Действие сапонинов в сверхмалых дозах на некоторые физико-химические свойства их растворителя и на физико-химическое состояние мембран эритроцитов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.04 ВАК РФ

На правах рукописи

КУВАРДИН НИКОЛАЙ ВЛАДИМИРОВИЧ

ДЕЙСТВИЕ САПОНИНОВ В СВЕРХМАЛЫХ ДОЗАХ НА НЕКОТОРЫЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ИХ РАСТВОРИТЕЛЯ И НА ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ

02 00.04 - Физическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Курск 2007

003066673

Работа выполнена на кафедре химии Курского государственного технического университета.

Научный руководитель

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Ниязи Фарух Фатехович

заслуженный деятель науки РФ, доктор химических наук, профессор Маркович Юрий Дмитриевич

кандидат химических наук, старший преподаватель Оксененко Ольга Ивановна

Ведущая организация

Институт Биохимической Физики им Эмануэля

Защита состоится октября 2007 г в часов на заседании

диссертационного совета К212 105.02 при Курском государственном техническом университете по адресу. 305040, г Курск, ул 50 лет Октября, 94.

Отзывы на автореферат просим присылать в двух экземплярах по адресу: 305040, г. Курск, ул 50 лет Октября, 94, на имя ученого секретаря диссертационного совета

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Курского государственного технического университета

Автореферат разослан сентября 2007 г.

Ученый секретарь 1

Диссертационного совета К212.105.02 Кудрявцева Т Н.

Общая характеристика работы

Актуальность темы В последнее время вопросу изучения эффектов сверхмалых доз химических соединений уделяется все больше внимания.

На сегодняшний день отсутствуют простые и надежные методы отбора веществ, обладающих активностью в сверхмалых концентрациях, а так же нет единого мнения, каким образом химическое вещество в этих сверхнизких концентрациях может проявлять свои свойства. Такими веществами могут быть ферменты, биодобавки, лекарственные вещества и другие биологически активные вещества. В сверхмалых дозах вышеперечисленные вещества проявляют большой положительный эффект. Причем, никаких побочных эффектов при их применении не отмечено.

В научной литературе имеется большой банк данных по исследованию химических веществ, которые обладают эффектом сверхмалых доз. На основе этих фактов выдвинуто много теорий механизма действия сверхмалых доз химических соединений, в большинстве из них превалируют гипотезы об определяющей роли воды в этих высокоразбавленных растворах

В настоящее время отсутствует единая теория, поясняющая вопросы поднятой проблемы, мало точных научных объяснений действия СМД, а так же обоснованности связи установленных эффектов со свойствами воды в которой растворено действующее вещество

Перспективы решения этой проблемы довольно широки Изучение механизма действия сверхмалых доз и роли воды в нём, возможно, позволит создать новый класс лекарственных препаратов, которые будут иметь достаточно большой фармокологический эффект и не будут иметь побочных эффектов, что очень перспективно, например, в онкологии Уже создано несколько лекарственных препаратов на основе действия сверхмалых доз, которые запатентованы и разрешены к применению и продаже

Решение проблемы сверхмалых доз может повлиять на решение экологических проблем и пересмотр предельно допустимых концентраций, в токсикологии, так как известно, что токсические вещества при действии в сочетании со сверхмалыми дозами могут по-разному влиять на живой организм

Вопросам изучения эффектов сверхмалых доз посвящена настоящая работа, что подтверждает её актуальность и современность.

Цель работы Выявить влияние сверхмалых доз некоторых химических веществ на изменения отдельных физико-химических свойств воды, которая является их растворителем Установить воздействие сверхмалых доз гемолизирующего раствора сапонинов на изменение физико-химических свойств мембран эритроцитов.

Для достижения этой были цели решены следующие задачи: - найдено вещество, сапонин, проявляющее эффект сверхмалых доз, установлен эффект сверхмалых доз сапонина на биомодели - эритроцитах крови;

- установлено изменение высоты мениска в капилляре для проб сверхмалых доз раствора сапонинов,

- проведено исследование влияния температурного режима на изменение высоты мениска в капилляре для проб сверхмалых доз раствора сапонинов,

- исследовано влияние постоянного магнитного поля на изменение высоты мениска в капилляре для проб сверхмалых доз раствора сапонинов,

- установлено изменение электропроводности водных растворов сапонинов в зависимости от их разведения;

- выявлены некоторые изменения ИК-спектров воды для некоторых высокоразбавленных растворов сапонинов,

- методом ЭПР-спектроскопии проведено исследование изменения микровязкости липидного бислоя мембран эритроцитов под действием сверхмалых доз раствора сапонинов

Научная новизна исследования и положения выносимые на защиту:

- Установлен эффект сверхмалых доз для раствора сапонинов

- Показано, что разведения раствора сапонинов, дающие при исследовании снижения высоты мениска в капилляре, обладают эффектом сверхмалых доз

- Показана связь, между действием сверхмалых доз раствора сапонинов и изменением определенных физико-химических свойств воды, являющейся растворителем сапонинов.

Научно-практическая значимость. Определен простой, надежный метод капиллярного анализа отбора веществ, обладающих активностью в сверхмалых дозах, дающий возможность указания, при каких разведениях возникает этот эффект.

Выявлена возможность применения эффекта торможения гемолиза сверхмалыми дозами гемолизирующего раствора в нейтрализации гемолитического яда.

Настоящие исследование сделает информационный вклад в изучение проблемы сверхмалых доз

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены и обсуждались на конференциях "Молодежная наука и современность" (Часть П КГМУ Курск 2006 г), "Материалы международной юбилейной научно-практической конференции поев 110-летию Курской биофабрики и агробиологической промышленности России" (Курск 2006 г), на информационном семинаре "Перспективы расширения участия ВУЗов и научных организаций в Шестой/Седьмой рамочных программах ЕС по научно-технологическому развитию" (Воронеж, 2006 г )

Публикации по теме диссертации. По материалам диссертации опубликовано 4 научных работы, в том числе одна в рецензируемом > журнале, подана заявка на патент

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, пяти глав, заключения, списка литературы из 125 наименований, приложения, и содержит 123 страницы, 35 рисунков, 10 таблиц

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении к диссертации обосновывается актуальность темы, определяются цели и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость работы

В первой главе приводится литературный обзор проблемы сверхмалых доз, описываются эффекты, закономерности и концентрационные интервалы возможной активности сверхмалых доз различных химических веществ. Представляются разные гипотезы механизмов действия сверхмалых доз различных веществ. Наибольшее внимание уделено гипотезам о роли воды в механизме действия сверхмалых доз, которые сводятся к тому, что вещество в определенных сверхмалых дозах может влиять на воду, изменяя её некоторые физико-химические свойства Рассматриваются результаты современных физико-химических исследований о структуре и свойствах воды. Приведены области и перспективы применения сверхмалых доз различных веществ.

Вторая глава посвящена установлению факта действия сверхмалых доз для некоторых веществ.

Из литературных источников известно, что, в основном, эффектом сверхмалых доз обладают вещества биологически-активные, поэтому для исследований был выбран гемолизирующий раствор сапонинов и соответствующий объект воздействия - эритроциты донорской крови.

Был установлен факт активности раствора сапонинов в областях степеней разведения 10'8 - 10"12 и 10"20-Ю"24 от исходной действующей концентрации (исходная действующая концентрация определялась экспериментально, и составила 0,0113 г действующего вещества на начальное разведение) Известно, что эритроциты растворяются при действии на них гемолизирующего раствора сапонинов. Было установлено, что при добавлении сверхмалых доз этого же раствора сапонинов (в областях

О ^ лп а/

степеней разведения 10 ° - 10'" и 10" -10" от исходной концентрации) к эритроцитам, гемолиза практически не наблюдается, при добавлении стандартной действующей концентрации этого раствора. Данное явление было обнаружено при исследовании влияния на эритроциты широкого диапазона разведений (от 10"2 до 10"28 степени разведения от исходной действующей концентрации) раствора сапонинов. Так как эффект торможения гемолиза наблюдался визуально по окраске надосадочной жидкости, то для более точного определения наличия эффекта сверхмалых доз каждую пробирку исследовали на оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 540 нм. Рис 1. На рисунке 1 показано снижение оптической плотности для образцов эритроцитов № 5 и №11, на

которые предварительно воздействовали помимо стандартной дозы гемолизирующего раствора, растворами сапонинов в степенях разведения Ю"[0 и 10"'2 соответственно.

