Биологически активные изопреноиды листьев облепихи тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК Сибирское отделение Новосибирский институт биоорганической химии

На правах рукописи УДК 547.926

КУКИНА ТАТЬЯНА ПЕТРОВНА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ИЗОПРЕНОИДЫ ЛИСТЬЕВ ОБЛЕПИХИ

02.00.10 - биоорганическая химия, химия природных и физиологически активных веществ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Новосибирск - 1992

Работа выполнена в Новосибирском институт^ органический химии СО РАН

Научный руководитель - доктор химических наук В.А.Ралдугин

Официальные оппоненты - доктор химических наук А.А.Семенов

кандидат химических наук С.А.Шевцов

Ведущая организация -Институт, органического синтеза • и углехимии Центрально-Казахстанского ' Отделения АН Казахстана, г.Караганда

Защита диссертации состоится "30" З-Я^Э^'/П/ок/ в часов на заседании специализированного совета по присуждению ученой степени кандидата химических наук В Новосибирском институте биорганической химии СО РАН по адресу 630090 г. Новосибирск, пр. Акад. Лаврентьева, 8

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биоорганической химии СО РАН

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного совета

к.х.н.

Федорова О.С.

Актуальность работы. Облепиха давно применяется в народной медицин© в качестве лекарственного растения. Общеизвестно облепиховое масло - ценный поливитаминный препарат, обладающий широким спектром фармакологического действия, что приводит к постоянному и быстрому росту потребности в этом лекарстве. В 80-х годах производство облепихового масла составляло около 50 тонн в год, в 19Э0 году достигло 200 тонн. Это требует значительного увеличения расхода пищевого сырья: ягод облепихи и подсолнечного масла, промышленного освоения диких популяций облепихи, включения в сырьевую базу низкока-ротинных и околюченных сортов, требующих дополнительных затрат при переработке. В то же время листья облепихи, являющиеся крупнотоннажным отходом переработки плодов, применяются в основном в качестве витаминной добавки в корм сельскохозяйственных животных. Поэтому химическая характеристика листьев облепихи позволит решить вопрос комплексной переработки облепихового сырья, а также расширения базы производства биологически активных препаратов подобного действия. Листья облепихи изучались недостаточно и лишь с точки зрения содержания некоторых витаминов и флавоноидов, не определяющих полностью практическую значимость этого растительного сырья.

Цель работы. Целью настоящей работы является изучение химического состава экстрактивных веществ листьев облепихи и определение содержания биологически активных соединений для оценки перспективности использования листьев в качестве сырья для получения фармакологических препаратов.

Научная новизна работы. Изучен состав нейтральной и кислой частей гидрофобных экстрактивных веществ листьев облепихи в сравнении с составом компонентов жома плодов. Идентифицировано 55 нейтральных и 20 кислых компонентов, из которых 40 обнаружено в облепихе впервые, а 35 ранее найдены в плодах того же растения. В листьях облепихи обнаружено значительное количество полипренолов, достигающее максимума во второй половине сентября. Впервые в листьях растений найдены

биологически активные вещества долихолы в количествах, сопоставимых с промышленными источниками этих соединений. Показано, что листья облепихи - перспективное сырье для получения фармакологических препаратов.

Практическая значимость работы. Высокая биологическая активность суммарных экстрактов листьев облепихи, их отдельных фракций и синтетических аналогов дает возможность выпуска на их основе эффективных фармакологических и косметических препаратов. Химическая характеристика экстрактивных веществ листьев облепихи создает теоретическую основу комплексной переработки облепихового сырья.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Всесоюзных совещаниях и конференциях "Исследование облепихи и облепихового масла" (Барнаул, 1983, Горький, 1985, Новосибирск 1987, Барнаул, 1989).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 статей и 4 тезисов докладов.

Структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 120 страницах, содержит 15 таблиц и 8 рисунков и состоит из введения, четырех глав, списка литературы и приложения. Первая глава посвящена обзору литературы об известных компонентах облепихи, выделенных из вегетативных и репродуктивных органов растения, и биологической активности етих соединений. Вторая глава включает анализ литературных данных по биологически активным полиизопреноидам - полипренолам и до-лихолам из различных источников растительного и животного происхождения. Б третьей главе обсуждаются результаты, полученные в процессе работы, четвертая излагает экспериментальную часть. Работа завершена выводами, списком литературы, включающим 157 наименований, и приложением, содержащим результаты биологических'испытаний.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Для детального исследования из эфирного экстракта листьев облепихи, разделенного предварительно на свободные и связанные кислоты и неомыляемый: остаток (нейтральную часть продуктов омыления), были выделены при помощи колоночной хроматографии (КХ) на силикагеле (СГ) фракции углеводородов, гю-лиизопреноидов, алифатических и тритерпеновых спиртов, сте-ринов, жирных кислот и тритерпеновых гидрокся- и дигидрокси-кислот. Идентификацию компонентов и расчет количественного состава проводили методами газозкидкостной хроматографии (ГЖХ) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Индивидуальные компоненты выделяли хроматографическими методами - адсорбционной и КХ на СГ и силикагеле, имгтрегнирован-ном азотнокислым серебром (СГ-АС), и идентифицировали сравнением ПМР- и масс-спектров с литературными. Полипренолы выделены препаративной ВЭЖХ.

1. Тритерпеноида листьев и плодов облепихи.

Е

НО

Р=Н - холестерин (-1) §=СНд - кампестерин (2) - _Р~ситостерин (3)

НО

цитростадиенол (5)

в

R

24-метиленциклоартанол (б) циклоартенол (7)

24-(Е)-этилиденциклоартанол (В) -

обтузифолиол (9)

^ у - 24-С-этил-

31-нор-ланоста-8,25(27)-диен -3^-ол (10)

R=H, ^=СН3 - 28-нор-олеан-12,18(17)-диен-З^-ол (II)

R1=H, R=CH3 - 28-нор-урс-12,18(17)-диен-З/З-ол (12)

- лупеол (13)

g=CH3 - Д-амирин (14)

R=CH0 - олеаноловый альдегид (15)

R=CHpOH - эритродиол (16)

R=CHg - о<-амирин (17) R=CH0 - урсоловыР альдегид (18) R=CH?0H - уваол (19)

Диметилстерины. Груша диметилстеринов представлена пятью компонентами с относительными временами удерживания (ОВУ) по ГЖХ на колонке, заполненной Хроматоном с Ъ% фазы БЕ-ЗО, 1.14, 1.27, 1-15, 1.05 и 1.15 (за 1.00 принято время удерживания р-ситостерина, записанного в тех же условиях). Вещества с близкими временами удерживания потребовали для идентификации дополнительной очистки на СГ-АС в виде ацетатов. В результате выделены ацетаты лупеола, циклоартенола и а-амирина. Температуры плавления (Тпл.) и спектральные характеристики близки к литературным, р-Амирин и 24-метилен-циклоартанол идентифицированы при помощи -хромато-масс-спект-рометрии (ХМС).

Метилстерины. Следующая по полярности группа соединений содержала 3 метилстерина: цитростадиенол (ОВУ 1.29), обтузи-фолиол (ОВУ 0.94) и 24-£-этил-31-норланоста-8,25(27)-диен~ Зр-ол (ОВУ 1.20). Цитростадиенол и 24-5~этал-31-норланоста-8,25(27)-диен-Зр-ол выделены в виде ацетатов в индивидуальном виде на СГ-АС. Сравнение ПМР- и масс-спектров, а также Тпл. с литературными данными подтвердило правильность идентификации по ОВУ. Обтузифолиол идентифицирован по данным ХМС.

Тритерпеновые альдегиды и диолы. При групповом разделении вместе-с метилстеринами была выделена пара соединений с ОВУ 1.60 и 1.78, относящихся, по данным масс-спектров, к тритерпеноидам урсанового и олеананового ряда с альдегидной группой при 17-ом углеродном атоме. Дополнительной очисткой на СГ они были отделены от примесей других компонентов и восстановлены борогидридом натрия. В результате получена смесь диодов, идентифицированных сравнением с аутентичными образцами как эритродиол и уваол. Таким образом, эти соединения идентифицированы как олеаноловый и урсоловый альдегиды. Нативные эритродиол и уваол были выделены из наиболее полярных фракций неомыляемого остатка (НО) и идентифицированы по ГЖХ сравнением с аутентичными образцами. Масс-спектры и ОВУ совпали с литературными данными для этих соединений.

