Дисперсионная твердофазная и жидкостно-жидкостная микроэкстракция при одновременном определении пестицидов различных классов в пищевых продуктах и кормах хроматографическими методами тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

На правах рукописи

/На

Лаврухнн Дмитрий Константинович

ДИСПЕРСИОННАЯ ТВЕРДОФАЗНАЯ И ЖИДКОСТНО-ЖИДКОСТНАЯ

МИКРОЭКСТРАКЦИЯ ПРИ ОДНОВРЕМЕННОМ ОПРЕДЕЛЕНИИ ПЕСТИЦИДОВ РАЗЛИЧНЫХ КЛАССОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ И КОРМАХ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

02.00.02 - аналитическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

6 НОЯ 2014

Саратов - 2014

005554613

005554613

Работа выполнена на кафедре химии ФГБОУ ВПО «Владимирский государственный университет имени Александра Григорьевича и Николая Григорьевича Столетовых» и в лаборатории химического анализа ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Амелин Василий Григорьевич

Доронин Сергей Юрьевич

Доктор химических наук, доцент, Саратовский государственный университет им. Н. Г. Чернышевского, профессор кафедры аналитической химии и химической экологии

Михайлова Алла Владимировна

Кандидат химических наук, старший научный сотрудник, Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Ордена Ленина и Ордена Октябрьской Революции Институт геохимии и аналитической химии им. В.И. Вернадского Российской академии наук (ГЕОХИ РАН), г.Москва Федеральное государственное бюджетное

образовательное учреждение высшего

профессионального образования "Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова", г. Москва

Защита состоится 11 декабря 2014 года в часов 00 минут на заседании диссертационного совета Д 212.243.07 на базе ФГБОУ ВПО «Саратовского государственного университета имени Н. Г. Чернышевского» по адресу: 410012, Саратов, ул. Астраханская, 83, корп.1, Институт химии.

С диссертацией можно ознакомиться в зональной научной библиотеке им. В. А. Артисевич ФГБОУ ВПО «Саратовского государственного университета имени Н.Г.Чернышевского» (410601, Саратов, ул.Университетская, 42) и на сайте http://www.sgu.IWsites/default/flles/dissertation/2014/09/24/dissertaciyaJavшЫn_dk_flnal.pd

Автореферат разослан «. 11» ОКМлЬрЭи 2014 г.

Ведущая организация:

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор химических наук

Русанова Т.Ю.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Контаминация пищевых продуктов пестицидами является одной из основных угроз пищевой безопасности. Такое положение связано не только с тем фактом, что практически все пестициды являются канцерогенными и особо опасными веществами, но и со всё возрастающими объемами их использования (более чем на 30% за последние несколько лет). На территории Российской Федерации разрешено к использованию более 250 наименований действующих веществ пестицидов. Эта цифра возрастает более чем в 2 раза, если говорить о разрешенных пестицидах в других странах, а также неизрасходованных запасах устаревших, запрещенных и особо стойких пестицидов, существующих в объектах окружающей среды.

Сложившаяся обстановка усугубляется весьма слабым методическим обеспечением, не позволяющим выявить и малой доли всего разнообразия действующих веществ пестицидов. Методики определения пестицидов по ГОСТ и методическим указаниям в РФ оказываются весьма продолжительными, трудозатратными и предполагают использование больших объёмов высокотоксичных растворителей. Нормативные документы, как правило, предполагают проводить определение небольшого числа (2-5 наименований) наиболее широко применяемых и ожидаемых в данном объекте пестицидов. Лишь небольшое количество методик направлено на определение 6-15 пестицидов, однако, в большинстве случаев, это представители одного класса, или же проводится поэтапное (раздельное) определение соединений различных классов.

В настоящее время для извлечения пестицидов из овощей, фруктов и определения их методами ГЖХ(ВЭЖХ)-МС/МС используют пробоподготовку по QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe). Таким способом определяют более 100 пестицидов единовременно. Однако при такой пробоподготовке определение пестицидов более доступными хроматографическими методами с диодно-матричным и электронно-захватным детекторами, а также методом ГЖХ(ВЭЖХ)-МС низкого разрешения затруднено в связи с недостаточной очисткой экстрактов для таких сложных матриц как мясо, молоко, зерно и корма. Кроме того, оборудование ГЖХ(ВЭЖХ)-МС/МС дорогостоящее и требует высокой

квалификации оператора, поэтому его использование в рутинных анализах в настоящее время невыгодно.

Цель данной работы состояла в разработке методологии одновременного извлечения широкого круга пестицидов различных классов из одной навески продуктов питания и кормов дисперсионной твердофазной и жидкостно-жидкостной микроэкстракцией и последующее определение пестицидов методами газожидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим, электронно-захватным и диодно-матричным детекторами.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: •установить возможность комбинации методов пробоподготовки ОиЕСЬЕЯЯ и дисперсионной жидкостно-жидкостной микроэкстракции (ДЖЖМЭ) для одновременного извлечения пестицидов различных классов из одной навески пробы;

•провести оптимизацию условий проведения подготовки проб для получения экстрактов необходимой для анализа хроматографическими методами чистоты при достаточной степени концентрирования;

• оптимизировать условия хроматографического разделения и детектирования пестицидов различных классов;

• разработать схемы определения пестицидов из одной навески пробы; •разработать способы определения широкого круга пестицидов различных

классов в пищевых продуктах и кормах.

Научная новизна. Предложена методология извлечения 100 пестицидов 13 различных классов из одной навески образцов зерна, кормов, пищевых продуктов с использованием дисперсионной твердофазной микроэкстракции и ДЖЖМЭ, как метода дополнительной очистки и концентрирования экстракта.

Исследовано хроматографическое поведение наиболее актуальных пестицидов различных классов (ХОП, ФОП, пиретроиды, неоникотиноиды, карбаматы, производные мочевины, триазины, триазолы, производные феноксиуксусной кислоты, производные бензимидазола, фталимиды, дикарбоксимиды, производные имидазола) при их совместном присутствии в условиях газожидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Показана возможность хроматографического разделения смесей ХОП, ФОП, пиретроидов, триазинов, триазолов, производных бензимидазола, фталимидов,

производных имидазола, дикарбоксимидов методом газовой хроматографии с электронно-захватным или масс-спектрометрическим детекторами, а также неоникотиноидов, карбаматов, триазинов, триазолов, пиретроидов, производных феноксиуксусной кислоты методом ВЭЖХ с диодно-матричным детектором.