Помимо стандартного раствора сапонинов исследовались другие вещества, в тех же степенях разведения, на предмет возникновения "эффекта сверхмалых доз".

Такими веществами являлись уксусная кислота (СН3СООН) и нитрит натрия (ЫаМСЬ). Названные вещества в обычных концентрациях обладают гемолитической активностью. Но при исследовании этих веществ в интервалах разведений 1(Р - 10"28 степени от исходной пороговой концентрации не было обнаружено никакой закономерности соответствующей эффектам сверхмалых доз. Однако, это не означаем что эти вещества не могут обладать вышеназванным эффектом, так как возможно, эффект сверхмалых доз для этих веществ проявляется в более низких, еще не изученных концентрациях или при других условиях.

4 б е ю 12 14 16 ia го гг 24 гв 28 -ig степень разведения

1

0.9 0,8 0.7 0.6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 а

2

Рис.) Зависимость оптической плотности надосадочной жидкости эритроцитов, от влиянии на них различных разведений стандартного раствора сапонинов

Выявлена гипо г ликемичес кая активность инсулина в разведениях 10"1S От действующей концентрации, Гипогликемический эффект сверхмалых доз инсулина установлен у животных in vivo на модели аллоксаиового диабета. Однако остаются неясными вопросы о надежной воспроизводимости эффекта, зависимости действия от индивидуальной чувствительности подопытных животных, возможной модуляции действия другими препаратами и приложимости феномена бипатии.

Вследствие этого, дальнейшие исследования проводились с разведениями раствора сапонинов, при работе с которыми, были получены наиболее четкие и воспроизводимые результаты.

В третьей главе проводится исследование изменения некоторых физико-химических свойств воды, которая являлась растворителем для соответствующих разведений сапонинов.

Образцы четырнадцати разведений раствора сапонинов (от 10" до 1СГЕ степени разведения от исходной действующей концентрации) катетометр и чески исследовались на изменение высоты мениска в капилляре при постоянной температуре 25°С. Результатом явилось то, что высота мениска В капилляре понижалась только в двух образцах №6 и №11, что соответствует разведениям гемолизирующего раствора 10"12 и 10"2г от исходной концентрации. Снижение высоты мениска в капилляре для указанных разведений отмечено в среднем на 32,4%, относительно контроля, относительно остальных проб разведений в среднем на 20,5%.Снижение высоты мениска в капилляре говорит об уменьшения краевого угла смачивании, так как в капиллярах косинус этого угла прямо пропорционален высоте мениска жидкости, а следовательно, об уменьшении поверхности мениска, это в свою очередь свидетельствует об увеличении поверхностного натяжения. В других пробах разведений изменения высоты мениска в капилляре не значительное. Такая закономерность отражена на рисунке 2.

Известно, что форма и размеры растворенных частиц оказывают влияние на ближайшее окружение растворителя, а так же на их ориентационное взаимодействие с окружающими молекулами растворителя. При растворении происходит некоторое изменение структуры воды вблизи растворенных частичек, что может приводить к изменению микровязкости в ближайшем их молекулярном окружении.

г 4 6 6 10 12 14 16 13 го 22 24 26 28-4д степень разведения раствора сапонинов

Рис. 2. Изменение высоты мениска раствора сапонинов в капилляре относительно степени разведения этого раствора при 1=25 °С

При этом, согласно теории К в иста и Маршалла происходят следующие процессы: 1) взаимодействие ион-ион;

2) взаимодействие ион-растворитель,

3) изменение ионами структуры воды

Предположительно, что сапонины в определенных сверхнизких концентрациях аналогичным образом влияют на воду, в которой происходит их растворение

Процесс потенцирования или интенсивного встряхивания и перемешивания предположительно связан с перестройкой водородных связей Ведь при данном процессе воде передается механическая энергия, которая, предположительно, играет немаловажную роль в процессе разведения. Необходимо учитывать, что для изменения структуры воды совершенно не обязателен "разрыв" водородных связей, требующий большого количества энергии, достаточно гораздо меньших усилий для деформации этих связей Все это в свою очередь, возможно, связано с изменением свойств растворителя — воды Само вещество, попадая в воду в силу особенности своего строения и функциональности, а так же, имея свою собственную частоту колебаний, начинает оказывать влияние на структурные характеристики воды. Затем, при интенсивном встряхивании, вся система получает избыточную энергию, способствующую движению растворяемого вещества по всему объему растворителя, а так же механическую энергию, направленную на деформацию (или разрыв) водородных связей. Далее, при последовательном разведении - при переносе установленного объема раствора в другой объем чистого растворителя -переносится не только само разводимое вещество, но и его энергетическая составляющая. Т.е это определенный избыток энергии, колебания растворимого вещества (сапонинов), колебания воды, кроме того, вновь образованные радикалы Н4 и ОН", НэО+, образованные под влиянием сапонинов и интенсивного встряхивания Все эти факторы не могут не повлиять на состав чистого растворителя, в котором вновь растворяется эта смесь. Затем это разведение вновь подвергается встряхиванию, при этом, к уже избыточной энергии, полученной при потенцировании предыдущего разведения, добавляется новая доза энергии Далее, для последовательного разведения, опять происходит перенос вещества и энергии в новый объем растворителя, при этом количество растворяемого вещества уменьшается, энергия каждого нового разведения увеличивается, увеличивается и количество радикалов, происходят все новые и новые перестройки в сетки водородных связей Итак, в определенных степенях разведения все эти факторы суммируются, радикально меняя свойства воды (свойства полученного разведения). В нашем случае это степени разведений 10'8 до 10" 12 и Ю"20 -10"24 раствора сапонинов. В работе было установлено, что в указанных степенях разведения уменьшается высота мениска в капилляре, а следовательно, увеличивается поверхностное натяжение Как мы видим, это явление носит периодичный характер, что может объясняться тем, что накопленной энергии, ионов и различных радикалов достаточно, при определенной степени разведения (10'8 - 10 и Ю"20 -10"24 степени разведения), для перестройки водородных связей и изменения свойств воды.

Далее, для следующего повторения этих изменений необходимо продолжать аналогичный процесс разведения до возникновения следующего энергетического запаса, необходимого для перестройки водородных связей.

В этом же разделе описано влияние низких положительных температурных параметров на зависимость снижения высоты мениска в капилляре раствора сапонинов от их разведения. Для этого разведения раствора сапонинов приготовлялись на би дистиллирован ной воде с температурой не превышающей 4°С. Были получены данные аналогичные выше описанным, обнаружено снижение высоты мениска в капилляре для образцов раствора сапонинов со степенями разведения Ю"12 и \0'22 от исходной концентрации на 14,5% относительно контроля (рис.3). Однако стоит отметить, что высота измеряемых менисков в капилляре для всех разведений сапонинов была менее выражена при температуре до 4°С, нежели при температуре 25°С, Мениск бидистиллированной воды в капилляре при температуре 3 С был так же меньше мениска той же воды при температуре 25сС.

Таким образом, можно предположить, что сверхмалые дозы раствора сапонинов могут влиять на некоторые свойства воды, причем роль температуры воды, в которой растворено вещество, не значительна, так как для температуры 3°С фазовая зависимость снижения высоты мениска в капилляре аналогична зависимости снижения при температуре 25°С.

