Ингибирование неорганической пирофосфатазы из дрожжей монеэфирами фосфорной кислоты различного строения тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

ВВЕДЕНИЕ

Глава I. ИССЛЕДОВАНИЕ МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ФЕРМЕНТОВ И

СТРОЕНИЯ ИХ АКТИВНОГО ЦЕНТРА С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА

АФФИННОЙ МОДИФИКАЦИИ (Обзор литературы)

1. Оксиредуктазы.

2. Трансферазы.

3. Гидролазы.

4. Лиазы.

5. Изомеразы.

6. Лигазы.

Глава П. ОСОБЕННОСТИ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ НЕОРГАНИЧЕСКОЙ ПИРО-ФОСФАТАЗЫ ИЗ ДРОЖЖЕЙ С МОНОЭФИРАМИ ФОСФОРНОЙ КИСЛОТЫ РАЗЛИЧНОГО СТРОЕНИЯ (Обсуждение результатов) . . .4V.

1. Центры связывания аффинных ингибиторов неорганической пирофосфатазы.

2. Кооперативные взаимодействия субъединиц в неорганической пирофосфатазе.

3. Роль четвертичной структуры пирофосфатазы в аффинной модификации.

4. Расположение аффинных ингибиторов в активном центре неорганической пирофосфатазы.

Глава Ш. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

1. Исходные вещества.

2. Методы исследования. III

2.1. Хроматография. III

2.2. Обнаружение веществ на хроматограммах.III

2.3. Определение радиоактивности.III

2.4. Количественное определение неорганического фосфата.

2.5. Количественное определение содержания фосфора в модифицированном белке.

2.6. Определение концентрации белка. а) Определение концентрации нативного фермента. . . . ИЗ б) Определение концентрации иммобилизованного фермента.ИЗ

2.7. Определение ферментативной активности пирофосфатазы.ИЗ

3. Исследование реакции неорганической пирофосфатазы с моноэфирами фосфорной кислоты.

3.1. Инактивация пирофосфатазы под действием метил-фосфата, фосфогликолевой кислоты, N-ацетилфос-фосерина, О-фосфоэтаноламина, 0-фосфопропанол~ амина и метилового эфира О-фосфосерина.

3.2. Реакция пирофосфатазы с монозфирами фосфорной кислоты в присутствии субстрата ~ неорганического пирофосфата.

3.3. Расчет констант скорости и констант ингибирования.

3.4. Модификация неорганической пирофосфатазы моноэфирами фосфорной кислоты.

3.5. Зависимость скорости инактивации фермента от концентрации моноэфиров фосфорной кислоты.

3.6. Влияние ингибиторов на кинетику гидролиза пирофосфата магния.

3.7. Получение фермент-субстратного комплекса, стабилизированного фторидом.

3.8. Влияние моноэфиров фосфорной кислоты на реактивацию фермент-субстратного соединения пирофосфатом натрия.

3.9. Влияние моноэфиров фосфорной кислоты на реактивацию фермент-субстратного соединения триполифосфатом натрия.

ЗЛО. Получение пирофосфатазы, модифицированной на 50$ метилфосфатом, Ы-ацетилфосфосерином, О-фосфопропаноламином или О-фосфоэтаноламином. . 118 3.II. Изучение кинетики реактивации фермента, модифицированного метилфосфатом, Ы-ацетилфос-фосерином или О-фосфопропаноламином, под действием пирофосфата натрия, триполифосфата натрия и хлористого магния.

4. Кооперативные взаимодействия субъединиц в неорганической пирофосфатазе.

4.1. Получение пирофосфатазы с одной модифицированной субъединицей.

4.2. Протеолиз субтилизином нативной и модифицированной пирофосфатазы.

4.3. Протеолиз субтилизином неорганической пирофосфатазы, модифицированной Н-ацетилфосфосерином, в присутствии имидодифосфата натрия и

5. Исследование значения четвертичной структуры пирофосфатазы для протекания аффинного ингибирования.

5.1. Иммобилизация пирофосфатазы.

5.2. Получение иммобилизованной субъединицы неорганической пирофосфатазы и реконструкция димерной формы фермента.

5.3. Исследование влияния монофосфатов на иммобилизованные производные пирофосфатазы во времени.

5.4. Влияние моноэфиров фосфорной кислоты на кинетику гидролиза пирофосфата магния иммобилизованными производными фермента.

6. Выделение пептида, содержащего аминокислоту, модифицированную метилфосфатом.

6.1. Последовательная модификация пирофосфатазы метилфосфатом и [^Н]-Ы-метилгидроксиламином.

6.2. Выделение и характеристика пептида, содержащего аминокислоту, модифицированную метилфосфатом.

6.3. Определение Ы-концевой аминокислоты методом дансилирования /208/.

6.4. Определение аминокислотного состава меченого пептида.

ВЫВОДЫ.

Объектом исследования настоящей работы является неорганическая пирофосфатаза (КФ 3.6.1.1) из пекарских дрожжей, катализирующая гидролиз пирофосфата, триполифосфата и их моноэфиров в присутствии ионов двухвалентных металлов /1-5/. Специфичность фермента зависит от природы ионов металла: в присутствии Мд проходит только гидролиз неорганического пирофосфата /2/ и триполифосфата /3/, a. Zn^j Мъ2'* и CoZ+ активируют реакцию расщепления как этих соединений, так и их моноэфиров /1,6/. Пирофосфатаза имеет три центра связывания ионов металла, отличающиеся по сродству. Один из них имеет высокое сродство (Kj = 2»10"^ М). Считают, что этот центр необходим для связывания комплекса пиро-фосфат - /7/. Заполнение ионами металла второго центра с меньшим сродством (К2 = 10"^ М) обеспечивает протекание каталитической реакции в фермент-субстратном комплексе. Третий центр имеет очень низкое сродство (К^ = 8*10"^ М) /7-10/ и проявляется при рН> 8,5.

Молекула пирофоефатазы состоит из двух химически идентичных субъединиц, аминокислотная последовательность которых полностью установлена /11-13/. В настоящее время группой советских ученых завершено рентгеноструктурное исследование фермента с разрешением о

ЗА, на основании которого построена пространственная модель белка /14,15/.

Индивидуальная субъединица обладает пирофосфатазной активностью, т.е. четвертичная структура не является необходимой для катализа /16/. Кроме активного центра, каждая субъединица имеет ре-гуляторный центр, способный ковалентно связывать фосфат, фосфори-лироваться под действием АТР и присоединять полианионы - пирофос-фат, триполифосфат, ЭДТА и другие. Связывание этих анионов способ ствует удалению пирофосфата из активного центра фермент-субстратного комплекса, стабилизированного фторидом /17,18/.

