Исследование влияния солей аскорбиновой кислоты на кинетику накопления аминокислот тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.04 ВАК РФ

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 КИНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ.

1.1 Формальная кинетика. Кинетическое описание биотехнологических процессов.

1.2 Теоретические особенности биоконверсии.

1.2.1 Микробиологические процессы. Практическая реализация микробиологических процессов. Биотехнология.

1.2.2 Сущность процесса биоконверсии.

1.2.3 Характеристика органического сырья, используемого для проведения биоконверсии.

1.2.4 Микробиологические особенности процесса биоконверсии органического сырья.

1.2.5 Возможности применение конечного продукта биоконверсии

Глава 2 ПРОТЕКАНИЕ ПРОЦЕССОВ БИОКОНВЕРСИИ, ИХ

КИНЕТИЧЕСКОЕ ОПИСАНИЕ И МЕХАНИЗМ.

2.1 Аминокислоты. Синтез аминокислот в процессе биоконверсии.

2.2 Способы интенсификации процессов биоконверсии.

2.3 Кинетические закономерности протекания микробиологических процессов.

2.4 Методы математического описания процесса биоконверсии

Глава 3 МЕТОДЫ И МЕТОДИКИ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И

АНАЛИЗОВ.

3.1 Установка для проведения эксперимента по биоконверсии.

3.2 Методика эксперимента.

3.3 Ультразвуковая пастеризация продукта биоконверсии.

3.4 Качественное определение содержания аминокислот в субстрате.

3.5 Количественное определение содержания аминокислот с помощью автоматического аминокислотного анализатора.

3.5.1 Экстракция свободных аминокислот из смеси и их очистка.

3.5.2 Сушка аминокислот.

3.5.3 Определение аминокислот на автоматическом анализаторе.

3.5.4 Расчет содержания отдельных аминокислот.

3.5.5 Подготовка реактивов.

3.5.5.1 Подготовка натрий-лимоннокислых буферов и регенерирующего раствора.

3.5.5.2 Приготовление раствора нингидрина.

3.5.5.3 Приготовление стандартных растворов аминокислот.

3.6 Определение ферментативной активности.

3.6.1 Колориметрический метод определения активности уреазы

3.6.2 Колориметрический метод определения активности дегидрогеназы.

3.6.3 Газометрический метод определения активности каталазы.

3.7 Микробиологический анализ субстрата.

3.7.1 Подготовка образца к микробиологическому анализу.

3.7.2 Предварительный отбор микроорганизмов, синтезирующих свободные аминокислоты методом Балицкой.

3.7.3 Определение содержания микроорганизмов в субстрате.

3.8 Использованные реактивы.

Глава 4 ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ СОЛЕЙ АСКОРБИНОВОЙ

КИСЛОТЫ НА ПРОЦЕСС БИОКОНВЕРСИИ

ОРГАНИЧЕСКОГО СЫРЬЯ.

4.1 Определение оптимальных условий проведения процесса.

4.1.1 Результаты экспериментов по определению оптимальной температуры.

4.1.2 Определение оптимального соотношения навоза и торфа в исходной смеси.

4.2 Изучение влияния солей аскорбиновой кислоты на образование свободных аминокислот в процессе биоконверсии.

4.2.1 Результаты экспериментов по исследованию воздействия на процесс различных солей аскорбиновой кислоты.

4.2.2 Определение количества аскорбинатов, оптимального для внесения в исходную смесь.

4.2.3 Исследование кинетики накопления свободных аминокислот в ферментируемой смеси.

4.3 Микробиологические исследования процесса биоконверсии.

4.3.1 Влияние солей аскорбиновой кислоты на развитие микроорганизмов в процессе биоконверсии.

4.3.2 Развитие аминокислотсинтезирующих микроорганизмов в процессе биоферментации органического сырья.

4.3.3 Результаты экспериментов по определению ферментативной активности.