Предложено применение ДЖЖМЭ в качестве метода дополнительной очистки и концентрирования при извлечении пестицидов различной полярности.

Изучено влияние основных параметров проведения подготовки проб на эффективность экстракции пестицидов различной полярности при совмещении методов ОиЕСЬЕИБ и ДЖЖМЭ (полярность растворителей, объем растворителей, значение рН среды, ионная сила раствора, добавки высаливающих компонентов, сорбенты).

Практическая значимость работы. Предложены способы определения 100 пестицидов различных классов из одной навески овощей, фруктов, меда, молока, мяса, зерна и кормов. Пределы обнаружения и определения составили 0,05-2,5 и 0,143,6 мкг/кг соответственно в зависимости от методики анализа. Относительное стандартное отклонение результатов анализа не превышает 0,1. Разработанные методики превосходят действующие национальные стандарты: значительно снижены расходы и продолжительность анализа, количество используемых токсичных растворителей, упрощены схемы пробоподготовки.

Разработанный способ позволил решить актуальные на настоящий момент проблемы:

• значительно расширить число определяемых пестицидов из одной навески (44 наименования методом ГХ-ЭЗД, 69 наименований методом ГХ-МС, 30 наименований методом ВЭЖХ);

• сократить продолжительность анализа до 1-1,5 часов (в зависимости от метода) за счет разработки схем одновременного определения пестицидов из одной навески и с одновременным использованием ГХ-МС, ГХ-ЭЗД, ВЭЖХ-ДМД;

• значительно сократить объем используемых токсичных растворителей, реактивов;

• снизить затраты на проведение анализа.

На защиту выносятся:

Методология одновременного извлечения пестицидов различных классов из пищевых продуктов и кормов и последующее их определение хроматографическими методами.

Результаты оптимизации условий селективного и эффективного разделения пестицидов различных классов хроматографическими методами с различными детекторами.

Результаты оптимизации условий пробоподготовки при совместном использовании QuEChERS и ДЖЖМЭ для извлечения пестицидов различных классов из одной навески пищевых продуктов и кормов.

Способы и схемы одновременного определения и идентификации 100 пестицидов в пищевых продуктах и кормах.

Личный вклад автора заключался в проведении экспериментальных исследований по оптимизации условий хроматографического разделения пестицидов; оптимизации пробоподготовки QuEChERS и метода ДЖЖМЭ и их совмещении; разработке способов одновременного определения пестицидов из одной навески зерна, кормов и продуктов питания за один анализ; интерпретации результатов эксперимента, формулировании научных положений и выводов.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на следующих конференциях и симпозиумах: международной молодежной научной конференции «ЛОМОНОСОВ- 2012» (Москва, МГУ), VI Всероссийской конференции молодых учёных, аспирантов и студентов с международным участием, «Менделеев - 2012» 2012 г. (Санкт-Петербург, СПбГУ), конференции «Методы анализа и контроля качества воды», 2012 г. (Москва, Институт геохимии и аналитической химии им. В.И. Вернадского РАН), международной конференции «7lh European conference on pesticides and related organic micropollutants in the environment and 13th Symposium on chemistry and fate of modern pesticides», 2012 г. (Порту, Португалия), международном симпозиуме «6th International Symposium on Recent Advances in Food Analysis», 2013 г. (Прага, Чехия), международном симпозиуме «10th European Pesticide Residue Workshop», 2014 г. (Дублин, Ирландия).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ, из них 5 статей в журналах из перечня ВАК и 6 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 179 страницах, включая введение, 6 глав, выводы, список литературы (155 источников) и 5 приложений. Работа содержит 33 рисунка и 27 таблиц.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность работы, сформулированы цели и задачи исследования, изложены новизна и практическая значимость работы, представлены основные положения, выносимые на защиту.

Экспериментальная часть. Реактивы. Стандартный раствор смеси пестицидов в циклогексане по 10 мг/л альдрина, г/ис-хлордана, «транс-хлордана, оксм-хлордана, 2,4'-ДДД, 4,4'-ДДД, 2,4'-ДЦЭ, 4,4'-ДДЭ, 2,4'-ДДТ, 4,4'-ДДТ, диэльдрина, эндрина, шы/ю-ГХЦГ, беота-ГХЦГ, гаш/а-ГХЦГ, дельта-ТУЛ\Г, гептахлора, гептахлора-экзо-эпоксида, гептахлора-эндо-эпоксида, гексахлорбензола, г/мс-нонахлора, транс-нонахлора (Pesticide-mix 1037, Dr. Ehrenstorfer, Германия); стандартный раствор смеси пестицидов в толуоле по 10 мг/л азинфос-этила, азинфос-метила, бромофос-метила, бромофос-этила, карбофенотиона, хлорфенвинфоса, хлорпирифоса, хлорпирифос-метила, диазинона, диклофентиона, дихлорфоса, этиона, этримфоса, фенхлорфоса, фонофоса, малатиона, метакрифоса, метидатиона, пиримифос-этила, пиримифос-метила, пропетамфоса, сульфотепа, тетрахлорвинфоса (Pesticide-mix 167, Dr. Ehrenstorfer, Германия). Стандартный раствор смеси пестицидов в циклогексане по 10 мг/л цифлутрина, циперметрина, дельтаметрина, фенвалерата, перметрина, фенотрина, тетраметрина (Pesticide-mix 118, Dr. Ehrenstorfer, Германия). Стандартный раствор пестицидов по 20 мг/л хлороталонила, дикофола, альфа-эндосульфана, бета-эндосульфана, эндосульфан-сульфата (Pesticide-mix 323, Dr. Ehrenstorfer, Германия). Стандартный раствор пестицидов по 20 мг/л хлоротолурона, диурона, фенурона, флуометурона, изопротурона, линурона, метобромурона, метоксурона, монолинурона, монурона (Pesticide-mix 129, Dr. Ehrenstorfer, Германия). Использовали стандартные образцы 35-и индивидуальных пестицидов (Dr.Ehrenstorfer, Германия), содержание основного вещества не менее 98,0%.

