Функционализация 2,1,3-бензоксадиазолов терминальными алкинами и нуклеофилами тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

Кузнецова, Анастасия Сергеевна АВТОР
кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ
Томск МЕСТО ЗАЩИТЫ
2014 ГОД ЗАЩИТЫ
   
02.00.03 КОД ВАК РФ
Автореферат по химии на тему «Функционализация 2,1,3-бензоксадиазолов терминальными алкинами и нуклеофилами»
 
Автореферат диссертации на тему "Функционализация 2,1,3-бензоксадиазолов терминальными алкинами и нуклеофилами"

На правах рукописи

КУЗНЕЦОВА АНАСТАСИЯ СЕРГЕЕВНА

ФУНКЦИОНАЛИЗАЦИЯ 2,1,3-БЕН30КСАДИА30Л0В ТЕРМИНАЛЬНЫМИ АЛКИНАМИ И НУКЛЕОФИЛАМИ

Специальность 02.00.03 - органическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

27 НОЯ

Томск-2014

005555945

Работа выполнена на кафедре химии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Красноярский государственный педагогический университет им. В.П. Астафьева»

Научный руководитель:

доктор химических наук, профессор, Горностаев Леонид Михайлович

Официальные оппоненты:

Потапов Андрей Сергеевич доктор химических наук, доцент, Национальный исследовательский Томский политехнический университет, кафедра биотехнологии и органической химии, инженер-исследователь

Колесник Василий Дмитриевич, кандидат химических наук, ООО «НИОСТ» (г. Томск), лаборатория нефтехимического синтеза, начальник лаборатории

Ведущая организация:

Новосибирский институт органической химии им. Н. Н. Ворожцова СО РАН.

Защита состоится 24 декабря 2014 г. в 14:30 на заседании диссертационного совета Д.212.269.04 при федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего образования «Национальный исследовательский Томский политехнический университет» по адресу: 634050, г. Томск пр. Ленина, 43а, 2-й корпус ТПУ, Малая химическая аудитория.

С диссертацией можно ознакомиться в Научно-технической библиотеке ФГАОУ ВО НИ ТПУ по адресу: 634050, г. Томск, ул. Белинского, 55 и на сайте http://portal.tpu.ru/counciI/91 илуогкЫ.

Автореферат разослан «18» ноября 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Г / Т. М. Гиндуллина Д.212.269.04 <Жги«/ ~

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. 2,1,3-Бензоксадиазолы (бензофуразаны) обладают рядом полезных свойств, обуславливающих возможность их использования в медицине, сельском хозяйстве и некоторых областях техники. Также бензофуразаны, содержащие в молекулах различные функциональные группы широко применяются в качестве флуоресцентных реагентов в различных аналитических и биохимических исследованиях. Интерес к данному классу соединений связан с их своеобразной структурой, физическими и химическими свойствами. Поэтому разработка новых удобных путей синтеза и дальнейших модификаций производных 2,1,3-бензоксадиазола остается одним из ведущих направлений органического синтеза.

Диссертация выполнена на кафедре химии Красноярского государственного педагогического университета им В.П. Астафьева при финансовой поддержке гранта Министерства образования и науки РФ (2009-2011г -per. № 1.1.08; 2012-2014г-рег. № 3.3999.2011). Цели работы.

• Изучение взаимодействия 4,6-дибром-2,1,3-бензоксадиазола с аренолами и арентиолами;

• Изучение отношения 4-(11-амино)-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазолов к нитрующим и нитрозирующим реагентами;

• Разработка эффективных способов получения 6-арилокси-4-бром-2,1,3-бензоксадиазолов и 7-6poM-N-R-2,1,3-бензоксадиазол-5-аминов на основе 2,6-дибром-4-фторнитрозобензола;

• Разработка эффективных способов получения бензофуразанов, содержащих в молекулах этинильный фрагмент и аминогруппу, получение на их основе модифицированных нуклеозидов и исследование люминесцентных свойств некоторых производных 2,1,3-бензоксадиазолов и их конъюгатов.

Научная новизна работы.

• Впервые установлено, что в 4,6-дибром-2,1,3-бензоксадиазоле бром, находящийся в положении 4 обладает большей нуклеофильной подвижностью по отношению к арилат- и арилтиолят-ионам.

• Впервые установлено, что взаимодействие 2,6-дибром-4-фторнитрозобензола с арилат-ионами протекает с замещением атома фтора и образованием 4-(4-К-арилокси)-2,б-дибромнитрозобензолов, субстратов для синтеза 6-(4-11-арилокси)-4-бром-2,1,3-бегооксадиазолов.

• Впервые предложен способ получения 7-6poM-N-R-2,1,3-бензоксадиазол-5-аминов в одну технологическую стадию из 2,6-дибром-4-фторнитрозобензола, и на их основе М-(2-азидоэтил)-7-бром-1^-Я-2,1,3-бензоксадиазол-5-аминов.

• Впервые показана возможность использования 4,6-дибром- и 4(6)-бром-6(4)-алкиламино-2,1,3-бензоксадиазолов в качестве субстратов в реакции

Соногаширы. Синтезирована группа 2,1,3-бензоксадиазолов, содержащих в молекулах аминогруппу и этинильную группу, непосредственно связанную с карбоциклом.