Глава 5 КИНЕТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ И ОБСУЖДЕНИЕ МЕХАНИЗМОВ ОБРАЗОВАНИЯ АМИНОКИСЛОТ В ПРОЦЕССЕ БИОКОНВЕРСИИ.

5.1 Математическая модель процесса накопления свободных аминокислот в ферментируемой смеси.

5.1.1 Описание процесса биоконверсии при помощи аппарата формальной кинетики. Решение обратной задачи химической кинетики.

5.1.2 Изменение кинетических параметров при варьировании температуры процесса. Определение кажущейся энергии активации.

5.2 Кинетическая модель роста популяции микроорганизмов в ходе процесса биоконверсии.

Актуальность проблемы и общая характеристика работы. Возрастающие потребности в продукции химико-фармацевтической и пищевой промышленности требуют создания новых технологий синтеза ценных биологически активных соединений, обоснованных физико-химическими исследованиями. Многочисленные биохимические и биотехнологические исследования показывают возможность использования специфических процессов из этих областей для промышленного синтеза целевых компонентов на основе дешевого природного органического сырья. В аспекте ожидаемого истощения природных ресурсов решение этой проблемы приобретает особое значение, так как продукты фотосинтеза и животного мира в будущем могут стать почти единственным полимерным сырьем для химического синтеза и биотехнологии.

Современная биотехнология предусматривает любое превращение субстрата в продукт и обратно. Целесообразность осуществления таких процессов определяют главным образом экономические факторы, в меньшей степени — технические.

Приемлемыми средствами для получения удобрений и других ценных продуктов при одновременном получении локального источника энергии могут служить методы биоконверсии. В такого рода процессах природные органические материалы играют роль исходного субстрата для получения многих биологически активных веществ, а также являются сырьем для получения кормовых добавок и премиксов.

Одним из наиболее перспективных направлений биоконверсии материалов природного происхождения является получение аминокислот на основе органических отходов и трудногидролизуемого растительного сырья. Этот процесс реализован в промышленном масштабе, однако, его физико-химические и кинетические исследования до настоящего времени не проводились.

Цель работы состоит в исследовании кинетических закономерностей накопления аминокислот в процессе получения кормовых добавок методом конверсии биополимеров, входящих в состав природного органического сырья, а также в поисках путей активизации данного процесса с использованием стимулирующих добавок, которые могут интенсифицировать процесс, способствуя биосинтезу вторичных метаболитов.

Для достижения поставленной цели в диссертационном исследовании решались следующие задачи:

- изучение кинетики накопления аминокислот в процессе ферментации;

- исследование аминокислотного состава продуктов биоконверсии органического сырья;

- микробиологические исследования субстрата в динамике процесса биоконверсии;

- изучение влияния биостимуляторов на развитие микробной биомассы, накопление аминокислот и аминокислотный состав продуктов ферментации;

- поиск условий проведения процесса (температура, время инкубации, режим аэрации, состав субстрата, вид и дозировка биостимулятора), оптимальных для максимального накопления аминокислот;

- построение кинетических моделей развития популяции микроорганизмов и накопления аминокислот в процессе ферментации;

- формулирование гипотез о биохимических механизмах интенсификации образования аминокислот при использовании стимуляторов процесса.

Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые изучена кинетика накопления аминокислот, а также исследован качественный и количественный аминокислотный состав конечных продуктов и ферментируемой смеси в динамике процесса биоконверсии природного органического сырья.

Изучено влияние добавок биостимуляторов, интенсифицирующих процесс ферментации, на кинетику накопления аминокислот, аминокислотный состав продуктов биоконверсии и развитие популяции микроорганизмов. Полученные данные использованы для определения наиболее эффективных биостимуляторов и нахождения оптимальных концентраций, внесение стимуляторов в которых способствует максимальному накоплению аминокислот в продукте биоферментации.

Проведено кинетическое моделирование процесса накопления аминокислот и развития микробной популяции, осуществляющей процесс биоконверсии. Показано, что образование аминокислот напрямую связано с ростом численности группы аминокислотсинтезирующих микроорганизмов.

