Термодинамический и структурный анализ формирования и функциональности пищевых биополимерных наносистем для доставки липофильных биологически активных веществ тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.04 ВАК РФ

На правах рукописи

Григорович Надежда Викторовна

ТЕРМОДИНАМИЧЕСКИЙ И СТРУКТУРНЫЙ АНАЛИЗ ФОРМИРОВАНИЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНОСТИ ПИЩЕВЫХ БИОПОЛИМЕРНЫХ НАНОСИСТЕМ ДЛЯ ДОСТАВКИ ЛИПОФИЛЬНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

02.00.04 - Физическая химия

Автореферат

на соискание учёной степени кандидата химических наук

- 8 НОЯ 2012

Москва 2012

005054868

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте биохимической физики им. Н. М. Эмануэля Российской академии наук

Научный руководитель:

доктор химических наук Мария Германовна Семёнова

Официальные оппоненты:

доктор химических наук Александр Сергеевич Татиколов

доктор химических наук, профессор Игорь Александрович Ямсков

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский химико-технологический университет имени Д. И. Менделеева»

Защита диссертации состоится 14 ноября 2012 г. в 13 часов 30 минут на заседании Диссертационного совета Д 002.039.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте биохимической физики им. Н. М. Эмануэля по адресу: 119334, Москва, ул. Косыгина, д. 4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института химической физики им. Н. Н. Семёнова Российской академии наук

Автореферат разослан « ОУ» 2012 года.

Учёный секретарь

Диссертационного совета Д 002.039.01 Кандидат химических наук

Л. И. Мазалецкая

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. В соответствии с требованиями сегодняшнего дня, основанными на данных нутрициологии и доказательной медицины, одним из приоритетных направлений развития в области здорового питания населения до 2020 года, принятых Всемирной ассамблеей здравоохранения в 2004 году («Глобальная стратегия по питанию, физической активности и здоровью») и распоряжением Правительства Российской Федерации от 25 октября 2010 г. № 1873-р, считается направление, связанное с «развитием производства пищевых продуктов, обогащенных незаменимыми микронутриентами, специализированных продуктов детского питания, продуктов функционального назначения, диетических (лечебных и профилактических) пищевых продуктов и биологически активных добавок к пище». Однако, эффективное обогащение продуктов питания незаменимыми биологически активными веществами (нутрицевтиками) не является просто решаемой, на первый взгляд, задачей, поскольку за исключением ряда водорастворимых витаминов и полифенолов, большинство из них являются липофильными соединениями, трудно растворимыми в водной среде, а значит и в биологических жидкостях организма человека, что приводит к их низкой биодоступности, а также к недостаточной мембранной проникающей способности и низкой эффективности in vivo. Кроме того, это также обуславливает сложности введения таких липофильных соединений в пищевые системы, особенно обезжиренные или с низким содержанием жира, пользующиеся постоянно растущим спросом в настоящее время. Наряду с этим, большинство нутрицевтиков имеют ненасыщенные углеродные связи в составе молекул, что требует их защиты от окисления кислородом воздуха, а также от деградации в экстремальных условиях окружающей среды при их хранении, переработке и усвоении в желудочно-кишечном тракте человека (высокая температура, ультрафиолетовое излучение, рН, ионная сила, специфические ионы и др.). Таким образом, актуальной задачей, стоящей перед фундаментальной физической химией, является поиск путей и способов контролируемого и эффективного обогащения пищевых продуктов биодоступными незаменимыми липофильными биологически активными веществами (ЛБАВ).

К моменту начала работы над диссертацией основное число исследований в области эффективной доставки биологически активных веществ с помощью полимеров было посвящено разработке макро-, микро- и нано-систем доставки для лекарственных веществ. При этом, главным образом, использовались синтетические полимеры, такие, как, например, полиэтиленгликоль, полиметилметакрилат. стеароил-поли-Ы-винилпирролидон, поливиниловый спирт, поли-£-капролактон и др. Успехи в создании таких систем создали хорошую научную базу для разработки подобных систем доставки для пищевой

промышленности. Так, начиная с 2004 года, наблюдался практически экспоненциальный рост активности научных исследований в области разработки систем доставки нутрицевтиков. При этом, одним из главных требований к таким системам доставки является то, что они могут быть созданы только из компонентов, разрешённых к использованию в пищевой промышленности, т.е. в случае полимерных компонентов - это могут быть только пищевые биополимеры, а именно животные и растительные белки и полисахариды.

Таким образом, перед нами стояла актуальная задача разработки и исследования физико-химических свойств нано-размерных систем доставки на основе пищевых биополимеров для ЛБАВ, относящихся к классу нутрицевтиков. При этом, мы пытались подойти к пониманию основных взаимосвязей между структурными и термодинамическими параметрами систем доставки и их функциональностью как в пищевой системе, так и в модельных условиях переваривания в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ) человека in vitro.

Цель и задачи работы, основные объекты исследования Целью настоящего диссертационного исследования являлась разработка и изучение физико-химических свойств многофункциональных наноконтейнеров на основе казеината натрия (натриевой формы основного белка молока) и ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами (продуктами ферментативного гидролиза картофельного крахмала с разным декстрозным эквивалентом (ДЭ)) для хранения и контролируемой доставки через обезжиренные пищевые системы такого липофильного нутрицевтика, как фосфатидилхолин сои, в состав молекул которого входят незаменимые жирные кислоты со-3 и со-6. Такие биополимерные наноконтейнеры, сохраняя высокой уровень функциональности, присущей, как белку, так и мальтодекстринам, должны защитить полиненасыщенный фосфатидилхолин от окисления кислородом воздуха, а также должны обеспечить высокий уровень биодоступности фосфолипида в организме человека. Для достижения поставленной цели мы планировали решение следующих конкретных задач:

1. Получить комплексы полиненасыщенного фосфатидилхолина сои с казеинатом натрия и исследовать их молекулярную структуру, термодинамические и функциональные свойства в водной среде.

2. Получить ковалентные коньюгаты казеината натрия с мальтодекстринами, имеющими различный декстрозный эквивалент (ДЭ = 2 и 10), и исследовать их молекулярную структуру, термодинамические и функциональные свойства в водной среде. Изучить зависимость этих свойств как от декстрозного эквивалента мальтодекстринов, так и от их соотношения с белком в коньюгатах.

3. Охарактеризовать молекулярную структуру и термодинамические свойства супрамолекулярных комплексов полиненасыщенного фосфатидилхолина сои с ковалентными коньюгатами казеината натрия и мальтодекстринов (пункт 2) в водной среде. Изучить зависимость этих свойств как от декстрозного эквивалента мальтодекстринов, так и от их соотношения с белком в коньюгатах.

4. Охарактеризовать структурное состояние фосфатидилхолина сои в составе супрамолекулярных комплексов как с казеинатом натрия, так и с ковалентными коньюгатами казеината натрия с мальтодекстринами по данным дифференциальной сканирующей калориметрии на модельных липосомах дипальмитоил фосфатидилхолина.

5. Провести поиск оптимальных составов и структур изучаемых супрамолекулярных комплексов, которые могут обеспечить эффективную защиту полиненасыщенного фосфатидилхолина сои от окисления кислородом воздуха.

6. Провести поиск оптимальных составов и структур изучаемых супрамолекулярных комплексов, которые могут обеспечить эффективную биодоступность полиненасыщенного фосфатидилхолина сои в модельных условиях их переваривания в ЖКТ человека in vitro.

7. Охарактеризовать традиционные, присущие биополимерам, функциональные свойства изучаемых супрамолекулярных комплексов, а именно:

- растворимость в водной среде в широком диапазоне рН, в том числе и в области изоэлектрической точки казеината натрия (рН 4.6);

- пенообразующую способность. Научная новизна работы

1. Впервые, удалось установить прямые корреляции между структурными параметрами наночастиц супрамолекулярных комплексов казеината натрия с липосомами фосфатидилхолина сои (ФТДХ) и их способностью защищать ФТДХ от окисления.

2. Впервые, удалось установить полноту связывания и высвобождения ФТДХ из супрамолекулярных комплексных частиц с казеинатом натрия в процессе их ферментативного гидролиза в условиях, моделирующих in vitro переваривание в ЖКТ человека.

3. Впервые, установлено влияние декстрозного эквивалента (степени полимеризации) мальтодекстринов на структурные и термодинамические параметры их ковалентных коньюгатов с казеинатом натрия в водной среде

4. Впервые, установлено влияние декстрозного эквивалента (степени полимеризации) мальтодекстринов на полноту включения липосом ФТДХ в супрамолекулярные комплексы с ковалентными коньюгатами (мальтодекстрин + казеинат натрия), а также на структурные и термодинамические параметры этих комплексов и на их функциональность (растворимость и пенообразующую способность).

5. Используя термодинамический подход, нам впервые удалось подойти к пониманию состояния липосом ФТДХ в супрамолекулярных комплексах с казеинатом натрия и с ковалентными коньюгатами (мальтодекстрин + казеинат натрия) на примере модельной системы с липосомами дипальмитоил фосфатидилхолина.

6. Впервые, удалось установить прямые корреляции между структурными параметрами наночастиц супрамолекулярных комплексов ковалентных коньюгатов (мальтодекстрин + казеинат натрия) с липосомами ФТДХ и их способностью защищать полиненасыщенный ФТДХ от окисления.

7. Впервые, удалось установить прямые корреляции между структурными и термодинамическими параметрами наночастиц супрамолекулярных комплексов ковалентных коньюгатов (мальтодекстрин + казеинат натрия) с липосомами ФТДХ и полнотой высвобождения ФТДХ из комплексных частиц в процессе их ферментативного гидролиза в условиях, моделирующих in vitro переваривание в ЖКТ человека. Практическая значимость работы. В первую очередь, проведённое систематическое исследование показало перспективность использования казеината натрия и ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами как наноразмерных супамолекулярных систем доставки для полиненасыщенного ФТДХ, защищающих его от окисления и контролирующих его высвобождение в ЖКТ человека in vitro. Высокая, присущая биополимерам, традиционная функциональность (растворимость и пенообразующая способность) таких систем доставки дают также дополнительную возможность разработки на их основе нового поколения природных пенообразователей, эмульгаторов и стабилизаторов для систем пищевого и фармацевтического назначения. Кроме того, найденные в работе корреляции между функциональностью разработанных наносистем доставки и их структурными и термодинамическими параметрами открывают возможности предсказания, регулирования и молекулярного дизайна широкого круга систем доставки для липофильных биологически активных веществ в практике современных биотехнологических исследований.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Ключевые структурные факторы, контролирующие защиту полиненасыщенного ФТДХ от окисления в его супрамолекулярных комплексах с казеинатом натрия.

2. Термодинамические и структурные параметры супрамолекулярных комплексов казеината натрия с ФТДХ, определяющие их пенообразующую способность.

3. Термодинамические и структурные параметры, определяющие традиционную, присущую биополимерам, (растворимость, пенообразующую способность) и новую (формирование супрамолекулярных комплексов с ФТДХ, защита ФТДХ от окисления,

контролируемое высвобождение ФТДХ в желудочно-кишечном тракте человека in vitro) функциональность ковалентных коньюгатов мальтодекстрина с казеинатом натрия.

4. Влияние декстрозного эквивалента мальтодекстринов и их молярного соотношения с белком в ковалентных коньюгатах мальтодекстринов с казеинатом натрия на их традиционную, присущую биополимерам, и новую функциональность.

5. Термодинамическая оценка состояния липосом ФТДХ в супрамолекулярных комплексах с казеинатом натрия и ковалентными коньюгатами мальтодекстринов с казеинатом натрия на примере модельной системы с липосомами дипальмитоил фосфатидилхолина.

Личный вклад автора. Автором изучены труды отечественных и зарубежных учёных в области данного исследования, выполнен основной объём исследований, проведён анализ полученных данных, их теоретическое обобщение и формулировка выводов. Структура и объем работы Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста, содержит 37 рисунков, 14 таблиц и состоит из введения, 4 глав литературного обзора, 2 глав экспериментальной части, 3 глав обсуждения результатов, выводов, а также списка литературы (307 ссылок).

Апробация работы Материалы диссертации были представлены на международных конференциях: ИБХФ РАН - ВУЗы, «Биохимическая физика» (Москва 2009-2011гг.), «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2009г. и 2011г.), «Delivery and functionality in complex food systems» (Нидерланды 2009г., Канада 2011г.), «Food Colloids» (Испания 2010г., Дания 2012г.), XXIII Плехановские чтения (Москва 2010г.), «BerIinFOOD2010 PhD conference» (Германия 2010г.), «Биоантиоксидант» (Москва 2010г.), «Производство и потребление пищевых лецитинов: ожидания следующего десятилетия» (Санкт-Петербург, 2010г.), «Модели инновационного развития фармацевтической и медицинской промышленности на базе интеграции университетской науки и индустрии» (Долгопрудный 2011г.), «Lecithin Short Course» (Бельгия 2010г.), «ILPS Phospholipid Congress» (Нидерланды 2011г.), «Экологическая, продовольственная, и медицинская безопасность человечества» (Москва 2011г.), «Питание и здоровье» (Москва 2009г. и 2011г.), «Phospholipids in Pharmaceutical Research» (Германия 2011г.), «Food structures, digestion and health» (Новая Зеландия 2012г.), XIX конференция по крахмалу (Москва, 2012г.)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 36 печатных работ, в том числе 3 статьи (1 статья опубликована в журнале, входящем в перечень ВАК, 2 статьи — в зарубежных изданиях, включённых в систему цитирования Web of Science (Sciences Citation Index Expanded)), 6 статей в книгах-сборниках докладов международных конференций с шифром ISBN, а также тезисы 11 устных и 16 стендовых докладов на международных конференциях.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ

1. Структурные и термодинамические особенности комплексов казенната натрия с полнненасыщенным ФТДХ, определяющие их многофункциональность, как наноконтейнеров для доставки ФТДХ и как структурообразующих н стабилизирующих агентов для коллоидных систем.

В первую очередь, необходимо отметить найденный высокий уровень (> 90%) связывания липосом ФТДХ = 50 60 нм) в составе супрамолекулярных наноразмерных < 200 нм) комплексов с казеинатом натрия. При этом, данные дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), полученные на модельной системе с дипальмитоил фосфатидилхолином, свидетельствовали о сохранении фазового состояния бислоя ФТДХ в таких комплексах (Рис. 1). Таблица 1 представляет сравнение между структурными и термодинамическими параметрами частиц супрамолекулярных комплексов (казеинат натрия + ФТДХ) и чистого белка, которые были определены комбинацией методов статического и динамического лазерного светорассеяния. Одной из наиболее важных особенностей изменения параметров казеината натрия в результате его взаимодействия с ФТДХ (10"3М) является значительное сжатие исходных частиц белка, которое проявляется в существенно более низких значениях радиуса инерции комплексных частиц при их практически неизменной молярной массе по сравнению с чистым белком (Табл. 1). При этом, когда одновременно наблюдается возрастание молярной массы комплексных частиц, такой эффект сжатия проявляется даже более ярко, как, например, при рН 5.5 и относительно высокой ионной силе (0.1 М). Как следствие наблюдаемого сжатия супрамолекулярные частицы комплексов обладают значительно более высокой плотностью по сравнению с чисто белковыми частицами. Таким образом, на основании полученных данных можно предположить, что амфифильные молекулы ФТДХ действуют как эффективные внутри- и межмолекулярные сшивающие агенты по отношению к частицам казеината натрия во всём изученном диапазоне рН (7.0, 6.0, 5.5) и ионной силы (0.001М, 0.01М. 0.1М).

