Физико-химические закономерности регуляции опиатных рецепторов ионами металлов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.15 ВАК РФ

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. РЕГУЛЯЦИЯ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ОПИАТНЫХ РЕЦЕПТОРОВ ИОНАМИ МЕТАЛЛОВ(. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР).

1.1 Современные представления о роли ионов металлов в функционировании рецепторов медиаторов и модуляторов Ц Н С.

1.1.1 Влияние ионов щелочных металлов на рецепторы . II

1.1.2 Влияние ионов щелочноземельных и переходных металлов на рецепторы.

1.2 Опиатные рецепторы и их лигаццы.

1.2.1 Методы исследования опиатной рецепции.

1.2.2 Взаимодействие лигандов с опиатными рецепторами

1.3 Ионы металлов и опиатные рецепторы

1.3.1 Влияние ионов щелочных металлов на опиатные рецепторы.

1.3.2 Ионы Са^+ и действие опиатов в ЦНС.

1.3.3 Влияние опиатов на транспорт ионов

Са^+в синаптосомы

1.3.4 Влияние ионов щелочноземельных и переходных металлов на опиатную рецепцию.

1.4 Современные представления о природе функциональных групп опиатных рецепторов.

1.5 Влияние ионов металлов на действие стр. опиатных лигандов in viV~C

Глава 2. МЕТОДИКА ЭКСПЕРИМЕНТА

2.1 Исходные вещества и материалы.

2.2 Методы

2.3 Обработка результатов

Глава 3. МЕХАНИЗМ РЕГУЛЯЦИИ РЕЦЕПЦИИ D -Ала2, D -Ле

§ ЭНКЕФАЛИНА ИОНАМИ ЩЕЛОЧНОЗЕМЕЛЬНЫХ И ПЕРЕХОДНЫХ МЕТАЛЛОВ

3.1 Влияние хелаторов на рецепцию Н-энкефалина.

3.2 Эффект ионов металлов на связывание %-эн-кефалина с препаратом мембран, преинку-бированным с хелатором

3.3 Доказательства отсутствия комплексообра-зования энкефалина с ионами металлов.

3.4 Равновесная схема влияния ионов металлов на рецепцию Н-энкефалина. Классификация катионов - активаторов

3.4.1 Влияние ионов Са2+ на рецепцию

Н - энкефалина

3.4*2 Влияние ионов Мп на рецепцию

Н - энкефалина

3.4.3 Влияние ионов м/* La3* Nd3* Smd+ на рецепцию

Н- энкефалина

3.4.4 Классификация ионов металлов - активаторов энкефалиновой рецепции

3.5 Механизм влияния ионов металлов на связывание %-энкефалина с низко аффинным рецептором

3.5.1 рН - зависимость связывания Н-энкефалина с низкоаффинным рецептором и эффект ионов металлов

3.5.2 Температурная зависимость связывания

Н-энкефалина с низкоаффинным рецептором. 105 3.5.3 Конкурентные ингибиторы процесса активации катионами низкоаффинного рецептора о о,

Н-энкефалина - ионы Са ,.

3.6 Механизм влияния ионов металлов на связывание Н-энкефалина с высокоаффинным рецептором.

3.6.1 рН - зависимость связывания Н-энкефалина с высокоаффинным рецептором и эффект катионов металлов

3.6.2 Температурная зависимость связывания %-энкефалина с высокоаффинным рецептором

3.7 Селективные ингибиторы рецепции %-энкефалина:

9 2.4" антагонист Са - верапамил и ионы Zn

Глава 4. МЕХАНИЗМ РЕГУЛЯЦИИ РЕЦЕПЦИИ ^-МОШИНА ИОНАМИ ЩЕЛОЧНОЗЕМЕЛЬНЫХ И

ПЕРЕХОДНЫХ МЕТАЛЛОВ

4.1 Влияние ЭГТА на рецепцию аН-морфина.

4.2 Влияние ионов Са2+ и ионов переходных металлов на рецепцию морфина

4.2.1 Влияние ионов Gsr+ на рецепцию °Н-морфина.

4.2.2 Влияние ионов переходных металлов на рецепцию %-морфина.

4.3 рН - зависимость рецепции ^Н-морфина и влияние ионов металлов

Глава 5. КИНЕТИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ ВЛИЯНИЯ ОПИАТОВ

НА ТРАНСПОРТ ИОНОВ Са2+ В СИНАПТОСОМЫ

5.1 Кинетические закономерности транспорта ионов Са2+ в синаптосомы.

5.2 Влияние агонистов и антагонистов опиатных рецепторов на К*" - стимулируемый транспорт ионов Са2+ в синаптосомы

5.3 Связаны ли регуляторные катионсвязывающие участки опиатных рецепторов с потенциал -зависимыми кальциевыми каналами нейромембраны ?.

Глава 6. ПРИРОДА КАТИОНСВЯЗЫВАЮЩИХ ГРУПП ОПИАТНЫХ

РЕЦЕПТОРОВ.