Аппаратура. В работе использовали:

• Жидкостной хроматограф Flexar LC с диодно-матричным детектором (Perkin-

Elmer, США). Одновременное разделение 30 полярных пестицидов проводили на хроматографической колонке WXTerra® RPC18 5 мкм, 3,9 х 150 мм (Waters, Великобритания)

• Газовый хроматограф Clarus-600 с электронно-захватным детектором (Perkin-Elmer, США). Одновременное разделение 44 летучих неполярных и

слабополярных пестицидов проводили на кварцевой капиллярной колонке Rtx-5® (RestekCorporation, США) длиной 30 м и внутренним диаметром 0,25 мм (толщина пленки неподвижной фазы 0,25 мкм) • систему ГХ/МС Clarus SQ8T с масс-спектрометрическим детектором с электронной ионизацией и моноквадрупольным масс-анализатором (Perkin-Elmer, США). Одновременное разделение 69 летучих неполярных и слабополярных пестицидов проводили на кварцевой капиллярной колонке Rtx-5MS® (RestekCorporation, США) длиной 30 м и внутренним диаметром 0,25 мм (толщина пленки неподвижной фазы 0,32 мкм),.

Для оценки эффективности процесса пробоподготовки рассчитывали коэффициент концентрирования (К) и степень извлечения (R) пестицидов из с с V

образцов: К =—; = 100, - где ск и с0 - концентрация аналита в конечном

с0 c0V0

анализируемом растворе и начальная концентрация аналита в исходной пробе; VK и Va - объем конечного анализируемого раствора-концентрата и объем пробы.

Пробоподготовка QuEChERS и дисперсионная жидкостно-жидкостная микроэкстракция при определении пестицидов различных классов в пищевых продуктах и кормах. С целью одновременного извлечения пестицидов были оптимизированы условия экстракции, очистки экстракта и проведения ДЖЖМЭ.

Экстракция QuEChERS. Установлено, что масса навески 10 г для овощей, фруктов, мяса; 5 г для мёда, зерна и кормов и 5 мл для молока является наиболее оптимальной для проведения метода QuEChERS. При такой массе (объёме) на хроматограмме наблюдается удовлетворительное количество пиков интерферирующих веществ приемлемой интенсивности в совокупности с большим концентрированием (фон матрицы незначительно возрастает с повышением массы навески или объёма пробы до оптимальных значений).

Исследовано влияние различных объёмов воды на условия экстракции целевых компонентов для проб с высоким содержанием влаги: 0; 2; 4; 5 и 6 мл. Установлено незначительное увеличение степени извлечения при увеличении объема воды до 4 мл и вновь ее уменьшение при дальнейшем увеличении доли воды.

На этапе экстракции были исследованы соотношения растворителей этилацетат:ацетонитрил и гексан:ацетонитрил (при добавлении 5 мл воды к пробам с

низким содержанием влаги: 2:8; 4:6; 5:5 и 6:4 (об.). Установлено, что при добавлении этилацетата степени извлечения пестицидов из проб мяса, молока, зерна и кормов значительно возрастают, достигая максимума при соотношении 1:1. Установлено, что введение этилацетата не влияет на степени извлечения пестицидов из фруктов и овощей.

Исследовано влияние различных соотношений высаливателей и буферирующих солей на эффективность экстракции. Оптимальным вариантом для достижения максимальных степеней извлечения пестицидов является следующее соотношение: 4.0 г MgS04, 1.0 г NaCl, 1.0 г Na3C6H507' 2Н20 и 0.5 г Na2HC6H507' 1,5Н20 для овощей и фруктов, и добавление 20 мкл муравьиной кислоты для проб мяса и молока.

Очистка экстракта. Для очистки экстрактов исследовали сорбенты: PSA (первичные-вторичные амины), С18, ENVI/Carb (графитированная сажа), диоксид кремния Si02, Florisil. Установлено, что применение 500 мг PSA для проб зерна, 200 мг PSA и 200 мг С18 для проб мяса и молока, 150 мг PSA и 50 мг ENVI/Carb для проб фруктов и овощей и 250 PSA для проб мёда позволяет извлекать пестициды в диапазоне 70-110 % в зависимости от компонента и матрицы. Добавления сульфата магния массой 950 мг, необходимого для удаления воды, достаточно для получения максимальных значений степеней извлечения пестицидов.

Дисперсионная жидкостно-жидкостная микроэкстракция. Полученные после пробоподготовки по методу QuEChERS экстракты являются недостаточно чистыми для дальнейшего хроматографирования (особенно с применением ЭЗД). Дополнительную очистку и концентрирование проводили ДЖЖМЭ, используя экстракт в качестве диспергента.

Выбор экстрагента и его объема. Экстрагентами, показывающими одинаково хорошие степени извлечения (70-110%), при экстракции неполярных и слабополярных пестицидов из овощей и фруктов являются трихлометан (80 мкл) и гексан (100 мкл). Трихлорметан (80 мкл) также хорошо извлекает полярные пестициды. Производные мочевины наиболее полно извлекаются при использовании в качестве экстрагента 200 мкл дихлорметана (рис. 1). При экстракции неполярных или слабополярных пестицидов (определяемых методом газовой хроматографии) из проб, где экстракцию пестицидов проводят смесью ацетонитрила и этилацетата, добавления какого-либо растворителя не требуется. В данном случае, растворенный

этилацетат будет являться экстрагентом. Для извлечения полярных пестицидов из

таких проб экстрагирующая способность этилацетата

недостаточно велика.

Добавление 50 мкл

дихлорметана для извлечения 12 производных мочевины и 50 мкл трихлорметана - 18 полярных пестицидов

(триазолы, триазины,

пиретроиды, оксазолы, ФОП, производные феноксиуксусной кислоты, карбаматы, производные имидазола, никотиноиды) способствует наиболее полному извлечению.