Ср, мДж / г град

20 25 30 35 40 45 50 55 Температура, С

Рисунок 1. Термограммы фазового перехода 1,2-дипальмитоил-хп-глицеро-З-фосфатщщлхолина (0.5 х 10"3М), сверху вниз: чистый ДФТДХ, комплекс ДФТДХ с казеинатом натрия, комплекс ДФТДХ с ковалентным коньюгатом Б + (Д„= МД : Б = 2), комплекс ДФТДХ с ковалентным коньюгатом Б + МйЮ (Д„ = 2) в водной среде (Сб=0.5% вес/объём рН 7.0, ионная сила 0.001М)

Таблица 1. Структурные и термодинамические параметры частиц чистого казеината натрия и супрамолекулярных комплексов

Условия Супрамолекулярный комплекс

эксперимента Казеинат натрия казеинат натрия + ФТДХ)

рН Ионная м„х 10 "5 ЯЕ (нм) 1*1, (нм) Р= с1 А2* М„ хЮ"5 (нм) 1*1. (нм) Р = с/ Л2*

сила (Да) 1*0/1*1. (кг/м3) (м3 моль"1) (Да) 1*о/1*1. (кг/м3) (м3 моль"')

(М)

0.001 179 214 144 1.5 0.72 - 17 184 187 122 1.5 1.11 -0.7

7.0 0.01 170 222 124 1.8 0.62 8 164 190 88 2.1 0.95 13

0.1 122 137 111 1.2 1.87 -24 135 157 113 1.4 1.39 - 10

0.001 228 221 127 1.7 0.83 31 224 144 120 1.2 2.96 2

6.0 0.01 274 208 114 1.8 1.20 29 140 152 107 1.4 1.59 -27

0.1 198 189 116 1.6 1.17 -6 225 161 94 1.7 2.14 23

0.001 235 219 121 1.8 0.89 27 216 150 44 3.4 2.56 27

5.5 0.01 195 206 107 1.9 0.88 12 177 184 93 2.0 1.13 8

0.1 241 162 94 1.7 2.23 58 497 108 48 2.3 15.60 212

Рисунок 2.

Влияние плотности частиц, с1, комплексов казеината натрия с ФТДХ (10'3М) на уровень окисления ФТДХ в условиях ускоренного окисления (Си2+ К)"5 М; 70"С, Зч). Формирование комплексов проводили при 40 "С, 1 ч. Условия экспериментов (рН, ионная сила) даны в Табл. 1. Нумерация образцов приведена в соответствии с возрастанием с1.

% окисления

1 2 3 4 5 6 7 8 9

ша (мг/мл) 0,95 1,11 1,13 1,39 1,59 2,14 2,56 2,96 15,6

0% окисления 33,8 2,4 43,5 25,2 57,3 0 0 0 0

Рисунок 3.

Зависимость уровня окисления (А) ФТДХ от степени ассоциации, км», (•), молекул белка в супрамолекулярном комплексе. Нумерация образцов соответствует, указанной в подписи к Рис. 2.

Номер образца комплекса

Кроме этого, важно отметить, что архитектура случайного клубка (1 < р < 2), присущая частицам казеината натрия, сохраняется для супрамолекулярных комплексных частиц во всём диапазоне изученных рН и ионных сил. В свою очередь, в случае как чисто белковых, так и комплексных частиц, относительная гидрофильность/ гидрофобность их поверхности может быть охарактеризована величиной моляльного второго вириального коэффициента, А2, который характеризует термодинамическое сродство полимерных частиц к растворителю (водной среде в нашем случае), и который был измерен методом статического лазерного светорассеяния (Табл. 1). Как более отрицательные, так и менее положительные величины А2, полученные для комплексных частиц, по сравнению с величинами Л2', характерными для чисто белковых частиц в каждом специфическом случае (Табл. 1), обычно характеризуют более гидрофобную поверхность комплексных частиц по сравнению с белковыми частицами, и наоборот. При этом, такие структурные особенности супрамолекулярных комплексных частиц, как степень ассоциации в них белковых молекул, их архитектура и размер имели определяющее влияние на найденные величины А2. Таким образом, используя полученные структурные и термодинамические параметры супрамолекулярных комплексных частиц (Табл. 1), мы пытались выяснить основные взаимосвязи между этими параметрами и функциональностью комплексных частиц, как белковых наноконтейнеров для доставки полиненасыщенного ФТДХ и как стабилизаторов коллоидных систем, в частности пен.

1.1. Защита ФТДХ от окисления. Так, во-первых, сопоставление данных по защите ФТДХ от окисления со структурными особенностями его супрамолекулярных комплексных частиц с казеинатом натрия позволяет выделить ключевые структурные факторы, которые контролируют окисление полиненасыщенного фосфолипида. В первую очередь, это плотность наночастиц сформировавшихся комплексов, с/, которая рассчитывалась по следующему уравнению: с! = (М„/А'Л)/ V , где Л/и - средневесовая молярная масса, М„ , Л^ - число Авогадро, К= 4/371 Яв - радиус инерции.

Из приведённой на Рис. 2 диаграммы видно, что при плотности частиц, превышающей величину 2 мг/см3, они практически полностью защищают полиненасыщенный ФТДХ от окисления в изученных условиях. Из этих же данных следует, что при плотности супрамолекулярных комплексных частиц меньшей 2 мг/мл в качестве второго структурного фактора можно выделить степень ассоциации белка в супрамолекулярном комплексе с ФТДХ. Так, из Рис. 3 видно, что уровень окисления ФТДХ тем меньше, чем

г- 1 _ ■ , комплекс # ■ / беток

выше степень ассоциации белка в комплексе, кш — м„ / м»

1.2. Высвобождение ФТДХ в ЖКТ. Важным требованием к системе доставки является ее способность к контролируемому высвобождению инкапсулированного ЛБАВ в нужных количествах в определенном отделе ЖКТ в ответ на определённые изменения условий

Рот а-амшша, рН 7.0 2 мин

Желудок

Тонкий кишечник ¡¡¡Г' * пепсин,

трипсин, / РН2°

а-химотрипсин, > 2 часа

а-амилаза, . ,, '

рН 8.0 ■

6 часов t

Рисунок 4.

Экспериментальные условия моделирования переваривания супрамолекулярных

комплексов биополимеров с ФТДХ в желудочно-кишечном тракте человека in vitro. Соотношение субстрат фермент поддерживалось постоянным и равным 1000 : 1.

окружающей среды. Поэтому, для оценки высвобождения ФТДХ из его супрамолекулярных комплексов с белком мы моделировали процесс переваривания таких комплексов в организме человека in vitro. Для этого мы последовательно воздействовали на сформированные комплексы основными ферментами ЖКТ, которые могли бы расщепить белковую оболочку комплекса при определённых условиях (Рис. 4). При этом, в качестве примера приведём результаты, полученные для комплексных частиц, сформированных при рН 7.0 и I = 0.001М: количество свободного ФТДХ до начала гидролиза составило 8.4%, и практически всё количество связанного (88.7%) ФТДХ высвободилось на стадии переваривания в модельной среде желудка под действием пепсина (Рис. 14).

1.3. Пенообразующая способность. Кроме этого, было важно, чтобы сформированные супрамолекулярные комплексы казеината натрия с ФТДХ не теряли бы высокой структурообразующей способности, присущей этому белку, и в частности, его пенообразующей способности. Действительно, в диссертационной работе было установлено, что казеинат натрия и ФТДХ. объединённые в супрамолекулярный комплекс, проявляют синергетические свойства и способны при механическом взбивании давать более стабильные пены, которые характеризуются большим временем полураспада, t]/2, по сравнению с чисто белковыми пенами (Рис. 5, 6). Здесь важно отметить, что чистый ФТДХ совсем не образует стабильной пены при выбранной концентрации (10"3 М). При этом сопоставление данных по стабильности пен во времени с молекулярными и термодинамическими параметрами наночастиц комплексов в объёме и на границе раздела

Рисунок 5.

Зависимость коэффициента hul = t 1/2 Б + фтдх/ t ,/2 Е увеличения времени полураспада пен стабилизированных супрамолекулярными

комплексами казеината натрия с ФТДХ относительно чисто белковых пен, от величины второго вириального коэффициента частиц супрамолекулярных комплексов. (Сб = 1% вес/объём, С фтдх = 10'JM. условия экспериментов, отвечающих определённой величине Аг , приведены в Таблице 1).

200 /•г-!«

фаз воздух-вода позволило установить структурные и термодинамические факторы, определяющие стабильность пен во времени (Рис. 5,6). Так зависимость изменения времени полураспада пен от величины Л2 показывает (Рис. 5), что существует оптимум в гидрофильно-гидрофобном балансе свойств поверхности образующихся комплексных частиц, который способствует образованию наиболее стабильной пены. Из Рис. 5 видно, что при относительно высокой гидрофобности поверхности комплексных частиц, о чём свидетельствует наиболее отрицательная величина Л2 , наблюдается, по-видимому, также возрастание сил притяжения между гидрофобными адсорбционными слоями, что способствует быстрой коалесценции пузырьков воздуха и уменьшает время полураспада пены. В то же время, рост относительной гидрофильности поверхности комплексных частиц (положительные величины Л2') не только препятствует адсорбции комплексов на границе раздела фаз и уменьшает время жизни пен, но и создаёт благоприятные условия для удерживания воды в пространстве между пузырьками воздуха, что также может способствовать стабильности пены.

Рассмотрение, в дополнение к этому, зависимости коэффициента увеличения времени полураспада пен, Ьш, от величин таких структурных параметров супрамолекулярных комплексных частиц, как их плотности, с1, и архитектуры, р, (Рис. 6) даёт основание сделать вывод, что хотя термодинамический фактор (величина Л2 ), по -видимому оказывается доминирующим в определении стабильности пен, но такие структурные особенности, как меньшая плотность комплексных частиц и их более компактная архитектура, также могут способствовать формированию более стабильной пены за счёт влияния на структуру и реологические параметры адсорбционных слоев на пузырьках воздуха в пене.

Рисунок 6.

Зависимость коэффициента, Ьт = / ¡/2 Б + фтдх/ I 1/2Б > увеличения времени полураспада пен, стабилизированных супрамолекулярными комплексами казеината натрия с ФТДХ относительно чисто белковых пен, от величин второго вириального коэффициента, плотности, а!, и архитектуры, р, частиц супрамолекулярных комплексов. (Сб = 1% вес/объем, С фтдх = 10°М, условия экспериментов, отвечающих определённым величинам Л2 ,с!ирприведены в Табл. 1).

2. Структурные м термодинамические особенности ковалентных копьюгатов казеината натрия с мальтодекстринами, лежащие в основе их традиционной бнополнмерноп функциональности.

Перед началом измерения структурных и термодинамических параметров приготовленных ковалентных коньюгатов, а также изучения их функциональных свойств, была проведена количественная оценка числа молекул мальтодекстринов, связавшихся ковалентно с индивидуальной усреднённой молекулой казеинов (24000 Да), составляющих наночастицу казеината натрия. Для этого использовали количественную оценку потери свободных групп лизина в белке (Таблица 2). Из таблицы 2 видно, что количество молекул мальтодекстринов, ковалентно присоединившихся к индивидуальным молекулам казеина закономерно растёт с возрастанием весового, Rw, или молярного отношения, R„, МД : Б. Однако, при этом всё большее число молекул мальтодекстринов остаётся несвязанными с белком, что по-видимому можно объяснить пространственными затруднениями, вызванными уже присоединившимися к молекулам казеинов молекулами мальтодекстринов. В пользу последнего предположения также свидетельствует большее число молекул более низкомолекулярного мальтодекстрина MD10 (10 глюкозных остатков), присоединившихся к индивидуальной усреднённой молекуле казеина, по сравнению с более длинноцепочечным мальтодекстрином SA2 (50 глюкозных остатков).

Таблица 2. Расчёт количества молекул мальтодекстринов, ковалентно связавшихся с индивидуальной усреднённой, по количеству аминокислотных остатков лизина, молекулой

% связанных аминокислотных остатков лизина R *> Число молекул мальтодекстрина, связавшихся с усреднённой молекулой казеина Число несвязавшихся молекул мальтодекстрина

Коньюгаты казеината натрия с мальтодекстрином SA2

0.4 6.89 1.0 1.0 0

1 12.77 2.6 1.8 0.8

2 14.96 5.1 2.1 3.0

5 17.92 12.8 2.5 10.3

Коньюгаты казеината натрия с мальтодекстрином MD10

0.4 24.92 5.1 3.4 1.7

1 37.38 12.8 5.2 7.6

2 47.60 25.5 6.5 19

5 61.34 64 8.5 55.5

индивидуальных молекул мальтодекстринов и индивидуальной усреднённой молекулы казеинов (24000 Да), включённых в наночастицу казеината натрия.

Таблица 3. Структурные и термодинамические параметры ковалентных коньюгатов казеината натрия (1% вес/об) с мальтодекстринами в водной среде (рН 7.0, ионная сила 0.001М), полученные по данным статического и динамического лазерного светорассеяния.

К, Эксперимент Расчёт Да я,„ Л2*10=, Р = с1*10\ 1/[Л]*Ю\

Да АС*/«1Да нм нм см3 моль г"2 г мл"' г мл"'

0 0 17.9 17.9 214 144 -2.7 1.5 0.7 69

казеинат натрия + мальтодекстрин 5Л2

0.4 1.0 39.8 24.6 259 123 2.7 2.1 0.9 40

1 2.6 24.6 25.5 243 133 1.7 1.8 0.7 68

2 5.1 15.6 19.5 219 135 1.1 1.6 1.15 73

5 12.8 7.3 11.5 126 62 -60.0 2.0 0.2 63

казеинат натрия + мальтодекстрин МОЮ

0.4 5.1 7.3 20.3 224 146 0.6 1.5 0.3 39

2 25.5 14.6 13.3 246 172 1.2 1.4 0.4 99

5 64 4.4 8.2 188 145 0.3 1.3 0.3 66

В свою очередь, в таблице 3 представлены измеренные в водной среде структурные и термодинамические параметры ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами, сформировавшихся при различном весовом (Л„)/ молярном (Ят) отношении мальтодекстринов к белку в их прогреваемых смесях. Кроме того в таблице представлены расчётные значения Д/„, полученные на основании данных о количестве молекул мальтодекстринов, ковалентно присоединившихся к индивидуальным усреднённым молекулам казеинов, составляющих наночастицу казеината натрия (Табл. 3).

При этом важно отметить, что, как показали расчёты, вклад несвязанных молекул мальтодекстринов в расчётную величину М„ оказался пренебрежимо мал и практически на неё не влиял. Близость же расчётных значений М„ к экспериментально определённым для большинства коньюгатов позволяет предположить отсутствие вклада несвязанных молекул мальтодекстринов в экспериментальную величину Мл. Кроме того, в связи с преимущественным вкладом в величину светорассеяния больших по размеру частиц, можно с уверенностью предположить, что именно структурные и термодинамические параметры частиц ковалентных коньюгатов казеината натрия и мальтодекстринов были определены экспериментально этим методом.

2.1. Растворимость. Одним из основных функциональных свойств пищевых биополимеров является их растворимость. Эксперимент показал, что образование ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами приводит к существенному увеличению растворимости белка в водной среде во всём изученном диапазоне рН (2 -г 8), что наиболее ярко проявляется в области ИЭТ белка в диапазоне рН от 4.0 до 4.6, где казеинат натрия имеет наиболее низкую растворимость, не превышающую 9% от общего содержания белка в объёме раствора. Рост количества молекул мальтодекстринов, ковалентно присоединённых к молекулам казеинов с

12

возрастанием Я„{11га) (Табл. 2) приводит к практически полной растворимости белка в ИЭТ (рН 4.6) при = 5. Причём простое смешивание растворов казеината натрия и мальтодекстринов не оказывает

положительного влияния на растворимость казеината натрия в области ИЭТ (Рис. 7).

На основании данных статического лазерного светорассеяния, полученных при рН = 7.0, можно предположить, что наблюдаемое увеличение растворимости коньюгатов по сравнению с чистым белком, может быть вызвано значительным возрастанием их термодинамического сродства к водной среде, что выражается в изменении знака второго вириального коэффициента от отрицательного к положительному при переходе от чистого белка к коньюгатам (Табл. 3, Рис. 8).

