Кинетические эффекты совместного ингибирующего действия α-токоферола с природными соединениями изопреноидного строения и фосфолипидами

Дарюхина, Елена Николаевна

Кинетические эффекты совместного ингибирующего действия α-токоферола с природными соединениями изопреноидного строения и фосфолипидами тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.04 ВАК РФ

Дарюхина, Елена Николаевна АВТОР

кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ

Тюмень МЕСТО ЗАЩИТЫ

2004 ГОД ЗАЩИТЫ

02.00.04 КОД ВАК РФ

Диссертация по химии на тему «Кинетические эффекты совместного ингибирующего действия α-токоферола с природными соединениями изопреноидного строения и фосфолипидами»

Автореферат диссертации на тему "Кинетические эффекты совместного ингибирующего действия α-токоферола с природными соединениями изопреноидного строения и фосфолипидами"

На правахрукописи

ДАРЮХИНА ЕЛЕНА НИКОЛАЕВНА

КИНЕТИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ СОВМЕСТНОГО ИНГИБИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ а-ТОКОФЕРОЛА С ПРИРОДНЫМИ СОЕДИНЕНИЯМИ ИЗОПРЕНОИДНОГО СТРОЕННИЯ И ФОСФОЛИПИДАМИ

02.00.04 - физическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Тюмень 2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Тюменской государственной медицинской академии МЗ РФ

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Сторожок Надежда Михайловна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

КасаикинаОльга Тарасовна

доктор медицинских наук, профессор

ПаничеваЛарисаПетровна

Ведущая организация:

Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова

Защита состоится «29» декабря 2004 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 212.273.06 в Тюменском государственном нефтегазовом университете. По адресу: 625000, г. Тюмень, ул. Володарского, 38, аудитория 219, ТюмГНГУ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ТюмГНГУ.

Автореферат разослан «йУ» ноября 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор химических наук,

профессор

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. В настоящее время из природных источников выделено и идентифицировано множество соединений изопреноидного строения. К ним относят витамины группы D (Рг - Dj), а также обширную группу природных пигментов - каротиноидов, включающих более 700 веществ /Спиричев В.Б., 1989, Бауман В.К., 1989, Бриттон Г., 1986, Edge R. 2000, Ладыгин В.Г., 2001, Barros M.P., 2001, Jackson H.L.,2004, McArdle F., 2004, Li W., 2003,2004/. Каротиноиды, имеющие в своей структуре от 10 до 13 двойных связей, окрашены в оттенки желтого, розового, оранжевого, красного, фиолетового цвета. Находясь в природе минорных количествах, они определяют окраску многих растений и живых организмов. Ряд соединений этого класса синтезированы и стали объектом всестороннего изучения их физико-химических свойств, антиоксидантного (АО), биологического и лечебного действия.

Значительный интерес представляет исследование влияния природных пигментов и витаминов на процесс окисления, поскольку существуют широкие перспективы практического использования биоантиоксидантов (биоАО) для стабилизации окисления полиненасыщенных липидов природного, биотехнологического происхождения, пищевых масел, лекарственных препаратов, нутрицевтиков, косметических средств.

Исследованию роли изопреноидов в процессе окисления посвящено ряд работ, касающихся преимущественно р-каротина (провитамина A) /Krinsky N.I., 1993, Ка-саикина ОТ., 1975, 1995, 1998, Сторожок Н.М., 1996, 1997, Terao J., 1994, Miller N., 1996, Grabtree D.V., 1997, Edge R., 1997,2000, Chen G. 2001, Kasaikina O.T., Vedutenko V.V. 2002, McArdle F.,2004, Hix L.M., 2004/ и витамина D2 /Спиричев В.Б., 1971,1975, 1977/. Показано, что (J-карогин является ингибитором свободнорадикального окисления /Krinsky N.I., 1993, Tsuchihashi H.," 1995, Miller N., 1996, Grabtree D.V., 1997, Edge R., 1997,2000/, а витамин D2 может инициировать этот процесс /Спиричев В.Б., 1975, 1977/ Имеются единичные работы, в которых при изучении модельных систем, а также в опытах на животных отмечалась возможность инверсии и значительного усиления реакции окисления в присутствии высоких доз р-каротина /Сторожок Н.М., 1996, Ланкин В.З., 1999/ или витамина D2 /Спиричев В.Б., 1975,1977, Исаева В.А., 1975/.

