Флуориметрические методы определения некоторых биологически активных веществ с использованием переноса энергии и организованных сред тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

На правах рукописи

.'Ч

........Шлчуио (&

Смирнова Татьяна Дмитриевна

ФЛУОРИМЕТРИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕКОТОРЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПЕРЕНОСА ЭНЕРГИИ И ОРГАНИЗОВАННЫХ СРЕД

02.00.02 — аналитическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук

3 МАЙ ш

Саратов - 2012

005015987

005015987

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный университет им. Н.Г.Чернышевского»

Научный консультант: доктор химических наук, профессор

Штыков Сергей Николаевич

Официальные оппоненты: Проскурнин Михаил Алексеевич

доктор химических наук, профессор, Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова, профессор кафедры аналитической химии

Муштакова Светлана Петровна

доктор химических наук, профессор Саратовский государственный университет им. Н.Г.Чернышевского, профессор кафедры общей и неорганической химии

Амелин Василий Григорьевич

доктор химических наук, профессор, Владимирский государственный университет имени А.Г. и Н.Г. Столетовых профессор кафедры химии

Ведущая организация: Институт геохимии и аналитической

химии имени В.И. Вернадского РАН

Защита состоится 24 мая 2012 года в 14 ч. 00 мин на заседании диссертационного совета Д 212.243.07 по химическим наукам при Саратовском государственном университете им. Н.Г. Чернышевского по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Астраханская 83, СГУ, Институт химии, I корпус.

С диссертацией можно ознакомиться в ЗНБ им. В.А. Артисевич Саратовского государственного университета им. Н.Г. Чернышевского.

Автореферат разослан «1$ » апреля 2012 года

Ученый секретарь диссертационного совета

Русанова Т.Ю.

Общая характеристика работы

Актуальность работы. Конец 20-го, начало 21-го века характеризуются активным развитием в мире различных биоаналитических методов, цель которых - совершенствование известных и разработка новых методик определения лекарственных средств, биомолекул, в том числе природных биополимерных молекул в биологических объектах. Признаками активизации работ в этом направлении являются появление большого числа новых журналов и научных статей, проведение международных конференций, разработка подходов к оценке качества результатов анализа в биообъектах и валидации создаваемых методик анализа. Анализ литературы показывает, что основными методами в биоанализе являются хроматография, капиллярный электрофорез в их гибридных вариантах с масс-селективным детектором и люминесцентный анализ. В последнем случае используется собственная люминесценция аналитов, люминесценция их хелатов с однородными или разными лигандами, флуороиммунные методы, не теряет своего значения и фотометрический анализ.

В последние годы при определении биологически активных веществ (БАВ) все чаще используют простой и высокочувствительный флуориметрический метод, основанный на измерении сенсибилизированной флуоресценции хелатов лантаноидов. Сенсибилизированная флуоресценция является результатом непрямого возбуждения иона металла: поглощения света органическими лигандами и передачи энергии электронного возбуждения с триплетного уровня лиганда на резонансный уровень лантаноида с последующей характерной для него эмиссией (эффект «антенны»). Эмиссионные свойства ионов лантаноидов можно регулировать активным заселением электронами их возбужденного состояния, а также минимизацией безызлучательной дезактивации, связанной с передачей энергии электронного возбуждения лантаноида на колебательные уровни связи -ОН молекул воды. Увеличение числа лигандов позволяет решать обе задачи: вытеснять воду и увеличивать эффект антенны.

Эффективность сенсибилизирующего действия органических лигандов должна определяться высокими значениями молярного коэффициента поглощения внутрилигандных п—>п* переходов, эффективностью синглет-триплетной интеркомбинационной конверсии, близостью энергии возбуждения триплетных уровней лиганда к нижнему возбужденному состоянию иона РЗЭ и другими факторами, увеличивающими квантовый выход флуоресценции. Дополнительный эффект «антенны» может реализоваться при образовании гетероядерных гидрофобных разнолигандных комплексов двух различных лантаноидов.

Еще одним фактором, повышающим интенсивность флуоресценции, является солюбилизация хелатов в наноразмерном объеме организованной системы - мицеллах ПАВ, микроэмульсиях, циклодекстринах.

Практически все работы по определению аналитов-лигандов методом сенсибилизированной флуоресценции выполнены за рубежом, в том числе в Одесской школе аналитиков (Украина), однако большинство из них имеет прикладной характер. Недостаточная распространенность люминесцентного анализа в России, отсутствие пригодной для массового применения аппаратуры, препятствуют широким исследованиям и применению данного высокоэффективного метода, имеющего диапазон от детектирования отдельных молекул до присутствия люминофора в качестве основного вещества препарата, для определения БАВ. В связи с этим требуется обобщение и систематизация накопленных фактов, определяющих эффекты переноса энергии возбуждения и сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов, а также формулировка общих подходов к выбору наиболее эффективных способов определения БАВ в различных объектах.

Цель работы - разработка подходов к повышению чувствительности флуориметрического определения биологически активных веществ за счет переноса энергии в хелатах некоторых лантаноидов с БАВ, солюбилизации хелатов в организованных средах и теоретическое обоснование выявленных эффектов.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

• изучить процесс переноса энергии в хелатах лантаноидов с биологически активными лигандами в водных и организованных средах;

• выявить факторы, способствующие понижению предела обнаружения биологически активных веществ, и принципы взаимного подбора лантаноидов и БАВ для достижения максимальной интенсивности аналитического сигнала;

• обосновать принципы, определяющие выбор второго лиганда и второго лантаноида, способствующие достижению максимальной чувствительности определения;

• установить особенности влияния мицеллярных растворов ПАВ, микроэмульсий, некоторых биополимеров и молекул рецепторов на интенсивность сенсибилизированной флуоресценции бинарных, разнолигандных хелатов европия, тербия и чувствительность определения БАВ, а также влияние мицелл на флуоресценцию биологически активных лигандов;

• найти оптимальные условия флуориметрического определения биологически активных веществ, основанного на измерении сенсибилизированной флуоресценции;

• изучить факторы, увеличивающие эффективность переноса энергии электронного возбуждения в хелатах лантаноидов с биологически активными веществами, сорбированных на модифицированных твердых матрицах;

• предложить направления практического применения разработанных методик для флуориметрического определения биологически активных веществ в различных объектах. Предмет исследования состоял в выявлении и теоретическом обосновании факторов, определяющих процесс формирования аналитического сигнала в результате переноса энергии электронного возбуждения в хелатах лантаноидов с различными биологически-активными лигандами в гомогенных и микрогетерогенных организованных средах.

Объекты и методы исследования: Для решения поставленных задач применяли комплекс методов исследования и анализа: молекулярную абсорбционную спектроскопию в УФ-, видимом и ИК-диапазонах, стационарную, разрешенную во времени и сенсибилизированную флуориметрию, термогравиметрию, потенциометрию, плоскостную и высокоэффективную жидкостную хроматографию, расчетные квантово-химические методы. Объектами исследования явились водные и мицеллярные растворы антибиотиков тетрациклинового, хинолонового, фторхинолонового рядов, кумаринов, других биологически активных веществ с одним, двумя и тремя ароматическими кольцами, являющихся моно- и полидентатными лигандами, хелатов лантаноидов (Eu3+, ТЬ3+, Lu3+, La3+, Sm3+, Gd3+, Y3+, Ce3+, Dy3+, Nd3+) с указанными лигандами; для создания мицеллярных растворов использовали поверхностно-активные веществе анионного, катионного и неионогенного типа; микроэмульсии готовили на основе анионных ПАВ, применяли a-, р- и у-циклодекстрины и их производные, некоторые биополимеры, a также гидрофильные и гидрофобные сорбенты на основе силикагеля. Объектами определения были представители классов указанных БАВ и европий, а объектами анализа явились биологические жидкости (плазма крови, моча) и мышечные ткани, лекарственные препараты, пищевые продукты, объекты окружающей среды (почвы). Научная новизна:

• Экспериментально доказано участие переноса энергии возбуждения в формировании аналитического сигнала хелатов европия с некоторыми антибиотиками в водных растворах, мицеллярных средах ПАВ, микроэмульсиях и на поверхности сорбентов;

• выявлены факторы, уменьшающие скорость безызлучательных переходов в бинарных и разнолигандных хелатах лантаноидов с биологически активными веществами (липофильность, основность антибиотика, координационная насыщенность иона металла, кислотность среды) и увеличивающие квантовый выход и интенсивность сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов;

• выявлено дифференцирующее влияние анионных, катионных и неионогенных ПАВ на флуоресценцию некоторых БАВ, однородно и

разнолигандных хелатов европия и тербия с различными БАВ, обусловленное их солюбилизацией мицеллами ПАВ;

• систематически исследован и обоснован эффект максимального увеличения чувствительности определения и понижения предела обнаружения ионов европия и тербия и БАВ флуориметрическим методом в результате синергетического действия второго лиганда, мицелл и микроэмульсий на основе ПАВ и молекул биополимеров; показана возможность понижения предела обнаружения в результате синергетического увеличения (до трех порядков) интенсивности сенсибилизированной флуоресценции, основанной на использовании эффекта ко-люминесценции в присутствии второго иона лантаноида в мицеллярных растворах ПАВ, выявлена связь интенсивности флуоресценции с размерами наноагрегатов, образующихся в растворе;

• предложены подвижные фазы, модифицированные молекулами рецепторами на основе циклодекстринов, позволяющие почти на порядок понизить предел обнаружения некоторых антибиотиков методом ОФ ВЭЖХ с флуоресцентным детектором;

• установлено, что иммобилизация хелата лантаноида с антибиотиком на сорбенте из водных или мицеллярных растворов сопровождается увеличением квантового выхода комплекса в 7 и 9.5 раз, скорость излучательного процесса Аг возрастает в 2 раза. Скорость безызлучательного процесса уменьшается в 3.6 и 5.1 раза;

• показано влияние ПАВ на протолитические свойства органических реагентов и расширение интервала комплексообразования ионов металлов с биологически активными и другими органическими лигандами, увеличение чувствительности определения ионов металлов в присутствии ПАВ, возможности их определения в кислых средах;

• показано использование синергетического эффекта увеличения сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов в присутствии второго лиганда и организованных средах для флуориметрического, сорбционно-флуориметрического, а также ОФ ВЭЖХ методов определения антибиотиков, антикоагулянтов, кумаринов, аминокислот, антиоксидантов и ионов Еи3+.

Практическая значимость:

Выявленные в работе факторы, способствующие уменьшению скорости безызлучательных процессов при внутримолекулярном переносе энергии электронного возбуждения в растворе и на поверхности, имеют общий характер и позволяет понижать пределы обнаружения как ионов Еи3+ и ТЬ3+, так и других БАВ различной природы, образующих комплексные соединения с лантаноидами.

Его практическая значимость реализуется в следующих направлениях: • увеличении чувствительности определения и понижении предела обнаружения антибиотиков, аминокислот, антикоагулянтов флуориметрическим методом, основанном на реализации

внутримолекулярного переноса энергии в возбужденном состоянии, эффекта антенны, ко-люминесценции и последующем измерении сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов;

• увеличении чувствительности (в 9 раз) определения антибиотиков в смеси методом ОФ ВЭЖХ при использовании молекул рецепторов в водно-органических подвижных фазах или модификации молекулами НПАВ подвижной и обращенной неподвижной фазы (циклодекстриновая и мицеллярная ВЭЖХ);

• возможности увеличения селективности определения БАВ, основанной на различном соотношении энергий их триплетных уровней и излучательных уровней ионов лантаноидов;

• возможности применения в качестве сенсибилизаторов более гидрофобных лигандов, нерастворимых в воде и мицеллярных растворах ПАВ, но растворимых в микроэмульсиях;

• предварительном концентрировании определяемого антибиотика или его комплекса с лантаноидом на сорбенте, и связанном с этим понижении предела его обнаружения;

• флуориметрическом определении неорганических и биологически активных веществ, основанном на проявлении синергетического эффекта увеличения (в 5-30 раз) сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов при использовании второго сенсибилизирующего лиганда и мицеллярных растворов ПАВ;

• расширении интервала кислотности комплексообразования в присутствии КПАВ, вследствие влияния гидрофобного фактора на устойчивость и растворимость аналитической формы Ое(1У)-ПКФ-КПАВ.

Разработано более 30 методик флуориметрического, сорбционно-флуориметрического, спектрофотометрического и ОФ ВЭЖХ определения различных веществ. Новизна и оригинальность разработанных способов определения ПАВ и антибиотиков подтверждены двумя патентами и одним авторским свидетельством. Фотометрический способ определения 2-алкил-2-имидазолинов в сернокислых ваннах травления внедрен в практику аналитической лаборатории завода «Южкабель», г. Харьков. Определение антибиотиков методом ОФ ВЭЖХ с флуориметрическим детектором используется ЗАО «НИТА-ФАРМ», г. Саратов при внедрении в производство новых фармпрепаратов для животноводства и птицеводства. Объектами внедрения являются хроматографические методики определения доксициклина и фторхинолонов в лекарственных формах.

На защиту автор выносит:

экспериментальное доказательство участия переноса энергии электронного возбуждения и эффекта «антенны» в системах лиганд-лиганд и лиганд-металл в формировании аналитического сигнала

сенсибилизированной флуоресценции европия в его хелатах с биологически-активными лигандами в водных растворах, мицеллярных средах ПАВ, микроэмульсиях и на поверхности сорбента;

- факторы, определяющие рост интенсивности сенсибилизированной флуоресценции европия и тербия в присутствии второго лиганда, второго иона РЗЭ и мицелл ПАВ, связанные с эффектом антенны и уменьшением скорости безызлучательных переходов в бинарных и разнолигандных хелатах лантаноидов с биологически активными веществами (число координированных металлом молекул воды, липофильность и основность лиганда, координационная насыщенность иона металла, кислотность среды);

- дифференцирующий эффект природы организованных сред на интенсивность собственной и сенсибилизированной флуоресценции бинарных и разнолигандных хелатов европия и тербия;

- влияние сорбции БАВ и их хелатов с лантаноидами на их прямую и сенсибилизированную флуоресценцию;

- методики флуориметрического, сорбционно-флуориметрического, фотометрического и хроматографического методов определения антибиотиков тетрациклинового, хинолонового и фторхинолонового рядов, некоторых антикоагулянтов, аминокислот, нуклеотидов и ПАВ и ионов европия.

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертационной работы доложены на X Всероссийской конференции по химическим реактивам «Реактив-97» (Москва-Уфа, 1997), VII Международной конференции «The Problems of Solvation and Complex Formation in Solutions» (Иваново, 1998), XXIV European congress on molecular spectroscopy (Prague, 1998), «VII Всероссийской конференции «Органические реагенты в аналитической химии» (Саратов, 1999), X Российско-Японском симпозиуме по аналитической химии (Москва, 2000), X Всероссийской конференции «Поверхностно-активные вещества и препараты на их основе» (Белгород, 2000), Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов» (Москва, 2001, 2003, 2008 г.г.), I, II Всероссийском семинаре «Проблемы и достижения люминесцентной спектроскопии» (Саратов, 1998 и 2001), Международной конференции по люминесценции, посвященной 110-летию со дня рождения академика С.И.Вавилова (Москва, 2001), Поволжской конференции по аналитической химии (Казань, 2001), Всероссийской конференции «Актуальные проблемы аналитической химии» (Москва, 2002), III Черкесовских чтениях «Проблемы аналитической химии» (Саратов, 2002), Международном форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж, 2003), Международной конференции «Analytical Chemistry and Chemical Analysis, devoted to 100 anniversary of A.Babko» (Киев, 2005), Всероссийской конференции молодых ученых «Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии»

(Саратов, 2003, 2005, 2007, 2010), Международной конференции молодых ученых и студентов в области оптики, лазерной физики и биофизики «Saratov Fall Meeting» (Саратов, 2005, 2006, 2008, 2011); VI Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2006», (Самара, 2006); международной конференции по аналитической химии «ICAS-2006» (Москва,

2006), Всероссийских конференциях с международным участием «Аналитика России», (Краснодар, 2004, 2007, 2009); VIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 2007); Российско-Украинско-Германском симпозиуме по аналитической химии «ARGUS'2007- Nanoanalytics» (Саратов,

2007), Научно-прикладном семинаре «Аналитические методы и приборы для химического анализа» (С.-Петербург, 2007), Международной конференции «Modern Physical Chemistry for Advanced Materials» (Харьков, 2007), Втором Международном форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж, 2008), VIII Украинской конференции по аналитической химии с международным участием (Одесса, 2008), Первой Международной конференции по люминесценции лантанидов (ICLL-1, Одесса, 2010), I Всероссийском симпозиуме по поверхностно-активным веществам «От коллоидных систем к нанохимии» (Казань, 2011), EURO ANAL YS YS 16 (Belgrad, Serbia, 2011), XIX Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Волгоград, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 102 печатные работы в виде 41 статьи (21 статья в журналах перечня ВАК), 1 авторского свидетельства и 2 патентов.

Личный вклад автора заключается в теоретическом обосновании проблемы, постановке и решении основных задач исследования, проведении совместно с аспирантами и дипломниками экспериментальных работ, обработке и интерпретации полученных результатов (разработка подходов к изучению эффекта переноса энергии, выявление факторов, способствующих понижению предела обнаружения аналитов, обоснование основных направлений практического применения эффектов).

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 308 страницах машинописного текста, включая введение, 8 глав, заключение, выводы, список литературы (390 наименования) и список сокращений. В работе содержится 68 таблиц и 67 рисунков.

В первой главе систематизирована литература, посвященная различным аспектам переноса энергии возбуждения в хелатах лантаноидов. Рассмотрена возможность использования сенсибилизированной флуоресценции для определения неорганических и органических компонентов флуоресцирующей системы и усиления сигнала в мицеллярных растворах ПАВ. Показано, что при реализации сенсибилизированной флуоресценции в качестве организованных сред ранее не использовали микроэмульсии, а сорбционно-флуориметрическому определению БАВ, основанному на

измерении сенсибилизированной флуоресценции, посвящены единичные работы.

Во второй главе дано описание объектов и методов исследования. В третьей главе представлены результаты экспериментальных исследований флуоресцентных свойств БАВ и подтвержден перенос энергии в бинарных хелатах лантаноидов, рассмотрено влияние второго лиганда на интенсивность сенсибилизированной флуоресценции. Четвертая глава посвящена изучению влияния различного типа организованных сред на флуоресцентные свойства БАВ и их хелатов с лантаноидами. В пятой главе показано использование эффекта ко-люминесценции для определения ионов европия, аминокислот и АТФ. В шестой главе представлены результаты хроматографических и сорбционно-флуориметрических исследований, основанных на

измерении собственной и сенсибилизированной флуоресценции БАВ и их хелатов с лантаноидами. В седьмой главе показано влияние ионов ПАВ на протолитические свойства органических реагентов, которое проявляется в особенностях комплексообразования на примере системы Ge(IV) -ПКФ-ПАВ. В восьмой главе приведены примеры практического применения изученных эффектов для повышения чувствительности, селективности и экспрессности определения БАВ флуориметрическим, сорбционно-флуориметрическим, фотометрическим и ОФ ВЭЖХ методами.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с Координационным планом Научного Совета РАН по аналитической химии и координируемым Головным Советом по химии и химической технологии РАН по проблеме 2.20.1. «Развитие теоретических основ аналитической химии» по теме НИР 3.71.96 «Изучение механизма аналитических реакций разных типов в водных, неводных и мицеллярных средах для разработки высокоэффективных методов контроля содержания металлов, ПАВ, органических соединений в объектах окружающей среды». Номера государственной регистрации в 1986-1990 гг.№0186.0119422, в 1991-1995 гг.-№01.9.10037921, в 1996-2000 гг,-№01.960.005200, в 2001-2005 гг. - №01.200.114305. Финансовая поддержка работы выполнялась в соответствии с проектами РФФИ № 94-03-08759а, № 97-03-33393а, № 01-03-32649а, № 04-03-32496а, № 08-03-00725а, Госконтрактов Министерства образования и науки РФ № 45166 (2005 г.) № 02.513.11.3028 (2007 г.) и № 02.740.11.0879 (2010-2012 г.г.)

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Факторы, определяющие интенсивность сенсибилизированной флуоресценции европия и тербия при образовании бинарных хелатов

с БАВ в водной среде

Известно, что сенсибилизированная флуоресценция, обусловленная переносом энергии в хелатах, возможна тогда, когда энергия Ti уровня лиганда

больше энергии резонансного уровня лантаноида (Ед > Ед). Как правило, величина энергетической щели ДЕ = Ед - Ед составляет 500-2500 см"1. Следовательно, для оценки возможности определения тех или иных органических соединений методом сенсибилизированной флуоресценции, основанной на флуоресценции хелатов лантаноидов с БАВ, необходимо систематическое изучение фотофизических, фотохимических и спектроскопических свойств самих БАВ, продуктов их взаимодействия с лантаноидами, выявление всего спектра критериев переноса энергии возбуждения и путей улучшения его эффективности в указанных хелатах.

В качестве критериев эффективности переноса энергии нами использованы следующие параметры:

- интенсивность собственной флуоресценции БАВ;

- интенсивность сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов;

- квантовый выход флуоресценции;

- наблюдаемое время затухания флуоресценции;

- скорости излучательных и безызлучательных переходов в хелатах.

Некоторые биологически активные лиганды, использованные в роли доноров энергии электронного возбуждения в хелатах лантаноидов, представлены в таблице 1. Хелаты европия и тербия с БАВ являются координационно-ненасыщенными соединениями, которые

характеризуются малоинтенсивным излучением иона лантаноида, соответствующим энергетическим переходам электронов внутри его оболочки.

Таблица 1. Биологически активные вещества-лиганды_

Класс Общая формула Соединения

Хинолоны и фторхинолоны 1*2 о он р!5 «1 Энрофлоксацин (ЭФ), ципрофлоксацин (ЦФ), норфлоксацин (НОР), флюмеквин (ФЛ), офлоксацин (ОФ), ломефлоксацин (ЛФ), налидиксовая (НК) оксолиновая (ОК) кислоты

Тетрациклины он о он о о Тетрациклин (ТТ), хлортетрациклин (ХТТ), окситетрациклин (ОТТ), метациклин (МЦ), доксициклин (ДЦ)

Производные пропионовой кислоты н,сч /—V н3с —у С ООН Ибупрофен

Кумарины ОСТ ш ад Варфарин (ВФ)

ОН ^^^О о о 7-(2,4-диоксо-2Н,ЗН-хромен-3-ил)-6Н,7Н-хромено[4,3-Ь] хромен-6-он (ТКЗ)

он аХ 4-оксикумарин (ОКМ)

Аминокислоты ноос-сн-сн2 п ш Гистидин (Шв)

соон н'| 1 Пролин (Рго)

соон Триптофан (Тпр)

Тирозин, лейцин, изолейцин, треонин, метионин, аланин, фенилаланин, 3.4-дигидроксифенилаланин, глицин, лизин, треонин, валин, аспарагиновая кислота, аспарагин, серин, орнитин, норвалин.

Нуклеотиды н Н Годной Р ООО „ Н Н II II II ^ ^ > сн2о-р—О-Р-О—Р-ОН ,[. |Г У/ ОН он он МЬ АТФ

о ""Лг) ОН ОН Рибоксин

Флавоноиды Рутин

ОН ^уи ОН 0 Кверцетин

Биологически Ксантинол, викасол, никотиновая кислота, диэтиламид активные никотиновой кислоты, хлорид тиамина, пиридоксин,

вторые лиганды пентоксифиллин, дибазол, нитроксолин, гидрохлорид папаверина, эмоксин, рибофлавин, изониазид, ксилометазолин, димексид, нафтизин

Наличие переноса энергии возбуждения от донора антибиотика к акцептору - иону лантаноида доказано нами на примере модельного хелата Еи3+-ДЦ, образующегося по гидроксихинонной группировке лиганда. Первое свидетельство этого - появление в присутствии Еи3+ новой полосы в спектре флуоресценции лиганда (Хвоз6 = 380 нм, ХфЛ = 500-540 нм), принадлежащей сенсибилизированной флуоресценции лантаноида с = 615 нм.

Это свидетельствует о внутримолекулярном переносе энергии, поскольку сам ион лантаноида при лв0-1б = 380 нм в возбужденное состояние не переходит. Другое подтверждение переноса энергии в хелате Еи3+-ДЦ состоит в том, что с, увеличением концентрации в растворе иона лантаноида интенсивность собственной флуоресценции лиганда (Лфл = 540 нм) уменьшается, а сенсибилизированная флуоресценция иона металла (\фл = 615 нм), наоборот, растет (рис.1). Видно также, что интенсивность сенсибилизированной флуоресценции металла превышает на порядок собственную флуоресценцию ДЦ. И, наконец, еще одним подтверждением внутримолекулярного переноса энергии служит линейная зависимость тушения флуоресценции 1/10 донора ДЦ от величины 1/СЕи3+ (рис.2).

Рис.1. Спектры

флуоресценции ДЦ (1) и хелата Еи3+-ДЦ (2-5) (Сдц=6.7-10"5 М, рН=6.35, }Чтб=380 нм) при различных концентрациях европия, М: 1-0;

2- 1.7-10"6; 3 - 5.0-10"6; 4- 8.3-10"6; 5 - 1.3-10-5.

При этом время затухания флуоресценции системы Еи3+-ДЦ остается постоянным, независимо от концентрации и соотношения компонентов системы, т.е. природа центра излучения не изменяется.

Установлено, что сенсибилизированная флуоресценция Еи3+ и ТЬ3+, основанная на внутримолекулярном переносе энергии возбуждения, наблюдается для всех антибиотиков группы хинолонов, фторхинолонов, кумаринов и некоторых аминокислот, т.е. в целом, для всех флуоресцирующих

лигандов, поглощающих в УФ-области спектра и удовлетворяющих указанному энергетическому соотношению. Таким образом, более высокое расположение и, одновременно, близость триплетных уровней антибиотиков и резонансных уровней энергии ионов металла является определяющим фактором эффективного переноса энергии в хелатах лантаноидов.

Рис. 2. Зависимость степени тушения (Мо) флуоресценции ДЦ от 1/СЕи3+, Сцц=6.7-10'5 М, рН=6.35, Хвозб=380 нм, Хфл=540 нм

В соответствии с этим, сенсибилизация флуоресценции ТЬ3+ тетрациклинами не наблюдается, поскольку энергии их триплетных уровней (18100-20300 см"1) ниже резонансного уровня металла (20500см-1). В то же время для всех хелатов Еи3+ (17260 см'1) условие переноса энергии с триплета тетрациклинов на его резонансный уровень соблюдается и сенсибилизированная флуоресценция этого металла закономерно наблюдается.

В нейтральной и щелочной областях рН Еи3+ и ТЬ3+ образуют комплексы с другой группой антибиотиков - хинолонами и фторхинолонами, характеризующиеся сенсибилизированной флуоресценцией различной интенсивности (рис. 3). Установлено, что при комплексообразовании европия с фторхинолонами в зависимости от соотношения компонентов образуется несколько комплексов различного состава. Это фиксируется не только по спектрам поглощения хелатов, но следует и из кривой затухания флуоресценции, которая имеет двуэкспоненциальный характер. Максимальная интенсивность сенсибилизированной флуоресценции европия, соответствующая сверхчувствительному электродипольному переходу (5О0—>7Р2), наблюдается в условиях избытка антибиотика при образовании комплексов с соотношением компонентов Еи3+ : БАВ = 1:2 или 1:3, что способствует более максимальному проявлению эффекта «антенны» и согласуется с известными данными литературы. Подтверждением наличия нескольких флуоресцирующих центров в системе является также уширение полосы перехода 5О0—>7Р2 при Х^п. Из рис.3 на примере европия видно также, что существует, по-видимому, критическая разность энергий донора и акцептора, при превышении которой эффективность переноса энергии уменьшается и интенсивность сенсибилизированной флуоресценции существенно падает, что также согласуется с литературными данными. Величину соотношения интенсивности полос г| (1с,,п/1м;ш), соответствующих сверхчувствительному (1счп) и магнитно-дипольному (1МД||) переходам,

1Л0 2,1

1,9

1,7 1,5

10

\'= -0,040х + 2,40 К2 =0,987

15 20

1'СЕ„з*- КН , М-1

используют для характеристики изменении, происходящих в спектрах люминесценции при комплексообразовании. Как видно из рис.4, при увеличении в системе Еи3+-Нор концентрации лиганда и соотношения Снор/СЕиз+ величина г), измеренная при >.585 и 2^15 нм возрастает, что свидетельствует об увеличении интенсивности флуоресценции и уменьшении скорости безызлучательных переходов, связанных с влиянием поля лиганда на скорость излучательных переходов в металле.