Кроме того, более высокие положительные значения второго вириального коэффициента, найденные для коньюгатов с мальтодекстрином МйЮ, может быть объяснено более высокой степенью связывания этого мальтодекстрина с белком (Табл. 2). Данное преимущество коньюгатов оказалось ещё более выраженным в области ИЭТ белка (рН 4.6), где вклад в растворимость коньюгатов мальтодекстринов, имеющих, по сравнению с белком более гидрофильную природу, проявился, например, в положительных значениях вторых вириальных коэффициентов коньюгатов с = 5 (А2* = 22.2 (м3моль"') для коньюгата с ЗА 2 и А2* = 1317.7 (м3моль-1) для коньюгата с МОЮ), характеризующих хорошее термодинамическое качество растворителя для них.

В свою очередь, уменьшение положительных значений второго вириального коэффициента с повышением степени связывания мальтодекстринов с белком в коньюгатах, сопровождающееся даже переходом к отрицательным значениям в случае коньюгата, содержащего 5А2, может быть связано, главным образом, с последовательной диссоциацией первичных ассоциатов казеината натрия, вызванной ковалентным присоединением увеличивающегося количества мальтодекстринов (Табл. 2, 3). Такая прогрессирующая диссоциация очевидно ведет к экспозиции в водную среду всё большего количества гидрофобных частей молекул белка, спрятанных первоначально во внутреннем интерьере первичных белковых ассоциатов.

Растворимость, % 100-

0 12 3 4 5

Рисунок 7.

Растворимость ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами: МОЮ (■), &42 (•) и простых смесей Б + МОЮ ( □ ), Б + 5X2 ( О ) в водной среде в области ИЭТ белка (рН = 4.6), как функция весового отношения, Д„,, мальтодекстрина к белку.

При этом важно отметить, что как принципиально одинаковая зависимость средневесовых молярных масс, М„, коньюгатов от весового отношения мальтодекстринов к белку в системе, (не смотря на различный размер (степень полимеризации)

мальтодекстринов МОЮ и 5А2), так и близкие значения М„ коньюгатов при > 2 (Табл. 3), дают возможность предположить, что как число взаимодействующих с белком молекул мальтодекстринов (Табл. 2), так и их размер (пространственный фактор) являются важными факторами, влияющими на диссоциацию первичных белковых агрегатов. Однако, ожидается, что большее число меньших по размеру молекул мальтодекстрина, ковалентно присоединённых к белку, как в случае мальтодекстрина МОЮ, может более значительно увеличить гидрофильность казеина натрия. Это отражается в положительном значении второго вириального коэффициента коньюгата (Б + МОЮ) при /?„, = 5 в отличие от отрицательного значения А2 для коньюгата (Б + 5^2).

2.2. Пенообразующая способность. Было показано, что коньюгаты формируют более тонкодисперсные пены по сравнению с белком при нейтральном рН и низкой ионной силе (0.001 М), что может быть причиной некоторого уменьшения их исходного объёма, количественно выраженного снижением значения коэффициента кратности объёма пены по сравнению с объёмом пены, стабилизированной чистым белком. Кроме того, наличие мальтодекстринов в коньюгатах обеспечивает значительное увеличение стабильности пены во времени, что выражается в значительном росте времени полураспада пен, к/т, и наиболее ярко проявляется в случае коньюгата, содержащего мальтодекстрин с более высоким декстрозным эквивалентом, МОЮ (Рис. 9).

На основании данных светорассеяния, можно сделать вывод, что такая пенообразующая способность коньюгатов может быть объяснена, главным образом, добавлением гидрофильное™ к адсорбционным слоям на пузырьках воздуха в пене, за счёт ковалентного присоединения мальтодекстринов к казеинату натрия в коньюгатах. Повышение гидрофильности адсорбционных слоёв усиливает удерживание воды между ними, что, в свою очередь, ведёт к снижению скорости дренажа воды из пены,

Рисунок 8.

Второй вириальный коэффициент ковалентных коньюгатов Б + ( • ) и Б + МЭ10 ( □ ) как функция весового отношения, Д,„ мальтодекстринов к казеинату натрия в коньюгатах (рН = 7.0, ионная сила 0.001М).

предотвращая коалесценцию пузырьков воздуха и последующее разрушение пены.

Кроме того, обнаруженная частичная диссоциация исходных ассоциатов казеината натрия, произошедшая в результате ковалентного присоединения большего количества низкомолекулярных

мальтодекстринов при > 2, может также вносить свой вклад в обнаруженную лучшую пенообразующую способность коньюгатов, благодаря как увеличению числа поверхностно-активных частиц, так и повышению их относительной поверхностной активности за счёт большей гидрофобности (Табл. 3.)

кратности времени _, коньюгат, 1 б

Рисунок 9.

Коэффициент

полураспада пены, к/1а = (¡¡2------------/ г ш

как функция весового отношения, /?„. мальтодекстрин : белок в коньюгатах: Б + ЭА2 (•), Б + МШО (□) (рН = 7.0, ионная сила 0.001М).

3. Структурные и термодинамические особенности комплексов ковалентных коньюгатов [казеинат натрия + мальтодекстрин] с ФТДХ, определяющие их функциональность как наноконтейнеров для доставки ФТДХ.

Комплексы между образцами ковалентных коньюгатов и липосомами фосфатидилхолина (ФТДХ) (10'3М) образовывались самопроизвольно в фосфатном буфере при рН 7.0, ионной силе 0.001М, 40°С и в присутствии 10% этанола. Растворы биополимеров с липосомами ФТДХ перемешивали в течение одного часа и выдерживали ночь при комнатной температуре для установления равновесия (СБ=1% вес/объём, СфТДХ=10"3М).

£ 02

5 0.1 <

(а)

\ 1 т & I

А 1

Ш 5

1Е-3 0.01 0.1 1

/?п, (МКМ)

Рисунок 10.

Распределение по размерам для частиц липосом чистого ФТДХ ( ▲ ), ковалентных коньюгатов Б + БА2 ( ■ ) и Б + МОЮ ( □ ) и комплексов с ФТДХ с ковалентными коньюгатами Б + 5Л2 ( • ) и Б + МОЮ( О ): (а) 5а2 б=5 (б) мою:б= 5 (рН7.0,1 = 0.001 МСБ=1% вес/объем, СФТдх=10"3М).

Данные по экстракции диэтиловым эфиром свободного ФТДХ из водных растворов комплексов коньюгатов с ФТДХ свидетельствовали о более чем 90% (в пределах 10% ошибки опыта) связывании ФТДХ коньюгатами. Эти данные подтверждаются данными динамического светорассеяния, которые показали образование одного нового пика комплексов, включающих липосомы ФТДХ и наночастицы коньюгатов. В качестве примера показано распределение частиц образующихся комплексов (коньюгат + ФТДХ) для систем с максимальным содержанием мальтодекстринов в коньюгатах (Рис 10 а, б).

При этом, интересно отметить, что данные дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), полученные на модельной системе с ДФТДХ. свидетельствовали, что бислой ДФТДХ не только не нарушается в комплексе с ковалентными коньюгатами, но даже становится более упорядоченным с увеличением числа присоединённых к белку гидрофильных молекул мальтодекстринов, на что указывают большие величины энтальпии (площадь под кривой) фазового перехода для ДФТДХ в коньюгатах (Рис. 1).

3.1. Растворимость. Важно отметить, что комплексы ковалентных коньюгатов с ФТДХ сохраняли такой же высокий уровень растворимости в водной среде в широком диапазоне рН. как и сами коньюгаты, в то время как комплексы с простыми смесями биополимеров теряли свою растворимость в области ИЭТ белка.

3.2. Защита ФТДХ от окисления. Защитные свойства ковалентных коньюгатов по отношению к окислению ФТДХ кислородом воздуха мы оценивали по появлению, как первичных продуктов автоокисления ФТДХ (коньюгированных диеновых гидроперекисей) (Рис. 11 показывает пример таких данных для комплексов ФТДХ с коньюгатами,

содержащими ¿>12). так и конечного продукта окисления (малонового диальдегида, МДА) в условиях ускоренного окисления (10° М Си2+, прогрев в течение 1 часа при 70°С) (Рис 12).

Согласно полученным данным, образец чистого ФТДХ имеет ярко выраженную тенденцию к росту количества коньюгированных диеновых гидроперекисей с течением времени, в то время как комплексы ФТДХ с ковалентными коньюгатами, независимо от весового соотношения в них биополимеров, остаются стабильными по отношению к окислению кислородом воздуха (Рис. 11).

Рисунок 11.

Отношение оптических плотностей в момент времени t (60 часов) и в начальный момент времени D,/Du растворов комплексов ФТДХ с ковалентными коньюгатами (Б + SA2) при Я„ = 0.4 (а) ии„ = 5 (б) и чистого ФТДХ (в) при 233 нм(рН 7.0.1 = 0.001 М, 22°С).

В результате ускоренного окисления большее количество МДА было обнаружено в образце чистого ФТДХ по сравнению с его комплексами, как с казеинатом натрия, так и с ковалентными коньюгатами (Рис. 12).При этом, оказалось, что уровень защиты ФТДХ от окисления был ниже у коньюгатов и простых смесей по сравнению с чистым белком, и кроме того, коньюгаты с мальтодекстрином &42, имеющим более высокую степень полимеризации, обеспечивали более высокий уровень защиты, чем коньюгаты с мальтодекстрином МОЮ.

Для того, чтобы лучше понять этот результат, обратимся к данным светорассеяния (Табл. 4). Рассчитанные на основе данных светорассеяния величины плотности сформированных частиц комплексов показывают снижение плотности с увеличением количества мальтодекстрина в коньюгатах, в обоих случаях и для 5X2, и для МйЮ. При этом, наиболее выраженный спад величины плотности частиц наблюдался для коньюгатов МО/О, что может быть причиной их более слабых защитных свойств по сравнению с коньюгатами БА2 (Рис. 12).

В свою очередь, на основании данных светорассеяния, можно заключить, что снижение величин плотности частиц комплексов с ростом в основном обусловлено значительным снижением их молярной массы по сравнению с чисто белковыми комплексами (казеинат натрия + ФТДХ), особенно ярко выраженном в случае комплексов ФТДХ с коньюгатом МОЮ (Табл. 4)

Важно отметить, что ковалентные коньюгаты казеината натрия с мальтодекстринами и МОЮ , в отличие от простых смесей и чистого белка, обеспечивают защиту ФТДХ от окисления не только при нейтральных значениях рН, но и при ИЭТ белка.

С .1Л * . нмоль/мл МДА

14

124-

А----^....................

2 9 ' . "Ф

А ..«...................... .....................*

о 1—,—.—,—,—г_,—.—.—,—.—

0 1 2 3 4 5 К„

Рисунок 12.

Количество малонового диальдегида, выделившегося в результате ускоренного окисления (10° М Си2+, прогрев в течение 1 часа при 70 °С) ФТДХ (10 3М): чистого (—), в комплексах с казеинатом натрия ( А ), простыми смесями Б + 5А2 ( О ), Б + МОЮ ( □ ) и ковалентными коньюгатами Б + ЭА2 ( • ), Б + МОЮ ( ■ ) (рН 7.0, ионная сила 0.001 М;СЕ = 1% вес/объём, С фтдх = Ю" М)

С ..г, А . нмоль/мл

МДА

ч

н--с........"1

0--г-

0 1 2 3 4 5 о

Таблица 4. Структурные и термодинамические параметры комплексов ковалентных коньюгатов с ФТДХ (103 М) в водной среде (рН 7.0, ионная сила 0.001М). полученные по _ данным статического и динамического лазерного светорассеяния. _

к М„* 106. Ко, Яь Л2х10\ (МО3, 1/№Ю3.

Да нм нм см3 моль г2 г мл ' г мл'1

0 18.4 187 122 -0.1 1.5 1.1 65

(казеинат натрия + мальтодекстрин £Л2) + ФТДХ

0.4 22.7 232 121 4.3 1.9 0.7 66

2 25.2 206 98 10.4 2.1 1.1 50

5 1.6 122 79 -8.8 1.5 0.3 66

(казеинат натрия + мальтодекстрин МОЮ) + ФТДХ

0.4 10.8 195 103 6.4 1.9 0.6 49

1 5.6 155 105 -0.6 1.5 0.6 45

2 0.5 163 90 -35.2 1.8 0.05 93

5 8.4 160 217 -3.6 0.7 0.3 71

На рисунке 13 представлено сравнение количества малонового диапьдегида, образовавшегося в водном растворе чистого ФТДХ (10"3 М) и его комплексов с казеинатом натрия, простыми смесями и ковалентными коньюгатами казеината натрия с мальтодекстринами 5'А 2 и МОЮ при рН = 4.6. Как видно из рисунка 13, уровень защиты ФТДХ от окисления в комплексах с коньюгатами может достигать 100% ФТДХ при Я„> 2, в отличие от чистого белка и его простых смесей с МД. При этом, такая большая степень защиты ФТДХ от окисления обусловлена значительно большей плотностью частиц комплекса в этих условиях, например, 23.7 и 48.2 (г/см3) для комплексов ФТДХ с коньюгатами (= 5), содержащими мальтодекстрины 5А2 и МОЮ, соответственно.

С , нмоль/мл

МДА '

С , . нмоль/мл

МДА 10-,

Рисунок 13.

Количество малонового диальдегида, выделившегося в результате ускоренного окисления (10"* М Си2+, 96ч хранения при 22°С) ФТДХ (10"3М): чистого (—), в комплексах с казеинатом натрия ( А ), простыми смесями Б + ЗА2 ( О ), Б + МОЮ ( □ ) и ковалентными коньюгатами Б + БА2 ( • ), Б + МОЮ ( ■ ) (рН 4.6. ионная сила 0.001 М; С Б = 1% вес/объём. С ФТдх = Ю"3М)

3.3. Высвобождение ФТДХ в ЖКТ. В отличие от практически полного высвобождения ФТДХ в желудке из комплексов ФТДХ с казеинатом натрия, в случае комплексов ФТДХ с ковалентными коньюгатами (Рис. 14) мы наблюдали преимущественное высвобождение фосфолипида на стадии переваривания в тонком кишечнике, т.е. под действием не только протеаз, но также и амилазы, эффективно гидролизующей мальтодекстрины. При этом, общее количество высвободившегося ФТДХ составляло не менее 80% в случае коньюгата SA2 и не менее 50% в случае коньюгата MD10. При этом было найдено, что чем большее число молекул мальтодекстринов ковалентно пришито к казеинам (Табл. 2). тем важнее роль амилазы, действующей в тонком кишечнике для эффективного высвобождения ФТДХ из его комплексов с ковалентными коньюгатами этих биополимеров. Таким образом, варьируя биополимерный состав систем доставки, мы можем достичь контролируемого высвобождения ЛБАВ в определённом отделе ЖКТ человека.

Свободный ФТДХ, %

Рисунок 14.

Высвобождение (in vitro) ФТДХ из его комплексов с казеинатом натрия и ковалентными коньюгатами казеината натрия с мальтодекстринами SA2 и MD10. перед началом гидролиза ( ), после ферментативного

гидролиза на стадии переваривания в ротовой полости ( ÍÜÍ ), в желудке (Ш) и тонком кишечнике ( I).

1. Впервые установлены ключевые структурные факторы комплексов ФТДХ с казеинатом натрия и ковалентными коньюгатами казеината натрия с мальтодекстринами. контролирующие эффективную защиту полиненасыщенного ФТДХ от окисления. Ими являются: плотность комплексных частиц, которая должна быть выше 2 мг/мл для 100% защиты ФТДХ от окисления, и степень ассоциации биополимеров в комплексных частицах при их плотности ниже 2 мг/мл. Найденный же немного более низкий, по сравнению с белком, защитный эффект ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами по отношению к окислению ФТДХ при нейтральном рН объясняется более низкой чем у белка плотностью образованных комплексных частиц в этом случае.

2. Впервые было показано, что бислой модельного фосфатидилхолина (ДФТДХ) сохранял свою целостность в комплексе с казеинатом натрия и даже становился более упорядоченным в комплексе с ковалентными коньюгатами с увеличением числа присоединённых к белку гидрофильных молекул мальтодекстринов.