6.1 Функциональные группы различных типов опиатных рецепторов. Зависимость между силой влияния ионов металлов на рецепцию и константами нестойкости их комплексных соединений

6.2 Химическая модификация опиатных рецепторов

6.2.1 Химическая модификация опиатных рецепторов диэтилпирокарбонатом

6,2.2 Химическая модификация высокоаффинного рецептора энкефалина молибдатом аммония.

6.3 0 природе катионной регуляции опиатных рецепторов.

Глава 7. ВЛИЯНИЕ ИОНОВ МЕТАЛЛОВ НА АНАЛЬГЕГИЧЕСКИЙ этш ОШАТОВ.

7.1 Кинетические закономерности потенцирования опиатной анальгезии ионами металлов.

7.2 Корреляционный анализ физико-химических характеристик влияния ионов металлов на опиатную рецепцию и анальгезию.

ВЫВОДЫ.

В последнее время большое внимание исследователей привлекает модуляция функционирования центральной нервной системы (ЦНС) опиатами и нейропептидами. Вещества из группы опиатов ( морфин и его аналоги ) известны давно и широко применяются в медицине. Группа эндогенных модуляторов ЦНС - нейропептидов -была обнаружена сравнительно недавно [ I ] и включает энкефали-ны и эндорфины ( соответственно пяти- и 31- аминокислотные пептиды ), а также некоторые другие соединения. Опиаты и нейропеп-тиды оказывают мощные эффекты на организм: повышают порог болевой чувствительности, влияют на эмоциональное состояние и память. Изменения, вызываемые в организме экзогенными опиатами, лежат в основе наркомании; эндогенные пептиды оказывают влияние на течение целого ряда психических заболеваний. Столь широкий спектр проявлений физиологической активности эти вещества реализуют через взаимодействие со специфическими опиатными рецепторами [2 - 4] , что и определяет актуальность и практическую ценность исследования последних. Особое значение имеет регуляция функционирования опиатных рецепторов, которая осуществляется многими факторами. К числу наиболее эффективных регуляторов опиатных рецепторов принадлежат ионы металлов. Тот факт, что ионы металлов могут оказывать сильное влияние на опиатную рецепцию, был известен давно, однако природа этого явления не изучена. В этой связи значительный интерес представляет физико-химическое исследование катионной регуляции опиатной рецепции. Перспективным представляется также применение физико-химических методов для выяснения закономерностей влияния опиатной рецепции на взаимодействие катионов с нейромембраной, на трансмембранные потоки универсальных клеточных регуляторов - ионов Са2+.

В этой связи основной задачей настоящей работы является изучение физико-химических закономерностей и определение параметров регуляции опиатной рецепции ионами двух- и трехвалентных металлов на основе применения физико-химических подходов и методов исследования. В работе эта задача решалась на примере рецепции классического опиата - морфина и стабильного аналога лейцин-энкефалина - D - Ала2, J) -Лей?- энкефалина. В работе решались также задачи исследования кинетических закономерностей влияния опиатов на транспорт ионов Са2+ в нервные окончания и действия ионов металлов на анальгетический эффект опиатов in viva.

- 171 -ВЫВОДЫ

1. Впервые проведено детальное изучение действия ионов щелочноземельных и переходных металлов, включая редкоземельные элементы, а также влияния рН среды на связывание морфина и энкефалина с различными типами опиатных рецепторов. Осуществлена классификация катионов - активаторов рецепции.

2. Предложена схема действия ионов металлов на различные типы опиатных рецепторов. Разработаны методы определения параметров схемы. Определены физико-химические параметры, характеризующие влияние ионов металлов на рецепцию морфина и энкефалина и значения рКа ионогенных групп рецепторов.

3. Впервые разработан корреляционный подход, позволяющий выявлять природу функциональных групп рецептора, взаимодействующих с ионами металлов. С помощью этого подхода и методов химической модификации исследована природа катионсвязывающих ре-гуля торных участков различных типов опиатных рецепторов.

4. Обнаружены и исследованы селективные ингибиторы различных типов опиатных рецепторов.

5. Изучены кинетические закономерности ингибирования опиатами К*- стимулируемого транспорта ионов Са^+ в синаптосомы. Отмечено, что антагонист опиатов- налоксон не снимает ингиби-рующего эффекта морфина на транспорт Са^+.

6. На основе сопоставления физико-химических параметров транспорта ионов Са^+ и влияния катионов на рецепцию опиатов показано, что участок связывания иона Са^+ на мембранном канале не идентичен катионсвязывающему регуляторному центру опиатных рецепторов.

7. Изучены кинетические закономерности действия ряда ионов металлов на анальгетический эффект морфина in vivrf. Показано, что ионы Мп , Hi , GdLв полном соответствии с данными itL vutrtf потенцируют и пролонгируют анальгетический эффект морфина.

8. Проведен корреляционный анализ параметров влияния ионов металлов на рецепцию Ui VtttO и анальгезию - Ш VZVU . Показано, что анальгетический эффект опиатов и опиоидов опосредуется через их взаимодействие с JUрецепторами.