Выбор диспергента и его объема. Для проведения ДЖЖМЭ диспергент должен отвечать определенным требованием: хорошо растворяться в воде (среде), растворять требуемый объем экстрагента. Для извлечения пестицидов из экстрактов проб фруктов и овощей возможно использование полярного ацетона (1 мл), растворяющегося в смеси воды и ацетонитрила (6 и 4 мл соответственно). В качестве диспергента возможно использование очищенного по ОиЕСЬЕЯЗ экстракта (роль диспергирующего растворителя выполняет ацетонитрил). Использование 2 мл экстракта показывает наилучшую степень извлечения пестицидов. Однако в данном варианте образуется слабоустойчивая эмульсия с довольно крупными каплями экстрагента. Поэтому для увеличения времени существования эмульсии и поверхности массопереноса применяли обработку образовавшейся системы ультразвуком, способствующему разрушению агрегатов молекул экстрагента на более мелкие, увеличивая дисперсность системы. Обработка ультразвуком в течение 1 мин для 69 неполярных и 18 полярных пестицидов и 30 с для 12 производных мочевины показывает наилучшую степень извлечения (70-110%).

Влияние ионной силы раствора. Влияние ионной силы раствора исследовали добавлением к 10 мл воды хлорида натрия для получения 1, 5, 10 и 15% раствора. Установлено, что при анализе объектов с применением на стадии экстракции смеси ацетонитрил:этилацетат оптимальным будет использование 10%-ного раствора

Рис. 1. Влияние экстрагента на степень извлечения пестицидов, экстрагируемых смесью

ацетонитрил :этилацетат

хлорида натрия. При анализе фруктов, овощей и мёда увеличение концентрации хлорида натрия в растворе приводит к уменьшению степени извлечения пестицидов (рис. 2).

Влияние рН среды. Изменяли рН среды путем добавления различных объемов муравьиной кислоты. Степень извлечения максимальна при использовании 100 мкл муравьиной кислоты при анализе продуктов животного происхождения. Для проб фруктов, овощей и мёда добавления муравьиной кислоты при проведении ДЖЖМЭ не желательно (рис. 3).

Концентрация раствора хлорида натрия

•Мясо, молоко, зерно, корма -Фрукты, овощи, мед

-Мясо, молоко, зерно, корма -Фрукты, овощи, мед

Рис. 2. Влияние ионной силы раствора на степени Рис. 3. Влияние pH на степень извлечения извлечения пестицидов в зависимости от матрицы пестицидов в зависимости от матрицы

Влияние времени и скорости центрифугирования. Рассматриваемые параметры оказывают значительное влияние на полноту разрушения эмульсии, характеризующую впоследствии полноту извлечения пестицидов. Наибольшая степень извлечения достигается центрифугированием при скорости 4500 об/мин в течение 20 мин.

Газо-жидкостная хроматография с различными детекторами в определении пестицидов. Газо-жидкостную хроматографию (ГЖХ) применяли для определения летучих, термостабильных пестицидов. Установлена возможность детектирования 44 извлекаемых пестицидов электронно-захватным детектором и 69 пестицидов масс-спектрометрическим детектором с электронной ионизацией и моноквадрупольным масс-анализатором. Установлены отношения m/z для идентификации и определения пестицидов методом ГХ-МС. Оптимизированы условия разделения исследуемых пестицидов (табл. 2).

Таблица 2. Параметры газохроматографического разделения пестицидов

Параметр Значение

ГХ-ЭЗД ГХ-МС

Инжектируемый объем 1 мкл

Температура инжектора 280°С

Температурный режим колонки От 60°С до 120°С со скоростью 30°С/мин, до 230°С со скоростью 2°С/мин, до 300°С (4 мин) со скоростью 30°С/мин От 120°С (1 мин) до 300°С (3 мин) со скоростью 15°С/мин

Скорость потока газа-носителя 1 мл/мин

Температура детектора 300°С 250°С

Температура трансфер-линии - 270°С

Энергия ионизации - 70 эВ

Таким образом удалось разделить 44 пестицида различных классов в течение 60 минут методом ГХ-ЭЗД (рис.4) и 69 пестицидов за 25 минут методом ГХ-МС (рис 5). В ГХ-ЭЗД получены приемлемые степени разделения Rs (0,6-1,0) для не полностью разделенных компонентов. Пики веществ на хроматограмме узкие, симметричные и не размытые (рис.4). Многие пестициды (при определении их методом ГХ-МС) имеют одинаковое время удерживания, однако режим ионной селективной регистрации позволил их идентифицировать по индивидуальным m/z (рис.6).

т 800

£700

|600

§■500 го

х400

300 200 100

^ 900

х

СИ * 800 о: о.

£700 х

600 500 400 300 200 100

Л) !и

20 13 1

17 18 ' 19 ' 20 ' 21 ' 22 23 24 ' 25 26 27 28 29 30 31 32 ЗВ 34 35 36 37 ' 38 39 ' 40 ' 41 42

J и

и

39

—

«а

и

!|11[1П1[1П1|И111ГПГ||1ТТ1ИТ1|ТТИ[Т11!]1И!||Т111 г! м [ т т пуг 1М|"|Ч|,"|ММТ"Т,!"Г,1"М',"Ч',МТТ,,Н""1,М,Г"Т,ТТ,Т,ГТГ,ТГТ

45 46 47 43 49 50 51 52 53 54 55 56 57 а58

Время.

43 44

59

МИН

Рис. 4. Хроматограмма смеси 44 пестицидов, определяемых методом ГХ-ЭЗД'. 7-метакрифос; 2-апьфа-\'Х1\Т: З-гексахлорбензол; 4-бета-ГХ1 [[5-гамма-ГХ1 [Г; б-сульфотеп; 7-гептахлор; 8-диазинон; 9-фенхлорфос; /0-метрибузин; 11-винклозолин; 72-гептахлор-эис)о-эпоксид; 13-пиримифос-метил; 74-альдрин; 15-хлорпирифос; 16-малатион; 77-пиримифос-этил; /<5-гептахлор-экзо-эпоксид; 19-хлорфенвинфос; 20-окси-хлордан; 27-каптан; 22-цис-хпордгт; 2_?-2,4'-ДДЕ; 24-транс-нонахлор: 25-транс-хпордш\ 26-цис-нонахлор; 27-дильдрин; 25-4,4'-ДДЭ; 29-2,4'-ДДД; 30-эндрин; 37-4,4'-ДДД; 32-этаконазол; 33-2А'-ДДТ, 34-этион; 35-карбофенотион; 36-пропиконазол; 37-4,4'-ДДТ; 38-бифентрин; 39-пенконазол; 40-лямбда- цигалотрин; 4/-эпоксиконазол; 42-флювалинат; 45-профенофос; 44-кумафос.