Рис.3. Соотношения интенсивности флуоресценции

„3+ ■

хелатов Еи3+ (50[ 19020 см"1,

Оо 17260 см") и №Т04 20500 см"1) с хинолонами и фторхинолонами.

22500 см"1

12 8 4 0

Снор/СЕ|1з+

Рис. 4. Зависимость г) (1счп/1мдп) хелатов европия с

норфлоксацином при

различных соотношениях иона металла и лиганда. Сец =1-10"4М, Снор =1-10"4М, Хвга6=360 нм, рН 8,6.

Взаимное расположение триплетов ФЛ, ОК, НК, Нор (22500 см'1 > Т1 > 21000 см"1) и резонансного уровня ТЬ3+ (20500 см"1) способствуют проявлению максимальной сенсибилизированной флуоресценции в хелатах, которая характеризуется сверхчувствительным переходом 5Б4 —>^5 (Хфл =545 нм). В то время как для ЭФ и ЦФ (21050см"1) максимальная флуоресценция наблюдается в хелатах Еи3+(50, 19020 см"1,5Б017260 см"1) при 615 нм (5Э0 ->7Р2) (рис.3).

Перенос энергии возбуждения, являясь многофакторным явлением, может зависите от гидрофобности, основности, поляризуемости биологически активного лиганда и степени ковалентности связи металл-лиганд, которые могут оказывать влияние на излучающий центр. Фторхинолоны и хинолоны являются слабыми одноосновными кислотами, значения рК которых лежат в диапазоне 7.3-8.8 (результаты Теслюк О.И.). Установлено, что с повышением основности лиганда (рК) интенсивности сверхчувствительных переходов полос

спектров люминесценции возрастают (рис.5). Возможно, это связано с тем, что происходит сближение константы диссоциации кислотной группы фторхинолона и рК гидролиза лантаноидов, которые по данным Назаренко, Антоновича и Невской лежат в интервале 7.8-9.0. На ряде примеров нами показано, что интенсивность сенсибилизированной флуоресценции, время жизни и квантовый выход в бинарных комплексах могут зависеть также от липофильных свойств лигандов и эти параметры выше для антибиотиков с более высокой гидрофобностью. Для некоторых лигандов фторхинолонового ряда линейная зависимость времени затухания бинарных хелатов европия от индекса липофильности представлена на рис. 6.

время жизни, мкс

ЭФ

Нор

ЦФ

рК

7,4 7,8 8,2 8,6 Рис. 5. Зависимость отношения 1счп/1мдп иона европия в комплексах от основности (рК) соответствующих комплексов с

фторхинолонами.

350 ■

250 ЦФ/ ^ у = 30,3х + 196

у/Ш R2 = 0,977

Нор , ■

150- | 1 - ...........

-113 5

Рис. 6. Зависимость времени затухания бинарных хелатов европия с фторхинолонами (норфлоксацин, ципрофлоксацин, флюмеквин) от индекса липофильности.

Показано, что при одинаковой дентатности, но различной липофильности (для фторхинолонов log Р = -0.78 -s- 4.7 и тетрациклинов log Р = -1.3 ^ -0.62) время затухания наблюдаемой сенсибилизированной флуоресценции хелатов европия с фторхинолонами значительно превышает (более чем в 5 раз) этот параметр для тетрациклинов. Высокая липофильность лиганда способствует удалению молекул воды из координационной сферы иона комплексообразователя, устраняя тем самым процесс диссипации энергии возбуждения и увеличивая интенсивность сенсибилизированной флуоресценции.

На уровне B3LYP/6-31 +G(d) нами рассчитана электронная структура молекул хинолонов и фторхинолонов. По атомно-связево-аддитивным схемам рассчитаны ван-дер-ваальсовы поверхность и объем молекул, поляризуемость и рефракция. Симбиотическое жестко-жесткое взаимодействие является преимущественно электростатическим, а поляризуемость молекулы отражает в основном ее способность к ковалентному связыванию. Поэтому зависимость

интенсивности флуоресценции комплексов ионов лантаноидов - жестких кислот с антибиотиками - жесткими основаниями - зависит от поляризуемости (и от близкой по физическому смыслу рефракции) антибатно. По мере возрастания размера молекулы (выражаемого как ван-дер-ваальсовы поверхности и объем) уменьшается интенсивность сенсибилизированной флуоресценции комплекса европия, что связано с увеличением числа структурных элементов и числа колебательных степеней свободы, с участием которых возможна диссипация энергии возбуждения. Чем прочнее (АН, АО) внутримолекулярная водородная связь, тем слабее кислота-антибиотик. Замыкание более прочного квазицикла в большей степени затрудняет отщепление протона.

Таким образом, максимальная интенсивность сверхчувствительного перехода лантаноида наблюдается при разнице энергий триплетного уровня органического лиганда и резонансного уровня иона металла, равной ДЕ = 5002500 см"1, более высокой основности, гидрофобности лиганда, координационной насыщенности иона металла.

Влияние второго лиганда и второго иона лантаноида на сенсибилизированную флуоресценцию лантаноидов в водной среде

Бинарные хелаты европия и тербия являются координационно-ненасыщенными соединениями, которые, несмотря на эффект сенсибилизации, характеризуются все же малоинтенсивным излучением лантаноида, вследствие диссипации энергии возбуждения на ОН-группы молекул воды, остающиеся во внутренней координационной сфере. Введение второго лиганда в бинарные системы лантаноид - БАВ сопровождается образованием разнолигандных комплексов и ростом флуоресценции, вызванном двумя причинами.

Первой причиной является простое вытеснение дополнительными лигандами остаточных молекул воды (тушителей флуоресценции) из координационной сферы иона металла и уменьшение доли безызлучательных потерь энергии возбуждения. Увеличение интенсивности сенсибилизированной флуоресценции при этом относительно небольшое. Такими лигандами в нашем случае являются гидрофобный монодентатный триоктилфосфиноксид (ТОФО) и ЭДТА, как представитель гидрофильных полидентатных лигандов. Из-за отсутствия хромофорных групп в их молекулах ТОФО и ЭДТА не участвуют в процессе переноса энергии.

Вторая причина имеет комплексный характер и обусловлена применением хромофорных бидентатных хелатообразующих лигандов, таких как теноилтрифторацетон (ТТА) и 1,10-фенантролин (Фен). В этом случае происходит не только вытеснение остаточных координированных молекул воды, но возможен и перенос энергии с их триплетных уровней, а также промежуточный межлигандный перенос, т.е. увеличение роли эффекта антенны и, следовательно, более значительный рост интенсивности флуоресценции металла (таблица 2). В то же время, видно, что влияние второго

хелатообразующего лиганда на интенсивность сенсибилизированной флуоресценции хелатов европия и тербия с изучаемыми БАВ зависит от природы этого лиганда и его соответствия природе БАВ.

Нами показано, что для гидрофобных фторхинолонов энрофлоксацина и флюмеквина разнолигандное комплексообразование сопровождается уменьшением числа молекул воды q в ближайшем окружении иона комплексообразователя (таблица 3). Число координированных молекул воды рассчитано из экспериментальных данных по методу и эмпирическому уравнению Хоррокса q =1,05(АОбЩ-Аг), где q - число молекул воды, Аобщ = 1/т, т - время затухания флуоресценции, Аг - скорость излучательного процесса.

Таблица 2. Влияние вторых лигандов на отношение интенсивностей (1/10)

-------------------—с,,3+ „ ти3+„ г А г>

Комплекс Второй лиганд

Фен ТОФО ТТА ЭДТА А1Ь

Еи3+-ТТ 4 2 1 1 2

Еи3+-ХТ 4 2 1 1 2

Еи3+-ОТ 4 2 1 1 2

Еи^-МТ 4 2 1.5 1 1.5

Еи3+-ДЦ 4 2 5 3 5

Еи3+-ВФ 2 осадки 20 1,5 1,5

ТЬ3+-ВФ 10 осадки 1,5 2 1

Еи^-Окм 2 осадки 24 2 1

ТЬ3+-Окм 4 осадки 1 1 1

Еи^-Кум 1 осадки 19 1 1

ТЬ3+-Кум 4 осадки 1 2 1

Еи^-ЦФ 3 осадки 1,5 1 1

Еи3+-ЭФ 3 осадки 1,7 1 1,5

ТЬ^-Нор 1.5 осадки 1 1 1

ТЬ3+-ФЛ 1.6 осадки 1 1 1

ТЬ^-НК 2 осадки 1 1.2 -

ТЬ3+-ОК 2 осадки 1 1.3 -

Кум - куматетралил; Окм - оксикумарин

Видно, что разнолигандное комплексообразование сопровождается также увеличением времени затухания (т) флуоресценции и уменьшением скорости безызлучательного перехода (А11Г), что полностью соответствует уменьшению гидратации иона лантаноида.

Таблица 3. Влияние второго лиганда на число молекул воды в ближайшем окружении иона Еи3+

Хелат I, МКС 1/т, мс"1 Апг Ч 1оёР

ЭФ-Еи^ 184 5,4 5.3 5,5 4,70

ЭФ-Еи3+-Фен 242 4,1 4.0 4,2

ФЛ-Еи^ 160 6,2 6.1 6,4 2,56

ФЛ-Еи3+ -Фен 178 5,6 5.3 5,8

В полном соответствии с установленными тенденциями находится найденная нами корреляция между скоростью безызлучательных переходов Апг в разнолигандных хелатах лантаноидов с фторхинолонами и индексом липофильности биологически активных веществ (рис. 7). С ростом индекса липофильности (1о§Р) скорость безызлучательных переходов в разнолигандных комплексах уменьшается. Как и в случае бинарных хелатов (см. рис.6), гидрофобные эффекты, характерные для липофильных фторхинолонов, также способствуют более эффективному удалению молекул воды из ближайшего окружения лантаноида и увеличению интенсивности сверхчувствительного перехода.

Но]

5

у = -0,240х + 5,13 Я* = 0,954

ФЛ

ЭФ

Рис. 7. Зависимость вероятности безызлучательного перехода в разнолигандном комплексе от липофильности второго лиганда.

-1

1

1оёР

Вторая составляющая повышения интенсивности сенсибилизированной флуоресценции в присутствии второго хромофорного хелатообразующего лиганда обусловлена дополнительным переносом энергии возбуждения со второго лиганда на лантаноид. Эффективность переноса энергии, как и для первого лиганда, зависит от взаимного расположения триплета второго лиганда и резонансного уровня иона лантаноида. При сравнении действия лигандов ТТА и Фен с ЭДТА и ТОФО (см. табл.2) видно, интенсивность флуоресценции хелатов Еи3+ при использовании ТТА и Фен в ряде случаев в 4-10 раз выше. Для доказательства предполагаемой дополнительной сенсибилизации европия нами выбраны системы Еи3+-ДЦ-Фен и Еи3+-ДЦ-ТТА и метод разрешенной во времени флуоресценции (табл.4). Особенно ярко влияние дополнительного переноса энергии видно на примере ТТА (триплет ТТА 20500 см"1). Перенос энергии происходит, по-видимому, сначала на 501 уровень (19020 см"1), а затем, безызлучательно на 5Оо уровень (17260 см"1) иона европия. Условием вероятного прямого переноса триплетной энергии служит и то, что оба лиганда (ДЦ и ТТА) переходят в возбужденное состояние при близких значениях длин волн - 350 и 380 нм, соответственно. Полученные нами относительные квантовые выходы флуоресценции бинарных и разнолигандных хелатов представлены в таблице 4. В случае Фен, который возбуждается и излучает при других условиях (^.возб = 280 нм, ХфЛ = 380 нм), и энергетическая щель между триплетом которого (22075 см"1) и излучающим резонансным уровнем европия (17260 см"1) близка к 5000 см*1, можно было предположить межлигандный триплет-триплетный (Т-Т) перенос с Фен на ДЦ (18100 см"1). Для

доказательства этого, был поставлен специальный эксперимент. Поскольку в бинарной системе Фен-ДЦ перенос энергии возбуждения с Фен на ДЦ (Козб = 280 нм, Х.фЛ = 540 нм) не был обнаружен из-за слабого взаимодействия в воде между этими лигандами, нами была подобрана модельная система — разнолигандный комплекс ТЬ3+ с Фен и ДЦ как вторым лигандом. Перенос энергии возбуждения с Фен на ТЬ3+ реализуется, так как в спектре появляется сенсибилизированная флуоресценция при 545 нм, а перенос с ДЦ на этот лантаноид невозможен, ввиду того, что энергия его триплетного состояния (18100 см-1) значительно ниже резонансного уровня 504 (20500 см'1) иона тербия. Таким образом, роль модельного комплекса ТЬ3+-Фен-ДЦ состояла в максимальном сближении возможного донора энергии Фен и её акцептора ДЦ при связывании лигандов с помощью данного металла.

Таблица 4. Влияние природы второго лиганда на увеличение интенсивности флуоресценции (Хфл=615 нм) и величину относительного

Система Mo ф±Дф

Еи^-ДЦ 1 0.0035±0,0002

Еи3+-ДЦ-Фен 4 0.0039±0,0003

Еи3+-ДЦ-ТТА 5 0.0054±0,0002

Как видно из рис. 8, интенсивность сенсибилизированной флуоресценции ТЬ3+, связанного с Фен при увеличении концентрации ДЦ, как второго лиганда, уменьшается. Одновременно появляется незначительная собственная флуоресценция антибиотика при 540 нм. Таким образом, вклад Фен в увеличение интенсивности флуоресценции комплекса Еи3+-ДЦ может состоять в лиганд-лигандном Т-Т переносе энергии возбуждения доксициклину, хотя нельзя полностью исключить и прямой перенос энергии с триплета Фен (22075 см-1) на 50) уровень (19020 см"1) европия. В пользу двухстадийного переноса

I/IfH 30

20 -

10 -

0

, нм

525 535 545 Рис. 8. Спектры флуоресценции ТЪ3+ связанного с Фен, (Сфен=3.3-10"5 М, Стъ3+=3.3-10"бМ, рН=6.35, >ч,озб=280 нм), при увеличении концент-

у = -2,22х + 39,2 R2 = 0,981

1/С

ю-4, м-1

2 6 10

Рис. 9. Зависимость тушения

флуоресценции ТЬ3+-Фен от 1/Сдц, рН=6.35,1ВО-,6=280 нм, Хфл=540 нм

увеличении рации ДЦ (Сдц-10 6 M): 1 - 0; 2 -6.7; 3-13; 4-27

энергии с Фен на ДЦ, а затем к иону европия свидетельствует установленный нами статический механизм тушения сенсибилизированной флуоресценции хелата ТЬ3+-Фен, подтверждаемый линейной зависимостью величины 1о/1 хелата ТЬ3+-Фен от 1/Сдц (рис.9).

Аналогичные эффекты роста интенсивности сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов при добавлении второго лиганда получены для флуорофоров кумаринового класса, в частности варфарина (ВФ). Интенсивность флуоресценции Еи3+, связанного в комплекс с ВФ (ХВО1б=330 нм, Хфл=380 нм) и другими антикоагулянтами в присутствии ТТА (ХВОЗб=330-345 нм) увеличивается в 20-24 раза, а с ТЬ3+ в присутствии Фен (268-290 нм) — в 10 раз. В таблице 5 представлены метрологические характеристики флуориметрических методик определения ВФ по собственной флуоресценции, в присутствии различных сенсибилизаторов, а также с помощью бинарных комплексов ТЬ3+-Фен и Еи3+-ТТА, из которой видно, что сенсибилизация флуоресценции разнолигандного комплекса позволила понизить предел обнаружения варфарина в 83 и 3800 раз, соответственно. В последнем случае предел обнаружения ВФ уменьшается до величины 5.2-1О"10М. Таким образом, образование разнолигандных хелатов позволяет дополнительно увеличить заселенность излучательных уровней и эффективность сверхчувствительных переходов европия и тербия, что согласуется с известными данными для других подобных систем.

Таблица 5. Пределы обнаружения и диапазоны линейности определения ВФ

Система 1/1о Диапазон определяемых концентраций,М Предел обнаружения, М Я2 а Ь

ВФ 1 5.010б-5.0-10"4 2.0-10"6 0.943 0.25 2.37

ВФ-ТТА 2 ьо-кгМ.о-кг4 7.2-10"8 0.976 0.28 3.09

ВФ-АБ 7 1.010"6-1.0-10"4 5.1-Ю"7 0.983 0.33 4.26

ТЬ3+-ВФ- Фен 15 5.010"8-5.010"6 2.4-10"8 0.995 0.45 6.30

Еи^-ВФ- ТТА 25 1.0ЮМ.010"' 5.2-10-'° 0.998 0.73 8.32

С целью реализации других путей увеличения интенсивности сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов нами на примере хелата Еи3+-ТТА исследован эффект ко-люминесценции, наблюдаемый в присутствии второго иона лантаноида и описанный ранее для хелатов европия с ТТА и Фен в работах Штенке Л.Д. В качестве второго иона лантаноида апробировали Ьи3+, Ьа3+, Ос13+, У3+, Се3+, Бу3+, Ис13+. Межмолекулярный перенос энергии от лигандов комплекса второго лантаноида к комплексу Еи3+ в сочетании с собственным внутримолекулярным переносом энергии при условии более высокого расположения уровня первого возбужденного состояния второго лантаноида способствует значительному (на 1-2 порядка) росту сенсибилизированной флуоресценции Еи3+ (рис.10). Нами показано, что наибольшее возрастание интенсивности флуоресценции разнолигандного

хелата Еи3+-ТТА с Фен наблюдается в присутствии Сс1 3+ в диапазоне его концентрации (0.25 -0.40)-10"6г/мл, а для более гидрофобного хелата с ТОФО при еще меньших концентрациях второго лантаноида — 0.2-10"10 г/мл - 1.6-10"7 г/мл, что связывают с образованием коллоидных гетеронаночастиц в исследуемых системах, размеры которых нами были определены.

Рис. 10. Зависимость интенсивности сенсибилизированной флуоресценции хелата Еи3+-ТТА-ТОФО-Бридж-35 от концентрации второго иона РЗЭ. 1-Ос13+, 2-Ьа3+, 3-Бу3+, 4-Се3+, 5-Ш3+ и без иона РЗЭ.

Рис. 11. Тушение флуоресценции хелата Еи-ТТА при увеличении концентрации АТФ.

ТТА в мицеллах Б-35 (ш!=а-рС+Ь) = 330 нм, АфЛ =б 15 нм)

Исходный хелат Аналит а Ь Область линейности, М ПрО,М

Еи3+-ТТА АТФ -0.37 1.39 1.0106- 1.010"4 6.210'7

Еи3+-Ос1э+-ТТА АТФ -0.13 2.97 1.0-10"7- 1.0-10"5 8.0-10"8

Другая часть исследований, направленных на разработку высокочувствительных методик определения БАВ, связана с использованием не усиления, а тушения сенсибилизированной флуоресценции бинарного хелата в присутствии второго лиганда-аналита. В качестве модельного был выбран интенсивно флуоресцирующий хелат Еи3+-ТТА в присутствии Оё . Апробирование в качестве второго лиганда трех десятков витаминных лекарственных препаратов и антиоксидантов, таких как изониазид, никотиновая кислота, эмоксин, пиридоксин, АТФ, рутин, кверцетин и др. позволило предложить высокочувствительную реакцию определения АТФ (табл. 6). Статический механизм тушения (рис.11) позволяет использовать подобные системы в аналитической практике для определения тушащих флуоресценцию биологически активных лигандов.

Таблица 6. Определение АТФ по тушению флуоресценции хелата Еи3+"

Влияние организованных сред

Известно, что еще одним фактором, позволяющим увеличивать интенсивность аналитического сигнала во флуоресцентном анализе, является использование жидких наносистем - мицелл и микроэмульсий на основе поверхностно-активных веществ (ПАВ). С олюбилизация компонентов аналитической реакции в таких жидких наносистемах способствует их дегидратации, изменению протолитических, таутомерных свойств, увеличению устойчивости комплексов, эффективности переноса энергии и заряда, сближению компонентов реакции и т.д. Установлено, что в присутствии мицелл неионогенных, катнонных и анионных ПАВ собственная флуоресценция антибиотиков, как правило, изменяется незначительно и зависит от состояния их в растворе и гидрофобности. Достаточно высокая гидрофильность тетрациклинов (log Р = -1.3 -0.6) препятствует их солюбилизации, в то время, как некоторые гидрофобные фторхинолоны, хинолоны, и кумариновые производные (logP = -0.8 4,75) достаточно легко солюбилизируются мицеллами ионогенных ПАВ, причем часто наблюдается дифференцирующий эффект, состоящий в разном влиянии мицелл ПАВ на интенсивность флуоресценции самих БАВ и сенсибилизированную флуоресценцию лантаноидов в их хелатах с БАВ.

Так, установлено, что солюбилизация таких фторхинолонов, как ЛФ и ОФ, мицеллами катнонных и анионных ПАВ сопровождается увеличением интенсивности их собственной флуоресценции до 4 раз, а изменение полярности микроокружения в мицелле вызывает смещение полосы флуоресценции в коротковолновую область (ДХфЛ=5-7 нм), расширение интервала рН флуоресценции на 1.5-3 единицы и диапазона определяемых концентраций (табл. 7). Характерно, что эти антибиотики не сенсибилизируют флуоресценцию лантаноидов, вероятно из-за малой устойчивости хелатов (по данным О.И.Теслюк lgKxb3+-oa>=3,55). Таким образом, обнаруженное нами увеличение собственной флуоресценции ОФ и ЛФ в мицеллярных растворах можно использовать для увеличения чувствительности их флуориметрического определения.

Интенсивность собственной флуоресценции кумаринов возрастает в присутствии мицелл неионных, катнонных и анионных ПАВ. Ее максимальное увеличение в 4-5 раз наблюдается в мицеллярных растворах ТХ-100, однако, линейный диапазон определяемых концентраций при этом уменьшается до одного порядка 5.0-10"5-5.0-10"4М.

Действие аналогичное мицеллам оказывает альбумин, образующий глобулы и способный одновременно как солюбилизировать хелаты, так и дополнительно сенсибилизировать флуоресценцию лантаноида. Показано, что солюбилизация некоторых БАВ альбумином увеличивает их собственную флуоресценцию до 7 раз, что может быть связано также с переносом энергии от донора — молекулы белка к акцептору - некоторым кумариновым производным и тетрациклинам. Доказательство переноса энергии получено нами на примере

Таблица 7. Сравнительная характеристика определения фторхинолонов и антикоагулянтов в водной и организованных средах (^1=а-рС+Ь)._

Система Диапазон определяемых концентраций, М ПрО,М рН а Ь Я2

ЛФ ЬО-КГ'-ЬО-Ю"4 6. МО"8 3,5-4,0 0.76 7.19 0,989

ЛФ-ЦПХ ЬО-КГМ.О-Ю"4 8.8-10"9 5,0-7,0 0.72 6.95 0,997

ОФ ЬО-Ю'-З.ОЮ"4 6.8-10"8 3,5-4,0 0.73 7.51 0.989

ОФ-ДДС 1.010"'-5.010"4 5.2Ю8 5,0-7,0 0.87 7.91 0.992

ВФ З.О'Ю^.О'Ю4 2.0-10"6 6,0-7,0 0.25 2.37 0.943

ВФ-АБ 1.0-10"*- 1.0-Ю4 5.1-10"7 5,0-7,5 0,33 4,26 0,983

системы альбумин - варфарин. Из рис. 12 видно, что в условиях возбуждения альбумина (Хво|б=280 нм) появляется и растет полоса, соответствующая флуоресценции варфарина (А.фл=380 нм) - акцептора энергии возбуждения, в то время как флуоресценция донора энергии - альбумина (Я.фл=330 нм) уменьшается, причем линейно с ростом концентрации варфарина (рис.13).

I отн.

флуоресценции АБ при увеличении концентрации ВФ (САБ=5.0Т0"5М, ^,озб=280 нм, рН 6.5) СВФ (М): I -1.0-10"6; 2 - 5.ОТО"7; 3 - 1.0-10"7.

Д1фл альбумин;!

О 1 2 3 А1фл

варфарина

Рис.13 Зависимость между

уменьшением интенсивности

флуоресценции донора (альбумин)

и увеличением интенсивности

акцептора (варфарин)

Электростатические и гидрофобные взаимодействия в паре донор-акцептор способствуют уменьшению расстояния между ними и росту эффективности межмолекулярного переноса энергии.

Важное влияние на усиление флуоресценции в мицеллах ПАВ оказывает их природа. Установлено, что в присутствии анионных ПАВ практически всегда наблюдается увеличение сенсибилизированной флуоресценции бинарных хелатов лантаноидов и расширение плато их комплексообразования; последнее основано на изменении протолитических свойств биологически активных лигандов. Рост интенсивности флуоресценции может быть связан с несколькими причинами: солюбилизацией и некоторой дегидратацией

координационно ненасыщенных комплексов в менее полярной среде мицелл, а также удалением молекул воды из ближайшего окружения иона комплексообразователя в результате непосредственного вхождения аниона ПАВ как второго лиганда в координационную сферу лантаноида (данные Н. Арнауд и И. Джерджес), о чем свидетельствует обнаруженное нами уменьшение скорости безызлучательного перехода иона лантаноида (табл. 8).

Таблица 8. Некоторые характеристики хелатов европия с флюмеквином в водных и мицеллярных средах

Хелат Т, МКС Ф,% Интервал рН

ФЛ-Еи3+ 160 6,4 2,0 6,5-7,5

ФЛ-Еи3+-ДЦС 177 5,6 3,0 6,0-8,5

ФЛ-Еи3+-Фен 178 5,8 1,8 6,0-9,0

ФЛ-Еи3+-Фен-ДДС 213 4,7 4,0 6,0-9,5

Косвенным подтверждением универсального влияния АПАВ являются близкие значения времени жизни и число молекул воды в ближайшем окружении иона европия в разнолигандном комплексе и бинарного - в мицеллярном растворе ДЦС (см. табл. 8). Нами также установлена линейная зависимость скорости безызлучательного процесса и числа молекул воды я, входящих в ближайшее окружение лантаноида в хелатах европий -фторхинолон, от липофилъности биологически активного лиганда (рис.14). Солюбилизация разнолигандных хелатов лантаноидов мицеллами ПАВ сопровождается также уменьшением безызлучательных потерь энергии возбуждения, наши данные подтверждают результаты исследований Кроппа и Виндзора свидетельствующие, что скорости безызлучательных переходов А,,, в ионах Еи3+ и ТЬ3+ пропорциональны количеству молекул воды в первой координационной сфере иона (рис.15).

Рис.14. Влияние липофильности лиганда на число молекул воды q, входящих в ближайшее окружение Еи3+ в хелатах с энрофлоксацином, ципрофлоксацином и норфлокса-цином, солюбилизированных мицелл-лами ДДС.

Рис.15. Зависимость скорости безызлучательного перехода А,,, от количества молекул воды в первой координационной сфере европия в его хелатах с ЭФ в воде (1), мицеллах ДДС (2), в присутствии Фен в воде (3) и мицеллярных средах ДДС (4).

Установлено, что увеличение интенсивности сенсибилизированной флуоресценции лантаноида тем больше, чем больше длина алифатического радикала ПАВ (табл. 9), что может быть связано с усилением связывания хелата мицеллами, дегидратацией и уменьшением доли безызлучательных процессов.

При солюбилизации разнолигандных хелатов, как и самих антибиотиков, наблюдается дифференцирующий эффект мицелл ПАВ (табл.10). Так мицеллы анионных ПАВ тушат флуоресценцию хелатов Еи3+-ДЦ-Фен и ТЬ3+-ОК-Фен, а мицеллы катионных - наоборот, увеличивают её. Мицеллы неионных ПАВ значительно увеличивают флуоресценцию хелата европия с ДЦ и Фен и не изменяют - хелата европия с ЭФ, НК и ОК.