При клиническом применении показано иммуномоделирующее, антиоксидант-ное действие р-каротина в малых дозах /Буюклинская О.В., 1992, Утешев Б С, 1998, 1999, Тихазе А.К., 1999/, при длительном приеме высоких доз установлено увеличение риска и смертности от онкозаболеваний /Mayne S.T., Handelman G.J., 1996, А1-banes D., 1999, Baker D.L., Krol E.S., 1999/. Эти данные указывают на необходимость дальнейшего изучения особенностей д е й с т ß-каротина, едования характера зависимости доза-эффект.

Среди идентифицированных к настоящему времени изопреноидов повышенный интерес вызывает астаксантин (Зл,-дигидрокси - 4,4-дикето-бета-каротин) /Di Mascio P., 1989, Oshima S., 1993, Lira B.H., 1992, Terao J., 1992, Jyonouchi, 1993, Tanaka, 1994, Lee S.J., 2003, Li W., Hellsten A. 2004, Jacobsson L.S. 2004/ и холекальциферол (витамин D3) /Кузьменко А.И., Морозова Р.П., 1997, 1999, Ku'menko A.I. Morozova R.P. 1997,1999/.

В современной литературе имеются единичные данные об антиоксидантной активности астаксантина /Lim В й, 1992, Oshima S., 1993, Miki W., 1991/ и витамина D3 /Кузьменко А.И., Морозова Р.П, 1997,1999/, которые, однако, достаточно противоречивы.

Известно, что каротиноиды и витамины группы D в фосфолипидном бислое биологических мембран присутствуют вместе с а-токоферолом (а-ТФ) — основным при-

родным антиоксидантом (АО) /Milon A., 1986, Bs ^^¿ {^ЦиШИ^ЛвЖНР 1 с этим

СИБЛИОТЕНА

о» smí/MT

немаловажным представляется изучение характера совместного действия каротинои-дов и а-ТФ, являющихся важнейшими компонентами системы АО защиты клетки. В литературе имеются единичные сведения о возможности взаимодействия биоАО в процессе окисления. Ранее были получены данные, констатирующие при окислении яичного фосфатидилхолина (ФХ) эффекты синергизма в совместном действии р-каротина и а-ТФ /Terao J., 1980, Palozza Р., 1991, Olma F., 1993, Tesoriere L., 1996/. Известны также работы, показывающие, что без фосфолипидов в действии указанные биоАО проявляется эффект антагонизма /Сторожок Н.М, 1996, Сторожок Н М., Кутузова И В., 1995,1996,1997/.

Работ, посвященных изучению совместного действия а-ТФ и астаксантина или витамина D3 в модельных системах различной сложности, в современной литературе не найдено. Таким образом, отсутствие исследований и противоречивость имеющихся в литературе данных свидетельствуют о необходимости системного изучения кинетических эффектов действия индивидуальных природных антиоксидантов и их смесей на процесс окисления модельных систем различной сложности, выявления особенностей концентрационных зависимостей, установления взаимосвязи между строением и ингибирующими свойствами изопреноидов.

Целью настоящей работы являлось сравнительное изучение закономерностей окисления модельных систем в присутствии индивидуальных природных соединений изопреноидного строения (Р-каротина, астаксантина, витамина D3), исследование кинетических эффектов их совместного действия с а-токоферолом, поиск путей усиления эффективности в композиции с синтетическими АО и фосфолипидами.

Задачи исследования

1. Исследовать кинетику инициированного окисления модельного субстрата мети-лолеата (МО) в присутствии индивидуальных р-каротина, астаксантина и витамина D3. Выявить особенности брутто-ингибирующего действия веществ от концентрации всех исследуемых АО в среде неполярного растворителя (хлорбензола) и в микрогетерогенной системе, образованной добавками анионного ПАВ (додецилсульфата натрия).

2. Методом термохемилюминесценции изучить антирадикальную активность указанных соединений, оценить значение константы к7.

3. Исследовать кинетические эффекты совместного ингибирующего действия бинарных смесей а-ТФ С {i-каротином, астаксантином или витамином D3.

4. Количественно изучить кинетику расходования а-токоферола в присутствии витамина D3 И JJ-каротина методом УФ- и И К- спектроскопии.

5. Установить характер и кинетические закономерности совместного ингибирую-щего действия композиций, включающих дополнительно к или витамину D3 фосфолипиды (яичный фосфатидилхолин)

6. Показать возможности стабилизации систем, содержащих p-каротин, при введении нового нетоксичного синтетического антиоксиданта - (бис-З-л'-гидрокси-З'.З'-дитрет.бутил фенил )-пропил сульфида) (СО-3).