степень разведения гемолизкрующего раствора

Рис. 3 ■ Изменение высоты мениска раствора сапонинов в капилляре относительно степени разведения этого раствора при температуре 3° С

Менее выраженное снижение мениска, а так же небольшая высота мениска для всех разведений и для чистой бидистиллированной воды, вероятно, обусловлено "льдообразной" структурой воды, которой обладает вода при температуре до 4°С. При указанной температуре происходит более

плотная упаковка молекул воды, что подтверждается различными гипотезами о строении воды.

Известно, что магнитные поля могут по-разному влиять на воду, изменяя её отдельные физико-химические свойства. Образцы растворов сапонинов в степенях разведения 10"2 - 10 '25 от исходной концентрации выдерживали в течении пяти минут в постоянном магнитном поле с магнитной индукцией 130,4 мТл и напряженностью 78,95 кА/м (рис.4) Далее, эти разведения исследовали катетом етрически на изменения мениска в капилляре.

Рисунок 4, Магнитная установка с омагничиваемым разведением сапонинов.

Было установлено, что при каждом разведении раствора сапонинов происходит понижение высоты мениска, нет резких скачков снижения высоты мениска, характерных для определенных степеней разведения, как в предыдущих экспериментах, что отражено на рисунке 5.

При воздействии на разведения сапонинов магнитным полем мы не видим закономерностей описанных выше, относительно мениска, напротив, мы видим совсем другую зависимость, что говорит о том, что магнитные поля своим действием перекрывают влияние сверхмалых доз и процесса потенцирования на воду.

При этом можно предположить, что частицы воды и сапонинов держатся вместе благодаря капиллярным силам воды, захваченной в их площади соприкосновения, и силами сцепления между частицами, главным образом, которые обусловлены многочисленными водородными мостиками, созданными под действием магнитного поля. В первых разведениях концентрация сапонинов больше, чем в последующих и, предположительно, под действием магнитного поля количество водородных мосгиков, которые

образуются как между молекулами воды, так и между сапонинами и водой, так же больше, чем в остальных разведениях. С увеличением степени разведения количество частиц сапонинов уменьшается, уменьшается и разнообразие водородных связей, преобладают водородные связи типа вода-вода, Поэтому жидкость с увеличением степени разведения становится менее "рыхлой", мениск в капилляре, в подтверждение этому, уменьшается при каждом разведении, соответственно, поверхностное натяжение увеличивается.

Однако, можно предположить следующее: вода под действием определенных сверхнизких концентраций веществ структурируется определенным образом, изменяя свои отдельные физико-химические свойства. Если в этих высоко разбавленных растворах имеется наличие некоторого количества растворенного кислорода, то кислород, являясь парамагнитным веществом, под действием магнитного поля, возможно, влияет на деформацию водородных связей, структурированных сверхнизкими концентрациями раствора сапонинов.

о.вб е о, аз

I 0.8

I 1 0.77 £ „- 0,74 1 £ 0.71 § | 0.68 | § 0,65

.. а 0.62

0 я 0.59

1 л г,.

х о 0,56 ® о

Р 3. 0.5

8 0,47 щ 0,44 0,41

2 4 6 8 10 12 14 16 16 20 22 24 26 264д степень разведения гемолиз и рующе го раствора

Рис.5. Изменение высоты мениска в капилляре образцов стандартного раствора сапонинов в степенях разведения 10 2 — 10 ~2г под действием постоянного магнитного поля

Учитывая, что магнитные поля могут изменять влияние физико-химических факторов, мы предположили, что некоторое непостоянство в полученных результатах, возможно, связано с воздействием магнитных полей на водные системы.

В этом разделе установили, что изменяется удельная электропроводность воды, в которой растворены сверхмалые дозы раствора

сапонинов. Для этого вновь приготавливали серию последовательных разведений раствора сапонинов. Далее, при помощи кондуктометра Мулътитест КС.Л-101 измеряли удельную электропроводность для каждого разведения. В результате было обнаружено небольшое повышение электропроводности для раствора сапонинов в степенях разведения 10'8 и 1СГг2 {рис, 6). Необходимо отметить, что фазовый характер изменения электропроводности аналогичен зависимостям изменения высоты мениска в капилляре. Обобщая статистические данные по изменению удельной электропроводности можно сказать, что удельная эле ктро проводи ость увеличивается в среднем на 12% относительно контроля, для образцов сапонинов в тех же степенях разведения (10~8 до 10'12 и 10'20 -10" ), для которых изменялось поверхностное натяжение, и наблюдался биологический эффект.

2 4 6 В 10 12 14 16 18 :о 22 24 26 28-1д

степень разведения раствора сапонинов

Рис. 6. Зависимость изменения удельной электропроводности для раствора сапонинов от его степени разведения

Как было сказано выше, процесс потенцирования и влияния растворенного вещества может провоцировать образование ионов гидроксония (НзСГ) и гидроксила (ОН*), что может объяснять наличие, именно в определенных в ысокораз баз ленных растворах сапонинов, небольшое увеличение электропроводности.

В четвертой главе описываются результаты исследования водных растворов сапонинов в широком интервале разведений методом инфракрасной спектроскопии.

Были получены инфракрасные спектры поглощения зля водных образцов сапонинов в степенях разведения НУ" - 10"24 от исходной действующей концентрации. Так как исходная концентрация сапонинов для разведения достаточно мала, то по своему составу разведения представляют

собой воду, содержащую примеси сапонинов в разном соотношении, соответственно, для каждого разведения. Поэтому полученные ИК - спектры являются спектрами воды соответствующих разведений сапонинов.

Из полученных спектров можно выделить инфракрасные спектры воды, принадлежащие образцам раствора сапонинов в степенях разведения 10'12и 10"22 от исходной концентрации (рис.7), которые схожи между собой и имеют отличия от спектров воды других образцов разведений (рис. 8). Эти отличия заключаются в проявлении повышенной интенсивности полос поглощения в областях волновых чисел 1560-1430 см"1 и 945-574 см'1.

Количество пиков для этих образцов разведения увеличивается в областях волновых чисел от 1000 см'1 до 800 см"1, что соответствует внегаюскостным деформациям О-Н связей (970-880 см"1), а так же валентным колебаниям О-О связей (930-800 см"1).

Итак, исходя из данных инфракрасной спектроскопии, можно предположить, что в образцах раствора сапонинов в областях степеней разведения Ю"10 - 10"14 и 10"22 - 10"24 происходят некоторые изменения в структуре растворителя, в основном деформационные. Это наводит на мысль, что в этих степенях разведения, вероятно под действием сбалансированного избытка энергии и небольшого количество содержащихся в воде молекул сапонинов, происходит перестройка структурных составляющих воды. Возможно, в результате этого меняются и свойства растворенных молекул действующего вещества, например степень их активности.

Рис.7, пример ИК-спектра воды для сапонинов со степенью разведения 10"22 от исходной концентрации, (проба № 11)

Рис 8.пример ИК-спектра воды для проб остальных разведений (кроме проб №6 и №11) раствора сапонинов

В пятой главе приведены результаты влияния широкого спектра концентраций гемолизирующего раствора сапонинов на физико-химическое состояние мембран эритроцитов

В модельных экспериментах мембраны эритроцитов инкубировались с растворами сапонинов в течение 30 мин, а затем оценивали микровязкость разных областей липидной компоненты мембран по времени вращательной корреляции, включенных в мембрану спиновых зондов- 2,2,6,6-тетраметил-4-каприлоил-оксипиперидин-1-оксил (зонд 1) и 5,6-бензо-2,2,6,6-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидро- у- карболин- 3-оксил (зонд 2), которые различаются по своим гидрофобным свойствам. Известно, что зонд 1 преимущественно локализуется в поверхностном липидном бислое, а зонд 2 - в глубоколежащих прибелковых липидах мембран. Зонды вводили в суспензию мембран в виде спиртового раствора за 30 мин до измерения образцов на ЭПР-спектрометре ЕЯ 200Е)-811С фирмы Вгискег (ФРГ) Из полученных спектров ЭПР рассчитывали время вращательной корреляции зонда (т0 х Ю"10 сек), имеющее смысл периода переориентации радикала на угол я/2 Результаты выражали в относительных единицах.

