Исследование триэфирного синтеза олигонуклеотидов в присутствии арилсульфохлорида и нуклеофильных катализаторов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

Список принятых сокращений

Введение

Глава I. НУКЛЕОФИЛЬНЫЙ КАТАЛИЗ ПИРИДИНАМИ И АЗОЯАМИ В РЕАКЦИЯХ СУЛЬФОНИЛИРОВАНИЯ И ФОСФОРИЛИРОВАНИЯ (обзор литературы)

1.1. Реакции арилсульфогалогенидов с нуклеофильными реагентами в присутствии пиридинов и азолов

1.1.1. Влияние растворителей

1.1.2. Влияние природы уходящей группы

1.1.3. Влияние заместителей в бензольном кольце арилсульфогалогенидов

1.1.4. Влияние природа катализатора

1.1.5. Влияние резонансной стабилизации промежуточного продукта

1.2. Реакции арилсульфоазолидов с нуклеофильными реагентами

1.3. Нуклеофильный катализ пиридинами и азолами в реакциях фосфорилирования, используемых в оли-гонуклеотидном синтезе

1.4. Механизм образования межнуклеотидной диэфирной связи 1.5. Механизм образования межнуклеотидной триэфирной связи в присутствии арилсульфотетразолидов

Глава 2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

2.1. Нуклеофильный катализ образования межнуклеотидной триэфирной связи в присутствии 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорида

§

2.1.1. Влияние 4- -диметиламинопиридина на образование фосфотриэфиров в присутствии арилсульфохлоридов в пиридине

2.1.2. Нуклеофильный катализ 4-N ,N -диметиламинопири-ном образования межнуклеотидной .связи в пиридине триэфирным методом

2.1.3. Влияние N -метилимидазола, З-нитро-1,2,4-три-азола и тетразола на образование межнуклеотидной триэфирной связи в присутствии арилсульфо-хлоридов в пиридине

2.1.4. Структура активных фосфорилирующих агентов

2.1.5. Влияние нуклеофильных катализаторов на взаимодействие Р-компонента и арилсульфохлори.да

2.1.6. Схемы реакций, протекающих при образовании фосфотриэфиров

2.1.7. Образование межнуклеотидной триэфирной связи в присутствии арилсульфохлори.да и А/ -метилимидазола или 4- /V/,Л/ -диметиламинопири.дина в различных растворителях

2.2. Синтез олигонуклеотидов

Глава 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1. Исходные материалы

3.2. Основные методы работы

3.3. Методики эксперимента

3.4. Синтез олигонуклеотидов

3.4.1. Межнуклеотидные конденсации

3.4.2. Получение Р-компонента

3.4.3. Получение ОН-компонента

3.4.4. Деблокирование олигонуклеотидов

3.4.5. Выделение олигонуклеотидов после деблокирования

Химический синтез олигонуклеотидов относится к числу важнейших задач биоорганической химии. Широкое использование синтетических олигонуклеотидов в биохимии, генной инженерии, молекулярной биологии служит стимулом для постоянного поиска новых подходов к синтезу этих соединений и углубленного исследования протекающих при этом процессов.

В последние годы наибольшее применение в синтезе олигонуклеотидов нашел триэфирный метод, в котором образование меж-нуклеотидной связи происходит путем конденсации оксигруппы нуклеозидного компонента (ОН-компонент) с блокированной фосфатной группой фосфатного компонента (Р-компонент) в присутствии конденсирующих агентов. До начала выполнения настоящей работы лучшие результаты были получены при использовании в качестве конденсирующих агентов арилсульфотетразолидов, главным достоинством которых, по сравнению с используемыми ранее арил-сульфохлоридами, является существенное ускорение процесса конденсации. Если при синтезе олигонуклеотидов триэфирным методом в присутствии арилсульфохлорида /1,2/ образование межнук-леотидной связи протекает в течение 20-50 часов, то использование арилсульфотетразолидов /3,4/ позволяет сократить время проведения реакции до 1-2 часов. Однако арилсульфотетразоли-ды являются менее доступными, чем арилсульфохлори.ды, и малостабильными соединениями, хранить которые можно не более одного месяца при пониженной температуре. Введенные позже в практику олигонуклеоти.дного синтеза арилсульфо-3-нитро-1,2,4-три-азолиды /5/ лишены этого недостатка, но в их присутствии реакции протекают несколько медленнее, чем при использовании арилсульфотетраз олидов.

Таким образом, поиск конденсирующих агентов, позволяющих сократить время, необходимое для образования межнуклеотидной связи, является актуальной задачей олигонуклеотидного синтеза.

Различие в скоростях образования межнуклеотидной связи в триэфирном методе синтеза при использовании арилсульфохло-ридов и арилсульфотетразоли.дов позволило предположить, что причиной ускорения образования фосфотриэфиров в присутствии арилсульфотетразоли.дов является катализ протекающих при этом реакций выделяющимся при расходовании конденсирующего агента тетразолом по нуклеофильному механизму. Следовательно, реакции, протекающие при образовании межнуклеотидной триэфирной связи в присутствии арилсульфохлоридов, более доступных, чем арилсульфотетразолиды, могут быть значительно ускорены эффективными нуклеофильными катализаторами.

Целью настоящей работы явились проверка возможности ускорения образования межнуклеотидной триэфирной связи в присутствии арилсульфохлори.да нуклеофильными катализаторами на примере использования 4-/У,/У-диметиламинопиридина, исследование закономерности образования фосфотриэфиров в присутствии 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорида и 4-/У,/У-.диметиламинопиридина, /V-метилимидазола, тетразола и 3-нитро-1,2,4-триазола, а также синтез олигонуклеотидов в выбранных в результате исследований условиях.