Стерины■ Основным стерином листьев облепихи является р-ситостерин. Он выделен в индивидуальном виде из стериновой

фракции, а также в виде ацетата при ¡очистке других, соединений. Его ОВУ, Тпл., ПМР- и масс-спектры совпали с литературными. По данным ГЖХ (ОВУ) были идентифицированы кампестерин (0.'8) и холестерин (0.65).

Тритерпеновые нордиены. Фракция стеринов содержала, помимо основного компонента, соединения с ОВУ 1.39 и 1.49. Масс-спектры их сходны и свидетельствуют о принадлежности к урсановому и олеанановому ряду (линия иона с m/z 202, с интенсивностью 100%). Молекулярный ион с.m/z 410 дает возможность предположить структуру нортритерпенового диенас сопряженными двойными связями, что подтверждается его дальнейшей фрагментацией и У€>-спектром. Очисткой на СГ ети соединения были выделены в индивидуальном виде. Тпл., ПМР- и масс-спектры совпали с характеристиками аегицерадиенола (28-нор-оле-ан-12,1В(17)-Диен-3/3-ола) и его урсанового аналога - 28-нор-урс-12,18(17)-диен~3/3-ола. Последний выделен из природного источника впервые.

Тритерпеноиды мома плодов облепихи. Соединения: а- и р-амирины, 24-метиленциклоартанол, p-ситостерин, кампестерин, цитростадиенол, уваол и эритродиол ранее были обнаружены в жоме плодов облепихи. Лупеол, циклоартенол, обтузифолиол, тритерпеновые альдегиды и нордиены, 24-£-этил-31-норлано-ста-8,25(27)-диен-Зр-ол и холестерин не были найдены в этом сырье. Было предпринято детальное изучение минорных и не идентифицированных ранее компонентов эфирного экстракта жома плодов этого растения. При этом доказано присутствие в плодах облепихи обтузифолиола, олеанолового и урсолового альдегидов, холестерина, 24-£;-етил-31-норланоста~8,25 (27 )-диен-Зр~ ола. Тритерпеновые нордиены и циклоартенол не обнаружены, лупеол найден в следовых (менее 0.05% от веса неомыляемого остатка) количествах.

При подробном исследовании неомыляемого остатка экстракта жома плодов облепихи было выделено соединение (ОВУ 1.50, Тпл. ацетата 138-140°). Масс-спектр его близок к таковому для 24-метил^нциклоартанола, однако молекулярный ион отличается . па 14 массовых единиц. ПМР-спектр позволил предположить, что aro ЯД-итилидепциклоартанол с Е-конфигурацией этилидеиового

Ь

заместителя. На это указывает наличие мультиплетного сигнала при 2.20 м.д., такого же, как у изоцитростадиенола и фуко-стерина, соответствующего протону при Я5-ом атоме углерода. У цитростадиенола и изофукостерияа, имеющих г-конфигурацию этилиденового заместителя, сигнал соответствующего протона проявляется в виде гептета при 2.83 м.д. Для доказательства структуры этот компонент был окислен реагентом Джонса в ацетоне, в тех же условиях, что и 24-метиленциклоартанол. В обоих случаях выделен один и тот же продукт, идентифицированный по ПМР спектру как 24-оксоциклоартанол. В случае 24-этилиденциклоартанола получен также кетодиол с оксогруппой в 28-ом положении и гидроксилом при 24-ом атоме углерода.

29 >,26 0

+

Таким образом, в листьях и плодах облепихи идентифицированы 19 нейтральных полициклических спирта, содержание которых в неомыляемом остатке, а также в пересчете на цельный экстракт приведено в таблице 1 .