В табл. 1 приведены данные изменения структурного состояния мембран эритроцитов в области локализации зондов Г и 2 в зависимости от концентрации гемолизирующего раствора сапонинов.

Изменение микровязкости липидного бислоя мембран эритроцитов при воздействии гемолизирующего агента в разных степенях разведения

Таблица 1

Степень р введения раствора сапонинов -1й 2 д 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 К! К2

Т|.ЗОНД 1 0,4В 0.41 0,48 0,58 0,52 0.« 0,48 0.62 0,49 0,53 0,48 0.48 0,51 0.54 0,» 0,65

т., ЗОНД 2 1,17 1.08 1,46 0.94 1.06 0,53 1.13 1.08 1,04 1.27 1,004 1.09 1,23 1,06 0,97 1,22

Где, т - 1(Г10сек.

Установлено, что под действием гемолизирующего раствора сапонинов микровязкость в поверхностной области липидного бислоя мембран эритроцитов снижена во всем диапазоне изученных концентраций, а величина эффекта зависит от дозы вещества: в степенях разведений 10 8 и 10"1Й вязкость снижается незначительно, и сильнее (до 25% по сравнению с контролем) уменьшается под действием гемолизирующего раствора в степенях разведений 10~2, 10 й и 10~22 (рис. 9). При этом следуег отметить, что изменения микровязкости липидного бислоя в области зондз 2 носят фазный характер. Таким образом, существуют области разведения, где микровязкость снижена (от ¡(Г3 до Ю44), причем наиболее заметно (до 45% относительно контроля) при Ю-12 (рис, 10).

Рис.9, Концентрационная зависимость действия раствора сапонинов на микровязкость поверхностного липидного слоя (зонд 1) мембран эритроцитов (в % по отношению к контролю)

Однако, при действии сапонинов в концентрациях 10 й, 10"го и 10""° микровязкость при белковых липидов мембран эритроцитов значительно увеличивается (максимально до 35% при разведении КГ6). В остальных случаях (разведения Ю"2- 10^ , 10-1 - Ю"18 , 10"22-10"!й ) эффекта от препарата не наблюдалось.

-5 -15

-25 -35 -45

-55

Номер разведения

Рис. 10. Концентрационная зависимость действия раствора сапонинов на микровязкость прибелковых липидов (зонд 2) мембран эритроцитов (в % по отношению к контролю)

Таким образом, можно сделать вывод, что сапонины в широком диапазоне концентраций влиян>г на структурное состояние мембран эритроцитов. Под действием гемолизирующего раствора сапонинов в степенях разведений 10"12 и 10" происходят максимальные изменения в микровязкости мембран эритроцитов, что можно непосредственно связать с явлением торможения гемолиза, даже при добавлении высокой концентрации гемолизирующего объекта.

В приложении приведены данные по ИК-спектроскопии (значения интенсивности поглощения от длины волны) для каждого разведения.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ

1, Установлен бимодальный эффект сверхмалых доз раствора сапонинов путем исследования водных растворов сапонинов в разведениях 10"г - 1(У28 от исходной пороговой концентрации. Этот эффект выражается в виде повышения устойчивости к гемолизу эритроцитов, инкубированных в потенц про ванных растворах сапонинов н разведениях 10* - 10" 5 и Ю"20— 10"2\ при последующем добавлении гемолизирующей дозы сапонинов,

2. При катето метрическом исследовании высоты мениска проб раствора сапонинов в степенях разведений 10"2 — 10"га от действующей пороговой концентрации установлено, что в пробах соответствуют их

степеням разведений 10"8- 10"12 и Ю'20- 10"24 происходит снижение высоты мениска в капилляре относительно контроля в среднем на 32,4%, относительно остальных проб разведений в среднем на 20,5%, следовательно, в этих образцах под действием сверхмалых доз раствора сапонинов происходит изменение поверхностного натяжения воды. На основе этого определен надежный метод капиллярного анализа отбора веществ, обладающих активностью в сверхмалых дозах, дающий возможность указания, при каких разведениях возникает этот эффект

Исследовано влияния температуры на изменение поверхностного натяжения растворов сапонинов в различных степенях разведения. Установлено, что при снижении температуры растворов сапонинов (разных разведений) до 4°С, вышеуказанная зависимость снижения высоты мениска в капилляре остается той же, но менее выраженной и составляет 14,5%, относительно контроля.

3 Отмечено, что пятиминутная экспозиция разведенных потенцированных растворов сапонинов в постоянном магнитном поле полностью отменяет эффект понижения высоты капиллярного мениска в разведениях 10"8 - 1012и Ю"20-10"24.

4 Выявлено, что электропроводность растворов сапонинов в разведениях проявляющих эффект сверхмалых доз (разведения 10"8 - 10"12 и Ю"20— 10"24) увеличивается в среднем на 12%, по отношению к дистиллированной воде.

5 Методом инфракрасной спектроскопии установлены некоторые изменения в спектрах воды для растворов сапонинов в разведениях 10"8 — 10"12и Ю"20- 10"24 от исходной действующей концентрации

6 Показано методом ЭПР-спектроскопии, что препарат в сверхмалых дозах оказывает эффект на структурное состояние мембран эритроцитов Изменения микровязкости мембран носят фазный характер в зависимости от концентрации сапонина. Обнаружено разведение препарата - 10~12, при котором наблюдается максимальный эффект во всех областях липидного бислоя

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих работах:

1) Кувардин, НВ. Эффекты сверхмалых доз биологически активных веществ [Текст] / Н В. Кувардин, Е С. Калиберда, В.О Устименко [и др ] // Молодежная наука и современность Часть II. - Курск 2006. — с. 162.

2) Кувардин, Н В Гипогликемический эффект сверх малых доз инсулина [Текст] / Н В. Кувардин., В.О. Устименко //Молодежная наука и современность. Часть П. — Курск 2006 — с. 161.

3) Кувардин, НВ Эффекты сверх малых доз биологически активных веществ в иммунологии [Текст] / Н В. Кувардин, В.В Новиков // Материалы международной юбилейной научно-практической конференции поев 110-

летию Курской биофабрики и агробиологической промышленности России -Курск 2006 - с. 271-273

4) Кувардин, Н В Действие сверхмалых доз гемолизирующего раствора на мембраны эритроцитов [Текст] / Н.В. Кувардин, Ф.Ф Ниязи // Известия ВУЗов Химия и химическая технология. — Т 50, №8 - 2007. с 5356.

Подписано в печать 18 09 07. Формат 60x84 1/16 Усл. печ л. 1 07 Тираж 100 экз Заказ 33 Курский государственный технический университет. Издательско-полиграфический центр Курского государственного технического университета 305040, Курск, ул 50 лет Октября, 94

Введение.

Глава 1 Литературный обзор

1.1 Основные понятия эффектов сверхмалых доз и их общие закономерности.

1.2 Современное представление о механизме действия сверхмалых

1.3 Структура и свойства воды.

1.4 Современные исследования действия сверхмалых доз и влияние сверхмалых доз различных веществ на состояние воды.

1.5 Области и перспективы применения сверхмалых доз различных веществ.

Актуальность проблемы - проблема сверхмалых (СМД) доз химических веществ привлекает, в последние годы, внимание многих исследователей в различных областях научных знаний, таких как химия, физика, биология, фармакология и т.д.