Большая часть представленных в работе данных получена с

ЗТ использованием импульсной Р-ЯМР спектроскопии, поскольку этот метод дает возможность регистрировать не только исходные соединения и конечные продукты реакции, но и следить за промежуточными превращениями Р-компонента.

В работе впервые продемонстрировано эффективное ускорение 4~Л/ ,Л/ -диметиламинопиридином образования фосфотриэфиров при использовании арилсульфохлоридов и показана возможность получения олигонуклеотидов в хлороформе в присутствии Д^-ме-тилимидазола и 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорида на примере синтеза ряда олигонуклеотидов.

При исследовании механизма образования межнуклеотидной триэфирной связи в присутствии арилсульфохлорида и нуклео

31 фильных катализаторов методом Р-ЯМР спектроскопии было установлено, что во всех исследованных случаях реакция протекает в две регистрируемые этим методом стадии. На первой стадии взаимодействие исходного Р-компонента с конденсирующим агентом приводит к накоплению тетразамещенного пирофосфата, который на второй стадии превращается в фосфотриэфир. При этом обнаружено, что 4-N,N-диметиламинопиридин и /У-метил-имидазол являются эффективными катализаторами как образования тетразамещенного пирофосфата, так и его взаимодействия с ОН-компонентом, вследствие чего синтез олигонуклеотидов в их присутствии можно проводить в различных растворителях. В то же время тетразол и 3-нитро-1,2,4-триазол не способствуют протеканию первой стадии процесса, что делает необходимым использование пиридина в качестве растворителя, который наряду с N -метилимидазолом и 4- -диметиламинопиридином катализирует взаимодействие Р-компонента и арилсульфохлорида. Ускорение реакции в присутствии азолов наблюдается только на стадии превращения тетразамещенного пирофосфата в фосфотриэфир. Предположение о нуклеофильном катализе 4— /V, /V ~ диметиламинопиридином и N -метилимидазолом реакций, протекающих при образовании межнуклеотидной триэфирной связи, подтверждается получением и установлением структуры модельных активных фосфорилирующих производных, образующихся в результате взаимодействия дифенилхлорфосфата и катализатора.

ВЫВОДЫ

I.Исследовало влияние нуклеофильных катализаторов: 4— /V,/V— диметиламинопиридина {DMAP), N -метилимидазола ( MeJm ), тетразола (Те-бН ) и 3-нитро-1,2,4-триазола ( NTiiH) -на образование межнуклеотидной три эфирной связи при использовании арилсульфохлоридов в качестве конденсирующих агентов: а) на примере использования 4- А/,А/ -диметиламинопиридина впервые показана принципиальная возможность ускорения нуклеофильными катализаторами образования фосфотриэфиров в присутствии 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорида (TPS ); б) установлено,что при использовании TPS и нуклеофильных катализаторов:27А1А Р ,MeJm,TetH и NTiiH - образование межнуклеотидной триэфирной связи протекает в две регистри

От руемые методом ХР-ЯМР спектроскопии стадии - быстрое образование тетразамещенного пирофосфата У и существенно более медленное превращение его в фосфотриэфир УШ; в) показано, что DMAP , Me Jm и пиридин (Ру ) по механизму нуклеофильного катализа ускоряют взаимодействие арилсульфо-хлорида с /7 -хлорфениловыми эфирами нуклеоти.дов (Р-компо-нентами). В отличие от пиридинов и N -метилимидазола тетразол и 3-нитро-1,2,4-триазол не являются катализаторами этого процесса. Образование тетразамещенного пирофосфата У при взаимодействии Р-компонента и TPS в .присутствии TeiP или NTiiP происходит только при наличии в системе пиридина; г) показано, что основное ускорение образования фосфотриэфиров в присутствии TPS в пиридине нуклеофильными катализаторами (DMAP ,MeJ/n,Tei/-/ , AfVz/P) происходит на второй стадии процесса - превращении тетразамещенного пирофосфата У в фосфотриэфир УШ - по механизму нуклео-фильного катализа.

2.Установлена структура активных фосфорилирующих производных, образующихся в результате взаимодействия дифенилхлорфосфата и нуклеофильного катализатора (DMAP, MeJm ), являющихся аналогами фосфорилирующих промежуточных соединений в реакциях образования межнуклеотидной триэфирной связи в присутствии TPS и нуклеофильных катализаторов (Ру yIlMAP%MeJm).

Обнаружено, что в присутствии 4- Л^/У-диметиламинопири-дина при взаимодействии дифенилфосфорной кислоты и арилсуль-фохлорида происхо.дит образование активного фосфорилирующего производного в результате нуклеофильной атаки 4-Л/,/У-.диме-тиламинопиридином тетразамещенного пирофосфата УШ .

3.С использованием арилсульфохлорида в присутствии нуклеофильного катализатора (MeJm ) в хлороформе осуществлен синтез ряда олигонуклеотидов исхода из п -хлорфениловых эфиров г

5 -нуклеотидов.

1. Letsinger E.L., Ogilvie К.К. A convenient method for stepwise synthesis of oligothymidylate derivatives in large scale quantities, - J.Amer.Chem.Soc., 1967, v.89, H 18,p.4801-4803.

2. Itakura K., Katagiri N., Bahl C.P., Wightman R.H., Harang S.A. Improved triester approach for the synthesis of penta-decathymidylic acid. J.Amer.Chem.Soc,, 1975 > v.97, IT 25, p.7327-7332.