Кислые тритерпеноиды плодов и листьев облепихи. Тритер-пеновые кислоты находятся в плодах и листьях в свободном виде, в этерифицированном виде не обнаружены. Кроме найденных ранее урсоловой.и олеаноловой кислот, из экстракта листьев выделены в индивидуальном виде маслиновая и 2а-гидроксиурсо-ловая кислоты, а из экстракта жома плодов - помоловая кислота. Идентификацию этих соединений проводили, анализируя 13

спектры ПМР и ЯМР С. Масс-спектры и Тпл. производных также совпали с литературными.

К,- олеанодов

I о

(20)

Р^СНр - урсоловая кислота (21)

К=С!Г3, Н..=К2=Н, Р-3=0К - маслиновая кислота (22)

Р^СНд,

К=н2=Р.3=Н,

С00Н

К2=Н'

=СН3 БЦ=0Н - 2о<-гидрок-

сиурсоловэя кислота (23) К=Р3=Н, Й^СНд, Р^=0Н - помоловая кислота (24)

Таблица 1.

Содержание полициклических.спиртов в неомыляемых остатках и цельных экстрактах плодов и листьев облепихи.

Вещество (Н формулы) - .л Содержание (%)

в неомыляемом остатке в цельном экстракте

листьев жома плодов листьев жома плодов

1 0,1 0.4 0.04 0.02 '

2 сл. 0.1 сл. сл.

3. 6.8 20.6 ; з.оо 1 .04

4 • . сл. 0.9 • сл. 0.05

' 5 0.5 1.5 0.22 0.08

6 1.3 ■ 7.5, 0.57 0.38

7 2.6 - 1.14 - '

8 0.2 0.01

9 0.3 ■ 0.8 ■ 0.13 0.04

10 0.2 0.3 0.09 0.02 ■ ■

'11 0.2 - 0.09 -

. .12 • 0.3 0.13

■ 13 ; 2.6 сл. 1 .14 сл.-

14 1 .7 2.6 0.75 0.13

' 15 . 0.5 0.5 0.22 0.03

16 • 5.8' 1.1 2.55 0.06

17 3.4 1.8 1 .50 , 0.09

,18 0.6 0.8 0.26 0.04

19 3.3 2.0 1 .45 0.10

Таким образом, не считая известных ранее урсоловой и олеаноловой кислот, в экстрактах листьев облепихи обнаружено 17 нейтральных и 3 кислых полициклических соединений (помо-ловая кислота - в следовых количествах). В экстрактах жома плодов зафиксировано наличие 7 полициклических спиртов и о гидроксикислот, не идентифицированных ранее.

2. Полипренолы и долихолы листьев облепихи.

Биологически активные полдапопреноиды - полипренолы и долихолы (формулы 25 и 38) облепихи ранее не исследовались, а-долихолы вообще обнаружены, а листьях растений впервые. Ранее долихолы были выделены из животных тканей, а также из семян растений. В облепихе нами обнаружено значительное (до 1 % от веса воздушно-сухого сырья) количество полиизопренои-дов, в том числе до 0.008 % долихолов. Для сравнения - основной источник долихолов - печень свиньи - содержит 0.012 % этих соединений.

По данным ВЭЯОС на колонке с фазой ЫсКгобогЪ НР-18 с использованием в качестве элюента смеси ацетон:метанол, фракция полиизопреноидов содержит 19 основных компонентов, причем свободные полипренолы представлены тремя соединениями, а этерифицированные содержат те же три основных компонента с числом изопреновых звеньев от 10 до 12, а также минорные полипренолы, состоящие из 14-19 изопреновых единиц.

ОН

(25)

(26)

D.

210

t

Рис. 1. Хроматограммы свободных и связанных полиизопреноидов.

Идентификацию полипренолов проводили сравнением с заведомым образцом пенгадекапренола (C^gHj^gO), а также препаративным выделением с последующим масс-спектрометрическим анализом индивидуальных декапренола ^so^go0^ и УнДекапРенола

Для решения вопроса, являются ли минорные компоненты высокомолекулярных полиизопреноидов долихолами или полипренолями другой стереохимической серии, сумма связанных полипренолов была окислена активной двуокисью марганца. При этом полилренолы легко окисляются до полипреналей, долихолы остаются неизменными. Хроматографией реакционной смеси на СГ по-липренали отделили от неокислившейся'части. Последняя, по данным БЭЖХ, содержала 7 основных компн^нтов и имела ПМР-гчтектр, характерный для долихолов. Добавка заведомого образца пмеси долихолоь Сог, и С,-,^ при записи ВЗЖХ позволила иден-

OVJ Оо

тифицировять компоненты смеси.