При взаимодействии фермента с фосфатом (^20 мМ) одновременно с фосфорилированием регуляторного центра происходит синтез пи-рофосфата в активном центре /19/.

На основании изучения взаимодействия пирофосфатазы с фосфатр том в реакциях 0-обмена и синтеза пирофосфата удалось описать промежуточные продукты превращения фермент-субстратного комплекса и определить константы скорости отдельных стадий:

- МдЕпгПдРс + Щк ф МрЕиг+Рг

Согласно предложенной схеме, образующиеся в результате гидролиза две молекулы неорганического фосфата оказываются связанными с ионами магния. Они имеют разное сродство к пирофосфатазе и уходят с фермента не одновременно, а последовательно, причем первым освобождается фосфат, имеющий более электрофильный характер. Стадиями, определяющими скорость всего процесса гидролиза субстрата, является расщепление пирофосфата и уход обоих фосфатов из активного центра /20,21/.

Важным для понимания функционирования фермента является выявление существенных для активности аминокислотных остатков. Для неорганической пирофосфатазы известен ряд остатков, модификация которых приводит к ее инактивации.

О существовании функционально важных карбоксильных групп пирофосфатазы свидетельствует полное подавление ферментативной активности при обработке белка гидроксиламином, его Ы- и О-алкиль-ными производными и метиловым эфиром глицина /22,23/.

Куперман и сотр. установили наличие в активном центре фермента остатка аргинина. Этот вывод сделан на основании исследования ингибирующего действия фенилглиоксаля - специфического реагента на аргинин и лизин /24/. Использование меченого реагента позволило локализовать существенный остаток аргинина в первичной по-видимому, заключается в связывании субстрата.

Окисление одного остатка триптофана на субъединицу Н-бром-сукцинимидом приводит к полной инактивации пирофосфатазы. Модифицированный таким образом фермент имеет меньшее сродство к ионам металла по сравнению с нативным /26/.

Для функционирования фермента важны также остатки тирозина, т.к. блокирование 3-4 таких остатков с помощью тетранитрометана и П-ацетилимидазола. приводит к полной потере пирофосфатазной активности /27/.

С модификацией существенных остатков метионина, по-видимому, связана инактивация фермента при карбоксиметилировании пирофосфатазы иодацетамидом при рН 5,5 /28/.

Наличие остатков лизина в активном центре фермента было доказано при исследовании реакции белка с тринитробензолсульфокис-лотой /29,30/. Один остаток лизина в каждой субъединице реагирует с модифицирующим агентом быстрее, чем остальные 26. Такая модификация ведет к инактивации пирофосфатазы. рК блокируемого остатка белка составляет 8,6. Эта группа несет положительный заряд при нейтральном рН и может выступать в качестве донора протона на стадии распада пирофосфатной связи. Используя данные ре/нтгено-структурного анализа, можно предположить, что функционально важный остаток лизина занимает положение 197 в полипептидной цепи белковой молекулы.

Ряд модифицирующих агентов не инактивирует фермент даже при длительном выдерживании. К ним относятся соединения, специфически взаимодействующие с остатками серина,- диизопропилфторфосфат /31/, а также - с остатками цистеина - п-хлормеркурибензоат, диструктуре белка, им оказался 77 /25/. Роль этого остатка,

- 10 тиобиснитробензойная кислота, иодацетамид, цистеин /32,33/, (1-окси-2,2/,6,б/'-тетраметил-4-пиперидинил)-п-хлормеркурибензамид /34/. Это свидетельствует о том, что остатки серина и цистеина не принимают участия в катализе. Однако установлено, что под действием H^Ct^ и п-оксимеркурибензоата в 2 раза уменьшается максимальная скорость гидролиза пирофосфата магния и в 5-8 раз-фос-форилирование фермента и синтез связанного с белком пирофосфата. Кроме того, инактивация фермента иодом коррелирует с окислением двух остатков цистеина на молекулу белка. Следовательно, сульф-гидрильные группы фермента не принимают непосредственного участия в катализе, но их модификация отражается на активности фермента /35/.

Таким образом, неорганическая пирофосфатаза из пекарских дрожжей принадлежит к числу детально изученных в структурном отношении ферментов. Дальнейший прогресс в понимании механизма действия фермента требует идентификации аминокислотных остатков, участвующих в связывании субстрата и его каталитических превращениях, являющихся лигандами металлов-активаторов, а также установления функциональной роли четвертичной структуры. Последняя проблема представляет особый интерес, так как она является общей для понимания механизма функционирования олигомерных ферментов, состоящих из одинаковых субъединиц. Хотя мономер неорганической пирофосфатазы из дрожжей обладает полной ферментативной активностью, свойства субъединиц в составе димера. существенно различаются. Очень ярко это проявляется, например, при взаимодействии пирофосфатазы с моноэфирами фосфорной кислоты, являющимися ее аффиннцми ингибиторами. Можно было думать, что детальное исследование реакции пирофосфатазы с аффинными реагентами приблизит к пониманию значения субъединичной структуры и окажется плодотворным подходом для выявления функциональных групп фермента, участвующих в катализе. Поэтому целью настоящей работы являлось изучение особенностей взаимодействия пирофосфатазы с моноэфирами фосфорной кислоты различного строения, В работе показано, что ингибирование неорганической пирофосфатазы моноэфирами фосфорной кислоты является результатом модификации активного центра. Установлено, что для протекания необратимой инактивации необходима четвертичная структура. Экспериментально доказано, что причиной неодинакового поведения субъединиц в реакциях с аффинными ингибиторами являются кооперативные взаимодействия субъединиц, а не предсуществующая асимметрия димера. Предложена гипотеза расположения моноэфиров фосфорной кислоты в активном центре пирофосфатазы и высказано предположение о важности остатка Gtu 147 для катализа. Полученные результаты вносят вклад в понимание регуляторной роли четвертичной структуры фермента и намечают пути локализации групп активного центра,

В обзоре литературы обсуждается использование аффинных реагентов, являющихся производными фосфорной, пирофосфорной и три-полифосфорной кислот, для исследования механизма действия ферментов различных классов.

- 127 -ВЫВОДЫ

1. Проведено детальное исследование реакции неорганической пирофосфатазы из пекарских дрожжей с моноэфирами фосфорной кислоты, содержащими различные функциональные группы в органической части молекулы: метилфосфатом, фосфогликолевой кислотой, Н-ацетилфос-фосерином, метиловым эфиром фосфосерина, О-фосфоэтаноламином и О-фосфопропаноламином.

