Биосенсоры на основе иммобилизованной пероксидазы для определения пероксида водорода тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.15 ВАК РФ

введение обзор литературы

ГЛАВА I. МЕТОДЫ ОРИЕНТИРОВАННОЙ ИММОБИЛИЗАЦИИ БЕЛКОВ

1.1 Методы иммобилизации белков на поверхности твердых носителей

1.2 Методы иммобилизации белков на золоте

1.3 Методы ориентированной иммобилизации белков

ГЛАВА II. СТРУКТУРА И МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА

2.1 Классификация и общая характеристика пероксидаз

2.2 Структура изофермента С пероксидазы хрена

2.3 Каталитический цикл пероксидазнрйреакции. - : -•»

2.4 Методы детекции пероксидазы хрена

ГЛАВА III. БИОСЕНСОРЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА.

3.1 Биосенсоры для определения пероксида водорода экспериментальная часть

ГЛАВА IV. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1 Материалы

4.2 Методы исследования результаты и их обсуждение

ГЛАВА V. ИЗУЧЕНИЕ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ИММОБИЛИЗАЦИИ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА НА ПОВЕРХНОСТИ ПОРИСТЫХ МЕМБРАННЫХ

НОСИТЕЙ 55 5.1 Выбор способов иммобилизации пероксидазы хрена на пористых носителях.

5.2 Изучение закономерностей реакции усиленной хемилюминесценции на поверхности мембранных носителей.

5.3 Сравнительное изучение ферментативной активности пероксидазы хрена, иммобилизованной различными методами.

5.4 Определение концентрации фермента на поверхности мембранных носителей

ГЛАВА VI. ОРИЕНТАЦИЯ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА НА ПОВЕРХНОСТИ ЗОЛОТА ЧЕРЕЗ ФРАГМЕНТЫ АНТИТЕЛ

6.1 Получение фрагментов антител со свободной тиоловой группой

6.2 Сравнительное изучение электрохимической и хемилюминесцентной активности пероксидазы, иммобилизованной на поверхности золота через фрагменты антител.

6.3 Определение кинетических и равновесных констант взаимодействия пероксидазы с иммобилизованными фрагментами моноклональных антител.

ГЛАВА VII. ИММОБИЛИЗАЦИЯ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА

НА ПОВЕРХНОСТИ ЗОЛОТА

7.1 Иммобилизация различных форм пероксидазы на поверхности золота

7.2 Кинетические характеристики различных типов пероксидаз, иммобилизованных на поверхности золотого электрода.

ГЛАВА VIII. БИОСЕНСОРЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА

НА ОСНОВЕ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ ПЕРОКСИДАЗЫ

8.1 Биосенсоры для определения пероксида водорода на основе иммобилизованной пероксидазы.

8.2 Основные аналитические характеристики различных групп биосенсоров для определения пероксида водорода. выводы

Определение концентрации пероксида водорода очень важно в различных областях, включая косметическую промышленность, медицину, контроль окружающей среды и т.д. Перекисные соединения могут образовываться в организме как при развитии патологических процессов, так и при проведение некоторых лечебных процедур, изменяющих равновесие метаболических процессов. Наряду с перекисными соединениями, различные токсины могут легко проникать в клетку через их окислительное воздействие на белки, мембраны и ДНК и вызывать разрушение здоровых клеток. Образование пероксида как промежуточного продукта может быть использовано для определения целого ряда биологически активных соединений (глюкоза, лизин, глутамат и др.) через сопряженные полиферментные системы. Определение пероксида водорода важно и при экологическом мониторинге. Это связано с ростом атмосферных загрязнений и разрушением озонового слоя. Поэтому пероксид водорода необходимо определять в достаточно широком диапазоне концентраций.