В работе сделаны выводы относительно возможных механизмов биосинтеза аминокислот и активации этих процессов с применением исследованных биостимуляторов.

Полученные данные и сделанные выводы использованы при выполнении следующих проектов в рамках научно-технических программ Министерства образования России: проект "Разработка технологии получения витаминизированных кормовых добавок методом биоконверсии сельскохозяйственных и пищевых отходов с добавлением биологически активных соединений" (программа "Научные исследования высшей школы по приоритетным направлениям науки и техники", подпрограмма "Химия и химические продукты"), проект "Создание комплекса практических занятий удаленного доступа для подготовки инженеров по специальности "Биотехнология" (программа "Научное, научно-методическое, материально-техническое и информационное обеспечение системы образования", подпрограмма "Научное и научно-методическое обеспечение индустрии образования"). Предложенные кинетические модели легли в основу опытно-конструкторской разработки "Система измерения параметров и автоматизации построения кинетических моделей процессов биоконверсии", которая при подготовке данной работы была защищена Свидетельством РФ на полезную модель.

Результаты работы нашли применение на опытно-промышленных установках для биоконверсии на базе Тверского государственного технического университета и Всероссийского научно-исследовательского института сельскохозяйственного использования мелиорированных земель. Решены практические вопросы рационального подбора состава субстратных смесей, установления оптимальных технологических режимов, организации контроля за проведением процесса ферментации природного органического сырья.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были доложены на следующих конференциях и конгрессах: Третья Всероссийская научная конференция "Перспективы развития Волжского региона" (Тверь, 2001 г.), Международная научно-техническая конференция "Проблемы энергосбережения" (Тверь, 2001 г.), Международная конференция молодых ученых "От фундаментальной науки — к новым технологиям. Химия и биотехнология биологически активных веществ, пищевых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии" (Москва, 2001 г.), Третья Всероссийская конференция "Современная образовательная среда" (Москва, 2001 г.), Седьмая конференция студентов и аспирантов центра по химии и физике полимеров и тонких органических пленок (Дубна, 2002 г.), Четвертая Всероссийская научная конференция "Катализ в биотехнологии, химии и химических технологиях" (Тверь, 2002 г.), Пятнадцатый Международный конгресс по химической технологии СШ8А'2002 (Прага, 2002 г.).

1. КИНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Данная работа посвящена исследованию кинетических закономерностей образования аминокислот в процессе биоконверсии природного органического сырья, а также влиянию на кинетику накопления аминокислот добавок биостимуляторов - солей аскорбиновой кислоты различных металлов. В работе подобраны условия проведения ферментации для получения конечного продукта с максимальным содержанием аминокислот, обсуждены механизмы, лежащие в основе процесса, и установлены соответствующие кинетические зависимости.

По результатам настоящей диссертационной работы можно сделать следующие выводы:

1. Изучена кинетика накопления аминокислот в процессе биоконверсии природного органического сырья. Показано, что в ходе микробной ферментации происходит интенсивное накопление аминокислот.

2. Проанализирован аминокислотный состав ферментируемой смеси и продукта биоконверсии.

3. Исследовано влияние солей аскорбиновой кислоты на развитие микроорганизмов в процессе биоконверсии. Использование аскорбинатов в качестве стимуляторов процесса приводит к его значительной интенсификации: численность микробной популяции значительно возрастает.

4. Изучен процесс накопления аминокислот при добавлении аскорбинатов различных металлов. При отсутствии биостимуляторов наблюдается увеличение содержания свободных аминокислот в конечном продукте в 14,5 раза. При введении в исходную смесь аскорбинатов цинка и железа наблюдалось почти 40-кратное увеличение количества свободных аминокислот.

5. Данные по аминокислотному составу продукта, полученные с помощью автоматического аминокислотного анализатора, подтвердились

123 многочисленными микробиологическими исследованиями: максимальное накопление свободных аминокислот в продукте соответствует наибольшему развитию популяции аминокислотсинтезирующих микроорганизмов.