• Впервые установлено, что 4-(4-метилфениламино)-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол и 4-бензиламино-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол по-разному относятся к нитрующим и нитрозирующим реагентам; на основании полученных данных предложены механизмы реакции.

• Впервые показано, что 4(6)-морфолин-4(6)-ил-6(4)-этинил-2,1,3-бензоксадиазолы и К-(2-азидоэтил)-Ы-метил-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-амин могут быть использованы в качестве люминесцентных меток нуклеозидов и олигонуклеотидов; установлено, что полученные модифицированные нуклеозиды и олигонуклеотиды обладают люминесцентными свойствами, причём максимумы эмиссии находятся в области, удобной для биохимических исследований (560-596 нм).

Практическая значимость работы.

1. Разработанные способы получения производных 2,1,3-бензоксадиазолов путем взаимодействия 4,6-дигалоген-2,1,3-бензоксадиазолов с аренолами и арентиолами, 2,6-дибром-4-фторнитрозобензола с аренолами, а также на основе реакций нитрования, нитрозирования 4-(11-амино)-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазолов, кросс-сочетания 4,6-дибром- и 4(6)-бром-6(4)-алкиламино-2,1,3-бензоксадиазолов с терминальными алкинами, позволили синтезировать новые группы бензофуразанов, перспективных для исследования их биохимической активности.

2. Найденные методы получения люминесцентных модифицированных нуклеозидов или олигонуклеотидов на основе 2,1,3-бензоксадиазолов позволяют рассматривать полученные конъюгаты в качестве флуоресцентных меток в медицинской диагностике и биохимических исследованиях.

Апробация работы. Результаты настоящей работы были представлены на Всероссийской конференции по органической химии, посвященной 75-летию со дня основания Института органической химии им. Н.Д. Зелинского РАН (Москва,

2009); International Symposium «Advanced Science in Organic Chemistry» (Крым,

2010); Всероссийской конференции «Современные проблемы органической химии», посвящённой 80-летию со дня рождения академика В.А. Коптюга (Новосибирск, 2011); XIX Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Волгоград, 2011); III Всероссийской конференции по органической химии (Санкт-Петербург, 2013); XV Международной научно-практической конференции имени профессора Л. П. Кулёва студентов и молодых ученых «Химия и химическая технология в XXI веке» (Томск, 2014).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 статьи (из них 1 статья в международном журнале), материалы 14 докладов, тезисы 4 докладов.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 132 страницах машинописного текста, содержит 28 рисунков, 6 таблиц. Состоит из введения, литературного обзора, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов, списка цитируемой литературы (101 ссылка) без приложений. Положения, выносимые на защиту.

1. Синтез и химические свойства 4-арилокси(арилтио)-6-бром-2,1,3-бензоксадиазолов.

2. Синтез 6-арилокси- и 6-амино-4-бром-2,1,3-бензоксадиазолов на основе 2,6-дибром-4-фтор-нитрозобензола.

3. Функционализация Ы-алкил-6(4)-бром-2,1,3-бензоксадиазол-4(6)-аминов терминальными алкинами.

4. Взаимодействие 4-(11-амино)-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазолов с нитрующими и нитрозирующими реагентами.

5. Флуоресцентные свойства некоторых 2,1,3-бензоксадиазолов и их применение в качестве флуоресцентных меток.

Основное содержание работы

1. Синтез и химические свойства 4-арилокси(арилтио)-6-бром-2,1,3-бензоксадиазолов

Реакции 4,6-дигалоген-2,1,3-бензоксадиазолов с аренолами и арентиолами ранее не были изучены. Установлено, что 4,6-дибром-2,1,3-бензоксадиазол 1 взаимодействует с фенолами или тиофенолами с замещением атома брома, находящегося в положении 4, а не 6 и образованием 4-арилокси(арилтио)-6-бром-2,1,3-бензоксадиазолов. Реакция проводилась в ДМСО в присутствии карбоната калия.

Схема 1

1 2 »-ж

2, X = О, Я = II (а); X = 0, И = Ме (б), X = О, Ят^Ви (в); X = О, Я = С1 (г);Х = О, Я = I (д) Х-Я, К- II(е).X = К, М<ж)

Строение и состав полученных веществ подтверждены данными элементного анализа, ЯМР 'Н-спектроскопии, масс-спектрометрии и двумерной ядерной спектроскопии ЫОЕБУ. В двумерном спектре вещества (2ж) присутствуют кросс-пики, соответствующие взаимодействию протонов, находящихся в положениях 2',6' иара-метилтиофенольного остатка (7.40 м.д.) и протона, находящегося в 5-м положении карбоцикла бензофуразана (6.73 м.д.).

и

Рисунок 1. ИОЕЗУ-спектр 6-бром-4-(4-метилфенил)тио-2,1,3-бензоксадиазола (2ж)

Для получения соединений, характеризующихся спектрами поглощения и флуоресценции в благоприятных для биохимических исследованиях областях, изучено взаимодействие полученных веществ 2 с алифатическими аминами. Аминирование веществ 2в,д-ж пирролидином и морфолином протекает в ДМСО при 80-90 °С с образованием продуктов 3.

