. Дегтярь а Е., Цреиаракая it В., Рыльцеаа Л. 2., Скрыма Р. Н. Связь метаболитов ареа.идокоБС1 кислота с фуикционмрогаш'.'Ч! кальциевых канатов нейроналышЯ Шираки // I Есесокх'.иая конференция по нейрона/кам. Тезисы докладов. Кксв, юьс-, с. 21-22

2. Скрыма ?. It, Дегтярь В. Е., Дуйк А. Ii. и др. Плклнк-v блока'-ога лкпсюксигеназы BW 755С на функционеров." чке структур, г.с-чиваюзих Ca-завис км».- процессы // Нейрофизиология, IQäV, Т. 19, N б, с. 841 - 845

3. Калашникова Л. Е. , Дегтярь В. Е., Скрыма Р. Н. Механизм rsfav-вия различных высокотоксичных веществ в пределах фссфоиноги-тидкой системы ¿тсричкых кессендмэроз // Сб.: "Биохимия - медицине", Ленинград, ".Чедицяна", 1988, с. 92 - 93

4. Kalashnikova L.E., Degtyar У. Е., Skryra R. .1., Luik A. I. Regulation of nerve cell Ca-channels by the ir.termartlato products of phos. 'ninos it ides exchango -V Abstracts of -lt.h Intern'tional Congress of cell blolctty. Canada, ibiitreal, 1938, p. 264.

5. Скрыма P. H. , Дегтярь В. E., Луйк А. И. и др. Особенности рлня-ния лейкотриена С4 и блокатора его биосинтеза BV 755С ¡¡а сократительную способность гладких шиц и функционировани:.-пстенциалозависюфх кальциевых каналов нервной глетка // Нейрофизиология, 1939, 21, М 1, с. 24 - 31

6. Скрыма Р. Ii, Дегтярь В. Е.,Кухерь В.П. к др. Действие лс-йкот-риена LTC4 на'кальциевые KaHa.it; соматической ме мбраны к -рз-ной клетки и тонус гладкомызечннх органов // Нейрофизиология , 1989, 21, N 2 с. 252 - ?.Ы

7. Дегтярь R Е., Скрш* Р. IL , Калашникова Л К. Нейрофизиологическое изучение клеточных механизмов регуляции погк1ое.£оино-зитидной системы вторичных моссйнджеров одеоилацэтичгдицеро-лом, лейкотриенами и их ингибиторами // "Актуальные ьопроеы клеточной биологии: факторы роста, дЖерс-кцирос;"!, глокл-чественной трансформации", Ленинград, ".Наука", 1'..50, с. 37

8. Дегтярь ЕЕ., Кошель it И. Модуляция сальцпевых токе;-; игроков активатора1« Яссфоиюзитной систем // III йг конференцйя по нейронаукам. Т( аисы докладов. К;:эз, изо, <->. 14 -15 '

■so-

il. Дегткрь К. L\ , Кондракова Л Е Влияние перхлората а:,а!ония на ка1ищк;:Е!лз тою! р. нейронах!? подвиялость лейкоцитов // Ней-ро&шологий, 1901, 2-3, Wo S, о. 842 - 245

10. Легтярь Б.Е., Пода Г. п., Скрыма Р. Е, Дуйк А.И. Элемента общности блок&торов кальциевых каналов и ü-холинолстиков // Доведи AH OOt'P, 1391, 313, N 1, о. 221 - 223.

11. Dogtyar Y.Е., Kukhar Y.F. , Lull: A. I., Skryra R.1). Stereotypy •oleœnts of, xenobiotics action en calcium current // Abstracts of 4th U3SR--FRG Symposium "Receptors, and icn channels", bfcscov, 1991, p.Go.

12. Dcetyar Y.E., Skryraa R.N. Calcium channels inhibition by various concpounds affecting, cell signalling systess // Atotr&ots of 1st World Congress of Cellular and Molecular BiolotV, Paris, 1-V September 1391. No T. 2.13, p. 177

13. Begtynr V. E., Luik A. I. Сошглп features of calcium channel blockers // Abstracts of 1st V'crld Congress ci' Cellular and î.tolec. Biolory, Paris, 1-7 Soptcnbor. 1931, Mo 7.2.12, p. 176

БФ Подписано к печати3Û.01.92. Объем- г.л.

Формат 60X84Vn. •• Заказ . Тираж ШО

Типография ВА ПВО СВ.