19

ВЫВОДЫ:

3. Впервые установлено, что уровень растворимости ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами тем выше в области ИЭТ белка, чем большее количество молекул мальтодекстрина ковалентно присоединяется к белку. При этом роль степени полимеризации (ДЭ) мальтодекстринов проявляется в пространственных ограничениях при ковалентном присоединении мальтодекстринов к белку, т.е. чем выше ДЭ и ниже степень полимеризации, тем больше молекул МД может быть присоединено к белку. Определено, что 100% растворимость белка в коньюгатах достигалась при пятикратном весовом избытке мальтодекстринов в системе. При этом наблюдаемое увеличение растворимости ковалентных коньюгатов по сравнению с белком объясняется значительным ростом их термодинамического сродства к водной среде.

4. Впервые установлено, что как ковалентное присоединение большого числа молекул мальтодекстрина к частицам казеината натрия, так и дополнительное присоединение большого числа молекул ФТДХ к частицам ковалентных коньюгатов приводит к ярко выраженной диссоциации исходных частиц белка и к изменению гидрофобно-гидрофильного баланса свойств их поверхности.

5. Впервые установлено, что оптимальное термодинамическое сродство к водной среде комплексных частиц ФТДХ с казеинатом натрия и с ковалентными коньюгатами казеината натрия и мальтодекстринов определяет максимальную стабильность пен, сформированных этими частицами, во времени.

6. Впервые установлено, что практически полное высвобождение ФТДХ из его комплексных частиц с казеинатом натрия наблюдается на стадии их переваривания в желудке под действием пепсина in vitro. Также впервые было найдено, что чем большее число молекул мальтодекстринов ковалентно пришито к казеинам, тем важнее роль амилазы, действующей в тонком кишечнике для эффективного высвобождения ФТДХ из его комплексов с ковалентными коньюгатами этих биополимеров in vitro. При этом, варьируя биополимерный состав комплексов, мы можем добиться контролируемого высвобождения ФТДХ в определённом отделе ЖКТ человека.

7. Таким образом, впервые было показано, что наночастицы казеината натрия и ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами являются эффективными системами доставки для ФТДХ, благодаря их следующим свойствам:

(а) высокой степени связывания ФТДХ (> 90%);

(б) контролируемого высвобождения ФТДХ под действием ферментов ЖКТ in vitro;

(в) высокой степени защиты ФТДХ от окисления кислородом воздуха в условиях авто- и ускоренного окисления.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

Сппсок опубликованных по теме диссертации статей:

1. Григорович II.B., Ангипова А С., Белякова Л.Е., Поликарпов Ю.Н., Семенова М.Г., Моисеенко Д.В., Баранов Б.А. Обезжиренный функциональный десерт для общественного питания. Пищевая промышленность. -2011-3 -42-43

2. N. V. Grigorovich, D. V. Moiseenko, A. S. Antipova, М. S. Anokhina, L. Е. Belyakova, Yu. N. Polikarpov, N. Korica, M. G. Semenova and B. A. Baranov. Structural and thermodynamic features of covalent conjugates of sodium caseinate with maltodextrins underlying their functionality. Food and Function.-2012.-3 - P. 283-289.

3. M. G. Semenova, A. S. Antipova, M. S. Anokhina, L. E. Belyakova, Yu. N. Polikarpov, N. V. Grigorovich and E. N. Tsapkina. Thermodynamic and structural insight into the underlying mechanisms of the phosphatidylcholine liposomes - casein associates co-assembly and functionality. Food and Function. -2012.-3-P. 271-282.

4. H. В.Григорович, A.C. Антипова, Л. E. Белякова, Ю. H. Поликарпов, A. D. de Oliveira Junior, М. Г.Семёнова, Б. А. Баранов. Коньюгаты казеината натрия с мальтодекстринами как наноконтейнеры для доставки фосфатидилхолина Труды IX ежегодной международной молодежной конференции ИБХФ РАН - ВУЗы, «Биохимическая физика», - 2010, 278-283.

5. Н.В.Григорович, Д.В. Моисеенко, A.D. de Oliveira Junior, N. Korica, L. Otten, A C. Антипова, Jl.E. Белякова, Ю.Н. Поликарпов, М.Г.Семёнова, Б.А. Баранов. Сравнение потенциальных возможностей использования ковалентных коньюгатов и простых смесей казеината натрия с мальтодекстринами в качестве наноконтеПнеров для доставки фосфатидилхолина через пищевые системы. В сборнике научных трудов X ежегодной международной молодёжной конференции ИБХФ РАН-ВУЗы «Биохимическая физика». - 2011, 55-58.

6. Д.В. Моисеенко, Н.В.Григорович, А С. Антипова, Л.Е. Белякова, Ю.Н. Поликарпов, М.Г.Семёнова, Б.А. Баранов. Разработка многофункционального пищевого ингредиента на основе комплексов казеината натрия и фосфатидилхолина для стабилизации обезжиренных пищевых систем. В сборнике научных трудов X ежегодной международной молодёжной конференции ИБХФ РАН-ВУЗы «Биохимическая физика». - 2011, 169-172.

7. М. G. Semenova, A. S. Antipova, М. S. Anokhina, L. Е. Belyakova, Yu.N. Polikarpov, N.V. Grigorovich, E.N. Tsapkina. Thermodynamic and structural insight into the underlying mechanisms of the phosphatidylcholine liposomes-casein micelles co-assembly and functionality. В сборнике научных трудов 4th International Symposium «Delivery of Functionality in Complex Food Systems Physically-Inspired Approaches from the Nanoscale to the Microscale». - 2011, 65-67.

8. N.V. Grigorovich, D.V. Moiseenko , A S. Антипова, M.S. Anokhina, L.E. Belyakova, Yu. N. Polikarpov, M.G. Semenova, B.A. Baranov. Structural and thermodynamic features of covalent conjugates of sodium caseinate with maltodextrins underlying formation, functionality and digestibility of their complexes with phosphatidylcholine. В сборнике научных трудов 4th International Symposium «Delivery of Functionality in Complex Food Systems Physically-Inspired Approaches from the Nanoscale to the Microscale». - 2011, 77-79.

9. D. V. Moiseenko, N. V. Grigorovich, Pictsch V.L. , Baran D.A., A. S. Antipova, M. S. Anokhina, L. H. Belyakova, Yu. N. Polikarpov, M. G. Semenova, B.A. Baranov. The potentiality of the use of the conjugates based on sodium caseinate and maltodextrins as a delivery system for hydrophobic nutraceuticals. В сборнике научных трудов XI ежегодной международной молодёжной конференции ИБХФ РАН-ВУЗы «Биохимическая физика». - 2012,307-310.

Список тезисов докладов на международных конференциях:

1. N.V. Grigorovich, M.G. Semenova, L.E. Belyakova, Y.N. Polikarpov, A.S. Antipova, B.A. Baranov. Foam capacity of sodium caseinate micelles, operating as nanovehicles for the delivery of phosphatidylcholine via food systems. The fifth Moscow international congress "Biotechnology: state of the art and prospects of development". Moscow, Russia, 16-20 March 2009.

2. Grigorovich N.V., Antipova A.S., Belyakova L.E., Polikarpov Y.N., Baranov B.A. and Semenova M.G. Sodium caseinate - maltodextrin conjugates as nanovehicles for the delivery of phosphatidylcholine. 3-th International Symposium "Delivery of functionality in complex food system: Physically-inspired approaches from nanoscale to microscale". Wageningen, the Netherlands, 18-21 October.

3. Grigorovich N.V., Antipova A.S., Belyakova L.E., Polikarpov Y.N., A. D. de Oliveira Junior, Baranov B.A. and Semenova M.G. Comparison of potentiality of simple mixtures (sodium caseinate + maltodextrin) and the covalent conjugates of these biopolvmers to behave as nanovehicles for the delivery of phosphatidylcholine via food colloids "Food Colloids 2010: On the Road from Interfaces to Consumers" Granada, Spain, March 21th-24th, 2010

4. Grigorovich, N.V., Moiseenko, D.V., Antipova, A S., Belyakova, L.E., Polikarpov, Y.N., Baranov, B.A. and Semenova, M.G. Covalent conjugates and simple mixtures of sodium caseinate with maltodextrins as biopolymer nanovehicles for the delivery of lecithin to human body via low-fat food systems «Lecithin Short Course» 10-11 июня 2010 года в г.Гент (Бельгия)

5. Н.В.Григоровнч. Сравнение свойств ковалентных коньюгатов (казеинат натрия + мальтодекстрин) и простых смесей данных биополимеров как наноконтейнеров для доставки фосфатидилхолина. Сборник трудов XXIII Международных Плехановских чтений, Москва, 2010.

6. Semenova M.G., Belyakova L.E., Polikarpov Y.N., Antipova A.S., Grigorovich N.V., Baranov B.A. and Elena N. Tsapkina. Self-assembled structures of caseins for the delivery of phosphatidylcholine via food systems. 3-th International Symposium "Delivery of functionality in complex food system: Physically-inspired approaches from nanoscale to microscale". Wageningen, the Netherlands, 18-21 October 2009.

7. II. В.Грнгорович, A C. Антипова, JI. E. Белякова, Ю. H. Поликарпов, A. D. de Oliveira Junior, М. Г.Семёнова, Б. А. Баранов Коньюгаты казеината натрия с мальтодекстринами как наноконтейнеры для доставки фосфатидилхолинаЛХ ежегодная международная молодёжная конференция ИБХФ РАН - ВУЗы, «Биохимическая физика», Москва, 9-11 ноября 2009г.

8. Moiseenko, D.V., Grigorovich, N.V., Antipova, A.S., Belyakova, L.E., Polikarpov, Y.N., Baranov, B.A. and Semenova, M.G. Comparison of the foaming abilities of the biopolymer nanovehicles for phosphatidylcholine based on the sodium caseinate and the covalent conjugates/simple mixtures of sodium caseinate with maltodextrins. Международная конференция BerlinFOOD2010 PhD conference, 8-10 сентября 2010, Берлин, Германия

9. Grigorovich, N.V, Moiseenko, D.V., Antipova, A S., Belyakova, L.E., Polikarpov, Y.N., Baranov, B.A. and Semenova, M.G.Molecular design of novel functional ingredients based on sodium caseinate-

maltodextrin conjugates for the delivery of phosphatidylcholine via food colloids.Международная конференция BerlinFC>OD2010 PhD conference, 8-10 сентября 2010, Берлин, Германия. 10. M.G. Semenova, L.E. Belyakova, Y.N. Polikarpov, M.S. Anokhina, A.S. Antipova, N.V. Grigorovich, B. A. Baranov, E. N. Tsapkina. Potentiality of self-assembled structures of caseins in the development of health-promoting ingredient for food colloids. "Food Colloids 2010. On the Road from Interfaces to Consumers". Granada, Spain, 21-24 March 2010.

И. Семёнова М.Г., Белякова Л.Е., Поликарпов Ю.Н., Ангипова А.С., Анохина М.С., Цапкина Е.Н., Григорович Н.В., Моисеенко Д.В., Баранов Б.А. Потенциальные возможности использования самоорганизующихся супрамолекулярных структур казеинов для разработки пищевых ингредиентов, способствующих улучшению здоровья человека. VIII Международная конференция «Биоантиоксидант», Москва, Россия, 4-6 октября 2010 г.

12. Григорович Н.В., Моисеенко Д.В., Антипова А.С., Белякова Л.Е., Поликарпов Ю.Н., Баранов Б.А., Семёнова М.Г. Сравнение эффективности комплексных систем коньюгат/простая смесь (казеинат натрия + мапьтодекстрин) в качестве многофункциональных наноконтейнеров для фосфатидилхолина. X ежегодная международная молодёжная конференция ИБХФ РАН - ВУЗы, «Биохимическая физика», Москва, 9-11 ноября 2010г.

13. D. V. Moiseenko, N. V. Grigorovich, Pietsch V.L., Baran D.A., A. S. Antipova, M. S. Anokhina, L. E. Belyakova, Yu. N. Polikarpov, M. G. Semenova, B.A. Baranov. The potentiality of the use of the conjugates based on sodium caseinate and maltodextrins as a delivery system for hydrophobic nutraceuticals. XI ежегодная международная молодежная конференция ИБХФ РАН - ВУЗы, «Биохимическая физика», Москва, 9-11 ноября 2011г.

14. Д.В Моисеенко, II.B. Григорович, А С. Антипова, Л.Е. Белякова, Ю Н. Поликарпов, Б.А.Баранов и М.Г. Семёнова. Пенообразующие способности функциональных макроингредиентов на основе комплексов ковалентных коньюгатов казеината натрия и мальтодекстринов с фосфатидилхолином. XII Всероссийский Конгресс диетологов и нутрициологов с международным участием «Питание и здоровье», Москва, Россия, 29 ноября - 1 декабря 2011.

15. N.V. Grigorovich, D.V. Moiseenko, A.S. Антипова M.S. Anokhina, L.E. Belyakova, Yu. N. Polikarpov, M.G. Semenova, B.A. Baranov. Innovative structure-forming ingredients for low-fat functional food products on the basis of the complexes of soy phosphatidylcholine with covalent conjugates of sodium caseinate and maltodextrins. VI Moscow International Congress "Biotechnology: state of the art and prospects of development". Moscow, Russia, 21-25 March 2011.

16. D.V. Moiseenko, N.V. Grigorovich, A.S. Antipova, M.S. Anokhina, L.E. Belyakova, Y.N. Polikarpov, M.G. Semenova, B.A. Baranov. Functional properties of the complexes based on sodium caseinate, maltodextrins and liposomes of soy phosphatidylcholine. International Symposium «Phospholipids in Pharmaceutical Research», Heidelberg, Germany, 12-13 September 2011.

17. Grigorovich N.V., Moiseenko D.V., Antipova A S., Anokhina M.S., Belyakova L.E., Polikarpov Y.N., Baranov B.A.and Semenova M.G. Relationships between molecular parameters and functional properties of the complexes of covalent conjugates (sodium caseinate + maltodextrin) with soy phosphatidylcholine. 10th ILPS Phospholipid Congress, Rotterdam, the Netherlands, 16-18 September 2011.

18. A.S. Antipova, L.E. Belyakova, Yu.N. Polikarpov, M.S. Anokhina, N.V. Grigorovich, E. N. Tsapkina and M.G. Semenova. Complex ingredients based on caseins and soy lecithin for functional foods. 10th ILPS Phospholipid Congress, Rotterdam, the Netherlands, 16-18 September 2011.

19. D. V. Moiseenko, N. V. Grigorovich, Pietsch V.L., Baran D.A., A. S. Antipova, M. S. Anokhina, L. E. Belyakova, Yu. N. Polikarpov, M. G. Semenova, B.A. Baranov. The potentiality of the use of the conjugates based on sodium caseinate and maltodextrins as a delivery system for hydrophobic nutraceuticals. XI ежегодная международная молодёжная конференция ИБХФ РАН-Вузы «Биохимическая физика». - Москва 9-11 ноября 2011.

20. Д.В. Моисеенко, Н.В. Григорович, А С. Антипова, М.С. Анохина, JI.E. Белякова, Ю Н. Поликарпов, М.Г. Семёнова, Б.А. Баранов. Разработка технологии функционального продукта питания пониженной калорийности, обогащенного фосфатидилхолином. Первый Международный конгресс «Экологическая, продовольственная и медицинская безопасность человечества». Москва, Россия, 14-17 ноября 2011.

21. Н.В. Григорович, Д.В. Моисеенко, А.С. Антипова, М.С. Анохина, JI.E. Белякова, Ю Н. Поликарпов, М.Г. Семёнова, Б.А. Баранов. Молекулярный дизайн ингредиентов для продуктов функционального питания с низким содержания жира. Первый Международный конгресс «Экологическая, продовольственная и медицинская безопасность человечества». Москва, Россия, 1417 ноября 2011.