Рис. 5. Хроматограмма смеси 69 пестицидов, определяемых методом ГХ-МС в режиме сканирования по полному ионному току (мин): метакрифос (8,94), сульфотеп (11,49), альфа-ТХ\\Т (11,98), гексахлорбензол (12,15), пропетамфос (12,69), бета-ГХЦГ (12,80), гамма-ГХЦГ (12,83), фонофос (12,93), диазинон (12,93), десметрин (13,05), хлороталонил (13,33), этримфос (13,34), дельта-ТХИУ (13,48), диклофентион (13,98), метрибузин (14,11), винклозолин (14,23), хлорпирифос-метил (14,25), гептахлор (14,54), прометрин (14,55), тербутрин (14,77), пиримифос-метил (14,81), фенхлорфос (14,85), дикофол (14,96), бромофос-метил (15,83), пенконазол (16,18), хлорфенвинфос (16,28), гептахлор-экзо-эпоксид (16,31), о/ссн-хлордан (16,31), тиабендазол (16,49), каптан (16,49), бромофос-этил (16,75), метидатион (16,80), цис-хлордан (16,85), 2,4-ДДЭ (16,86), паклобутразол (16,91), тетрахлорвинфос (16,93), сиь^а-эндосульфан (17,01), транс-хлордан (17,19), флутриафол (17,19), транс-нонахлор (17,28). профенофос (17,40), 4,4'-ДДЭ (17,55), дильдрин (17.74), 2,4'-ДДД (17,78), ципроконазол (18,22), эндрин (18,24), диниконазол (18,44), этион (18,48), бетя-эндосульфан (18,52), 4,4'-ДДД (18,58), г/ис-нонахлор (18,69), карбофенотион (18,96), 2,4'-ДДТ (19.02), 4,4'-ДДТ (19,31), эндосульфан-сульфат (19,35), эпоксиконазол (19,97), бифентрин (20,20), тетраметрин (20,25), азинфос-метил (20,46), фенотрин (20,68), тритиконазол (20,96), лямбда-цигалотрин (21,12), азинфос-этил (21,15), фозалон (21,20), кумафос (21,33), перметрин (22,29), фенбуконазол (23,23), этаконазол (19,39; 18,47), пропиконазол (19,15; 19,30).

. ЭЯ 0 9 От«« Е1* РШОММ- л м$ь 1Ш

Фонофос

6 »ПоПОСМггаНЕ!-

Хлорпирифос-метил

Диазинон

Винклозолин

Фонофос и диазинон в режиме сканирования по полному ионному току

Хлорпирифос-метил и винклозолин I режиме сканирования по полному ионному току

!

Время, мин

Рис. 6. Идентификация пестицидов по индивидуальным т/г при равном времени удерживания в режиме селективной ионной регистрации:

А - фонофос (т/г=179) и диазинон (т/г=109) Гл=12.94 мин.

Б - хлорпирифос-метил (/и/г=286) и винклозолин (/и/г=212) гл=14.24 мин.

Высокоэффективная жидкостная хроматография с диодно-матричным детектором в определении пестицидов. Методом газовой хроматографии не удается определить ряд пестицидов вследствие их низкой летучести или недостаточной термической стабильности. Однако возможно их определение методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, разделение таких пестицидов позволяет провести хроматографическая колонка с неподвижной обращенной фазой С18. Так как все рассматриваемые пестициды поглощают свет в УФ-области, возможно их детектирование ДМД.

Благодаря возможности одновременной регистрации спектров поглощения аналитов, установлены максимумы светопоглощения и средняя длина волны, при которой наблюдается достаточная для дальнейшего определения рассматриваемых пестицидов чувствительность детектора: 240 нм для 12 производных мочевины и 220 нм для 18 пестицидов различных классов. Создана библиотека полученных спектров

с помощью программного обеспечения IRIS™, по УФ-спектрам проводили оценку «чистоты пика» аналита и дополнительную идентификацию пестицида.

В качестве подвижной фазы для эффективного разделения полярных пестицидов использовали ацетонитрил и воду в режиме градиентного элюирования. Подвижную фазу меняли от более к менее полярной. Скорость потока на протяжении всего анализа составляет 1,2 мл/мин, температура колонки - 30°С.

В данных условиях элюирования все пестициды имеют хорошую степень разделения (Rs 0,8-1,4) (рис. 7).

Рис. 7. Хроматограмма стандартной смеси 30 полярных пестицидов, определяемых методом ВЭЖХ-ДМД: /-2.4-Д; 2-этилентиомочевина; .?-тиаметоксам: 4-фенурон; 5-имидаклоприд; 6-ацетамиприд; 7-метоксурон; 8-монурон; 9-симазин; 70-карбофуран; /У-флуометурон; /2-хлортолурон; УЗ-изопротурон; 74-атразин; 15-карбарил; /6-метобромурон; /7-диурон; 7<5-имазалил; 79-пропазин; 20-ципроконазол; 27-линурон; 22-хлорбромурон; 23-пропиконазол; 24-дифлубензурон; 25-феноксикарб; 2б-винклозолин; 27-хлорпирифос; 28-циперметрин; 29-лял/бда-цигалотрин; 30-дельтаметрин. Условия разделения: СН3С№Н20 20:80 10 мин, 40:60 5 мин, 60:40 11 мин, 80:20 6 мин. Скорость потока подвижной фазы - 1,2 мл/мин. температура колонки - 30°С, длина волны - 240 нм для детектирования 12 производных мочевины и 220 нм для детектирования 18 пестицидов разных классов.

Новые способы определения пестицидов в пищевых продуктах и кормах. В

предложенном способе извлечение 100 пестицидов различных классов проводили с применением пробоподготовки РиЕСЬЕИв из одной навески пробы. Полученный экстракт делили на три части и проводили дополнительную очистку и концентрирование

методом ДЖЖМЭ отдельно для 70 летучих неполярных пестицидов, 18 нелетучих полярных пестицидов и 12 производных мочевины (рис. 8-9).