За последнее время все большее внимание уделяется ферментным биосенсорам. Это связано с высокой селективностью ферментов высокой чувствительностью таких методов. Пероксидаза хрена является одним из наиболее часто используемых в аналитических целях ферментом. Пероксидазу применяют как метку в иммуноанализе и в методе ДНК-зондов, в аналитических целях для определения широкого круга физиологически активных соединений. Использование пероксидазы в качестве метки и условия ее детекции в методах иммуноанализа достаточно хорошо изучены. Одним из подходов для использования пероксидазы для целей аналитической биохимии является иммобилизация фермента, так как она позволяет увеличить стабильность фермента и обеспечить его многоразовое использование. Пористые мембранные носители являются перспективными для иммобилизации различных белков, так как обладают большой удельной поверхностью и высокой механической прочностью. Они находят применение, в том числе и для методов иммуноанализа. На практике возникает потребность проведения высокочувствительного, по при этом быстрого и несложного в выполнении анализа для различных целей, например, для анализа объектов окружающей среды, для контроля качества технологических производств, контроля качества продуктов и в ряде других областей. Часто применение существующих методов анализа требует специального оборудования, поэтому такую диагностику, возможно, провести только в специализированных лабораториях. Использование в этих случаях достаточно простых аналитических устройств, которые могут быть разработаны на основе пористых носителей, может быть перспективно.

С другой стороны для создания амперо, пъезо- или оптических биосенсоров требуется иммобилизовать фермент на проводящих материалах. В качестве такого материала удобно использовать золото или платину, так как они химически инертны и обладают ровной поверхность. Однако в этом случае, вследствие инертности золота, возникает проблема иммобилизации белков на его поверхности.

Пероксид водорода необходимо определять в достаточно широком диапазоне концентраций. Поэтому возникает необходимость создания как очень чувствительных биосенсоров для определения следовых количеств пероксида водорода, так и таких биосенсоров, предел обнаружения пероксида в которых достаточно высок.

Целью настоящей работы является разработка различных типов биосенсоров с хемилюминесцентной и электрохимической детекцией на пероксид водорода с использованием пористых мембранных носителей и золота. Для этого необходимо было изучить различные методы иммобилизации пероксидазы хрена на поверхности твердых носителей.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

выводы

1. Показано, что при иммобилизации пероксидазы хрена на пористых мембранных носителях активность увеличивается с ростом расстояния между ферментом и носителем, определенный вклад вносит ориентация фермента. Максимальную активность проявляла пероксидаза, иммобилизованная через специфические антитела и систему стрептавидин-биотин.

2. Разработан метод ковалентной иммобилизации фрагментов антител на поверхности золота с использованием тиоловых групп белка. Установлено, что связывание пероксидазы с иммобилизованными на золоте фрагментами моноклональных антител обеспечивает ориентацию активного центра фермента относительно поверхности носителя.

3. Установлено, что для амперометрических биосенсоров имеет значение ориентация фермента по отношению к поверхности носителя, а также уменьшение расстояния между ферментом и носителем. Для биосенсоров с хемилюминесцентной детекцией имеет значение максимальное удаление фермента от поверхности носителя.

4. Для рекомбинантной пероксидазы был показан прямой (безмедиаторный) перенос электрона с активного центра фермента на поверхность электрода. Дегликозилированная рекомбинантная пероксидаза обладает более высокой активностью при прямом переносе электрона по сравнению с нативной. Введение остатков гистидина в молекулу рекомбинантной пероксидазы на С-конце усиливает прочность взаимодействия фермента с носителем.

5. Разработаны различные типы биосенсоров на пористых носителях и золоте с хемилюминесцентной и электрохимической детекцией. Наибольшая чувствительность установлена для биосенсора с электрохимической детекцией на основе рекомбинантной пероксидазы с гистидинами на С-конце, предел детекции составил 20 нМ Н202.

1. L.J. Blum, S.M. Gautier, P.R. Coulet, Design of luminescence photobiosensors. // J. Biolum. and chemilum., 4 (1), 543-550 (1989).

2. Т.Н. Шеховцова, C.B. Чернецкая, H.B. Белкова, И.Ф. Долманова, Тест-метод определения ртути на уровне ПДК с использованием пероксидазы, иммобилизованной на бумаге. // Ж. Анал. Химии, 50 (5), 538-542 (1995).

3. J.M. Gershoni, G.E. Palade, Protein blotting: principles and applications. // Anal.Biochem., 131 (1), 201-232 (1983).

4. K.E. Geckeler, B. Muller, Polymer materials in biosensors. // Naturwissenschaften, 80,18-24(1993)

5. P. Hammerl, A. Hartl, J. Thalhamer, Particulate nitrocellulose as a solid phase for protein immobilization in immuno-affinity chromatography. // J. Immunol. Mrthods. 165 (1), 59-66 (1993).

6. J. Fiedurek, J. Lobarzewski, A. Wojcik, T. Wolski // J. Biotechnol. and Bioeng., 28 (5), 747-750 (1986)

7. A. Roda, S. Girotti, S. Ghini and G. Carrea, Continuous-flow assays with nylon tube-immobilized bioluminescent enzymes.//Methods inEnzymol., 137, 161-171 (1988).