Таблица 9. Влияние длины алифатического радикала анионного ПАВ на

прирост интенсивности (1/10) сенсибилизированной флуоресценции

ПАВ Еи3+-ТЦ -Фен рНопт Ьп3+-ФХ-Фен рНопт

Дедилсульфат натрия 1.5 7.5-8.5 1.0 9.0-10.0

Додецилсульфат натрия 2.5 7.5-8.5 3.0 10.0-11.0

Додецилбензолсульфонат натрия 3.5 7.5-8.5 5.0 9.0-10.5

Неионогенные ПАВ также более эффективны при солюбилизации разнолигандных хелатов Еи3+ с менее гидрофобными лигандами ТТА и ДЦ, которые лучше солюбилизируются в оксиэтиленовом слое мицелл.

Негативное влияние мицелл анионных ПАВ на указанные комплексы может быть связано с их разрушением в результате связывания иона металла отрицательно заряженной поверхностью анионной мицеллы, которая к тому же может слабо связывать лиганды, имеющие тот же отрицательный заряд, т.е. разделять компоненты аналитической реакции. В то же время в мицеллах катионных ПАВ ориентация солюбилизированных лигандов видимо такова, что положительно заряженная поверхность не препятствует образованию хелатов. Хелат тербия с оксолиновой кислотой и Фен, по-видимому, не солюбилизируется мицеллами неионных ПАВ.

Дифференцирование наблюдается даже для хелатов тербия с Фен и лигандами одного и того же класса фторхинолонов - норфлоксацином и флюмеквином (см табл. 10). Если мицеллы анионных ПАВ увеличивают флуоресценцию обоих хелатов, а мицеллы неионных тушат её, то катионные ПАВ действуют по-разному. Поскольку строение НОР и ФЛ отличается, можно предположить, что именно селективная солюбилизация лигандов является причиной разного влияния мицелл КПАВ. Особенностями солюбилизации можно объяснить и влияние мицелл на хелат тербия с налидиксовой кислотой и Фен, флуоресценция которого тушится мицеллами только катионных ПАВ, в отличие от хелата другого хинолона - оксолиновой кислоты.

Таблица 10. Влияние мицелл ПАВ на интенсивность флуоресценции разнолигандных хелатов европия и тербия с антибиотиками и 1,10-

ПАВ Ио

ТЪ3+-ВФ ТЬ3+- ок ТЪ3+- нк Еи3+-ЭФ Еи3+- ДЦ ТЪ3+-НОР ТЬ3+-ФЛ

ДДС тушение тушение 2 3 тушение 2.5 3.0

ДДБС гушение тушение 1.2 5 тушение 4 2.1

ЦПХ тушение 1.4 тушение 1 1 тушение 2.4

ЦТАБ тушение 4.2 тушение 1 2.5 тушение 1.2

Тритон Х-100 тушение 1 1 1 7 тушение тушение

Бридж-35 тушение 1 1.2 1 6 тушение тушение

Твин -80 тушение 1 1 1 6 тушение тушение

Для некоторых БАВ найдено удовлетворительное соответствие между константами кислотной диссоциации антибиотиков хинолонового и фторхинолонового рядов с интервалом оптимальной кислотности образования разнолигандного комплекса (как это было ранее показано для бинарных комплексов), в котором наблюдается максимальная сенсибилизированная флуоресценция ионов Еи3+ (табл. 11). Как видно из таблицы, в присутствии мицелл ДДС диапазон кислотности комплексообразования расширяется в щелочную область, что связано с изменением кислотных свойств микроокружения хелатов в мицеллах анионных ПАВ.

Таблица 11. Значения рК аминогруппы антибиотиков в водных растворах и диапазоны кислотности комплексообразования лантаноидов_

Антибиотик рК Интервал кислотности в отсутствие ПАВ Интервал кислотности в присутствии ДДС

ТЬ3+-НОР-Фен 8,8 8,5-9,0 8,0-9,5

Еи3+-ЦФ-Фен 8,1 8,0-9,0 8,0-10,5

ТЬ3+-НК-Фен 7,6 7,0-7,5 6,5-8,0

Указанное изменение протолитических свойств органических лигандов и интервалов комплексообразования лантаноидов с антибиотиками в растворах ПАВ имеет общий характер. Ранее в работах кафедры под руководством Р.К.Черновой было показано, что в присутствии катионных ПАВ наблюдается затруднение протонирования донорного гетероатома реагентов флуоронового ряда, бромпирогаллового красного и устранение конкуренции протона по отношению к иону-комплексообразователю. Аналогичный эффект депротонирования получен нами и для пирокатехинового фиолетового (ПКФ), реагента трифенилметанового ряда, который содержит достаточно легко протонируемый в кислых средах карбонильный атом кислорода. Методом

амперометрического титрования показано, что при рН 1 - 5 в присутствии ЦПХ образуется ионный ассоциат состава 1:1 по сульфогруппе реагента, при этом изменений в спектрах поглощения не наблюдаются, но изменяется рК депротонирования карбонильного кислорода (рис.16). Показано, что если комплексообразование Ое(1У) с ПКФ в воде происходит при рН > 4 и сопровождается образованием двух продуктов Ое(1У) : ПКФ =1:1 (Хмах=580 нм) и 1:2 (А.мах=640 нм), то введение катионного ПАВ резко сдвигает комплексообразование в среду 1-5 М Н2804, что является результатом эффекта депротонирования карбонильной группы реагента и удаления гидратной воды.

Этот эффект, как и в случае с фторхинолонами, сопровождается расширением плато рН комплексообразования, но в данном случае в кислую область. С целью выяснения причин наблюдаемого явления исследовалось влияние на константу устойчивости комплекса природы гидрофильной компоненты (при неизменной длине алифатического радикала) и величины гидрофобной составляющей КПАВ. Показано, что рКдег1 и константа устойчивости зависят от длины углеводородного радикала КПАВ (рис.17). Следовательно, этим же явлением можно объяснить увеличение интенсивности сигнала сенсибилизированной флуоресценции хелатов лантаноидов с различными антибиотиками, показанное в табл. 10.

Причина такого явления заключается как в изменении состояния самого реагента в присутствии ПАВ, так и иона металла (дегидратация) под влиянием ПАВ в хелатном ассоциате или мицелле ПАВ. Поскольку протонирование донорного гетероатома кислорода является конкурирующим по отношению к комплексообразованию с ионом металла, то устранение этого процесса приводит к активации комплексообразования. Подобную же дегидратирующую роль играют обнаруженные нами гидрофобные свойства лигандов, приводящие к образованию хелата с большим числом координированных лигандов в хелатов лантаноидов.

Рис. 16. Зависимость рКдеп ПКФ от Рис.17. Зависимость АрКдеп ПКФ от Сцпх в 2М(1), 1М(2), 0,6М(3), длины алифатического радикала 0,2М (4) Н2804 ПАВ пиридиниевого ряда.

Сочетание эффектов сенсибилизации и уменьшения полярности микроокружения бинарного хелата при его солюбилизации в глобуле бычьего альбумина (^возб=280 нм, ^фЛ=330 нм) позволило получить 5-

кратное увеличение интенсивности сенсибилизированной флуоресценции комплекса Еи3+-ДЦ (см табл. 2). В этом случае также уменьшается число молекул воды в ближайшем микроокружении лантаноида и безызлучательные потери энергии возбуждения, и наблюдается сенсибилизирующий эффект связанный с переносом энергии с триптофана, входящего в состав белка.

Представлялось интересным выяснить каков размер гетеронаночастиц Еи3+-Ос13+-ТТА в мицеллах различных ПАВ и существует ли связь между их размером и интенсивностью сенсибилизированной флуоресценции. Измерения, проведенные на наносайзере показали, что средний размер гидрофобных наночастиц в водных растворах, проявляющий эффект ко-люминесценции, равен 20-50 нм. Установлено, что дополнительное увеличение интенсивности флуоресценции гетеронаночастиц наблюдается при их солюбилизации в мицеллы ПАВ. Причем максимальный рост флуоресценции практически еще на порядок происходит в мицеллах неионогенных ПАВ — блоксополимеров оксидов этилена и пропилена Проксанол-091, а также оксиэтилированного спирта Бридж-35. В мицеллярных растворах Бридж-35 сигнал флуоресценции наблюдается при меньших концентрациях лигандов, при этом размер наночастиц составляет всего 5-10 нм. Показано, что при соотношении концентраций ионов Еи3+: Сс13+ = 1:(80-100) относительное число наночастиц меньшего размера возрастает на 20%, что сопровождается синергетическим увеличением интенсивности сенсибилизированной флуоресценции. Таким образом, синергетическое действие ко-люминесценции и солюбилизации увеличивает интенсивность сенсибилизированной флуоресценции Еи3+ на три порядка и позволяет существенно понизить предел его обнаружения. Этот эффект использован нами для снижения пределов обнаружения Еи3+ и гистидина, используемого как второй лиганд(табл. 12).

Таблица 12. Флуориметрическое определение гистидина и европия, основанное

Система Аналит ПрО,М

Еи3+-ТТА -Фен Еи3+ 3.9 10"8

Еи3+-ТТА-Фен-Бридж-35 4.0 10 "у

Еи3+-ТТА-Б-35-Ос13+ 3.2 10'11

Еи3+-ТТА Шэ 5.6-10"6

Еи3+-ТТА -Ос13+ 1.0-10"8

Еи3+-ТТА-Б-35-Сс13+ 1.0-КГ''М

В флуоресцентном анализе достаточно редко используют другой тип организованных жидких наносистем - микроэмульсии, имеющие необычайную солюбилизирующую емкость и способные к инверсии фаз «вода-масло» и «масло-вода», т.е. смене полярности среды в микроокружении солюбилизированной аналитической системы. Нами установлено, что использование микроэмульсий (МЭ) состава ДДС/н-пентанол/н-октан/вода при переходе от структуры «масло в воде» к структуре «вода в масле» увеличивает интенсивность сенсибилизированной флуоресценции в 1.3

раза по сравнению с мицеллами ДДС и, кроме того, позволяет использовать в качестве второго лиганда гидрофобные соединения, которые даже в мицеллярных растворах ПАВ образовывали осадки (рис.18). Такая высокая солюбилизирующая емкость микроэмульсий связана с особенностью их состава и микрогетерогенной структуры. Установлено, что эффективность микроэмульсии зависит от состава буферного раствора, компоненты которого могут также солюбилизироваться микроэмульсией (рис.19).

555 нм

Рис. 18. Спектры флуоресценции хелатов ТЬ3+-ФЛ (5), ТЬ3+-ФЛ-Фен(4), ТЬ3+-ФЛ-ДДС (3), ТЬ3+-ФЛ-Фен-ДДС (2) и ТЬ3+-ФЛ-Фен в микроэмульсии м/в 80/20 (1), рН 7.5.

б 7 8 9 рН

Рис. 19. Зависимость интенсивности флуоресценции от природы буфера и рН среды системы ФЛ-ТЬ3+-Фен в МЭ состава ДЦС / н-пентанол / н-октан / вода типа в/м (СТьз+ = 3.0-10"4М, СФен = 1.0-10"4М, СФЛ = 1.0-10"5М). 1-боратный, 2-ацетатно-аммиачный буфер.

Максимальная флуоресценция в микроэмульсии наблюдалась в ацетатно-аммиачном буферном растворе, который позже использовался при разработке методики анализа. Применение микроэмульсии позволило в 1.5 раза понизить предел обнаружения ФЛ с помощью хелата ТЬ3+. Некоторые метрологические характеристики флуориметрического определения флюмеквина в мицеллярной среде ДДС и микроэмульсии на его основе представлены в табл. 13.

Таблица 13. Характеристики определения ФЛ с помощью хелата ТЬ3+ в

Среда а Ь Диапазон линейности, М ПрО,М

0.01 МДДС 0.39 7.07 1.0-10"8 - 1.0-10'3 6,2-10"9

Микроэмульсия 0.45 5.74 1.0-10"8 - 1.0-10"3 4,2-10"9

Таким образом, совместное действие второго лиганда, второго лантаноида, мицелл ПАВ и микроэмульсий на аналитические системы в водных

растворах, сопровождается синергетическим действием, способствующим достижению максимальной интенсивности сенсибилизированной флуоресценции лантаноида, и, следовательно, снижению предела обнаружения БАВ.

Еще один популярный вид организованных сред на основе наночастиц -водные и водно-органические растворы циклодекстринов. Использование циклодекстринов для увеличения интенсивности собственной флуоресценции БАВ и сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов не дали положительного результата. Однако применение у-циклодекстрина в ВЭЖХ с флуориметрическим детектором позволило увеличить площадь хроматографического пика флюмеквина в 2.3 раза, улучшить селективность его определения, понизить предел его обнаружения более чем в 4 раза и расширить диапазон определяемых концентраций.

Применение мицелл ПАВ в ВЭЖХ оказалось менее эффективно. Из 9 исследованных ПАВ только неионогенные при концентрации равной 5.ОТО"5 М, т.е. значительно меньше критической концентрации мицеллообразования, увеличивали площадь хроматограммы ФЛ по сравнению с исходной подвижной фазой, не содержащей ПАВ, в 1.5 - 1.9 раза. Увеличение аналитического сигнала связано с модификацией молекулами ПАВ поверхности обращенной фазы хроматографической колонки. Установлена зависимость времени удерживания антибиотиков фторхинолонового и тетрациклинового рядов на ОФ модифицированной колонке и индексом их липофильности (рис.20).

Рис.20. Зависимость времени удерживания в ОФ ВЭЖХ производных фторхинолонов и тетрациклинов от индекса липофильности антибиотиков.

Влияние сорбции хелатов на интенсивности собственной и сенсибилизированной флуоресценции в присутствии различных типов организованных сред

Другой фактор, способный уменьшить гидратацию лантаноидов, потери энергии возбуждения за счет безызлучательной дезактивации и увеличить интенсивность собственной или сенсибилизированной флуоресценции, основан на сорбции хелатов антибиотиков с лантаноидами из водных и водно-мицеллярных растворов ПАВ на твердых подложках. Для этой цели на первом этапе нами апробированы силикагели Silasorb 600, Silasorb CI8 и Silasorb С8. Первый сорбент представляет собой мелкодисперсный Si02 без привитых

групп, два последних содержат привитые гидрофобные алкильные радикалы (Silasorb С18, Silasorb С8). Как видно из рис.21 максимальная флуоресценция хелата Еи3+-ДЦ в присутствии мицелл Тритон Х-100 наблюдается на Silasorb 600, который обеспечивает прочную сорбцию комплекса.

585 600 615

Рис. 21. Спектры флуоресценции комплекса Еи3+- ДЦ - Тритон Х-100 на сорбентах: 1-Silasorb 600, 2-Silasorb С18, 3- Silasorb С8. ?.втб=390 нм, СЕи3+=3-10"4М, СдЦ=10"5 М,

60 40

RGB (G)

20 Х

1 2 3 4 5 Рис. 22. Влияние природы ПАВ на собственную флуоресценцию ДЦ на силикагеле (Сдц =1.0Т0"2 М), 1-без ПАВ, 2-ДДС, 3-ЦПХ, 4-Тритон-Х100, 5-Бридж-35.

■ тх-юо

= 10"z М.

Полученные на сорбенте комплексы европия с антибиотиком флуоресцируют (1В01Й = 390 нм) при той же длине волны, что и в растворах (Д.фл =615 нм), соответствующей сверхчувствительному переходу 5Б0 —» ¥2. Сравнение некоторых параметров флуоресценции комплекса Еи3+- ДЦ в водных растворах, мицеллярных средах и на поверхности силикагеля в отсутствие и в присутствии мицелл приведено в таблице 14. Процесс сорбции из водных и мицеллярных растворов бинарного комплекса способствует увеличению времени затухания флуоресценции, причем сорбция из мицеллярного раствора ТХ-100 сопровождается более эффективным переносом энергии.

Таблица 14. Характеристика люминесценции Еи3+-ДЦ в водных, мицеллярных

Хелат т, МКС Аг мс"1 Апг мс"1 Ф (%) 1/т, мс'1

растворы

Еи3+-ДЦ 35 0,2 28,0 0,63 28,2

Еи3+-ДЦ-ТХ-100 38 0,2 26,0 0,68 26,2

сорбент

Еи3+-ДЦ 108 0,4 8,9 4,3 9,3

Еи3+ - ДЦ-ТХ-100 182 0,4 5,1 6,6 5,5

Гидрофильность доксициклина и его комплекса с европием препятствуют солюбилизации в мицеллах, поэтому время жизни системы Еи3+ -ДЦ-ТХ-100 и другие параметры флуоресценции меняются не столь значительно при переходе от водных к мицеллярным растворам.

Иммобилизация же хелата на сорбенте из водных или мицеллярных растворов сопровождается увеличением квантового выхода комплекса в 7 и 9.6 раз, скорость излучательного процесса Аг возрастает в 2 раза. Скорость безызлучательного процесса уменьшается в 3.6 и 5 раз. Причина наблюдаемых эффектов заключается в повышении «жесткости» флуоресцирующих центров на сорбенте, которому способствует также солюбилизация в гемимицеллы, образующиеся на поверхности сорбента. Немаловажную роль в увеличении интенсивности флуоресценции играет эффект концентрирования компонентов реакции в результате сорбции аналита из раствора.

Использование пластин ТСХ на основе силикагеля (пластины «Сорбфил АТСХ») для последующего экспрессного сорбционно-люминесцентного определения антибиотиков рассмотрено ниже. Предварительная модификация силикагеля мицеллами неионогенных ПАВ и последующая сорбция ДЦ сопровождаются 5-кратным увеличением его собственной флуоресценции (рис.22). Для измерения интенсивности флуоресценции использовали видеоденситометр и программу Adobe Photoshop CS3 с системой RGB. Установлены линейные зависимости интенсивности цвета зоны от содержания определяемого антибиотика.

Иммобилизация на силикагеле ионов ТЬ3+ и последующая сорбция антибиотика (ЭФ или OK) позволила увеличить их флуоресценцию в 1.5 и 1.8 раз, соответственно, в результате образования на поверхности комплекса с переносом энергии. Сорбция бинарных хелатов тербия на модифицированной мицеллами Бридж-35 поверхности силикагеля дополнительно увеличивает интенсивность флуоресценции в 2.4 и 3.8 раза, соответственно (табл. 15).

Таблица 15. Факторы роста флуоресценции антибиотиков на сорбенте, модифицированном солью тербия и мицеллярным раствором Бридж-35_

Система Энрофлоксацин (1о/Т) Оксолиновая кис-та (1о/1)

Антибиотик 1 1

ТЬ^-антибиотик 1.5 1.8

ТЬ^-антибиотик-Бридж-Зб 2.4 3.8

Показана также возможность использования сорбции хелатов европия с ДЦ на твердой целлюлозной матрице для последующего сорбционно-флуоресцентного определения антибиотика. Рассеяние флуоресцирующего излучения целлюлозной матрицы нивелировали предварительным трехкратным нанесением на бумагу защитного слоя сахарозы (рис.23), а также использованием временной задержки измерения сигнала флуоресценции. Установлено, что интенсивность сенсибилизированной флуоресценции комплекса европия с ДЦ возрастает при предварительной модификации

подложки мицеллярными растворами ПАВ и максимальна для Твин-80 (рис. 24).

целлюлозы,

ионами Ей

сахарозы.

нм

з+

300 350 400 "

Спектр возбуждения модифициро ванной : 1 - с сахарозой, 2 - без

-ей

;api

= 6-1 (Г М, А.фл=615

585 600 615 630 '

Рис. 24. Спектры флуоресценции Еи3+-ДЦ на целлюлозе, модифицированной сахарозой, при обработке мицелл-лярным раствором ПАВ: 1 - Твин-80, 2 - Бридж-35, 3 - ТХ-100, 4 - ДДС, 5 -ЦПХ, 6 - без ПАВ. СЕи3+ = 6.0-Ю-5 М,

Сдц = 6.0-10"'

ХВОзб=395 нм.

М, Q,

= 1.0-10^ м,

В табл. 16 представлены метрологические характеристики сорбционно-люминесцентных методик определения ДЦ с использованием различных сорбентов. Видно, что при использовании сенсибилизированной флуоресценции на целлюлозе предел обнаружения минимален. Использование пластинок «Сорбфил АТСХ» позволяет осуществить экспрессное предварительное тест-определение антибиотика и отличается простотой выполнения.

Таблица 16. Некоторые характеристики сорбционно-люминесцентных методик

Система Сорбент Уравнение градуировочного графика Диапазон содержаний, мкг/мл ПрО, мкг/мл R2

EuJ+ -ДЦ-ТХ-100 Silasorb 600 у = - 0.670х+5.08 15-150 3.0 0.998

Еи3+-ДЦ-Бридж-35 Сорбфил АТСХ у = - 16.0х + 77.5 30-600 4.6 0.993

EuJДЦ-Твин-80 Целлюлозная матрица у = -0.851х+ 6.56 0.1-138 0.08 0.995

Применение закономерностей, увеличивающих эффективность сенсибилизированной флуоресценции, для определения БАВ

Выявлены следующие аспекты прикладного использования влияния второго лиганда, второго иона лантаноида и организованных сред при определении БАВ методом сенсибилизированной флуоресценции:

• применение хелатов лантаноидов как реагентов для определения биологически активных веществ в присутствии второго лиганда в мицеллярных и микроэмульсионных средах;

• увеличение чувствительности флуориметрического определения ионов Еи3+ и некоторых БАВ с помощью системы Ос13+-ТТА-Фен(ТОФО)-Бридж-35.

• модификация у-ЦД и мицеллами ПАВ неподвижной обращенной фазы ВЭЖХ для определения антибиотиков при их совместном присутствии с использованием флуориметрического детектора;

• модификация твердой матрицы на основе силикагеля и целлюлозы мицеллами ПАВ и солями РЗЭ для разработки сорбционно-люминесцентных методик и тест-методов определения некоторых антибиотиков;

Метрологические характеристики флуориметрических методик

представлены в табл. 17.

Таблица 17. Некоторые характеристики определения биологически активных веществ с помощью организованных сред_

БАВ Система Диапазон определяем ых конц, М ПрО,М Я2 а Ь

Флуоресцентные методики

Тетрациклины

Доксициклин Еи^-Фен-Тритон X-100 5.0-10"8-5.0-10"5 2.2-10"8 0,998 0,481 5,41

Еи^-ТТА-Тритон X-100 1.0-10"5-1.0-10"3 4.3-10"6 0.996 1.75 5.10

Е1Г-альбумин-Тритон X-100 1.0-10"8-5.0-10"5 5.1-10"9 0.999 0.821 6.50

Еи3+-Фен-ДДБС 5.0 10""-4.010"5 1.4 10"8 0.996 0.692 6.10

Тетрациклин Еи3+-Фен-ДЦБС 4.0 10"7-2.0-10"5 2.9 10"7 0.997 0.681 5.73

Хлортетрациклин 6.0 10"7-8.010"5 3.2 10"7 0.996 0.451 4.20

Метациклин 4.0 10"7-6.0 Ю-5 1.2 10"7 0.995 0.412 4.02

Окситетрациклин 8.0 10"8-4.0 10'5 5.3 10"8 0.994 0.651 6.01

Хинолоны

Флюмеквин ТЪ3+-Фен-ДДС 1.0-10"8-1.0-10"3 6.2-10"9 0.993 0.391 7.07

микроэмульсии 1.010"8-1.0-10"3 4.0 10"9 0.981 0.452 5.74

Норфлоксацин ТЬ3+-Фен -ДДБС 1.0-10"8-1.0-10"3 3.110"9 0.989 0,351 3,54

Оксолиновая кислота ТЬ3+-Фен-ЦТАБ 1.010"7-1.0-10"4 7.0-10"8 0.979 1,20 9,42

Налидиксовая кислота ТЬ3+-Фен- ддс 5.0-10"8 -8.0-10"5 2.8-10"8 0.979 0,811 4,40

Ломефлоксацин ЦПХ 1.0-10"8-1.0-10"4 8.8-10"9 0.986 0.721 6.95

Офлоксацин дцс 1.0-10"7-5.0-10"4 5.2-10"8 0.978 0,872 7,91

Ципрофлоксацин Еи3+-Фен-ДДБС 4.0-10"7-1.0-10"4 2.3-10"7 0.988 1.23 9.01

Энрофлоксацин 0.989 1.22 8.91

Антикоагулянты

- 5.010"6-5.0'Ю"4 2.0-10"6 0.943 0.251 2.37

ТТА 1.010"7-1.0-10"4 7.2-10"8 0.976 0.282 3.09

Варфарин АБ 1.0-10"6-1.0-10"4 5.110"7 0.983 0.333 4.26

ТЬ3+-Фен 5.0-10"8-5.010"6 2.4-10"8 0.995 0.451 6.36

Еи3+-ТТА 1.0-10"9-1.0-10"7 5.2-Ю"10 0.998 0.733 8.32

Оксикумарин Eu3+-TTA 1.0-10"6- 6.2-10"7 0.996 0.681 6.28

Куматетралил 1.0-10"4 6.010"' 0.998 0.501 5.35

Аминокислоты

Гистидин 1.0-10"8-3.0-10"7 6.0-10"9 0.996 0.403 5.72

Пролин 3.0-10"8-1.0-10"5 1.5-10"8 0.992 0.502 4.53

Антиоксиданты

Рутин Eu3+-TTA 4.0-10"6-1.0-10"4 2.9-10"6 0.989 17.5 68.6

Кверцетин - Бр-35 l.O-lO-6-6.0-10"5 7.5-10"7 0.982 8.77 37.8

Нуклеотиды

АТФ Eu3+-TTA - Бр-35 1.0-10-4-6.0-10"6 6.2 10"7 0.985 1.39 0.371

АТФ Eu"-TTA - Бр-35-Gd3+ 1.0-10"5-1.0-10"7 8.0 10"8 0.988 0.132 2.97

Белки

Альбумин Eu3+-TTA 4.0-60 мкг/мл 1.7 мкг/мл 0.992 3.02 117

Сорбционно-люминесцентные методики

Доксициклин Бридж-35 2-10 1-10"3 0.993 -15.7 78.3

Налидиксовая кислота Tb" Бридж-35 3-10--7-10"3 0.974 -24.9 98.3

Оксолиновая кислота Tb" Бридж-35 9-10-"-1-10"2 0.974 -22.7 73.6

ОФ вэжх

Флюмеквин у-ЦД 0.65-250.0 мкг/мл 0.32 мкг/мл 0.999 3.54 201

Ципрофлоксацин у-ЦД 0.25-75 мкг/мл 0.2 мкг/мл 0.997 28.5 64.5

Ципрофлоксацин в смеси у-ЦД 0.25-75 мкг/мл 0.2 мкг/мл 0.996 26.6 64.5

Флуориметрия. Исследовано более 30 систем, сравнительные метрологические характеристики которых представлены выше в табл.5-8, 12, 13. В табл. 18 приведен еще один пример, показывающий, как использование выявленных факторов увеличения интенсивности сенсибилизированной флуоресценции изменяет в лучшую сторону аналитические и метрологические характеристики определения налидиксовой кислоты. Видно, что разнолигандное

комплексообразование в мицеллярных растворах ПАВ увеличивает интенсивность флуоресценции в 38 раз, а предел обнаружения НК уменьшается более чем на 5 порядков, расширяется диапазон определяемых концентраций и увеличивается интервал кислотности определения. Разработанные нами методики флуориметрического определения антибиотиков, например, флюмеквина, характеризуются пределами обнаружения ниже уровней предельно допустимых концентраций, установленных для некоторых пищевых продуктов (табл. 19) и использованы для их определения БАВ в курином мясе (табл. 20).

Таблица 18. Некоторые метрологические характеристики определения НК по собственной и сенсибилизированной флуоресценции.