Сущность проблемы состоит в том, что пока научному миру неясно, каким образом химическое вещество, в определенных сверхнизких концентрациях, может проявлять свои свойства. Эти свойства проявляют химические вещества, воздействуя на биообъект. Такими веществами могут быть ферменты, биодобавки, лекарственные вещества и другие биологически-активные вещества. При наличии большого положительного эффекта воздействия сверхмалых доз веществ никаких побочных эффектов не отмечается.

Существует много гипотез механизма действия сверхмалых доз биологически активных веществ, среди которых большую часть занимают теории о роли воды в этих высокоразбавленных растворах. Выявлено и исследовано большое количество различных химических веществ, которые обладают эффектом сверхмалых доз. Подробно изучаются свойства воды.

В настоящее время ответов на многие вопросы поднятой проблемы не дано, точка в проблеме СМД не поставлена, пока что мало точных научных объяснений действия СМД, а также точной обоснованности связи эффектов со структурой воды.

Поэтому в данный момент эта область исследований достаточно актуальна. Перспективы решения этой проблемы довольно широки. Изучение действия СМД и роли воды в нём, возможно, позволит создать новый класс лекарственных препаратов, которые будут иметь достаточно большой биологический эффект и не будут иметь побочных эффектов, что очень перспективно, например, в онкологии. Уже создано несколько лекарственных препаратов на основе действия СМД, которые запатентованы и разрешены к применению и продаже.

Решение проблемы СМД может повлиять на решение экологических проблем и пересмотр ПДК в токсикологии, так как известно, что токсические вещества при действии в сочетании со сверхмалыми дозами могут по-разному влиять на живой организм.

Цель работы. Выявить влияние СМД некоторых химических веществ на изменения отдельных физико-химических свойств воды, которая является их растворителем. Установить воздействие СМД гемолизирующего раствора сапонинов на изменение физико-химических свойств мембран эритроцитов.

Для достижения этой были цели решены следующие задачи:

- найдено вещество, сапонин, проявляющее эффект СМД, установлен эффект СМД сапонина на биомодели - эритроцитах крови;

- установлено изменение высоты мениска в капилляре для проб СМД раствора сапонинов;

- проведено исследование влияния температурного режима на изменение высоты мениска в капилляре для проб СМД раствора сапонинов;

- исследовано влияние постоянного магнитного поля на изменение высоты мениска в капилляре для проб СМД раствора сапонинов;

- установлено изменение электропроводности водных растворов сапонинов в зависимости от их разведения; выявлены некоторые изменения ИК-спектров для высокоразбавленных водных растворов сапонинов;

- методом ЭПР проведено исследование изменения микровязкости слоев мембран эритроцитов под действием СМД раствора сапонинов.

Научная новизна исследования и положения выносимые на защиту:

- Установлен эффект СМД для раствора сапонинов

- Показано, что разведения раствора сапонинов, дающие при исследовании снижения толщины мениска в капилляре, обладают эффектом СМД.

- Показана связь между действием СМД раствора сапонинов и изменением определенных физико-химических свойств воды, являющейся растворителем сапонинов.

Научно-практическая значимость. Определен простой, надежный метод капиллярного анализа отбора веществ, обладающих активностью в сверхмалых дозах, дающий возможность указания, при каких разведениях возникает этот эффект.

Выявлена возможность применения эффекта торможения гемолиза СМД гемолизирующего раствора, в нейтрализации гемолитического яда.

Настоящие исследование сделает информационный вклад в изучение проблемы СМД.

Вклад автора. Автором лично, или при его непосредственном участии получены, обработаны и проанализированы экспериментальные результаты, сформулированы конкретные и общие итоги работы.

На защиту выносятся:

1) Эффект сверхмалых доз некоторых химических соединений

2) Влияние сапонинов в сверхмалых дозах на изменение отдельных физико-химических свойств растворителя

3) Изменение физико-химического состояния мембран эритроцитов под воздействием сверхмалых доз сапонинов.

Выводы

1. Установлено, что раствор сапонинов в областях степеней разведения 10"8 - 10"12 и Ю"20- 10"24 от действующей концентрации обладает эффектом сверхмалых доз. Указанный эффект выражается в виде изменения чувствительности эритроцитов к действию раствора сапонинов в действующих концентрациях. Таким образом, при влиянии на эритроциты

8 12 20 24 раствора сапонинов в степенях разведений 10" - 10" и 10" - 10" , не происходит разрушение эритроцитов при последующей добавленной действующей концентрации раствора сапонинов. Исходя из вышесказанного, можно предположить практическую значимость данного эффекта СМД -использование эффекта, как защитное действие от применимого гемолитического яда.

2. При исследовании высоты мениска проб раствора сапонинов в

2 28 степенях разведений 10" -10" от действующей пороговой концентрации

8 12 установлено, что в пробах соответствующих степеням разведений 10' - 10" и Ю"20- 10"24 происходит снижение высоты мениска в капилляре относительно контроля в среднем на 32,4%; относительно остальных проб разведений в среднем на 20,5%, следовательно, в этих образцах под действием сверхмалых доз раствора сапонинов происходит изменение поверхностного натяжения воды. На основе этого определен надежный метод капиллярного анализа отбора веществ, обладающих активностью в сверхмалых дозах, дающий возможность указания, при каких разведениях возникает этот эффект.

Исследовано влияния температуры на изменение поверхностного натяжения растворов сапонинов в различных степенях разведения. Установлено, что при снижении температуры растворов сапонинов (разных разведений) до 4°С, вышеуказанная зависимость снижения высоты мениска в капилляре остается той же, но менее выраженной и составляет 14,5%, относительно контроля.

3. Установлено, что под действием постоянного магнитного поля с магнитной индукцией 130,4 мТл и напряженностью 78,95 кА/м не наблюдается снижение высоты мениска для определенных степеней разведения раствора сапонинов. Напротив, установлено монотонное снижение высоты мениска в капилляре, от пробы наиболее концентрированного раствора до пробы менее концентрированного. Это, указывает на влияние сверхмалых доз стандартного раствора сапонинов, которое устраняется под действием сильного постоянного магнитного поля.

Сделаны предположения о причине физико-химических изменений в воде.

4. Выявлено, что электропроводность растворов сапонинов в

8 12 20 24 разведениях проявляющих эффект СМД (разведения 10" - 10" и 10" - 10" ) увеличивается в среднем на 12%, по отношению к дистиллированной воде.

5. Методом инфракрасной спектроскопии установлены некоторые изменения в спектрах воды для растворов сапонинов в разведениях 10" -10"12и Ю"20- 10'24 от исходной действующей концентрации.

6. Показано методом ЭПР-спектроскопии, что сапонины в СМД оказывают эффект на структурное состояние мембран эритроцитов.

Изменения микровязкости мембран носят фазный характер, в зависимости от 12 концентрации сапонина. Обнаружено разведение препарата - 10 , при котором наблюдается максимальный эффект во всех областях липидного бислоя.

1. Бурлакова, Е.Б. Особенности действия сверхмалых доз биологически активных веществ и физических факторов низкой интенсивности Текст. / Е.Б. Бурлакова, A.A. Конрадов, E.J1. Мальцева // Российский химический журнал. - 1999. - T. XLIII, №5. - с. 3-11.

2. Ашмарин, И.П. К вопросу о развитии проблемы эффективности сверх малых доз биологически активных соединений Текст. / И.П. Ашмарин, Е.П Каразеева, Лелеков Т.В. // Российский химический журнал. 1999. - T. XLIII, №5.-с.21-27.

3. Духович, Ф.С. Количественный подход к определению понятия "сверх малые дозы лекарственных веществ и ядов" Текст. / Ф.С. Духович, E.H. Горбатова, В.К. Курочкин [и др.] // Российский химический журнал. 1999. -Т. XLIII, №5.-с. 12-14.