8. G.E. Valkis, R. Barton, Immunoconcentration a new format for solid-phase immunoassays // Clin.Chem., 31 (9), 1427-1431 (1985).

9. C. Berggren, G. Johansson, Capacitance measurements of antibody-antigen interactions in a flow system. // Anal. Chem., 69, 3651-3657 (1997).

10. N Kazuyuki, T Tatehiko, T Kazusuke // J. Phys. Chem. Biol. Seibutsu., 33 (6), 21-31 (1989).

11. Иммобилизованные ферменты. //Изд. МГУ. (1976).

12. М.И. Добриков, Т.А. Приходько, И.Б. Сафронов, Г.В. Шишкин, Синтез и свойства светочувствительных капроновых мембран. Фотоиммобилизация ДНК. // Биоорг. химия, 2, 18-23 (1992).

13. N.F. Kazanskaya, М.А. Manenkova, S.B. Pozharsky and I.V. Berezin, Light-sensitive process with immobilized enzyme. // Enzyme Microb. Technol., 11, 507-510(1989).

14. М.И. Добриков, Е.Д. Тенетова, Г.В. Шишкин, Ковалентная иммобилизация белков на светочувствительных капроновых мембранах для твердофазного иммуноанализа. // Биотехнология., 1, 80-83 (1991).

15. М.И. Добриков, Г.В.Шишкин, п-Азидотетрафторбензальдегид -высокоэффективный гетеробифункциональный реагент для фотоимобилизации ферментов. // Известия сибирского отделения академии наук СССР, серия химических наук, 6, 50-57 (1990).

16. Р.Е. Neisen, О. Buchardt, Aryl azides as photoaffmity labels. A photochemical study of some 4-substituted aryl azides. //Photochem.Photobiol., 35 (3) 317-323 (1982).

17. R.C. Graham, M.L. Karnovsky, The early stages of absortion of injected horseradish peroxidase in the proximal tubules of mouse kidney: Ultrastructural cytochemistry by a new technique. // J. Histochem. Cytochem., 14, 291-299 (1966).

18. M.Yu. Rubtsova, E.M. Gavrilova, An assay for human myoglobin using the tchnique of membrane immunoassay with light-sensitive nylon supports. // Anal. Lett., 27 (15), 2961-2972 (1994).

19. M.Yu. Rubtsova, E.M. Gavrilova, A.M. Egorov, Dot-immunoassay with chemiluminescent detection for the determination of pesticides. // Biolum. and Chemilum., ed. Campbell A.K., Kricka L.J., Stanley P.E., J.Willey Sons, 365-370 (1994).

20. C. Galiatsatos, Y. Ikariyama, J.E. Mark, W.R. Heineman, Immobilization of Glucose Oxidase in a Poly(Vinyl Alcohol) Matrix on Platinized Graphite Electrodes by g-Irradiation. // Biosens. Bioelectr., 5, 47 (1990).

21. J. Devies, A.C. Dawkes, A.G. Haymes, C.J. Roberts, at al., A scannig tunneling microscopy comparison of passive antibody adsorption and biotinylated antibody linkage to streptavidin on microtier wels. // J. Immunol. Methods., 167, 263-269 (1994).

22. J.E. Butler, L. Ni, R. Nessler, M. Suter, at al., The physical and functional behavior of capture antibodies adsorbed on polystyrene. // J. Immunol. Methods. 150, 77-90 (1992).

23. V.M. Mirsky, M. Riepl, O.S. Wolfbeis, Capacitive monitoring of protein immobilization and antigen-antibody reactions on monomolecular alkylthiol films on gold electrodes. // Biosensors & Bioelectronics, 1997, 12 (9-10), 977-989 (1997).

24. Т. Lotzbeyer, W. Schuhmann, H-L. Schmidt, Electron transfer principles in amperometric biosensors direct electron transfer between enzymes and electrode surface. // Sensors and Actuators B, 33, 50-54 (1996).

25. T. Lotzbeyer, W. Schuhmann, H-L. Schmidt, Direct electrocatalytical H202 reduction with hemin covalently immobilized at monolayer-modified gold electrode. // J. Electroanal. Chem, 395, 341-344 (1995).