Система 1Ло Диапазон определяемых содержаний, М рН Предел обнаружения, М Я2

Налидиксовая кислота (НК) 1.0 4.3-10"3-4,3-10"2 6.0-6.5 2.5 10"3 0.961

нк-ть3+ 10 1.0-Ю4-5,0-10'3 6.0-7.0 04,0-10"5 0,980

НК-ТЬ3+-Фен 20 4.3'10"б-1,0'10"4 6.0-7.0 8,0-10"8 0,996

НК-ТЬ3+-Фен-ДДС 38 4.0-10"8 - 7.9-10"5 6.5-8.0 1,0-10"' 0.998

Таблица 19. ПДК некоторых БАВ и достигнутые нами ПрО

Биологически-активное вещество ПДК, мкг/кг ПрО, мкг/кг

Флюмеквин 50 (в мясе кур) 1.2

Варфарин 1.0 (в продутах питания) 0.2

Тетрациклин 10 (в мясе) 1.0

Таблица 20. Результаты определения флюмеквина в курином мясе (п = 3, Р=0.95,1табл=4.30)__

Образец Найдено, мкг/мл вг Рэкс ^ЭКСП

Флуориметрич. метод ВЭЖХ Флуориметрич. метод ВЭЖХ

1 5.4±0.1 5.6±0.2 0.05 0.07 1.5 1.0

2 8.6+0.2 8.7+0.2 0.07 0.06 1.2 0.5

3 6.53±0.09 6.65±0.07 0.04 0.03 1.3 0.8

Использование микроэмульсии вместо мицелл анионного ПАВ - ДЦС, при флуориметрическом определении флюмеквина позволило уменьшить погрешность определения антибиотика и использовать более гидрофобный второй лиганд(табл. 21).

Таблица 21. Определение флюмеквина в курином мясе (п = 3, Р=0.95)

Среда Введено Х + ДА'

мг/кг мг/кг

Додецил- 65 64.1±0.9 1.4

сульфат натрия, 39 38.3±0.9 1.8

0.01 М

9 8.5±0.3 5.6

65 64.8±0.4 0.3

Микро- 39 38.6+0.9 1.2

эмульсия 9 8.6+0.6 4.4

Разработанные флуориметрические методики нашли применение в изучении фармакокинетики новых лекарственных форм на базе доксициклина, разрабатываемых в ЗАО «НИТА-ФАРМ», Саратов.

Лекарственный препарат добавляли в питьевую воду кур и через определенное время отбирали пробы крови птицы, в плазме которой определяли содержание антибиотика. Результаты определения представлены в табл. 22.

Таблица 22. Результаты определения доксициклина в плазме крови кур (п=3, р=0.95).__

Содержание доксициклина в качестве пищевой добавки

40мг/мл 20мг/мл 5мг/мл

Время, мин Найденное содержание доксициклина в плазме крови, х + Дх, мкг/мл

30 0.07+0.01 0.06+0.01 0.16+0.01

60 3.77+0.47 0.23+0.03 0.60+0.02

180 1.13+0.06 1.34+0.08 0.41+0.05

240 0.47+0.02 0.39+0.02 0.34+0.02

360 0.24+0.01 0.32+0.01 0.20+0.05

480 0.19+0.01 0.24+0.01 0.12+0.01

При отсутствии у определяемого биологически активного аналита флуоресцентных свойств для флуориметрического определения использовали эффект тушения сенсибилизированной ко-флуоресценции, например АТФ в фруктовых соках (табл.23).

Таблица 23. Определение АТФ во фруктовых соках с помощью системы Еи3+-0(13+-ТТА-Бридж-35 (п=3; Р=0.95).__

Сок Найдено, мг/л 8г

"Л" яблочный 0.28±0.07 0.02

"Вико" яблочный 0.40±0.08 0.01

"Фруктовый сад" яблочный 0.38±0.06 0.02

"Любимый сад" яблочно-виноградный 0.42±0.04 0.02

Ко-флуоресценция использована также для определения европия в Балтийской кильке, содержание составило (1.60 ± 0.02)-10"2мкг/кг, эг не превышает 0.01.

Высокоэффективная жидкостная хроматография. В присутствии в подвижной фазе мицелл неионогенных ПАВ и циклодекстринов разработаны способы прямого определения антибиотиков хинолонового и тетрациклинового рядов в лекарственных препаратах. Модификация подвижной фазы у-ЦД приводит к образованию комплексов включения антибиотиков с у-ЦД и уменьшает предел обнаружения в 4 и 9 раз, соответственно (табл. 24, 25).

Таблица 24. Некоторые характеристики определения ФЛ и ЦФ при использовании ПФ вода-ацетонитрил и вода-ацетонитрил-у-ЦД__

Фторхинолон Модификатор Диапазон определяемых концентраций, мкг/мл ПрО, мкг/мл Уравнение градуировочного графика Я2

Флюмеквин - 2.5 - 650.0 1.4 у = 3.90х + 61.4 0.997

у-ВД 0.65-250.0 0.32 у = 3.54х + 201 0.999

Ципрофлоксацин - 2.5-100 1.7 у = 17.6х + 80,6 0.998

у-ЦЦ 0.25-75 0.2 у = 28.5х + 64,5 0.997

Ципрофлоксацин на фоне антибиотиков - 2.5-100 1.4 у= 15.4х + 220 0.996

у-ЦД 0.25-75 0.2 у = 26.6х + 64.5 0.997

Таблица 25. Результаты определения ЦФ в глазных каплях (п = 3, Р=0.95)

Препарат Найдено, мг/мл Б,

«Ципролет», Индия 2.62+0.07 0.03

«Ципрофлоксацин», Россия 2.5±0.2 0.06

«Ципромед», Индия 2.2910.05 0.02

Время разделения смеси антибиотиков уменьшилось в 3-4 раза. В отсутствие организованных сред время удерживания составляло 12-15 мин, в присутствии у-Ц Д оно сократилось до 2-4 минут.

Твердофазная флуоресценция. Такой подход позволил предложить тест-метод определения антибиотиков, основанный на измерении собственной или сенсибилизированной флуоресценции в результате их сорбции в тонком слое силикагеля, модифицированного мицеллами неионогенных ПАВ или смесью мицеллярных растворов ПАВ и соли лантаноида. Тест-методы определения доксициклина, энрофлоксацина и оксолиновой кислоты могут быть использованы для экспресс-анализа лекарственных препаратов, преимущественно для определения содержания активно действующего вещества (табл. 26). Другие примеры сорбционно-флуориметрических методик приведены в табл. 16.

Таблица 26. Некоторые характеристики определения антибиотиков на модифицированном силикагеле пластины «Сорбфил АТСХ».

Определяемый компонент Модификация силикагеля Диапазон определяемых концентраций,М Я2 Уравнение градуировочного графика

Энрофлоксацин ТЬ3+-Бридж-35 3-10"4-7-10"3 0,974 у = -24,9х + 98,3

Доксициклин Бридж-35 2-10"5-1-10"3 0,993 у = -15,7х + 78,3

Оксолиновая кислота ТЬ3+-Бридж-35 9-10"4-1-10"2 0,974 у = -22,7х + 73,6

Определение катионных ПАВ. Влияние катионных ПАВ на протолитические свойства ПКФ и его комплексообразование с Ое(1У) использовано для разработки фотометрической методики определения пенозолина (табл 27.), представляющего смесь производных 2-алкил-2-имидазолинов с длиной цепи С12-С20, поскольку с помощью этого хелата возможно определение КПАВ имидазолинового ряда в 4.0 М Н2504, а КПАВ пиридиниевого ряда в 8.0 М Н2304 в широком диапазоне определяемых концентраций.

Таблица 21. Результаты определения пеназолина в ваннах травления

Образец Содержание пеназолина, мг/л *

Ванна до травления

1 28.6±1.0 0.01

2 26.5±1.1 0.01

3 24.3±1.5 0.02

4 30.7±1.5 0.01

Ванна после травления

1 10.5±0.8 0.03

2 15.3±0.8 0.02

3 8.5±0.18 0.04

4 12.4±0.5 0.03

ВЫВОДЫ

1. Предложена совокупность подходов к повышению чувствительности определения и снижения предела обнаружения биологически активных веществ методом сенсибилизированной флуоресценции в хелатах с лантаноидами в водной среде и мицеллярных растворах поверхностно-активных веществ и дано теоретическое обоснование основных эффектов и закономерностей в системах (Ьп)-БАВ, Ln-БАВ- лиганд2, Ln-БАВ-лиганД2-Ьп2, основанное на связи между интенсивностью аналитического сигнала и скоростью безызлучательной потери энергии возбуждения и изменением числа молекул воды, координированных лантаноидом.

2. Экспериментально установлено, что основным источником формирования аналитического сигнала флуоресценции европия в его хелатах с биологически-активными лигандами во всех указанных случаях является внутримолекулярный перенос энергии электронного возбуждения с лиганда на европий или тербий (эффект антенны). Показано, что свидетельствами переноса являются:

уменьшение интенсивности флуоресценции донора энергии, сопровождаемое соответствующим появлением и увеличением интенсивности флуоресценции акцептора при возрастании его концентрации, а также линейная зависимость между этими величинами;

независимость времени затухания флуоресценции хелата от концентрации акцептора.

Перенос энергии в исследованных хелатах эффективен когда Ед > ЕА примерно на 500-2500 см"1, что соответствует литературным данным. Указанный факт может лежать в основе увеличения селективности определения БАВ.

3. Показано, что дополнительный рост интенсивности флуоресценции европия и тербия с БАВ определяют три фактора:

- использование второго лиганда;

- использование второго иона РЗЭ;

- проведение реакции в мицеллярном растворе или использование глобулярных биополимеров, формирующих более «жесткую» структуру флуоресцирующего центра.

Их совместное использование позволяет получить максимальную величину аналитического сигнала. При высокой гидрофобности второго лиганда и всего разнолигандного комплекса предложено использовать микроэмульсии. Аналитическое значение при действии второго лиганда имеет и тушение флуоресценции хелата Ln-БАВ.

4. Экспериментально показано, что результатом влияния второго лиганда и солюбилизации в мицеллах ПАВ является уменьшение числа остаточных молекул воды, координированных металлом в бинарном хелате Ln-БАВ, и скорости безызлучательных переходов в бинарных и разнолигандных хелатах. Выявлено влияние на указанные характеристики липофильности, основности лиганда и кислотности среды; определены и

сопоставлены времена жизни возбужденных состояний, скорости безызлучательных и излучательных процессов в водной и мицеллярной средах в присутствии и в отсутствие второго лиганда.

5. Установлено, что при использовании вторых лигандов, содержащих хромофорные группы, увеличение интенсивности флуоресценции может быть связано не только с замещением остаточных молекул воды, но и дополнительным лиганд-лигандным или лиганд-металльным внутримолекулярным переносом энергии возбуждения (усилением эффекта антенны). Показано, что в спектрах флуоресценции отношение интенсивностей переходов СЧП к МДП в растворах бинарных комплексов свидетельствует о низкой симметрии координационного окружения иона лантаноида и ее уменьшении при переходе к мицеллярным средам. Результатом одновременного действия второго иона лантаноида и второго лиганда является образование гидрофобных гетеронаночастиц, в которых реализуется межмолекулярный и внутримолекулярный перенос энергии возбуждения. Интенсивность флуоресценции зависит от размера наночастиц.

6. Выявлен дифференцирующий эффект природы организованных сред на интенсивность собственной и сенсибилизированной флуоресценции бинарных и разнолигандных хелатов европия и тербия с различными БАВ, обусловленный их солюбилизацией мицеллами ПАВ; показано, что усиление флуоресценции связано с солюбилизацией хелатов в мицеллы, а тушение - с их разрушением за счет конкурентного взаимодействия ионов мицелл с ионом металла или лигандом или отсутствием солюбилизации в мицелле.

7. Изучено влияние природы, концентрации ПАВ и циклодекстринов на хроматографическое поведение двух групп антибиотиков в методе ВЭЖХ с флуориметрическим детектором. Установлены оптимальные условия хроматографического разделения антибиотиков фторхинолонового ряда при их совместном присутствии. Предложены подвижные фазы, модифицированные молекулами рецепторами на основе циклодекстринов, позволяющие почти на порядок понизить предел обнаружения некоторых антибиотиков методом ОФ ВЭЖХ;

8. Установлены закономерности изменения интенсивности собственной и сенсибилизированной флуоресценции БАВ и их хелатов с лантаноидами, сорбированными на силикагелях Silasorb 600, Silosorb С18 и Silosorb С8 и целлюлозе: иммобилизация хелата лантаноида с антибиотиком на сорбенте из водных и мицеллярных растворов сопровождается увеличением квантового выхода и скорости излучательного процесса Аг в 13.7, 12.8, 3.5 и 1.5 раза, соответственно; вклад безызлучательных процессов в потери энергии возбуждения при этом уменьшается в 3.4 и 5 раза. Показано, что скорость излучательного переноса энергии в растворах практически не меняется, а на силикагеле возрастает в 2 раза, в то время, как скорость безызлучательного переноса уменьшается, причем в присутствии ПАВ в большей степени. С

использованием эмпирической формулы Хоррокса показано, что удаление молекул воды, являющихся основным тушителем, из гидратной оболочки лантаноида повышает эффективность переноса энергии возбуждения в растворе и на сорбенте.

9. Определены основные направления прикладного использования предлагаемых подходов к повышению чувствительности определения и снижению предела обнаружения БАВ для флуориметрического, сорбционно-флуориметрического, а также ОФ ВЭЖХ методов определения антибиотиков тетрациклинового, хинолонового и фторхинолонового рядов, антикоагулянтов кумаринового ряда, аминокислот, нуклеотидов, антиоксидантов, ПАВ и ионов Еи3+. Предложено около 30 методик их определения в различных биологических и фармацевтических объектах.

Список основных публикаций по теме диссертационной работы Статьи в журналах и патенты

1. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Молчанова Ю.В. Синергетические эффекты в системе европий - теноилтрифторацетон-1.10-фенантролин в мицеллах блоксополимеров неионных ПАВ и их аналитическое применение // Журн. аналит. химии. 2001. Т.56. №10. С.1052-1056.

2. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Былинкин Ю.Г. Сенсибилизированная флуоресценция теноилтрифторацетонатного комплекса европия с некоторыми органическими основаниями в мицеллярных растворах неионных ПАВ // Изв. вузов. Химия и хим. технол. 2002. Т.45. №.2.С.96-100.

3. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Былинкин Ю.Г. Определение АТФ по тушению флуоресценции дикетонатного хелата европия (Ш) в мицеллах Бридж-35 // Журн. аналит. химии. 2004. Т.59. № 5. С.495 - 499.

4. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Былинкин Ю.Г., Жемеричкин Д.А. Флуориметрическое определение тетрациклинов с помощью хелата европия с 1,10-фенантролином в мицеллярных растворах анионных ПАВ // Журн. аналит. химии. 2005. Т.60. №1. С.30-34.

5. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В., Конюхова Ю.Г. Комплексы с переносом энергии в возбужденном состоянии в организованных средах для флуориметрического определения биологически активных веществ // Биомед. технол. и радиоэлектроника. 2006. № 12. С.4-9.

6. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В., Жемеричкин Д.А. Флуориметрический метод определения норфлоксацина, основанный на явлении переноса энергии // Изв. вузов. Химия и хим. технол. 2006. Т.49. №7. С.27-30.

7. Штыков С.Н., Карцев В.Н., Сумина Е.Г., Смирнова Т.Д. и др. Применение организованных сред и принципов супрамолекулярной химии в химическом анализе // Вестник МГОУ. Серия: «Естественные науки», вып. «Химия и хим. экология» 2006. № 1. С. 16 - 24.

8. Shtykov S.N., Smirnova T.D., Kalashnikova N.V., Bylinkin Y.G. and Zhemerichkin D. A. Fluorescence in the system Eu(III) - Oxytetracycline - co-ligand - sodium dodecylbenzene sulphonate micelles and its analytical application// Proc. SPIE. 2006. V. 6165. P.61650Q1-61650Q6.

9. Штыков C.H., Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В., Былинкин Ю.Г., Жемеричкин Д.А.. Определение ципрофлоксацина и энрофлоксацина методом сенсибилизированной флуоресценции // Журн. аналит. химии. 2007. Т.62. №2. С.153-157.

10. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В., Жемеричкин Д.А. Флуориметрическое определение доксициклина с помощью хелата европия и 1.10-фенантролина в мицеллярных растворах тритона Х-100 // Изв. вузов. Химия и хим. технол. 2009. Т.52. №1. С.39-42.

11. Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В., Штыков С.Н., Кочубей В.И., Жемеричкин Д.А. Определение варфарина методом сенсибилизированной флуоресценции с применением организованных сред // Журн. аналит. химии. 2009. Т.64. №11. С.1114-1119.

12. Смирнова Т.Д., Штыков С.Н., Паращенко И. Флуориметрическое определение европия, основанное на переносе энергии возбуждения в организованных средах // Цветные металлы. 2009. №11. С.55-58.

13. Смирнова Т.Д., Штыков С.Н., Неврюева Н.В. Обращенно-фазовая ВЭЖХ флюмеквина и ципрофлоксацина в организованных средах // Сорбционные и хроматогр. процессы. 2010. Т.10. Вып.1. С.142-149.

14. Смирнова Т.Д., Штыков С.Н., Неврюева Н.В., Жемеричкин Д.А., Паращенко И.И. Флуориметрическое определение флюмеквина с помощью сенсибилизированной флуоресценции тербия в организованных средах // Химико-фармацевтический журнал. 2010. Т.44. №11. С. 13-16

15. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В., Богомолова И.В. Комплексы с переносом энергии в организованных средах для определения флюмеквина в биологических объектах // Изв. вузов. Химия и хим. технол. 2010. Т.53. №11. С.24-28.

16. Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В. Флуориметрическое определение оксолиновой и налидиксовой кислот с использованием мицеллярных растворов ПАВ // Заводск. лаб. Диагностика матер. 2010. №12. С. 17-20.

17. Смирнова Т.Д., Паращенко И.Ю.. Флуориметрическое определение рутина, основанное на комплексообразовании с европием (Ш) в мицеллярных растворах ПАВ // Изв. Саратовск. ун-та. Новая серия. Химия. Биология. Экология. 2010. Т.10. Вып. 2. С. 19-23.

18. Смирнова Т.Д., Штыков С.Н., Кочубей В.И., Хрячкова Е.И. Перенос энергии возбуждения в хелате европия с доксициклином в присутствии второго лиганда в мицеллярных растворах неионогенных ПАВ // Оптика и спектроскопия. 2011. Т. 110. №1. С.65-71.

19. Смирнова Т.Д., Удалова А.Ю., Птицкая С.А. Определение некоторых антибиотиков тетрациклинового и хинолонового ряда методом ТСХ // Изв.

Саратовск. ун-та. Новая серия. Химия. Биология. Экология. 2011. Т.П. Вып. 1. С 38-42.

20. Чернова Р.К., Смирнова Т.Д., Круть В.В., Коновалова И.В. Спектрофотометрическое определение катионных поверхностно-активных веществ в сильнокислых средах // Журн. аналит. хим. 1997. Т.52. №3. С. 324327.

21. Чернова Р.К., Смирнова Т.Д., Штыков С.Н. Синтез и изучение физико-химических свойств комплекса германия с пирокатехиновым фиолетовым и хлоридом цетилпиридиния // Журн. неорг. химии. 1983. Т.28. №11. С.2814-2817.

22. Смирнова Т.Д., Чернова Р.К., Круть В.В. Способ количественного определения имидазолинов. А.С. №1348720 СССР от 10.03.86.

23. Пат. RU № 2427840 МПК G 01 N 33/52 G 01 21/64 А 61К 31/4738 Микроэмульсия для количественного определения флюмеквина в биологических объектах Смирнова Т.Д., Богомолова И.В., Штыков С.Н. ГОУ ВПО Саратовский государственный университет. Заявка № 20101102100/15 Заявл. 25.01.2010 Опубл. 27.08.2011

24. Пат. RU № 2416792 С1 МПК G 01 N 33/15 Способ количественного определения ципрофлоксацина в лекарственных препаратах / Смирнова Т.Д., Штыков С.Н., Неврюева Н.В. ГОУ ВПО Саратовский государственный университет. Заявка № 2009142476/15 Заявл. 19.11.2009 Опубл. 20.04.2011 Бюл. №11

Прочие издания

25. Smirnova T.D., Nevrjueva N.V., Shtykov S.N. Effect of micelles and second ligands on Eu3+ and Tb3+ sensitized fluorescence determination of tetracycline and fluoroquinolone antibiotics based on energy transfer and antenna phenomenon // Proc. «Argus'2007-Nanoanalytics», Saratov, 2007. P.122-124.

26. Shtykov S.N., Pankratov A.N., Malova M.I., Smirnova T.D., Parshina E.V. Spectroscopic and theoretical study of 1,3-diketones and azocompounds prototropic tautomerism in micellar and organo-aqueous media // Proc. 8-th Russian-Japan Joint Symp. on Anal. Chem. RJSAC'96. Aug.26-31, 1996. Moscow and Saratov. Russia. P.131-132.

27. Неврюева H.B., Смирнова Т.Д., Штыков С.Н. Флуориметрическое определение биологически-активных веществ с помощью хелатов с переносом энергии в организованных средах // Аналит. методы и приборы для хим. анализа: Тез. докл. научно-прикл. семинара. 29-31 авг. 2007 г. С-Пб: Изд-во Политехи, ун-та. 2007. С.37-42.

28. Неврюева Н.В., Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Криволапова Л.Ю., Ханина О.М. Флуориметрическое определение некоторых хинолонов с помощью хелатов тербия в организованных средах // «Соврем, проблемы теорет. и эксперим. химии»: Межвуз. сб. науч. трудов VI Всерос. конф. молодых ученых с международ, участием - Саратов: изд-во «Научная книга». 2007. С.213-217.

29. Неврюева Н.В., Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Астахова Н.А. Сенсибилизированная флуоресценция хелатов лантанидов с пролином в

мицеллярных растворах ПАВ. // «Соврем, проблемы теорет. и эксперим. химии»: Межвуз. сб. науч. трудов VI Всерос. конф. молодых ученых с международ, участием - Саратов: изд-во «Научная книга». 2007. С.217-219.

30. Неврюева Н.В., Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Фаррахова Л.В.. Определение ломефлоксацина и офлоксацина флуориметрическим методом в присутствии мицелл поверхностно-активных веществ. // «Соврем, проблемы теорет. и эксперим. химии»: Межвуз. сб. науч. трудов VI Всерос. конф. молодых ученых с международ, участием. - Саратов: изд-во «Научная книга». 2007. С.219-222.

31. Калашникова Н.В., Богомолова И.В., Штыков С.Н., Смирнова Т.Д. Флуоресцентное определение флюмеквина в курином мясе // «Соврем, пробл. теорет. и эксперим. химии»: Межвуз. сб. науч. трудов V Всерос. конф. молодых ученых - Саратов: изд-во «Научная книга». 2005. С.161-164.

32. Былинкин Ю.Г., Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Жемеричкин Д.А. Сенсибилизированная флуоресценция европия с фторхинолонами в мицеллах ПАВ. // Органич. реагенты в организов. средах: Межвуз. сб. науч. статей. -Саратов: Изд-во «Научная книга». 2003.С.174-178.

33. Смирнова Т.Д., Былинкин Ю.Г., Штыков С.Н. Люминесцентный метод определения аденозинтрифосфорной кислоты с помощью комплекса европия с теноилтрифторацетоном // Проблемы аналит. химии: Сб. науч. статей. -Саратов: Изд-во «Слово». 2002. С.224-225.

34. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Русанова Т.Ю. Спектроскопическое исследование сенсибилизированной люминесценции в системе европий-теноилтрифторацетон-фенантролин-бридж-35 и её применение в анализе И Проблемы оптической физики: Матер. 4 международ, науч. школы по оптике, лазерной физике и биофизике - Саратов: Изд-во Саратовск. ун-та. 2001. С.111-112.

35. Shtykov S.N., Smirnova T.D., Rusanova T.Yu. Chemical sensors based on Langmuir-Blodgett films. Protolytic properties of methyl orange film // Proc. 8-th Russian-Japan Joint Symp. on Anal. Chem. RJSAC'96. Aug.26-31, 1996. Moscow and Saratov. Russia. P.129-130.

36. Смирнова Т.Д., Коновалова И.В. Определение 2 -алкил-2-имидазолинов в сильнокислых средах // Применение ПАВ в анализе природных и промышленных объектов: Сб. науч. статей. Саратов: изд-во Саратовск. ун-та. 1986. 4.2. С.26-32.

37. Чернова Р.К., Штыков С.Н., Сухова Л.К., Кулапина Е.Г., Коробова Т.Д. (Смирнова Т.Д.), Амелин В.Г., Белолипцева Г.М., Сумина Е.Г. Свойства фотометрических реагентов трифенилметанового ряда, модифицированного КПАВ // Органич. реагенты в анализе: Сб. науч. статей - Саратов: изд-во Саратовск. ун-та. 1983. Вып. 4 (6). С.З - 20.

38. Чернова Р.К., Харламова Л.Н., Коробова Т.Д. (Смирнова Т.Д.) Эффект многоцентрового взаимодействия реагентов и контрастность цветных реакций в присутствии КПАВ // Органич. реагенты в анализе: Сб. науч. статей - Саратов: изд-во Саратовск. ун-та. 1983. Вып. 4 (6). С.20-41.

39. Птицкая С.А., Смирнова Т.Д. Флуориметрическое определение альбумина // Соврем, проблемы теорет. и эксперим. химии: Межвуз. сб. науч. трудов VII Всерос. конф. молодых ученых с международ, участием.- Саратов: ООО Изд-во «КУБиК» 2010.. С. 167-169.

40. Паращенко И.И., Смирнова Т.Д. Флуориметрическое определение кверцетина и рутина. // Химия и химическая технология в XXI веке: Сборник науч. трудов XI Всерос. научно-практич. конф. студентов и аспирантов. -Томск. 2010. С. 348-349.

41. Штыков С.Н., Климов Б.Н., Смирнова Т.Д., Глуховской Е.Г., Сумина Е.Г., Истрашкина И.В. Получение и исследование свойств пленки Ленгмюра-Блоджетт на основе метилового оранжевого и полиамида кислоты // Журн. физ. хим. 1997. Т.71. №7. С.1292-1295.

42. Штыков С.Н., Климов Б.Н., Смирнова Т.Д., Науменко Г.Ю. Получение и исследование пленки Ленгмюра-Блоджетт на основе соли полиамидокислоты, содержащей краситель родаминоваого ряда // Журн. физ. хим. 1999. Т.73. №9. С.1689-1691.

43. Штыков С.Н., Русанова Т.Ю., Смирнова Т.Д., Горин Д.А. Чувствительный элемент оптического сенсора на основе бензопурпурина 4Б для определения кислотности травильных растворов // Журн. аналит. химии. 2004. Т.59. №2. С.198-201.

44. Чернова Р.К., Смирнова Т.Д. Флотационные свойства хелатов некоторых металлов с пирокатехиновым фиолетовым, модифицированным катионами ПАВ // Актуальные проблемы электрохим. технол.: Сб. статей молодых ученых - Саратов: изд-во СГТУ. 2000. С.273-275.

Автор выражает глубокую благодарность и признательность своему научному консультанту профессору Штыкову Сергею Николаевичу и заведующей кафедрой аналитической химии и химической экологии СГУ профессору Черновой Римме Кузьминичне за всестороннюю поддержку, ценные советы, помощь и консультации на разных этапах выполнения работы.

Автор благодарит профессора кафедры оптики и биофотоники СГУ Кочубея В.И. за предоставленные возможности постановки экспериментальных работ на спектрофлуориметре ££-55 фирмы «Регкт-Е1тег», ценные советы и обсуждение результатов.

Глубокая признательность старшему научному сотруднику ЗАО «НИТА-ФАРМ» (г.Саратов) Жемеричкину Д.А. за предоставление ряда биологически активных веществ, д.х.н., профессору Панкратову А.Н. за совместно проведенные оценку QSAR-cвoйcmв по атомно-связево-аддитивным схемам, расчеты энергетики и электронной структуры молекул хинолонов и фторхинолонов методом теории функционала плотности и интерпретацию результатов теоретических исследований.