3. Stawinski J., Hozumi Т., Harang S.A., Balh C.P., Wu R. Arylsulfonyltetrazoles, new coupling reagents and further improvements in the triester method for the synthesis of deoxyribooligonucleotides, Hucl.Acids Res,, 1977, v.4, N 2, p.353-372,

4. Harang S.A., DHA synthesis, Tetrahedron, 1983, v.31, H 1, p.3-22«

5. Reese C.B., Titmas R.C., Jay L. Oximate ion promoted unblocking of oligonucleotide phosphotriester intermediates.-Tetrahedron Lett., 1978, v.30, p,2727-2730.

6. П.Литвиненко Л.М., Олейник H.M. Органические катализаторы и гомогенный катализ. Киев: Наукова думка,1981,с.219-223.

7. Шатская Б.А., Савелова В.А., Литвиненко Л.М. О механизме катализа третичными аминами реакции сульф-амидообразования в полярном растворителе. Ж.общ.химии,197I, т.41, № 10, с. 2256-2264.

8. Савелова В.А., Соломойченко Т.Н., Литвиненко Л.М. Нуклео-фильный катализ., Каталитическая активность пиридиновых оснований и их /V-окисей в реакциях сульфамидообразования. -Реакц.способность орган.сое,дин., 1972,т.9,вып.3,с.665-677.

9. Шатская В.А., Савелова В.А., Литвиненко Л.М., Шонина Л.В. Эффект избирательной неспецифической сольватации в реакциях сульфамидообразования. Реакц.способность орган.соедин., 1972, т.9, вып.4, с.965-976.

10. Литвиненко Л.М., Малеева Н.Т., Савелова В.А. Катализ третичными аминами в реакции сульфамидообразования. Кинетический изотопный эффект. Реакц.способность орган.соедин., 1974, т.II, вып.1, с.227-238.

11. Литвиненко Л.М., Савелова В.А., Шатская В.А., Садовская Т.Н. Кинетическое доказательство образования промежуточного продукта при азот- и кислород-нуклеофильном катализе в реакции сульфамидообразования. Докл. АН СССР, 1971, т.198, № 4,с. 844-847.

12. Дадали В.А., Зубарева Т.М., Литвиненко Л.М., Симаненко Ю.С. Определение кинетических и термодинамических характеристик отдельных стадий нуклеофильного механизма катализа в апро-тонной среде. Докл. АН СССР, т.239, № 4, с.868-871.

13. Haughton A.R., Laird M.J., Spence M.J. Reactions of organic sulphur compounds. Part I. The hydrolysis of arenesulphonyl chlorides. J.Chem.Soc.Perkin Trans II, 1975, N 6, p.637-643.

14. Rogne 0. Rates, activation parameters, and enthalpies of transfer of transition states for the reaction of imidazole with aromatic sulphonyl chlorides in methanol and ace-tonitrile. J.Chem.Soc.Perkin Trans II, 1973, N 6, p.823-826.

15. Ballistreri F.P., Cantone A., Maccarone E., Tamaselli G.A., Tripolone M. Hucleophilic substitution at sulphonyl sulphur. Part 2. Hydrolysis arid alcoholysis of aromatic sulphonyl chlorides. J.Chem.Soc.Perkin Trans II, 1981, N 3, p.438-441.

16. Литвиненко Л.М., Олейник H.M. Органические катализаторыи гомогенный катализ. Киев: Наукова думка, 1981, с. 195.

17. Литвиненко Л.М., Савелова В.А., Кочкалда В.Е. Кинетика реакций ароматических аминов с /ъ-нитробензолсульфобромидом в смесях нитробензола с бензолом. Реакц.способность орган, сое,дин., 1965, т.2, № вып.4, с.101-125.

18. Литвиненко Л.М., Попов А.Ф., Савелова Б.А. Влияние структуры арилсульфогалогенидов на их реакционную способность с аминами. Ж.общ.химии, 1967, т.33, № I, с.57-61.

19. Литвиненко Л.М., Савелова В.А. Скорость ацилирования ароматических аминов арилсульфогалогенидами в диокеане. -Ж.общ.химии, 1968, т.38, № 4, с.747-756.

20. Литвиненко Л.М., Дадали В.А. Кинетика реакций арилсульфогалогенидов с ароматическими аминами в нитробензоле. -Реакц.способность орган.соедин., 1967, т.4, вып.2, с.258-272.

21. Литвиненко Л.М., Савелова В.А., Шатская В.А. Кинетика катализируемого пиридином образования сульфамидов. Ж.общ. химии, 1968, т.38, № 5, с.1028-1037.

22. Белоусова И.А., Савелова В.А., Литвиненко Л.М.»Матвиенко В.Н. Исследование промежуточных продуктов в катализируемом 4 A/t /V-диметиламинопиридином ацилировании ариламинов производными арилсульфокислоты.-Ж.орг.химии,1979, т.15,№ 9, с.1947-1956.

23. Rogne 0. Kinetics of the neutral and alkaline hydrolysis of aromatic sulphonyl chlorides in water. J.Chem.Soc. В., 1968, N 11, p. 1294-1296.

24. Rogne 0. Rates of reaction of benzenesulphonyl chloride with some nucleophile in aqueous solution. J.Chem.Soc. В., 1970, Ж 6, p.1056-1058.

25. Визгерт P.В., Панов Е.П., Скрыпник Ю.Г., Стародубцева М.П. Исследование ацилирования фенолов и спиртов алкансульфо-хлоридами в присутствии третичных аминов. Ж.орган, химии, 1975, т.II, № 9, с.1894-1899.