6. Подобраны оптимальные условия проведения процесса биоконверсии. Показано, что максимальное накопление аминокислот в конечном продукте ферментации достигается при длительности инкубации 60 часов, температуре 37°С, соотношении торфа и навоза в исходной смеси 1:1 и добавлении аскорбината железа в концентрации 0,045 %.

7. Разработано математическое описание процесса, включающее кинетические характеристики для развития популяции микроорганизмов и накопления свободных аминокислот в ферментируемой смеси.

8. Предложенные модели дали возможность осуществлять в автоматическом режиме расчет кинетических параметров процесса. Опытно-конструкторская разработка "Система измерения параметров и автоматизации построения кинетических моделей процессов биоконверсии" при подготовке диссертационной работы защищена Свидетельством РФ на полезную модель №21322. Бюл. №1 от 10.01.2002.

1. И.В.Березин, А.А.Клесов. Практический курс химической и ферментативной кинетики. М., 1976.

2. С.Д.Варфоломеев, К.Г.Гуревич. Биокинетика: практический курс. М.: ФАИР-ПРЕСС, 1999. 720 с.

3. И.В.Березин, С.Д.Варфоломеев. Биокинетика. М.: Наука, 1979. 310 с.

4. С.Д.Варфоломеев, С.В.Калюжный. Биотехнология: кинетические основы микробиологических процессов. М.: Высшая школа, 1990. 296 с.

5. The Substrate Reaction Mechanism of Class III Anaerobic Ribonucleotide Reductase / Cho K.B., Himo F., Graslund A., Siegbahn P.E.M. // J. Phys. Chem. 2001. V.105. P.6445-6452.

6. Ф.Даниэльс, Р.Олберти. Физическая химия. М.: Химия, 1989. 760 с.

7. А.Г.Стромберг, Д.П.Семченко. Физическая химия. М.: Химия, 1999. 560 с.

8. Дж.Бейли, Д.Оллис. Основы биохимической инженерии. М.: Мир, 1989. Т.1.682 с.

9. А.Сассон. Биотехнология: свершения и надежды / Пер. с англ. Под ред. Дебатова В.Г. М.: Мир, 1987. 411 с.

10. В.М.Чурбанов. Микроудобрения. М.: Россельхозиздат, 1976.

11. Г.С.Муромцев. Методы почвенной микробиологии. М.: Колос, 1983.

12. Biotechnology for the Elimination of Agrochemical Wastes / Karns J.S., Hapeman C.J., Mulbry W.W., Ahrens E.H., Shelton D.R. // Hortscience. 1998. V.33.P.626-631.

13. Components of Dairy Manure Management-System / Vanhorn H.H., Wilkie A.C., Powers W.J., Nordstendt R.A. // JORNAL OF DAIRY SCIENSE. 1994. V.77. P.2008-2030.

14. З.А.Арзамасов, Л.К.Рышкова. Основы биотермического процесса ускоренного обезвреживания и переработки твердых бытовых отходов иего контроль // Обезвреживание и переработка городских отходов. Вып. 168. М.: ОНТИ АКХ, 1979.

15. Я.Йонаш. Возможности использования жидкого свиного навоза после анаэробной переработки // Тез. докл. Сов.-Чех. научн.-произв. симпозиума. 2-4 окт. 1985 г. Ужгород, 1985. С.34-35.

16. D.Praer, A.G.Hashimoto. Effluent from anaerobic digester as feed stors // Energy Biomass. 1980. №2. P.6-12.

17. У.Э.Виестур, И.А.Шмите, А.В.Жилевич. Биотехнология. Рига: Зинатне, 1987.246 с.

18. D.Foster. Hamilton standard's recycling plant now on stream // Calif. News. 1979. №17. P.6-28.

19. V.C.Kalia, A.P.Yohy. Conversion of waste biomass (Peashells) into hydrodgen and methane through anaerobic-degestion // Bioresource technology. 1995. V.53. P. 165-168.