Подписано в печать 27.02.2012 Формат 60х 48 1/16. Бумага офсетная. Гарнитура Times. Печать офсетная. Усл. печ. л. 3.0. Тираж 120 экз. Заказ № 52-Т

Типография Саратовского государственного университета имени Н.Г. Чернышевского 410012 г. С аратов, ул. Большая Казачья, д.. 112 а Тел.: (8452)27-33-85

Введение.

Список сокращений.

Глава 1. СЕНСИБИЛИЗИРОВАННАЯ ФЛУОРЕСЦЕНЦИЯ В АНАЛИЗЕ ОРГАНИЧЕСКИХ И НЕОРГАНИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ.

1.1 Перенос энергии и люминесцентные переходы.

1.2 Флуоресцентные свойства редкоземельных элементов.

1.3 Межмолекулярный перенос энергии в системах ион лантаноида - органический лиганд.

1.4 Перенос энергии в комплексных соединениях лантаноидов.

1.5 Перенос энергии от комплексов лантаноидов к красителям.

1.6 Влияние посторонних ионов лантаноидов на эффективность переноса энергии.

1.7 Сорбционные процессы во флуориметрическом анализе.

1.8 Влияние организованных сред на эффективность переноса энергии.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 1.

Глава 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2.1 Реактивы.

2.2 Приготовление микроэмульсий.

2.3 Определение квантового выхода флуоресценции.

2.4 Аппаратура и техника измерений.

Глава 3. ФАКТОРЫ, ОПРЕДЕЛЯЮЩИЕ ИНТЕНСИВНОСТЬ СЕНСИБИЛИЗИРОВАННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ ЕВРОПИЯ И ТЕРБИЯ В ХЕЛАТАХ С БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ.

3.1 Флуоресцентные свойства биологически активных веществ в водных и организованных средах.

3.2 Сенсибилизированная флуоресценция лантаноидов в комплексах с биологически активными лигандами.

3.2.1 Исследование кинетики затухания флуоресценции комплекса Ей ДЦ.

3.2.2 Факторы, определяющие интенсивность сенсибилизированной флуоресценции.

3.3 Влияние второго лиганда на сенсибилизированную флуоресценцию лантаноидов.

3.4 Тушение флуоресценции хелата Eu - ТТА некоторыми биологически активными веществами.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 3.

Глава 4. ВЛИЯНИЕ ОРГАНИЗОВАННЫХ СРЕД НА ФЛУОРЕСЦЕНЦИЮ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ И ИХ КОМПЛЕКСОВ С ЛАНТАНОИДАМИ.

4.1 Влияние организованных сред на флуоресценцию биологически активных веществ.

4.2 Влияние мицеллярных растворов ПАВ на сенсибилизированную флуоресценцию лантаноидов.

4.3 Влияние микроэмульсий на интенсивность сенсибилизированной флуоресценции хелатов РЗЭ.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 4.

Глава 5. ВЛИЯНИЕ ДРУГИХ РЕДКОЗЕМЕЛЬНЫХ

ЭЛЕМЕНТОВ НА СЕНСИБИЛИЗИРОВАННУЮ ФЛУОРЕСЦЕНЦИЮ ЕВРОПИЯ.

5.1 Влияние природы второго иона лантаноида на интенсивность сенсибилизированной флуоресценции.

5.2 Влияние природы второго лиганда на интенсивность сенсибилизированной флуоресценции.

5.3 Влияние мицеллярных растворов ПАВ.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 5.

Глава 6. ДРУГИЕ ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ В АНАЛИЗЕ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ СВОЙСТВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ И ИХ ХЕЛАТОВ В ОРГАНИЗОВАННЫХ СРЕДАХ.

6.1 Определение антибиотиков методом ОФ ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием.

6.1.1 Условия разделения антибиотиков.

6.1.2 Влияние ПАВ.

6.1.3 Влияние циклодекстринов.

6.1.4 Определение ципрофлоксацина в смеси с антибиотиками.

6.2 Сорбционно-люминесцентное определение некоторых антибиотиков.

6.2.1 Модификация сорбента.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 6.

ГЛАВА 7. ДРУГИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КОМПЛЕКСООБРАЗОВАНИЯ С РЕАГЕНТАМИ, МОДИФИЦИРОВАННЫМИ КАТИОНАМИ ПАВ.

7.1 Особенности комплексообразования гемания (IV) с ПКФ и хлоридом цетилпиридиния.

7.2 Определение 2-алкил-2-имидазолинов.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 7.

ГЛАВА 8. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТЕЙ, УВЕЛИЧИВАЮЩИХ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПЕРЕНОСА ЭНЕРГИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ И ИОНОВ РЗЭ.

8.1 Применение в анализе сенсибилизированной флуоресценции разнолигандных хелатов лантаноидов в различного типа организованных средах.

8.1.1 Определение антибиотиков в биологических объектах.

8.1.2 Анализ лекарственных препаратов.

8.1.3 Анализ объектов окружающей среды.

8.1.4 Определение ионов европия флуориметрическим методом.

8.1.5 Анализ пищевых продуктов.

8.2 Определение фторхинолонов методом ОФ ВЭЖХ.

8.3 Сорбционно-флуориметрические методы определения антибиотиков.

8.4 Фотометрическое определение пеназолинов в сильнокислых средах.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 8.

ВЫВОДЫ.

Актуальность работы. Конец 20-го, начало 21-го века характеризуются активным развитием в мире различных биоаналитических методов, цель которых - совершенствование известных и разработка новых методик определения лекарственных средств, биомолекул, в том числе природных биополимерных молекул в биологических объектах. Признаками активизации работ в этом направлении являются появление большого числа новых журналов и научных статей, проведение международных конференций, разработка подходов к оценке качества результатов анализа в биообъектах и валидации создаваемых методик анализа. Анализ литературы показывает, что основными методами в биоанализе являются хроматография, капиллярный электрофорез в их гибридных вариантах с масс-селективным детектором и люминесцентный анализ. В последнем случае используется собственная люминесценция аналитов, люминесценция их хелатов с однородными или разными лигандами, флуороиммунные методы, не теряет своего значения и фотометрический анализ.

В последние годы при определении биологически активных веществ (БАВ) все чаще используют простой и высокочувствительный флуориметрический метод, основанный на измерении сенсибилизированной флуоресценции хелатов лантаноидов. Сенсибилизированная флуоресценция является результатом непрямого возбуждения иона металла: поглощения света органическими лигандами и передачи энергии электронного возбуждения с триплетного уровня лиганда на резонансный уровень лантаноида с последующей характерной для него эмиссией (эффект «антенны»). Эмиссионные свойства ионов лантаноидов можно регулировать активным заселением электронами их возбужденного состо также минимизацией безызлучательной дезактивации, связанной с передачей энергии электронного возбуждения лантаноида на колебательные уровни связи -ОН молекул воды. Увеличение числа лигандов позволяет решать обе задачи: вытеснять воду и увеличивать эффект антенны.

Эффективность сенсибилизирующего действия органических лигандов должна определяться высокими значениями молярного коэффициента поглощения внутрилигандных л;—»л* переходов, эффективностью синглет-триплетной интеркомбинационной конверсии, близостью энергии возбуждения триплетных уровней лиганда к нижнему возбужденному состоянию иона РЗЭ и другими факторами, увеличивающими квантовый выход флуоресценции. Дополнительный эффект «антенны» может реализоваться при образовании гетероядерных гидрофобных разнолигандных комплексов двух различных лантаноидов.

Еще одним фактором, повышающим интенсивность флуоресценции, является солюбилизация хелатов в наноразмерном объеме организованной системы - мицеллах ПАВ, микроэмульсиях, цикл о декстринах.

Практически все работы по определению аналитов-лигандов методом сенсибилизированной флуоресценции выполнены за рубежом, в том числе в Одесской школе аналитиков (Украина), однако большинство из них имеет прикладной характер. Недостаточная распространенность люминесцентного анализа в России, отсутствие пригодной для массового применения аппаратуры, препятствуют широким исследованиям и применению данного высокоэффективного метода, имеющего диапазон от детектирования отдельных молекул до присутствия люминофора в качестве основного вещества препарата, для определения БАВ. В связи с этим требуется обобщение и систематизация накопленных фактов, определяющих эффекты переноса энергии возбуждения и сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов, а также формулировка общих подходов к выбору наиболее эффективных способов определения БАВ в различных объектах.

Цель работы - разработка подходов к повышению чувствительности флуориметрического определения биологически активных веществ за счет переноса энергии в хелатах некоторых лантаноидов с БАВ, солюбилизации хелатов в организованных средах и теоретическое обоснование выявленных эффектов.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

• изучить процесс переноса энергии в хелатах лантаноидов с биологически активными лигандами в водных и организованных средах;

• выявить факторы, способствующие понижению предела обнаружения биологически активных веществ, и принципы взаимного подбора лантаноидов и БАВ для достижения максимальной интенсивности аналитического сигнала;

• обосновать принципы, определяющие выбор второго лиганда и второго лантаноида, способствующие достижению максимальной чувствительности определения;

• установить особенности влияния мицеллярных растворов ПАВ, микроэмульсий, некоторых биополимеров и молекул рецепторов на интенсивность сенсибилизированной флуоресценции бинарных, разнолигандных хелатов европия, тербия и чувствительность определения БАВ, а также влияние мицелл на флуоресценцию биологически активных лигандов;

• найти оптимальные условия флуориметрического определения биологически активных веществ, основанного на измерении сенсибилизированной флуоресценции;

• изучить факторы, увеличивающие эффективность переноса энергии электронного возбуждения в хелатах лантаноидов с биологически активными веществами, сорбированных на модифицированных твердых матрицах;

• предложить направления практического применения разработанных методик для флуориметрического определения биологически активных веществ в различных объектах.

Предмет исследования состоял в выявлении и теоретическом обосновании факторов, определяющих процесс формирования аналитического сигнала в результате переноса энергии электронного возбуждения в хелатах лантаноидов с различными биологически-активными лигандами в гомогенных и микрогетерогенных организованных средах.

Объекты и методы исследования; Для решения поставленных задач применяли комплекс методов исследования и анализа: молекулярную абсорбционную спектроскопию в УФ-, видимом и ИК-диапазонах, стационарную, разрешенную во времени и сенсибилизированную флуориметрию, термогравиметрию, потенциометрию, плоскостную и высокоэффективную жидкостную хроматографию, расчетные квантово-химические методы. Объектами исследования явились водные и мицеллярные растворы антибиотиков тетрациклинового, хинолонового, фторхинолонового рядов, кумаринов, других биологически активных веществ с одним, двумя и тремя ароматическими кольцами, являющихся моно- и полидентатными лигандами, хелатов лантаноидов (Eu3+, Tb3+, Lu3+, La3+, Sm3+, Gd3+, Y3+, Ce3+, Dy3+, Nd3+) с указанными лигандами; для создания мицеллярных растворов использовали поверхностно-активные веществе анионного, катионного и неионогенного типа; микроэмульсии готовили на основе анионных ПАВ, применяли a-, Р- и у-циклодекстрины и их производные, некоторые биополимеры, a также гидрофильные и гидрофобные сорбенты на основе силикагеля. Объектами определения были представители классов указанных БАВ и европий, а объектами анализа явились биологические жидкости (плазма крови, моча) и мышечные ткани, лекарственные препараты, пищевые продукты, объекты окружающей среды (почвы).

Научная новизна;

• Экспериментально доказано участие переноса энергии возбуждения в формировании аналитического сигнала хелатов европия с некоторыми антибиотиками в водных растворах, мицеллярных средах ПАВ, микроэмульсиях и на поверхности сорбентов;

• выявлены факторы, уменьшающие скорость безызлучательных переходов в бинарных и разнолигандных хелатах лантаноидов с биологически активными веществами (липофильность, основность антибиотика, координационная насыщенность иона металла, кислотность среды) и увеличивающие квантовый выход и интенсивность сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов;

• выявлено дифференцирующее влияние анионных, катионных и неионогенных ПАВ на флуоресценцию некоторых БАВ, однородно и разнолигандных хелатов европия и тербия с различными БАВ, обусловленное их солюбилизацией мицеллами ПАВ;

• систематически исследован и обоснован эффект максимального увеличения чувствительности определения и понижения предела обнаружения ионов европия и тербия и БАВ флуориметрическим методом в результате синергетического действия второго лиганда, мицелл и микроэмульсий на основе ПАВ и молекул биополимеров; показана возможность понижения предела обнаружения в результате синергетического увеличения (до трех порядков) интенсивности сенсибилизированной флуоресценции, основанной на использовании эффекта ко-люминесценции в присутствии второго иона лантаноида в мицеллярных растворах ПАВ, выявлена связь интенсивности флуоресценции с размерами наноагрегатов, образующихся в растворе;

• предложены подвижные фазы, модифицированные молекулами рецепторами на основе циклодекстринов, позволяющие почти на порядок понизить предел обнаружения некоторых антибиотиков методом ОФ ВЭЖХ с флуоресцентным детектором;

• установлено, что иммобилизация хелата лантаноида с антибиотиком на сорбенте из водных или мицеллярных растворов сопровождается увеличением квантового выхода комплекса в 7 и 9.5 раз, скорость излучательного процесса Аг возрастает в 2 раза. Скорость безызлучательного процесса уменьшается в 3.6 и 5.1 раза;

• показано влияние ПАВ на протолитические свойства органических реагентов и расширение интервала комплексообразования ионов металлов с биологически активными и другими органическими лигандами, увеличение чувствительности определения ионов металлов в присутствии ПАВ, возможности их определения в кислых средах;

• показано использование синергетического эффекта увеличения сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов в присутствии второго лиганда и организованных средах для флуориметрического, сорбционно-флуориметрического, а также ОФ ВЭЖХ методов определения антибиотиков, антикоагулянтов, кумаринов, аминокислот, антиоксидантов и ионов Еи3+.

Практическая значимость:

Выявленные в работе факторы, способствующие уменьшению скорости безызлучательных процессов при внутримолекулярном переносе энергии электронного возбуждения в растворе и на поверхности, имеют общий характер и позволяет понижать пределы обнаружения как ионов Еи3+ и ТЬ3+, так и других БАВ различной природы, образующих комплексные соединения с лантаноидами. Его практическая значимость реализуется в следующих направлениях: • увеличении чувствительности определения и понижении предела обнаружения антибиотиков, аминокислот, антикоагулянтов флуориметрическим методом, основанном на реализации внутримолекулярного переноса энергии в возбужденном состоянии, эффекта антенны, ко-люминесценции и последующем измерении сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов;

• увеличении чувствительности (в 9 раз) определения антибиотиков в смеси методом ОФ ВЭЖХ при использовании молекул рецепторов в водно-органических подвижных фазах или модификации молекулами НПАВ подвижной и обращенной неподвижной фазы (циклодекстриновая и мицеллярная ВЭЖХ);

• возможности увеличения селективности определения БАВ, основанной на различном соотношении энергий их триплетных уровней и излучательных уровней ионов лантаноидов;

• возможности применения в качестве сенсибилизаторов более гидрофобных лигандов, нерастворимых в воде и мицеллярных растворах ПАВ, но растворимых в микроэмульсиях; предварительном концентрировании определяемого антибиотика или его комплекса с лантаноидом на сорбенте, и связанном с этим понижении предела его обнаружения;

• флуориметрическом определении неорганических и биологически активных веществ, основанном на проявлении синергетического эффекта увеличения (в 5-30 раз) сенсибилизированной флуоресценции лантаноидов при использовании второго сенсибилизирующего лиганда и мицеллярных растворов ПАВ;

• расширении интервала кислотности комплексообразования в присутствии КПАВ, вследствие влияния гидрофобного фактора на устойчивость и растворимость аналитической формы Ое(1У)-ПКФ-КПАВ.

Разработано более 30 методик флуориметрического, сорбционно-флуориметрического, спектрофотометрического и ОФ ВЭЖХ определения разл ичных веществ. Новизна и оригинальность разработанных способов определения ПАВ и антибиотиков подтверждены двумя патентами и одним авторским свидетельством.

Фотометрический способ определения 2-алкил-2-имидазолинов в сернокислых ваннах травления внедрен в практику аналитической лаборатории завода «Южкабель», г. Харьков. Определение антибиотиков методом ОФ ВЭЖХ с флуориметрическим детектором используется ЗАО «НИТА-ФАРМ», г. Саратов при внедрении в производство новых фармпрепаратов для животноводства и птицеводства. Объектами внедрения являются хроматографические методики определения доксициклина и фторхинолонов в лекарственных формах.

На защиту автор выносит;

- экспериментальное доказательство участия переноса энергии электронного возбуждения и эффекта «антенны» в системах лиганд-лиганд и лиганд-металл в формировании аналитического сигнала сенсибилизированной флуоресценции европия в его хелатах с биологически-активными лигандами в водных растворах, мицеллярных средах ПАВ, микроэмульсиях и на поверхности сорбента;

- факторы, определяющие рост интенсивности сенсибилизированной флуоресценции европия и тербия в присутствии второго лиганда, второго иона РЗЭ и мицелл ПАВ, связанные с эффектом антенны и уменьшением скорости безызлучательных переходов в бинарных и разнолигандных хелатах лантаноидов с биологически активными веществами (число координированных металлом молекул воды, липофильность и основность лиганда, координационная насыщенность иона металла, кислотность среды);

- дифференцирующий эффект природы организованных сред на интенсивность собственной и сенсибилизированной флуоресценции бинарных и разнолигандных хелатов европия и тербия;

- влияние сорбции БАВ и их хелатов с лантаноидами на их прямую и сенсибилизированную флуоресценцию;

- методики флуориметрического, сорбционно-флуориметрического, фотометрического и хроматографического методов определения антибиотиков тетрациклинового, хинолонового и фторхинолонового рядов, некоторых антикоагулянтов, аминокислот, нуклеотидов и ПАВ и ионов европия.

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертационной работы доложены на X Всероссийской конференции по химическим реактивам «Реактив-97» (Москва-Уфа, 1997), VII Международной конференции «The Problems of Solvation and Complex Formation in Solutions» (Иваново, 1998), XXIV European congress on molecular spectroscopy (Prague, 1998), «VII Всероссийской конференции «Органические реагенты в аналитической химии» (Саратов, 1999), X Российско-Японском симпозиуме по аналитической химии (Москва,

2000), X Всероссийской конференции «Поверхностно-активные вещества и препараты на их основе» (Белгород, 2000), Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов» (Москва, 2001, 2003, 2008 г.г.), I, II Всероссийском семинаре «Проблемы и достижения люминесцентной спектроскопии» (Саратов, 1998 и

2001), Международной конференции по люминесценции, посвященной 110-летию со дня рождения академика С.И.Вавилова (Москва, 2001), Поволжской конференции по аналитической химии (Казань, 2001), Всероссийской конференции «Актуальные проблемы аналитической химии» (Москва, 2002), III Черкесовских чтениях «Проблемы аналитической химии» (Саратов, 2002), Международном форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж, 2003), Международной конференции «Analytical Chemistry and Chemical Analysis, devoted to 100 anniversary of A.Babko» (Киев, 2005), Всероссийской конференции молодых ученых «Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии» (Саратов, 2003, 2005, 2007, 2010), Международной конференции молодых ученых и студентов в области оптики, лазерной физики и биофизики «Saratov Fall Meeting» (Саратов, 2005, 2006, 2008, 2011); VI Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2006», (Самара, 2006); международной конференции по аналитической химии «ICAS-2006» (Москва, 2006), Всероссийских конференциях с международным участием «Аналитика России», (Краснодар, 2004, 2007, 2009); VIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 2007); Российско-Украинско-Германском симпозиуме по аналитической химии «ARGUS'2007- Nanoanalytics» (Саратов, 2007), Научно-прикладном семинаре «Аналитические методы и приборы для химического анализа» (С.-Петербург, 2007), Международной конференции «Modern Physical Chemistry for Advanced Materials» (Харьков,

2007), Втором Международном форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж,

2008), VIII Украинской конференции по аналитической химии с международным участием (Одесса, 2008), Первой Международной конференции по люминесценции лантанидов (ICLL-1, Одесса, 2010), I Всероссийском симпозиуме по поверхностно-активным веществам «От коллоидных систем к нанохимии» (Казань, 2011), EUROANALYSYS 16 (Belgrad, Serbia, 2011), XIX Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Волгоград, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 102 печатные работы в виде 41 статьи (21 статья в журналах перечня ВАК), 1 авторского свидетельства и 2 патентов.

Личный вклад автора заключается в теоретическом обосновании проблемы, постановке и решении основных задач исследования, проведении совместно с аспирантами и дипломниками экспериментальных работ, обработке и интерпретации полученных результатов (разработка подходов к изучению эффекта переноса энергии, выявление факторов, способствующих понижению предела обнаружения аналитов, обоснование основных направлений практического применения эффектов).

Автор выражает глубокую благодарность и признательность своему научному консультанту профессору Штыкову Сергею Николаевичу и заведующей кафедрой аналитической химии и химической экологии СГУ профессору Черновой Римме Кузьминичне за всестороннюю поддержку, ценные советы, помощь и консультации на разных этапах выполнения работы.

Автор благодарит профессора кафедры оптики и биофотоники СГУ Кочубея В.И. за предоставленные возможности постановки экспериментальных работ на спектрофлуориметре Ь8-55 фирмы «Регкт-Е1тег», ценные советы и обсуждение результатов.

Глубокая признательность старшему научному сотруднику ЗАО «НИТА-ФАРМ» (г.Саратов) Жемеричкину Д.А. за предоставление ряда биологически активных веществ, д.х.н., профессору Панкратову А.Н. за совместно проведенные оценку С^АЯ-свойств по атомно-связево-аддитивным схемам, расчеты энергетики и электронной структуры молекул хинолонов и фторхинолонов методом теории функционала плотности и интерпретацию результатов теоретических исследований.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ вэжх высокоэффективная жидкостная хроматография

НФ неподвижная фаза

ПФ подвижная фаза

Бр-35 Бридж-35

П-385 проксамин - 385

Д-157 дипроксамин 157

П-091 проксанол 091

П-186 проксанол 186

ПЦЛ-3 проксанол ЦЛ-3

ТХ-100 Тритон Х-100

Тв-80 Твин-80

ДДС додецилсульфат натрия

ДДБС додецилбензолсульфонат натрия

ЦТАБ бромид цетилтриметиламмония

ЦПХ хлорид цетилпиридиния

ОТ окситетрациклин

ТТ тетрациклин дц доксициклин

ФХ фторхинолоны

ОФ офлоксацин

ЛФ ломефлоксацин

Нор норфлоксацин

ФЛ флюмеквин

ЭФ энрофлоксацин

ЦФ ципрофлоксацин

ОК оксолиновая кислота

НК налидиксовая кислота

ВФ варфарин

Окм оксикумарин

Кум куматетралил

ОДИ октадецилимидазолин

ГДИ гептадецилимидазолин

ТДИ тетрадецилимидазолин

БПК бромпирогалловый красный

СФ салицилфлуорон

ГЖФ пирокатехиновый фиолетовый

ХТ хлортетрациклин

МЦ метациклин

Фен 1,10-фенантролин

ТОФО триоктилфосфиноксид

ЭДТА динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты

АБ альбумин

ТТА теноилтрифторацетон т время затухания флуоресценции

Апг скорость безызлучательного перехода

Аг скорость излучательного перехода

1о§ Р индекс липофильности q число молекул воды

Ф квантовый выход

ПрО предел обнаружения

З-ЦД бета-циклодекстрин у-ЦД гамма-циклодекстрин

БАВ биологически активные вещества

ПАВ поверхностно-активные вещества

237 ВЫВОДЫ

1. Предложена совокупность подходов к повышению чувствительности определения и снижения предела обнаружения биологически активных веществ методом сенсибилизированной флуоресценции в хелатах с лантаноидами в водной среде и мицеллярных растворах поверхностно-активных веществ и дано теоретическое обоснование основных эффектов и закономерностей в системах (Ьп)-БАВ, Ьп-БАВ- лиганд2, Ьп-БАВ-лиганд2-Ьп2, основанное на связи между интенсивностью аналитического сигнала и скоростью безызлучательной потери энергии возбуждения и изменением числа молекул воды, координированных лантаноидом.

2. Экспериментально установлено, что основным источником формирования аналитического сигнала флуоресценции европия в его хелатах с биологически-активными лигандами во всех указанных случаях является внутримолекулярный перенос энергии электронного возбуждения с лиганда на европий или тербий (эффект антенны). Показано, что свидетельствами переноса являются:

- уменьшение интенсивности флуоресценции донора энергии, сопровождаемое соответствующим появлением и увеличением интенсивности флуоресценции акцептора при возрастании его концентрации, а также линейная зависимость между этими величинами;

- независимость времени затухания флуоресценции хелата от концентрации акцептора.

Перенос энергии в исследованных хелатах эффективен когда Ед > Еа примерно на 500-2500 см"1, что соответствует литературным данным. Указанный факт может лежать в основе увеличения селективности определения БАВ.

3. Показано, что дополнительный рост интенсивности флуоресценции европия и тербия с БАВ определяют три фактора:

- использование второго лиганда;

- использование второго иона РЗЭ;

- проведение реакции в мицеллярном растворе или использование глобулярных биополимеров, формирующих более «жесткую» структуру флуоресцирующего центра.

Их совместное использование позволяет получить максимальную величину аналитического сигнала. При высокой гидрофобности второго лиганда и всего разнолигандного комплекса предложено использовать микроэмульсии. Аналитическое значение при действии второго лиганда имеет и тушение флуоресценции хелата Ьп-БАВ.

4. Экспериментально показано, что результатом влияния второго лиганда и солюбилизации в мицеллах ПАВ является уменьшение числа остаточных молекул воды, координированных металлом в бинарном хелате Ьп-БАВ, и скорости безызлучательных переходов в бинарных и разнолигандных хелатах. Выявлено влияние на указанные характеристики липофильности, основности лиганда и кислотности среды; определены и сопоставлены времена жизни возбужденных состояний, скорости безызлучательных и излучательных процессов в водной и мицеллярной средах в присутствии и в отсутствие второго лиганда.

5. Установлено, что при использовании вторых лигандов, содержащих хромофорные группы, увеличение интенсивности флуоресценции может быть связано не только с замещением остаточных молекул воды, но и дополнительным лиганд-лигандным или лиганд-металльным внутримолекулярным переносом энергии возбуждения (усилением эффекта антенны). Показано, что в спектрах флуоресценции отношение интенсивностей переходов СЧП к МДП в растворах бинарных комплексов свидетельствует о низкой симметрии координационного окружения иона лантаноида и ее уменьшении при переходе к мицеллярным средам. Результатом одновременного действия второго иона лантаноида и второго лиганда является образование гидрофобных гетеронаночастиц, в которых реализуется межмолекулярный и внутримолекулярный перенос энергии возбуждения. Интенсивность флуоресценции зависит от размера наночастиц.

6. Выявлен дифференцирующий эффект природы организованных сред на интенсивность собственной и сенсибилизированной флуоресценции бинарных и разнолигандных хелатов европия и тербия с различными БАВ, обусловленный их солюбилизацией мицеллами ПАВ; показано, что усиление флуоресценции связано с солюбилизацией хелатов в мицеллы, а тушение - с их разрушением за счет конкурентного взаимодействия ионов мицелл с ионом металла или лигандом или отсутствием солюбилизации в мицелле.

7. Изучено влияние природы, концентрации ПАВ и циклодекстринов на хроматографическое поведение двух групп антибиотиков в методе ВЭЖХ с флуориметрическим детектором. Установлены оптимальные условия хроматографического разделения антибиотиков фторхинолонового ряда при их совместном присутствии. Предложены подвижные фазы, модифицированные молекулами рецепторами на основе циклодекстринов, позволяющие почти на порядок понизить предел обнаружения некоторых антибиотиков методом ОФ ВЭЖХ;

8. Установлены закономерности изменения интенсивности собственной и сенсибилизированной флуоресценции БАВ и их хелатов с лантаноидами, сорбированными на силикагелях Silasorb 600, Silosorb CI8 и Silosorb С8 и целлюлозе: иммобилизация хелата лантаноида с антибиотиком на сорбенте из водных и мицеллярных растворов сопровождается увеличением квантового выхода и скорости излучательного процесса Аг в 13.7, 12.8, 3.5 и 1.5 раза, соответственно; вклад безызлучательных процессов в потери энергии возбуждения при этом уменьшается в 3.4 и 5 раза. Показано, что скорость излучательного переноса энергии в растворах практически не меняется, а на силикагеле возрастает в 2 раза, в то время, как скорость безызлучательного переноса уменьшается, причем в присутствии ПАВ в большей степени. С использованием эмпирической формулы Хоррокса показано, что удаление молекул воды, являющихся основным тушителем, из гидратной оболочки лантаноида повышает эффективность переноса энергии возбуждения в растворе и на сорбенте.