Автор выражает глубокую благодарность сотруднику отдела биокинетики Межфакультетской проблемной НИЛ им. А.Н.Белозерского Сергею Владимировичу Зайцеву за участие в руководстве и консультации при выполнении данной работы; заведующему отделом синтеза пептидов Института экспериментальной кардиологии ВКНЦ АМН СССР Михаилу Ивановичу Титову за предоставление препарата энкефалина; доценту кафедры фармакологии лечебного и санитарно- гигиенических факультетов I Московского медицинского института им. И.М.Сеченова Олегу Николаевичу Чиченкову за консультации и помощь в работе.

1. Hughes J# r Smith ,Kosterlitz H.W., Fothergill L»» Morgan B.A., Morris H.R. 1.entification of two related pentapeptides from the brain with potent opiate agonist activity. - Nature, 1975, v 258,№5536, p.577-579.

2. Pert C.B,Snyder S,H# Opiate receptor: demonstration in nervous tissue. Science , 1973, v179«№4142,P«1011-1014.

3. Snyder S.H., Childers S.R. Opiate receptors and opioid peptides. Ann.Rev.Neurosci., 1979, v 2, p. 35-64»

4. Chang E-J.,Cuatrecasas P. Heterogeniety and properties of opiate receptors. Fed. Proc. , 1981, v 40, N13,p. 2729 2734.

5. Pasternak G.W.,Snowman A.M., Snyder S.H., Selective enhancement of (^H)- opiate agonist binding by divalent cations- Mol. Pharmacol. , 1975, v 11,p 6 , p.735 744.

6. Harris R.A., boh H.H., Way E.b. Effects of divalent cations, cation chelators and an ionophore on morphine analgesia and tolerance. J. Pharm. Exp. Ther., 1975, v 195, № 3,p. 488 498.

7. Волькенштейн M.B. Биоорганическая химия и молекулярная биология. Мол.биол., 1982, т.16, с. 901 - 929.

8. Хьюз М. Неорганическая химия биологических процессов. М., Мир, 1983, 414 стр.

9. Yamamura H.I., Enna S.J., Kuhar M.J. eds. Neurotransmitter receptor binding . Raven Press , N.Y., 1978, 195 p.

10. Snyder S.H., Bruns R.E., Daly J.W., Innis R.B. Multipleneurotrsnsmitter receptors in the brain: amines, adenosine and cholecystokinin.-Federation Proc., 1981, v 40 , К 2, p. 142 146.

11. Snyder S.H. , Goodman R.R. Multiple neurotransmitter receptors. J. Neurochem., 1980, v 35, N I ,p. 5 15.

12. Enna S.J., Snyder S.H. Influence of ions, enzymes,and detergents on ^ aminobutyric acid receptor binding in synaptic membranes of rat brain. - Mol. Pharmacol, 1977, v 13, N 3, p. 442 - 453.

13. Nukina Itaru Characteristics of muscarinic acetylcholine receptors in rat brain. Acta Med. Okayama , 1983, v 37, IT 3, p. 179 - 191.

14. Vickroy T.W., Yamamura H.I., Roeske W.R. Differential regulation of high affinity agonist binding to muscarinic sites in the rat heart, cerebellum, and cerebral cortex.- Biochem. Biophys. Res. Communs., 1983, v 116, N 1, p. 284 290.

15. Tsai B.S., Lefkowitz R.J. Agonist specific effects of monovalent and divalent cations on adenilate cyclase - coupled ' alpha - adrenergic receptors in rabbit platelets.- Mol. Pharmacol., 1978, v 14, N4 , p. 540 548.

16. TJzumaki H., Govoni S., Memo M. ,Caeruba M.O., Trabucchi M. Spano P.E. Effects of GIP and sodium on rat striatal dopamine receptors labelled with lizuride. Brain Res., 1982, v 248, N 1, p. 185 - 187.

17. Kato K., Goto M., Fiikuda H.Regulation by divalent cations of %-labelled baclofen binding to GABA sites in rat cerebellar membranes1.fe Sci,, 1983, r 32, N 8, p. 879 887.

18. Erlich B.E. , Diamond J.M. lithium, membranes and manic -depressive illnes. J. Membr. Biol. , 1980, v 52, N 3, p. 187 - 200.

19. Duhm J., Becker B.E1. Studies on lithium transport across cell membrane ; V: On the nature of the Ifa+- dependent Li+ counter transport system of mammalian erythrocytes.- J. Membr. Biol., 1979, v 51, N 3/4, p. 263 286.

20. Michell R.H. A link between lithium, lipids and receptors? -Trends in Biol. Sci., 1982, v 11, p. 387 388.

21. Berrie C.P., Birdsall H.I.M., Burgen A.S.V.,Hulme E.C., Jameson M. Divalent cations regulate the receptor-specific binding of muscarinic agonists. Br. J. Pharmacol., 1983, v 78, suppl. 66 P.