2. Доказано, что все эти реагенты взаимодействуют с активным центром пирофосфатазы. Введение дополнительных функциональных групп влияет на сродство ингибиторов к ферменту и на устойчивость образующейся ацилфосфатной связи.

3. Сравнение свойств иммобилизованных мономера и димера показало, что химическая модификация характерна для фермента, имеющего четвертичную структуру.

4. Установлено, что модификация пирофосфатазы моноэфирами фосфорной кислоты разного строения вызывает различные конформацион-ные изменения. Причиной неодинакового поведения субъединиц в ди~ мере является их кооперативное взаимодействие.

5. Проанализированы возможности расположения аффинных ингибиторов в активном.центре пирофосфатазы и сделано предположение о модификации остатка С£и-.Ш7. Высокая реакционная способность этого аминокислотного остатка и полная потеря ферментативной активности при его блокировании указывают на возможное участие

С Си. 147 в катализе.

1. Брага Э.А., Байков А.А., Аваева С.М. Роль ионов магния в гидролизе пирофосфата неорганической пирофосфатазой из дрожжей. - Биохимия, 1973, т. 38, № 2, с. 344-350.

2. Kunitz М. Crystalline inorganic pyrophosphatase isolated from baker's yeast* J.Gen,Physiol., 1952, v, 35, N 3» p. 423-449.

3. Шафранский Ю.А., Байков А.А,, Андрукович П.В., Аваева С.M. Сравнительное изучение кинетики Мд2+-активируемого гидролиза пирофосфата и триполифосфата неорганической пирофосфатазой из дрожжей. Биохимия, 1977, т. 42, № б, с. I244-I25I.

4. Kunitz М, Hydrolysis of adenosine triphosphate by crystalline yeast pyrophosphatase. J.Gen.Physiol., I9&2, v. 45, N I,p. 31-46.

5. Schleizinger M.J., Coon M.G. Hydrolysis of nucleotid triphosphates by yeast inorganic pyrophosphatase. Biochim. Biophys. Acta, i960, v. 41, N I, p. 3O-36.

6. Braga E.A., Avaeva S.M. The interaction of yeast inorganic pyrophosphatase with bivalent cations and pyrophosphate. -FEBS Lett., 1972, v. 27, N 2, p. 251-255.

7. Ridlington J.W., Bailer L.G. Yeast inorganic pyrophosphatase. Binding of p у rophophosphate, metal ion, and metal ionjpyro-phosphate complexes. J.Biol.Chem., 1972, v. 247, N 20,p. 7303-7307.

8. Braga E.A., Avaeva S.M. Activation of yeast inorganic pyrophosphatase from baker's yeast. Eur.J.Biochem., 1972,v. 26, N 2, p. 237-246.

9. Hohne W.E., Rapoport T.A. Binding of metal ions to the inorganic pyrophosphatase from ibaker's yeast. Eur.J. Biochem., 1973, v. 33, N 2, p. 323-33I.- 129 «

10. Мое О.A., Butler L.G. Yeast inorganic pyrophosphatase.2+1.. Kinetics of Mg -activation. J.Biol.Chem., 1972, v. 247, N 20, p. 7308-7314.

11. Hansen G., Eifler R., Heitmann P. The subunit structure of inorganic pyrophosphatase from baker's yeast. Acta biol. med. germ., 1972, v. 28, N 5, p. 977-987.

12. Heinrikson R., Sterner R., Noyes C., Gooperman B.S., Bruck-mann R. The subunit structure of inorganic pyrophosphatase. J.Biol.Chem., 1973» v, 248, N 7, p. 2521-2528.

13. Cohen S„, Sterner R., Keim P., Heinrikson R, Covalent structural analysis of yeast inorganic pyrophosphatase. -J.Biol.Chem., 1978, v. 253, N 3, P- 889-897.

14. Плаксина Е.А., Сергиенко О .В., Склянкина В.А., Аваева С.М. Получение иммобилизованного димера и мономера неорганической пирофосфатазы и доказательство каталитической активности субъединицы. Биоорган, химия, 1981, т. 7, № 3, с. 357-364.

15. Baykov A.A., Bakuleva N.P., Nazarova Т.A., Avaeva S.M.

16. Fluoride inhibition of inorganic pyrophosphatase II. Isolation and characterization of a covalent intermediate between enzyme and entire substrate molecule. Biochem. Biophys.

17. Acta, 1977, v. 481, N I, p. 184-194.

18. Бакулева Н.П., Костенко Е.Б., Байков A.A., Аваева С.М. Обнаружение и характеристика дополнительного центра присоединения субстрата и его аналогов у неорганической пирофосфатазы. Биохимия, 1981, т. 46, вып. 5, с, 832-840.

19. Bakuleva К.P., Nazarova T.I., Baykov A.A., Avaeva S.M. The phosphorylation of yeast inorganic pyrophosphatase and formation of stoichiometric amounts of enzyme-bound pyrophosphatase. FEBS Lett., 1981, v. 124, N 2, p. 245-247.

20. Cooperman B.S. The mechanism of action of yeast inorganic pyrophosphatase. in: Methods in Enzymology/Ed. S.Pestka. N.Y., L.: Acad. Press. Inc., 1982, v. 87, p. 526-548.

21. Spring В., Welch K.M., Cooperman B.S. Thermodynamics, kinetics, and mechanism in yeast inorganic pyrophosphatase catalysis of inorganic pyrophosphate: inorganic phosphate equilibration. Biochemistry, 1981, v. 20, N 22, p. 6^84

22. Финк Н.Ю., Назарова Т.И., Аваева С.М. Ингибирование неорганической пирофосфатазы из дрожжей метиловым эфиром глицина и гидроксиламинами. Химия природных соединений, 1975, т. 12, с. 235-240.

23. Аваева С.М., Воробьева Н.Н., Мельник М.С., Назарова Т.И. Реакция аспарагиновой кислоты активного центра неорганической пирофосфатазы из дрожжей с гидроксиламином и боргидридом натрия. Биоорган, химия, 1979, т. 5, № 10, с. 1570-1578.

24. Cooperman B.S., Chin N.Yu. Yeast inorganic pyrophosphatase

25. Negi Т., Samejima Т., Irie M. Studies on the tryptophan residues of yeast inorganic pyrophosphatase in relation to the enzyme activity. J.Biochem., 1972, v, 71, N1, p.29-37.

26. Heitmaim P., Mollerker M.J,, Uhlig N.J. The state of tyrosine in inorganic pyrophosphatase of baker's yeast. -Acta "biol. med. germ., 1972, v. 29, N 3, p. 551-560.

27. Yano Y., Negi Т., Irie M. Carboxymethylation of yeast inorganic pyrophosphatase. J.Biochem., 1973» v* 74, N I, P* 67-76. .