22. М. G. Semenova, N. V. Grigorovich, D. V. Moiseenko,М. S. Anokhina, A. S. Antipova, L. E. Belyakova, Yu. N. Polikarpov and E. N. Tsapkina.Role of the character of the protein - polysaccharide interactions in the formation and digestion in-vitro of the ternary complex particles involving phosphatidylcholine along with the biopolymers. «Food structures, digestion and health», Palmerston North, New Zealand, 7-9 March 2012

23. M. S. Anokhina, A S. Antipova, N.V. Grigorovich, D. V.Moiseenko, E. N. Tsapkina and M. G. Semenova. Calorimetric insight into the interactions of covalent conjugates (sodium caseinate + maltodextrins) and phosphatidylcholine liposomes in aqueous medium. «Food structures, digestion and health», Palmerston North, New Zealand, 7-9 March 2012

24. D. V. Moiseenko, N.V. Grigorovich, A. S. Antipova, M. S. Anokhina, L. E. Belyakova, Yu. N. Polikarpov, M. G. Semenova and B. A. Baranov. Molecular transformation of the complexes of the covalent conjugates (sodium caseinate + maltodextrins) with lisophosphatidyl choline under the consecutive enzymatic action in the simulated gastro-intestinal conditions in-vitro. «Food structures, digestion and health», Palmerston North, New Zealand, 7-9 March 2012

25. D.V. Moiseenko, N.V. Grigorovich, A.S. Antipova, M.S. Anokhina, T.A. Misharina, M.B. Terenina, M. G. Semenova and B.A. Baranov. Encapsulation ability of the covalent conjugates of sodium caseinate with maltodextrins relative to the polyunsaturated lipids. «Food Colloids 2012: Creation and Breakdown of Structure». Copenhagen, Denmark, 15-18 April 2012.

26. Семёнова М.Г., Григорович H.B., Моисеенко Д.В., Антипова А.С., Анохина М.С., Белякова JI.E., Поликарпов Ю.Н., Цапкина Е.Н.. Структурные и термодинамические аспекты роли мальтодекстринов в функциональности биополимерных наносистем доставки для полиненасыщенных липидов. XIX Международная конференция по крахмалу, Москва, Россия, 18-20 сент. 2012

27. Моисеенко Д.В., Григорович Н.В., Антипова А.С., Анохина М.С., Баранов Б.А., Семёнова М.Г. Системы доставки для полиненасыщенных жирных кислот на основе белка и мальтодекстринов. XIX Международная конференция по крахмалу, Москва, Россия, 18-20 сент. 2012

Подписано в печать:

08.10.2012

Заказ № 7681 Тираж - 120 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

1. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

2. ВВЕДЕНИЕ

3. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

3.1. Биологически активные вещества, относящиеся к классу нутрицевтиков

3.2. Процессы инкапсулирования и системы доставки

3.3. Системы доставки на основе пищевых биополимеров

3.3.1. Биополимерные гели и гелевые частицы

3.3.2. Биополимеры как эмульгаторы при эмульсионном инкапсулировании

3.3.3. Смеси и комплексы белков и полисахаридов

3.4. Факторы, влияющие на биодоступность биологически активных веществ в пищеварительной системе человека 39 Заключение по литературному обзору

4. ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

5. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

5.1. Объекты исследования

5.1.1. Казеинат натрия

5.1.2. Мальто декстрины

5.1.3. Фосфатидилхолин

5.2. Методы исследования

5.2.1. Приготовление растворов биополимеров

5.2.2. Приготовление ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами (Б + МД)

5.2.3. Приготовление водных растворов фосфатидилхолина

5.2.4. Приготовление комплексов казеината натрия, мальтодекстринов, простых смесей (Б + МД) и ковалентных коньюгатов (Б + МД) с фосфатидилхолином

5.2.5. Рефрактометрия

5.2.6. Оценка степени связывания казеината натрия с мальтодекстринами в ковалентных коньюгатах

5.2.7. Количественная оценка ФТДХ, связавшегося с казеинатом натрия, ковалентными коньюгатами, мальтодекстринами и простыми смесями казеината натрия с мальтодекстринами

5.2.8. Оценка степени растворимости казеината натрия в водных растворах ковалентных коньюгатов белка с мальтодекстринами

SA2 и MD10 и их комплексов с ФТДХ

5.2.9. Вискозиметрия в разбавленных растворах

5.2.10. Статическое многоугловое лазерное светорассеяние

5.2.11. Динамическое лазерное светорассеяние

5.2.12. Оценка пенообразующей способности биополимеров, ковалентных коньюгатов и их комплексов с ФТДХ

5.2.13. Оценка степени окисления чистого ФТДХ и его комплексов с казеинатом натрия, мальтодекстринами, простыми смесями и ковалентными коньюгатами (Б + МД)

5.2.14. Оценка действия ферментов желудочно-кишечного тракта на комплексы ФТДХ с ковалентными коньюгатами (Б + МД) invitro

5.2.15. Дифференциальная сканирующая калориметрия 78 6. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 79 6.1. Структурные и термодинамические особенности комплексов казеината натрия с полиненасыщенным ФТДХ, определяющие их многофункциональность, как белковых наноконтейнеров для доставки ФТДХ и как структурообразующих и стабилизирующих агентов для коллоидных систем

6.1.1. Структурные и термодинамические параметры супрамолекулярных комплексов (казеинат натрия + ФТДХ), определённые методом многоуглового лазерного светорассеяния

6.1.2. Защита полиненасыщенного ФТДХ от окисления кислородом воздуха в супрамолекулярных комплексах с казеинатом натрия

6.1.3. Высвобождение ФТДХ из супрамолекулярных комплексов с казеинатом натрия в модельных условиях их переваривания в желудочно-кишечном тракте т-уИго.

6.1.4. Пенообразующая способность супрамолекулярных комплексов ФТДХ с казеинатом натрия

6.1.5. Состояние липосом ФТДХ в комплексе с казеинатом натрия

6.2. Структурные и термодинамические особенности ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами, лежащие в основе их традиционной и новой функциональности

6.2.1. Растворимость ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами в водной среде.

6.2.2. Пенообразующие свойства ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами

6.3. Структурные и термодинамические особенности комплексов ковалентных коньюгатов (казеинат натрия + мальтодекстрин) с ФТДХ, определяющие их новую функциональность, как наноконтейнеров для доставки ФТДХ

6.3.1. Состояние липосом ФТДХ в комплексе с ковалентными коньюгатами казеината натрия и мальтодекстринов

6.3.2. Растворимость комплексов ковалентных коньюгатов (казеинат натрия + мальтодекстрин) с ФТДХ в водной среде

6.3.3. Окисление ФТДХ в комплексе с казеинатом натрия, мальтодекстринами, ковалентными коньюгатами Б + БА2 и Б Мй10 , простыми смесями Б + БА2 иБ + М£>

6.3.4. Пенообразующие свойства комплексов ковалентных коньюгатов (казеинат натрия + мальтодекстрин) с ФТДХ

6.3.5. Высвобождение ФТДХ из комплексов с ковалентными коньюгатами (Б + МД) в модельных условиях их переваривания в желудочно-кишечном тракте т-укго

ВЫВОДЫ

выводы

1. Впервые установлены ключевые структурные факторы комплексов ФТДХ с казеинатом натрия и ковалентными коньюгатами казеината натрия с мальтодекстринами, контролирующие эффективную защиту полиненасыщенного ФТДХ от окисления. Ими являются: плотность комплексных частиц, которая должна быть выше 2 мг/мл для 100% защиты ФТДХ от окисления, и степень ассоциации биополимеров в комплексных частицах при их плотности ниже 2 мг/мл. Найденный же немного более низкий, по сравнению с белком, защитный эффект ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами по отношению к окислению ФТДХ при нейтральном рН объясняется более низкой чем у белка плотностью образованных комплексных частиц в этом случае.

2. Впервые было показано, что бислой модельного фосфатидилхолина (ДФТДХ) сохранял свою целостность в комплексе с казеинатом натрия и даже становился более упорядоченным в комплексе с ковалентными коньюгатами с увеличением числа присоединённых к белку гидрофильных молекул мальтодекстринов.

3. Впервые установлено, что уровень растворимости ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами тем выше в области ИЭТ белка, чем большее количество молекул мальтодекстрина ковалентно присоединяется к белку. При этом роль степени полимеризации (ДЭ) мальтодекстринов проявляется в пространственных ограничениях при ковалентном присоединении мальтодекстринов к белку, т.е. чем выше ДЭ и ниже степень полимеризации, тем больше молекул МД может быть присоединено к белку. Определено, что 100% растворимость белка в коньюгатах достигалась при пятикратном весовом избытке мальтодекстринов в системе. При этом наблюдаемое увеличение растворимости ковалентных коньюгатов по сравнению с белком объясняется значительным ростом их термодинамического сродства к водной среде.

136

4. Впервые установлено, что как ковалентное присоединение большого числа молекул мальтодекстрина к частицам казеината натрия, так и дополнительное присоединение большого числа молекул ФТДХ к частицам ковалентных коньюгатов приводит к ярко выраженной диссоциации исходных частиц белка и к изменению гидрофобно-гидрофильного баланса свойств их поверхности.

5. Впервые установлено, что оптимальное термодинамическое сродство к водной среде комплексных частиц ФТДХ с казеинатом натрия и с ковалентными коньюгатами казеината натрия и мальтодекстринов определяет максимальную стабильность пен, сформированных этими частицами, во времени.

6. Впервые установлено, что практически полное высвобождение ФТДХ из его комплексных частиц с казеинатом натрия наблюдается на стадии их переваривания в желудке под действием пепсина in vitro. Также впервые было найдено, что чем большее число молекул мальтодекстринов ковалентно пришито к казеинам, тем важнее роль амилазы, действующей в тонком кишечнике для эффективного высвобождения ФТДХ из его комплексов с ковалентными коньюгатами этих биополимеров in vitro. При этом, варьируя биополимерный состав комплексов, мы можем добиться контролируемого высвобождения ФТДХ в определённом отделе ЖКТ человека.

7. Таким образом, впервые было показано, что наночастицы казеината натрия и ковалентных коньюгатов казеината натрия с мальтодекстринами являются эффективными системами доставки для ФТДХ, благодаря их следующим свойствам: а) высокой степени связывания ФТДХ (> 90%); б) контролируемого высвобождения ФТДХ под действием ферментов ЖКТ in vitro; в) высокой степени защиты ФТДХ от окисления кислородом воздуха в условиях авто- и ускоренного окисления.

1. Пища и пищевые добавки. Роль БАД в профилактике заболеваний. (2004) Под ред. Дж. Ренсли, Дж. Донелли и Н. Рида., Москва, Изд-во, Мир, 312 с.

2. Ratnam, D.V., Aiikola, D.D., Bhardwaj, V., Sahana, D.K., Kumar, M.N. (2006). Role of antioxidants in prophylaxis and therapy: a pharmaceutical perspective. Journal of Controlled Release, 113, 189-207.

3. Spernath, A., Aserin, A. (2006). Microemulsions as carriers for drugs and nutraceuticals. Advances in Colloid and Interface Science, 128-130,.47-64.

4. Langer, R., Peppas, N.A. (2003). Advances in biomaterials, drug delivery, and bionanotechnology. American Institute of Chemical Engineers Journal, 49, 29903006.

5. Dziubla, T.D., Karim, A„ Muzykantov, V.R. (2005). Polymer nanocarriers protecting active enzyme cargo against proteolysis. Journal of Controlled Release, 102,427-439.

6. Shea, T.B., Ortiz, D., Nicolosi, R.J., Kumar, R., Watterson, A.C. (2005). Nanospheremediated delivery of vitamin E increases its efficacy against oxidative stress resulting from exposure to amyloid beta. Journal of Alzheimer's Disease, 7, 297-301.

7. Moghimi, S.M., Hunter, A.C., Murray, J.C. (2001). Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory to practice. Pharmacological Reviews, 53, 238-318.

8. Kreuter, J. (2001). Nanoparticulate systems for brain delivery of drugs. Advanced Drug Delivery Reviews, 47, 65-81.

9. Nishioka, Y., Yoshino, H. (2001). Lymphatic targeting with a nanoparticulate system. Advanced Drug Delivery Reviews, 47, 55 64.

10. Merisko-Liversidge, E., Liversidge, G.G., Cooper, E.R. (2003). Nanosizing: a formulation approach for poorly water-soluble compounds. European Journal of Pharmaceutical Sciences, 18, 113-120.

11. Medina, C., Santos-Martinez, M.J., Radomski, A„ Corrigan, O.I., Radomski, M.W. (2007). Nanoparticles: pharmacological and toxicological significance. British Journal of Pharmacology, 150, 552-558.

12. Takeuchi, H., Yamamoto, H., Kawashima, Y. (2001). Mucoadhesive nanoparticulate systems for peptide drug delivery. Advanced Drug Reviews, 47, 39-54.

13. Vandamme, Th.F., Lenourry, A., Charrueau, C., Chaumeil, J.-C. (2002). The use of polysaccharides to target drugs to the colon. Carbohydrate Polymers, 48, 219-231.

14. Ransley, J.K., Donnelly, J.K., Read, N.W. (Eds). (2001). Food and Nutritional Supplements: Their Role in Health and Disease. Berlin: SpringerVerlag.

15. Ficarra, R., Tommasini, S., Raneri, D., Calabro, M.L., Bella, M.R.D., Rustichelli, C., Ferrieres, J. (2004). The French paradox: lessons for other countries. Heart, 90, 107- 111.

16. Omenn, G.S., Goodman, G.E., Thornquist, M.D. (1996). Effects of a combination of beta-carotene and vitamin A on lung cancer and cardiovascular disease. New England Journal of Medicine, 334, 1150-1155.

17. Edge, R., McGarvey, D.J., Truscott, T.G. (1997). The carotenoids as antioxidants a rectal adenomas. American Journal of Clinical Nutrition, 78, 1219-1224.

18. Gibbs, B.F., Kermasha, S., Alii, I., Mulligan, C.N. (1999). Encapsulation in the food industry. International Journal of Food Sciences and Nutrition, 50, 213-224.

19. Albanes, D. (1999). Beta-carotene and lung cancer: a case study. American Journal of Clinical Nutrition, 69, 1345s-1350s.

20. Edge, R., McGarvey, D.J., Truscott, T.G. (1997). The carotenoids as antioxidants a review. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology 41, 189-200

21. Ruxton, C.H.S., Calder, P.C., Reed, S.C., Simpson, M.J.A. (2005). The impact of long chain co-3 polyunsaturated fatty acids on human health. Nutrition Research Reviews, 18, 113-129.

22. Ruxton, C.H.S., Reed, S.C, Simpson, M.J.A., Millington, K.J. (2004). The health benefits of omega-3 polyunsaturated fatty acids: a review of the evidence. Journal of Human Nutrition and Dietetics, 17,449-459.

23. Shahidi, F., Miraliakbari, H. (2005). Omega-3 fatty acids in health and disease. Part 2. Health effects of omega-3 fatty acids in autoimmune diseases, mental health, and gene expression. Journal of Medicinal Food, 8, 133-148.

24. Шендеров Б.А. (2003). Состояние и перспективы развития концепции «Функциональное питание в России»: общие и избранные разделы проблемы. Пищевая промышленность, 5, 4-7.

25. Placzek, М., Gaube, S., Kerkmann, U., Gilbertz, K.P., Herzinger, Т., Haen, E.,

26. Przybilla, B. (2005). Ultraviolet B-induced DNA damage in human epidermis is140modified by the antioxidants ascorbic acid and D-a-tocopherol. Journal of Investigative Dermatology, 124, 304-307.

27. Stringham, J.M., Hammond, B.R. (2005). Dietary lutein and zeaxanthin: possible effects on visual function. Nutrition Reviews, 63, 59-64.

28. Basu, A„ Imrhan, V. (2007). Tomatoes versus lycopene in oxidative stress and carcinogenesis: conclusions from clinical trials. European Journal of Clinical Nutrition, 61,295-303.

29. Hibbeln, J.R., Nieminen, L.R.G., Blasbalg, T.L., Riggs, J.A., Lands, W.E.M. (2006). Healthy intakes of n-3 and n-6 fatty acids: estimations considering worldwide diversity. American Journal of Clinical Nutrition, 83, 14838-14938.

30. Cleland, L.G., French, J.K., Betts, W.H., Murphy, G.A., Elliott, M.J. (1988). Clinical and biochemical effects of dietary fish oil supplements in rheumatoid arthritis. Journal of Rheumatology, 15, 1471-1475.