10 г фруктов или овощей (5г меда, растворенного в 5 мл дистиллированной воды) +10 мл ацетонитрила (встряхивание 1 мин) ♦ буферирующие соли и высаливатели (встряхивание 1 мин)

5 мин Шнпжфугнромкне

6 мл экстракта + насыпные сорбенты (встряхивание 30 с)

С^^Шнтрифугироюиие

Дисперсионная жидкостно-жидкостная микроэкстракция

-а

Смесь 1 мл ацетона и 100 мкл гексана или хлороформа вводится в смесь 6 мл воды и 4 мл экстракта

НЛП

Смесь 2 мл экстракта и 200 мкл дихлорметана вводится в 10_длл дистиллированнои воды

Смесь 2 мл экстракта и 80 мкл хлороформа вводится в 10 мл дистиллированной воды

д

Смесь 2 мл экстракта и 80 мкл хлороформа вводится в 10 мл дистиллированнои воды_

Обработка ультразвуком

Обработка ультразвуком

ГП

мин

.а

Центрифугирование

Центрифугирование

[Л

мин

а

!ю

мин

I 11Л11 I

Нодииг"

Отбор верхнего слоя гексана или нижнего слоя хлороформа и отдув досуха. Растворение в 50 мкл гексана

V_У

Отбор верхнего слоя дихлорметана и отдув в токе азота досуха. Растворение в 50 мкл ацетонитрила

Отбор нижнего слоя хлороформа и отдув в токе азота досуха. Растворение в 50 мкл ацетонитрила

Анализ методом ВЭЖХ-ДМД

V

\7

Анализ методом ГХ-МС. Определение 69 пестицидов

Анализ методом ГХ-ЭЗД. Определение 44 пестицидов

Определение 12 гербицидов производных мочевины

Определение 18 полярных пестицидов различных классов

Рис. 8. Схема определения 100 пестицидов в пробах фруктов, овощей и мёда из одной навески методами ГХ-МС, ГХ-ЭЗД и ВЭЖХ-ДМД.

10 г мяса (5 мл молока; 5 г зерна или кормов) + 5 мл дистиллированной воды (только для зерна и кормов) +10 мл смеси ацетонитрил:зтилацетат 1:1 (встряхивание 1 мин) + 20 мкл муравьиной кислоты, буферирующие соли и высаливатели

Центр ифутирование~~^>

6 мл зкстракта + насыпные сорбенты (встряхивание 30 с)

5 мин <^^Центрифу™рование~^5

Дисперсионная жидкостно-жидкостная микрозкстракция

2 мл экстракта вводится в 10 мл 10% раствора хлорида натрия с 100 мкл муравьиной кислоты

Смесь 2 мл экстракта и 50 мкл дихлорметана вводится в 10 мл 10% раствори хлорида натрия с 100 мкл муравьиной кислоты

.а

С-месь 2 мл экстракта и 50 мкл хлороформа вводится в 10 мл 10% раствора хлорида натрия с 100 мкл муравьиной кислоты

Д.

Обработка ультразвуком

Центрифугирование

20 мин

Рис. 9. Схема определения 100 пестицидов в пробах мяса, молока, зерна и кормов из одной навески методами ГХ-МС, ГХ-ЭЗД и ВЭЖХ-ДМД.

Выделившуюся после микроэкстракции фазу отдували в токе азота досуха и сухой остаток растворяли в 40 мкл гексаиа. Таким образом, проводили концентрирование пробы в 100 раз (при использовании 4 мл экстракта) или в 50 раз (при использовании 2 мл экстракта). С учетом степени извлечения коэффициент концентрирования А" составил 86-105 и 43-52.

Для проведения количественного анализа строили градуировочные графики по 6 концентрациям в трех повторностях для каждой точки. Графики линейны во всем диапазоне содержаний, коэффициенты корреляции составили 0,9964-0,9999. Норматив контроля стабильности градуировочных графиков не превышал 5%.

Степень извлечения пестицидов оценивали по двум добавкам в пределах линейного диапазона: на уровне 20 мкг/кг(л) и 100 мкг/кг(л). Анализ проводили в пяти повторностях для каждого уровня концентрации. Рассчитана средняя степень извлечения Я, доверительный интервал и относительное стандартное отклонение В качестве репрезентативных образцов матрицы использованы: яблоки, зерно пшеницы, говядина, коровье молоко, мёд (табл. 4).

Пределы обнаружения (ЬОД сигнал/шум =3:1) и определения (ЬОО, сигнал/шум =10:1) рассчитаны с учетом коэффициентов концентрирования и составили 0,05-2,5 мкг/кг и 0,14-3,6 мкг/кг соответственно (табл. 4).

Таблица 4. Аналитические характеристики разработанных методик (п=5, Р=0,95)

Класс пестицидов Метод определения ДОС мм/кг (мм/.1) ьсю, ми Лег (иМ ЬОО, мкг/кг <*„%)

хопй^-дцдд^-додгд'-ШАА'-ШМ-ДЮАА'-ДДЭ.Альарща'гьфяГХЦГ, бетЫКиГ.алпоГХиГ, дельтаГХЩ',спьфа-эвдхульфан, йпи-энаосульфон, гекшхлорбатт, гшгахло£Ушгахло|>экэ0-эпоюэд юпахлор-энйоэпсжсиц даюфол,дилырин,окш-хлордаи, грс-хлордан, трснс-хлораан, прснс-шкзхтр, гцс-нонклор, хтаротаюнил, энзхульфансупьфаГ'эНлрин) гх-эзд 1-500 09992-0ДО9 Фрукты, овоши 92-102 (4-9) Мжо90-105(4-10) Мсшиэ 9098(49) 0,0*020 (2-10) й13-Ц65 (10-11)

гх-мс ода7- одо Зерно90-105(49) Мед 92-102 (49) 0,050,42 (4-8) 0,15-12(4-10)

ФОП (азинфос-мепш, азинфос-этил, бромофос-мешл, бромофсс-зшцдимнон, диююфеншон, гарбофеилион, маипиоцмггафифос, мещпашон, пцзимифос-мешл, пиримифос-эпш, пропегамфос, профенофос, сульфотеп, тираютрвинфа; факпсрфос; фонофос, фазапон, хлорпирифос,хлоргафифсс-метл,хлорфенвинфос,зшон, Зфимфос) гх-ззд 1-500 0996409999 Фрукты, овоши 90-105 (4-9) Мясо85-100(4-10) Малою 90-101 (49) Зерно90-106(4-9) Мет 90-105(49) 0,090,66 (2-8) 0292,10 (4*)

пх-мс 0998509999 0,050,58 (4-Ю) 0,14-1,6(2-8)