28. Склянкина В.А., Медведева И.В., Аваева C.M, Участие лизино-вых остатков неорганической пирофосфатазы из дрожжей в проявлениях каталитической активности. Докл. АН СССР, 1973, т. 221, с. 494-496.

29. Склянкина В,АМ Суранова Е.Д., Аваева С.М. Лизин в активном центре неорганической пирофосфатазы из дрожжей. Биоорган, химия, 1975, т.1, № 9, с. 1352-1356.

30. Аваева С.М., Назарова Т.И., Воробьева Н.Н. Взаимодействие неорганической пирофосфатазы из дрожжей с диизопропилфтор-фосфатом. Биохимия, 1970, т. 35, № 6, с, III3-IH7.

31. Аваева С.М., Ковальчук О.В. Влияние SH-реагентов на активность неорганической пирофосфатазы из дрожжей. Химия природных соединений, 1971, т. 6, с. 813-815. . .

32. Ковальчук О.В., Аваева СД. Сульфгидрильные группы неорганической пирофосфатазы из дрожжей. Химия природн. соед., 1974, т, 3, е.389-392. .

33. Шафранский Ю.А., Аваева С.М., Котельников А.И. Изучение- 132 свойств неорганической пирофосфатазы из дрожжей с помощью спин-метки на основе п-хлормеркуробензоата. Биоорган.химия, 1975, т. I, № 2, с. 203-207,

34. Байков А.А., Краснова В.И., Аваева С.М. Изменение функциональных свойств неорганической пирофосфатазы из дрожжей при модификации S'H-групп. Биоорган, химия, 1982, т. 8, R 2, с. 195-199.

35. Franzen J.S., Ruo I., Eichler A.J., Feingold D.S. UDP-glucose dehydrogenase: substrate binding stoichiometry and affinity. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1973» v* 50» N 2, p. 517-523.

36. Burger E., Gorisch H. Reaktive Gruppen am aktiven Zentrum der L-Histidinol :Niu£-Oxidoreduktase, einer bifunktionellen Dehydrogenase Hoppe-Seulor's Z. Physiol. Chem., 1980, v. 36I, N 9, p. 1273-1274.

37. Burger E., Gorisch H. Evidence for on essential lysine at the active site of L-histidinol: NAD+-oxydoreductase; a bifunctional dehydrogenase. Eur. J. Biochem., 1981, v. 118,ж i, p. 125-130.

38. Burger E., Gorisch H. An essential lysine at the active center of a bifunctional dehydrogenase; L -histidinol: НАБ-oxidoreductase. Biochem. Soc. Trans., 1981, v. 9, N 2, p. 121

39. Eccleston E.D., Thayer M.L., Kirkwood S. Mechanism of action of histidinol dehydrogenase and UDP-GLC-dehydrogenase. Evidence that the half reactions proceed on separate subunits. J.Biol.Chem., 1979, v. 254, N 22, p. II399-II404.

40. Thelander L., Larsson B. Active site of ribonucleoside diphosphate reductase from Escherichia coli, Inactivationof the enzyme by 2'-substituted ribonucleoside diphosphates.-J.Biol.Chem., 1976, v. 251, N 5, p. 1398-1405.

41. Hartman F.C. Haloacetol phosphates. Potential active-site reagents for aldolase, triose phosphate isomerase, and glycerophosphate dehydrogenase. I. Preparation and properties. -Biochemistry, 1970, v. 9, N 8, p. 1776-1782.

42. Bellini Т., Signorini M., Dallochio F., Hippa M. Affinity labelling of the ШШР -binding site of glucose-6-phosphate dehydrogenase from Candida utilis. Biochem, J., 1979*v. 183, N 2, p. 297-302.

43. Dallochio F., Mattenzzi M., Bellini T. Effect of the substrate on the binding of coenzyme and coenzyme analogues to 6-phosphogluconate dehydrogenase from Candida utilis, -J.Biol.Chem., 1981, v. 256, N 21, p. 10778-10780.

44. Minchiotti L., Ponchi S., Rippa M. Amino acid sequence around the pyridoxal-57-phosphate binding sites of 6-phosphogluconate dehydrogenase. Biochim. Biophys. Acta, 1981,v. 657, N I, p. 232-242.

45. Nincenzini M.T., Vanni P., Tortora P., Hanozet G.M., Guerritore A. Effect of pyridoxal-f/-phosphate on yeast glucose-6-phosphate dehydrogenase. Ital,J.Biochem., I98O,v. 29, и з, p. 206-207.

46. Camardella L., Romano M., Prisco G., Descalzi-Cancedda F. Human erythrocytes glucose-6-phosphate dehydrogenase: labelling of a reactive lysine residue by pyrido3ial-5/-phosphate.-Biochem. Biophys. Res. Coiamun., 19.81, v. 103, N 4, p. 1384-1389.

47. Gould K.G., Engel P.C. The reactions of pyridoxal-5^phosphate with the M^ and H4 isoenzymes of pig lactate dehydrogenase, Arch. Biochem. Biophys., 1982, v. 215, N 2, p. 498-507.

48. Gould K.G., Engel P.C. Modification of mouse testicular lactate dehydrogenase by pyridoxal-5/-phosphate. Biochem. J., 1980, v. 191, N 2, p. 365-371.

49. Ogawa H., Fujioka M. The reaction of pyridoxal-5/^-phosphate with an essential lysine residue of saccharopine dehyrogen-ase (L-lysine-forming). J.Biol.Chem., 1980, v. 255, N 15, p. 7420-7425.

50. Fujioka M. Active-site residues of saccharopine dehydrogenase (NAD^-lysine-forming) from baker's yeast. Biochem. Soc. Trans., 1981, v. 9, N 4, p.281-282.

51. Багиров Э.М., Кочетков С.Н., Габибов А.Г., Сащенко Л.П», Северин Е.с. Механизм действия с АМР-зависимой протеинки-назой. I. Изучение рН- и температурной зависимостей взаимодействия каталитической субъединицы фермента с АТР.

52. Мол,биология, 1983, т. 17, № I, с. 129-135.

53. Kochetkov S.N., Bulargina T.V., Sashchenko L.P., Severin E.S, Role of a histidine residue in the active site of cyclic AMP-dependent histone kinase. FEBS Lett., 1976, v. 71, N 2, p. 212-214.

54. Hoppe J., Freist W. Localization of the highaffinity ATP--site in adenosine-3/-5'-monophosphate-dependent protein kinase type. I. Photoaffinity labelling studies with 8-azi-doadenosine-5''-triphosphate. Eur. J. Biochem., 1979, v. 93, N I, p. I4I-I46.