31. Geusens, P., Wouters, C., Nijs, J., Jiang, Y.B., Dequeker, J. (1994). Long-term effect of omega-3-fatty-acid supplementation Zn active rheumatoid-arthritis 12-month, double-blind, controlled study. Arthritis and Rheumatism, 37, 824-829.

32. Wong, N.C.W. (2001). The beneficial effects of plant sterols on serum cholesterol. Canadian Journal of Cardiology, 17, 715-721.

33. Ostlund, R.E. (2004). Phytosterols and cholesterol metabolism. Current Opinion in Lipidology, 15,3741.

34. Hallikainen, M.A., Sarkkinen, E.S., Uusitupa, M.I.J. (2000). Plant stanol eaters affect serum cholesterol concentrations of hypercholesterolemic men and women in a dose- dependent manner. Journal of Nutrition, 130, 767-776.

35. Материалы XI Всероссийского конгресса диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье», 30 ноября 2 декабря 2009, Москва.

36. Материалы общенациональной программы интегрированной профилактики неинфекционных заболеваний в Российской Федерации http://cindi.gnicpm.ru/004.pdf

37. R. Vieth, Н. Bischoff-Ferrari and В. J. Boucher (2007) The urgent need to recommend an intake of vitamin D that is effective. American Journal of Clinical Nutrition, 86, 809-813

38. Шендеров Б.А., (2010). Функциональное и персональное питание. Современное состояние и перспективы. Гастроэнтерология Санкт-Петербурга, 3, 2-5.

39. В.А.Княжев, Б.П.Суханов, В.А.Тутельян «Правильное питание. Биодобавки, которые Вам необходимы». Гэотар Медицина. М. 1998, 208с

40. Методические рекомендации MP 2.3.1.2432-08 «Нормы физиологических потребностей в энергии и пищевых веществах для различных групп населения Российской Федерации».

41. Основы государственной политики в области здорового питания населения Российской Федерации на период до 2020 года. Распоряжение правительства РФ от 25.10.10 №1873-Р.

42. Статистические данные ВОЗ по Российской Федерации http://www.who.int/healthinfo/survey/whsrus-russia.pdf

43. Jonesa, Р J., Jew, S. (2007). Functional food development: concept to reality. Trends in Food Science & Technology, 18, 387-390

44. Bech-Larsen, T., Scholderer J. (2007). Functional foods in Europe: consumer research, market experiences and regulatory aspects. Trends in Food Science & Technology, 18, 231-234.

45. Helmut Kaiser consultancy group report. Strong increase in nanofood and molecular food markets in 2008 worldwide. http://www.hkc22.com/Nanofoodconference.html

46. Limbach, H. J. and Kremer, K. (2006) Multi-scale modelling of polymers: Perspectives for food materials. Trends in Food Science & Technology, 17, 215— 219.

47. Tiede, K., Boxall, A. B.A., Tear, S. P., Lewis, J., David, H., and Hassellov, M. (2008). Detection and characterization of engineered nanoparticles in food and the environment. Review. Food Additives and Contaminants, 7, 795-821.

48. Chaudhry, Q., Scotter, M., Blackburn, J., Ross, B., Boxall, A., Castle, L., Aitken, R., & Watkins, R. (2008). Applications and implications of nanotechnologies for the food sector. Review. Food Additives and Contaminants, 3, 241-258

49. Morris, V. (2004) Probing molecular interactions in foods. Trends in Food Science & Technology, 15, 291-297

50. Dickinson, E. (2004) Editorial overview. Food colloids: the practical application of protein nanoscience in extreme environments. Current Opinion in Colloid & Interface Science, 9, 295-297.

51. Acosta, E. (2009). Bioavailability of nanoparticles in nutrient and nutraceutical delivery. Current Opinion in Colloid and Interface Science, 14, 35.

52. Amidon, G.L., Lennernas, H., Shah, V.P., Crison, J.R. (1995). A theoretical basis for a biopharmaceutic drug classification: the correlation of in vitro drug product dissolution and in vivo bioavailability. Pharmaceutical Research, 12,413420.

53. Horter, D., Dressman, J.B. (2001). Influence of physicochemical properties on dissolution of drugs in the gastrointestinal tract. Advanced Drug Delivery Reviews, 46, 75-87.

54. Hecq, J., Deleers, M., Fanara, D., Vranckx, H., Amighi, K. (2005). Preparation and characterization of nanocrystals for solubility and dissolution rate enhancement of nifedipine. International Journal of Pharmaceutics, 299, 167-177.

55. Lipinski, C.A., Lombardo, F., Dominy, B.W., Feeney, P.J. (2001). Experimental and computational approaches to estimate solubility and permeability in drug discovery and development settings. Advanced Drug Delivery Reviews, 46, 3-26.

56. McClements, D.J., Decker, E.A., Park, Y., Weiss, J. (2008). Designing food structure to control stability, digestion, release and absorption of lipophilic food components. Food Biophysics, 3,219-228

57. Velikov, K.P., Pelan, E. (2008). Colloidal delivery systems for micronutrients and nutraceuticals: tools and resources. SoftMatter, 4, 1964-1980.

58. Singh, H., Ye, A„ Home, D.S. (2009). Structuring food emulsions in the gastrointestinal tract to modify lipid digestion. Progress in Lipid Research, 48, 92100.

59. Weber, C., Bysted, A„ Holmer, G. (1997a). The coenzyme QIO content of the average Danish diet. International Journal of Vitamin and Nutrition Research, 67, 123-129.

60. Weber, C., Bysted, A„ Holmer, G. (1997b). Intestinal absorption of coenzyme QIO in a meal or as capsules to healthy subjects. Nutrition Research, 17, 941-945.

61. Beaulieu, L., Savoie, L., Paquin, P., Subirade, M. (2002). Elaboration and characterization of whey protein beads by an emulsification/cold gelation process: application for the protection of retinol. Biomacromolecules, 3, 239-248.

62. Lesser, S., Cermak, R., Wolffram, S. (2004). Bioavailability of quercetin in pigs is influenced by the dietary fat content. Journal Of Nutrition, 134, 15081511.

63. Cercaci, L., Rodriguez-Estrada, M.T., Lercker, G., Decker, E.A. (2007). Phytosterol oxidation in oil-in-water emulsions and bulk oil. Food Chemistry, 102, 161-167.

64. McClements, D.J., Decker, E.A., Park, Y., Weiss, J. (2009). Structural design principles for delivery of bioactive components in nutraceuticals and functional foods. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 49, 577-606.

65. Augustin, M.A., Hemar, Y. (2009). Nano- and micro-structured assemblies for encapsulation of food ingredients. Chemical Sociely Reviews, 38, 902-912.

66. Cagri A.,Ustunol Z., Ryser E.T. (2004). Antimicrobial edible films and coatings. Journal of Food Protection, 67, 833-848.

67. Garti N., Spernath A., Aserin A., Lutz R. (2005). Nano-sized self-assemblies of nonionic surfactants as solubilization reservoirs and microreactors for food systems. Soft Matter 3, 206-218.

68. Golding M, Sein A. (2004). Surface rheology of aqueous casein-monoglyceride dispersions. Food Hydrocolloids 18, 451-61.

69. Flanagan J, Singh H. (2006). Microemulsions: a potential delivery system for bioactives in food. Critical Review of Food Science and Nutrition 46(3), 221-37.

70. McClements DJ, Decker EA. (2000). Lipid oxidation in oil-in-water emulsions: impact of molecular environment on chemical reactions in heterogeneous food systems. Journal of Food Science 65(8), 1270-82.

71. Benita, S. (Ed.) (1998). Submicron Emulsions in Drug Targeting and Delivery, Boca Raton, FL: CRC Press.

72. Sarker, D.K. (2005). Engineering of nanoemulsions for drug delivery. Current Drug Delivery, 2, 297-310.

73. Garti N, Benichou A. (2001). Double emulsions for controlled-release applications:progress and trends. In: Sjoblom J, editor. Encyclopedic handbook of emulsion technology. New York: Marcel Dekker., 377—407.

74. Gu YS, Decker AE, McClements DJ. (2005). Production and characterization of oil-inwater emulsions containing droplets stabilizedby multilayermembranes consisting of beta-lactoglobulin, iota-carrageenan and gelatin. Langmuir 2, 57525760.

75. Mun S, Decker EA, McClements DJ. (2005). Influence of droplet characteristics on the formation of oil-in-water emulsions stabilized by surfactant-chitosan layers. Langmuir 2, 6228-6234.

76. Guzey D, McClements DJ. (2006). Formation, stability and properties of multilayer emulsions for application in the food industry. Advances in Colloid and Interface Science. 128, 227-248.

77. Kataoka, K., Kwon, G.S., Yokoyama, M., Okano, T., Sakurai, Y. (1993). Block copolymer micelles as vehicles for drug delivery. Journal of Controlled Release, 24, 119-132.

78. Zhang, C., Ding, Y., Ping, Q.E., Yu, L.L. (2006). Novel chitosan-derived nanomaterials and their micelle-forming properties. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 54, 8409-8416.

79. Jani, P., Halbert, G.W., Langridge, J., Florence, A.T. (1990) Nanoparticle uptake by the rat gastrointestinal mucosa: quantitation and particle size dependency. Journal of Pharmacy and Pharmacology, 42, 821-826.

80. Horn, D., Rieger, J. (2001). Organic nanoparticles in the aqueous phase theory, experiment, and use. Angewandte Chemie, International Edition, 40,43304361.

81. Hussain, N., Jaitley, V., Florence, A.T. (2001). Recent advances in the understanding of uptake of microparticulates across the gastrointestinal lymphatics. Advanced Drug Delivery Reviews, 50, 107-142.

82. Lai, S.K., O'Hanlon, D.E., Harrold, S., Man, S.T., Wang, Y.-Y., Cone, R., Hanes, J. (2007). Rapid transport of large polymeric nanoparticles in fresh undiluted human mucus. Proceeding of the National Academy of Sciences USA, 104, 1482-1487.

83. Chen, H., Weiss, J., Shahidi, F. (2006). Nanotechnology in nutraceuticals and functional foods. Food Technology, 60(3), 30-36.

84. Charych, D., Cheng, Q., Reichert, A, Kuziemko, G., Stroh, N., Nagy, J., Spevak, W., Stevens, R. (1996). A "litmus test" for molecular recognition using artificial membranes. Chemistry and Biology, 3, 113-120.

85. Qaqish, R.B., Amiji, M.M. (1999). Synthesis of a fluorescent chitosan derivative and its application for the study of chitosan-mucin interactions. Carbohydrate Polymers, 38, 99-107.

86. Sakuma, S., Suzuki, N., Sudo, R., Hiwatari, K.-I., Kishida, A„ Akashi, M. (2002). Optimized chemical structure of nanoparticles as carriers for oral delivery of salmon calcitonin. International Journal of Pharmaceutics, 239,185195.

87. Lamprecht, A., Koenig, P., Ubrich, N., Maincent, P., Neumann, D. (2006). Low molecular weight heparin nanoparticles: mucoadhesion and behaviour in Caco-2 cells. Nano-technology, 17, 3673-3680.

88. Macleod, G.S., Collett, J.H., Fell, J.T. (1999). The potential use of mixed films of pectin, chitosan and HPMC for bimodal drug release. Journal of Controlled Release, 58, 303-310.

89. Morris, V.J. (2005). Is nanotechnology going to change the future of food technology? International review of food science and technology, 3, 16-18.

90. Morris, V.J. (2006). Nanotechnology and its future in new product development. Journal of the Institute of Food Science and Technology, 20, 15-17

91. Weiss, J., Takistov, P., McClements, D.J. (2006). Functional Materials in Food Nanotechnology. Journal of food science, 71, 107-116.

92. Helmut Kaiser Consultancy Group. Study: Nanotechnology in Food and Food Processing Industry Worldwide 2006-2010-2015. http://www.hkc22.com/Nanofood.html

93. Faulks, R.M., Southon, S. (2008). Assessing the bioavailability of nutraceuticals. In Garti, N. (Ed.). Delivery and Controlled Release of Bioactives in Foods and Nutraceuticals. Cambridge, UK: Woodhead, 3-25

94. Kirby, C. J. (1991). Microencapsulation and controlled delivery of food ingredients. Food Science and Technology International, 5, 74-78.

95. Ubbink, J., Kruger, J. (2006). Physical approaches for the delivery of active ingredients in foods. Trends in Food Science and Technology, 17, 244-254

96. Semenova M.G. and Dickinson E. (2010). Biopolymers in Food Colloids: Thermodynamics and Molecular Interactions. Eds: E.B. Burlakova and G.E. Zaikov, Leiden: Brill, pp. 350.

97. Lemay, D.G., Dillard, C.J., German, J.B. (2007). Food structure for nutrition. In Dickinson, E., Leser, M.E. (Eds). Food Colloids: Self-assembly and Material Science, Cambridge, UK: Royal Society of Chemistry, 1-15.

98. Lefevre, T., Subirade, M. (2000). Molecular differences in the formation and structure of fine-stranded and particulate P-lactoglobulin gels. Biopolymers, 54, 578-586.

99. Roff, C.F., Foegeding, E.A. (1996). Dicationic-induced gelation of pre-denatured whey protein isolate. Food Hydrocolloids, 10, 193-198

100. Veerman, C., Baptist, H., Sagis, L.M.C., van der Linden, E. (2003). A new multistep Ca2+- induced cold gelation process for beta-lactoglobulin. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 51, 3880-3885

101. Maltais, A., Remondetto, G.E., Gonzales, R., Subirade, M. (2005). Formation of soy protein isolate cold-set gels: protein and salt effects. Journal of Food Science, 70, 67-73.

102. Chen, L., Remondetto, G.E., Subirade, M. (2006). Food protein-based materials as nutraceutical delivery systems. Trends in Food Science and Technology, 17, 272-283.

103. Remondetto, G.E., Paquin, P., Subirade, M. (2002). Cold gelation of p-lactoglobulin in the presence of iron. Journal of Food Science, 67, 586-595.

104. Remondetto, G.E., Subirade, M. (2003). Molecular mechanisms of Fe-induced p-lacto- globulin cold gelation: an interactions story. Biopolymers, 69,461-469.

105. Remondetto, G.E., Beyssac, E., Subirade, M. (2004). Influence of the microstructure of biodegradable whey protein hydrogels on iron release: an in vitro study. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 52, 8137-8143.

106. Zhang, Y., Yang, Y., Tang, K., Hu, X., Zou, G. (2008). Physicochemical characterization and antioxidant activity of quercetin-loaded chitosan nanoparticles. Journal of Applied Polymer Science, 107, 891-897.

107. Dickinson, E. (2001). Milk protein adsorbed layers and the relationship to emulsion stability and rheology. Studies in Surface Science and Catalysis, 132, 973-978.

108. Dickinson, E. (2006). Structure formation in casein-based gels, foams, and emulsions. Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects, 288, 3-11

109. Keogh, M.K., O'Kennedy, B.T., Kelly, J., Auty, M.A., Kelly, P.M., Fureby, A„ Haahr, A.-M. (2001). Stability to oxidation of spray-dried fish oil powder microencapsulated using milk ingredients. Journal of Food Science, 66, 217-224.

110. McClements, D.J. (2004). Protein-stabilized emulsions. Current Opinion in Colloid and Interface Science, 9, 305-313.

111. Damodaran, S. (2005). Protein stabilization of emulsions and foams. Journal of Food Science, 70, 54-66.

112. Chu, B.S., Ichikawa, S., Kanafusa, S., Nakajima, M. (2007). Preparation of protein-stabilized p-carotene nanodispersions by emulsification-evaporation method. Journal of the American Oil Chemists' Society, 84, 1053-1062.

113. Chen, C.C., Wagner, G. (2004). Vitamin E nanoparticle for beverageapplications. Chemical Engineering Research and Design, 82, 1432-1437.150

114. Drusch, S. (2007). Sugar beet pectin: a novel emulsifying wall component for micro-encapsulation of lipophilic food ingredients by spray-drying. Food Hydrocolloids, 21, 1223-1228.