вэжх- дмд 0998909998 0,4-0^ (2-10) 1,4-1,7 (4-10)

ГЬфецхвды (би})ен1рин, дельтаиетрин, лямбаа-иигалотрин, герлефин, промефицтетрамярин, фенсприн, флюналинаг, ципермегрин) ГХ-ЭЗД 1-1200 0996509999 Фрукты, овощи 8998 (49) Мясо86-102(4-10) Молоко 8999 (49) Зерно 92-101(49) Мед 9098 (49) 0,08050 (4-8) 0271,60 (4S)

ГХ-МС 1-500 Ct9987-09999 0,120,44 (4-10) озз- 1Д) (4-10)

вэжх-дмд 10-500 099920,9999 0,1-05 (2-8) 02-14 (2-8)

ТрЕшиьПгпраицамнн прогазм, метриЕуин, десмелринтарбутрин, прометрин) вэжх-дмд 10-500 0998809993 Фругаы, овощи 92-95 (49) Мж»9698 (410) Молоко9098 (49) Зерно9091(49) Мед9095(49) 0Д-0,8 (4-Ю) 04-24 (2-8)

ГХ-ЭЗД 1-500 0,08 (4-8) 027 (4-8)

ге-мс 1-250 0,1225 (4-8) озз- 70 (4-8)

Тргаэолы (гаююбуграэол, пшкошзол, пропикиизси, тригаюнаэоп, фенбукшааш, флуфгафол, щпрококшп, эпоксиксшюл, эгакскшот, диникюнюл) ГХ-ЭЗД 1-600 0999109996 Фрукт, овоши 9096 (49) Мясо8698(4-10) Молоко 89-106(49) Зерно 90-101(49) Мед 9096(4-9) ОДО 0,70 (2-8) 032-2Д) (4-8)

ГХ-МС 1-500 0998809998 0,15035 (4-10) 0,421,00 (4-Ю)

вэжх-жд 10-500 0997509999 03-07 (4-8) 1,0-2,1 (2-8)

Ьйоникшинэиды (ацетамиприи имщислопрвдтиалгтоксам) вэжх-ЛМЦ 10500 0999109999 Фругаы, овощи 8696 (49) Мясо8695(4-10) Мс»юю91-91(49) Зерно9098(49) Мед 90-100(49) 03-0,7 (2-10) 1,0-21 (4-Ю)

Карбамагы (карбарил, феноксикарб, карбофуран) вэжх-ДМЦ 10-500 0999709999 Ч^усты, овощи 92-91 (49) Мяоо92-96(410) Малою95-106(49) Зерно9098(49) Мёд9094(49) 0,4-04 (4-8) 1,2-1,7 (4-Ю)

Производные мочевины (диурон, дифлубензурон, изопротурон, линурон, метобромурон, метоксурон, монурон, фенурон, флуометурон, хлорбромурон, хлоротолурон, этилентиомочевина) южх-дмц 10-500 Q9981-09998 Фрукты, овощи 9096 (49) Msco90106(4-10) Молоко 9099 (49) Зерно9098(49) Мед909б(Ф9) 03-0,9 (2-8) 0,8-2,8 (4-Ю)

Друпе кпасхы (2,4-Д имиалил, катан, ^мафос, винююаолин, ишавнп) пх-эзд 1-1200 09М- одаэ Фруюьц овощи 9098 (4-9) Мясо92-98(4-10) Молоко 9^98(49) Зерно9094(49) Мед 9098 (49) 0,080,66 (4-10) 0292,10 (2-8)

пх-мс 1-500 09995- одаб 0220,42 (2-8) 0,620,85 (4-8)

вэжх- ЯМЦ 10500 Q9975- ода 0300,40 (4-10) 1,0-13 (4-10)

Разработанная методика определения остаточных количеств пестицидов в овощах, фруктах, зерне и кормах была утверждена и валидирована по 10 пестицидам: альфа-, бета-, гсышд-ГХЦГ; 2,4'-ДДЭ, 4,4'-ДДЭ, 2,4'-ДДД, 4,4'-ДДД, 2,4'-ДЦТ, 4,4'-ДДТ; гексахлорбензол. При этом данные измерений для рабочего стандартного образца исследованы на однородность выборки (анализ выбросов по критерию Кохрэна С=0,20-0,21 < 0.54), установлены аналитические характеристики методики: специфичность, линейность диапазона применения (/^=0.9997-0.9999), предварительный норматив контроля стабильности градуировочных графиков Лд/ви<5%, правильность определения (для двух концентраций, входящих в диапазон применения методики, отношения смещения результатов измерения количественного содержания к абсолютному СКО среднего значения не превышают табличного значения критерия Стьюдента t(0,95; 5) = 2,57, что удовлетворяет критерию приемлемости), повторяемость (сходимость) - коэффициенты вариации CV составили 3,97-3,98%, внутрилабораторная воспроизводимость (по критерию Граббса): рассчитанные значения критерия Граббса (G) Gp и G, не превышают табличных значений при Р=0,95.

Правильность разработанных методик подтверждена методом «введено-найдено» и успешным прохождением межлабораторных (провайдер ФГБУ «Федеральный центр оценки безопасности и качества зерна и продуктов его переработки») и международных (провайдер "The Food and Environment Research Agency") сличительных испытаний.

По разработанным методикам проведен анализ проб мяса, молока, молочных продуктов, овощей, фруктов и мёда. По результатам анализа 26 проб яблок, 62 мёда, 32 говядины, 21 свинины, 41 молока составлена гистограмма частоты определения того или иного пестицида (рис.10). Во всех продуктах обнаружены пестициды различных классов. Наиболее часто встречающимися во всех исследуемых продуктах оказались инсектициды из класса ФОП (пиримифос-метил и хлорпирифос) и пиретроидов (лямбда-цигалотрин).

. 1

1

1

1 п В.пП

г^аг^^Х-А-а-Х-в-а-^х т ^ х -©• ^ о. о. о. -е- о. х т а. £ а. -©■ и д ф-в-х-е ~ ||||Ч1 ИМ541 И Г И! ни ИГ И ■5; 3 1 3-1 | к е 5 * ! а 1 = □ Мёд (62 пробы) и Яблоки (26 проб) □ Молоко (41 проба) ■ Свинина (21 проба) □ Говядина (32 пробы) ■ Пшеница (31 проба) Циперметрин Ципроконазол Эндосульфан сульфат Этаконазол

Рис. 10. Частота определения пестицидов в различных продуктах.