55. Hayakawa Т., Perkins J.P., Walsh D.A., Krebs E.G. Studies on the subunit structure of rabbit skeletal muscle phospho-rylase kinase. Biochemistry, 1973, v. 12, N 4, p. 574-58O.

56. Carlson G.M., Bechtel P.J., Graves D.J. Chemical and regulatory properties of phosphorylase kinase and cyclic ЖР-dependent protein kinase. Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol, Biol., 1979, v. 50, p. 41-115.

57. Гуляева H.B., Вульфсон П.Л., Северин Е.С. Ингибирование активности киназы фосфорилазы аналогами АТР и связывание ихс субъединицами фермента. Биохимия, 1978, т. 43, № 2, с. 373-382.

58. Shenolikar S., Cohen P.T.W., Cohen P., Nairn А.С., Perry S.V. The role of calmodulin in the structure and regulation of phosphorylase kinase from rabbit skeletal muscle. Eur. J. Biochem., 1979, v. 100, N 2, p. 329-337.

59. King M.M., Carlson G.M. Interaction of phosphorylase kinase with the 23'-dialdehyde derivative of adenosine triphosphate. 2. Differential inactivation measured with various protein substrates. Biochemistry, 1981, v. 20, N 15, p. 4387-4393.

60. Gregory M.B., Kaiser E.T. Inactivation of phosphofructokinase by dialdehyde-ATP, Arch. Biochem. Biophys., 1979, v. 196,1. N I, p. 199-208.

61. Uyeda K. Reaction of phosphofructokinase with maleic anhydride, succinic anhydryde and pyridoxal-5'-phosphate. Biochemistry, 1969, v. 8, N 6, p. 2366-2373.

62. Setlow W., Mansuor Т.Е. Studies of heart phosphofructokinase. The effect of pyridoxal-5/-phosphate on enzyme activity and dissociation. Biochim. Biophys. Acta, 1972, v. 258, N I,p. I06-IX2.

63. Hinrichs M.V., Euzaguirre J. Affinity labeling of rabbit muscle pyruvate kinase with dialdehyde ADP. Biochim, Biophys. Acta, 1982, v, 70, N2, p. 177-185*

64. Kapoor M., Roland В. Negative cooperativity in the interaction of fructose-I,6-diphosphate with pyruvate kinase of Neurospora crassa. FEBS Lett., 1981, v. 12?, N 2, p. 255-257.

65. Stephanson L.G., Whiteley J.M. 5-fl"uoro-2'-deoxyuridine-5/--(p-azidophenylphosphate) a potential photoaffinity labelof thymidylate synthetase. J.Med.Chem., 1979, v. 22, N 8, p. 953-957.

66. Park J.S., Chang C.T.-C., Mertes M.P. Enzyme affinity of the 5»6-dihydroderivatees of the substrate and product of thymidylate synthetase catalysis. J.Med.Chem., 1979» v. 22,м 3, p. 319-321.

67. Matsuda A., Wataya Y., Santi D.V, 5-bTitro-2 '-deoxyuridylate a mechanism-based inhibitor of thymidylate synthetase, -Biochem. Biophys. Res. Commun., 1978» v. 84, N 3» p. 654-659•

68. Wataya Y., Matsuda A,, Santi D. Interaction of thymidylate synthetase with 5-ni"tro-2/-deoxyuridylate. J.Biol.Chem.,1980, v. 255, К 12, p. 5538-5544.

69. Maggiora L., Chang C.T.-C., Torrence P.E., Mertes M.P.! 5-Nitro-2 -deoxyuridine-5 -phosphate: a mechanism-basedinhibitor of thymidylate synthetase. J. siner. Chem, Soc.,1981, v. 103, N II, p. 3192-3198.

70. Santi D.V., Mc Henry C.S., Sommer H. Mechanism of interaction of thymidylate synthetase with 5-fluorodeoxyuridylate. Biochemistry, 1974, v. 13, N 3, p. 471-481.

71. Santi D.V., Mc Henry C.S., Perriard E. A filter assay for thymidylate synthetase using 5-flv.OTO-2-> deoxyuridylate as an active site titrant. Biochemistry, 1974, v. 13, N 3, p. 467-471.

72. Pogolotti A,, Ivantetich K,, Sommer H., Santi D.V. Thymidylate synthetase: studies on the peptide containing covalently bound 5-fluoro-2y-deoxyuridylate and 5,IO-metbylene-tetrahydrofolate. Biochem, Biophys. Res. Commun., I97&,v. 70, N 3, p. 972-978,

73. Wataya Y., Santi D.V., Active-site labeling of thymidylate synthetase with 5-fluoro-2/ -deoxyuridylate. in: Methods in Enzymology/Ed. Jakoby W.B., Wilchek M. II.Y., L: Acad. Pressinc., 1977, v. 46, p. 307-312.

74. Brouiletti C.B., Chang C.T.-C., Mertes M.P, 5-(o6 -bromo-acetyl)-2/-deoxyxiridine-5''-phosphate: a mechanism-based affinity label for thymidylate synthetase. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1979» v. 87, N 2, p. 613-619.

75. Brouilletti C.B., Chang C.T.-C., Mertes M.P. 5-(d6~bromo-acetyl-2/-deoxyuridine-5/-phosphate: an affinity label for thymidylate synthetase. J.Med.Chem., 1979» v. 22, N 12, p. I541-1544.

76. Kalman T.I,, Goldman D. Inactivation of thymidylate synthetase by a novel mechanism-based enzyme inhibitor: I-( /3 --D-2/-deoxyribofuranosyl)-8-azapurin-2-one-5'-monophosphate. Biochem, Biophys. Res. Commun., 1981, v. 102, II 2, p. 682-689.

77. Paris X., Llorens R., Arus C., Cuchillo C.M. The reaction of bovine pancreatic ribonuclease A with 6-chloropurine riboside 5'monophosphate. Evidence on the existence of a phosphatebinding subsite. Eur.J.Biochem., 1980, v. 105, К 3, P. 571-579.

78. Hartman F.C., Norton I.L. Detection of an essential sulf-hydryl group in phosphoglycerate mutase with an affinity-labeling reagent. J.Biol.Chem., 1976, v, 251, N 15,p. 4565-4569.

79. Tanase S., Kojima H., Morino Y., Pyridoxal-5'-phosphate binding site of pig heart alanine aminotransferase. -Biochemistry, 1979, v. 18, N 14, p. 3002-3007.

80. Riva P., Carotti D,, Barra D., Giartosio A., Turano C. Different reactivity of mitochondrial and cytoplasmic aspartate aminotransferases toward an affinity labiling reagent analog of the coenzyme. J.Biol.Chem., v. 255» N 19»p. 9230-9235.