26. F.Pariente, C. La Rosa, F. Galan, L.Hernandez, E.Lorenzo, Enzyme supports system for biosensor applications based on gold-coated nylon meshes. // Biosensors & Bioelectronics, 11 (11), 1115-1128 (1996).

27. H.X. You, D.M. Disley, D.C. Cullen, C.R. Lowe, A scanning tunnelling microscopic study of site-specificity immobilized immunoglobulin G on Gold. // Micron, 26 (4), 311-315 (1995).

28. D.J. O'Shannessy, M. Brigham-Burke, K. Pack, Immobilization chemistries suitable for use in the BIAcore surface plasmon resonance detector. // Anal.Biochem., 205, 132-136(1992).

29. S.H. Paek, L.G. Bachas, W. Schramm, Defined analyte-enzyme conjugates as signal generators in immunoassays. // Anal. Biochem., 210, 145-154 (1993).

30. J.E. Hale, Irreversible, oriented immobilization of antibodies to cobalt-iminodiacetate resin for use as immunoaffinity media. // Anal. Biochem., 231 (1), 46-49 (1995).

31. M.A. Previero-Coletti, A. Previero, Alumina-phosphate complexes for immobilization of biomolecules.// Anal. Biochem.,180, 1 (1989).

32. R.F. Borch, M.D. Bernstein, H. D.Durst // J. Am. Chem. Soc., 93, 2897 (1971).

33. A.M. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова, Теория и практика имунноферментного анализа. // Москва, «Высшая школа» (1991).

34. К. Nakanishi, N. Muguruma, I. Karube, A Novel Method of Immobilizing Antibodies on A Quartz Crystal Microbalance Using Plasma-Polymerized Films for Immunosensors. //Anal.Chem, 68 (10),1695-1700 (1996).

35. S.V. Rao, K.W. Anderson, L.G. Bachas, Oriented immobilization of protein. // Microchimica Acta, 128, 127-143 (1998).

36. T.M. Spitznagel, D.S. Clark, Surface density and orientation effects on immobilized antobodies and antibody fragments. // Biotechnology, 11, 825-829 (1993).

37. B. Lu, M.R. Smyth, R. O'Kennedy, Oriented immobilization of antibodies and its application in immunoassays and immunosensors. //Analyst, 121, 29-32 (1996).

38. W.L. Hoffman, D.J. O'Shannessy, Site-specific immobilization of antibodies by their oligosaccharide moieties to new hydrazide derivatized solid supports. // J.Immunol.Methods, 112 (1), 113-120(1988).

39. B. Solomon, R. Koppel, F. Schwartz, G. Fleminger, Enzymic oxidation of monoclonal antibodies by soluble and immobilized bifunctional enzyme complexes. // J. Chromotogr, 510, 321-329 (1990).

40. V.S. Prisyazhnoy, M. Fusek, Y. Alakhov, Synthesis of high-capacity immunoaffinity sorbents with oriented immobilized immunoglobulins or their Fab' fragments for isolation of proteins. // J. Chromotogr., 424, 243 (1988).

41. A. Chilkoti, G.Chen, P.S. Stayton, A.Hoffman, Site-specific conjugation of a temperature-sensitive polymer to a genetically-engineered protein. // Bioconjugate Chem., 5(7) 504-507 (1994).

42. M.A. McLean, P.S. Stayton, S.G. Sligar, Engineering Protein Orientation at Surfaces to Control Macro-Molecular Recognition Events. // Anal.Chem, 65, 2676-2678 (1993).

43. A. Chilkoti, T. Boland, B.D. Ratner, P.S. Stayton, The Relationship Between Ligand-Binding Thermodynamics and Protein-Ligand Interaction Forces by Atomic Force Microscopy. //Biophys. J, 69, 2125- 2130 (1995).

44. E. Kopetzki, K. Lehnert, PBuckel, Enzymes in diagnostics: achievements and possibilities of recombinant DNA technology. // Clin. Chim., 40, 688-704 (1994)

45. C. Ljungquist, B. Jansson, T. Moks, M. Uhlen, Thiol-directed immobilization of recombinant IgG-binding receptors. // Eur. J. Biochem, 186, 557 (1989).

46. M.C. Smith, T.C. Furman, T.D. Ingolia, C. Pidgeon, Chelating Peptide Immobilized Metal Ion Affinity Chromatography, a New Concept in Affinity Chromatography for Recombinant Proteins. // J. Biol. Chem, 263, 7211-7215 (1988).