Материалы и методы исследования. В работе использованы манометрический метод поглощения кислорода, метод термохемилюминесценции, методы УФ- и ИК-спектроскошш, метод Ребиндера определения критической концентрации мицелооб-

разования. _ _ ______ __

Исследуемые шименты {Р-каротина, астаксантин) предоставлены ФГУ Институт витаминов, * использовали витамин D3 (холекальциферол), дибунол фирмы (Sigma),

Германия, а-токоферол фирмы «Serva» США. Синтетический антиоксидант (СО-3) -бис-3-(4'-гидрокси-3 ллдитрет. бутилфенил)н.-пропил сульфид и метилолеат (МО) синтезированы в НИОХ им. В.В. Ворожцова СО РАН. МО очищен перегонкой под вакуумом при остаточном давлении 5 мм. рт. ст. Применяли эмульгатор додецил-сульфат натрия (SDS) и яичный фосфатидилхолин фирмы «Serva», США. В качестве растворителей использовали хлорбензол, четырёххлористый углерод марки «ОСЧ» сорт 2. Растворители очищали методом простой перегонки.

Достоверность результатов

Результаты экспериментов обработаны статистически с использованием компьютерной программы на языке QBasic. Достоверность результатов определялась с использованием t-критерий Стьюдента (Г.Корн, Т.Корн, 1970).

Научная новизна. Впервые изучены особенности ингибирующего действия ас-таксантина в модельной системе инициированного окисления метилолеата в микрогетерогенной системе, образованной добавками анионного поверхностно активного вещества (ПАВ) (додецилсульфата натрия) к водно-органической среде. Показан экстремальный характер изменения эффективности от количества астаксантина в системе окисления. Показаны диапазоны концентраций, обеспечивающие максимальное торможение процесса. Установлено, что витамин Dj участвует в инициировании окисления. Впервые оценены константы элементарной реакции взаимодействия ас-таксантина с пероксильными радикалами (кл). Показано, что астаксантин проявляет антирадикальную активность, на порядок превосходящую активность Холекальциферол в указанной реакции не активен.

В диссертационной работе впервые кинетически изучены эффекты совместного ин-гибирующего действия а-ТФ с астаксантином и витамином D3. Установлена общая для всех закономерность изменения эффективности действия композиций ОгТФ С f$-каротином, астаксантином или витамином Dj. Было показано, что при разных молярных соотношениях в действии компонентов возможно проявление аддитивности, эффектов синергизма или антагонизма. При одном и том же количестве а-ТФ зависимость изменения эффективности от концентрации ^-каротина или атаксантина описывается IJ-образной кривой, адля смеси *а-ТФ -холекальциферол носит линейный характер.

Показано, что эффективность действия смесей зависит от молярных соотношений а-ТФ и полнена, количества в его структуре сопряженных Я-СВЯЗеЙ. Установлены соотношения концентраций а-ТФ И Р-карОТИНа, астаксантина или витамина D3 в смесях, которые будут обеспечивать высокую эффективность совместного действия за счет проявления эффектов синергизма. Показано, что синергизм в совместном действии а-ТФ с витамином Dj наблюдается при отношении их концентраций, превышающей 100:1, для композиций а-ТФ С (3-каротином- при молярном соотношении, большем чем 4:1. Для бинарной системы а-ТФ: астаксантин - область синергизма отвечает соотношению указанных компонентов, больших 12:1.

Предложен способ увеличения действия в композиции с новым син-

тетическим ингибитором окисления (бис-З-л'-гидрокси-З'.З'-дитрет.бутил фенил)-пропил сульфид (СО-3) или яичным фосфатидилхолином (ФХ).

Практическая значимость работы заключается в установлении концентрационных диапазонов, обеспечивающих максимальное ингибирование окисления в присутствии природных пигментов: астаксантина. Сведения о максимальной эффективности этих соединений могут послужить основой для разработки новых рецептур составов, применяемых для стабилизации окисления липидных субстратов различного происхождения, лекарств, косметических средств, пищевых продуктов

(масел, маргарина, йогуртов и других молочных продуктов). В расчете на лиииды оптимальное содержание индивидуальных а-токоферола, астаксантина и (5-каротина должно составлять 0,3% и 0,095%, 0,003% соответственно.

Показано, что для обеспечения окислительной стабильности систем, включающих витамин Оз, требуется дополнительное введение а-ТФ или его синергической композиции с фосфатидилхолином.