81. YoshidaM,, Sone M., Hirata H., Kagawa Y. Reconstitution of adenosine triphosphatase of thermophilic bacterium from purified individual subunits, J.Biol.Chem,, 1977> v. 252 ,1. N 10, p. 3480-^485.

82. Risi S., Нооке1 M., Hulla F.W., Dose K. Fj-ATPase from Micrococcus sp. ATCC 398* Purification by ion-exchange chromatography and further characterization . (Auto)proteo-lysis and dissociative effects. Eur.J.Biochem., 1977,v. 81, N I, p. 103-109.2 +

83. Abrams A,, Jensen C., Morris D.H. Role of Mg ions in the subunit structure and membrane binding properties of bacterial energy transducing ATPase. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1976, v. 69, N 3, p. 804-811.

84. Williams N„, Coleman P.S. Exploring the adenine nucleotidebinding sites on mitochodrial Fj-ATPase with a new photo/ affinity probe, 3 ~0 -(4-benzoyl)benzoyl adenosine 5 '-"tdiphosphate. J.Biol.Chem., 1982, v. 257, N 6, p. 2834-2841.

85. Deters D., Racker E., Nelson N., Nelson H. Partial resolution of the enzymes catalysing phosphorylation. XV". Approaches to the active site of coupling factor I. J.Biol.Chem., 1975, v. 250, N 3, p. I041-1047.

86. Hockel M., Hulla F.W., Risi S., Dose K. Me2r-(I3 S) ATPase from Micrococcus Sp. ATCC 398 E. The effect of trypsin on the purified enzyme. Biochim. Biophys. Acta, 1976, v. 429, N 3, p. I020-1028.

87. Wagenvoord R.J., van der Kraan I., Kemp A. Specific photo-labeling of beef-heart mitochondrial ATPase by 8-azido-ATP.-Biochim. Biophys. Acta, 1977, v. 460, N I, p. 17-24.

88. Lowe P.N*, Baumi H., Beachey H.B. Interactions "between periodate-oxidized adenosine triphosphate and the mitochondrial adenosine triphosphatase. Biochem. Soc. Trans., 1979» v. 7, N 5, p. II33-II36.

89. Lowe P.N., Beachey R.B. Interactions between the mitochondrial adenosinetriphosphatase and periodateoxidized adenosine-^' -triphosphate, an affinity label for adenosine-^'-triphosphate binding sites. Biochemistry, 1982, v. 21,1. N 17, p. 4073-4082.

90. Kozlov I.A., Milgrom Y.M. The non-catalytic nucleotide-binding site of mitochondrial ATPase is localised on the$ -subunit (s) of factor Fj. Eur.J.Biochem., 1980, v. 106, N 2, p. 457-462.

91. Lauquin G., Pougeois E., Vignais P.v, 8-azido-2-nitrophenyl phosphate a new photoaffinity derivative of inorganic phosphate binding site of beef heart mitochondrial adenosine triphosphatase. Biochemistry, 1980, v. 19, N 20, p. 4620-—4б2б.

92. Gross R.L., Nalin C.M, Adenine nucleotide binding sites on beef heart F^-ATPase. Evidence for three exchangeable sites that are distinct from three noncatalytic sites. J.Biol. Chem., 1982, v. 257, N 6, p. 2874-2881.

93. Koga P.G., Cross R.L. Pyridoxylation of essential lysine residues of mitochondrial adenosine triphosphatase. -Biochim. Biophys. Acta, 1982, v. 679> N 2, p. 269-278.

94. Peters H., Risi S., Dose K. Evidence for essential primary amino groups in a bacterial coupling factor Fj ATPase. -Biochem. Biophys. fies. Commun., I980, v. 97, N 3, p. 1215-1219.

95. Sugiyama Y., Mukohata Y. Modification of one lysine pyri-doxal phosphate completely inactivates chloroplast coupling factor I ATPase. FEBS Lett., 1979, v. 98, N2, p, 276-280.

96. Cosson J.J., Guillory H.J. The use of arylazido- p> --alanyl-ATP as a photoaffinity label for a isolated and membrane-bound mitochondrial, ATPase complex. J.Biol.Chem., 1979, v. 254, N 8, p. 2946-2955.

97. Lunardi J., Satre M., Viguais P.V, Exploration of adenosine 5 diphosphate-adenosine^' -triphosphate binding sites of Escherichia coli adenosine 5'-triphosphatase with arylazi-doadenine nucleotides. Biochemistry, 1981, v. 20, К 3,p. 473-480.

98. Schafer H.-J#) Scheurich P., Rathgeber G., Dose K. Photoaffinity labelling of coupling factor ATPase from Micrococcus luteus. Energy" Conserv.Biol.Membranes. Berlin; Mosbach--Baden, 1978, p. 247-249.

99. Scheurioh P., Schafer H,, Dose K. 8-azidoadenosine 5^triphosphate as a photoaffinity label for bacterial Fj-ATPase.- Eur.J.Biochem., 1978, v. 88, N I, p. 253-257.

100. Schafer H.-J,, Scheurich P., Rathgeber G., Dose K. 8-azido-I,N -etheno-ATPi a fluorescent photoaffinity label for Fj-ATPase. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1978, v. 359, N 9, p. II42-II43.

101. Schafer H.-J., Scheurich P., Rathgeber G., Dose K. Fluorescent photoaffinity labeling of Fj-ATPase from Micrococcus luteus with 8-azido-I,lA-etheno-adenosine 5/-triphosphate.- Anal.Biochem., 1980, v. 104, N I, p. I06-III.

102. Schafer H.-J., Scheurich P., Rathgeber G., Dose K. Photo-affinity cross-linking of Fj-ATPase with 3'-arylazido-8--azido-ATP. Hoppe-Seyler*s Z. Physiol. Chem., 1980,v. 361, N 9* P. 1333*

103. Schafer H.-J., Scheurich P., Rathgeber G., Dose K. Photo-affinity labelling, fluorescent photoaffinity labelling and photoaffinity cross-linking of F^-ATPase. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1980, v. 361, N 10, p. 1484-1485.

104. Gregory P., Recktenwald D., Hess В., Schafer H.-J., Scheurich P., Dose K. Photoaffinity labelling of a low affinity nucleotide binding site on the /3 -subunit of yeast mitochondrial F.-ATPase. FEBS Lett., 1979, v. 108,hi, p, 253-256.

105. Schafer G,, Onur G., Weber A., Lucken U, Sensing structure and function of nucleotide-binding sites of Fj-ATPase by nucleotide analogs. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., J3S0, v. 36I, N 10, p. 1483-1484.