47. E. Hochuli, W. Bannwarth, H. Doebeli, R. Gentz, D. Stueber // Bio. Technology, 6, 1321-1325 (1988).

48. A. Kondo, T. Teshima, Biothehnol. Bioeng, // 46, 421 (1995).

49. S. Vishwanath, D. Bhattacharyya, W. Huang, L.G. Bachas, Site-Directed and Random Enzyme Immobilization on Functionalized Membranes: Kinetic Studies and Models. //J. Membr. Sci, 108 (1+2), 1-13 (1995).

50. S. Huddleston, S.Robertson, C. Dobson, F.Y.P. Kwong and B.M. Chamralambous, Structural and functional stability of Horseradish peroxidase. // Biochemical Society Transaction, 23 (1), 108S, (1995).

51. И.В. Упоров, A.M. Егоров, Моделирование пространственной структуры пероксидазы хрена (изофермент С). // Доклады Академии Наук, 356 (5), 696699 (1997).

52. K.G. Welinder, Amino Acid Sequence Studies of Horseradish Peroxidase. // Eur. J. Biochem., 96,483-502 (1979).

53. K.G. Welinder, Plant Peroxidases, Their Primary, Secondary and Tertiary Structures, and Relation to Cytochrome С Peroxidase. // Eur. J. Biochem., 151, 497-504 ( 1985).

54. T.N. Ammosova, I.V. Ouporov, M.Y. Rubtsova, O.V. Ignatenko, A.M. Egorov, E.F. Kolesanova, A.I. Archakov, Epitope mapping of horseradish peroxidase (Isoenzyme C). // Biochemistry (Moscow), 62 (4) 516-524 (1997).

55. H.-L. Schmidt, W. Schuhmann, Reagentless oxidoreductase sensors. // Biosens. Bioelectron. 11 (1/2), 127-135 (1996).

56. M. Gajhede, D.J. Schuller, A. Henriksen, A.T. Smith and T.L. Poulos, Crystal structure of horseradish peroxidase С at 2,15 A resolution. // Nat. Struct. Biol., 4 (12), 1032-1040, (1997).

57. G Smulevich, et.al., Characterization of recombinant horseradish peroxidase С and three site-directed mutants, F41V, F41W, and R38K, by resonance Raman spectrocopy. //Biochemistry, 33, 7398-7407 (1994)

58. H. Theorell, The Preparation and Some Properties of Crystalline Horseradish eroxidase. // Ark. Kemi. Min. Geol. A, 16, 1-11 (1942).

59. H.B. Dunford, J.S. Stillman, On the function and mechanism of action of peroxidases. // Coord. Chem. Rev., 19, 187-251 (1976).

60. H.B. Dunford, Peroxidases, // in Advances in Inorganic Biochemistry, Editors: G.L. Eichhorn and L.G. Marzilli, Elsevier Biomedical: Amsterdam. 41-68 (1982).

61. S.F. Sontum, D.A. Case, Electronic Structures of Active Site Models for Compounds I and II of Peroxidase. // J. Am. Chem. Soc., 107, 4013-4015 (1985).

62. P. Du, F.U. Axe, G.H. Loew, S. Canuto, M.C.Zerner, Theoretical Study on the Electronic Spectra of Model Compound II Complexes of Peroxidases. // J. Am. Chem. Soc., 113, 8614-8621 (1991).

63. J.E. Frew, P.L. Jones, Structure and Functional Properties of Peroxidases and Catalases. // Advances in Inorganic and Bioinorganic Mechanisms, 3, 175-212 (1984).

64. J.S. Dordick, A.M. Klibanov, M.A. Marietta, Horseradish Peroxidase Catalyzed Hydroxylations: Mechanistic Studies. // Biochemistry, 25, 2946-2951 (1986).

65. M.J. Cormier, P.M. Prichard, An Investigation of the Mechanism of the Luminescent Peroxidation of Luminol by Stopped flow Techniques. // J. Biol. Chem., 243, 4706-4714(1968).

66. T.P. Whitehead, G.H.G. Thorpe, T.J.N. Carter, C. Groucutt, L.J. Kricka, Enhanced Luminescence Procedure for Sensitive Determination of Peroxidase-Labelled Conjugates in Immunoassays. //Nature, 305, 158-159 ( 1983).