20. J.Sweeten. Methane production from livestor waste // Texas Agr. Progress. 1978. №24. P. 19-22.

21. В.С.Дубровский, У.Э.Виестур. Метановое сбраживание сельскохозяйственных отходов. Рига: Знание, 1988. 200 с.

22. C.E.Wyman. Ethanol from lignocellulosic biomass technology economics and opportunities //Bio-resource technology. 1994. V.50. P.3-16.

23. В.Л.Яровенко. Основные закономерности непрерывного спиртового и ацетоно-бутилового брожения. М., 1975. 103 с.

24. Wyman Morris, Chen Scku, Dean Kim. Bioconversion of waste paper to ethanol // Process. Biochem. 1992. V.27. P.239-245.

25. H.G.Lawford, J.D.Rousseau. Production of Ethanol from Pulp-Mill Hardwood and Softwood Spent Sulfite Liquors by Genetically-Engineered

26. Escherichia-Coli // APPLIED BIOCHEMISTRY AND BIOTECHNOLOGY. 1994. V.39. P.667-685.

27. Г.В.Наумова. Торф в биотехнологии. Мн.: Наука и техника, 1987. 258 с.

28. Продукты микробного синтеза на торфяных субстратах 1 Под ред. М.В.Залашко. Мн.: Наука и техника, 1978. 234 с.

29. И.И.Лиштван, Е.Г.Базин, Н.И.Гамаюнов. Физика и химия торфа. М.: Недра, 1989.304 с.

30. В.Н.Письменов. Получение и использование бесподстилочного навоза. М.: Росагропромиздат, 1988. 206 с.

31. И.Н.Бацанов, И.И.Лукьяненков. Уборка и утилизация навоза на свиноводческих комплексах. М., 1977. 160 с.

32. Методические рекомендации по проектированию систем удаления, обработки, обеззараживания и использования навоза и помета. М., 1983. 61 с.

33. М.Е.Бекер, Ю.Э.Швинка, В.Т.Лука. Трансформация продуктов фотосинтеза. Рига, 1984. 249 с.

34. В.А.Васильев, М.М.Швецов. Применение бесподстилочного навоза для удобрений. М., 1983. 174 с.

35. Г.Н.Орлов, В.Д.Савин, В.М.Шрамков. Центрифуга для разделения жидкого навоза и помета // Механизация и электрификация сельского хозяйства. 1996. №6. С.11-12.

36. Бесподстилочный навоз и его использование для удобрения. М., 1978. 14 с.

37. И.И.Лукьяненков. Приготовление и использование органических удобрений. М., 1982. 207 с.

38. Н.Г.Ковалев. Жидкий навоз потенциальное сырье для получения нетрадиционных кормовых продуктов // Нетрадиционные корма в питании сельскохозяйственных животных. Ужгород, 1984. С.56-57.

39. Общесоюзные нормы технологического проектирования систем удаления, обработки, обеззараживания и использования навоза и помета. ОНТП 17-81. М., 1981.58 с.

40. Ветеринарная служба в промышленном свиноводстве. / Пер. с нем. Л.Х.Левентуля. Под ред. К.И.Степико. М., 1980.445 с.

41. Л.В.Насимова, А.Я.Класс, Т.В.Пичугина. Влияние соотношения исходных компонентов на процесс компостирования. // Торф в сельском хозяйстве. ВНИЦ Сельхозторф. Томск, 1990. С.63-71.

42. Г.Ю.Рабинович, Н.Г.Ковалев, Э.М.Сульман. Биоконверсия органического сырья в удобрения и кормовые добавки. Тверь: ТГТУ, 1999.

43. Ю.А.Тырнов, В.П.Капустин. Реологические свойства навозной массы // Механизация и электрификация сельского хозяйства. 1996. №1. С. 12-14.

44. W.Baader, H.Ortti. Nutzung der Bio-Barme // Fetd u. IVatd. 1978. №97. P.5-6.

45. К.А.Мудрецова-Висс. Микробиология. M.: Экономика, 1985. 256 с.