ВЫВОДЫ

1. Предложена методология одновременного определения 100 пестицидов из одной навески анализируемого материала пищевых продуктов и кормов.

2. Установлена возможность совмещения методов (ЗиЕСЬЕКЗ и ДЖЖМЭ для одновременного извлечения и концентрирования различных классов пестицидов широкого диапазона полярности. Изучено влияние основных параметров подготовки проб на степень извлечения аналитов.

3. Проведено разделение смеси наиболее распространенных пестицидов классов ХОП, ФОП, пиретроиды, триазины, триазолы, производные бензимидазола, фталимиды, производные имидазола. дикарбоксимиды методом газовой хроматографии с электронно-захватным или масс-спектрометрическим детектором и пестицидов классов неоникотиноиды, карбаматы, триазины, триазолы, пиретроиды, производные феноксиуксусной кислоты) методом ВЭЖХ с диодно-матричным детектором. Изучено поведение пестицидов при их совместном присутствии в зависимости от параметров разделения.

4. Установлена возможность одновременного определения 30 полярных пестицидов методом ВЭЖХ с диодно-матричным детектором (продолжительность анализа 34 мин). Создана библиотека спектральных данных определяемых пестицидов для дополнительной идентификации и определения «чистоты» хроматографического пика.

5. Установлена возможность одновременного определения 70 неполярных пестицидов методом газовой хроматографии с электронно-захватным и масс-спектрометрическим детекторами (продолжительность анализа 60 и 25 мин соответственно).

6. Разработаны новые методики определения 100 пестицидов различных классов хроматографическими методами, основанными на совместном использовании дисперсионной твердофазной (QuEChERS) и жидкостно-жидкостной микроэкстракции (ДЖЖМЭ) в пищевых продуктах и кормах из одной навески. Пределы обнаружения и определения снижены до 0,05-2,5 мкг/кг и 0,14-3,6 мкг/кг соответственно в зависимости от методики анализа. Относительное стандартное отклонение результатов анализа не превышает 0,1. Разработанные методики превосходят действующие национальные стандарты: значительно снижены себестоимость, продолжительность анализа, количество используемых токсичных растворителей и реактивов, упрощена схема пробоподготовки.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях:

1. Амелин В.Г., Лаврухин Д.К, Третьяков A.B., Ефремова АА. Определение полярных пестицидов в воде, овощах и фруктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Веста. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 2012. Т. 53. № 6. С. 392-400.

2. Амелин В.Г., Лаврухин Д.К, Третьяков A.B. Сочетание метода QuEChERS и дисперсионной жидкостно-жидкостной микроэкстракции при идентификации и определении пестицидов различных классов в пищевых продуктах методами газожидкостной хроматографии // Журн. аналит. химии. 2013. Т. 68. № 8. С. 1-13.

3. Амелин В.Г., Лаврухин Д.К., Третьяков A.B. Дисперсионная жидкостно-жидкостная микроэкстракция при определении гербицидов - производных мочевины в природных водах методом ВЭЖХ // Журн. аналит. химии. 2013. Т. 68. № 9. С. 908-916.

4. Амелин В.Г., Большаков Д.С., Лаврухин Д.К, Третьяков A.B. Одновременное определение фунгицидов тирама и тебуконазола в зерне методами высокоэффективной жидкостной или мицеялярной электрокинетической хроматографии // Известия Саратовского университета. Новая серия. Серия Химия. Биология. Экология. 2013. Т. 13. Вып. 1.С. 7-11.

5. Ханбекова ЕМ., Рубцова Л.Е., Бабин Ю.Ю., Елаткин Н.П., Лаврухин Д.К, Третьяков A.B., Спрыгин AB. Поражение медоносной пчелы APIS MELIFERA CAUCASICA GORB. вирусами и паразитами и состояние пчелиных семей в разных эколого-географических условиях Большого Кавказа // Сельскохозяйственная биология. 2013. №6. С. 43-54.

6. Лаврухин Д.К Дисперсионное жидкостно-жвдкостное микроэкстракционное концентрирование гербицидов класса производных мочевины и последующее их определение в природных водах методом ВЭЖХ / XIX Молодежная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2012». М.: МАКС Пресс. [Электронный ресурс]. 2012. С.40.

7. Лаврухин Д.К. Ультразвуковая дисперсионная жидкостно-жидкостная микроэкстракция гербицидов производных мочевины при определении их в природных водах методом ВЭЖХ / VI всероссийская конференция молодых учёных, аспирантов и студентов с международным участием «Менделеев-2012». Тезисы докладов. СПб.: Изд-во «Соло». 2012. С.217.

8. Амелин В.Г., Лаврухин Д.К, Третьяков А.В. Дисперсионная жидкостно-жидкостная микроэкстракция хлорпирифоса и синтетических пиретроидов при определении их в природных водах методом газожидкостной хроматографии / Методы анализа и контроля качества воды. Москва. 5-8 июня 2012. Тезисы докладов. С.23.

9. Amelin V.G., Lavrukhin D.K, Tretyakov A.V. Dispersive liquid-liquid microextraction and QuEChERS method at the identification and determination pesticides in food by gas chromatography / 7th European conference on pesticides and related organic micropollutants in the environment and 13th Symposium on chemistry and fate of modern pesticides. Porto, Portugal. 7-10 October, 2012. P.221.

10. Lavrukhin D.K, Amelin V.G. The combination of QuEChERS and DLLME for the determination of different classes' pesticide residues by GC-MS (ECD) in food / 6th International Symposium on Recent Advances in Food Analysis. Prague, Czech Republic. November 5-8,2013. P.436.

11. Lavrukhin D.K, Amelin V.G. Combination of QuEChERS and DLLME for determination of pesticides in feeds, milk and dairy products by gas chromatography /10 European Pesticide Residue Workshop. Dublin, Ireland. 30th june-3rd july, 2014. P.128.

Подписано в печать б октября 2014 г. Формат 60*901/16. Усл.печ. л.1. Тираж 100 экз Отпечатано на полиграфической базе ФГБУ «Федеральный цапр охраны здоровья животным» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)