Полипр^нолы облепихи отнесены к фикапренолам, исходя из 1 *3

спектров ПМР и ЯМР С. Соотношение интенсивностей сигналов

13

разнотипных протонов в спектре ЯМР С свидетельствует о том, что 3 двойные связи с транс-(Е)-конфигурацией расположены на i.i- конце молекулы.

Соотношение полиизопреноидных компонентов в сырье, собранном в сентябре 1989 года, указано в таблице 2.

Из литературы известно, что обычно содержание полипренолов в листьях растений растет в период вегетации, а затем существенно снижается к моменту листопада. Изучение динамики накопления полипренолов в листьях облепихи было проведено на Э оортообразцах атого растения, предоставленных ИЦиГ GO РАН и 1SS1 гиду и отличающихся по полу, срокам созревания, поли-млоиднощ'и, содержанию карогиноидоь в плодах. Сбор листьев иронодили один раз в месяц с одних и тех же растений, полученных для каждого сортообразца клонированием с одного ма-точпмр; растения и характеризующихся одинаковым генотипом и фенотип.jM. Подержание полиизопреноидов определяли по методике, включающей омыление экстракта, выделение неомыляемого остатка,, высокоэффективную жидкостную хроматографию на при-<V/p<! ''Милихром" с применением фазы Hchroaorb RP- 18 со спс-пиал/,по недобранным стандартом и обсчет хроматограммы. Пыле-

ленда полипренольной фракции при помощи КХ на СГ показало близкие результаты. На рисунке 2 представлена сезонная динамика накопления полипренолов за период вегетации с июня по октябрь.

Таблица 2.

Качественный и количественный состав полипренолов и долихолов листьев облепихи (в % от рассматриваемой группы)

С 1 * Свободные Связанные полипренолы Долихолы

полипренолы и долихолы

С45 Следы Следы

С50 22.5 10.0

С55 63.2 47.9

С60 1 4.3 13.1

С65 Следы Следы

С70 Следы

С70-Д Следы 1 .5

С75 2.5

с75-д 0.3 8.3

С80 8.8

С80-Д 2.2 33.2

С85 8.1

С85-Д 2.3 38.8

С90 2.8

С90~Д 0.8 13.4

СЭ5 0.9

С95"Л П.З 3.7

С100 Следы

С100"Л Следы 1 .1

# - обозначение полипренолов и долихолов (СМ -Д), содержащих I уг.Ф'р >динх атмон

Рис. 2. Сезонная динамика накопления полиизопреноидов в листьях облепихи (в % от веса воздушно-сухого сырья).

Номерам от 1 до 9 соответствуют следующие сортообразцы облепихи: 1 - сорт Зырянка - созревание в III декаде августа -

1 декаде сентября;

2 - форма 4-80-29 - красноплодная, созревание раннее,"

3 - форма 11-79-15 - оранжевая, сладкая, созревание раннее;

4 - форма 81-78-11 - красная, созревание позднее;

5 - форма 74-78-1 - оранжевая, созревание позднее;

6 - форма 61-78-79 - оранжевая, созревание раннее,'

7 - форма 84-78-12-4х - красная, созревание среднее, тетра-плоид;

8 - форма 1-80-3-4х - мужское растение, тетраплоид;

9 - форма 104 - мужское растение.

Из рисунка видно, что окраска плодов и сроки их созревания не оказывают существенного влияния на динамику накопления полипренолов в листьях, так же как и полиплоидность. Содержание полипренолов в листьях мужских растений заметно ниже, чем у женских.

На трех из девяти образцов сырья была прослежена динамика состава. Качественный состав не меняется на всем протяжении периода вегетации. В количественном - соотношение дека-цренола и ундекапренола меняется в пользу последнего. Содержание ' долихолов в суммарной фракции падает при общем росте концентрации в сырье. Максимум в распределении минорных компонентов сдвигается от гепта- и гексадекапренола в июне-июле к гекса- и пентадекапренолу в сентябрё-октябре.