9. Определены основные направления прикладного использования предлагаемых подходов к повышению чувствительности определения и снижению предела обнаружения БАВ для флуориметрического, сорбционно-флуориметрического, а также ОФ ВЭЖХ методов определения антибиотиков тетрациклинового, хинолонового и фторхинолонового рядов, антикоагулянтов кумаринового ряда, аминокислот, нуклеотидов, антиоксидантов, ПАВ и ионов Еи3+. Предложено около 30 методик их определения в различных биологических и фармацевтических объектах.

1. Weissman S.1. Luminescence of europium thenoyltrifluoroacetonate complexes // J. Chem. Phys. 1942. V.10. P.214.

2. Галанин М.Д. Резонансный перенос энергии возбуждения в люминесцирующих растворах, диссерертация (ФИАН, 1955).

3. Forster Th. Zwischenmolekulare energiewanderung und fiuoreszenz //Ann. Phys. 1948.V.2 P.55-75.

4. Dexter D.L. //J.Chem.Phys. 1953. V.21. №5. P.836

5. Ермолаев В. Л. Безызлучательный перенос энергии электронного возбуждения при обменно-резонансных взаимодействиях // Изв АН СССР, сер. физ. Т.32, 1968. №8. 1287-1293.

6. Векшин Н.Л. Флуоресцентная спектроскопия биополимеров Пущино, ООО «Фотон-век», 2008. - 168 с.

7. Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии М.: Наука, 1986. - 496 с.

8. Полуэктов Н.С., Кононенко Л.И., Ефрюшина Н.П., Бельтюкова С.В. Спектрофотометрические и люминесцентные методы определения лантанидов. Киев: Наукова думка. 1989. 256 с.

9. Bunzli J.C.G., Piguet С. Taking advantage of luminescent lanthanide ion //Chem. Soc. Rev., 2005, V.34.P.1048-1077.

10. Ермолаев В.Л., Свешникова Е.Б. и Шахвердов Т.А. Перенос энергии между органическими молекулами и ионами переходных металлов. Успехи химии, 1975, T.XLIV, вып. 1, С.49-73

11. Ермолаев В.Л., Тачин B.C. О механизме переноса энергии триплетного состояния ароматических кетонов к ионам редких земель в жидких растворах //Оптика и спектроскопия 1969, т.27, №6 с. 1007-100

12. Tanaka М., Yamaguchi G., Shiokawa Y. Et al. Mechanism and rate of the intermolecular energy transfer in rare earth chelates // Bull. Chem.Soc, Jap.-1970.-V.43, №2.-P.549-550

13. Ермолаев В.Л., Шахвердов Т.А. О механизме тушения флуоресценции органических соединений ионами редких земель в растворе // Оптика и спектроскопия. 1969. Т.26. С. 845.

14. Ермолаев В.Л., Шахвердов Т.А. Безызлучательный перенос энергии от ионов редких земель к красителям в твердых растворах // Оптика и спектроскопия. 1971. Т.30. С. 648.

15. Шахвердов Т.А. Безызлучательный перенос энергии от ионов редких земель к красителям в твердых и жидких растворах. // Изв. АН СССР, сер. Физ. 1972. Т.36. С.1018

16. Шахвердов Т.А., Ермолаев В.Л. Безызлучательный перенос энергии от ионов редких земель к красителям // Оптика и спектроскопия . 1972. Т.ЗЗ, С.941

17. Свешникова Е.Б. и Ермолаев В.Л. Механизм безызлучательной дезактивации, возбужденных ионов редких земель в растворах. Оптика и спектроскопия. 1971. т.30. С.379-380.

18. Кузнецов В.В., Севченко А.Н. О механизме миграции энергии в органических комплексах редких земель// Физические проблемы спектроскопии,- М.: Изд-во АН СССР.1962.-Т.1. С.236-239

19. Crosby G.A., Uhau R.E., Alire R.M. Intramolecular energy transfer in rare earth chelates. Role of the triplet state// L. Chem. Phys. 1961. V.34, №3. P.743-747

20. Arnaud N., Vaquer E., Georges J. Comparative study of the luminescent properties of europium and terbium coordinated with thenoyltrifluoroacetone or pyridine-2,6-dicarboxylic acid in aqueous solutions // Analyst 1998. V.123. P.261-265.

21. Whan R.E., Crosby G.A. Spectroscopic studies of rare-earth chelates // J. Mol. Spectrosc. 1962. V.8. P.315.

22. Kleinerman M. Intramolecular energy transfer in lanthanide chelates // Bull. Amer. Phys. Soc. 1964. V.9. N.3. P.265.

23. Kleinerman M. Energy migration in lanthanide chelates // J. Chem. Phys. 1969. V.51. N.6. P.2370-2381.

24. Bhaumik M.L., El-Sayed M.A. Mechanism and rate of the intramolecular energy transfer process in rare-earth chelates // J. Chem. Phys. 1965. V.42. N. 2. P.787-788.

25. Matsuda Y., Makishima S., Shinoya S. Intermolecular energy transfer in europium chelates due to excitation of the triplet state // Bull. Chem. Soc. Jpn. 1968. V.41. N.7. P.1513-1518.

26. Kropp I.L. Windsor N.W. Luminescence and energy transfer in solutions of rare-earth complexes. I. Enchancement of fluorescence by deuterium substiotution // J. Chem. Phys. 1963. V.39. P.2391.

27. I. Mekkaoui Alaoui, J. Nonparticipation of the Ligand's First Triplet State in Intramolecular Energy Transfer in Eu and Tb Ruhemann's Purple Complex // J.Phys. Chem. 1995. V. 99. P. 13280-13282.

28. Buono-Core G.E., Marciniak H. Li, B. Quenching of excited states by lanthanide ions and chelates in solution // Coord. Chem. Rev. 1990. V.99. P.55-87.

29. Мовсесян M.E., Геворкян В.А., Григорян Дж. X. Передача энергии от некоторых ароматических кетонов к ионам РЗЭ в растворах // Журн. прикл. спектроскопии. 1969. Т. 10. Вып.З. С.458-461.

30. Filipescu S., Mushrush G. Lanthanide ions as sensitive probes in oraguc photochemistry. I. Collisional sensitization of fluorescence by triplet donors // J. Phys. Chem. 1968. V.72. P.3516-3522.

31. Heller A., Wasserman E. Intermolecular energy transfer from excited organic compounds to rare earth ions in dilute solutions // Ibid. 1965. V.42. P.949-954.

32. В.Л.Ермолаев, Е.Б.Свешникова Применение люминесцентно-кинетических методов для изучения комплексообразования ионов лантаноидов в растворах // Успехи химии. 1994. Т.63, №11. С. 762778.

33. Horrocks W., Sidnick D.R. Lanthanide ion luminescence probes of the structure of biological macromolecules // Acc. Chem. Res. 1981. V. 14. P. 384-388.

34. Suprowski R.M., . Horrocks W.D. On the determination of the number of water molecules, q, coordinated to europium (III) ions in solution from luminescence decay lifetimes // Inorganica Chimica Acta. 2002. V. 340.P.44-48.

35. Kluber R.W., Horrocks W. D. Spin derealization in y-picoline N-oxide coordinated with bis(l,l.l-trifluoro 2,4 pentanedionato)copper(II) // Inorganic Chemistry. 1967. V.6. №7. P. 1427-1429.

36. Кравченко Т.Б., Бельтюкова С.В., Полуэктов Н.С. Тушение кислородом люминесценции ионов Sm, Eu и Tb в комплексных соединениях // Докл. АН СССР. 1980. Т.250. №3. С.632-635.

37. Lehn J.M. Perspectives in supramolecular chemistry from molecular recognition towards molecular information processing and self-organization //Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1990. V. 29. P. 1304-1319.

38. Стид Дж. В., Элтвуд Дж.Л. Супрамолекулярная химия. Пер.с англ.: В 2 т. М.:ИКЦ»Академкнига», 2007. Т.1.- 2007.- 490 С.

39. Voleur В. Volecular Fluorescence. Principles and Application.Wiley-VCH. 2002. P.247

40. Diamandis E., Christopoulos T. Europium chelate labels in time-resolved fluorescence immunoassays and DNA hibridisation assays // Anal. Chem. 1990. V.62. P.1149A.

41. Christopoulos Т., Diamandis E. Enzymaticaliy amplified time-resolved fluorescence immunoassay with terbium chelates // Anal. Chem. 1992. V.64. P.342.

42. Saha A., Kross K., Kloszewsky E. Time-resolved fluorescence of a new europium chelate complex: demonstation of highly sensitive detection of protein and DNA samples. // J. Amer. Chem. Soc. 1993. V.115. N.23. P.11032-11033.

43. Yoshikawa K., Yuan J., Matsumoto K., Kimura H. Time-resolved fluorometric detection of DNA using a tetradentate (3-diketonate europium chelate as a label // Anal. Sci. 1999. V.15. N.2. P.121-124.

44. Yuan J., Wang G., Kimura H., Matsumoto K. Highly sensitive detection of bensulfuron-methyl by time-resolved fluoroimmunoassay using a tetradentate (3-diketonate europium chelate as a label // Anal. Sci. 1999. V.15. N.2. P.125-128.

45. Bunzli J.-C.G., Piguet C. Taking advantage of luminescent lanthanide ions. //Chem. Soc. Rev., 2005. V.34. 1048-1077.

46. Eliseeva S.V., Bunzli J.-C.G. Lanthanide luminescence for functional materials and bio-sciences // Chem. Soc. Rev. 2010. V.39. P. 189-227.

47. Georges J. Investigation of fluorescence efficiency in the europium-thenoyltrifluoroacetone chelate in aqueous and ethanolic solutions by laser-induced fluorescence and photothermal spectroscopic methods // Anal. Chim. Acta. 1995. V.317. P.343-351.

48. Erostyak J., Buzady A., Kozma L., Hornyak I. Time-resolved luminescence of Eu(III)/Thenoyltrifluoroacetone/Surfactant systems in aqueous solutions // Spectrosc. Lett. 1995. V.28. P.473.

49. Li W., Yu G., Wang Q., Jin Y. Enhanced luminescence and energy transfer of Eu(III) by Tb(III) in chelates in micelle solutions // J. Alloys Comp. 1993. V.191. P.107-110.

50. Erostyak J., Buzady A., Kaszas A., Kozma L., Hornyak I. Time-resolved study of intramolecular energy transfer in Eu3+, Tb3+/(3-diketone/o-phenanthroline complexes in aqueous micellar solutions // J. Lumin. 1997. V.72-74. P.570-571.

51. Huang H., Zeng X. Sensitive determination of europium by thenoyltrifluoroacetone sensitize // Bunseki Kagaku. 1986. V.35. P.579.

52. Zhou T., Ping X., Zhang H. Determination of europium in rare-earth ores // Yankuangceshi. 1988. V.7. P.294.

53. Yang J., Zhu G., Wang H. Application of the co-luminescence effect of rare earths: simultaneous determination of trace amounts of samarium and europium in solution // Analyst. 1989. V.l 14. P.1417-1420.

54. Ci Y., Lan Z. Fluorimetric determination of europium // Anal. Lett. 1988. V.21. P.1499.

55. Li W., Yu G., Wang Q., Jin R. Luminescence enhancement of Eu(III) or Tb(III) complexes with organic ligands by Ln(III) (Ln Y, La, Gd, Lu) // J. Alloys Comp. 1993. V.192. P.34-36.

56. Xu Y.Y., Hemmila I., Mukkala V., Holttinen S., Lovgren T. Co-fluorescence of europium and samarium in time-resolved fluorimetric immunoassays // Analyst. 1991. V.l 16. P.l 155-1158.

57. Li J., Chen G., Hu J., Zeng Y. Enhancement fluorescence of europium-thenoyltrifluoroacetone complexes by terbium in micellar solution of Triton X-100 // Fresen. J. Anal. Chem. 1992. V.342. P.552.

58. Biju V.M., Reddy M.L.P., Rao T.P., Kannan G., Mishra A.K., Balasubramanian N. Enhancement of fluorescence europium-diketone complexes by micellar solution // Anal. Lett. 2000. V.33. P.2271.

59. Watarai H., Ogawa K. Formation of fluorescent complexes of Eu(III) and Sm(III) with ^-diketones and trioctylphosphine oxide in oil-water microemulsions // Anal. Chim. Acta. 1993. V.277. P.73-78.

60. Ci Y., Lan Z. Fluorescence enhancement of the europium(III)-thenoyltrifluoroacetone-trioctylphosphine oxide ternary complex by gadolinium(III) and its application to the determination of europium(ITI) // Analyst. 1988. V.l 13. P.1453-1458.

61. Si Z.K., Zhu G.Y., Li J. Study of the fluorescence of the europium-thenoyltrifluoroacetone-cetyltrimethylammonium bromide-Triton X-100 system//Analyst. 1991. V.116. P.309-312.

62. Zhu G., Si Z., Liu P., Jiang W. Study of the fluorescence enhancement system europium gadolinium - thenoyltrifluoroacetone cetyltrimethylammonium bromide-Triton X-100 and its application // Anal. Chim. Acta. 1991. V.247. P.37-43.

63. Цаплев Ю.Б. Флуоресценция хелата еврпоия с нафтоилтрифторацетоном // Журн. физ. химии. 1997. Т.71. С.730.

64. Ci Y., Ни К., Liu J., Ma Н. Enhancement of fluorescence europium-diketone complexes by phenanthroline in micellar solution// Fenxi Huaxue. 1982. V.10. P.232.

65. He L., Ren Y. Use of biphenyl guanidine for enhancement europium sensitized fluorescence // Fenxi Huaxue. 1992. V.20. P.541.

66. Shi H., Cui W. Detection europium by its diketone complexes with dibezo-18-krown-6 // Fenxi Huaxue. 1982. V.10. P.561.

67. Sita N.M., Rao T.P., Iyer C.S.P., Damodaran A.D. Ultratrace determination of europium in high-purity lanthanum, praseodymium and dysprosium oxides by luminescence spectrometry // Talanta. 1997. V.44. P.423-426.

68. Ci Y.X., Lan Z.H. Fluorometric determination of samarium and gadolinium by enhancement of fluorescence of samarium-thenoyltrifluoroacetone-1,10-phenanthroline ternary complex by gadolinium // Anal. Chem. 1989. V.61. P.1063-1069.

69. Li W., Yu G., Wang Q., Jin R. Luminescence enhancement of Eu or Tb complexes with organic ligands by Ln(III) (Ln Y, La, Gd, Lu) // J. Alloys Comp. 1993. V.192. P.34-36.

70. Meshkova S.B., Topilova Z.M., Bolshoy D.V., Beltyukova S.V., Tsvirko M.P., Venchikov V.Ya. // Acta Phys. Polonica A. 1999. V.95. P.983.

71. Soini E. Biospecific assays with time-resolved fluorescence detection // Trends Anal. Chem. 1990. V.9. P.90-93.

72. Zhu G. Y., Si Z. K., Zhang B., Jiang W., Hu J. T. Enhancement of fluorescence europium-diketone complexes by phenanthroline // Guangpuxue Yue Guangpu Fenxi. 1995. Y.15. P. 109.

73. Shirakawa E., Honjo T., Terada K. Fluorescence of europium-benzoylacetone- phenanthroline system // Fresenius J. Anal. Chem. 1989. V.334. P.37.

74. Yang J., Zhou H., Ren X., Li C. Fluorescence enhancement of the Eu-Tb-benzoylacetone-phenanthroline system // Anal. Chim. Acta. 1990. V.238. P.307-315.

75. Xu Y.Y., Hemmila LA. Co-fluorescence enhancement system based on pivaloyltrifluoroacetone and yttrium for the simultaneous detection ofeuropium, terbium, samarium and dysprosium // Anal. Chim. Acta. 1992. V.256. P.9-16.

76. Xu Y.Y., Hemmila I.A. Analytical application of the co-fluorescence effect in detection of europium, terbium, samarium and dysprosium with time-resolved fluorimetry // Talanta. 1992. V.39. P.759-763.

77. Zhu G., Si Z., Yang J., Ding J. Simultaneous spectrofluorimetric determination of terbium, samarium and europium with hexafluoroacetylacetone-trioctylphosphine oxide and Triton X-100 // Anal. Chim. Acta. 1990. V.231. P.157-159.

78. Werts M.H.V., Duin M.A., Hofstraat J.W., Verhoeven J.W. Synthesis of Novel Macrocyclic Lanthanide Chelates Derived from Bis-pyrazolylpyridine // Chem. Commun. 1999. V.61. P.799-802.

79. Ostakhov S.S., Voloshin A.J., Kazakov V.P., Shavaleev N.M. // Russ. Chem. Bull. 1998. V.47. P.1466.

80. Charles R.G., Ohlmann R.C. Thenoyltrifluoroacetonate, preparation and fluorescence properties // J. Inorg. And Nucl. Chem. 1965. V.27. №1. P.255-259

81. Stevent F., Gong M., William D. Synergistic Coordination in Ternary Complexes of Eu3+ with Aromatic, P-Diketone Ligands and 1,10-Phenanthroline // Inorg. Chem. 1994. V.33. N.15. P.3229-3234

82. Sun Z., Wang L., Guo C., Wang X., Chen J., Zhang X., Zhu G., Zhang Q. Determination of rare-earth elements by sensitized fluorimetry // Guangpuxue Yu Guangpu Fenxi. 1999. V.19. N.6. P. 776-778

83. Lis S., Elbanowski M., Makowska B. Energy transfer in solution of lanthanide complexes// J.of Photochemistry and Photobiolody A: Chemistry 150 (2002) P. 233-247

84. Мешкова С.Б., Кузьмин В.Е., Шапиро Ю.Е., Топилова З.М. Высокочувствительное люминесцентное определение европия /V Журн. аналит. химии. 2000. Т.55. С.118

85. С.Б.Мешкова, А.В.Кирияк, З.М.Топилова, С.М.Левшов Способы повышения чувствительности люминесцентного определения лантаноидов с использованием их комплексных соединений//Вюник Харьювского нацюнального ушверситета. 2008. №820. Химия. Вып. 16(39).

86. Matsuya Т, Hoshino N, Harita Т, Ogasawara М, Arao S. Synthesis, purification, and stability of beta-diketonate europium chelate reagent, determined by RP-HPLC // J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 2002. V.25. N.18. P.2807-2820

87. Мешкова С. Б., Топилова З.М., Лозинский М.О., Русакова Н.В., Большой Д.В. Перфторпроизводные ацетилацетона реагенты для высокочувствительного люминесцентного определения Sm, Eu, Nd и Yb // Журн. аналит. химии. 1997. Т.52. №9. С. 939-949;

88. Мешкова С.В., Топилова З.М., Лозинский М.О., Большой Д.В. Усиление люминесценции лантанидов в комплексах с дикетонами, содержащими различные флуоресцирующие радикалы // Журн. прикл. спектроскопии. 1997. Т.64. №2. С.229-233.

89. Мешкова С.Б., Русакова Н.В., Топилова З.М., Лозинский М.О., Кудрявцева Л.С. //Коорд.химия. 1992. Т. 18. №2. С.210-217;

90. Мешкова С.Б., Шапиро Ю.Е., Кузьмин В.Е., Артеминко А.Г., Русакова Н.В., Пыхтеева Е.Г., Большой Д.В. // Координ. Химия. 1998. Т.24. №9.С.714-718

91. Мешкова С.Б., Топилова З.М., Лозинский М.О., Большой Д.В. // Журн. прикл. спектроскопии. 1997. Т.64. №2. С.217-220;

92. Yuan J., Matsumoto К. Fluorescence enhancement by electron-withdrawing groups on (3 -diketones in Eu(III)- |3 -diketonato-TOPO ternary complexes // Anal. Sci. 1996. V.12. P.31-36

93. Arnaud N., Georges J. Fluorimetric Determination of Europium Over a Large Dynamic Range Using its Ternary Complex with Thenoyltrifluoroacetone and Trioctylphosphine Oxide in a Micellar Solution of Triton X-100 // Analyst. 1997. V.122. P.143-146

94. Erostyak J., Buzady A., Kaszas A., Kozma L., Hornyak I. Time-resolved3 4* 3 "Ьstudy of intramolecular energy transfer in Eu , Tb /p-diketone/o-phenanthroline complexes in aqueous micellar solutions // J. Lumin. 1997. V.72-74. P.570-571

95. Morin M., Bador R., Dechaud H. Detection of europium(III) and samarium(III) by chelation and laser-excited time-resolved fluorimetry // Anal. Chim. Acta. 1989. V.219. N.l. P.67-77

96. С.Б.Мешкова, А.В.Кирияк, З.М.Топилова, В.П.Городнюк Усиление люминесценции комплексов ТЬ3+ с производными пиразола путем устранения внутри- и межмолекулярных потерь энергии //Оптика и спектроскопия. 2006. Т. 100. №6. С.908-912

97. Oktar О., Karadag О., Gok Е. A novel Approach for the Determination of Stability Constants of Eu3+ and Tb 3+ Pyridine-2,6-dicarboxylic acid complexts, using Fluorimetrescence Spectroscopy// Analytical Letters, V.25, №11, P.2123-2142,1992

98. Arnaud N., Vaquer E., Georges J. Comparative study of the luminescent properties of europium and terbium coordinated with thenoyltrifluoroacetone or pyridine-2,6-dicarboxylic acid in aqueous solutions // Analyst 1998. V.123. P.261-265

99. Christopoulos Т., Diamandis E. Ultrasensitive determination of europium using microsecond time-resolved spectrofluorimetry // Analyst. 1991. V.116. N.6. P.627-630

100. Егорова А.В., Скрипинец Ю.В., Александрова Д.И., Антонович В.П. Сенсибилизированная люминесценция ионов лантаноидов и ее применение в биоанализе (обзор) //Методы и объекты химического анализа. 2010. Т.5, №4ю С.180-203

101. Tran C.D., Zhang W., Luminescence detection of rare-earth ions by energy transfer from counteranion to crown ether-lanthanide ion complexes // Anal. Chem. 1990. V.62. P.835.

102. Susy P., Panigrahi B.S., Viswanathan K.S. Fluorescence enhancement of dysprosium, europium and terbium using sodium benzoate-trioctylphospine oxideTriton X-100//Analytica Chimicf Acta, V.260. 1992. P.135-141

103. Arnaud N., Georges J. Influence of pH, surfactant and synergic agent on the luminescent properties of terbium chelated with benzoic acid derivatives in aqueous solutions Analyst V.125. 2000. P. 1487

104. Ioannou P.C., Rusakova N.V., Andrikopolou D.A. Spectrofluorimetric determination of anthranilic acid derivatives based on terbium sensitized fluorescence // Analyst V.123. 1998 P.2839

105. Zhang H., Bing Yan, Shu-bin Wang The photophysical properties of binary and ternary complexes of rare earths with conjugated carboxylic acid and 1.10-phenanthroline//J.of Photochemistry and Photobiology A: Chemistry V.109. 1997. P.223-228

106. Arnoud N., Georges J. Improved detection of salicylic acids using terbium-sensitized luminescence in aqueous micellar solutions of cetyltrimethylammonium chloride Analyst V. 124. 1999.P.1075

107. Jiang W., Feng Y., Y. Ma, N.Wang, Z. Si Spectrofluorometric determination of trace amounts of terbium with 4-chlorosalicylic acid, EDTA, and cetyltrimethylammonium bromide //Analytical sciences. 2003. V.19. P.923-925

108. Panadero S., Gomez-Hens A., Perez-Bendito. Kinetic determination of salicylic acid, diflunisal and their mixture based on lanthanide-sensitized luminescence Anal. Chim. Acta. V.329. 1996. P. 135

109. Hergert LA., Escandar G.M. Spectrofluorimetric study of the |3-cyclodextrin-ibuprofen complex and determination of ibuprofen in pharmaceutical preparations and serum// Talanta. 2003. V.60. P.235-246.

110. Теслюк О.И., Бельтюкова С.И., Егорова A.B., Ягодкин Б.Н. Комплексные соединения тербия (III) с некоторыми нестероидными противовоспалительными препаратами и их аналитическое применение // Журн. Аналит. химии, 2007. Т.62. №4. С.369-375

111. Espinosa-Mansilla A., Salinas F., De Orbe Paya I. Simultaneous determination of sulfadiazine, doxycycline, furaltadone and trimethoprim by partial least squares multivariate calibration // Anal. Chim. Acta. 1995. V.313. P. 103

112. Panagiotis Anastasopoulos, Meropi Timotheou-Potamia. Chemiluminescence Determination of Tetracyclines via Aluminum Sensitized Fluorescence //Anal. Letters. 2011. V.44. № 3, P. 25 37

113. Mitscher L.A., Bonacci A.C., Sokoloski T.D. Circular dichroism and solution conformation of the tetracycline antibiotics. // Tetrahedron Letters.-1968. V.51.-P.5361-5364.

114. Arnaud N., Georges J. Sensitive detection of tetracyclines using europium-sensitized fluorescence with EDTA as co-ligand and cetyltrimethylammonium chloride as surfactant // Analyst. 2001. V.126, P.694-697.

115. Rieutord A., Prognon P., Brion F. Liquid Chromatographic Determination Using Lanthanides as Time-Resolved Luminescence Probes for Drugs and Xenobiotics: Advantages and Limitations // Analyst, May 1997, V.122 (59R-66R)

116. Izquierdo P., Gomez-Hens A., Perez-Bendito D. Study of the Eu(III)— tetracycline—thenoyltrifluoroacetone system by using the stopped-flow mixing technique: Determination of tetracycline in serum // Anal. Chim. Acta. 1994. V.292. N.l-2. P.133-139

117. Ермолаев В.JI. Люминесцентные методы в химии лантаноидов // Журн. прикл. спектроск. 1995. Т.62. № 2. С.22

118. Jee R.D. Study of Micellar Solutions to Enhance the Europium-sensitized Luminescence of Tetracyclines //Analyst, December 1995, V.120. P.2867-2872

119. Jiang C., Luo L. Spectrofluorimetric determination of human serum albumin using a tetracycline-europium complex// Analytical letters 2004. V.37. №6. P.1129-1137.

120. Jiang C. Q. , Luo L. Spectrofluorimetric determination of human serum albumin using a doxycycline-europium probe // Anal. Chim. Acta. 2004. V.506. №.2. P.171-175.

121. Jiang C.Q., Luo L. Lysozyme enhanced europium-metacycline complex fluorescence: a new spectrofluorimetric method for the determination of lysozyme //Anal. Chim. Acta. 2004. V.511. P.l 1-16.

122. Jing L., Jinkai L., Xiaojing Z. Spectrofluorimetric determination of heparin using doxycycline-europium probe // J. Luminescence. 2005. V.l 13. №3-4. P.305-313.

123. Latva M., Takalo H., Mukkala V.M., Matachescu C. et al. Correlation between the lowest triplet state energe level of the ligand and lanthanide luminescence quantum yield // J. Luminescence. 1997. V.75. P. 149-169.