26. Визгерт P.B., Скрыпник Ю.Г., Петров В.А., Максименко H.H. Конкурирующее взаимодействие фенола и метанола с бензол-сульфохлоридом в присутствии триэтиламина и пиридина. -Ж.орган.химии, 1977, т.13, № 6, с.1251-1255.

27. Визгерт Р.В., Максименко H.H. Адилирование фенолов ароматическими сульфохлоридами в присутствии третичных аминов. -Ж.орган.химии, 1978, т.14, № 5, с.1031-1036.

28. Визгерт Р.В., Максименко H.H. Кинетика реакции ацилирова-ния фенола арилсульфохлоридами в присутствии триэтиламина.-Ж.общ.химии, 1978, т.48, № 12, с.2776-2781.

29. Коршак В.В., Васнев В.А., Богатков C.B., Тарасов А.И., Виноградова C.B. Кинетика бензоилирования замещенных фенолов в присутствии триэтиламина. Реакц.способность орган, со-един., 1973, т.10, № 2, с.375-388.

30. Савелова В.А., Шатская В.А., Литвиненко Л.М., Никишина Н.И. Влияние полярности среды на каталитическое сульфами-дообразование. Ж.общ.химии, 1974, т.44, № 5, C.II24-II33.

31. Визгерт Р.В., Максименко H.H., Панов Е.П. Каталитическое влияние пиридиновых оснований в реакциях образования фе-ниловых эфиров сульфокислот. Ж.орган.химии, 1981, т.17, № 3, с.605-609.

32. Савелова В.А., Белоусова И.А., Литвиненко Л.М. Исследование кинетики взаимодействия Ж-арилсульфонил(4- A/,/V-№-метиламино)пиридиниевых солей с 3-нитроанилином в хлористом метилене. Ж.орган.химии, 1981, т.17, № 7, с. 14991505.

33. Дадали В.А., Симаненко Ю.С., Лапшин С.А., Литвиненко Л.М., Рыбаченко В.И. Каталитическое влияние N -замещенных азолов на реакцию амидообразования. Роль структуры катализатора и ароматического амина. - Ж.орган.химии, 1976,т.12, № 7, с.1483-149I.

34. Литвиненко Л.М., Савелова В.А., Белоусова И.А. "Аномаль-но"высокая каталитическая активность N -окисей пириди-нов в реакциях ацильного переноса в протоинертных средах.

35. Ж.орган.химии,1983, т.19, № 7, с.1474-1485.

36. Lohrmann R., Khorana H.G., Studies on polynucleotides.LII.

37. The use of 2,4,6-triisopropylbensenesulphonyl chloride for the synthesis of internucleotide bonds. J.Amer.Chem. Soc., 1966, v.88, IT 4, p.829-833.

38. Höfle G., Steglich W., Vorbrüggen H. 4-Dialkylaminopyridi-nes as highlyactive acylation catalysts. Angew.Chem.Intern. Ed.Engl.,1978, v.17, U 8, p.569-583.

39. Титов Е.В., Рыбаченко В.И., Макарова P.A. ИК спектроскопические характеристики колебаний сульфогруппы и строение некоторых солей /У-сульфониламмония. Ж.прикл.спектроскопии, 1979, т.31, № 5, с.844-850.

40. Staab H.A., Wendel К. Synthesen und Umsetzungen von Imi-dazoliden aromatischer Sulfonsäuren.- Chem.Ber.,1960, v.93,1. N 12, p.2902-2915»

41. Arcoria A., Ballistreri P.P., Musumarra G., Tomaselli G.A. Nucleophilic substitution at sulphonyl sulphur. Part 1. Reactivity of thiophen-2-sulphonyl halides in water and methanol-acetonitrile. J.Chem.Soc.Perkin Trans.11,1981, N 2, p.221-227.

42. Katagiri N., Itakura K., Narang S.A. Novel condensing reagents for polynucleotide synthesis. J.Chem.Soc.Chem. Communs, 1974,N 9, p.325-326.

43. Ohtsuka E., Tozuka Z., Ikehara M. Hew condensing reagents for stereospecific synthesis of dinucleoside monophosphate aryl esters. Tetrahedron Lett., 1981, v.22, IT 45, p.4483 4486.

44. Зарытова В.Ф., Шишкин Г.В., Халимская Л.М. Исследование механизма химического синтеза олигонуклеотидов. ХУ. Роль пиридина в триэфирном методе химического синтеза олигонуклеотидов. Биоорган.химия, 1981, т.7, № б, с.900-906.

45. Добрынин В.Н., Болдырева Е.Ф., Быстров Н.С., Северцева И.В., Чернов Б.К., Колосов М.Н, Синтез олиго- и полинуклеотидов

46. XX.Синтез додекадезоксинуклеотидов ATCTTACTGCAT и CATCGTACC6TG фосфотриэфирным методом. Биоорган, химия, 1978, т.4, № 4, с.523-534.

47. Traylor P.S., Westheimer F.H. Mechanisms in the hydrolysis of phosphorodiamidic chlorides. J.Amer.Chem.Soc., 1965,v.87,p.553-559.

48. Dimroth K., Botta A. Spaltung von fl -Chlorathylestern ider Phosphorsaure mit Natrium. Angew. Chem.,1960, v.72, H 19, p.751.

49. Wagner -Jauregg Т., Hackley B.E. Model reactions of phosphorus-containing enzyme inactivators.III. Interaction of imidazole, pyridine and some of their derivatives with di-alkyl halogenophosphates. J.Amer.Chem.Soc., 1953, v.75, U 9, p. 2125-2130.