106. Recktenwald D., Hess B. Classification of nucleotide binding sites on mitochondrial Fj-ATPase from yeast. -Biochim. Biophys. Acta, I98O, v. 592, К 3, p. 377-384.

107. Grubmeyer C., Penefsky H.S. Cooperativity between catalytic sites in the mechanism of action of beef heart mitochondrial adenosine triphosphatase, J.Biol.Chem., 1981, v. 256, N 8, p. 3728-3734.

108. Liang S.M., Winter Ch.J. Digitonin-induced changes in subunit arrangement in relation to some in vitro activities of the (U a+ , K+)-ATPase. J.Biol.Chem., 1977, v. 252, N 22, p. 8278-8284.

109. Emelyanov S.A., Tunitskaya V.L., Boldyrev A. Adenosine ^'-(p-fluorosulfonylphenylphosphate) as a tool for investigation of cooperative properties of Na*,K-ATPase. FEBS Lett., 1980, v. 114, N 2, p. 334-338.

110. Koepsell II., Hull a F.W. Affinity labelling of nucleotide binding site of Na+,K+-ATPase• Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1978, v. 359, I 9, p. II07-H08.

111. Chopak H., Fb'lsch G. Irreversible inactivation of Escherichia coli alkaline phosphatase with active site directed alkylating reagents. Acta Chem. Scand., 1970, v. 24, N 3, p. 1025-1035.

112. Chang G.-G., Wang S.-C., Pan F. Periodateoxidized AMP as a substrate, an inhibitor and an affinity label of human placental alkaline phosphatase. Biochem.J., 1981, v. 199» N 2, p. 281-287.

113. Fujiyoshi Т., Nakayama J., Anai M. Inhibitory effect of pyridoxal-5;-phosphate on the ША binding site of ATP-depen-dent deoxyribonuclease from Bacillus laterosporus. J. Biochem., 1981, v. 89, N 4, p. II37-II42.

114. Griffith M.J. Covalent modification of human L-trombin with pyridoxal-5'-phosphate. Effect of phosphopyridoxylation on the interaction of trombin with heparin. J.Biol.Chem., 1979, v. 254, N 9, P. 3401-3406.

115. Aurebekk В., Little C. Phospholipase С from Bacillus cereus. Evidence for essential lysine residues. Biochem.J., 1977, v. I6l, N I, p. 159-165.

116. Suda H., Xu G.-J., Kutny R.M., Natalini P., Pontremoli S,, Horecker B.L. Location of Lysyl residues of the allosteric site of fructose-I,6-bisphosphatase. Arch. Biochem. Biophys. 1982, v. 217, N I, p. 10-14.

117. Marcus F., Haley B.E. Inhibition of Fructose-I,6-bis-phosphatase by the photoaffinity AMP analog, 8-azidoadenos-ine-5'-monophosphate. J.Biol. Chem., 1979, v. 254, N 2, p. 259-261.

118. Maccioni R.B., Hubert E., Slebe J.-C. Selective modification of fructose-I,6-bisphosphatase by peri0date-oxidized AMP. FEBS Lett., 1979, v. 102, N I, p. 29-32.

119. Kawakita N., Yamazaki M. Allosteric properties of nucleo-zide diphosphatase. Activation by pyridoxal-5''-phosphate and specific modification of effector binding sites. -Biochemistry, 1978, v. 17, N 17, p. 3546-3551.

120. Kobayashi H., Takabe Т., Uishimura M., Akazawa T. Roles oflarge and small subunit of ribulose-I,5-bisphosphate carboxy2 +lase in the activation by C02 and Mg . J.Biochem., 1979, v. 85, N 4, p. 923-930.

121. Norton I.L., Welch M.H., Hartman F.C. Evidence for essential lysyl residues in ribulosebisphosphate carboxylase by use of the affinity label 3-bromo-I,4-dihydroxy-2-butan-one-I,4-bisphosphate. J.Biol.Chem., 1975, v. 250, N 20,p. 8062-8068.

122. Norton I.L., Hartman F.C. Ribulosebisphosphate carboxylase.-in: Methods in Enzymology/Ed. Jakoby V/.B., Wilchek M.

123. N.Y., L.: Acad. Press Inc. 1977, v. 46, p. 388-398.

124. Stringer C.D., Hartman F.C. Sequenses of two active-site peptides from spinach ribulosebisphosphate carboxylase/oxygenase. Biochem. Biophys. Res, Commun., 1978, v. 80, N 4, p. I043-1048.

125. Schloss J.V., Hartman F.C. Reaction of ribulosebisphosphate carboxylase from Rhodospirillum rubrum with the potential affinity label 3-bromo-I,4-dihydroxy-2-butanone-I,4-bisphosphate. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1977» v. 75,1. N 2, p. 320-325.

126. Poulsen C. Comments on the structure and function of the large subunit of the enzyme ribulose bisphosphate carboxylase/ oxygenase. Carlsberg Res. Commun., 1981, v. 46, N 4,p. 259-278.

127. Morton I.L., Stringer C.D., Fraij В., Hartman F.C. Ribulosebisphosphate carboxylase/oxygenase:active site and primary structure. 5 th Int. Congr. Protosynth. Halkidiki, 1980, p. 240.

128. Schloss J.?/., Hartman F.C. Inactivation of ribulosebis-phosphate carboxylase/oxygenase from spinach with, the affinity label N-bromoacetylethanolaminephosphate. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1977, v. 77, N I, p. 23O-236,

129. Vater J., Gandszum Т., Salnikov J. PyridoxaJL-5'-phosphate as a molecular probe for the reaction centres of the D-rib-ulose-I,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase from spinash.- Biochem. Soc. Trans., I98I, v. 9, N 2, p. 326.

130. Paech C., Tolbert N.E. Active site studies of ribulose-I,5--bisphosphate carboxylase/oxygenase with pyridoxal-5'--phosphate. J.Biol.Chem., 1978, v. 253» N 21, p, 7864-7873

131. Lin Y., Kobes R.D., Norton I.L., Hartman F.C. Affinity labelling of yeast aldolase by haloacetol phosphates. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1971, v. 45, N I, p. 34-42.

132. Lai C.Y. Studies on the structure of rabbit muscle aldolase. Determination of the primary structure of the COOH-terminal BrCN peptide, the complete sequence of the subunit polypeptide chain. Arch. Biochem. Biophys., 1974, v. 166, N I,p. 358-368.