124. Wang Т., Wang X., Jiang C.Spectrofluorimetric determination of bile acid using a europium-doxycycline probe /7 J. of clinical laboratory analysis. 2007. V.21. P.207

125. F.Hou. X.Wang, C.Jiang Determination of ATF as a fluorescence probe with europium (III)-doxycycline//Analitical Sciences 2005 V.21.P.231-234

126. Waggoner Т.В., Bowman М.С. Spectrofluorometric determination of BAY Vp 2674 residues in poultry tissues // J. Assoc.Off. Anal. Chem. Int. 1987. V. 70. P. 813

127. Tyczkowska K.L., Voyksner R.D., Anderson K.L. Simultaneous determination of enrofloxacin and its primary metabolite ciprofloxacin in bovine milk and plasma by ion-pairing liquid chromatography // J. Chromatogr. B. 1994. V. 658. P. 341

128. Groeneveld A.J.N., Brouwers J.R.B.J. Quantitative determination of ofloxacin, ciprofloxacin, norfloxacin and pefloxacin in serum by high pressure liquid chromatography //Pharm. Weekbl. Sci. Ed. 1986. V.8. P. 79

129. Veiopoulou C.J., Ioannou P.C., Liaidou E.S. Application of terbium sensitized fluorescence for the determination of fluoroquinolone antibiotics pefloxacin, ciprofloxacin and norfloxacin in serum // J. Pharm. Biomed. Anal. 1997. V.15. P. 1839.

130. El-Walily A.F.M., Belal S.F., Bakru R.S. Spectrophotometric and spectrofluorimetric estimation of ciprofloxacin and norfloxacin by ternary complex formation with eosin and palladium(II) // J. Pharm. Biomed. Anal. 1996. V.14. P.561.

131. Panadero S., Gomez-Hens A., Perez-Bendito D. Stopped flow kinetic determination of nalidixic acid and norfloxacin based on lanthanide-sensitized fluorescence // Analyt. Chim. Acta. 1995. V.303. C.39-45.

132. A. Rieutord, P.Prognon, F.Brion Liquid Chromatographic Determination Using Lanthanides as Time-Resolved Luminescence Probes for Drugs and Xenobiotics: Advantages and Limitations // Analyst, May 1997, V.122 (59R-66R)

133. Lis S., Elbanowski M., Makowska B., Hnatejko Z. Energy transfer in solution of lanthanide complexes. J. Photochem. Photobiol. A Chem. 2002. V.150. P. 233247.

134. Georges J. Lanthanide-sensitized luminescence and application to the determination of organic analytes // A review. Analyst. 1993. V.l 18. P. 1481-1486

135. Rizk M., Belal F., Ibrahim F. Differential pulse polarographic determination of ofloxacin in pharmaceuticals and biological fluids // Anal. Lett. 1997. V.30. P.1531.

136. Jia Zhen. Study on Fluoremetric Method for the Determination of Protein in Serum Using Quercetin-Lanthanum(III)-Sodium Dodecyl Benzene Sulfonate-Protein System// Analytical Letters.V.39.2006.P.67-81

137. Jiang C., Luo L. Spectrofluorimetric determination of humanserum albumin using a tetracycline-europium complex //Analytical Letters. 2004.№6 V.37.P.1129-1137

138. Saha A., Mukherjee A.K. Spectroscopic and thermodynamic study of charge transfer interaction of doxycycline hidrocloride with riboflavin in aqueous ethanol media of varying compositions // J. Phys. Chem B. 2004. V.108. P.18988-18992.

139. Tang J. , Qi S. , Chen X. Spectroscopic studies of the interaction of anticoagulant rodenticide diphacinone with human serum albumin // J. Jf Molecular Structure V.779.2005. P.87-95

140. Sendra B., Panadero S., Gomes-Hens A.Fluorescene spectroscopic study of serum albumin-bromadiolone interaction: fluorimetric determination of bromadiolone // Anal. Chim. Acta. 1997. V. 355. Is.2-3. P. 145.

141. Li Aiyun, Zhao H. , Jin L. Protein analysis with terbium(III) and sodium dodecyl sulphonate by a second-oder scattering technique // Luminescence 2007 V.22. P.9-14

142. Wang F., Yang J. , Wu X. Improvement of the acridine orange-protein- surfactant system for protein estimation based on aromatic ring stacking effect of sodium dodecyl benzene sulphonate //luminescence 2006.V.21.P.186-194

143. Amin M., Harrington K., Wandruszka R. Determination of Steroids in Urine by Micellar HPLC with Detection by Sensitized Terbium Fluorescence // Anal. Chem. 1993. V.65 P.2346-235

144. Rieutord A., Prognon P. , Brion F. Liquid Chromatographic Determination Using Lanthanides as Time-Resolved Luminescence Probes for Drugs and Xenobiotics: Advantages and Limitations // Analyst, May 1997, V.122 (59R-66R)

145. Udenfriend S., Zaltzman P., Fluorescence characteristics of purines, pyrimidines, and their derivatives: Measurement of guanine in nucleic acid hydrolyzates // Anal. Biochem. 1962. №3. P. 49

146. Cheng Zhi Huang, Yuan Fang Li, Shen Yang Tong // Spectrofluorimetric Determination of Nucleic Acids with Aluminum(III)/8-Hydroxyquinoline Complex // Anal. Lett. 1997. V.30. №7. p. 1305

147. Udenfriend S., Zaltzman P. A study of cellular transport with the fluorescent amino acid, aminonaphthylalanine // Anal. Biochem. 1966. V.17. P. 100

148. Stout D.L. , Becker F.F. . Fluorometric quantitation of single- stranded DNA: A method applicable to the technique of alkaline elution. // Anal. Biochem. 1997. V. 83. P. 2521

149. Pasternack R.F., Bustamante C., Collings P.J. Molecular complexes of nucleosides and nucleotides with a monomeric cationic porphyrin and some of its metal derivatives // J. Am. Chem. Soc. 1985. V. 13. P.

150. Ci Y.X., Li Y.Z., Liu X.J. Selective Determination of DNA by Its Enhancement Effect on the Fluorescence of the Eu3+-Tetracycline Complex // Anal. Chem. 1995. V.671.P. 1785

151. Fu P.K.-L., Turro C. , Energy transfer from nucleic acids to Tb(III): Selective emission enhancement by single DNA mismatches // J.Am. Chem. Soc. 1999. V.121.P.1.

152. Satyanaryana S., Dabrowiak J.C., Chaires J.B. Neither .DELTA.- nor .LAMBDA.-tris(phenanthroline)ruthenium(II) binds to DNA by classical intercalation. //Biochemistry. 1992. V.31. P.9319.

153. Fu P.K.L., Turro C. Energy Transfer from Nucleic Acid to Tb (III): Selective Emission Enhancement by Single DNA Mismatches //J. Am Chem. Soc. 1999. V.122, № 1.

154. Yang J., Z. Gao, N.Jie. Study of the Fluorescence system Deoxyguanylic Acid-Tb (III) and the Determination of Dioxyguanylic Acid // Analyt. Chimmica Acta, V.248, № 2, 1 August 1991, P.589-594

155. Yang J., Gao Z., Jie N. Terbium (III) luminescence probes: determination of energy transfer distance between metal ion and tryptophan in proteins and postulation // Spectrochim. Acta A. 1996. V.52. P.709.

156. Ci Y.X., Li Y.Z., Chang W.B. Fluorescence reaction of terbium(III) with nucleic acids in the presence of phenanthroline // Anal.Chim. Acta. 1991. V. 248 P.589

157. Sueda S., Ihara T., Juskowiak B. Detection of higher-ordered DNA sequence by using terbium(III) luminescence //Anal. Chim. Acta. 1998. V. 365. P.27.

158. Lin C., Yang J., Wu X. Enhanced fluorescence of the terbium-gadolinium-nucleic acids system and the determination of nucleic acids // Anal. Chim Acta. 2000. V.403,P.219.

159. Lin C., Yang J., Wu X. Study on the columinescence effect of terbium-gadolinium-nucleic acids-cetylpyridine bromide system // J. Luminescence. 2003. V. 101. P.141-146

160. Liu R., Yang J., Wu X. . Study of the interaction between nucleic acid and oxytetracycline-Eu3+ and its analytical application // J. Of Luminescence 96 (2002) 201-209

161. Si Z., Jiang W., Ding Y. The europium/samarium-2-benzoyl-indane-l,3-dione-cetyltrimethylammonium bromide fluorescence system and its analytical application// Fresenius J. Anal.Chem. 1998 V.360. P.731-734

162. Gui-Yun Zhu, Zhi-Kun Si and Wen-Jing Zhu. Study on Sensitised Luminescence of Rare Earths by Fluorescence Enhancement of the Europium Gadolinium -Diphacinone - Ammonia Complex System and its Application//Analyst. 1990. V.l 15. P.1139-114

163. Sendra В., Panadero S., Gomes-Hens A. Kinetic determination of bromadiolone based on lanthanide-sensitized luminescence // Anal. Chim. Acta. 1997. V. 355. №.2-3. P. 145-150.

164. Дударь С.С., Свешникова Е.Б.„ Ермолаев В.Л. Перенос энергии от комплексов Еи(Ш) и Tb(LLI) к красителям в их смешанных наноструктурах // Оптика и Спектроскопия. 2008, Т. 104, №2 С.262-271

165. Дударь С.С., Свешникова С.Б., Ермолаев В.Л., Мамончиков Е.И. Колюминесценция молекул красителей в наноструктурах из комплексов ионов металлов // Оптика и спектроскопия 2009, Т. 107, №1, С.81-91

166. Кононенко Л.И., Дробязко В.Н., Полуэктов Н.С. Сенсибилизация тербием люминесценции европия в комплексах с некоторыми Р-дикетонами/Юптика и спектроскопия. 1962.Т.32. вып.2. С.312-316

167. Melby L.R., Rose N., J.Abramson E. Synthesis and Fluorescence of Some Trivalent Lanthanide Complexes // J.Am.Chem.Soc., 1964. V.86, P.5117.

168. Bauer, Y.,Blanc J., Rose D.L. Octacoordinate Chelates of Lanthanides. Two Series of Compounds// J. Am.Chem. Soc. 1964. V.86. P.5125.

169. N.Mahalakshmi S., T.Prasada Rao, C.S.P. Iyer. Ultratrace determination of europium in high-purity lanthanum, praseodymium and dysprosium oxides by luminescence spectrometry // Talanta 1997. V.44.P.423-426.

170. Buono-Core G.E., Li H. Quenching of excited states by lanthanide ions and chelates in solution // Coord. Chem. Rev. 1990. V. 99. P.55-87.

171. Севченко A.H., Кузнецова В.В., ХоменкоВ.С. Сенсибилизация и тушение люминесценции в двухкомпонентных поликристаллических порошках редкоземельных комплексов// Изв. АН СССР Сер.Физ.Т.32. №8. С.1436-1441;3+

172. Kropp J.L., Energy transfer in solution between UO2 and Eu // J.Chem.Phys.1967. V.46.№3. P.843-847

173. Meshkova S.B. The Dependence of the Luminescence Intensity of Lanthanide Complexes with (3-diketones on the Ligand Form // J. Fluorescence 2000.V. 10. P.333-337.

174. Свешникова Е.Б., Дударь С.С., Шабля А.В., Ермолаев B.JI. Влияние среды и образования наноструктур на дезактивацию электронного возбуждения хелатов Еи3+и ТЬ3+ //Оптика и спектроскопия. 2006. Т. 101. №4. С.588-595.

175. Свешникова Е.Б., Наумов С.П., Шахвердов Т.А. Роль составных частот в деградации энергии электронного возбуждения ионов редкоземельных элементов // Оптика и спектроскопия. 1977. Т.42. №5. С.748-753.

176. Дударь С.С., Свешникова Е.Б., Ермолаев B.J1. Перенос энергии между ионами лантанидов в наноструктурах их комплексов. I. // Оптика и спектроскопия. 2007. Т. 102. №4.С.578-586.

177. Дударь С.С., Ермолаев В.Л., Шабля А.В. Перенос энергии между ионами лантанидов в наноструктурах их комплексов.!! //Оптика и спектроскопия. 2007. Т.102. №4. С.587-598.

178. Воронина Р.Д., Зоров Н.Б. Высокочувствительное сорбционно-люминесцентное определение следов европия с предварительнымконцентрированием на кремнеземе, химически модифицированном иминодиуксусной кислотой. // Журн. Аналит. химии. 2007. Т.62. С.230-237.

179. Бельтюкова С.В., Бычкова Сорбционно-люминесцентное определение рутина в фармацевтических препаратах // Bíchhk Уж.НУ. Сер1я Х1м1я. Випуск 20. 2008. С.93-98

180. Бельтюкова С.В., Бычкова А.А. Сорбционно-люминесцентное определение кверцетина в лекарственных растениях. // Тр. Одесского политехнического ун-та. 2008. вып.2 (30). С.242-247.

181. Navalon A., Ballesteros О., Blanc R., Jose. Vilchez L. Determination of ciprofloxacin in human urine and serum samples by solid-phase spectrofluorimetry. Spain. Granada. 2000.

182. Oscar Ballesteros, Jose. Luis Vilchez, Alberto Navalon, Determination of the antibacterial ofloxacin in human urine and serum samples by solid-phase spectrofluorimetry. Spain. Granada. 2002.

183. Vilchez J.L., Ballesteros О., Taoufiki J., Sanchez-Palencia G., Navalon A. Determination of the antibacterial norfloxacin in human urine and serum samples by solid-phase spectrofluorimetry. Spain.Granada. 2001.

184. Ballesteros O., Vi.lchez J. L., Taoufiki J. and Navalo A. Determination of the Antibacterial Drug Enrofloxacin by Solid-Phase Spectrofluorimetry. Spain. Granada. 2004

185. Beltyukova S.V., Egorova A.V., Teslyuk O.I., Tselik EL Solid-Phase Luminescence Determination of Ciprofloxacin and Norfloxacin in Biological Fluids // J. Fluorescence 2002. V.12. P. 269-272.

186. LinShu Liu, Guoying Chen, Marshall L. Fishman. A single sorbent for tetracycline enrichment and subsequent solid-matrix time-resolved luminescence. LinShu Liu, USA, Wyndmoor. 2004.

187. Рунов B.K. Сорбционно-люминесцентный анализ // Российский хим. Журн. 1994. Т.38. №1.С.36-41.

188. Бельтюкова С.В., Малинка Е.В. Определение ципрофлоксацина в молоке с помощью люминесцентной спектроскопии в тонком слое // Труды одесского политехнического университета. 2008. Вып. 2(30). С. 238-242.

189. Бельтюкова С.В., Бычкова А.А. Сорбционно-люминесцентное определение рутина в фармацевтических препаратах // Вюник УжНУ. Сер1я Х1м1я 93. 2008. Випуск 20. С. 93-98.

190. Бельтюкова С.В., Бычкова А.А. Сорбционно-люминесцентное определение кверцетина в лекарственных растениях // Труды Одесского политехнического университета. 2008. Вып. 2(30). С. 242-246.

191. Штыков С.Н. Химический анализ в нанореакторах: основные понятия и применение//Журн. аналит. химии. 2002. Т.57. №10. С. 1018-1028.

192. Баран А.З., Левшин Л.В., Рулева Н.Н., Салецкий A.M. Процессы переноса энергии электронного возбуждения между молекулами люминесцирующих красителей в водных растворах поверхностно-активных веществ // Оптика и спектроскопия. 1999, Т.87.№2.С.249-252

193. Hernandez-Arteseros J.A, Compano R., Prat M.D. Application principal component regression to luminescence data for the screening of ciprofloxacin and enrofloxacin in animal tissues // Analyst. 2000. V.125.P. 1155

194. Rodriguez-Diaz R.C., Aguilar-Caballos M.P., Gomez-Hens A. Sensitive determination of fluoroquinolone antibiotics in milk samples using time-resolved methodology // Analytical Letters. 2004. V.37. № 6. P. 1163-1175

195. Ocana J.A., Callejon M., Barragan F.J. Terbium-sensitized luminescence determination of lovofloxacin in tablets and human urine and serum. // Analyst. 2000. V. 125.1851-1854

196. Ocana J.A., Callejon M., Barragan F.J. Determination of trovafloxacin in human serum by time resolved terbium-sensitised luminescence // European Journal of Pharmaceutical Sciences. 2001. V.13. P.297-301

197. Zhikun Si, Wei Jiang, Yuanju Ding. The europium/samarium-2-benzoyl-indane-1,3-dione-cetiltrimethylammonium bromide fluorescence system and its analytical application // Fresenius J. Anal. Chem. 1998.V.360. P.731-734;

198. Beltyukova S., Egorova A. Terbium chelates for fluorescence immunoassays // J.of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 1998. V.18. P.267-270.

199. Jee R.D. Study of Micellar Solutions to Enhance the Europium-sensitized Luminescence of Tetracyclines // Analyst, December, 1995. V.120. P.2867-287

200. Jiang C.Q., Zhang N. Enzyme-amplified lanthanide luminescence based on complexation reaction—a new technique for the determination of doxycycline // J. Pharm and Biomed. Anal. 2004. V.35. P.1301-130

201. Chongqiu J. Spectrofluorimetric determination of human serum albumin using a tetracycline-europium complex // Anal. Lett. 2004. №6. P.l 129 1137.

202. Deepa Subbiah, Subramanian Kala, Ashok K. Mishra. Study on fluorescence characteristics of bromadiolone in aqueous and organized media and application in analysis // Chemospere V.61. 2005. P. 1580-1586

203. Si Z., Jiang W., Ding Y. The europium/samarium-2-benzoyl-indane-l,3-dione-cetyltrimethylammonium bromide fluorescence system and its analytical application // Fresenius J. Anal.Chem. 1998 V.360. P.731-734

204. Duran-Meras I., Munoz de-La-Pena, Salinas I., Caceres R. . Spectrofluorimetric determination of nalidixic acid based on host-guest complexation with y-cyclodextrin//Analyst. 1994. V.l 19. P. 1215-1221.

205. Duran-Meras I., Munoz de-La-Pena, Salinas I., Rodrigues Caceres. Simultaneous fluorometric determination of nalidixic acid and 7-hydroxymethylnalidixic acid by partial least squares calibration // Appl. Spectrosc. 1997. V.51. P.684-692

206. Xu L., Huang Z.Y., Chen Z.H., Fenxi-Kexue-Xuebao. Photoluminescence and fluorescence quenchings of Сбо-pyrrolidine derivatives at room temperature // Anal. Abstr. 1996. V.58. P.3G28

207. Wang H., Hou F., Jiang C. Ethyl substituted 3-cyclodextrin enhanced fluorimetric method for the determination of trace amounts of oxytetracycline in urine, serum, feed of chook and milk // J. Luminescence. 2005. № 1-2. V. 113. P.94-99

208. Vilchez Quero J.L., Rohand J., Navalon Monton A., et al. Determination of warfarin at trace-levels in water by solid-phase spectrofluorimetry // J. Anal. Chem. 1996. V. 354. P.470

209. Shigemasa Ishiwata, Mamoru Kamiya. Cyclodextrin inclusion effects on fluorescence and fluorimetric properties of the pesticide warfarin // Chemosphere. 1997. V.34. №4. P.783

210. Пат. 7052864 США Bioanalytical measuring method using oxidases and lanthanoid-ligand complexes /Durcop A., Wolfbeis O. № 093103; заявл. 03.08.2002; опубл. 05.30.2006.

211. Экспериментальные методы химической кинетики: Учебн. пособие / Под ред. Н.М.Эмануэля, М.Г. Кузьмина. М.: Изд-во Московского ун-та, 1985. -224 с.

212. Parson W.W. Modern optical spectroscopy / Springer-Verlag Berlin Heidelberg. 2007. 505 p.

213. Hirschy L.M., van Geel T.F., Winefordner J.D. Characteristics of the binding of europium (III) to tetracycline // Anal. Chim. Acta. 1984. V.166. P.207-219.

214. Mitscher L.A., Bonacci A.C., Sokoloski T.D. Circular dichroism and solution conformation of the tetracycline antibiotics // Tetrahedron Lett. 1968. №51. -P.5561-5564.

215. Leeson L.J., Krueger J.E., Nash R.A. Concerning the structural assignment of the second and third acidity constants of the tetracycline antibiotics // Tetrahedron Lett. 1963. №.18. P.l 155-1160.

216. Трошева В.И. Влияние депротонирования на конформационное состояние молекулы тетрациклина // Антибиотики и химиотерапия. 1992. Т. 37, № 1. С. 11-14.

217. Matsuya T, Hoshino N, Harita T, Ogasawara M, Arao S. Synthesis, purification, and stability of beta-diketonate europium chelate reagent, determined by RP-HPLC // J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 2002. V. 25, № 18. P.2807-2820

218. Komori, Aiko, Naoto Inoue, Kaori Fujita, Shin-ya Kasajima and Asakazu Horiib. Measurement of Rutin and Quercetin in Tartary Buckwheat Flour by Ultraviolet1.duced Fluorescence // Section E Quality and Post-harvest Processing. P. 403 -409.

219. Давыдов A.C. Электронные возбуждения и колебания решетки в молекулярных кристаллах // Изв. АН СССР. Сер. Физ. -1970.-т.34, №3.-с.483-488

220. Georges J., Ghazarian S. Study of europium-sensitized fluorescence of tetracycline in a micellar solution of Triton X-100 by fluorescence and thermal lens spectrometry. // Anal. Chim. Acta. 1993. V. 276. P.401.

221. Jee R.D. Study of micellar solutions to enhance the europium-sensitized luminescence of tetracyclines //Analyst. 1995. V. 120. P.2867

222. Ермолаев В.JI. Свешникова Е.Б . Применение люминесцентно-кинетических методов для изучения комплексообразования ионов лантаноидов в растворах // Успехи химии, т.63, №11, 1994

223. Yang J., Tong С., Jie N., Wu. X., Zhang G., Ye H. Study on the fluorescence system of chlortetracycline-Eu-TOFO-sodium dodecyl sulfonate and the determination of chlortetracycline. J. of Pharmaceutical and Biomedical Analysys 1997. V.15. P.1833-1838.

224. Erostyak J., Buzady A., Kaszas A., Kozma L., Hornyak I. Time-resolved study of intramolecular energy transfer in Eu3+, Tb3+/(3-diketone/ophenanthroline complexes in aqueous micellar solutions // J. Luminesc. 1997. V.72-74. P.570.

225. Guo M., Jian-Wei Zou, Ping-Gui Yi, Zhi-Cai Shang. Binding Interaction of Gatifloxacin with Bovine Serum Albumin // Analytical Sciences. 2004. V.20. March. P.465-470.

226. ЕгороваА.В., Скрипинец Ю.В. Применение сенсибилизированной люминесценция ионов лантаноидов в биоанализе. Учебное пособие. Одесса: Астропринт, 2008. 200 с.

227. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Молчанова Ю.В. Синергетические эффекты в системе европий теноилтрифторацетон-1.10-фенантролин в мицеллах блоксополимеров неионных ПАВ и их аналитическое применение // Журн. аналит. химии. 2001. Т.56. №10. С. 1052-1056.

228. Штыков С.Н. Организованные среды стратегия, основанная на принципах биоподобия в аналитической химии. // Вестник Харьковского национального университета. 2000 №495. Химия. Вып.6(29). С.9-14

229. Холмберг К. Поверхностно активные вещества и полимеры в водных растворах.-М.:БИНОМ. Лаборатория знаний, 2007. 528 с.

230. Yongnian Ni, Shaojing Su, Kokot S. Spectrofluorimetric studies on the binding of salicylic acid to bovine aerum albuin using and ibuprofen as site markers with the aid of parallel factor analysis // Anal. Chim. Acta. 2006. V. 580. P.206.

231. Zhang R., Liu H., Zhang C. Influence of several compounds on the fluorescence of rare earth complexes Eu(TTA)3Phen and Sm(TTA)3Phen in LB films // Thin solid films. 1997. V.302. N.l-2. P.223-230.

232. Taketatsu T. Partition of europium (III) with P-diketones and neutral additives between micellar and bulk phases in aqueous nonionic surfactant solutions // Anal. Chim. Acta. 1985. N.174. P. 323-326.

233. Александрук B.M., Бабаев A.C., Демьянова A.T., Степанов А.В. Люминесценция теноилтрифторацетонатных комплексов европия и кюрия в водных растворах ПАВ. // Радиохимия. 1989. Т. 31. №4. С. 139-145.

234. Свешникова Е.Б., Дударь С.С., Ермолаев В.Л. Закономерности переноса энергии в водных растворах ионов Ln(III) в условиях образования их мостиковых комплексов с С03 " и ОН" анионами. //Оптика и спектроскопия. 2002. Т.92. №2. С. 187-194

235. Свешникова Е.Б., Ланин В.Е., Крутинева Е.В., Ермолаев В.Л. Природа влияния Gd(III) на люминесценцию хелатов Ln(III) в водных растворах. // Оптика и спектроскопия. 2001. Т.90. №5. С.754-759

236. Не L., Ren Y. Use of biphenyl guanidine for enhancement europium sensitized fluorescence // Fenxi Huaxue. 1992. V.20. P.541.

237. Imre S., Dogaru M.T., Vari C.E., Muntean Т., Kelemen L. Validation of an HPLC method for the determination of ciprofloxacin in human plasma // J. Pharm. Biomed. Anal. 2003. V. 33. №1. P.125-130.

238. Ramos M., Aranda A., Garcia E., Reuvers Т., Hooghuis H. Simple and sensitive determination of five quinolones in food by liquid chromatography with fluorescence detection // J. Chromatogr. B. 2003. V. 789. №2. P.373-381.

239. Zotou A., Miltiadou N. Sensitive LC determination of ciprofloxacin in pharmaceutical preparations and biological fluids with fluorescence detection // J. Pharm. Biomed. Anal. 2002.V. 28. №3-4. P.559-568.

240. Бельтюкова C.B., Малинка E.B. Определение ципрофлоксацина в молоке с помощью люминесцентной спектроскопии в тонком слое // Труды одесского политехнического университета. 2008. Вып. 2(30). С. 238-242.

241. Traviesa-Alvarez J. М., Costa-Fernandez J. М., Pereiro R., Sanz-Medel A. Direct screening of tetracyclines in water and bovine milk using room temperature phosphorescence detection // Anal. chim. acta. 2007. 589, N 1, c. 51-58.

242. Чернова P.K. Влияние некоторых коллоидных поверхностно-активных веществ на спектрофотометрические характеристики хелатов металлов с хромоформными органическими реагентами // Ж. аналит. химии, 1977, т.32, №8, С.1477

243. Чернова Р.К.,Лобачева И.В. В кн.: Строение и свойства молекул: Межвузов. Научн. Сборник, вып. 3 Изд-во куйбышевск. Ун-та, 1978, с. 109.

244. Харламова Л.Н. Изучение и применение в анализе разнолигандных комплексов р-, d-, f-элементов с пирокатехиновым фиолетовым и некоторыми аминами: Автореф. Дис. . канд. Хим. Наук: 02.00.02. Киев, 1977.-18 с.

245. Епимахов ВН., Церковницкая И.Л. Изучение комплексообразования германия с пирокатехиновым фиолетовым (ПФ) полярографическим методом // Изв.вузов СССР. Химия и хим. Технология, 1967, т. 10. №4. с.381

246. Хоменко В.А., Чикрызова Е.Г., Филиппов М.П. Изучение взаимодействия Германия (IV) с пирокатехиновым фиолетовым потенциометрическим титрованием с поляризованным электродом // Изв. АН Молд.ССР. Сер. Биол. Хим. Н, 1979, №4, с.52

247. Климова В.А. Основные микрометоды анализа органических соединений. М.: Химия, 1967, с. 19, 71.

248. Назаренко В.А., Антонович В.П., Невская Е.М. Гидролиз ионов металлов в разбавленных растворах. М.: Атомиздат, 1979. с. 192.

249. Чернова Р.К., Кудрявцева Л.М., Сухова Л.К., Штыков С.Н. В кн.: Органические реактивы в анализе. Вып. 3(5). Изд-во Сарат. Гос. Ун-та, 1979, с.52

250. Наканаси К. Инфракрасные спектры сложных молекул. М.,: Наука, 1973, С.41

251. Назаренко В.А. Аналитическая химия германия. М.: Наука, 1973, с.41

252. Наканаси К. Инфракрасные спектры сложных молекул. М: И.Л. 1963.

253. Идзава Я., Аики Т., Кимура В. Анализ алифатических катионных поверхностно- активных веществ методом спектрометрии в УФ области спектра.- Kogye kagai zasshi //J.Chem. Soc. Japan, Industr. Chem. See. 1963. V.66. № 11. P.1679-1682.

254. Дедков Ю.М. О перспективах применения спектроскопических методов при определении органических веществ в водах // Методы анализа природных и сточных вод. М. 1977.