46. М.В.Гусев, Л.А.Минеева. Микробиология. М.: Изд-во МГУ, 1985.

47. М.Фробишер. Основы микробиологии. М.: Мир, 1965.

48. Биоконверсия отходов животноводства и растительного сырья в удобрения и кормовые добавки / Сульман Э.М., Тактаров Э.А., Рабинович Г.Ю., Ковалев Н.Г. // Вестник Российской Академии Сельскохозяйственных Наук. №1. 2001. С.32-34.

49. Растительные белки и их использование в кормлении сельскохозяйственных животных // Под ред. Э.Э.Маргона. Л.: Колос, 1964.216 с.

50. К.А.Калунянц, Н.В.Ездаков, И.Г.Пивняк. Применение продуктов микробиологического синтеза в животноводстве. М.: Колос, 1980.

51. К.А.Калунянц, Л.ИГолгер. Микробные ферментные препараты. М.: Пищевая промышленность, 1979. 304 с.

52. Y.C.Lu, T.C.Kelly. Implications of Sustainable Agriculture for the World Food Situation // Food Reviews International. 1995. V. 11. P.255-280.

53. Н.П.Елинов. Химическая микробиология. M.: Высш. шк., 1989. 448 с.

54. Р.Я.Карклинып, А.К.Пробок. Биосинтез органических кислот. Рига, 1972.

55. Biochemistry, A Problems Approach / Wood W.B., Willson J.H., Benbow R.M., etc. // Benjamin Cummings Publishing Co. Menlo Park, CA. 1981. P.294.

56. Д.Мецлер. Биохимия. M.: Мир, 1980. Т. 1 -3.

57. А.Н.Шамин, Н.А.Джабраилов. Развитие химии аминокислот. М.: Наука, 1974. 151 с.

58. Г.Готтшалк. Метаболизм бактерий / Пер. с англ. М.: Мир, 1982.

59. Е.Н.Мишустин, В.Т.Емцев. Микробиология. М.: Агропромиздат, 1987. 368 с.

60. Г.Шульц, Р.Ширмер. Принципы структурной организации белков. М.: Мир, 1982. 354 с.

61. H.C.Davies, F.Karush, J.H.Rudd. Effect of amino acids on steady-state growth of a group A hemolytic Streptococcus II Journal of Bacteriology. №89. 1965. P.421-427.

62. Г.Стент, Р.Кэлиндар. Молекулярная генетика. М.: Мир, 1981.

63. Микробиологический синтез аминокислот (Сборник АН ЛатвССР, ин-т микробиологии им.А.Кирхенштейна) // Под ред. П.А.Кукайн, Ю.О.Якобсон, А.Э.Дук. Рига: Зинатне, 1972. 130 с.

64. Промышленная микробиология // Под ред. Н.С.Егорова. М.: Высшая школа, 1989. 688 с.

65. P.C.Wouters, E.Glaasker, J.P.Smelt. Effects of High-Pressure on Inactivation Kinetics and Events Related to Proton Efflux in Lactobacillus Plantarum // Applied and Environmental Microbiology. 1998. V.64. P.509-514.

66. А.Н.Черкасов, Ю.В.Уханов, Е.А.Половцев. Промышленное производство компостов из помета // Достижения науки и техники АПК. 1992. №3. С.32-33.

67. И.К.Горновносов. Испытание опытно-производственной биогазовой установки. Запорожье, 1969. 34 с.

68. Контроль качества и стандартизации биопрепаратов, фармакологических веществ, кормовых добавок, применяемых в ветеринарии и животноводстве: Сб. науч. труд. М.: ВГНКИ ветпрепаратов, 1983. 259 с.

69. Руководство по контролю качества кормов и полноценности кормления сельскохозяйственных животных / Халикаев Е.А., Петухова Е.В. и др. М.: Колос, 1967. 424 с.

70. H.J.Bendixen. Safeguard against pathogens in Danish biogas plants // Water science and technology. 1994. V.30. P.171-180.