Схема 2

2н„1-ж За-л

3, X - О к-<-Ви, У = О (а); X = О, Я = I, У = О (6);

X = Б, 1? = Н, У = О (в); X = Б, И = Н, У = - (г); X = Я, И = Мс, У = О (д)

Представлялось интересным изучить влияние различных заместителей на характер электронных спектров поглощения 4-арилокси(арилтио)-6-бром-2,1,3-бензоксадиазолов 2 и продуктов их аминирования 3 (рисунок 2). Установлено, что введение арилоксигруппы в положение 4 вместо атома брома в 4,6-дибром-2,1,3-бензоксадиазоле 1 приводит к батохромному сдвигу длинноволновых максимумов на 10-15 нм, а арилтиогруппы на 40-50 нм. В электронном спектре поглощения 2,1,3-бензоксадиазола Зг, содержащего в положении 4 4-фенилтиогруппу, а 6 — остаток пирролидина наблюдается батохромный сдвиг на 65 нм по сравнению с 6-бром-4-фенилтио-2,1,3-бензоксадиазолом 2е и на 30 нм по сравнению с 6-бром-4-морфолино-2,1,3-бензоксадиазолом 4а. Таким образом, введение в молекулы бензоксадиазолов двух электронодонорных заместителей приводит к смещению максимумов поглощения в длинноволновую область по сравнению с монозамещенными бензофуразанами.

7

! )

!

Рисунок 2. ЭСП 4,6-дибром-2,1,3-бензоксадиазола (1), 6-бром-4-фенокси-2,1,3-бензоксадиазола (2а), 6-бром-4-фенилтио-2Д,3-бензоксадиазола (2е), 6-пироллидино-4-фенилтио-2,1,3-бсизоксадиазола (Зг), 6-бром-4-морфолино-2,1,3-бензоксадиазола (4а) (ДМФА, ! 1-Ю"4 моль/л)

2. Синтез 6-арилокси и 6-алкиламино-4-бром-2,1,3-бензоксадиазолов на основе 2,6-дибром-4-фтор-нитрозобензола

2.1. Синтез 6-арилокси-4-бром-2,1,3-бензоксадназолов на основе 2,6-дибром-4-фторнитрозобензола

I

Найдено, что 2,6-дибром-4-фторнитрозобензол 5 взаимодействует с аренолами в ДМСО в присутствии карбоната калия с замещением атома фтора и | образованием 2,6-дибром-4-арилоксинитрозобензолов 6а,б. Замещению атома фтора, а не конденсации с участием нитрозогруппы способствует высокая нуклеофугность атома фтора и наличие в орто-положениях к нитрозогруппе двух атомов брома, затрудняющих ее пространственную доступность в 2,6-дибром-4-фторнитрозобензоле 5.

Продукты 6а,б оказались хорошими субстратами для синтеза 2,1,3-бензоксадиазолов. На основе соединений 6а,б были получены 4-бром-6-(4-Я-фенокси)-2,1,3-бензоксадиазолы 7а,б.

I

Схема 3

Я - Ме(а). |-Вч(6)

!

2.2. Синтез и химические свойства 7-бром-]\-1*-2,1,3-бе11зок:садиазол-5-аминов и 2-|(7-бром-2,1,3-бензоксадиазол-5-ил)-К-амино]этанолов

Предложен способ получения аминопроизводных 2,1,3-6ензоксадиазолов, содержащих вторичную аминогруппу в положении 6 без выделения соответствующих аминонитрозобензолов.

Синтез осуществляется последовательно и включает две стадии:

а) Замещение атома фтора в 2,6-дибром-4-фторнитрозобензоле 5 под действием первичного амина. Эта стадия проводится при внешнем охлаждении, к раствору 4-фтор-2,6-дибромиитрозобензола 5 в ДМСО приливается небольшой избыток первичного амина. После завершения стадии аминирования исходного 2,6-дибром-4-фторнитрозобензола реакционную массу нагревают до комнатной температуры.

б) Циклизация 2-бром-6-азидо-4-аминонитрозобензолов. К реакционной массе прибавляется водный раствор азида натрия, после чего реакционная масса ; нагревается до 50-60 °С и выдерживается в течение 40 мин.

Схема 4

R - Рг (a). Bu (б), í-Bu (в) !

Проведение синтеза таким способом является более удобным и позволяет синтезировать 2,1,3-бензоксадиазолы, содержащие в молекулах вторичную аминогруппу. Таким же способом можно получить и беизофуразаны, содержащие в молекулах остатки аминоспиртов 8г,д.

Дальнейшая функционализация веществ 8г,д проводилась с использованием бензолсульфохлорида (БСХ) в пиридине при 50-60 °С. В полученных веществах 8г,д гидроксильная группа замещается атомом хлора.

Схема 5

R EI (г); Ме(д)

Вещества 9а,б содержат подвижный атом хлора, удаленный от карбоцикла и ! способный подвергаться нуклеофильному замещению. В связи с этим соединения !

9а,б вводились в реакцию с избытком азида натрия, что приводит к замещению атома хлора азидогруппой.