50. Crea R., Horn T. Synthesis of oligonucleotides on cellulose by a phosphotriester method. Uucl.Acids Res., 1980, v. 8, U 10, p.2331-2348.

51. Grzeskowiak K. 2-Cyanoethyl 2,2,2-trich.loroethyl phosphoro-rochoridate; an effective reagent for the phosphorylation of nucleosides. Synthesis, 1980, N 10, p.831-833.

52. Кабачник M.M., Полякова И.А., Потапов В.К., Шабарова З.А. Прокофьев М.А. Фосфорилирование нуклеозидов на полимерныхносителях. Докл.АН СССР,1970,т.195, № 6, с.1344-1346.

53. Turner А.P., Khorana H.G. Studies on polynucleotides.VI.

54. Experiments on the chemical polymerization of mononucleotides. Oligonucleotides derived from thymidine-3'-phosphate. J.Amer.Chem. Soc., 1959, v.81, IT 17, p. 4651-4656.

55. Reitz G., Pfleiderer W. Syntese und Eigenschaften von Of-benzyl-Substituierten Diuridylphosphaten. Chem.Ber., 1975, V.108, N 9, p.2878-2894.

56. Reese C.B., Saffhill R. Oligonucleotides synthesis via phosphotriester intermediates: the phenyl-protecting group. J.Chem.Soc.Chem.Communs, 1968, Ж 13, p.767-768.

57. Itakura K., Katagiri IT., Narang S.A. Synthesis of lactose-operator gene fragments by the improved triester method. Can.J.Chem.,1974, v.52, Ж 21, р.3б89-3б93.

58. Katagiri IT., Itakura K., Narang S.A. The use of arylsulfonyltriazoles for the synthesis of oligonucleotides by the triester approach. J.Amer.Chem.Soc.,1975, v.97, N 25, p.7332-7337.

59. Добрынин B.H., Быстров H.C., Чернов Б.К., Северцева И.В., Колосов М.Н. Нуклеофильный катализ реакций фосфорилирова-ния фосфотриазолидами в триэфирном синтезе олигонуклеоти-дов. Биоорган.химия, 1979, т.5, № 8, с.1254-1256.

60. Miyoshi К., Itakura К. Solid-phase synthesis of polynucleotides: V. Synthesis of oligodeoxyribonucleotides by the phosphomonotriazolide. Nucl.Acids Res.Simposium series, 1980, v.7, p.281-291.

61. Agarwal К.Ь., Riftina F. Chemical synthsis of a selfcomp-lementary octanucleotide, dGGTTAACC by a modified triester method. Hucl.Acids Res., 1978, v.5, N 8,p.2809-2823.

62. Jones S.S., Rayner В.,Reese C.B., Ubasawa A., Ubasawa M. Synthesis of the 3'-terminal decaribonucleoside nonaphosphate of yeast alanine transfer ribonucleic acid. Tetrahedron, 1980, v. 36, U 21, p.3075-3085.

63. Broka C., Hozumi T.,Arentzen R., Itakura K. Simplifications in the synthesis of short oligonucleotide blocks. -Nucl.Acids Res., 1980, v.8, IT 22, p.5461-5471.

64. Reese C.B., Zard L. Some observations relating to the oxi-mate ion promoted unblocking of oligonucleotide arylesters. Hucl.Acids Res., 1981, v.9, N 18, p.4611-4625.

65. Добрынин B.H., Чернов Б.К., Колосов М.Н. Новый метод твердофазного синтеза олигодезоксинуклеотидов фосфотриэфирным путем. Биоорган.химия, 1980, т.6, № I, с.138-140.

66. Туркин С.И., Ямщиков В.Ф., Потапов В.К., Хабарова З.А., Прокофьев М.А. Блочный синтез октадезоксинуклеотидаoL{ TGCACATG ) фосфотриэфирным методом без конденсирующих агентов. Докл. АН СССР, 1979, т.245, № 3, с.614-617.

67. Catlin J.C., Cramer P. Deoxy oligonucleotide synthesis via triester method. J.Org.Chem.,1973, v.38, N 2, p.245-250.

68. Cramer P., Schaller H., Staab H.A. Darstellung von Imi-dazoliden der Phosphorsäure. Chem.Ber., 1961, v.94, N 6, p.1612-1621.

69. Cramer P., Schaller H. Phosphorylierungsreaktion mit Diestern der Imidazolyl-phosphonsäure und Monoestem der Di-imidazolylphosphinsaure. Chem.Ber., 1961, v.94, И 6,p. 1634-1640.

70. Туманов Ю.В., Шляпников М.Г., Потапов В.К., Шабарова З.А. Блочный синтез пентануклеотидтетрафосфата на полимерном носителе. Биоорган.химия, 1975, т.1, № 9, с.1291-1295.

71. Сергеева Н.Ф., Шабарова З.А., Прокофьев М.А. Блокирование фосфодиэфирных групп олигодезоксирибонуклеотидов с использованием фосфорилтриимидазолида. Докл.АН СССР, 1977,т.234, № 3, с.607-609.

72. Lohrmann R., Orgel L.E. Preferentialformation of (2f-5')-linked internucleotide bonds in non-enzymatic reactions.-Tetrahedron, 1978, v.34, p.853- 855.

73. Goldman L., Marsico J.W., Anderson G.W. The preparationof adenosine-5'-imidazol-l-yl-phosphonate and its reactions with nucleophiles. A novel synthesis of nucleotide coenzymes. J.Amer.Chem.Soc., 1960, v.82, U 11, p.2969-2970.

74. Chambers R.W., Moffatt J.G. The synthesis of adenosines'- and uridine-5'-phosphoramidates. -J.Amer.Chem.Soc., 1958, v.80, N 14, p.3752-3756.