22. El-Fakhany E.E., Pfennig M., Richelson E. Kinetic effects of terbium ions on muscarinic acetylcholine receptors of murine neuroblastoma cells. J. Heurochem., 1984, v 42, N 3, p. 863 869.

23. Fain N.J., Garcia S&inz J.A. Adrenergic regulation of adipocyte metabolism. - J.lipid Res., 1983, v 24, К 8, p. 945 - 966.

24. Baudry M., Lynch G. Regulation of glutamate receptors by cations.«Nature , 1979, v 283, Iff 5740 ,p.748 750.

25. Baudry M., Siman R., Smith E.K., Lynch G. Regulation by calcium ions of glutamate receptor binding in hippocampal slices. Eur. J. Pharmacol., 1983, v 90, N 2 - 3,p. 161-168.

26. Hamblin M.W., Creese I. ^H-dopamine binding to rat striatal D-2 and D-3 sites : enhancement by magnesium and inhibition by guanine nucleotides and sodium. Life Sci.,1982, v 30, N 18, p. 1587 - 1595.

27. Asano Т., Ogasawara N. Chloride dependent stimulation of GABA and benzodiazepine receptor binding by pentobarbital. - Brain Res. ,1981, v 225, N 1, p.212 - 216.

28. Avissar S., Moscona-Amir E., Sokolovsky M. Photoaffinity labelling reveals two muscarinic receptor macromolecules associated with the presence of calcium in rat adenohypo -physis. FEBS Lett., 1982, v 150, Iff 2, p. 343 - 346.

29. Mohler H., Okada T. Properties of ^ aminobutyric acid receptor binding with bicuculine methiodide in rat cerebellum. - Mol. Pharmacol., 1978, v 14, N 2,p. 256 265.

30. Chapman D.B., Way E.L. Metal ion interactions with opiates. Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 1980, v20,p.553-579.34., Глебов Р.Н., Крыжановский Г.Н. Функциональная биохимия синапсов. М., "Медицина", 1978, 325 стр.

31. Hanig R.,Aprison М . Determination of calcium, copper, magnesium, manganese, potassium,sodium, zink and chloride concentrations in several brain areas. Anal. Biochem., 1967, v21 , Ж 2 ,p. 169 -177.

32. Beckett A.H.,Casy A.P. Synthetic analgesics : stereochemical considerations. J.Pharm.Pharmacol. ,1954, v 6, p. 986 - 999.

33. Harris R.A., Loh H.H., Way Е.Ъ. Antinociceptive effects of lanthanum and cerium in non-tolerant and morphine tolerant -dependent animals. J.Pharmacol.Exp.Ther.,1976, v 196 ,1. N 2 ,P. 288 -297.

34. Rosenfeld J.P., Hammer M. Antagonism of opiate-like, lan -thanum induced analgesia by naloxone, 2 mg/kg, in rats. - Brain Res., 1983, v268 , N 1 , p. 189 -191.

35. Iwamoto E.I., Harris R.A., boh H.H., Way E.b. Antinociceptive responces after microinjection of morphine or lanthanum in descrete rat brain sites. J.Pharmacol.Exp. Ther. 1978, v 206 , N I , p. 46 -55.

36. Rosenbaum-J.S.,Holford N.H.G., Richards М.1., Aman R.A., SadeS W. Discrimination of three types of opioid binding sites in rat brain in vivo.- Mol. Pharmacol., 1984, v 5 > N 2 f p.242 248.

37. Kuhar M.J., Pert С.Б., Snyder S.H. Regional distribution of opiate receptor binding in monkey and human "brain.- Nature, 1973, v 245, N5515 , p.447 -450.

38. С.Д.Варфоломеев, С.В.Зайцев Кинетические методы в биохимических исследованиях. Изд-во МГУ, 1982, 344 стр.

39. Scatchard G. Interaction of small molecules and ions with proteins. Ann. U.Y. Acad. Sci.,1949, v 51, p.660-672.

40. Cheng 1.С., Prusoff W.H. Relationship between the inhibi -tion constant (K^) and the concentration of inhibitor which causes 50 per cent inhibition (IC^q) of an enzymatic reaction. -Biochem. Pharmacol.,1973, v 22, N 23p. 3099 ЗЮ8.

41. Magnan J., Paterson S.L., Tavini A.,Kosterlitz H.W. The binding spectrum of narcotic analgesic drugs with different agonist and antagonist properties. Naunyn - Schmiedebergl Arch. Pharmacol., 1982, v 319,№ 3, P- 197 - 205.

42. Громов А.И., Курочкин И.H.,Зайцев С.В., Породенко Н.В.

43. Exp.Ther.,1976, v 198, N I ,p. 66 -82.

44. Yaupel D.B., Jasinski D.R. Acute single dose effects on phencyclidine (PCP)in the dog.- Fed.Proc.,1979, v 38,№ 3, p. 435 (abstr.)