3. Алифатические компоненты листьев облепихи. ■

Алифатические компоненты листьев облепихи представлены углеводородами, п-алканолами, жирными кислотами.

Состав углеводородов, составляющих'3.6 % веса неомыляе-мого остатка, исследован методом ГЖХ на колонке с. 5 % БЕ-ЗО на Хроматоне. Основными компонентами являются парафины с. нечетным числом углеродных атомов 29 и 31, идентифицированные ранее в плодах облепихи. Их количество .55.2 и 27.1 % от веса фракции соответственно. Остальные компоненты- составляют:

~ °"4 С26Н54 - °"4 С27Н56 - 6'2 С28Н58 ' 4'3 %, С30Н63 - 5.8 %, ' С32Не6 - 0.5 %, кроме того, обнаружены

парафины с числом углеродных атомов от 15 до 24 в следовых

количествах.

Смесь алифатических спиртов листьев облепихи,' по данным ГЖХ, содержит 9 компонентов, среди которых преобладают насыщенные алканолы нормального строения. В отличие от соответствующей фракции плодов облепихи, непредельные спирты представлены только фитолом, не обнаруженным в составе плодов и присутствующим как в свободном, гак и в этерифицированном виде.. Идентификация проведена путем добавки к анализируемой смеси аутентичных образцов алканолов С^Н^цО, С^Н^дО и ^~ тола. Масс-спектрометрические данные подтвердили правильность идентификации.

Алифатические спирты составляют 22.5 % от веса неомыляе-

мого остатка экстракта листьев. Количественный состав этой

фракции в % от ее веса: фитол (С20Н400^ ~ 15-6, С18Н40° ~

1'8' С20Н42° - 6'2' С22Н46° - 17-7' С23Н48° ~ С24%0° ~

38.2, С25Н520 - 0.9, С26Н540 - 15.6, С^О - 3.5.

В связи с фармакологическими испытаниями был проведен анализ связанных алифатических спиртов, этерифицированных жирными кислотами, в сравнении в соответствующей фракцией из плодов облепихи. Результаты полученные методом Г5КХ неомыляе-мого остатка жирноалифатических эфиров, приведены в таблице 3.

Таблица 3.

Количественный состав алифатических спиртов, входящих в состав эфиров листьев и жома плодов облепихи.

Соединение Содержание в НО жирноалифатических эфиров

жома плодов листьев

С18Н38° Следы 4.5

С20Н42° 3.1 17.4

С21Н44° - 0.8

С22Н46° 4.9 24.9

С23Н48° - 1.0

С24Н50° 33.4 35.2

С24Н48° 1 .4 -

°ге\л° 50.0 11 .8

С26Н52° 1 .8 -

С28Н58° 3.5 3.1

Неидент. 0.4 1 .3

Идентификация жирных кислот листьев облепихи проводилась и ранее (Мамедов), однако исследованные авторами экстракты практически не содержали свободных жирных кислот. Листья облепихи, собранные в районе Новосибирска, характеризуются высоким (20-30 % от веса экстракта) содержанием свобод-

ных кислот, из которых 25-30 % составляют жирные. Содержание связанных жирных кислот достигает 20 % от веса эфирного экстракта.

Свободные и связанные алифатические кислоты выделяли и анализировали раздельно. Анализ проводили при помощи ГЖХ на колонке с 9 % ДЗГС на Хроматоне, добавляя к анализируемой смеси предварительно прометилированных кислот заведомые образцы метиловых эфиров миристиновой, стеариновой, пальмитиновой, олеиновой, линолевой, лияоленовой кислот. Это позволило идентифицировать 11 основных компонентов, обнаруженных ранее в плодах и листьях облепихи. Состав жирных кислот приведен в таблице 4.

Таблица 4.