115. Balk, E.M., Lichtenstein, A.H., Chung, M., Kupelnick, B., Chew, P., Lau, J. (2006). Effects of omega-3 fatty acids on serum markers of cardiovascular disease risk: a systematic review. Atherosclerosis, 189,19-30.

116. Klaypradit, W., Huang, Y.-W. (2008). Fish oil encapsulation with chitosan using ultrasonic atomizer. Food Science and Technology, 41, 1133-1139.

117. Eliot, C., Dickinson, E. (2003). Thermoreversible gelation of caseinate-stabilized emulsions at around body temperature. International Dairy Journal, 13, 679-684.

118. Anal, A.K., Tobiassen, A., Flanagan, J., Singh, H. (2008). Preparation and characterization of nanoparticles formed by chitosan-caseinate interactions. Colloids and surfaces B: Biointerfaces, 64, 104-110

119. H. Singh, A. Q. Ye and D. Home (2009). Structuring food emulsions in the gastrointestinal tract to modify lipid digestion, Progress in Lipid Research., 48(2), 92-100

120. Dickinson, E. (2009). Hydrocolloids as emulsifiers and emulsion stabilizers. Food Hydrocolloids, 23, 1473-1482

121. McClements, D.J. (2005). Theoretical analysis of factors affecting the formation and stability of multilayered colloidal dispersions. Langmuir, 21, 97779785

122. Dickinson, E. (2007). Food Colloids. Editorial overview. How do interactions of ingredients control structure, stability and rheology? Current Opinion in colloid and Interface science, 12, 155-157

123. Dickinson, E. (2008). Interfacial structure and stability of food emulsions as affected by protein-polysaccharide interactions. Soft Matter, 4, 932-942

124. Turgeon, S.L., Schmitt, C., Sanchez, C. (2007). Protein-polysaccharide complexes and coacervates. Current Opinion in Colloid and Interface Science, 12, 166-178.

125. Dickinson, E. (2010). Food emulsions and foams: Stabilization by particles. Current Opinion in Colloid & Interface Science, 15,40—49

126. Yoav D. Livney, (2010). Milk proteins as vehicles for bioactives. Current Opinion in Colloid & Interface Science, 15, 73-83

127. McClements, D.J. (2006). Non-covalent interactions between proteins and polysaccharides. Biotechnology Advances, 24, 621-625

128. Guerin, D., Vuillemard, J.C., Subirade, M. (2003). Protection of bifidobacteria encapsulated in polysaccharide-protein gel beads against gastric juice and bile. Journal of Food Protection, 66, 2076-2084

129. Levy, M.C., Edwards-Levy, F. (1996). Coating alginate beads with cross-linked biopolymers: a novel method based on a transacylation reaction. Journal of Microencapsulation, 13, 169-183.

130. Schmitt, C., Sanchez, C., Sobry-Banon, S., Hardy, J. (1998). Structure and technofunctional properties of protein-polysaccharide complexes. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 38, 689-753

131. Livney, Y.D. (2008). Complexes and conjugates of biopolymers for delivery of bioactive ingredients via food. In Garti, N. (Ed.). Delivery and Controlled Release of Bioactives in Foods and Nutraceuticals, Cambridge, UK: Woodhead, pp. 234-250.

132. Zimet, P., Livney, Y.D. (2009). Beta-lactoglobulin and its nanocomplexes with pectin as vehicles for 01-3 polyunsaturated fatty acids. Food Hydrocolloids, 23, 1120-1126.

133. Dickinson, E. (2008). Emulsification and emulsion stabilization with protein-poly saccharide complexes. In Gums and Stabilizers in the food Industry. Eds. Philips G.O., Wedlock, D.J., Williams, P.A., IRL Press, Oxford, 14, 221-232

134. Semenova, M.G., Antipova, A.S., Belyakova, L.E. (2002). Food protein interactions in sugar solutions. Current opinion in Colloid & Interface Science, 7, 438-444

135. A Kato, Y Sasaki, R Furuta, K Kobayashi (1990). Functional protein-polysaccharide conjugate prepared by controlled dry-heating of ovalbumin-dextran mixtures Agricultural and biological chemistry, 54(1), 107-12.

136. Dickinson, E., Galazka, V.B. (1991). Emulsion stabilization by ionic and covalent complexes of P-lactoglobulin with polysaccharides. Food Hydrocolloids, 5, 281-296

137. Dickinson, E., Galazka, V.B.,(1992). in Gums and Stabilisers for the Food Industry, eds. Phillips, G.O., Wedlock, D.J., Williams, P.A., IRL Press, Oxford, 6, 351- 357

138. Dickinson, E., Semenova, M.G. (1992). Emulsifying properties of covalentprotein—dextran hybrids. Colloids and Surfaces, 64, 299-310.153

139. Kato, A., Minaki, K., Kobayashi, K. (1993). Improvement of emulsifying properties of egg white proteins by the attachment of polysaccharide through Maillard reaction in a dry state. Agricultural and food chemistry, 41, 540-543.

140. Dunlap, C.A., Cote, G.L., (2005). P-Lactoglobulin-Dextran Conjugates: Effect of Polysaccharide Size on Emulsion Stability. Agricultural and food chemistry, 53, 419-423.

141. N. Neirynck, P. Van der Meeren, S. Bayarri Gorbe, S. Dierckx, K. Dewettinck (2004). Improved emulsion stabilizing properties of whey protein isolate by conjugation with pectins. Food Hydrocolloids, 18, 949-957.

142. Ulrike Einhorn-Stoll, Marco Ulbrich, Sarah Sever, Herbert Kunzek (2005). Formation of milk protein-pectin conjugates with improved emulsifying properties by controlled dry heating. Food Hydrocolloids, 19, 329-340.

143. Ames, J. M. (1992). The Maillard reaction. In B. J. F. Hudson (Ed.), Biochemistry of food proteins (pp. 99-153). London: Elsevier Science Publishers.

144. Fayle, S.E., & Gerrard, J.A. (2002). The Maillard Reaction. Cambridge, UK: Royal Society of Chemistry.

145. Dickinson, E., & Euston, S. R. (1991). Stability of food emulsions containing both proteins and polysaccharides. In E. Dickinson (Ed.), Food polymers, gels and colloids, 132-146.

146. Dills, W.I. (1993). Protein fructosylation: Fructose and the Maillard reaction. American Journal of Clinical Nutrition, 58, 779-787.

147. Schmitt, C., Sanchez, C., Desobry-Banon, S., & Hardy, J. (1998). Structure and technofunctional properties of protein-polysaccharide complexes. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 38, 689-753

148. Shepherd, R.; Robertson, A.; Ofman, D. (2000). Dairy glycoconjugate emulsifiers: Casein-maltodextrins. Food Hydrocolloids, 14, 281-286

149. Akhtar, M., Dickinson, E., (2007). Whey protein-maltodextrin conjugates as emulsifying agents: and alternative to gum Arabic. Food Hydrocolloids, 21, 607616

150. Akhtar, M., and Dickinson, E. (2003). Emulsifying properties of whey protein-dextran conjugates at low pH and different salt concentrations. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 31, 125-132

151. Campbell, L., Raikos, V., and Euston, S. (2003). Modification of functional propertiesof egg-white proteins. Nahrung, 47, 369-376

152. Gerrard, J.A., Brown, P.K., and Fayle, S.E. (2003b). Maillard crosslinking of food proteins III: The effects of gluteraldehyde, formaldehyde and glyceraldehydes upon bread and croissants. Food Chemistry, 80, 45-50

153. Kato, Y., Aoki, T., Kato, N., Nakamura, R., and Matsuda, T. (1995). Modification of ovalbumin with glucose-6-phosphate by amino-carbonyl reaction. Journal of Agricultural Food Chemistry, 43 (2), 301-305

154. Manzocco, L., Calligaris, S., Mastrocola, D., Nicoli, M.C., and Raffaele, C.2000).Review of non-enzymatic browning and antioxidant capacity in processed foods. Trends Food Science Technology, 11, 340-346

155. Sun, Y., Hayakawa, S., and Izumori, K. (2004). Modification of ovalbumin with a rare ketohexose through the Maillard reaction:effect on protein structure and gel properties. Journal of Agricultural Food Chemistry, 52, 1293-1299

156. Jiminez-Castaco, L., Lypez-Fandico, R., Olano, A., & Villamiel, M. (2005). Study on blactoglobulin glycosylation with dextran: Effect on solubility and heat stability. Food Chemistry, 93, 689-695

157. Kato, A. (2002). Industrial applications of Maillard-type protein-polysaccharide conjugates. Food Science and Technology Research, 8, 193-199

158. Koichi Nagasawa, Koji Takahashi, Makoto Hattori (1996). Improved emulsifying properties of (3-lactoglobulin by conjugating with carboxymethyl dextran. Food Hydrocolloids, 10, 63-67

159. Dickinson, E., and Izgi, E. (1996). Foam stabilization by protein-polysaccharide complexes. Colloids and Surfaces A:Physicochemical and Engineering Aspects, 113, 191-201

160. Morris, G. A.; Sims, I. M.; Robertson, A. J.; Furneaux, R. H. (2004). Investigation into the physical and chemical properties of sodium caseinate-maltodextrin glyco-conjugates. Food Hydrocolloids, 18, 1007-1014

161. O'Regan, J., & Mulvihill, D. M. (2009a). Preparation, characterization and selected functional properties of sodium caseinate-maltodextrin conjugates. Food Chemistry, 115, 1257-1267

162. O'Regan, J., & Mulvihill, D. M. (2010). Heat stability and freeze thaw stability of oil in water emulsions stabilized by sodium caseinate-maltodextrin conjugates. Food Chemistry, 119, 182-190

163. O'Regan, J., Mulvihill, D.M. (2010). Sodium caseinate maltodextrin conjugate stabilized double emulsions: encapsulation and stability. Food Research International, 43, 224-231

164. Dickinson, E. (2003). Hydrocolloids at interfaces and the influence on the properties of dispersed systems. Food Hydrocolloids, 17, 25-39

165. Ennis, M.P., & Mulvihill, D.M. (2005). Milk proteins. In G.O. Phillips & P.A. Williams (Eds.), Handbook of hydrocolloids. Cambridge, England: CRC Press., 189-217

166. Dickinson, E. (1998). Proteins at interfaces and in emulsions. Stability, rheology and interactions. Journal of the Chemical Society, Faraday Transactions, 1657-1669.

167. Grigoriev, D.O., Miller R. (2009). Mono-and multilayer covered drops as carriers. Current Opinion in Colloid and Interface Science, 14,48-59.

168. Benichou, A., Aserin, A., Garti, N. (2002). Double emulsions stabilized by new molecular recognition hybrids of natural polymers. Polymers for Advanced Technologies, 13, 1019-1031.

169. Physiology of the gastrointestinal tract: в 2 т. / Ed. L.R.Johnson. N.Y., 1987

170. Химия биологически активных природных соединений (углевод-белковые комплексы, хромопротеиды, липиды, липопротеиды, обмен веществ). Под ред. Н.А. Преображенского и Р.П. Евстигнеевой. М., «Химия», 1976,456 стр

171. McClements, D.J., Li, Y. (2010) Review of in-vitro digestion models for rapid screening of emulsion-based systems. Food & Function 1, 32-59

172. А.Я.Николаев. Биологическая химия. 3-е изд., перераб. И доп. - М.: Медицинское информационное агентство. - 2004. - 566 е.: ил.

173. Скурихин И.М., Нечаев А.П. Все о пище с точки зрения химика: Справ, издание. С 46 М.: Высш. шк. 1991. - 288 е.: ил.

174. Garti, N. (Ed.). (2008) Delivery and Controlled Release of Bioactives in Foods in Nutraceuticals. Cambridge, UK: Woodhead

175. M. Armand (2007). Lipases and lipolysis in the human digestive tract: where do we stand? Current Opinion in Clinical and Nutrition Metabolic Care, 10(2), 156-164.

176. M. Mukherjee (2003). Human digestive and metabolic lipases a brief review, Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 22(5-6), 369-376

177. E. Bauer, S. Jakob and R. Mosenthin (2005). Principles of physiology of lipiddigestion, Asian-Australasian Journal of Animal Sciences, 18(2), 282-295

178. C. J. H. Porter and K. M. Wasan (2008). Lipid-based systems for the enhanced delivery of poorly water soluble drugs, Adv. Drug Delivery Rev., 60(6), 615-616.

179. C. W. Pouton, (2006). Formulation of poorly water-soluble drugs for oral administration: Physicochemical and physiological issues and the lipid formulation classification system. Eur. Journal of Pharmaceutical Sciences, 29(3-4), 278-287

180. G. S. Patten, et al., (2009). Site Specific Delivery of Microencapsulated Fish Oil to the Gastrointestinal Tract of the Rat, Dig. Dis. Sci., 54(3), 511-521

181. D. J. McClements, E. A. Decker and Y. Park, (2009). Controlling Lipid Bioavailability through Physicochemical and Structural Approaches. Critical Review in Food Science and Nutrition, 49(1), 48-67.

182. Sagalowicz, L., Leser, M.E. (2010). Delivery systems for liquid food products Current Opinion in Colloid & Interface Science 15, 61-72.

183. R.M. Faulks, A.L. Bailey (1990). Digestion of cooked starches from different food sources by porcine a-amylase. Food Chemistry 36, 191-203

184. De Zorzi M., Curioni A., Simonato B., Giannattasio M., Pasini G. (2007). Effect of pasta drying temperature on gastrointestinal digestibility and allergenicity of durum wheat proteins. Food Chemistry 104, 353-363

185. Hur S.J., Joo S.T., Lim B.O., Decker E.A., McClementsD.J. (2011). Impact of salt and lipid type on in vitro digestion of emulsified lipids Food Chemistry, 126, 1559-1564

186. Hur S.J., Decker E.A., McClements DJ. (2009). Influence of initial emulsifier type on microstructural changes occurring in emulsified lipids during in vitro digestion. Food Chemistry, 114, 253-262

187. Wang P., Hai-Jie Liu H.-J., Xue-Ying Mei X.-Y., Nakajima M., Yin L.-J. (2012). Preliminary study into the factors modulating ß-carotene micelle formation in dispersions using an in vitro digestion model. Food Hydrocolloids, 26, 427^33

188. S.D. Kulkarni, R. Acharya, N.S. Rajurkar, A.V.R. Reddy (2007). Evaluation of bioaccessibility of some essential elements from wheatgrass (Triticum aestivum L.) by in vitro digestion method. Food Chemistry, 103, 681-688

189. Hur S.J., Lim B.O., Decker E.A., McClements D.J. (2011). In vitro human digestion models for food applications. Food Chemistry, 125, 1-12

190. Argyri K., Birba A., Miller D.D., Komaitis M., Kapsokefalou M. (2009). Predicting relative concentrations of bioavailable iron in foods using in vitro digestion: New developments. Food Chemistry, 113, 602-607

191. Li Y., Hu M., McClements D.J. (2011). Factors affecting lipase digestibility of emulsified lipids using an in vitro digestion model: Proposal for a standardised pH-stat method. Food Chemistry, 126, 498-505

192. Bermüdez-Soto M.-J., Tomäs-Barberän F.-A., Garcia-Conesa M.-T. (2007). Stability of polyphenols in chokeberry (Aronia melanocarpa) subjected to in vitro gastric and pancreatic digestion. Food Chemistry, 102, 865-874

193. Carnachan S.M., Bootten T.J., Mishra S., Monro J.A., Sims I.M. (2012). Effects of simulated digestion in vitro on cell wall polysaccharides from kiwifruit (Actinidia spp.). Food Chemistry, 133, 132-139

194. Miao M., Jiang B., Zhang T., Jin Z., Mu W. (2011). Impact of mild acid hydrolysis on structure and digestion properties of waxy maize starch. Food Chemistry, 126, 506-513

195. German J.B., Dionisi F. (2011). Milk as a model of Bioavailability Delivery of Functionality in Complex Food Systems Physically-Inspired Approaches from the Nanoscale to the Microscale 4th International Symposium, 8-9

196. Mackie, A., Macierzanka, A. (2010). Colloidal aspects of protein digestion. Current Opinion in Colloid & Interface Science, 15 102-108.