Результаты настоящей работы позволяют заключить, что применение в медицинской практике высоких доз Р-каротина, астаксантина или витамина Из может способствовать ускоренному расходованию основного природного АО - а-ТФ, что может привести к ослаблению антиоксидантной системы организма в целом и увеличению интенсивности пероксидного окисления липидов (ПОЛ) биологических мембран. Учитывая патогенетическое значение процессов ПОЛ должны быть проведены дополнительные фармакологические испытания действия разных доз |)-каротина, астаксантина и витамина разработаны рекомендации их длительного безопасного применения.

Полученные в работе данные необходимо учитывать в технологии производства пищевых продуктов и нутрицевтиков, фармпрепаратов, косметики с целью длительного сохранения их биологической ценности и повышения окислительной устойчивости. Предложены способы стабилизации окисления смесей липидов с р-кар0ПШ0М за счет дополнительного введения фосфолипидов или синтетического пространственно-затрудненного фенола (СО-3). Подобраны оптимальные соотношения компонентов, позволяющих значительно увеличить эффективность ингибирующего действия композиций.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на международной конференциям "Биоантиоксидант", Москва, 2002 г.; международных симпозиумах "Медицина и охрана здоровья" Тюмень, 1997,1999,2000,2001,2002,2004 гг.; III международном симпозиуме "Биологически активные добавки - нутрицевтики и их использование с профилактической и лечебной целью при наиболее распространенных заболеваниях" Тюмень, 1997; международной конференции "Химия органических и элементорганических пероксидов", Москва, 1998 г.; V Национальном конгрессе "Человек и лекарство", Москва, 1998; международной конференции "Свободнорадикаль-ные процессы: фармакологические, клинические, биологические аспекты", Санкт-Петербург, 1999; «Терапевтическом форуме», Тюмень, 2000 г.; региональных и всероссийских межвузовских конференциях молодых ученых и студентов "Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины", Тюмень, 2001,2002, 2003,2004 гг., VI конгрессе молодых учёных и специалистов «Науки о человеке», Томск, 2003 г.

Публикации. Основной фактический материал и выводы диссертации опубликованы в 21 работе (8 журнальных статей и 13 тезисов докладов).

Положения работы, выносимые на защиту:

1. Антирадикальная активность (кт) и особенности брутто-ингибирующего действия непредельных соединений (астаксантина, р-каротина и витамина Э3).

2. Кинетика совместного ингибирующего д е й а-ТФКвферола с астаксантином,

р-каротином или витамином Оз.

3. Кинетика расходования а-токоферола в присутствии витамина И Р-каротина.

4. Кинетические закономерности совместного ингибирующего действия композиций, включающих фосфолипиды (фосфатидилхолин), а-токоферол и {(-каротин или витамин

5. Перспективы стабилизации окисления липидов и {¡-каротина за счет введения нового синтетического АО - (бис-З-л-гидрокси-З'.З'-дитрет.бутил фенил)-пропил сульфида) (СО-3).

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 159 страницах, содержит 14 таблиц 32 рисунка. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. Исследование особенностей ингибирующего действия Р-каротина, астаксантина и витамина D3 (холекальциферола)

В сравнении изучено ингибирующее действие витамина Вз, Р-каротина и астаксантина, которые включают в своей структуре 3, 11 и 13 сопряженных двойных связей соответственно (см. формулы, схема 1).

Схема 1

Формулы исследуемых соединений

I Р-КАРОТИН

П АСТАКСАНТИН, 3,3'дигидрокси -^'-дикето-бета-каротин

Мв

а-токоферол 2,5,7,8 - тетраметил- 2-(4,8,12 триме-тилтридецил) хроман-6-ол

Витамин Из (холекалыциферол) 9,10,-секохолеста - 5,7,10, (19)-триен-3-ол.

I I с-о ^-о

V (бис-3-(41-гидрокси-31,51-дитрет.бутилфенил)-пропил сульфида) (СО-3)

Фосфатидилхолин

Брутто-ингибирующее действие веществ изучалось при инициированном окислении модельного субстрата МО в среде неполярного растворителя хлорбензола при их соотношении 1:1; а также в микрогетерогенной среде, образованной дополнительными добавками воды и анионного ПАВ додецилсульфата натрия (ЭЭ8). Концентрация ПАВ в опытах соответствовала критической концентрации мицеллообразования, установленной экспериментально (2,5х10"2 М). Микрогетерогенность системы с ПАВ была подтверждена методом электронной микроскопии, показано, что в выбранных условиях формируются обращенные мицеллы. Процесс инициировали за счет термического разложения азобисизобутиронитрила (АИБН) при 333 К.