71. E.J.Vandamme. Production of vitamins, coenzymes and related biochemicals by biotechnological processes // J. Chem. Technol. Biotechnol. 1992. V.53(4). P.313-327.

72. Параметрическое управление биосинтезом микроводорослей / Под ред. И.А.Терскова. Новосибирск: Наука, 1980. 120 с.

73. В.А.Мельникова, И.А.Баскакьян, Е.В.Ермолов. Лимитирование и ингибирование жизнедеятельности микроорганизмов ионами металлов // Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1991. №6. С.80-84.

74. С.Дж.Перт. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.: Мир, 1978. 326 с.

75. Стимуляция жизнедеятельности микроорганизмов и вирусов / Под ред. М.Х.Шигаевой. Алма-Ата: Наука, 1986.

76. М.Х.Шигаева. Стимуляция жизнедеятельности микроорганизмов и вирусов. Алма-Ата: Наука, 1960.

77. Способ получения кормовых добавок и удобрений из органических отходов / Ковалев Н.Г., Рабинович Г.Ю., Сульман Э.М., Пакшвер C.JL, Рогов Р.В. // Патент РФ №2126779.

78. Y.L.Peng, A.L.Demain. Bioconversion of Compactin to Pravastatin by Actinomadura Sp. ATCC-55678 // J. MOL. CATAL. B-ENZYM. 2000. V.10. P.151-156.

79. B.Hinz, H.Schroder. Vitamin-C Attenuates Nitrate Tolerance Independently of Its Antioxidant Effect // FEBS LETT. 1998. V.428. P.97-99.

80. А.И.Абрамов. Обогащение кормов химическими средствами. М.: Колос, 1966.

81. Г.Шлегель. Общая микробиология. М: Мир, 1987. 568 с.

82. Теория и практика непрерывного культивирования микроорганизмов / Под ред. И.Л.Работнова. М: Наука, 1980. 220 с.

83. Н.П.Елинов. Основы биотехнологии. СПб.: Наука, 1995. 600 с.

84. Н.С.Печуркин. Популяционная микробиология. Новосибирск: Наука, 1978.277 с.

85. Н.С.Печуркин, И.А.Терсков. Анализ кинетики роста и эволюции микробных популяций. Новосибирск: Наука, 1975.215 с.

86. С.Л.Киперман. Введение в кинетику гетерогенных каталитических реакций. М: Наука, 1964. 608 с.

87. Р.С.Гутер, П.Т.Резниковский. Программирование и вычислительная математика. М.: Наука, 1971. Вып.2. 264 с.

88. Н.Н.Калиткин. Численные методы. М.: Наука, 1978. 512 с.

89. А.Ермакова. Макрокинетика трехфазных гетерогенных каталитических реакций: Дис. д-ра техн. наук. Новосибирск, 1986. 468 с.

90. Ю.Ю.Косивцов. Математическое моделирование процессов гидрирования в синтезе витаминов: Дис. канд. техн. наук. Тверь, 1996. 129 с.

91. Комплексная биоконверсия органических субстанций / Отчет о НИР. Тверь: ТГТУ, 1998. 86 с.

92. Способ биоконверсии органических отходов в кормовую добавку и удобрение / Ковалев Н.Г., Рабинович Г.Ю., Степанюк В.В. и др. // Патент РФ №2151133.

93. K.S.Suslick. Ultrasound, Its Chemical, Physical and Biological Effects. New York: VCH Publishers, 1998. 450 p.

94. Bacterial-Resistance to Ultrasonic-Waves Under Pressure at Nonlethal (Manosonication) and Lethal (Manothermosonication) Temperatures / Pagan R., Manas P., Raso J., Condon S. // Applied And Environmental Microbiology. 1999. V.65. P.297-300.

95. T.J.Mason, J.Ph.Lorimer. Sonochemistry: Theory, Application and Uses of Ultrasound in Chemistry. London: Ellis Horwood, 1988. 186 p.