75. Schaller H., Staab H.A., Cramer P. Phosphorylierungsreac-tionen mit Salzen der Imidazolylphosphonate und Diimidaso-lylphosphinate. Chem.Ber., 1961, v.94, N 6, p.1621-1633.

76. Staab H.A., Schaller H., Cramer P. Imidazolide der Phos— phorsaure. Angew.Chem., 1959, v.71, N 23, p.736.

77. Baddiley J., Buchanan J.G., Letters R. Phosphorylations through glyoxaline(imidazole) and its significance in en-zymic transphosphorylations. J.Chem.Soc., 1956, IT 8,p.2812-2817.

78. Kan S.A., Kirby A.J,, The preactivity of phosphate esters. Multiple structure reactivity correlations for the reactions of triesters with nucleophiles. - J.Chem.Soc. B., 1970, N 6, p.1172-1182.

79. Ramirez P., Marecek J.O. Acetate ion catalysis of phosphorylation in aprotic solvents. Tetrahedron Lett., 1976,1. H 42, p.3791-3794.

80. Ramirez P., Marecek J.F. Nucleophilic catalysis of phosphorylations by p-nitrophenyldiphenyl phosphate and by alkyl ethylene phosphates in aprotic solvents. Tetrahedron Lett., 1977, N11, p.967-970.

81. Ramirez P., Marecek J.P., Okasaki H. One-flask synthesis of unsymmetrical phosphodiesters. Selective amine catalysis of phosphorylations of primary vs. secondery alcohols.

82. J. Amer. Chem. Soc., 1975, v.97, p.7181-7182.

83. Moffatt J.H., Khorana H.G. Carbodiimides.VII. Tetra-p-nit-rophenyl pyrophosphate, a new phosphorylating agent.

84. J.Amer.Chem.Soc., 1957, v. 79, N 10, p.3741-3746.

85. Brown D.M., Hamer U.K. Studies on phosphorylation. Part XIX. The P'P'-diethyl-pyrophosphate ion. J.Chem.Soc., 1960, N 3 p.1155-1161.

86. Dudek G.O., Westheimer P.H, The solvolysis of tetrabenzyl-pyrophosphate. J.Amer.Chem.Soc., 1959, v.81, N11,p.2641-2646.

87. Blakeley R., Kerst P., Westheimer P.H. Solvolysis of tet-rabenzyl pyrophosphate. Catalysis by imidazole. J.Amer. Chem.Soc., 1966, v.88, N 1, p. 112-119.

88. Ramirez P., Okazaki H.Marecek J.P. Acetoin enediol cyc-lophosphorochloridate. Synthesis, 1975, N 10, p.637-638.

89. Ramirez P., Marecek J.P., Ugi I. Synthesis of unsymmetrical phosphodiesters "by means of cyclic enediol pyrophosphates. J.Amer.Chem.Soc., 1975, v. 97, N 13, p.3809-3817.

90. Ramirez P., Okazaki H., Marecek J.E., Tsuboi H. Improved preparation of phosphorylating reagents derived from the acetoin enediol cyclophosphoryl function, Synthesis, 1976, : N 12, p.819-821.

91. Ramirez P., Tsuboi H., Okazaki H., Marecek J.P. A convenient synthesis of 6-,7- and 8-membered cyclic phosphor diesters. - Tetrahedron Lett., 1982, V. 23, Ж 51, p.5375-5376.

92. Charubala R., Pfleiderer W. Synthesis and reactivity of dinucleoside pyrophosphates. Жис1.Acids Res.,SimposW series, 1981, N9, p.161-164.

93. Каюшин A.JI., Берлин Ю.А., Колосов М.Н. Нуклеофильный катализ межнуклеотидной конденсации в фосфотриэфирном синтезе олигонуклеотидов. Биоорган.химия, 1982, т.8, Л 5, с.660-666.

94. Tener G.M., Khorana H.G., Markham R., Pol E.H. Studieson polynucleotides.II.The synthesis and characterization of of linear and cyclic thymidine oligonucleotides. J. Amer.Chem.So с., 1958, v. 80, Ж 23, p.6223-6230.

95. Зарытова В.Ф., Халимская Л.М. Исследование механизма химического синтеза олигонуклеотидов.ХУ1.Катализ пиридином образования межнуклеотидной связи диэфирным методом.-Изв. Сиб.отд.АН СССР,сер.хим.наук,1982,№14,вып.6, с.119-124.

96. Грайфер Д.M.,Зарытова В.Ф.»Иванова Е.М.»Лебедев А.В.,

97. Резвухин А.И. Структура активного фосфорилирующего произят тводного фосфомоноэфиров по данным ЯМР ХР и ■LH. Докл. АН СССР, 1978, т.242, № 3, с.616-619.

98. Зарытова В.Ф., Кнорре Д.Г. Лебедев А.В., Левина А.С.Резвухин А.И. Промежуточные реакции при синтезе олигонуклетидов по данным спектроскопии ЯМР на ядрах ^Р. -Докл.АН СССР, 1973, т.212, №3, с.630-633.

99. Knorre D.G., Lebedev A.V., Levina A.S., Rezvukhin A.I., Zarytova V.F. Active monomeric nucleotide intermediatein the oligonucleotide synthesis. Tetrahedron, 1974,v. 30, N 17, p.3075-3079.

100. Kirby A., Younas M. The reactivity of phosphate esters. Reactions of diesters with nucleofiles. J.Chem.Soc.B., 1970, IT 6, 1165-1172.