4. Зайцев, C.B. Общие закономерности и возможные механизмы действия биологически активных веществ в сверхмалых дозах Текст. / C.B. Зайцев, A.M. Ефанов, Л.А. Сазанов // Российский химический журнал. 1999. - Т. XLIII, №5. - с. 28-33.

5. Гуревич, К.Г. Закономерности и возможные механизмы действия сверхмалых доз биологически активных веществ Текст. / К.Г. Гуревич // Вестник Московского ун-та. Сер. 2. Химия 2001. Т. 2, №2. - с. 131-134.

6. Готовский, Ю.В. Особенности действия физических и химических факторов малых и сверхмалых интенсивностей и доз. Текст. / Ю.В. Готовский, Ю.Ф. Перов. Первое издание. - М.: ИМЕДИС, 2003. - с. 388

7. Богатыренко, Т.Н. The effect of organic peroxides on the growth of cultivated cells of higher plants Text. / Т.Н. Богатыренко, Г.П. Редкозубова, Конрадов A.A. [и др.] // Биофизика. 1989. - Т. 34, №26. - с. 327-329.

8. Тушмалова, H.A. О биологическом значении сверхмалых доз Текст. / / H.A. Тушмалова // Международный медицинский журнал. 1999. - №9-10. -с. 547-549.

9. Коновалова, Н.П. Antimetastatic activiti of low and ultra-low doses of lonidamine Text. / Н.П. Коновалова, Ф. Френки, Р.Ф. Дьячковская [и др.] // Изв. АН. Сер. биол. 1995, №6. - с. 750-753.

10. Ю.Тушмалова, Н.А. Влияние малых доз пирацетама на условнорефлекторную память крыс Текст. / Н.А. Тушмалова, JI.JI. Прагина,

11. A.Н. Иноземцев и др. // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1995. - Т. 120. - с. 60.

12. Гендель, Л.Я. Effect of Thyrotropin-Releasing Hormone on the Structure of Rat Erythrocytes Text. / Л.Я. Гендель, H.E. Яковлева, T.B. Лелекова [и др.] // Изв. АН. Сер. биол. 1997. - №1 . - с. 103-106.

13. Пальмина, Н.П. Форболовый эфир как модификатор структуры биологических мембран Текст. / Н.П. Пальмина, Н.Г. Богданова, Е.Л. Мальцева [и др.] // Биол. мембраны. 1992. - Т. 9. - с. 77-91.

14. Бонавида, Б. Иммунологические эффекты веществ в сверхмалых дозах: новые механизмы и синергетические взаимодействия Текст. / Б. Бонавида // Российский химический журнал. 1999. - Т. XLIII, №5. - с. 100-107.

15. Крутова, Т.В. Чувствительность опухолевых клеток к низким дозам противоопухолевых препаратов Текст. / Т.В. Крутова, Л.А. Островская,

16. B.А. Рыкова и др. // Изв. АН. Сер. биол. 1994. - №5. - с. 738-744.

17. Бурлакова, Е.Б. The Effect of Inhibitors of Radical Reactions of Lipid Oxidation on Electrical Activity of Isolated Neuron of the Edible Snail Text. / Е.Б. Бурлакова, Т.Н. Греченко, E.H. Соколов [и др.] // Биофизика. 1986. -Т. 31,№5.-с. 921-923.

18. Чернявская, Л.И. Противосудорожная деятельность сверхмалых доз фенозепама Текст. / Л.И. Чернявская, Н.И. Хорсева, Е.Б. Бурлакова [и др.] // сб. Механизмы действия сверхмалых доз. М. - 1995. - с. 111.

19. Чернявская, Л.И. Влияние фенозепама, вводимого в сверхнизких дозах на ЭЭГ крыс и их поведение в различных моделях тревожных состояний Текст. / Л.И. Чернявская, Е.Б. Бурлакова, Т.А. Воронина [и др.] // БЭБМ. 1997. - Т. 124, №9.-с. 308-310.

20. Лебедева, Н.Е. Метод скрининга веществ, действующих в сверхмалых концентрациях. Текст. / Н.Е. Лебедева, Е.Н. Горбатова, Т.В. Головкина // Тез. докл. III Междунар. симпозиума "Механизмы действия сверхмалых доз" (3-6.12.2002). Москва. - 2002. - с. 10.

21. Варфоломеев, С.Д. Биокинетика. Практический курс Текст. / С.Д Варфоломеев, К.Г. Гуревич. М., 1999. - с. 720.

22. Burlakova, Е.В. Effect of Chemical Agents in Ultra-Low Doses on Biological Objects Text. / E.B. Burlakova, A.A. Kondratov, I.V. Khudyakov // Journal of Nonlinear Biologi. 1990. - V. 1. - P. 77-90.

23. Блюменфельд, Л.А. Параметрический резонанс как возможный механизм действия сверхнизких концентраций биологически активных веществ на клеточном и субклеточном уровнях Текст. / Л.А. Блюменфельд //Биофизика. 1993.-Т. 1.-е. 129-132.

24. Blumenfeld, L.A. Fluctuations and Mass Action Law Breakdown in Statistical Thermodynamics of small System Text. / L.A. Blumenfeld, A.Yu. Grosberg A.N. Tikhonov// J. Chem. Phys. 1991. -V. 95, №10. - P. 7541-7544.

25. Албертис, Б. Молекулярная биология клетки Текст. / Б. Албертис, Д. Брей, Дж. Льюис. М., 1994. - с. 325.

26. Саноцкий, И.В. "Возвращение действия" химических соединений при уменьшении их дозы, введенной в организм. Текст. / И.В. Саноцкий

27. Chatelain, Е. Inhibition of Smooth Muscle Cell Proliferation and Protein Kinase С Activity by Tocopherols and Tocofenols Text. / E. Chatelain, D.O. Boscoboinik, J.M. Bartoli // Biohim. Biophys. Acta. 1993. -V. 1176. - P. 83-89.

28. Пальмина, H. П. Протеинкиназа С пероксилипидзависимый фермент Текст. / Н.П. Пальмина, E.J1. Мальцева, Е.Б. Бурлакова // Хим. физика. -1995.-Т. 14, №11.-с. 47-60.

29. Ямсков, И.А. Механизм биологического действия физико-химических факторов в сверхмалых дозах Текст. / И.А. Ямсков, В.П. Ямская //Российский химический журнал. 1999. Т. XLIII, №2. - с. 74-80.

30. Аксенов, С.И. Вода и её роль в регуляции биологических процессов Текст. / С.И. Аксенов. М.: Наука, 2004. - с. 212.

31. Аксенов, С.И. Динамика биологических структур и её роль в чувствительности организмов к слабым воздействиям Текст. / С.И. Аксенов

32. Тезисы докладов III Межд.симпозиума "Механизмы действия сверх малых доз". Москва, 3-6 дек. 2002. - с. 162.

33. Бульенков, H.A. Обоснование понятия "Кристаллический модуль" Текст. / H.A. Бульенков // сб. Вестник Нижегородского ун-та им. Лобачевского. Сер. Физика твердого тела. 1998. - с. 19-30.

34. Bulienkov, N.A. Three Possible Branches of Determinate Modular Generalisation of Crystallography Text. / N.A. Bulienkov // Fields Institute Monographs. J. Patera (Ed). Providence R.I. - 1998. - V. 10. - P. 67.

35. Бульенков, H.A. Возможная роль гидратации как ведущего интеграционного фактора в организации биосистем на различных иерархических уровнях Текст. / H.A. Бульенков // Биофизика. 1991. - Т. 36, №2. -с. 181-243.

36. Реш, Г. Структура и системная организация гомеопатических потенций Текст. / Г. Реш, В. Гутман // Вестник биофизической медицины. 1994. -№2.-с. 3-10.

37. Беловалова, JT.В. Роль активных форм кислорода и воды Текст. / JI.B. Беловалова, М.В. Глушков // Гомеопатический ежегодник. М., 2003. - с. 3843.