67. L.J. Kricka, G.H.G. Thorpe, Enhanced Chemiluminescent Enzyme Immunoassays. // Parasitol. Today, 2, 123-124 (1986).

68. T. Ohnishi, I. Yamazaki, T. Yanagi, T. Nakamura, H. Yamazaki, EPR investigation of cooxidation of two peroxidase substrates. // Biochim. Biophys. Acta, 172 (3), 357-359 (1969).

69. L.H. Piette, I. Yamazaki, The rapid oxidation of ascorbic acid by HRP-containing system. // Biochim. Biophys. Acta, 77 (1), 47-64 (1963).

70. G. Merenyi, J. Lind, Т.Е. Eriksen, The equilibrium reaction of the luminol radical with oxygen and the one-electron reduction potential of 5-amnophtalazine-l,4-dione. // J. Phys. Chem, 88 (11), 2320-2323 (1984).

71. M. Hodson, P. Jones, Enhanced chemiluminescence in the peroxidase-luminol-H202 system: anomalous reactivity of enhancer phenols with enzyme intermediates. // J. Biolum. Chemilum, 3 (1), 21-25 (1989).

72. A.N. Diaz, F.G. Sanchez, J.A.G. Garcia, Enhancement and inhibition of luminol chemiluminescence by phenolic acids. // Journal of Bioluminescence and Chemiluminescence, 10 (3),175-184 (1995).

73. F.G. Sanchez, A.N. Diaz, J.A.G. Garcia, P-phenol derivatives as enhancers of the chemiluminescent luminol-horseradish peroxidase-H202 reaction: Substituent effects. // Journal of Luminescence, 65 (1), 33-39 (1995).

74. T.E.G. Candy, P. Jones, Attenuation of 4-I-Phenol-Enhanced Chemiluminescence by Non-Enhancer Phenols. // Journal of Bioluminescence and Chemiluminescence, 6 (4), 239-243 (1991).

75. P.M. Easton, A.C. Simmonds, A. Rakishev, A.M. Egorov, L.P. Candeias, Quantitative model of the enhancement of peroxidase-induced luminol luminescence. // Journal of the American Chemical Society, 118 (28), 6619-6624 (1996).

76. L.C. Clark, C. Lyons, Electrode systems for continuous monitoring in cardiovascular surgery. // Ann. NY Acad. Sci., 102,29-45 (1962).

77. G.G. Guilbault, G.J. Lubrano, An enzyme electrode for amperometric determination of glucose. // Anal. Chim. Acta, 64 (3), 439-455 (1973).

78. Э. Тернер, И. Карубе, Дж. Унлсон, Биосенсоры: основы и приложения. // "Мир", М., 614 (1992).

79. A.G. Mauk, R.A. Scott, Н.В. Gray, Distances of electron transfer to and from matalloprotein redox sites in reaction with inorganic complexes. // J. Am. Chem. Soc., 102 (13), 4360-4363 (1980).

80. JI.H. Григоров, Д.С. Чернавский, Квантово-механистическая модель переноса электрона от цитохрома к хлорофилу в фотосинтезе. // Биофизика, 17 (2), 195202 (1972).

81. Ю.Ю. Кулис, В.Й. Разумас, Биокатализ в электрохимии органических соединений. // "Москлас", Вильнюс, 168 (1983).

82. G.L. Kok, K.R. Darnall, A.M. Winer, J.N. Pitts and B.W. Gay, Chemiluminescence method of the determination of hydrogen peroxide in the ambient atmosphere. // Environ. Sci. Technol., 12, 1077(1978).

83. P. Jolliet, B.Polla, A. Donath, D. Slosman, Early hydrogen peroxide-induced pulmonary endothelial cell dysfunction: detection and prevention. // Critical Care Medicine, 22, 157-162 (1994)

84. T. Tatsuma, M. Gondaira and T. Watanabe, Peroxidase-Incorporated Polypyrrole Membrane Electrode. // Anal. Chem., 64, 1183-1187 (1992).

85. D.Price, R.F.C. Mantoura, P.J. Worsfold, Shipboard determination of hydrogen peroxide in the western Mediterranean sea using flow injection with chemiluminescence detection. //Anal. Chim. Acta, 371, 05-215 1998).

86. M.J. Navas, Air analysis: determination of hydrogen peroxide by chemiluminescence. // Atmospheric Environment, 33, 2279-2283 (1999).