101. Зарытова В.Ф., Иванова E.M., Кнорре Д.Г., Форбрюгген X. Влияние п /У^-диметиламинопиридина на образование меж-нуклеотидной связи в ди- и триэфирном методе синтеза оли-гонуклеотидов. - Докл. АН СССР, 1980, т.255, № 5, с.1128-II3I.

102. Зарытова В.Ф.»Иванова Е.М.,Кнорре Д.Г.,Коробейничева И.К., Мальцева Т.В. Структура активных производных моноэфиров фосфорной кислоты по данным ИК спектроскопии. Докл. АН СССР, 1980, т.255, № 2, с.355-358.

103. Ramirez F., Marecek J.F. Amine catalysis in phosphoryl transfer from 2,4-dinitrophenyl phosphate in aprotic and protic solvents. Tetrahedron, 1979, v.35, H 13, p. 15811589.

104. Ramirez F., Marecek J.F. Phosphoryl transfer from phenyl and 4-nitrophenyl phosphates in aprotic and protic solvents. Amine catalysis and formation of oxyphosphorane and metaphosphate intermediates. Tetrahedron, 1980,v. 36, IT 22, p.3151-3160.

105. Knorre D.G., Zarytova V.F. Reactive phosphorylating intermediates in the nucleic acids chemistry. In: Phosphorus Chemistry Directed towards Biology, Stec W.J.,Ed., Oxford; Pergamon Press,1980, p.13-31.

106. Letsinger R.L., Ogilvie K.K. Synthesis of oligothymidyla-tes via phosphotriester intermediates. J.Amer.Chem.Soc., 1969, v.91, N 12, p.3350-3355.

107. Wille G. SynthMs of oligonucleotides with sequence identical wiht or analogous to the З'-ehd of 16S ribosomal RNA of Escherichia coli; preparation of т^АССИСС and ACCUCm^C via phosphotriester inteimediates. Nucl.Acids Res., 1977, v.4, N 4, p.747-754.

108. Takaku H., Yamaguchi R., Nomoto T. 5-Chloro-8-quinolyl group as high efficient phosphate protecting group for the synthesis of oligoribonucleotides. Tetrahedron Lett., 1979, N40, p.3857-3860.- lt>4

109. Narang S.A., Itakura K., Bahl G.P., Katagiri N. Chemical synthesis of two deoxyribopolynucleotide fragments containing the natural sequence of T^-lysozyme gene e. V.

110. Stawinski J.,Hozumi T.,Narang S.A. Arylsulfonyltetrazoles as highly efficient condensing reagents for polynucleotide synthesis. Can.J.Chem.,1976, v.54, N 4, p.670-672.

111. Chakhmakhcheva O.G., Efimov V.A., Ovchinnikov Yu.A. Chemical-enzymatic synthesis of biologically active DNAfragments, Nucl.Acids Res.Simposium series, 1980, IT 7, p. 345-363.

112. Зарытова В.Ф., Ярмолинская E.B. Синтез октануклеотида ААТТССАТ триэфирным методом при взаимодействии 5'-диэфирной группировки нуклеоти.дного с З'-оксигруппой нуклеозидного компонентов. Изв.Сиб.отд. АН СССР, сер. хим.наук, 1981, № 4, вып.2, с.131-138.

113. Takaku Н., Yoshida М. (8-Quinolinesulfonyl)tetrazole: a new type of highly efficient coupling agent for the synthesis of ribooligonucleotides by the phosphotries-ter approach. J.Org.Cnem., 1981, IT 46, p. 589-593.

114. Зарытова В.Ф., Иванова E.M., Кутявин И.В. Синтез олиго-дезоксирибонуклеотидов GQCCTGTTTGGС и триэфирным методом с использованием 5'-/г-хлорфениловых эфиров соответствующих олигонуклеотидных блоков. Биоорган, химия, 1982, т.8, № 2, с.224-230.

115. Берлин Ю.А., Лебеденко Е.Н., Каюшин А.А., Карпов В.А., Колосов М.Н. Химико-ферментативный синтез структурного гена валиновой тРНК .дрожжей. Би о орган, химия, 1983, т.9,1. I, с.43-51.

116. Takaku Н., Yoshida М., Nomoto Т. A convenient synthesis of the 3'terminal nonaoligoribonucleotide of Raus Sarcoma virus 35S RITA via the modified phosphotriester approach. J.Org.Chem.,1983, v.48, v.48, p.1399-1403.

117. Uhlmann E., Pfleiderer W. New improvements in oligonucleotide synthesis by use of the p-nitrophenylethyl phosphate blocking group and its deprotection by DBU or DBN. -Tetrahedron Lett., 1980, v.21, IT 13, p. 1181-1184.

118. Charubala R., Pfleiderer W. Synthesis and properties of adenylate trimers A2»р5'A2fp5'А, A2»p5,A3'p5,A and АЗ'р5'А2»р5'А. Tetrahedron Lett., 1980, v.21, IT 20, p. 1933-1936.

119. Chattopadhyaya J.В., Reese C.B. Some observations relating to phosphorylation methods in oligonucleotide synthesis. Tetrahedron Lett., 1979, IT 52, p. 5059-5062.

120. Takaku H., Kamaike K., Kasuga K. 4-Chlorophenyl 5-chlo-ro-8-quinolyl hydrogen phosphate: a useful phosphoryla-ting agent for guanosine 3-phosphotriester. Chem. Lett., 1982, № 2,p.197-200.

121. Seth А.К., Jay Е. A study of the efficiency and the problem of sulfonation of several condensing reagents and their mechanisms for the chemical synthesis of deoxyoli-goribonucleotides. Nucl.Acids Res., 1980, v.8, IT 22,1. P.5445-5459.