Закономерности, полученные при изучении действия антиоксидантов и их смесей при окислении субстрата в среде неполярного растворителя, могут быть применены для описания окислительных превращений жиров, масел различного происхождения. Кинетика окисления в системе липид-вода в присутствии ингибиторов и их композиций могут использоваться для характеристики процесса окисления водно-жировых эмульсий, которые широко применяются как основы лекарственных и косметических средств, являются пищевыми продуктами (сметана, йогурты, майонезы, маргарины).

Известно, что важной характеристикой ингибиторов окисления является активность в реакции с пероксильными радикалами (К0201 характеризуемая величиной константы к7. Тестирование методом хемилюминесценции антиразикальной активности асгаксангина, (}-каротина и витамина О) показало, что в реакции с пероксильными радикалами участвуют только пигменты (табл.1). Значение к7 эф. для астаксантинаи Р-каротина составляет (1,Зх103)М"|хс1 И 1,4хЮ4 М''хс"' соответственно (табл.1). Видно, что в сравнении с а-ТФ, для которого было подтверждено известное из литературы значение к7, равное 3,6x10* М"'хс'' /КухтинаЕ.Н, 1983/, антирадикальная активность асгаксангина и р-каротина существенно ниже (соответственно в 27 и 260 раз).Для ^-каротина подтверждены литературные данные /О/Иодта О.Л. 1995, Ка»и-кта О.Т. 2002/. Антирадикальная активность астаксантина по сравнению с каротином выше практически в 10 раз. Этот факт объясняется дополнительным введением в кольца ионона электроноакцепторов - гидрокси (-ОН) и оксо- (С=О) групп.

Витамин в тех же условиях окисления не проявлял антирадикальной активно-ста, что позволяет заключить, что он не является АО (табл. 1).

При изучении кинетики окисления липидов в присутствии витамина Бз, установлено увеличение скорости инициирования, окисляемости системы, характеризуемой кинетическим показателем к^Л/ к^ (рис. 1). Дибупол не влиял на величин этого кинетического показателя (рис. 1). При высоких количествах витамина Из величина кгЛ/ к« уменьшается, что связано с увеличением скорости обрыва цепей в реакциях кросс - диспропорционирования. Исследовали начальную скорость поглощения кислорода смесей, включающих различные концентрации МО.

Из рис. 2 видно, что скорость процесса возрастает прямо пропорционально увеличению количества окисляемого вещества (рис.2, кривая 1). Кривая скорости окисления для композиций МО и витамина располагается выше указанной линейной зависимости и носит экстремальный характер (рис. 2, кривая 2). Эти данные указывают на то, что витамин ^ служит дополнительным источником свободных радикалов, что связано с его строением. Витамин Бз по сравнению с (3-каротином и астак-сантином имеет существенно меньшую степень сопряжения системы я-связей. Снижение длины, а, следовательно, и энергии делокализации сопряжённых связей приводит к образованию активных радикалов, способствующих дополнительному иниции-

рованию процесса. В присутствии витамина D3 наблюдалось повышение периодов индукции по сравнению с контролем (табл.1), что является следствием кросс-диспропорционирования радикалов, образующихся в системе окисления.

Таблица 1

В литературе, однако, приводятся сведения об ингибирующем действии витамина D3, полученные при введении экспериментальным животным холекальциферола на фоне его недостаточности /Кузьменко А.И., 1997/, а также при изучении in vivo окисления липопротеидов низкой плотности, микросомальной и митохондриальной фракций печени крыс /Кузьменко А.И., 1999/. Можно полагать, что описываемые в работах /Кузьменко АЛ. 1997, 1999/ эффекты ингибирования обусловлены не витамином Dj а действием его метаболитов, образующихся в организме в результате реакций гидроксилирования. Ингибирующим действием может обладать, в частности, 1,25-дигидрокси витамин Имеются данные, косвенно подтверждающие антиоксидант-ные свойства метаболитов холекальциферола /Brasitus T.A., 1986/. Таким образом, совокупность полученных нами данных показывает, что индивидуальный холекальци-ферол не является АО, он вовлекается в реакцию подобно субстрату и способствует дополнительному инициированию окисления.