Количественный состав свободных и связанных кислот листьев облепихи (в процентах от веса фракции)

Соединение Содержание в кислотах

свободных связанных

С14:0 0.9 4.5

С16:0 29.7 20.3

С16:1 9.9 2.7

С16:2 Следы Следы

С18:С 3.8 3.5

С18:1 6.3 8.3

С18:3 9.7 10.7

С18:3 35.2 34.8

С20:0 1 .6 3.8

С22:0 2.6 10.2

С24:0 0.3 1 .0

Представляло интерес изучить состав отдельных фракций связанных кислот, а именно кислоты, этерифицирукхцие алифатические спирты, исследованы в связи с фармакологическими испытаниями, а кислоты, входящие в состав ¡эфиров полиггренолоь, !(Зу«аЛИОЬ И Н'ропг«''«"'!-1 1К'еЛ^ДОЬЯНИ>1 сьжшшшл М»ДШКЮ111»>1К>И

дов. Анализ жирных кислот алифатических эфиров листьев был проведен в сравнении с соответствующей фракцией плодов. Качественный и количественный состав кислот, входящих в сложные эфиры с алифатическими кислотами, приведен в таблице 5.

Таблица 5.

Количественный состав связанных кислот, этерифицирующих алифатические спирты в листьях и плодах облепихи

Соединение Содержание в кислой части эфиров

листьев плодов

С14:0 Следы 0.9

С16:0 5.4 65.7

С18:0 1.2 2.3

С20:0 14.1 3.8

°22:0 46.7 12.3

С24:0 9.2 6.3

С2в:0 Следы 3.0

С28:0 6.0 3.6

С30:0 16.6 Следы

Неидент. .0.9 2.0

Кислоты, верифицирующие полипренолы и долихолы, качественно отличаются от вышеприведенных высоким содержанием непредельных кислот. Так, содержание кислоты с-\2-0 ~ 4 С14:0 - 3.3 Ж, С16:0 - 21.4 *. С16:1 -23.0%, С16.й-1.1

С16:3 " гИ %' С18:0 " С18:1 " 4'9 С18:2 ~ б'6

%, С18:3 - 22.5 %, С20:0 - З.г %, С24;0 - 2.4 неидентифи-

цированных кислот - 2.4 % от веса (¿акции.

Данные таблиц 3 и 5 показывают, что алифатические эфиры жома плодов содержат в основном пальмитат гексакозилового спирта, тогда как в соответствующей фракции листьев преобладает бегенат тетракозилового спирта. Это отражается на их биологической активности.

4. Биологическая активность экстрактов листьев, их

компонентов и синтетических аналогов.

Фармакологические испытания препаратов из облепихи и их синтетических аналогов проводились в группе токсикологии ШОХ СО РАН и НПО "Витамины" г. Москва. На ожоговых и язвенных моделях установлена высокая репарационная и профилактическая антиульцерогенная активность эфирного и фреонового экстрактов листьев и неомыляемого остатка эфирного экстракта, полипренолов, р-ситостеринэ, натуральных и синтетических ефиров р-ситостерина в виде 2 %-ных растворов в подсолнечном масле. Эти образцы показали активность выше контроля - подсолнечного цасла, причем растворы экстрактов листьев, эфиров стеринов, исключая ацетат, полипренолов, р-ситостерина на ожоговой модели не уступают эталонному облепиховому маслу. На язвенной модели активность р-ситостерина и его эфиров была значительно ниже, чем у эталона.

Натуральные и синтетические жирноалифатические эфиры испытывали на модели индометациновой язвы в профилактическом варианте в виде растворов с концентрацией О.1 % в подсолнечном масле. При атом установлено, что антиульцерогенная активность этих образцов значительно превышала контроль, хотя и уступала эталонной, причем эфира, выделенные из жома плодов, и синтетические, их моделирующие, превышали по активности соответствующую фракцию из листьев и его синтетические аналоги.

Полученные данные дают основание для практического применения экстрактов листьев облепихи, представляющих собой отходы послеуборочной сортировки плодов. Синтетические ана-' •логи натуральных восков облепихи представляют интерес как добавка к фармакологическим и косметическим препаратам благодаря относительной дешевизне и низкой концентрации действующего вещества.

Экспериментальные данные по выявлению биологической активности подтверждены актами испытаний и отчетами по х/д.