Схема 6

9а,б 10а,б

Я = Н(а),Ме(б)

Синтезированные соединения 10а,б содержат линкерную азидогруппу и проявляют люминесцентные свойства, что открывает возможность их использования в качестве флуоресцентных меток модифицированных биомолекул.

3. Изучение реакций 1\-алкил-6(4)-бром-2,1,3-бензоксадиазол-4(6)-аминов с терминальными алкинами

Данные об использовании 4,6-дибром- и 4(6)-бром-6(4)-алкиламино-2,1,3-бензоксадиазолов 1, 4, 8 в качестве субстратов в реакции кросс-сочетания нам не известны. Установлено, что бромбензоксадиазолы, содержащие атомы брома в положениях 4 4а,б или 6 8е,ж, а также в обоих положениях 1, реагируют с фенилацетиленом и 2-метилбут-3-ин-2-олом в кипящем бензоле в присутствии трифенилфосфина, хлорида палладия (И), иодида меди и триэтиламина в атмосфере аргона. Продукты реакции — соответствующие алкинилбензофуразаны 11-13 — выделялись обычным способом.

Схема 7

I.К1 =й! = Вг:4, в! <=Вг,1)' .щаисн,),0 (■). N(01,), (б);8. Н' = Вг, I? - Ы(СН,СН,),0 <е). Ы(СП,), (ж).

II. Я1 = РЬ (а), С(СЦ),ОП (б); 12 13 И1 = РЬ к1 = М(С1ЦСН,},() (а). М(СН,)3 (б); Я5 = С(СН,),ОН, Й4 = ЩГЦСНДО (в)

Бензофуразаны, содержащие в молекулах ацетиленовый фрагмент, связанный с карбоциклом проявляют люминесцентные свойства и имеют максимумы эмиссии в области 500-600 нм. На рисунках 3 и 4 приведены спектры флуоресценции соединений 12а, 136. Максимумы эмиссии 4-морфолино-6-фенилэтинил-2,1,3-бензоксадиазола 12а и 4-фенилэтинил-6-диметиламино-2,1,3-бензоксадиазола 136 находятся в длинноволновой области и составляют 581 и 542 нм соответственно. Поглощение и флуоресценция исследуемых веществ 11-13 именно в указанных областях делают возможным их использование в качестве биолюминесцентных меток.

I "... »-"43 1 Г \ >_-*»«»

/ \

! ! / \ \ /

\J \ 1 \

•150 nif) V \

А

Рисунок 3. Спектры поглощения и Рисунок 4. Спектры поглощения и

флуоресценции 4-морфолино-6-фенилэтинил- флуоресценции 4-фенилэтинил-6-

2,1,3-бензоксадиазола 12а (Ацетонитрил, диметиламино-2,1,3-бензоксадиазола ]3б

С=3.3-10° моль/л) (Ацетонитрил, С=1.5-10"' моль/л)

Соединения 12в и 13в могут быть использованы как промежуточные вещества для синтеза бензофуразанов, содержащих в молекуле этинильный остаток и аминогруппу. Установлено, что наиболее удобным вариантом проведения данной реакции является кипячение бензофуразанов 12в, 13в в толуоле в присутствии гидроксида калия.

Схема 8

О

о

^ПМс)3ОН

счет наличия

молекулах

»СОН.

СМ1(Ме),С- [ [ \)

12в 14

Полученные бензофуразаны 14, 15 за электронодонорных заместителей имеют спектры эмиссии и поглощения в длинноволновой области спектра, там, где для большинства биомолекул поглощение электромагнитного излучения не характерно. Присутствие терминального этинильного фрагмента позволяет использовать соединения 14, 15 в «клик»-химии в качестве флуоресцентных меток модифицированных нуклеозидов и олигонуклеотидов.

4. Изучение реакций 4-Г1-ами110-7-нитро-2,1,3-бешоксадиазолов с нитрующими и иитрозирующими реагентами

В поисковых системах Яеахуз и 8с1Ртс1ег информация о нитровании и нитрозировании аминобензофуразанов практически отсутствует. Согласно известным методикам нами получены 2,1,3-бензоксадиазолы 17а,б, содержащие в молекулах остатки вторичных ароматических аминов.

Схема 9

16 17а,б

17, X - СН,, И - Н (а). X = -, И - МЦб)

Бензофуразаны 17а,б содержат функциональные группы, чувствительные к действию ни трующих и нитрозирующих реагентов. Установлено, что субстрат 176 при обработке нитрующей смесью или нитрозилсерной кислотой нитруется в активное положение бензольного кольца. Вступление нитрогруппы именно в оргио-положение по отношению к аминогруппе подтверждено встречным синтезом — взаимодействием 4-хлор-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазола 16 с 2-нитротолуидином. Интересно, что продукт 18 также образуется и при обработке субстрата 176 нитритом натрия в уксусной кислоте.

Схема 10

ДсОН

Образование 4-(2-нитро-4-метилфениламино)-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазола 18 может объясняться механизмом, включающим на одной из стадий перегруппировку по Фишеру-Хеппу: в результате взаимодействия соединения 176 с нитрозирующими реагентами сначала образуется М-нитрозосоединение 19, которое далее перегруппировывается в С-нитрозосоединие 20, а последнее затем окисляется кислородом воздуха в динитропроизводное 2,1,3-бензоксадиазола 18.