197. Macleod, G.S., Collet, J.H., Fell, J.T. (1999). The potential use of mixed films of pectin, chitosan and HPMC for bimodal drug release. Journal of Controlled Release, 58, 303-310.

198. Tagliazucchi D, Verzellon E., Davide Bertolinia, Angela Contea (2010). In vitro bio-accessibility and antioxidant activity of grape polyphenols Food Chemistry, 120, 599-606

199. M.-J. Bermudez-Soto, F.-A. Tomas-Barberan, M.-T. Garcia-Conesa (2007). Stability of polyphenols in chokeberry (Aronia melanocarpa) subjected to in vitro gastric and pancreatic digestion. Food Chemistry, 102, 865-874

200. Biehler E., Kaulmann A., Hoffmann L., Krause E., Bohn T. (2011). Dietary and host-related factors influencing carotenoid bioaccessibility from spinach (Spinacia oleracea). Food Chemistry, 125, 1328-1334

201. Argyri K., Komaitis M., Kapsokefalou M. (2006). Iron decreases the antioxidant capacity of red wine under conditions of in vitro digestion. Food Chemistry, 96, 281-289

202. Shim S.-M., Ferruzzi M.G., Kim Y.-C., Janle E.M., Santerre C.R. (2009). Impact of phytochemical-rich foods on bioaccessibility of mercury from fish. Food Chemistry, 112, 46-50

203. Howard P., Mahoney R.R. (1989). Effect of dietary fibers on the enzymatic digestion of casein. Food Chemistry, 34, 141-146

204. A. Popoulou, M. Komaitis, M. Kapsokefalou (2006). Effects of iron, ascorbate, meat and casein on the antioxidant capacity of green tea under conditions of in vitro. Food Chemistry, 94, 359-365

205. Beysseriat M, Decker EA, McClements DJ (2006). Preliminary study of the influence of dietary fiber on the properties of oil-in-water emulsions passing through an in vitro human digestion model. Food Hydrocolloids 20, 800-809.

206. Malaki N. A; Corredig M., Wright A.J. (2011). Release of lipophilic molecules during in vitro digestion of soy protein-stabilized emulsions. Molecular nutrition and Food Research, 55, 278-289

207. Wickham M, Faulks R, Clare M. (2009). In vitro digestion methods for assessing the effect of food structure on allergen breakdown. Molecular nutrition and Food Research. 53(8), 952-958.

208. Borel P. (2003). Factors affecting intestinal absorption of highly lipophilic food microconstituents (fat-soluble vitamins, carotenoids and phytosterols). Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, 41, 979-994.

209. Porter CJ, Charman WN. (2001). In vitro assessment of oral lipid based formulations. Advances in Drug Delivery Review, 50, 127-147.

210. Yonekura L., Nagao A. (2007). Intestinal absorption of dietary carotenoids Molecular Nutrition and Food Research, 51, 107-115

211. Golding, M., Wooster, T. J., (2010). The influence of emulsion structure and stability on lipid digestion. Curr. Opin. Colloid Interface Sci., 15, 90-101

212. McClements D.J., Li Y. (2010). Structured emulsion-based delivery systems: Controlling the digestion and release of lipophilic food components. Advances in Colloid and Interface Science, 159, 213-228

213. Roefs, S. P. F. M., Groot-Mostert de, A. E. A., Vliet van, T. (1990). Structure of acid gels, formation and model of gel network. Colloids and Surfaces 50, 141159.

214. Braga, A. L. M., Menossi, M., Cunha, R. L. (2006). The effect of the glucono-5-lactone/caseinate ratio on sodium caseinate gelation. International Dairy Journal. 16, 389-398

215. C. Holt, (1992). Structure and stability of the bovine casein micelle in Advances in Protein Chemistry, eds. C.B. Anfinsen, J.D.Edsall, F.R. Richards, and D.S. Eisenberg, Academic Press, 43, 63-151.

216. D.S. Home (2002). Protein-stabilized emulsions. Current Opinion in Colloid & Interface Science, 7, 456-461.

217. D.S. Home (2006). Casein micelle structure: models and muddles. Current Opinion in Colloid & Interface Science, 11, 148-153.

218. Jr. H.M. Farrell, E.L. Malin, E.M.Brown, and P.X. Qi, (2006). Casein micelle structure: What can be learned from milk synthesis and structural biology? Current Opinion in Colloid & Interface Science, 11, 135-147.

219. J. A. Lucey, M.Srinivasan, H.Singh and P.A. Munro, (2000). Characterization of commercial and experimental sodium caseinates by multiangle laser light scattering and size-exclusion chromatography. Journal of Agricultural Food Chemistry, 48, 1610-1616.

220. Chu, B., Zhou, Z., Wu, G., Farrell, H. M. (1995) Laser light scattering of model casein solutions: effects of high temperature. Journal of Colloid Interface Science, 170, 102-112.

221. Home, D.S. (2002). Casein structure, self-assembly and gelation. Current opinion in Colloid & Interface Science, 7,456-461

222. Dickinson, E. The role of hydrocolloids in stability particulate dispersions and emulsion (1988) In Gums and Stabilisers for the Food Industry; eds. Phillips, G.O., Wedlock, D. J.; Williams, P. A.; IRL Press: Oxford, 4, 249-263.

223. Sindayikengera et al. (2006) Nutritional evaluation of caseins and whey proteins and their hydrolysates from Protamex, Journal of Zhejiang University Science B, 7(2), 90-98

224. Swaisgood H.E. (1996). Characteristics of Milk. In: Fenemma O.R., editor. Food Chemistry. 3rd Ed. Marcel Dekker, Inc. New York, 841-878

225. Semo, E., Kesselman, E., Danino, D., Livney, Y.D. (2007). Casein micelle as a natural nano-capsular vehicle for nutraceuticals. Food Hydrocolloids, 21, 936942

226. Matthew J. Mollan Jr. and Celik M., Maltodextrin. The State University of New Jersey, Piscataway, NJ 08855

227. Richter M., Schierbaum F., Augustat S., Knoch K.D. US Patent no. 3962465, 1976.

228. Harkema Ir. J., Paselli SA-2 and Paselli Excel. In Ingredients Handbook. Fat Substitutes; Dalzell J. M. (Ed.) Surrey: Leatherhead Food RA. 1998, 103-115.

229. Product Design and Engineering : best practices. (2007). Raw materials, Aditives and Applications Ulrich Brockel, Willi Meier and Gerhard Wagner (Editors) Wiley-VCH Verlag GmbH& Co. KGaA, Weinheim, 2, 734 pages

230. L. Dokic-Baucal , P. Dokic and J. Jakovljevic (2004). Influence of different maltodextrins on properties of O/W emulsions. Food Hydrocoll., 18 (2), 233-239

231. Chronakis I. S. (1998). On the molecular characteristics, compositional properties, and structural-functional mechanisms of maltodextrins: A review. Critical Review in Food Science and Nutrition, 38(7), 599-637

232. Reuther F., Plietz P., Damaschun, G., Purschel H.-V., Krober R., Schierbaum F. (1983). Structure of maltodextrin gels a small angle X-ray scattering study. Colloid Polymer Science, 261 -271.

233. Dokic P., Jakovljevic J., Baucal L. D. (1998). Molecular characteristics of maltodextrins and theological behaviour of diluted and concentrated solutions. Colloids and Surfaces, 141 (3), 435-440.

234. Biliaderis C. G., Swan R. S., Arvanitoyannis I. (1999). Physicochemical properties of commercial starch hydrolyzates in the frozen state. Food Chemistry, 64 (4), 537-546.

235. Wang Y. J., Wang L. (2000). Structures and Properties of Commercial Maltodextrins from Corn, Potato, and Rice Starches. Starch, 52 (7-8), 296-304.

236. Richter M., Schierbaum F., Augustat S., Knoch K.D. US Patent no. 3962465, 1976

237. Нечаев, А.П., Кочеткова А.А., Зайцев A.H. Пищевые добавки. M.: Колосс, Колосс-Пресс. 2002. -256 е.: ил.

238. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М.: просвещение, 1987. -815 е.: ил.

239. Бурлакова Е.Б., Поритов Х.О., Сторижнок Н.М., Крашков С.А., Храпова Н.Г. О константе скорости реакции феноксильных радикалов токоферола с высшими жирными кислотами и фосфолипидами. Биоантиоксидант: тез. докл. конф. М., 1992.

240. Храпова Н.Г., Егоров В.Ю., Крашков С.А. Исследование дикорастущих препаратов растений как потенциальных источников стабилизаторов для пищевых продуктов и липидных препаратов. Биоантиоксидант : тез. докл. конф. М., 1992.,

241. Ю.П.Гичев, Ю.Ю.Гичев, «Мир наших продуктов для здоровья», Изд. 4-е. Новосибирск, 2004. - 224 с.

242. A. I. Archakov and К. J. Gundermann, eds.,Phosphatidylcholine on Cell Membranes and Transport of Cholesterol,wbn-Verlag-Bingen, Rhein, Germany, 1988.

243. Максимов В.А.(2008). Жировой гепатоз: патогенез и основные принципы лечения. Медицинский вестник, 22, 449-455

244. Мецлер, Д. Биохимия, том 1. Химические реакции в живой клетке. Изд-во «Мир», Москва, 1980. 408 с.

245. Dunjic BS, Axelson J, Ar'Rajab A, Larsson K, Bengmark S. (1993). Gastroprotective capability of exogenous phosphatidylcholine in experimentallyinduced chronic gastric ulcers in rats. Scand. J. Gastrol. 28, 89-94166

246. Бородин Е.А., Арчаков А.И., Лопухин Ю.М. (1985). Теоретическое обоснование использования ненасыщенных фосфолипидов для восстановления структуры и функции поврежденных биологических мембран. Вестник АМН СССР, 3, 84-90

247. Гичев, Ю.Ю., Гичев, Ю.П. (2009). Новое руководство по микронутриентологии. Биологические добавки к пище и здоровье человека. Из-во «Триада-Х», Москва -304 с.

248. Kidd, P.M. (1996). Phosphatidylcholine: A superior protectant against liver damage. Alternative Medicine Review, 1,258-274.

249. Ипатова, Л.Г., Кочеткова, A.A., Нечаев, А.П., Тутельян, В.А. (2009). Жировые продукты для здорового питания. Современный взгляд. Из-во «ДеЛи принт», Москва.

250. В.Н. Короткий, И.В. Колосович, В.В. Чегусов (2008). Эссенциальные фосфолипиды в комплексном лечении больных с печеночной недостаточностью, вызванной длительной механической желтухой, Медицина сегодня, 10, 245-251

251. Сайт Codex alimentarius (F AO/WHO Food Standards) http://www.codexalimentarius.net/gsfaonline/additives/details.html?id=77

252. Дополнения к «Медико-биологическим требованиям и санитарным нормам качества продовольственного сырья и пищевых продуктов». Пищевые добавки утв. Госкомсанэпиднадзором РФ от 14 августа 1994г. N 01-19/42-11 ,

253. F. Orthoefer and S. U. Gurkin (1992). Lecithin-the universal ingredient. Food Marketing Technol. 12, 11-14

254. G. Gregoriadis and A. T. Florence (1993). Liposomes in drug delivery. Clinical, diagnostic and ophthalmic potentional. Drugs 45(1), 15-28

255. Taylor, T.M., Davidson, P.M., Bruce, B.D. and Weiss, J. (2005) Liposomal nanocapsules in food science and agriculture. Critical Review in Food Science and Nutrition, 45, 1-19

256. Тенфорд, Ч. Химия полимеров Москва: «Химия» - 1965

257. Rha С., Pradipasena P. (1985). Viscosity of proteins. In Functional properties of food macromolecules; Mitchell J. R. and Ledward D. A. (Eds.) London-New-York: Elsevier applied science publishers, 2, 79-120.

258. Burchard, W. (1994). Light scattering. In Physical Techniques for the Study of Food Biopolymers; S. B. Ross-Murphy (Ed.) Glasgow: Blackie, 151- 214.

259. Evans J.M. (1972). Manipulation of light scattering data. In Light scattering from polymer solutions; Huglin M. B. (Ed.) London: Academic Press, 5, 89-164

260. Home D.S. (1995). Light scattering studies of colloidal stability and gelation. In New Physico-Chemical Techniques for the Characterization of Complex Food Systems; Dickinson E. (Ed). Glasgow: Blackie, 240-267

261. Mosca M., Ceglie A., Ambrosone L. (2001). Effect of membrane composition on lipid oxidation in liposomes. Chemistry and Physics of Lipids, 164, 158-165.

262. Dahle, L. K., Hill, E. G., and Homan. R. Т., (1962). The thiobarbituric acid reaction and the autoxidations of polyunsaturated fatty acid methyl esters. Arch. Biochem. Biophys. 98, 253-261

263. Yu, Т. C. and Sinnhuber, R. O. (1957). 2-thiobarbituric acid method for the measurement of rancidity in fishery products. Food Technol. 11, 104-108

264. Kwon, T. W. and Watts, B. M. (1964). Malonaldehyde in aqueous solution and its role as a measure of lipid oxidation in foods J. Food Sci. 29, 294-302

265. Melton, S. L. (1983). Methodology for following lipid oxidation in muscle foods. Food Tech., 37, 105-116.

266. Leland K. Dahle, Eldon G. Hill and Ralph T. Holman (1962). The Thiobarbituric Acid Reaction and the Autoxidations of Polyunsaturated Fatty Acid Methyl Esters. Arch. Of Bioch. And Biophys., 98, 253-261

267. R. O. Sinnhuber and T. C. Yu (1958). 2-thiobaribituric acid method for the measurement of rancidity in fishery products. The quantitative determination of malonaldehyde. Food Technol., 12 9-12.

268. B. G. Tarladgis, B. M. Watts and M. T. Younathan, (1960). A distillation method for the quantitative determination of malonaldehyde in rancid foods. J. Am. Oil Chem. Soc., 37, 44-48.

269. W. V. Vyncke (1975). Evaluation of the direct thiobarbituric acid extraction method for determining oxidative rancidity in mackerel (Scomber scombrus L.). Fette, Seifen, Anstrichm., 77, 239-240.

270. Bernheim, F. M., Bernheim, L. C. & Wilbur, K. M. (1948). The reaction between thiobarbituric acid and the oxidation products of certain lipids. Journal of Biological Chemistry, 174, 257-64.

271. Hoyland D.V., Taylor A.J. (1991) A review of the Methodology of the 2-thiobarbituric acid test. Food chemistry, 40, 271-291.

272. Kohn. H. I., and Liversedge, M., (1944). On a new aerobic metabolite whose production by brain is inhibited by apomorphine, emetine, ergotamine, epinephrine, and menadione f. Pharmacol. Exp. Ther. 82, 292-300.

273. Nair V., Turner G.A. (1984) The thiobarbituric acid test for lipid peroxidation: Structure of the adduct with malondialdehyde. Lipids, 19, 10, 804805

274. Privalov P.L. & Khechinashvili N.N. (1974) A Thermodynamic Approach to the Problem of Stabilization of Globular Protein Structure: A Calorimetric Study. Journal of Molecular Biology, 86 , 665 -684.

275. Tanford, C. (1961). Physical chemistry of macromolecules. New York: Wiley.

276. E. Tsaliki, U. Kechagia and G. Doxastakis (2002). Evaluation of the foaming properties of cottonseed protein isolates. Food Hydrocolloids, 16, (6), 645-652.

277. Brent S. Murray, Rammile Ettelaie (2004). Foam stability: proteins and nanoparticles. Current Opinion in Colloid & Interface Science, 9, 314-320.

278. Gennis, R.B. (1989). Biomembranes.Molecular structure and function. In Charles R. cantor, Advanced text in Chemistry. Berlin: Springer.

279. C. M. Oliver, L. D. Melton and R. A. Stanley (2006). Creating proteins with novel functionality via the Maillard reaction: a review. Critical Review in Food Science and Nutrition, 46, 337-350.

280. M. Friedman (1996). Food Browning and Its Prevention: An Overview. Journal of Agricultural Food Chemistry, 44, 631-653.