выводы

1. Впервые проведено исследование химического состава изопреноидных компонетов экстракта листьев облепихи и сопутствующих им алифатических соединений в сравнении с составом ее плодов. Ряд компонентов идентифицирован в облепихе впервые. Уточнен качественный состав . тритерпеновых спиртов и кислот кома плодов.

2. -Установлено, что в листьях облепихи содержатся природные иммунорегуляторы - полипренолы в свободном и етерифици-рованном виде, отсутствующие в составе компонентов плодов. Смесь свободных полипренолов содержит компоненты от С^ до

а смесь этерифицированных жирными кислотами - две группы полипренолов от С^ ДО и от до Сц-^. Разработана методика определения содержания полипренолов в растительном сырье . Прослежена динамика изменения содержания полипренолов в листьях облепихи в период вегетации.

3. Впервые в листьях растений обнаружены биорегуляторы животных организмов - долихолы (2,3 - дигидрополипренолы), присутствующие в экстракте в виде сложных эфиров с жирными кислотами. Долихолы представлены компонентами от С^ до

По содержанию долихолов листья облепихи сопоставимы с источниками их выделения.

4. Установлено, что листья облепихи, содержащие, ряд биологически активных веществ, являются перспективным сырьем для получения препарата, обладающего наиболее ценными свойствами облепихового масла.

Основное содержание работы опубликовано:

1. Шевнюк Л.А., Кукина Т.П., Саленко В.Л., Ралдугин В.А, Ава-кумов В.М. Выделение отдельных фракций жома плодов облепихи и сравнительное изучение их биологической активности/ Биология, химия и фармакология облепихи. - Новосибирск: Наука, 1583. - С. 102 - 105.

2. Саленко В.Л., Кукина Т.П., Карамышев В.Н., Сидельников В. Н., Пентегова В.А. Химическое исследование Н1ррор1аае гЬаш-гю1с1ез II. Основные компоненты нейтральной части продуктов

омыления экстракта листьев облепихиХимия природ, со-един. - 1985. - N 4. - С. 514 - 517.

3. Кукина Т.П., Саленко В.Л., Ралдугин В.А., Пентегова В.А. Тритерпеновые спирты и метилстерины из листьев и жома облепихи /Биологические аспекты интродукции, селекции и агротехники облепихи. - Горький, 1985. - С. 123 - 128.

4. Кукина Т.П., Попова Л.Н., Сорокина И.В., Лапик A.C., Пентегова В.А. Химико-фармакологическое исследование фреонового экстракта листьев облепихи/ Биология, химия, интродукция и селекция облепихи. - Горький, 1986. - С. 129 -130.

5. Кукина Т.П., Ралдугин В.А. Нейтральные и кислые компоненты экстрактов листьев облепихи /Новое в биологии, химии и фармакологии облепихи. - Новосибирск: Наука, 1991. - С. 94 - 98.

в. Скуридин Г.М., Кукина Т.П. Метод количественного определения неомыляемых липидов облепихи/ Там же. - С. 99 - 102.

7. Скуридин Г.М., Кукина Т.П. Сравнительный анализ неомыляе-мого остатка липидов плодовой мякоти облепихи /Там же. -С. 102 - 106.

8. Кукина Т.П., Ралдугин В.А., Лапик A.C., Сорокина И.В., Попова Л.Н. Сравнительная химико-фармакологическая характеристика алифатических эфиров из жома и листьев облепихи/ Там же. - С. 121 - 125.

9. Кукина Т.П., Агеева Л.Д., Ралдугин В.А., Пентегова В.А., Кошелев Ю.А. К вопросу о стандартизации облепихового масла /Там же. - С. 157 - 160.

10.Кукина Т.П., Деменкова Л.И., Ралдугин В.А., Максимов Б.И., Чижов О.С., Веселовский В.В., Моисеенков A.M. Полипренолы и долихолы листьев облепихи/'' Сибирский хим. журн. -1991. - Вып. 6. - С. 89 - 93.

11.Кукина Т.П., Ралдугин В.А. Маслиновая и 2а-гидроксиурсоло-вая кислоты из листьев облепихи ß Сибирский хим. журн .-(Ж."

Вып. 2. - С. 92 - аз.

/MfKU^