45. Chang E>J., Hazum E., Cuatrecasas P. Multiple opiate receptors. Trends Neurosci.,1980, v 3, N 7 , p.160-162.57. "Wood P.L., CharrisonD.b.,Hudgin R.Ii. Multiple opiate re- Neuropharmacology., 1981, v 20, N 12 A, p.1215-1220.

46. Mack K.,Killian A., Weyhenmeyer J.A. Comparison of mu, delta and kappa opiate binding sites in rat brain and spinal cord.- life Sci., 1984, v 34, N 3, p.281 285.

47. Chang K-J., Miller R.J., Cuatrecasas P. Interaction of en-kephaline with opiate receptors in the intact culturedceptors: differential binding of Д-, f(- andcells. Mol. Pharmacol. ,1978, v.14, H 2 ,p. 961 - 970.

48. Law P.Y., Herz A., boh H.H. Demonstration and character! -zation of a stereospecific opiate receptor in the neuroblastoma N18TG2 cells. J. Neurochem., 1979, v 33,11 6, p. 1177 - 1187.

49. Klee W.A., Nierenberg M. A neuroblastoma glioma hybrid cell line with morphine receptors.- Proc. Natl.Acad. Sci. USA , 1974, v 71, N 9 , p. 3474 - 3477.

50. Childers S.R., Snyder S.H. Differential regulation by guanine nucleotides of opiate agonist receptor interactions.- J. Neurochem., 1980, v 34, N 3 ,p. 583 593.

51. Chang K-J., Hazum E., Killan A., Cuatrecasas P. Interactions of ligands with morphine and ehkephaline receptors are differentially affected by guanine nucleotides.-Mol. Pharmacol.,1981, v 20, Ж I , p.1 7.

52. Hughes J. Peripherial opiate receptors mechanisms.- Trends Pharmacol. Sci., 1981, v 2, N I ,p 21 24.

53. Schultz fi., Wuster M., Krenss H., Herz A. Selective deve-lopement of tolerance without dependence in multiple opiate receptors of mouse vas deferens.- Nature , 1980,v 285, N 5762 ,p. 242 243.

54. Chang K-J., Hazum E., Cuatrecasas P. Novel binding opiate sites selective for benzomorphan drugs.- Proc.Natl.Acad. Sci. USA , 1981, v 78, N 7 ,p. 4141 4145.

55. Smith J.R., Simon E.J., Selective protection of stereospecific eiikephaline and opiate binding against inactivation by N-ethylmaleimid : evidence for two classes of opiate receptors.- Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1981, v 77, N I,p. 281 -284.

56. Portoghese P.S., Xarson D.L., Sayre i.M.,Pries D.S.,

57. Pasternak G.W., Snyder S.H. Identification of novel high-affinity opiate receptor binding in rat brain. Nature , 1975, v 253, N5492 , p. 563 - 565.

58. Pasternak: G.W., Zhang A-Z., Tecott b. Developemental dif -ferences between high and low affinity opiate binding sites: their relationship to analgesia and respiratory depression. life Sci., 1980, v 27 , N 13 ,p.1185-1190.

59. Курочкин И.Н. Кинетические закономерности связывания ли-гандов в системе опиатных рецепторов.- Дисс. на соиск. ученой степени канд.хим.наук. ,МГУ, Москва, 1984.

60. Gravel J., Sadee W. An opiate binding site in rat brain highly selective for 4,5-epoxymorphinans.- Science, 1983* v 221, N4616 , p. 1198 1201.

61. Pert C.B., Pasternak G.W., Snyder S.H. Opiate agonists and antagonists discriminated by receptor binding in brain. Science , 1973, v 182, N 4098 ,p. 1359 - 1361.

62. Cardenas H.L., Ross D.H. Calcium depletion of synaptoso-mes after morphine treatement. -Br.J.Pharmacol., 1976,v 57, N 4 , p.521-526.

63. Kouakou Y., Zijac J.M., Moisand C., Mennier J.C. The opiate receptor binding interactions of opioid alkaloids and of an opioid peptides in rat brain membranes. Mol. Pharmacol. , 1982, v 21, H 3, p. 564 - 569.

64. Lin-Shian, Shoei- Yn, Hammonds R.G., bi C.H. fb -Endor -phin : characteristics of binding sites in the mouse brain. Eur. J. Pharmacol., 1983, v 87, N 2-3, p.297 - 300.

65. Pfeiffer A., Sadee W., Herz A. Differential regulation of the J(A -, $ and K-opiate receptors subtypes by gua-nyl nucleotides and metal ions. - J. Neurosci.,1982,v 2 , H 7, p. 912 917.

66. SadeS W., Pfeiffer A., Herz A. Opiate receptor j multiple effects of metal ions. J. Neurochem., 1982, v.39, И 3, p. 659 -667.

67. Pasternak G.W., Simantov R.,Snyder S.H. Characterisation of endogenous morphine- like factor ( enkephaline) in mammalian brain. Mol. Pharmacol.,1976, v 12, N 3,p.504-513.