При окислении МО в присутствии а-ТФ в среде хлорбензола подтвержден описанный ранее в литературе экстремальный характер зависимости эффективности действия от концентрации АО /Храпова Н.Г., 1977, 1988, Бурлакова Е.Б., 1998/ (рис.3). Было показано, что при окислении в мицеллярных растворах воспроизводится аналогичная по форме концентрационная кривая. Обращает внимание, что вне зависимости от среды окисления положение точек экстремума, соответствующих наиболее эффективным концентрациям ингибитора, отвечают одному и тому же диапазону (7,50-35,00)* 10'4 М (табл.1). Значения периодов индукции в точках экстремума при окислении МО в среде неполярного растворителя и в системе, образованной добавками воды и ПАВ, различаются практически в 2 раза (960 мин и 1800 мин соответственно) (рис. 3).

Показано, что в водно-органических системах в присутствии анионного ПАВ -додсцилсульфата натрия, формируются обращенные мицеллы /Карташева З.С., Максимова Т.В., Коверзанова Е.В., Касаикина О.Т., 1997/. В работе /Галявин А.А., Касаи-кина О.Т., 2003/ на примере гидропероксида кумила установлено, что концентрирующиеся в микрореакторах гидропероксиды в присутствии додецилсульфата авто-каталитически распадаются с образованием молекулярных продуктов окисления (до-децилового спирта - стабилизатора эмульсий 2 рода - обращенных мицелл и, по-видимому, фенолсульфокислоты). Предложенная концепция объясняет большую эффективность действия исследуемых веществ при окислении субстрата в микрогетерогенной среде по сравнению с гомогенатами липидов в хлорбензоле.

При исследовании действия показано, что как и для концен-

трационная кривая имеет экстремум (рис. 4, 5), который относится к узкому диапазону концентраций (табл.1). Концентрации, соответствующие максимальному действию Р-каротина, относительно малы (2-7)x10_3M, однако, именно они соответствуют уровню каротиноидов в плазме крови /Шашкина М.Я., 1999/. Превышение содержания р-каротина по сравнению с указанным уровнем приводит к значительному уменьшению эффектов торможения окисления.

Считают, что Р-каротин легко присоединяет алкильные и пероксильные радикалы, которые в дальнейшем обратимо присоединяют кислород. Эта реакция определяет сильную зависимость скорости расходования Р-карогина от концентрации кислорода в условиях инициированного окисления /Ведутенко В.В., Карташева З.С., Касаикина О.Т., 2002/. Авторы считают, что большую роль в торможении окисления играют продукты превращения в радикальных реакциях.

Показано, что в микрогетерогенной среде действие р-каротина на 15% выше, чем при окислении в гомогенной системе, что обусловлено действием DDS /Галявин А.А., КасаикинаО.Т.,2003/.

Ингибирующее действие астаксантина было изучено в среде неполярного растворителя с добавками воды и DDS. В сравнении с ($-каротином астаксантин более эффективен, его действие как ингибитора окисления проявляется в широком диапазоне концентраций (табл. 1). Концентрационная кривая носит экстремальный характер (рис. 4). Указанные свойства биоАО обусловлены особенностями их структуры и различиями в стабильности их радикальных продуктов Модификация у астаксантина кольцевых структур электроноакцепторными -ОН и С=0 группами способствует увеличению жёсткости полиеновой Я-ЭлектрОННОЙ системы и большей стабилизации по сравнению с образующихся при его окислении радикалов. Влияние указанных фрагментов приводит к некоторому увеличению брутто-ингибирующего действия астаксантина.

Таким образом, для изучаемых нами природных АО установлен экстремальный характер зависимости между ингибирующим действием и количеством их в системе окисления. Можно полагать, что эта закономерность имеет важное регуляторное значение. Биологический смысл кривых заключается в том, что интенсивность неферментативных окислительных процессов может поддерживаться на стационарном уровне при изменении концентрации а-ТФ или астаксантина в достаточно широком интервале. Нецелесообразно введение в организм высоких количеств природных ингибиторов в течение длительного времени, поскольку это может приводить не к повышению, а к ослаблению антиоксидантной защиты.

Сведения о максимальной эффективности а- токоферола, ^-каротина и астаксан-тина полученные в настоящей работе, могут послужить основой для разработки составов, используемых для стабилизации окисления липидных субстратов различного происхождения, лекарственных препаратов, косметических средств, пищевых продуктов (масел, маргарина, молочных продуктов). В расчете на липиды оптимальное содержание индивидуальных токоферола, астаксантина и должно со-

ставлять 0,3% и 0,095%, 0,003% соответственно.

Глава 2. Кинетика совместного антиоксидантного действия о-токоферола с р-каротином, астаксантином и витамином О]

Известно, что в природных объектах изучаемые нами соединения (а-ТФ, витамин Из, (3-каротИН, атаксантин) локализованы совместно. В связи с этим одной из задач настоящего исследования являлось выявления характера их взаимоотношений в процессе окисления липидов.