122. Eckstein P., Rizk J. Synthfee von Oligodesoxynucleotiden über Phosphorsauretrieester. Chem.Ber., 1969» v. 102, N 7, 2362-2377.

123. Лебедев A.B. ,Резвухин A.PI. Наблюдение диастереоизомерных форм производных нуклеотидов в спектрах ЯМР ^Р. Изв. Сиб.отд.АН СССР,сер.хим.наук,1975,№ 4,вып.2, с.149-151.

124. Ефимов В.А.»Ревердатто С.В.,Чахмахчева О.Г. Применение триизопропилбензолсульфохлорида и /V-метилимидазола для создания фосфотриэфирной межнуклеотидной связи. -Биоорган.химия, 1982, т.8, № 2, с.231-238.

125. Efimov V.A., Reverdatto S.V., Chakhmakhcheva O.G. New effective method for the synthesis of oligonucleotides via phosphotriester intermediates. Nucl.Acids Res., t982, v.10, N 21, p. 6675-6694.

126. Каюшин А.Л., Берлин Ю.А., Колосов М.Н. Нуклеофильный катализ межнуклеотидной конденсации в фосфотриэфирном синтезе олигонуклеотидов.II.Катализ I-метилимидазолом в различных растворителях.-Биоорган.химия,1983,т.9,№4,с.5II-5I5.

127. Efimov V.A., Reverdatto S.V., Chakhmakhcheva O.G. Aryl-sulfonyl chlorides in the presence of N-methylimidazole as efficient condensing reagents in phosphotriester oligonucleotide synthesis. Tetrahedron Lett., 1982, v.23, N 9, p. 961-964.

128. Ефимов B.A.,Бурякова A.A.,Ревердатто C.B.,Чахмахчева О.Г. Применение /V-метилимидазолидного фосфотриэфирного метода для получения олигонуклеотидов, полезных при изучении ре-комбинантных ДНК. Биоорган.химия, 1983, т.9, № 10, с.1367-1381.

129. Добрынин В.Н., Филиппов С.А., Быстров Н.С., Северцева И.Б., Колосов М.Н. Катализируемый метилимидазолом быстрый синтез олигодезоксинуклеотидов фосфотриэфирным путем на силикагельном носителе в .дихлорэтане, Биоорган.химия, 1983, т.9, № 5, с.70(?-710.

130. Efimov V.A., Burykova A.A., Reverdatto S.V., Chakhmakhcheva O.G., Ovchinnikov Yu. A. Rapid synthesis of long-chain deoxyribooligonucleotides by N-methylimidazolide phosphotriester method. Nucl.Acids Res., 1983, v.11, N 23, p.8369-8387.

131. Rosenthal A., Alder L., Cech D., Gorn V.V., Ivanova E.M. Pyrolyse-Massenspektrometrie zur analytischen Kontrolle von Oligodesoxyribonucleotid-Triestersynthesen an fester Phase in V-5'-Richtung. Z.Chem.,1983, N 23, p.25-27.

132. Горн B.B.»Зарытова В.Ф.»Карпова Г.Г.»Кнорре Д.Г.,Кутявин И.В.,Пичко Н.П. Аномальная скорость комплементарно-адресованного алкилирования в прочных комплементарных комплексах. Докл.АН СССР, 1983, т.270, № 3, с.613-615.

133. Горн В.В., Зарытова В.Ф.»Ярмолинская Е.В. Полуавтоматический твердофазный триэфирный синтез олигодезоксирибонукле-отидов с активацией фосфатного компонента на полимерном носителе. Биоорган.химия,1983, т.9, № II, с.1511-1517.

134. Rosenthal A., Cech D., Veiko V.P., Orezkaja T.S., Kupri-3'anova E.A., Shabarova Z.A. Triester-festphasensynthese von Oligodesoxyribonucleotiden an Polystyren-teflön Trägern. - Tetrahedron Lett., 1983, v.24, N16, p.1691-1694.

135. Michelson A.M., Todd A.R. Nucleotides. Part XX. Mononucleotides derived from thymidine. Identity of thymidilic acid from natural sources with thymidine-5'-phosphate.

136. J.Chem.Soc., 1953, N 3, p.951-956.

137. Физер Л., Физер M. Реагенты для органического синтеза.1. М: Мир, 1970, с.400-401.

138. Очерки по химии азолов. Под редакцией Назаровой S.H. -Ростовский Государственный университет, 1965, C.4T-42.

139. Мишенина Г.Ф., Самуков В.В., Семенова Л.Н., Шубина Т.Н. Использование экстракционного метода для выделения бисза-мещенных.по концевому фосфату дезоксидинуклеотидов. -Биоорган.химия, 1978, т.4, № 6, с.735-739.

140. Мишенина Г.Ф., Самуков В.В., Семенова Л.Н., Шубина Т.Н. Использование комбинации трифенилфосфина с четыреххлори-стым углеродом в качестве конденсирующего агента в оли-гонуклеотидном синтезе. Биоорган.химия, 1978, т.4,8, с.II37-TI39.

141. Gilham Р.Т., Khorana H.G. Studies on polynucleotides.!. A new general method for the chemical synthesis of theinternucleotidic linkage. Synthesis of deoxyri-bodinucleotides. J.Amer.Chem.Soc., 1958, v.8, N 23, p. 6212-6222.

142. Knorre D.G., Zarytova V.P. The mechanism of the chemical synthesis of oligonucleotides and its synthetic consequences. Nucl.Acids Res., 1976, v.3, N 10, p.2709-2727.