255. Полковниченко И.Т., Сафина Л.Г., Круть В.В. Экстракция ионных ассоциатов высших 2-алкил-2имидазолинов с хлорфеноловым красным // Журн. Аналит. химии. 1978. Т.ЗЗ. №7. С.1387-1390.

256. Амелин В.Г., Чернова Р.К. Спектрофотометрическое определение германия (IV) с салицилфлуороном в присутствии цетилпиридиния. // Журн. аналит. химии 1984. Т.39. №8. С.1436-1437.

257. Чернова Р.К., Амелин В.Г. 9-(2-Гексадецилпиридинийоксафенил)-7-окси-2,3-дигексадецилпиридинийокса-6-флуорон в качестве фотометрического реагента для определения ниобия и тантала // А.С. СССР. № 1004370//Б.И. 1983. №10

258. Смирнова Т.Д., Чернова Р.К., Штыков С.Н. Синтез и изучение физико-химических свойств комплекса германия (IV) с пирокатехиновым фиолетовым и хлоридом цетилпиридиния // Журн. неорган, химии. 1983. Т.27. №11. С.2814-2817.

259. Чернова Р.К., Харламова Л.Н., Гурьев К.И., Сергеева И.С. Квантово-химическое и спектрофотометрическое изучение протолитических равновесий в растворах пирокатехинового фиолетового //Журн. аналит. химии. 1975. Т.30. №6. С.1065

260. Чернова Р.К., Штыков С.Н., Сухова Л.К. Свойства фотометрических реагентов трифенилметанового класса, модифицированных катионами ПАВ // Органические реагенты в анализе. Межвуз. Сб. Саратов: СГУ, 1983. С.3-20.

261. Harrison М., Theaker P. D., Archibald Н. W. Experience with ATP -bioluminescence for rapid microbial assessment in the brewery // Proc. 21st Conv. Adelaide. 1990. P. 168.

262. Analytical study of the ATP raw milk kit. Independent laboratory reports on sensitivity // 2 Milk Ind. 1994. V. 96. N.7. P. 15-16

263. Kyriakides A. ATG bioluminescence applications for microbiological quality control in the dairy industry // J. Soc. Dairy Technol. 1992. V.45. № 4. P.91-93.

264. Miller J.N., Nawawi M.В., Burgess С. Detection of bacterial ATP by reversed flow-injection analysis with luminescence detection //Anal. Chim. Acta. 1992. V.266. N.2. P.339-343

265. Simpson W. J., Pye J. M. Заявка 2288232 Великобритания, МПК {6} G Ol N 21/76. С 12 Q/66. BRF International. № 9406737.8. Заявл. 6.4.94. Опубл. 11.10.95

266. Ribeiro A.R., Santos R.M., Rosario L.M., Gil M.H. Immobilization of luciferase from a firefly lantern extract on glass strips as an alternative strategy for luminescent detection of ATP // J. Biolum. Chemilum. 1998. V.13. № 6. P.371-378.

267. Blum L.J., Coulet P.R., Gautheron D.C. Flow injection analysis with bioluminescence-based fiber-opticbiosensors // Biotechnol. Bioengin. 1985. V. 7. P. 232

268. Blum L.J., Gautier S.M., Coulet P.R. Comparison of different biosensor systems suitable for bioprocess monitoring // J. Biotechnol. 1993. V.31. N.3. P. 257-266.

269. Simpson W. J., Pye J. M. Заявка 2288232 Великобритания, МПК {6} G 01 N 21/76. С 12 Q/66. BRF International. № 9406737.8. Заявл. 6.4.94. Опубл. 11.10.95

270. Chapman A.G., Atkinson D.E. Nanomolar Level Amperometric Determination of ATP through Substrate Recycling in an Enzyme Reactor in a FIA System // Adv. Microb. Physiol. 1977. V. 15. P. 253

271. Yang X., Johansson G., Pfeiffer D., Scheller F.W. Enzyme Electrodes for ADP/ATP with Enhanced Sensitivity Due to Chemical Amplification and Intermediate Accumulation // Electroanalysis. 1991. V.3. P.659-664.

272. Compagnone D,, Guilbault G.G. Glucose oxidase/hexokinase electrode for the determination of ATP// Anal. Chim. Acta. 1997. V.340. N.l-3. P. 109113.

273. Poquet Y., Constant P., Peyrat M.A., Poupot R., Halary F., Bonneville M., Fournie J.J. A rapid HPLC determination of ATP related compounds and its application to herring stored under modified atmosphere // Anal. Biochem. 1996. V. 243. P.119.

274. Mikkers F.E.P., Everaerts F.M., Verheggen T.P. High-performance zone electrophoresis//J. Chromatogr. 1979. V.169. P. 11-20.

275. Ci Y., Li Y., Chang W. Fluorescence enhancement of terbium (III) by nucleotides and polyhomonucleotides in the presence of phenanthroline // Fresenius J. Anal. Chem. 1992. V. 342. № 1-2. P. 91-94

276. Li Y., Chang W., Ни X., Ci Y. The nature of synergic effect of phenanthroline and nucleotides in enhancing the fluorescence of terbium(III) and its application // Anal. Proc. 1992. V. 29. № 8. P. 349.

277. Wang D., Zhao Y., Zu J., Guo X. Sensitive determination of nucleotides and polynucleotides based on the fluorescence quenching of the Tb3+-tiron complex//Fresenius J. Anal. Chem. 1997. V. 358. №4. P. 514-518

278. Рябчиков Д.И., Рябухии В.А. Аналитическая химия редкоземельных элементов и иттрия. М.: Наука. 1966. 380 С.

279. Вредные химические вещества. Неорганические соединения элементов I-IV групп: Справочн. изд. jl: Химия. 1988. С.512.

280. Андреева О.С. Редкоземельные элементы. Радиационно-гигиенические аспекты. М.:Наука. 1975. С. 152.

281. Полуэктов Н.С., Кононенко Л.И., Мелентьева Е.В. Материалы республиканской конференции по химии и химической технологии, вып. 1. Изд. Госплана СМ УССР. Киев. 1966. С.29.

282. Zhao F, Zhang X, Gan Y. Determination of tetracyclines in ovine milk by highperformance liquid chromatography with coulometric electrode array system // J. Chromatogr. A. 2004. V.1055,№l-2. P.109-114.

283. Gigosasa P.G., Revosadoa P.R, Gadahiaa O. and etc. Determination of quinolones in animal tissues and eggs by high-performance liquid chromatography with photodiode-array detection // J. Chromatogr. A. 2000. V. 871. №1-2. P.31-36.

284. Gigosos P. G., Revesado P. R., Cadahia O. and etc. Determination of quinolones in animal tissues and eggs by high-performance liquid chromatography with photodiode-array detection // J. Chromatogr. A. 2000. V.871. Is. 1-2. P.31-36.

285. Xie S., Chin S., Zhang F. Determination of enrofloxacin and its metabolite in animal plasma by reversed-phase ion-pair high-performance liquid chromatography // Se Pu. 1998. V.16, №3. P.258.

286. Pecorelli I., Galarini R., Bibi R., Floridi Al., Casciarri E., Floridi A. Simultaneous determination of 13 quinolones from feeds using accelerated solvent extraction and liquid chromatography //Analyt. Chem. Acta. 2002. V. 464. Is. 1. P.37-45.

287. Kurie M, Hiroyuki K. Determination of fluoroquinolones in environmental waters by in-tube solid-phase microextraction coupled with liquid chromatography-tandem mass spectrometry // Analyt. Chim. Acta.2006.V. 562. №. l.P. 16-22.

288. Lolo M., Pedreira S., Fente C., Vázquez B. I, Franco C. M., Cepeda A. Use of the diphasic dialysis as a new extraction procedure in the determination of enrofloxacin and ciprofloxacin in egg // Analyt. Chim. Acta. 2003. V. 480. № l.P. 123-130.

289. Vyncht G, Janosi A, Bordin G, Toussaint B, Pauw E, Rodriguez A-R. Multiresidue determination of (fluoro) quinolones antibiotics in swine kidney using liquid chromatography tandem mass spectrometry // J. Chromatogr. 2002. V.952. №1-2. P. 121-129.

290. Harnandoa M.D., Mezcuaa M., Suarez-Barcenab J.M. Liquid chromatography with time of - flight mass spectrometry for simultaneous determination of chemotherapeutant residues in salmon // Analyt. Chim. Acta. 2006. V.562. №2. P.176-184.

291. Rasmussen К. E., Tonnesen F., Thanh H.H. Solid-phase extraction and highperformance liquid chromatographic determination of flumequine and oxolinic acid in salmon plasma // J. Chromatogr. 1989. V.496. P.355-364.

292. Кабрера К., Хайзенредер С., Дике И. Определение тетрациклина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Росс. хим. журн. 1997. Т.41. №1. С. 85.

293. Линберг Л., Цирлина Л., Машилов В. Определение тетрациклина и хлортетрациклина в крови // Хим.-фарм. журн. 1989. Т.ЗЗ. №1. С.23-26

294. Xie S., Chin S., Zhang F. Determination of enrofloxacin and its metabolite in animal plasma by reversed-phase ion-pair high-performance liquid chromatography // Se Pu. 1998. V.16, №3. P.258.

295. Wang P.L., Feng Y.L. Simultaneous TLC determination of norfloxacin, pefoxacin and ciprofloxacin in urine and serium // Microchem. 1997. V.56. P.229-232.

296. Juhel-Gaugain M., Abjean J.P. Application of HPTLC for the screening of quinolone residues in pig muscles // Chromatogr. 1998. V.47. P. 101-108.

297. Viennean D.S., Kindberg C.G. Development and validation of a sensitive method for tetracycline in gingival crevicular fluid by HPLC using fluorescence detection // J. Pharmac. Biomed. Anal. 1997. №16. P. 111-117.

298. Guyonnet J., Pacaud M., Richard M. Routine determination of flumequine in kidney tissue of pig using automated liquid // J. Chromatogr. B: Biomed. Sciences and Applicat. 1996. V.679. №1-2. P. 177-184.

299. Delmas J.M., Chapel A.M., Sanders P. Determination of flumequine and 7-hydroxyflumequine in plasma of sheep by high-performance liquid chromatography // J. Chromatogr. B: Biomed. Sciences and Applicat. 1998. V. 712. №1-2. P.263-268.

300. Decolin D., Nicolas A., Siest G. Determination of flumequine and 7-hydroxy metabolite by reversed-phase high- performance liquid chromatography // J. Chromatogr. B: Biomed. Sciences and Applicat. 1987. V.414. P.499-503.

301. Schneide M. J., Braden S. E., Reyes-Herrera I, Donoghue D.J. Simultaneous determination of fluoroquinolones and tetracyclines in chicken muscle using HPLC with fluorescence detection /'/ J. Chromatogr. B. 2007. V.846. №1-2. P.8-13.

302. Vybiralova Z., Nobilis M., Zoulova J., Kvetina J., Petr P. High-performance liquid chromatographic determination of ciprofloxacin in plasma samples // J. Pharm. Biomed. Anal. 2005. V. 37. №5. P.851-858;

303. Abdelgawad F.M., Abouttia F.M. Spectrophotometric determination of Flumequine using Iron (III) Chloride as a Color Developer // Microchem. J. 1994. V.50. P.106-110.

304. Eboka C.J., Aigbavboa S.O., Akerele J.O. Colorimetric determination of the fluorquinolones // J. Antimicrob. Chemother. 1997. V.39. P.639-645.

305. Prasad D., Raol K, Sastryl C. Extracitive spectrophotometric Method for The Determination of Certain 4-Quinolones in Drug Formulation // Sci. Pharm. 2000. V.68. P.173-188.

306. Международная фармакопея. 3е издание. Т.1. Общие методы анализа здравоохранения. Женева. 1981. С. 165-166.

307. Международная фармакопея. 3е издание. Т.2. Спецификация для контроля качества фармацевтических препаратов. Всемирная организация здравоохранения. Женева. 1983. С.292-297.

308. Oomori Y. Disk-diffusion method for determination of norfloxacin using E. coli NINJ JC -2 and modified Muller-Hinton medium // Chemotherapy. 1981. V.29. P.91.

309. Bland J. Determination of norfloxacin in serum, tissues and serum using Klebsiellapxeumonia ATCC 10031 //Eur. J. Clin. Microbiol. 1983. V.2. P.249.

310. Leigh D.A., Harris C.A., Tail S., Walsh В., Hancock P. Microbiological determination of lomefloxacin in serum using the disc susceptibility test /7 J. Antimicrob. Chemother. 1991. V.27. P.655.

311. Зельцер И. 3., Ануфриева P. Г., Бару Р. В. и др. Токсичность доксициклина гидрохлорида // Фармакол. и токсикол. 1986. №2. С. 121.

312. Jin J. Spectrofluorimetric method of determination of norfloxacin after dissolving in hydrogenchloric acid // Anal. Abatr. 1991. V.53. P.5-39.

313. El-Yazbi F.A. Ciprofloxacin as broad-spectrum empiric therapy are fluoroquinolones still viable monotherapeutic agents compared with lactams: Data from the MYSTIC Program (US) // Spectroscopy Lett. 1992. V.25. P.279-286.

314. Drakopouos A.I., Loannou P.C. The interactions of metal ions with quinolone antibacterial agents // Anal. Chem. Acta. 1997. V.354. P.197-203.

315. Rizk M., Belal F, Ibrahim F. Spectrofluorimetric analysis of 4- quinolone in pharmaceuticals and biological fluids // Pharmaceut. Acta Helv. 2000. V. 74. P. 371-377.

316. Zhihong L., Zuyun H., Ruxiu C. Study of the fluorescence characteristics of norfloxacin in reversed micelles and application in analysis // Analyst. 2000. V.125. P.1477-1481.

317. Duran-Meras I., Munoz de-La-Pena, Salinas I., Rodrigues Caceres. Simultaneous fluorometric determination of nalidixic acid and 7-hydroxymethylnalidixic acid by partial least squares calibration // Appl. Spectrosc. 1997. V.51. P.684-692.

318. Xu L., Huang Z.Y., Chen Z.H., Fenxi-Kexue-Xuebao. Spectrofluorimetric analysis of 4- quinolone in pharmaceuticals and biological fluids // Anal. Abstr. 1996. V.58. P.3G28.

319. Yusheng Wang, Feng L., Jiang C. Fluorimetric study of the interaction between human serum albumin and auinolones -terbium comolex and itsa xapplication // Spectrochim. Acta Part A: Molecular and Biomolec. Spectrosc. 2005.V.61, №13-14. P.2909-2914.

320. Roger D. J. Study of micellar solutions to enhance the europium -sensitized luminescence of tetracycline // Analyst. 1995. V.120. P.2867-2872.

321. Georges J., Arnaud N. Sensitive detection of tetracycline using europium-sensitized fluorescence with EDTA as co-ligand and cetyltrimetilammonium chloride as surfactant // Analyst. 2001. V. 126. P.694-697.

322. Hernandez-Arteseros J.A, Compano R., Prat M.D. Determination of ciprofloxacin and enrofloxacin in edible animal tissues by terbium -sensitized luminescence//Analyst. 1998. V.123. P.2729-2732.

323. Veiopoulou C.J., Ioannou P.C., Liaidou E.S. Application of terbium sensitized fluorescence for the determination of fluoroquinolone antibiotics pefloxacin, ciprofloxacin and norfloxacin in serum // J. Pharm. Biomed. Anal. 1997. V.15. P.1839-1843.

324. Panadero S., Gomez-Hens A., Perez-Bendito D. Stopped flow kinetic determination of nalidixic acid and norfloxacin based on lanthanide-sensitized fluorescence // Analyt. Chim. Acta. 1995. V.303. C.39-45.

325. Jiang C.Q., Zhang N. Enzyme-amplified lanthanide luminescence based on complexation reaction—a new technique for the determination of doxycycline // J. Pharm and Biomed. Anal. 2004. V.35. P.1301-1306.

326. El-Walily A.F.ivL, Belal S.F., Bakru R.S. Spectrophotometry and spectrofluorimetric estimation of ciprofloxacin and norfloxacin by ternary complex formation with eosin and palladium(II) // J. Pharm. Biomed. Anal. 1996. V. 14. P.561.

327. Rizk M., Belal F., Aly F.A., El-Enany N.M. Differential pulse polarographic determination of ofloxacin in pharmaceuticals and biological fluids//Anal. Lett. 1997. V.30. P. 1531.

328. Xu Y., Shen H. X., Huang H.G., Huaxue F. Studies on the energy transfer system of terbium-norfloxacin chelate and its interaction with serum albumins // Anal. Abstr. 1997. V.59. 11 G 48.

329. Бельтюкова С.В., Егорова А.В., Теслюк О.И. Хелаты европия (III) и тербия (III) с производными хинолонкарбоновой кислоты как метки для имунофлуоресцентного анализа. // Журн. аналит. химии. 2000. Т.55. №7. Р.760-768

330. Падейская Е.Н., Яковлев В.П. Фторхинолоны. М.: Биоинформ. 1995. С.54

331. Touraki М, Ladoukakis М, Prokopiou С. High-performance liquid chromatographic determination oxolinic acid and flumequine in the live fish feed Artemia//J. Chromatogr. B: Biomed. Scienc. Applicat. 2001. V.751. №.2. P.247-256.

332. Thanh H.H., Andersen A.T., Agasoster T. Automated column-switching highperformance liquid chromatographic determination of flumequine and oxolinic acid in extracts from fish // J. Chromatogr. B: Biomed. Scienc. Applicat. 1990. V.532. P.363-373.

333. Gigosos P. G., Revesado P. R., Cadahia O. and etc. Determination of quinolones in animal tissues and eggs by high-performance liquid chromatography with photodiode-array detection // J. Chromatogr. A.2000. V.871. №.1-2. P.31-36.

334. Sunderland J., Lovering A.M., Tobin C.M., MacGowan A.P., Roe J.M., Delsoi A.A. A reverse-phase HPLC assay for the simultaneous determination of enrofloxacin and ciprofloxacin in pig faeces // Intern. J. Antimicrob. Agents. 2004. V.23. № 4. P.390-393.

335. Waggoner Т., Bowman M. Determination of tetracyclines by fluorescence spectroscopy in plasma// J. Assoc. Off. Anal. Chem. 1987. V.70. P.813-818.

336. Pauiiuconis L., Musson D., Bayne W. // J. Pnarm. Sci. 1984. V.73. P.99-102

337. McCoy L., Crawmer В., Benziger D. // Antimicrob. Agents. Chemoter. 1985. V.27. P.769-773.

338. Аркадьева Г. В. Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук «Антикоагулянтная терапия в профилактике и лечении тромботических и тромбоэболичских осложнений при сердечнососудистой патологии». Москва. 2006. С.З.

339. Suzuki О., Watanabe К. Drugs and Poisons in Humans. A Handbook of Practical Analysis. Springer, 2007. P.599.

340. Аринушкина E.B. Руководство по химическому анализу почв. М.:Изд-во МГУ. 1961. С.494.

341. Zhang Т., Zhao Н., Jin L. Photochemical fluorescence enhancement of the terbium-lomefloxacin complex and its application // Talanta/ 1990. V. 49. P.77-82.

342. Tong C., Xiang G. Sensitive determination of norfloxacin by the fluorescence probeof terbium (Ill)-sodium dodecylbenzene sulfonate and its luminescence mechanism // J.Fluorescence. 2006. V.16. P.831-837.

343. Wang F., Huang W., Hou Y., Xu Z. The co-luminescence effect of Eu-Gd-Ofloxacin-SDBS system and its analytical application // J. Fluorescence. 2007. V.17. P.105-111.

344. Guo C., Dong P., Chu Z., Wang L., Jiang W. Repid determination of gatifloxacin in biological samples and pharmaceutical products using europium-sensitized fluorescence spectrophotometry // Luminescence. 2008. V.23. №1. P.7-13.

345. Hirschy M., Dose V., Winefordner D. Lanthanide-sensitized luminescence for the detection of tetracyclines // Anal. Chim. Acta. 1983. V. 147. P. 311-316.

346. Zhang п., Liu J., Jiang C. Lysozyme enhanced europium (III) - metacycline luminescence and its application to the determination of metacycline // Anal. Sci. 2005. V. 21. P. 541-544.

347. Chena G., Schneider M., Darwish A., Lehotay S., Freeman D. Europium-sensitized luminescence determination of oxytetracycline in catfish muscle // Talanta. 2004. V.64. P. 252-257.

348. Список основных публикаций по теме диссертационной работы

349. Статьи в журналах и патенты

350. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Молчанова Ю.В. Синергетические эффекты в системе европий теноилтрифторацетон-1.10-фенантролин в мицеллах блоксополимеров неионных ПАВ и их аналитическое применение // Журн. аналит. химии. 2001. Т.56. №10. С.1052-1056.

351. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Былинкин Ю.Г. Определение АТФ по тушению флуоресценции дикетонатного хелата европия (Ш) в мицеллах Бридж-35 // Журн. аналит. химии. 2004. Т.59. № 5. С.495 499.

352. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Былинкин Ю.Г., Жемеричкин Д.А. Флуориметрическое определение тетрациклинов с помощью хелата европия с 1,10-фенантролином в мицеллярных растворах анионных ПАВ // Журн. аналит. химии. 2005. Т.60. №1. С.30-34.

353. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В., Жемеричкин Д.А. Флуориметрический метод определения норфлоксацина, основанный на явлении переноса энергии // Изв. вузов. Химия и хим. технол. 2006. Т.49. №7. С.27-30.

354. Штыков С.Н., Карцев В.Н., Сумина Е.Г., Смирнова Т.Д. и др. Применение организованных сред и принципов супрамолекулярной химии вхимическом анализе // Вестник МГОУ. Серия: «Естественные науки», вып. «Химия и хим. экология» 2006. № 1. С. 16 24.

355. Штыков C.H., Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В., Былинкин Ю.Г., Жемеричкин Д. А. Определение ципрофлоксацина и энрофлоксацина методом сенсибилизированной флуоресценции // Журн. аналит. химии. 2007. Т.62. №2. С.153-157.

356. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В., Жемеричкин Д.А. Флуориметрическое определение доксициклина с помощью хелата европия и 1.10-фенантролина в мицеллярных растворах тритона Х-100 // Изв. вузов. Химия и хим. технол. 2009. Т.52. №1. С.39-42.

357. Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В., Штыков С.Н., Кочубей В.И., Жемеричкин Д.А. Определение варфарина методом сенсибилизированной флуоресценции с применением организованных сред // Журн. аналит. химии. 2009. Т.64. №11. С.1114-1119.

358. Смирнова Т.Д., Штыков С.Н., Паращенко И. Флуориметрическое определение европия, основанное на переносе энергии возбуждения в организованных средах // Цветные металлы. 2009. № 11. С.55-58.

359. Смирнова Т.Д., Штыков С.Н., Неврюева Н.В. Обращенно-фазовая ВЭЖХ флюмеквина и ципрофлоксацина в организованных средах // Сорбционные и хроматогр. процессы. 2010. Т. 10. Вып.1. С. 142-149.

360. Смирнова Т.Д., Штыков С.Н., Неврюева Н.В., Жемеричкин Д.А., Паращенко И.И. Флуориметрическое определение флюмеквина с помощьюсенсибилизированной флуоресценции тербия в организованных средах // Химико-фармацевтический журнал. 2010. Т.44. №11. С.13-16

361. Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В., Богомолова И.В. Комплексы с переносом энергии в организованных средах для определения флюмеквина в биологических объектах // Изв. вузов. Химия и хим. технол. 2010. Т.53. №11. С.24-28.

362. Смирнова Т.Д., Неврюева Н.В. Флуориметрическое определение оксолиновой и налидиксовой кислот с использованием мицеллярных растворов ПАВ // Заводск. лаб. Диагностика матер. 2010. №12. С. 17-20.

363. Смирнова Т.Д., Паращенко И.Ю. Флуориметрическое определение рутина, основанное на комплексообразовании с европием (Ш) в мицеллярных растворах ПАВ // Изв. Саратовск. ун-та. Новая серия. Химия. Биология. Экология. 2010. Т. 10. Вып. 2. С. 19-23.

364. Смирнова Т.Д., Штыков С.Н., Кочубей В.И., Хрячкова Е.И. Перенос энергии возбуждения в хелате европия с доксициклином в присутствии второго лиганда в мицеллярных растворах неионогенных ПАВ // Оптика и спектроскопия. 2011. Т. 110. № 1. С.65-71.

365. Смирнова Т.Д., Удалова А.Ю., Птицкая С.А. Определение некоторых антибиотиков тетрациклинового и хинолонового ряда методом ТСХ // Изв. Саратовск. ун-та. Новая серия. Химия. Биология. Экология. 2011. Т.П. Вып. 1. С 38-42.

366. Чернова Р.К., Смирнова Т.Д., Круть В.В., Коновалова И.В. Спектрофотометрическое определение катионных поверхностно-активных веществ в сильнокислых средах // Журн. аналит. хим. 1997. Т.52. №3. С. 324327.

367. Чернова Р.К., Смирнова Т.Д., Штыков С.Н. Синтез и изучение физико-химических свойств комплекса германия с пирокатехиновымфиолетовым и хлоридом цетилпиридиния // Журн. неорг. химии. 1983. Т.28. №11. С.2814-2817.

368. Смирнова Т.Д., Чернова Р.К., Круть В.В. Способ количественного определения имидазолинов. А.С. №1348720 СССР от 10.03.86.

369. Былинкин Ю.Г., Штыков С.Н., Смирнова Т.Д., Жемеричкин Д.А. Сенсибилизированная флуоресценция европия с фторхинолонами в мицеллах ПАВ. // Органич. реагенты в организов. средах: Межвуз. сб. науч. статей. -Саратов: Изд-во «Научная книга». 2003.С. 174-178.

370. Смирнова Т.Д., Былинкин Ю.Г., Штыков С.Н. Люминесцентный метод определения аденозинтрифосфорной кислоты с помощью комплекса европия с теноилтрифторацетоном // Проблемы аналит. химии: Сб. науч. статей. Саратов: Изд-во «Слово». 2002. С.224-225.

371. Смирнова Т.Д., Коновалова И.В. Определение 2 -алкил-2-имидазолинов в сильнокислых средах // Применение ПАВ в анализе природных и промышленных объектов: Сб. науч. статей. Саратов: изд-во Саратовск. ун-та. 1986. 4.2. С.26 32.

372. Птицкая С.А., Смирнова Т.Д. Флуориметрическое определение альбумина // Соврем, проблемы теорет. и эксперим. химии: Межвуз. сб. науч. трудов VII Всерос. конф. молодых ученых с международ, участием.-Саратов: ООО Изд-во «КУБиК» 2010. С. 167-169.

373. Паращенко И.И., Смирнова Т.Д. Флуориметрическое определение кверцетина и рутина. // Химия и химическая технология в XXI веке: Сборник науч. трудов XI Всерос. научно-практич. конф. студентов и аспирантов. -Томск. 2010. С. 348-349.

374. Штыков С.Н., Климов Б.Н., Смирнова Т.Д., Глуховской Е.Г., Сумина Е.Г., Истрашкина И.В. Получение и исследование свойств пленки Ленгмюра-Блоджетт на основе метилового оранжевого и полиамида кислоты // Журн. физ. хим. 1997. Т.71. №7. С.1292-1295.

375. Штыков С.Н., Климов Б.Н., Смирнова Т.Д., Науменко Г.Ю. Получение и исследование пленки Ленгмюра-Блоджетт на основе соли полиамидокислоты, содержащей краситель родаминоваого ряда // Журн. физ. хим. 1999. Т.73. №9. С. 1689-1691.

376. Штыков С.Н., Русанова Т.Ю., Смирнова Т.Д., Горин Д.А. Чувствительный элемент оптического сенсора на основе бензопурпурина 4Б для определения кислотности травильных растворов // Журн. аналит. химии. 2004. Т.59. №2. С. 198-201.

377. Чернова Р.К., Смирнова Т.Д. Флотационные свойства хелатов некоторых металлов с пирокатехиновым фиолетовым, модифицированным катионами ПАВ // Актуальные проблемы электрохим. технол.: Сб. статей молодых ученых Саратов: изд-во СГТУ. 2000. С.273-275.