Попарно изучали ингибирующее действие смесей а-ТФ с одним из перечисленных выше соединений. Сопоставляли между собой сумму периодов индукции опытов, в которых окисление МО ингибировалось индивидуальными соединениями (£Т|), с эффектом, получаемым при совместном действии компонентов (т^). Эффективность действия смеси количественно оценивали по абсолютному значению Дт, определяемому по уравнению Дт = Те — Гт, ,, либо в относительных единицах <Дт/ Ет,)х100%.

Количество а-ТФ в опытах оставалось постоянным, а концентрация второго компонента изменялась в широком диапазоне. Совместное действие веществ исследовалось при окислении МО в среде хлорбензола и в системе липиды - вода, стабилизированной

Вне зависимости от условий окисления была установлена общая для всех закономерность изменения эффективности действия композиций а-ТФ С Р-кар0ТИН0М, атаксантином или витамином Из от их концентрации (рис. 6,7,8). Было показано, что при разных молярных соотношениях в действии компонентов возможно проявление аддитивности, эффектов синергизма или антагонизма. При одном и том же количестве зависимость изменения эффективности от концентрации или атаксантина описывается и-образной кривой (рис. 7, 8), а для смеси а-ТФ с холекаль-циферолом носит линейный характер (рис.6). Общность этих кривых заключается в том, что они располагаются в области синергизма и в области антагонизма. Для смесей с постоянным уровнем а-ТФ показано, что знак эффекта: (+) - синергизм, (-) - антагонизм - определяется количеством второго компонента. При малых концентрациях пигментов или витамина в их совместном действии с констатируются эффекты синергизма. По мере роста количества соединений с сопряженными связями, уменьшается брутто-эффективность смеси за счет проявления эффектов антагонизма в действии составляющих (рис.6,7,8).

Изучен характер взаимосвязи между действием смесей и концентрацией а-ТФ. Показано, что для композиций с одинаковым уровнем астаксантина эффективность смеси пропорциональна количеству антиоксиданта фенольной природы (а-ТФ) (рис.9). Эта закономерность подтверждается дцЯ композиций а-ТФ с другими полиненасыщенными сопряженными соединениями (р-кар<ЯИНОМ и витамином 'Рз).

Величина эффекта антагонизма обратно пропорциональна количеству сопряженных связей в структуре полнена. При сравнимых концентрациях, например С„.тф =1Д5х10"4М, СШииы«=1|8х10"3М> показано, что эффект антагонизма наиболее выражен для смесей а-ТФ с витамином Р^ (50%), для смеси а-ТФ С р-каротином он достигает 41,2%, а для композиции а-ТФ с астаксантином - 15% (рис. 6, 7, 8). Видно, что возможность проявления эффектов антагонизма в совместном действии уменьшается пропорционально увеличению степени делокализации в сопряженной системе п-связей.

В работе изучали влияние витамина Бз И (5-карОТИна на скорость окислительного превращения а-ТФ. Методами и ПК- УФ- спектроскопии была изучена кинетика расходования а-ТФ в смесях с различным содержанием Р- каротина и витамина Рз. Показано, что кинетически выявляемый эффект антагонизма в действии а-ТФ с поли-енами сопровождается ускоренным расходованием наиболее эффективного антиоксиданта. Скорость расходования а-ТФ связана экстремальной зависимостью с количеством полнена в смеси и может увеличиваться в 10-15 раз (рис. 10,11). Таким образом, введение в субстрат дополнительно к высоких доз или витамина

может способствовать ускоренной потере фенольного ингибитора и снижению окислительной стабильности системы в целом.

В свете полученных данных целесообразно пересмотреть практику применения высоких доз ß-каротина или холекальциферола с лечебной или профилактической целью. В том случае, если в организм будут длительно вводиться указанные соединения, то их концентрация в липидах биологических мембран может стать аномально высокой, что в свою очередь приведет к уменьшению пула а-ТФ и интенсификации неферментативного окисления. Усиление процессов свободнорадикального окисления имеет патогенетическое значение и может являться пусковым механизмом развития многих заболеваний /Владимиров ЮА., Арчаков А.И. 1972, Панкин В.З., Тихазе А.К.2000,2001/.