Схема 11

™ 19 2(1 18

Превращение 176—>18 при действии нитрозилсерной кислоты может протекать по катион-радикальному пути. Катион нитрозония, генерированный из нитрозилсерной кислоты, атакует вторичную аминогруппу, образующийся при этом катион-радикал 21 может через ряд промежуточных продуктов превращаться в 4-(2-нитро-4-метилфениламино)-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол 18.

Схема 12

17» 21 18

Кроме предложенных выше маршрутов нельзя исключить и прямое нитрозироваиие субстрата 176 в С-нитрозосоединение 20.

Нами найдено, что 4-бензиламино-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол 17а относится к нитрующим и нитрозирующим реагентам иначе, чем бензофуразан 176. Реакция соединения 17а с нитрующей смесью протекает с участием карбоцикла бензофуразанового фрагмента, а не фенильного остатка бензильного радикала. Очевидно, что бензиламиногруппа активирует карбоцикл бензоксадиазола 17а к электрофильному нитрованию, а фенильная группа в исходном веществе оказывается менее активной. В то же время обработка субстрата 17а нитрозилсерной кислотой приводит к образованию двух продуктов - 4-бензиламино-5,7-динитро-2,1,3-бензоксадиазола 22 и гидроксиимидазола 23.

Схема 13

По-видимому, циклизация вещества 17а в гидроксиимидазол 23 протекает по радикальному механизму.

Установлено, что нагревание реакционной массы, полученной после взаимодействия 4-бензиламино-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазола 17а с азотистой кислотой приводит к образованию продукта 22. Вероятно, что первичным продуктом реакции субстрата 17а с азотистой кислотой является 1Ч[-нитрозосоединение 24, которое в результате нагревания превращается в динитропроизводное 22.

Схема 14

ЫаЫО,, АсОН

реакционная масса

Данные УФ- и ЯМР 'Н-спектроскопии подтверждают

структуру, предложенную для 2,1,3-бензоксадиазола 24, который образуется со степенью чистоты -90%. На рисунке 5 представлены ЭСП бензофуразанов 17а и 24, максимум поглощения соединения 17а составляет 450 нм, а вещества 24 — 380 нм. После выдержки реакционной массы в течение 20 ч, были повторно записаны ЭСП реакционной массы, при этом профиль спектра и максимумы поглощения были практически идентичными соединению 17а. Вероятнее всего протекает

денитрозирование и образование исходного бензофуразана 17а.

Рисуиок 5. ЭСП 4-бензиламино-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазола (17а), 4-(Ы-нитрозобензиламино)-7-китро-2,1,3-бензоксадиазола (24), реакционная масса после 20-ти часовой выдержки (24) (ДМСО, С=1-10'4моль/л)

Установлено, что нагревание бензофуразана 24 в уксусной кислоте приводит к образованию двух продуктов — исходного 4-бензиламино-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазола 17а и 4-бензиламино-5,7-динитро-2,1,3-бензоксадиазола 22. Нагревание того же субстрата 24 в присутствии мочевины приводит только к образованию исходного

бензиламинобензофуразана.

Схема 15

По-видимому, нагревание ТЧ-нитрозосоединения 24 в уксусной кислоте с мочевиной приводит к его денитрозированию и реагированию катиона нитрозония с мочевиной, что исключает перегруппировку Фишера-Хеппа. В отсутствии мочевины, очевидно, имеет место и денитрозирование, и перегруппировка Фишера-Хеппа, а затем дальнейшее окисление С-нитрозосоединения до динитробензофуразана.

Производные 2,1,3-бензоксадиазола, содержащие нитрогруппу в карбоцикле бензофуразана или в арильном остатке, пригодны для дальнейших модификаций.

5. Флуоресцентные свойства 2,1,3-бензоксадназолов и их применение в качестве флуоресцентных меток

Бензофуразаны, содержащие в молекулах электронодонорные заместители, имеют максимумы эмиссии в длинноволновой области. Так, максимум эмиссии для б-морфолино-4-(4-йодфенокси)-2,1,3-бензоксадиазола 36 составляет 540 нм (рисунок 6), а для 2-[(7-бром-2,1,3-бензоксадиазол-5-ил)-метиламино]этанола 573 нм (рисунок 7). Такие спектральные данные позволяют использовать производные 2,1,3-бензоксадиазолов в качестве флуоресцентных меток.

А А 1 / \ д

\ / / 1 1 / \ 1/

Рисунок 6. Спектры поглощения и флуоресценции 6-морфолино-4-(4-

йодфенокси)-2,1,3 -бензоксадиазола 36 (Ацетонитрил, С=1.810"4 моль/л)

Рисунок 7. Спектры поглощения и флуоресценции 2-[(7-бром-2,1,3-

бензоксадиазол-5-ил)-метиламино]этанола 8д, (Ацетонитрил, С=3.2Ю"5 моль/л)

Автор благодарит за помощь в записи спектров флуоресценции В.В. Королева, к.х.н., доцента, научного сотрудника лаборатории механизмов реакций Института химической кинетики и горения СО РАН.