68. Poupeart J.H., Portoghese P.S.,Garsky Y. A circular di-croism study of the interaction of sodium and potassium ions with methionine-enkephaline. -J. Med. Chem. ,1976, v 19 , И II , p. 1354 1356.

69. Akera Т., Dee C.-Y.,Bordy T.M. Differential effects ofsodium on two types of opiate binding sites. -Life Sci., 1975, v 16, U 12 , p. 1801 1802.

70. Wajda I.J., Вanay-Schwartz M., Manigault I., bajtha A. Effect of lithium and sodium ions on opiate and dopamine receptor binding. Ueurochem. Bes., 1981, v 6, H 3,p. 321 «331.

71. Ross D.H. Effect of opiate drugs on the metabolism of calcium in synaptic tissue. Ins "Calcium in drug action»1 Weiss G.B. ed., Plenum press N-Y, L, 1978, p. 241 259.

72. Катц Б. Нерв, мышца, синапс. М., Наука, 1969, с.119.

73. Костюк П.Г., Крншаль О.А. Механизмы электрической возбудимости нервной клетки. М., Наука , 1981, с.182.

74. Sanghvi I.S., Gerson S., Brain calcium and morphine action. Biochem. Pharmacol., 1977, v 26, Ж 13 , p. 1183 - 1185.

75. Ross D.H., Medina M.A., Cardenas H.L. Morphine and ethanol: selective depletion of regional brain calcium. ~ Science,1974, v 186, N 4149 , p. 63- 68.

76. Cardenas H.L., Ross D.H. M»rphine-induced depletion of calcium in discrete regions of rat brain. -J. Neurochem.,1975, v 24, К 3 , p. 487 494.

77. Harris R.A., Loh H.H., Way E.b. Effects of divalent cation, cation chelators and ionophore on morphine analgesia and tolerance. J. Pharmacol. Exp. Ther., 1975»v 195, N 3 , p. 488 495.

78. Ross D.H. Calcium content and binding in synaptosomal subfractions during chronic morphine treatments.

79. Neurochemical Res., 1977, v 2, N 5 , p. 581 593.

80. Brandt M.B,,Buchen C.,Hamprechts B. Neuroblastoma X glyo-ma hybride cells as a model system for studying opioid action. Ins Characteristics and function of opioids.

81. Yan Ree J.M, Terenius I. eds., Amsterdam , Elsevier/ North Holland Biomed. Press., p. 299 310.

82. Biggio G., Guiddoti A., Costa E. On the mechanism of the of the decrease in cerebellar cyclic GMP content elicited by opiate receptor agonists. Naunyn Schmiedeberg's Arch. Pharmacol., 1977, v 296, N 2 , p. 117- 121.

83. Bygrave F.L. Calcium movements in cells. Trends in Biol. Sci., 1978, v3 , N 8 , p. 175 - 178.2+

84. Janis R.A., Tuggle D.J. New developments in Ca antagonists. J.Med.Chem., 1983, v.26, N 6, p. 775 - 785.

85. Nachshen D.A., Blaustein M.P. Some properties of potassium stimulated calcium influx in presinaptic nerve endings-J.Gen.Physiol., 1980, v 76, N 5, p. 709 728.

86. Tan K-N, Tashjian A.H., Voltage-dependent calcium channel in pituitary cells in culture. J. Biol. Chem. ,1984,v 259, N 1, p. 418 426.

87. Tan А.Т., Tsang D., Renand L.P., Martin J.B. Effect of somatostatin on calcium transport in guinea pig cortex synaptosomes. Brain Res., 1977, v 123, N I , p. 193- 196.

88. Kostyuk P.G. Calcium channels in the neurounal membrane.- Вiochim.Biophys,Acta, 1981, v 650, N 2 , p. 128 - 150.

89. Rosenberg b., Triggle D.J. Calcium, calcium translocationand specific calcium antagonists. In' : Calcium in drug action. Weiss G.B. ed. Plenum press N-Y-L., 1978, p. 3 -- 31.

90. ЮЗ. Кудинов С.А., Гриненко T.B. Некоторые свойства процесса накопления Са^+ фракцией плазматических мембран синаптосом.- Докл. АН УССР,сер. Б, 1978, т.Ю, с. 941 944.

91. Кравцов Г.М., Ряжский Г.Г., Орлов С.Н. Транспорт кальция в синаптосомы и субклеточные мембранные фракции головного мозга: влияние опиоидных пептидов.- Биохимия, 1982, т.47, Р 12, с. 2006 2014.

92. Mule S.J. Inhibition of phospholipid-faciliated calcium trasport by central nervous system-acting drugs. Bio-chem.Pharmacol., 1969, v. 18, N 2 , p. 339 - 346.

93. Yamamoto H., Harris R.A., boh H.H., Way E.L. Effects of acute and chronic morphine treatments on calcium localization and binding in brain. J.Pharmacol. Exp.Ther.,1978, v 205, N 2 , p. 255 264.