133. Hartman F.C., Suh В., Welch M.H., Barker R. Inactivation of class I fructose diphosphate aldolases by the substrate ana- 150 log N-bromoacetylethanolamine phosphate. J.Biol .Chem., 1973, v. 248, N 23, p. 8233-8239.

134. Hartman F.C., Welch M.H. Identification of the histidyl residue of rabbit muscle aldolase alkylated by N-bromo-acetylethanolamine phosphate. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1974, v. 57, N I, p. 85-92.

135. Hartman F.C., Brown J.P. Affinity labelling of a previously undetected essential lysyl residue in Class I. fructose bis-phosphate aldolase, J.Biol.Chem., 1976, v. 251, N 10,1. P. 3057-3062.

136. Waud J.M., Feldman E., Schray K.J. Inhibition and inactivation of liver aldolase. Arch. Biochem. Biophys., 1981, v. 206, N 2, p. 291-295.

137. Hartman F.C., Norton J.L. Active-site-directed.reagents of glycolitic enzymes. in: Methods Enzymol./Ed, Hirs C.H.W., Timshelf S.N. N.Y., L.: Acad. Press Inc. 1977, v. 47,p. 479-498»

138. O'Connell E.L., Rose I.A. Affinity labelling of Phosphogluc-ose isomerase by I,2-anhydrohexitol-6-phosphates. J.Biol. Chem,, 1973, v. 248, N 6, p. 2225-2231.

139. Gibson D.R., Talent J.Li», Gracy R.W., Hartman F.C. Affinity labelling of human glucosephosphate isomerase with N-bromo-acetylethanolaminephosphate, Biochem, Biophys, Res. Commun.,1977, v. 78, N 4, p. 1241.

140. Salas M., Yinuela E., Sols A. Spontaneous and enzymatically- 151 catalyzed, anomerization of glucose-6-phosphate and. anomeric specificity of related, enzymes. J.Biol.Chem., I965, v, 240, N 2, p. 56I-568.

141. Chirgwin J.M., Uoltman E.A, The enediolate analogue 5-phos-phoarabinonate as mechanistic probe for phosphoglucose isom-erase. J.Biol.Chem., 1975» v. 250, N 18, p. 7272-7276.

142. Miller J.C., Waley S.G. The active centre of rabbit muscle triose phosphate isomerase. The site that is labelled by- 152 glycidol phosphate. Biochem.J., 1971, v. 125, N 2, p. 163-170.

143. Hartman F.C. Irreversible inactivation of triose phosphate isomerase by I-hydroxy-3-iodo-2-propanone phosphate. Biochem. Biophys. Res. Commun., I968, v. 33, N 6, p. 888-894.

144. Hartman F.C. Partial sequence of an active site peptide from triose phosphate isomerase. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1970, v. 39, N 3, p. 384-388.

145. Hartman F.C. Hdloacetol phosphates. Characterization of the active site of rabbit muscle triose phosphate isomerase. -Biochemistry, 1971» Ю, N I, p. 146-153.

146. Hartman F.C. Haloketones as affinity labelling reagents. -in: Methods in Enzymology/Ed. Jakoby VS.В., Wilchek M. N.Y., L.s Acad. Press Inc. 1977» v. 46, p. 130-153.

147. Norton I.L., Hartman F.C. Haloacetol phosphates. A comparative study of the active sites of yeast and muscle triose phosphate isomerase. Biochemistry, 1972, v. II, N 24,p. 4435-4441.

148. Горшкова И.И., Даций И.И., Лаврик О.И., Невинский Г.А. Фенилаланил-тРНК-синтетаза из е. coli МЕЕ-600 . Влияние химической модификации остатков лизина на взаимодействие фермента с субстратами. Биохимия, 1981, т. 46, № 4,с. 699-707,

149. Кузнецов А.В., Склянкина В.А., Аваева С.М. Неодинаковое функционирование двух химически идентичных субъединиц неорганической пирофосфатазы из дрожжей. Биоорган, химия,1978, т. 4, № 7, с. 984-986.

150. Eaykov A.A., Avaeva S.M. Yeast inorganic pyrophosphatase: studies on metal binding. Eur.J.Biochem., 1974, v. 74,1. N I, p. 57-66.- 154

151. Кузнецов А.В., Склянкина В.А., Аваева С.М. Особенности ингибирования неорганической пирофосфатазы из дрожжей О-фосфо-этаноламином. Биоорган.химия, 1979, т. 5, № 9, с. 1396-1403.

152. Лагутина И.О., Склянкина В.А., Аваева С.М. Аффинная модификация неорганической пирофосфатазы из дрожжей метилфосфатом. Биохимия, 1980, т. 45, вып. 9, с. 1568-1575.

153. Кузнецов А.В., Аваева С.М,, Байков А.А., Склянкина В.А. О-пирофосфоэтаноламин новый субстрат неорганической пирофосфатазы из дрожжей. Синтез и субстратные свойства. -Биоорган.химия, 1977, т. 3, № 7, с. 950-957.

154. Аваева С.М», Диков М.М., Кузнецов А.В., Склянкина В.А. Специфическая модификация активного центра неорганической пирофосфатазы из дрожжей Ы-хлорацетилфосфоэтаноламином. -Биоорган.химия, 1977, т. 3, # 7, с. 943-949.

155. Нанес C.S., Isherwood F.A. Separation of the phosphoric esters on the filter paper chromatogram. Nature, 1949, v. 164, К 4152, p. II07-HI2.

156. Baykov A.A., Avaeva S.M, Regulation of yeast inorganic pyrophosphatase activity by divalent cations. Eur.J,Biochem., 1973, v. 32, N I, p. 1^6-142.

157. Baykov A.A., Artyukov A.A., Avaeva S.M. Fluoride inhibition2+of inorganic pyrophosphatase. Kinetic studies in Mg PP^ system using a new continuous enzyme assay. - Biochim. Biophys. Acta, 1976, v. 429, N 3, p. 982-992.

158. Hess H.H., Derr J.E, Assay of inorganic and organic phosphorus in the 0,1-5 nanomole range. Anal. Biochem., 1975,v. 63, К 2, p. 607-613.- 155

159. Березин И.В., Клесов А.А. Практический курс химической и ферментативной кинетики. М., изд-во Московского университета, 1976, с.

160. Аваева С.М., Плаксина Е.А., Склянкина В.А. Реконструкция каталитически активного фермента из субъединиц дрожжевой неорганической пирофосфатазы. Биохимия, 1979, т. 44, № б, с. I080-1083.

161. Ганкина Э.С., Королева Е.М., Беленький Б.Г. Определение Ы-концевой последовательности аминокислот в пептидах по методу Эдмана в дансил-модификации. Биоорган.химия, 1979,т. 5, № 3, с. 485-492.