Нами была исследована возможность введения 2,1,3-бензоксадиазолов 14,15, содержащих в молекулах терминальную тройную связь и аминогруппу, в модифицированные нуклеозиды. Введение флуоресцентных красителей в положение 5 2'-дезокси-5-йодцитидина 26 проводилось с помощью реакции Соногаширы.

Схема 16

При превращении 25—>26 или 25—>27 в качестве растворителя использовался ДМСО, реакция проводилась в течение нескольких дней при температуре 70-80 °С; выход целевых продуктов составил 30-40%.

Полученные нуклеозидные производные 26, 27 могут быть использованы для получения амидофосфитных мономеров для стандартного твердофазного синтеза или трифосфатов для ферментативного синтеза модифицированных (флуоресцентными красителями) олигонуклеотидов.

Для соединений 14,15 и полученных на их основе нуклеозидов 26, 27 были записаны спектры флуоресценции (рисунке 8, 9).

I" 1»

><яГ/\/' /%

% Г1

» Чп Ш \ixr-Xi »«S

■7W ■ MSé

х1Л

ж

Рисунок 8. Спектры возбуждения и флуоресценции 4-морфолин-4-ил-6-этинил-2,1,3-бензоксадиазола 14 и 5-(2-(4-этинил-6-морфолинобензо[с][1,2,5]оксадиазолил))-2'-дезоксицитидин 2f> (Трис HCI буфер 0.1 М:ЕЮН=1:1, С=7-10 5моль/л)

Рисунок 9. Спектры возбуждения и флуоресценции 6-морфолин-6-ил-4-этинил-2,1,3-бензоксадиазола 15 и 5-(2-(6-этинил-4-морфолинобензо[с][1,2,5]оксадназолил))-2'-дезоксицитидин П (Трис HCl буфер 0.1 М:ЕЮН=1 :1, С=7-10 5моль/л)

Данная часгь работы была выполнена в Институте химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН совместно с сотрудниками лаборатории органического синтеза, к.х.н. Васильевой C.B. и д.х.н. Силышковым В.Н.

Максимум эмиссии для соединения 26 незначительно сдвинулся в коротковолновую область (с 603 нм до 575 нм). Для соединения 27 максимум эмиссии остается таким же, как и для соединения 15 и составляет 560 нм. Длинноволновая эмиссия 564-596 нм и ее достаточно высокая интенсивность для полученных нуклеозидов 26, 27 позволяют использовать их в качестве флуоресцентных меток олигонуклеотидов.

Флуоресцентные красители, содержащие линкерную азидогруппу, могут быть введены в молекулы нуклеозидов или олигонуклеотидов с помощью реакции 1,3-диполярного азид-алкинового циклоприсоединения. 1Ч-(2-Азидоэтил)-М-метил-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-амин 30 был синтезирован из 4-хлор-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазола 16 по следующей схеме.

Схема 17

Полученное соединение 30 с помощью клик-реакции вводилось в 5 -пропаргилоксиметил-2'-дезоксиуридии 31.

Схема 18

" "" и

Реакция протекает при температуре 23-25 °С в течение 10-18 ч и согласно ВЭЖХ-анализу происходит 100% конверсия исходного 5-пропаргилоксиметил-2'-дезоксиуридина 31 в продукт 32. Полученные вещества выделялись и очищались экстракцией,

хроматографией на силикагеле и на силикагеле с обращенной фазой. В результате был получен чистый продукт 32 с выходом 53%.

Для исходного соединения 30 и полученного на его основе нуклеозида 32 были записаны спектры флуоресценции, максимумы эмиссии соединений 30 и 32 совпадают и составляют 538 нм (рисунок 10).

!

Рисунок 10. Спектры возбуждения и флуоресценции 1Ч-(2-Азидоэтил)-1Ч-метил-7-нитро-2,1,3-бензокеадиазол-4-амин 30 и 5-(1-(2-(метил(7-

нитробензо[с][1,2,5]оксадиазол-4-ил)амино)этил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)метокси)метил)-2'-дезоксиуридин 32 (Трис НС1 буфер 0.1М:ЕЮН=1:1, С=710" 3моль/л).

Выводы:

1. Установлено, что в 4,6-дибром-2,1,3-бензоксадиазоле бром, находящийся в положении 4 обладает большей нуклеофильной подвижностью по отношению к арилат- и арилтиолят-ионам.

2. Обнаружено, что 2,6-дибром-4-фторнитрозобензол реагирует с 4-Я-фенолами с образованием 4-(4-11-арилокси)-2,6-дибромнитрозобензолов, субстратов для синтеза 6-(4-К-арилокси)-6-бром-2,1,3-бензоксадиазолов.

3. Предложен способ получения 7-бром-Ы-Я-2,1,3-бензоксадиазол-5-аминов в одну технологическую стадию из 2,6-дибром-4-фторнитрозобензола и на их основе М-(2-азидоэтил)-7-бром-Т\Г-11-2,1,3-бензоксадиазол-5-аминов.

4. Предложен способ получения 2,1,3-бензоксадиазолов, содержащих в молекулах остатки терминальных алкинов и аминогруппу, пригодных для использования в качестве люминесцентных меток.

5. Установлено различное отношение 4-(11-амино)-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазолов к нитрующим и нитрозирующим реагентам.