94. Kakunaga T. Pharmacological studies on analgesic drugs. IX. Effect of calcium on morphine analgesia Pt. 37.- Folia.Pharmacol.Jpn., 1966, v 62, , p. 40 50,

95. Ross D.H. Effects of opiate drugs on the metabolism of calcium in synaptic tissue. In: "Calcium in Drug action. Weiss G.B. ed., p. 241 -259.

96. Konno F., Takayanygi I. Effect of morphine on the stimuli induced calcium uptake into synaptosomes isolated from morphine - tolerant rats. - Japan. J. Pharmacol,, 1982,. v 32, N 4, p. 625 - 632.

97. Ross D.H., Gardenas H.L. Nerve cell calcium as a messenger for opiate and endorphin actions. In: "Neurochemical mechanisms of opiates and endorphins. Adv. Biochem. Pharmacol., 1979, v 20, p. 301 - 336.

98. Leslie S.W., McCormick J., Gonzales R., Friedman M.B. Lack of morphine effect on potassium stimulated calcium uptake Ъу whole brain synaptosomes. - Biochem. Pharmacol., 1982, v 31, N 16, p. 2697 - 2698.

99. Pfeiffer A., Herz A. Different types of opiate agonists interact distinguishably with mu, delta, кара opiate binding sites. Life Sci., 1982, v 31, N 12 - 13, p.1355-1358.

100. Bowen W.D., Gentleman S., Herkennam M., Pert C.B. Interconverting /А"" ^^ ^ ~ forms of the opiate receptor in rat striatal patches. Proc. Nat. Acad. Sex. USA, 1981, v 78, N 8, p. 4818 - 4822.

101. Abood L.G., Takeda P., Salem N.J. Role of phosphatidyl serine in the opiate receptor. In: "Alcohol and opiates: Neurochemical and Behavioral mechanisms, Blum K. ed.,p.283 297. New York: Academic., 1977, pp. 403.

102. Kouakou Y., Zijac J.M., Moisand C., Mennier J.C. The opiate receptor binding interactions of opioid alkaloids and of an opioid peptides in rat brain membranes. Mol. Pharmacol., 1982, v 21, N 3, p. 564 - 569.

103. Балашов A.M., Брусов 0.С.,Балакирева H.H., Панченко Л.Ф.

104. Исследование взаимодействияД-Ала2- Тир-3,5-Зн. энкефали-на(Д-5-Лей) с опиатными рецепторами головного мозга крыс.- Биохимия, 1981, т.46, № б, с.1067 1072.

105. Pfeiffer A. Effect of calcium on opiate receptor binding- Naunyn Schmiedeberg's Arch. Pharmacol., 1981, v 316, R 61.

106. Sadel W., Pfeiffer A., Herz A. Opiate receptor: multiple effects of metal ions. J. Neurochem., 1982, v 39, ИЗ, p. 659 - 667.

107. Blume A.J. Interaction of ligands with the opiate recep* tors of brain membranes: Regulation by ions and nucleotides. Proc. Natl. Acad.Sci. USA, 1978, v 75, N 4 »p. 1713 1717.

108. Pasternak G.W. \ltiple opiate receptors: 3H 3" Ethylke-tocyclazocine receptor binding and ketacyclazocine analgesia. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v 77, N 6,p. 3691 3694.

109. Hitzemann R.J., Hitzemann B.A., boh H.H. Binding of -- naloxone in the mouse "brain: Effect of ions and tole -ranee development. life Sci., 1974, v 14, I2393 2404.

110. Cho T.M., Gho J.S., Loh H.H. Physicochemical basis of opiate-cerebroside sulfate interaction and its application to receptor theory. «• Molecular Pharmacology, v 16, К 2, p. 393 4o5., 1979.

111. Bowen W.D., Pert C.B. .Conformational malleability of opiate receptors: sulfhydryl modification alters ion-induced ^k /<^-ligand selectivity shifts in rat striatal sections. Cell and Mol. Neurobiol., 1982, v 2,1. N 2, p. 115 128.

112. Simon E.J., Hiller J.M,, Edelman I. Solubilization o£a stereospecific opiate macromolecular complex from rat brain. Science, 1975, v 190, N 4212 , p. 389 - 390.

113. Law P.Y., Harris R.A., Loh H.H., Way E.L. Evidence for the involvement of celebroside sulfate in opiate receptor binding: Studies with Azure A and Jimp у mutant mice.

114. J.Pharmacol. Exp.Ther., 1978, v 207, IT 2 ,p.458-468.

115. Pasternak G.W., Snyder S.H. Opiate receptor bindings Effects of enzymatic treatements.- Mol. Pharmacol., 1974, v 10, U I , p. 183 193.

116. Pasternak G.W., Snyder S.H. Opiate receptor binding s Enzymatic treatements that discriminate between agonist and antagonist interactions.- Mol. Pharmacol., 1975,v 11, IT 4 , p. 478 484.

117. Abood Ij.G., Takeda P. Enhancement of stereospecific opiate binding to neural membrane by phosphatidilserine.

118. Eur. J. Pharmacol., 1976, v 39, W I , p. 71 77.

119. Law P.Y., Eisher G., boh H.H., Herz A. Inhibition of specific opiate binding to synaptic membrane by cerebro-side sulfatase. Biochem. Pharmacol., 1979, v 28, H17, p. 2557 - 2562.