87. P.A. Tanner, A.Y.S. Wong, Spectrophotometric determination of hydrogen peroxide in rainwater. // Anal. Chim. Acta, 370,279-287 (1998).

88. A. Sakuragawa, T. Taniai, T. Okutani, Fluorimetric determination of hydrogen peroxide with an immobilized enzyme prepared by coupling horseradish peroxidase to chitosan beads. // Anal. Chim. Acta, 374, 191-200 (1998).

89. A.A. Karyakin, E.E. Karyakina, Prussian blue-based "artificial peroxidase" as a transducer for hydrogen peroxide detection. Application to biosensors. // Sensors and Actuators B, 57, 268-273 (1999).

90. H. Yohyi, Z. Kiyoshi, 0. Yosuke // Anal. Sci. 1 (1), 65-68 (1985).

91. A. Roda, S. Girotti, S. Ghini, G. Carrea, Coupled reactions for the determination of analytes and enzymes based on the use of luminescence. J. Biolum. and Chemilum // 4(1), 423-435 (1989).

92. S. Girotti, A. Roda, M.A. Angellotti, S. Ghini, G. Carrea, R. Bovara, S. Piazzi, R. Merighi, Bioluminescence flow system for determination of branched chain L-amino acids in serum and urine. // Anal. Chim. Acta, 205, 229-237 (1988).

93. L,J. Blum, J.M. Plaza and P.R. Coulet // Anal. Lett, 20, 317-326 (1987).

94. Bo. Olsson // Microchim. Acta., 2 (3-4), 211-221 (1985).

95. A.N. Diaz, M.C.R. Peinado, M.C.T. Minguez, Sol-gel horseradish peroxidase biosensor for hydrogen peroxide detection by chemiluminescence. // Anal. Chim. Acta, 363, 221-227 (1998).

96. Y.Xiao, H.X. Ju, H.Y.Chen, Hydrogen peroxide sensor based on horseradish peroxidase-labeled Au colloids immobilized on gold electrode surface by cysteamine monolayer. //Anal. Chem, 391, 73-82 (1999).

97. U. Wellinberger, J. Wang, M. Ozsoz, E. Gonzalez-Romero, F. Scheller, Bulk modifine enzyme electrodes for reagentless detection of peroxides. // Bioel.Bioeng, 26,287-295 (1991).

98. A. Lundin, M. Hasenson, J. Persson, A. Pousette, Estimation of biomass in growing cell lines by adenosine triphosphate assay. // Methods in Enzymol. 133, 27-42 (1986).

99. S.P. Swerdlov, D. Finley, A. Varshavstry, Enhancement of immunoblot sensitivity by heating of hydrated filters. //Anal. Biochem. 156, 147-153 (1986).

100. JI.B. Колосова, Б.Б.Ким, T.B. Чередникова, Г.Г.Садванова, Е.М. Гаврилова, A.M. Егоров, Получение и исследование моноклональных антител к пероксидазе из корней хрена. // Биохимия, 53 (11), 1858-1863 (1988).

101. J.J. Calvente, Z. Kovacova, M.D. Sanchez, R. Andreu and W.R. Faweett, Desorption of spontaneously adsorbed and electrochemically readsorbed 2-mercaptoethanesulfonate. //Langmuir, 12 (23), 5696-5703 (1996).

102. U. K. Laemmli, Cleaveage of structiral proteins during the assembly of the head of bacteriofag T4. //Nature, 227, 680-685 (1970).

103. М.Тернер, Ф. Ричарде, Дж.Варга, Р.Розенстайн, У. Конигсберг, М. Стьюард, А. Файнстайн, Д. Бил, Структура и функции антител. // Пер. с англ под ред. Л. Глинна, М. Стюарда, Москва, изд. «Мир» (1983).

104. Т. Аммосова // Кандидатская диссертация, Химический факультет МГУ, Москва (1998).

105. Р.К. Nakane, A. Kawaoi, Peroxidase-Labeled Antibody a New Method of Conjugation. //J. Histochem. Cytochem. 22, 1084-1091 (1974).

106. T. Ruzgas, L.Gorton, J. Emneus, G. Marko-Varga, Kinetic models of horseradish peroxidase action on a graphite electrode. // Journal of Electroanalytical Chemistry, 391, 41-49 (1995).

107. Р.В.Худяков, C.B. Солошко, А.Ю. Сафронов, Электрохимическое поведение гистидина на золоте. // Электрохимия, 33 (10), 1165-1171 (1997).