6. Показана возможность использования производных 2,1,3-бензоксадиазолов в качестве люминесцентных меток нуклеозидов. С помощью реакции Соногаширы на основе 4(6)-морфолин-4(6)-ил-6(4)-этинил-2,1,3-бензоксадиазолов получены люминесцентные производные дезоксицитидина, а с помощью «клик»-реакции на основе М-(2-азидоэтил)-М-метил-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-амина — производные дезоксиуридина.

Основное содержание диссертации опубликовано в работах:

1. Кузнецова, А.С. Синтез 4(6)-арилокси- и 4-арилтио-2,1,3-бензоксадиазолов / А.С. Кузнецова, JI.M. Горностаев, Г.А. Сташина, С.И. Фирганг // Известия Академии наук. Серия химическая. - 2013. -№ 9. - С. 2079-2083.

2. Горностаев, JI.M. Взаимодействие М-алкил-6(4)-бром-2,1,3-бензоксадиазол-4(6)-аминов с терминальными алкинами / JI.M. Горностаев, А.С. Кузнецова, Н.В. Геец, Е.А. Бочарова // Журнал органической химии. — 2012. — Т.48. — Вып.1. — С. 142- 144.

3. Кузнецова, А.С. Реакции 4-К-амино-7-нитро-2,1,3-бензоксадиазолов с нитрующими и нитрозирующими реагентами / А.С. Кузнецова, Л.М. Горностаев // Бутлеровские сообщения - 2013. - Т. 33. - №3. - С. 88-92.

4. Vasilyeva, S.V. Novel fluorescent pyrimidine nucleosides containing 2,1,3-benzoxadiazole and naphtho-[l,2,3-cd]indole-6 (2H)-one fragments / S.V. Vasilyeva, A. S. Kuznetsova, J. G. Khalyavina, V. A. Glazunova, A. A. Shtil, L. M. Gornostaev, V. N. Silnikov//Nucleosides, Nucleotides, Nucleic acids -2014. - Vol. 33:9. —P.615 — 625.

5. Кузнецова, А.С. О взаимодействии 4-11-амино-7-нитробензофуразанов с азотистой кислотой / А.С. Кузнецова, А.Е. Девяшина, Е.А. Бочарова, Л.М. Горностаев // Материалы III Региональной научно-практической конференции, посвященной 175-летию со дня рождения Д.И. Менделеева и 140-летаю со дня открытия Периодического закона химических элементов «Химическая наука и образование Красноярья». — Красноярск, КГПУ им. В.П. Астафьева. — 2009. -С. 36-41.

6. Горностаев, Л.М. Реакции некоторых галогеннитропроизводных бензо[1,2,5]оксадиазолов с нуклеофильными и электрофильными реагентами / Л.М. Горностаев, А.Е. Девяшина, А.С. Кузнецова, Е.А. Бочарова, Г.А. Сташина, С.И. Фирганг // Материалы Всероссийской конференции по органической химии, посвященной 75-летию Института органической химии им. Н.Д. Зелинского. - Москва, ИОХ им. Н.Д. Зелинского. - 2009. - С. 151.

7. Кузнецова, А.С. Отношение 4-11-амино-7-нитробензофуразанов к нитрующим и нитрозирующим реагентам / А.С. Кузнецова, Л.М. Горностаев // Материалы IV Региональной научно-практической конференции «Химическая наука и образование Красноярья». - Красноярск, КГПУ им. В.П. Астафьева. - 2010. -С. 75-80.

8. Геец, Н.В. Взаимодействие производных 2,1,3-бензоксадиазолов с фенилацетиленом / Н.В. Геец, Е.А. Бочарова, А.С. Кузнецова, Л.М. Горностаев // Материалы IV Региональной научно-практической конференции «Химическая наука и образование Красноярья». - Красноярск, КГПУ им. В.П. Астафьева. - 2010. - С. 26 - 30.

9. Кузнецова, A.C. Синтез 2,1,3-бензоксадиазолов, содержащих алкильные заместители / A.C. Кузнецова, Е.А. Бочарова, Н.В. Геец, Л.М. Горностаев // Тезисы International Symposium «Advanced Science in Organic Chemistry». -Mischor, Crimea. - 2010. -С. 177.

10. Геец, H.B. Изучение взаимодействия производных 2,1,3-бензоксадиазолов с терминальными алкинами / Н.В. Геец, A.C. Кузнецова, Е.А. Бочарова II Материалы V Региональной научно-практической конференции, посвященной Году химии «Химическая наука и образование Красноярья». - Красноярск, КГГТУ им. В .П. Астафьева. - 2011. - С. 24 - 26.

11. Geets, N. V. Synthesis and properties of some alkynylbenzofurazanes / N. V. Geets, L.M. Gornostaev, E.A. Bocharova, A.S. Kuznetsova // Abstracts of International conference «Current topics in organic chemistry». — Novosibirsk. — 2011. — C.l 17.

12. Горностаев, Л.М. Отношение галогеннитропроизводных бензо[1,2,5]оксадиазолов к нитрующим и нитрозирующим реагентам / Л.М. Горностаев, A.C. Кузнецова, Е.А. Бочарова, Г.А. Сташина, С.И. Фирганг // Тезисы XIX Менделеевского съезда по общей и прикладной химии. -Волгоград.-2011.-T. 1.-С. 167.