38. Юсупов, Г.А. Научные основы гомеопатии и энергоинформационной медицины Текст. / Г.А. Юсупов, В.Г. Зилов // Гомеопатический ежегодник. -М., 2003.-с. 92-97.

39. Смит, С. Электромагнитная биоинформация и вода Текст. / С. Смит // Вестник биофизической медицины. 1994. - №1. - с. 3-13.

40. Вакс, В.И. Диссоциация воды под действием СВЧ излучения Текст. / В.И. Вакс, Г.А. Домрачев, Ю.И. Родыгин [и др.] // Известия высших учебных заведений. Радиофизика. 1994. -№1. -с.149-154.

41. Наберухин, Ю.И. Загадки воды Текст. / Ю.И. Наберухин // СОЖ. 1996. -№5.-с. 41-48

42. Головин, Ю.И. Вода и лед знаем ли мы о них достаточно? Текст. / Ю.И. Головин. Соросовский образовательный журнал. - 2000. №9. - с. 66-72.

43. Бернал, Дж. Роль воды в кристаллических веществах Текст. / Дж. Бернал //Успехи химии. 1956. -Т. 25, №5. - с. 643-661

44. Волькенштейн, М.В. Биофизика Текст. / М.В. Волькенштейн. М.: Наука, 1988.-с. 592.

45. Габуда, С.П. Связанная вода. Факты и гипотезы Текст. / С.П. Габуда. -Новосибирск, 1982.-с. 159.

46. Эйзенберг, Д. Структура и свойства воды Текст. / Д. Эйзенберг, В. Кауцман. Д.: Гидромедиздат, 1975. - с. 280.

47. Антонченко, В.Я. Физика воды Текст. / В.Я. Антонченко. Киев: Наукова думка, 1986.-е. 127.

48. Антонченко, В.Я. Основы физики воды Текст. / В.Я. Антонченко, A.C. Давыдов, В.В. Ильин. Киев: Наукова Думка, 1991.-е. 668.

49. Дерягин, Б.В. Поверхностные силы Текст. / Б.В. Дерягин, Н.В. Чураев, В.М. Муллер. М.: Наука, 1985. - с. 398.

50. Уоттерсон, Дж. Роль воды в функции клетки Текст. / Дж. Уоттерсон // Биофизика. -1991. Т. 36, №1. - с. 5-30.

51. Fernandez, A. Desolvation shell of hydrogen bonds in folded proteins,protein complexes and folding pathways Text. / A. Fernandez // FEBS Letters. -№ 527-2002.-P. 166-170.

52. Reymond, U. How water provides the impetus for molecular recognition in aqueous solution Text. / U. Reymond // Account. Chem.Res. 1996. - Vol. 29, №8.-P. 373-380.

53. Maliniak, A. Molecular dynamics simulation study of association in aqueous solution of Quinuclidine Text. / A. Maliniak, A. Laaksonen, J. Korpi-Tamnola // J.Amer.Chem.Soc. 1990. -Vol.112, №.1. - P.86-93.

54. Букин, B.A. Вода вблизи биологических молекул Текст. / В.А. Букин, А.П. Сарвазян, Д.П. Харакоз. М.: Химия, 1989. - с. 288.

55. Лук, В. Влияние электролитов на структуру водных растворов. Вода в полимерах Текст. / В. Лук. Пер. с англ. Под ред. С. Роуленда. М.: Мир, 1984.-с. 555.

56. Самойлов, Ю.А. Структура водных растворов электролитов Текст. / Ю.А. Самойлов. М.: Изд. АН СССР, 1957. - с. 182.

57. Кузнецов, П.Е. Введение в молекулярное моделирование Текст. / П.Е. Кузнецов, Л.А. Грибов. Саратов: СГУ, 2003. - с. 52.

58. Комиссаренко, А.А.Взгляд на роль гомеопатического феномена в регуляции жизненных функций организма в норме и патологии Текст. / А.А. Комиссаренко // Гомеопатия и фитотерапия. 1998. - №1. - с. 15-19.

59. Зацепина, Г.Н. Физические свойства и структура воды Текст. / Г.Н. Зацепина. 2-е изд. - М.: МГУ, 1987. - с. 171.

60. Комиссаренко, A.A., К вопросу о гомеопатических разведениях Текст. / A.A. Комиссаренко, JT.B. Салычева // Гомеопатия и фитотерапия. 2000. -№1.-с. 35.

61. Классен, В.И. Омагничивание водных систем Текст. / В.И. Классен. -М.: Химия, 1978.-с. 240.

62. Черников, Ф.Р. Роль электронных фазовых переходов воды в биологических системах Текст. / Ф.Р. Черников // Биофизика. 1990. - Т. 36.-с. 741-746.

63. Черников, Ф.Р. Проблемы сверхнизких концентраций в гомеопатии и структура воды Текст. / Ф.Р. Черников. М.: Ин-дрик, 2002. - с. 17.

64. Сорокин, В.Н. Исследование гомеопатических средств в сотенной шкале ' разведений, приготовленных по С. Ганеману Текст. / В.Н. Сорокин, Ф.Р.

65. Черников // Гомеопатический ежегодник. М.: Валанг, 1998.- с. 93.

66. Черников, Ф.Р. Метод оценки качества гомеопатических средств и его физико-химические основы Текст. / Ф.Р. Черников // Материалы съезда Гомеопатов России. Новосибирск, 1999. - с. 73.

67. Кузнецов, П.Е. К вопросу о физической природе действия сверхнизких концентраций Текст. / П.Е. Кузнецов, В.А. Злобин, Г.В. Назаров // Тезисыдокладов III Международного симпозиума "Механизмы действия сверхмалых доз". Москва, 3-6 дек. 2002. - с. 229.

68. Можайский, A.M. Использование метода ВЭЖХ для исследования воды,подвергнутой действию факторов низкой интенсивности Текст. / A.M.117

69. Можайский, A.M. Степанов // Тезисы III Международного симпозиума "Механизмы действия сверхмалых доз". Москва, 3-6 дек. 2002. - с. 232.

70. Морозов, А.А. О молекулярных основах биологической активности нулевых концентраций Текст. / А.А. Морозов // Тезисы III Международного симпозиума "Механизмы действия сверхмалых доз". Москва, 3-6 дек. 2002. -с. 233.

71. Морозов, А.А. Технология гомеопатического потенцирования и проблема биологических эффектов малых доз химических веществ Текст. / А.А. Морозов // Химическая технология. 2001. - №2. - с. 25-47.

72. Селивановский, Д.А. О механохимической нестойкости жидкой воды Текст. / Д.А. Селивановский, И.Н. Диденкулов, Г.А. Домрачев [и др.] // Тезисы III Международного симпозиума "Механизмы действия сверх малых доз". Москва, 3-6 дек. 2002. - с. 234.

73. Петров, С.И. Потенцированные растворы: влияние на сигнал ртути (II) в инверсионной вольтамперометрии Текст. / С.И. Петров, О.И. Эпштейн // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2003. с. 6-9.

74. Wales David, J. Structure dynamics and thermodynamics of model (fyOJg and (H20)2o clusters Text. / J. Wales David, Ohmine Iwao // J. Chem. Phys. 1998. № 9. - P. 7245-7256.

75. Ferantos, S.C. Minimum structure and dynamics of small water clusters Text. / S.C. Ferantos, S. Kapetanakis, A. Vegiri // Phys. Chem. 1997. - № 47. - P. 12158-12166.

76. Ford, J.V. Water clusters: Contributions of binding of energy and entropy to stability Text. / J.V. Ford, S. Wei, A.W. Castleman // J. Chem. Phys. 1999. - № 10.-P. 8009-8015.

77. Xantheas Sotiris, S. Optimal structures and vibration specters Text. / S. Xantheas Sotiris, Jn. Dunning, H. Thorn // J. Chem. Phys. 1999. - № 11. -P.8774-8792.