96. The use of ultrasound in food technology. Inactivation of peroxidase by themosonication / De Gennaro L., Cavella S., Romano R., Masi P. // Journal of Food Engineering. 1999. Y.39. P.401-407.

97. Influence of Ultrasound Irradiation on Hydrolysis of Sucrose Catalyzed by Invertase / Sakakibara M., Wang D., Takahashi R., et. al. // Enzyme and Microbial Technology. 1996. V.18. P.444-448.

98. G.L.Lin, H.C.Liu. Ultrasound-Promoted Lipase-Catalyzed Reactions // Tetrahedron Letters. 1995. V.36. P.6067-6068.

99. Ю.Б.Филиппович. Основы биохимии. M.: Высш. шк., 1993. 496 с.

100. Жидкостная колоночная хроматография / Под ред. Э.Дейла и др. М., 1978.

101. P.Bohlen, R.Schroeder // Anal. Chem. 1982. V.126. P. 144-152.

102. The amino acid sequence of toxin V from Anemonia sulcata / Scheffler J. J., Tsugita A., Linden G., Schweitz H., Lazdunski M. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1982. V.107.

103. RJ.Simpson, M.R.Neuberger, Y.Y.Liw. // J. Biol. Chem. 1976. V.251. P. 1936-1940.

104. Л.А.Коган. Количественная газовая хроматография. М.: Химия, 1975. 18 с.

105. Э.Лейбниц, Х.Г.Штрупке. Руководство по газовой хроматографии. М.: Мир, 1988.

106. С.Бернхард. Структура и функция ферментов. / Пер. с англ. М.: Мир, 1971.334 с.

107. А.М.Безбородов. Ферментативные реакции в биотехнологии. М., 1994.

108. Методы почвенной энзимологии / Под ред. Ф.Х.Хазиева. М.: Наука, 1990. 189 с.

109. М.Диксон, Э.Уэбб. Ферменты. М.: Мир, 1982. Т.1. 396 с.

110. Введение в прикладную энзимологию. М.: 1982.

111. Практикум по биохимии / Под ред. С.Е.Северина, Г.А.Савельевой. М.: Изд-во МГУ, 1989.

112. И.В.Березин. Исследования в области ферментативного катализа и инженерной энзимологии. М.: Наука, 1990. 382 с.

113. Практикум по микробиологии / Под ред. Н.С.Егорова. М.: Изд-во МГУ, 1976.308 с.

114. J.Monod. La technique de culture continue: Theorie et application. Ann. Inst. Pasteur, Paris. 1950.

115. J.L.Ingraham. Growth of psychrophilic bacteria. // J. Bact. 1958. V.76. P.75-80.

116. B.S.Lane, A.P.J.Trinci, A.T.Gillespie. Influence of cultural conditions on the virulence of conidia and blastospores of Beauveria bassiana to the green leafhopper. Nephotettix virescens. Mycol. 1991. Res.95(7). P.829-833.133

117. Further-Studies on the Bioconversion of Penicillin-G into Deacetoxycephalosporin-G by Resting Cells of Streptomyces-Clavuligerus Np-1 / Baezvasquez M.A., Adrio J.L., Piret J.M., Demain A.L. // APPL. BIOCHEM. BIOTECH. 1999. V.81. P. 145-152.

118. Е.С.Панцхава. Применение метанового брожения в народном хозяйстве // Теоретические и методические основы изучения анаэробных микроорганизмов. Пущино, 1978. С.158-169.

119. Л.Ф.Дмитриев. О механизме сопряжения окисления и фосфорилирования // Молекулярная биология. 1986. Т.20. Вып.4. С.1111-1125.

120. Inactivation of Deacetoxycephalosporin-C Synthase in Extracts of Streptomyces-Clavuligerus During Bioconversion of Penicillin-G to Deacetoxycephalosporin-G / Adrio J.L., Cho H., Piret J.M., Demain A.L. // ENZYME MICROB. TECHNOL. 1999. V.25. P.497-501.