13. Кузнецова, A.C. Взаимодействие 4,6- дибром-2,1,3-бензоксадиазола с некоторыми S- и О-нуклеофилами / A.C. Кузнецова, Л.М. Горностаев // Материалы VI Региональной научно-практической конференции, посвященной 80-летию Красноярского государственного педагогического университета им. В.П. Астафьева и 70-летию Красноярского государственного медицинского университета им. профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого «Химическая наука и образование Красноярья». — Красноярск, КГПУ им. В.П. Астафьева. - 2012. - С. 56 - 59.

14. Васильева, C.B. Синтез флуоресцентных аналогов дезоксицитидина / C.B. Васильева, В.Н. Сильников, Л.М. Горностаев, Н.В. Геец, A.C. Кузнецова // Материалы VI Региональной научно-практической конференции, посвященной 80-летию Красноярского государственного педагогического университета им. В.П. Астафьева и 70-летию Красноярского государственного медицинского университета им. профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого «Химическая наука и образование Красноярья». — Красноярск, КГПУ им. В.П. Астафьева. - 2012. - С.56 - 59.

15. Талдыкина, Д.С. Синтез производных 2,1,3-бензоксадиазолов, содержащих азидогруппу / Д.С. Талдыкина, Ю.А. Шупыро, Н.В. Таранин, A.C. Кузнецова // Материалы XIV Всероссийской (с международным участием) научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Молодежь и наука XXI века». — Красноярск, КГПУ им. В.П. Астафьева. -2013.-С. 28.

16. Кузнецова, A.C. Синтез новых 2,1,3-бензоксадиазолов и их связывание с аналогами дезоксицитидина / A.C. Кузнецова, Л.М. Горностаев, C.B.

Васильева, В.Н. Сильников // Тезисы кластера конференций по органической химии «ОргХим-2013». - Санкт-Петербург. - 2013. - С. 158.

17. Талдыкина, Д.С. Синтез 4-арилокси-6-амино-2,1,3-бензоксадиазолов / Д.С. Талдыкина, Ю.А. Шупыро, A.C. Кузнецова, JI.M. Горностаев // Тезисы Всероссийской научной конференции, посвященной 80-летию химического факультета ИГУ «Теоретическая и экспериментальная химия глазами молодежи». - Иркутск. - 2013. - С. 147 - 148.

18. Талдыкина, Д.С. Различные пути синтеза производных 2,1,3-бензоксадиазолов, содержащих линкерную функциональную группу / Д.С. Талдыкина, Ю.А. Шупыро, A.C. Кузнецова // Материалы VII Региональной научно-практической конференции, посвященной 180-летию со дня рождения Д.И. Менделеева «Химическая наука и образование Красноярья». -Красноярск, КГПУ им. В.П. Астафьева. - 16 мая, 2014. - С. 56 - 57.

19. Шупыро, Ю.А. Синтез и химические свойства 4-арилокси(арилтио)-6-бром-2,1,3-бензоксадиазолов / Ю.А. Шупыро, Д.С. Талдыкина, A.C. Кузнецова // Материалы VII Региональной научно-практической конференции, посвященной 180-летию со дня рождения Д.И. Менделеева «Химическая наука и образование Красноярья». - Красноярск, КГПУ им. В.П. Астафьева. -16 мая, 2014.-С. 57-59.

20.Кузнецова, A.C. Новый способ получения 6-амино-4-галоген-2,1,3-бензоксадиазолов / A.C. Кузнецова, Ю.А. Шупыро // Материалы XV Международной научно-практической конференции имени профессора Л.П. Кулёва студентов и молодых ученых «Химия и химическая технология в XXI веке». - Томск. - 26-29 мая 2014. - С. 133-134.

21 .Талдыкина, Д.С. Синтез производных 2,1,3-бензоксадиазолов, содержащих атом галогена, удаленный от карбоцикла / Д.С. Талдыкина, Ю.А Шупыро, A.C. Кузнецова // Материалы XV Международной научно-практической конференции имени профессора Л.П. Кулёва студентов и молодых ученых «Химия и химическая технология в XXI веке». - Томск. - 26-29 мая 2014 -С. 155-157.

22.Шупыро, Ю.А. Синтез некоторых 4-арилокси-6-амино-2,1,3-бензоксадиазолов / Ю.А. Шупыро, Д.С. Талдыкина, A.C. Кузнецова // Материалы XV Международной научно-практической конференции имени профессора Л.П. Кулёва студентов и молодых ученых «Химия и химическая технология в XXI веке». - Томск. - 26-29 мая 2014. - С. 163-164.

Подписано в печать 18.11.2014. Формат 60x84/16. Бумага «Svetocopy», «ColorCopy». Печать XEROX. Усл.печл. 1,4. Уч.-изд.л. 0,8. Заказ 2/18.11.14- 10. Тираж 120 экз.

ООО «СКАН», Студенческий центр, 634050, Томская область г. Томск, Ул. Советская,80, тел.: (3822) 56-17-26, e-mail: ntb@scan.tom.ru,

сайт: scan.tom.ru.