78. Head-Gordon, T. An orientational perturbation theory for pure liquid water Text. / T. Head-Gordon, F.H. Stillinger // J. Chem. Phys. 1998. - № 4. - P. 3313-3327.

79. Киров, H.B. F структура полиэдрических кластеров воды Текст. / Н.В. Киров // Ж-л. структура химии. - 1993. -Т. 34, №4. - с. 77-82.

80. Сорокин, В.Н. Физическая химия гомеопатических средств по Ганеману Текст. / В.Н. Сорокин // Гомеопатический ежегодник. М.: Валанг. - 1997. -с. 38-43.

81. Махова, Е.В. Генетическая активность супермалых доз противоопухолевых антибиотиков и 2-нитрофлуорена: экологические аспекты проблемы Текст. / Е.В. Махова, C.B. Васильева // Известия РАН. Сер. биол. 1996. - №6. - с. 676-680.

82. Бурлакова, Е.Б. Бимодальный эффект производных пиколиновой кислоты на скорость проростания пшеницы и гороха Текст. / Е.Б. Бурлакова, П.Я. Бойков, Р.И. Панина [и др.] // Известия РАН. Сер. биол. 1996. - №1. - с. 3945.

83. Островская, J1.A. Биологические эффекты сверхмалых доз противоопухолевых препаратов Текст. / JT.A. Островская, М.М. Фомина, Д.Б. Корман // Наука производству. 2000. - № 3. - с. 59-62

84. Крутова, Т.В. Цитокинетические механизмы противоопухолевой активности химических соединений Текст. / Т.В. Крутова, A.A. Кондратов //Хим. физика. 1995.-№11.-с. 84-94.

85. Куценко, С.А. Основы токсикологии Текст. / С.А. Куценко // Рос. биомедицинский журнал. Т. 4. - с. 119. 2003.

86. Зилов, В. Г. Элементы информационной биологии и медицины Текст. / В. Г. Зилов, К.В. Судаков, О.И. Эпштейн. М.: Материа Медика. - 2000.с. 256.

87. Зенин, C.B. Молекулярные и полевые представления о механизме гомеопатии. Проблемы сверхмалых концентраций в гомеопатии и структура воды Текст. / C.B. Зенин. М.: Индрик, 2002. - с. 25-31.

88. Евстратова, К.И. Физическая и коллоидная химия: Учеб. для фарм. вузов и факультетов Текст. / К.И. Евстратова. М.: Высш. шк., - 1990. - с.487.

89. Гречишкина, А.Ю. Влияние ионов на структуру водных растворов электролитов по данным их вязкости Текст. / А.Ю. Гречишкина, В.П. Казимиров, В.В. Гончарук // Химия и технология воды. Т.26/6. - 2004. - с. 554.

90. Chidambaram, R. A Bent Hydrogen Bond Model of the Structure of Ice-I Text. / R. Chidambaram // "Acta Crystalloggraphica" 1961. - Vol. 14. - P. 467-468.

91. Хорн, P. Морская химия (структура воды и химия гидросферы) Текст. / Р. Хорн. М.: Мир, 1972. - с. 397.

92. Drost-Hansen W. The structure of water and water-solute interactions. Equilibr. Concepts in nature. Water system Text. / W. Drost-Hansen // Amer. Chem. Soc.- 1967.-P. 70-120.

93. Kavanau, J. L. Water and solute Water interactions Text. / J. L. Kavanau // Holden-Day. -San-Francisco. Amer. Book Publ. Ree. - 1964. - 101 p.

94. Блох, A.M. Модели структуры жидкой воды Текст. / A.M. Блох // В кн.: Значение структурных особенностей воды и водных растворов дляiгеологических интерпретаций. Вып. 2. - М.: ВИМСа, 1971. - с. 15-34.

95. Лященко, А.К. Модель структуры водных растворов электролитов по данным плотности Текст. / А.К. Лященко. Физ. химия растворов. - М.: Наука, 1972.-е. 5-12.

96. Quist, A.S. The electrical condunctances of some alkali metal halides in agueous solutions from 0 to 800° and pressures to 4000 bars Text. / A.S. Quist, W.L. Marshall // J. Phys. Chem. 1969. - Vol. 73, №4. - P. 978-985.

97. Вдоведенко, B.M. Применение двухструктурной модели воды к N разбавленным водным растворам электролитов Текст. / В.М. Вдоведенко,

98. Ю.В. Гуриков, Е.К. Легин // Жур. структурн. химии. 1969. - с. 576-579.

99. Классен, В.И. К вопросу об изменчивости свойств воды при ее перемещении Текст. / В.И. Классен // Сб. Новые методы повышения эффективности обогащения полезных ископаемых. М.: Наука, 1968. - с. 157.

100. Классен, В.И. К вопросу об структурных особенностей воды Текст. / В.И. Классен // Сб. Обогащение угля и химическая переработка. М.: Наука. - T. XXV. - Вып.2. - 1969. - с. 75.

101. Онацкая, А.А. Активированная вода Текст. / А.А. Онацкая, Н.Н. Музалевская // в кн. Химия традиционная и парадоксальная. - Л.: Изд. ЛГУ, 1985.-с. 88-113.

102. Миненко, В.И. Магнитная обработка вводно-дисперсных систем Текст. / В.И. Миненко. Киев: Техника, 1970. - с. 170.

103. Понамарев, О.А. Свойства жидкой воды в электрических и магнитных полях Текст. / О.А. Понамарев, Е.Е. Фесенко // Биофизика. 2000. - Т. 45, №3.-с. 389-398.

104. Тебенихин, Е.Ф. Обработка воды магнитным полем Текст. / Е.Ф. Тебенихин, Б.Т. Гусев. -М.: Энергия, 1970. с. 215.

105. Классен, В.И. Вода и магнит Текст. / В.И. Классен. М.: Наука, 1973. -с. 110.

106. David, H.G. The chemical effects of pressure. Part 5. The electrical conductivity of water at hight shock pressures Text. / H.G. David, S.D. Hammanо

107. Trans Faraday Soc. 1959. -Vol. 55. - P. 72-78.

108. Духин, C.C. Электрофорез Текст. / C.C. Духин, Б.В. Дерягин. M.: Наука, 1972.-с. 332.

109. Гончарук, B.B. О механизме воздействия ультразвука на водные системы Текст. / В.В. Гончарук, В.В. Маляренко, В.А. Яременко // Химия и технология воды. Т. 26, №3. - 2004. - с. 275-284.

110. Браун, Д. Спектроскопия органических веществ Текст. / Д. Браун, А. Флойд, М. Сейнсбери. М.: Мир, 1992. - с. 300.

111. Дорохова, E.H. Аналитическая химия. Физико-химические методы анализа Текст. / E.H. Дорохова, Г.В. Крохова. М.: Высш. школа, 1991. - с. 256.

112. Кесслер И. Методы инфракрасной спектроскопии в химическом анализе. Текст. / И. Кесслер. М.: Мир, 1964. - с. 257.

113. Белов, В.В. Роль полярности растворителя в механизме действиябиологически активных веществ в сверхмалых дозах Текст. /В.В. Белов, E.JI. Мальцева, Н.П. Пальмина [ и др.] // Доклады Академии Наук. 2004. -Т. 399,№4.-с. 1-3.

114. Бахишев, Н.Г. Введение в молекулярную спектроскопию Текст. / Н.Г. Бахишев. Ленингр. ун-т, 1987.-с. 216.

115. Кузнецов, А.Н. Метод спинового зонда Текст. / А.Н. Кузнецов. М.,f)1976.-с. 210.

116. Голощапов, А.Н. Исследование микровязкости и структурных переходов в липидах и белках клеточных мембран методом спиновых зондов Текст. / А.Н. Голощапов, Е.Б. Бурлакова // Биофизика. 1975. - Т. 20. - с. 816-821.