120. Way Е.Ъ. Endogenous and exogenous opiate agonists and antagonists. Pergamon Press, IT.Y.,1979, p.51-54.

121. Демушкин B.H., Зотов B.M.,Пляшкевич Ю.Г. Структура участков узнавания ацетилхолиновых рецепторов ЦНС.- Вестн. Ш СССР, 1982, т.I, с.15 20.

122. Martin W.R. Pharmacology of opioids.- Pharmacol. Rev., 1983, v 35, N 4, p. 283 323.

123. Rogues B.P., Gacel G., Lodey P., Zijac J.M., lournie--Zaluski M C.,Morgat J-Ь.,Costentin J.,Marcais-ColladoH., Chaillett P. Peptides, 1982, Proc. Eur.Peptide Symp.

124. Prague, 1982. Berlin, N.Y. , 1983, p. 475 480.

125. Vaught J.Ii., Rothman R.B. ,Westfall Т.О. Mu- and delta receptors: their role in analgesia and in the differential effects of opioid peptides on analgesia.- Life Sci., 1982, v 30, N 17, p. 1443 1455.

126. Ueda H., Amano H, Shiomi H. Comparison of the analgetic effects of various opioid peptides by a newly devised intracisternal injection technique in conscious mice. -Eur. J. Pharmacol., 1979, v 56, N 3 , p. 265 268.

127. Munoz P.G., Pearon Z., Opioids/opiates analgesic responce modified by calcium.- Life Sci., 1982, v 30, N 12 13, p. 1237 - 1240.

128. Harris R.A., Iwamoto E.T., Loh H.H., Way E.L. Analgetic effects of lanthanum: cross tolerance with morphine. -Brain Res. , 1975, v 100, N I , p. 221 225.

129. Henderson G., Hughes J., Kosterlitz H.W. In vitro release of Leu- and Met- ehkephaline from the corpus striatum.-Nature, 1978, v 271, N5646, p. 677 679.

130. Stem P. Beitrag zur wirkungsweise des histamines im centralnervensystem.- Wien. Klin. Wochenschr., 1968, v 80, p.181 185.

131. Kaneto H., Nakanishi H., Fuji M. Reports at 35-th Regional Meet, of Japan Pharmacol. Soc., 1969*

132. Chapman D.B., Way E.L. Modification of endorphine/enke-phaline analgesia and stress-induced analgesia by divalent cations, a cation chelator and an ionophore.-Br.J.Pharmacol., 1982, v 75, И 2 , p. 389 396.

133. Enero M.A. Properties of the peripheral opiate receptors in the cat nictitating membrane.- Eur. J. Pharmacol., 1977, v 45, N 4 ,p. 349 356.

134. Hajos P. Improved method for preparation of synaptasomal fractions in high- purity

135. Brain Res., 1975, v 93, N 3, p. 485 489.

136. Bray G.A. A simple efficient liquid scintillator for counting aqueous solutions in a liquid scintillation coun* ter.- Anal. Biochem., 1960, v 1, N4-5 ,p.279 285.

137. Zuman Z., Wervilghen R.L. Dye-binding assay for protein solubilised in the presence or absence of sodium dodecyl sulf ate. Anal. Biochem. , 1980,v 109,N 5 p.454-459.

138. Гмурман B.E. Теория вероятностей и математическая статистика. М.,"Высшая школа", 1977, с.344.

139. Ferguson g.a. Statistical analysis in psychology and education, 3-rd edn., Mc-graw-Hill, N.Y.,1971, p.324.

140. Pilippi В.,Guisti P., Cima L., Borin G., Riccelli P., Marchiori P.Synthetic enkephalines- addicting propertiesand conformational studies in solution- Int.J.Peptide protein Res., 1979, v 14, N I ,p.34-40.

141. HolloIi M., Dobolyi Z.,Bajusz S. CD studies on enkephalin and its Pro^- analogs. FEBS Lett., 1980, v 110, И 1 , p. 136 - 140.

142. Sillen L.G., Martell A.E., Stability constants of me-tai ion complexes . - Spec. Publ. N°17 Chem. Soc. London, 1964, 870 p.

143. Martell A.E., Smith R.M. Critical stability constants v 1, Plenum Press, I.Y.,L., 1974, 1236 p.

144. Perrin D.D. Stability constants of metal ion complexes. Pergamon Press, N.Y., L., 1979, 1546 p.

145. Melchior W.B., Fahrley D. Ethoxyformylation of proteins. Reaction of ebhoxyformic anhydride with c?C -Chimotripsin, Pepsin and Pancreatic ribonuclease at pH 4 .- Biochemistry , 1970, v 9, 12 , p.251 258.

146. Means G.E., Feeney R.E. Chemical modification of proteins. Holden- Day, Inc., San-Francisco, 1971, 454 p.