Была проанализирована взаимосвязь брутто-ингибирующего действия композиций от соотношения молярных концентраций а-ТФ и второго компонента смеси (по-лиена). Было показано, что смена знака эффекта, переход совместного действия смеси из области антагонизма в область синергизма происходит при различных соотношениях П-ТФ/полиен и зависит от количества в его структуре сопряженных я-связей. Так, синергизм в совместном действии а-ТФ с витамином Из в структуре которого имеется 3 двойные связи, наблюдается при отношении концентраций, превышающей 100:1 (рис.12). Для композиций а-ТФ С Р-каротином, включающим в молекуле 11 я-связей, синергизм проявляется при отношении, большем чем 4:1 (рис.13). Для системы астаксантин - в водно-эмульсионной среде - область синергизма отвечает отношению компонентов, превышающему 12:1 (рис. 14).

Результаты настоящей работы имеют важное практическое значение, поскольку обосновывают отношения концентраций компонентов: а-ТФ и Р-каротина или астак-сантина или витамина смеси которых будут обеспечивать высокую эффективность совместного действия за счет проявления эффектов синергизма.

Глава 3 Способы повышения окислительной устойчивости систем, содержащих соединения изопреноидного строения

Одной из задач работы являлся поиск способов стабилизации окисления ненасыщенных липидов, содержащих соединения изопреноидного строения, за счет введения в субстрат либо синтетических АО, либо синергических композиций.

Изучали пути стабилизации окисления систем, включающих пары веществ (а-ТФ и витамин D3), (tt-ТФ И (j-каротин) в соотношениях, при которых в их совместном действии констатировался эффект антагонизма (глава 2). Были исследованы возможности повышения окислительной стабильности системы за счет дополнительного введения фосфолипидов. Использовали яичный лецитин фосфатидилхолин (ФХ).

Известно, что фосфолипиды (ФЛ) выполняют роль синергистов ингибиторов окисления /Hudson B.J., 1984, Hildebrant D.H. 1984, Oshima F. 1993, Tisoriere L. 1996, Сторожок Н.М. 1996/. Считают, что синергическая активность ФЛ обусловлена возможностью регенерации активной фенольной формы АО при взаимодействии фенок-силов с остатками полиненасыщенных жирных кислот, входящих в структуру ФЛ. При этом азотистое основание полярной головки ФЛ способно разрушать гидропе-роксиды нерадикальным путём, что приводит к уменьшению роли реакций вырожденного разветвления, способствующих инициированию процесса. /Сторожок Н.М. 1996/.

Было показано, что дополнительное включение ФХ в систему с витаминами Е и D3 приводит к увеличению величины периодов индукции и существенному уменьшению значений начальной и максимальной скоростей окисления. Так, добавки ФЛ в количестве 1,0*10"3 М по сравнению с действием бинарной смеси увеличивают значения периодов индукции на 60%, а величину начальной и максимальной скоростей окисления в 4,8 и 1,6 раза соответственно. Анализ зависимости изменения эффективности тройной композиции от количества витамина D3 показывает, что во всем изученном диапазоне в действии смеси проявляется эффект синергизма. Концентрационная кривая (рис. 6, кривая 3) располагается в верхнем квадрате, относящемся к области синергизма. Таким образом, введение ФЛ существенно увеличивает окислительную устойчивость системы. Приведенные данные позволяют рекомендовать использовать для увеличения сроков хранения лекарственных препаратов с витамином D3 композиции а-ТФ с ФЛ, например яичным лецитином. Найдены оптимальные молярные соотношения компонентов, обеспечивающие наибольшее брутто-ингибирующее действие композиции а-ТФ: витамин D3: ФХ, составившие 0,125: 0,005:1,00 соответственно.

Аналогично было исследовано влияние ФХ на эффективность смеси каротина (рис. 7, кривая 4). Сравнение меязду собой действия бинарной смеси а —ТФ и Р-каротина (рис. 7, кривая 3) и тех же количеств биоАО с добавкой ФЛ (рис. 7, кривая 4) показывает, что во всем изученном диапазоне концентраций эффективность действия тройной смеси выше (в среднем на 15-20 % ). Практически полностью кривая 4 располагается в области синергизма, достигающего при определенных соотношениях компонентов 40%. Отмечается закономерное увеличение величины эффекта синергизма с ростом количества ФЛ в смеси (табл. 2).

Приведенные данные показывают, что для более эффективного ингибирования окислительных превращений липидных препаратов, включающих целесообразно вводить ФЛ. Молярные соотношения компонентов, обеспечивающие

наиболыпее ингибирующее действие составляют: а-ТФ: Р-каротин: ФХ, равные 0,25: 0,0075:1,00 соответственно.

Таблица 2

Кинетические параметры окисления МО в присутствии а-ТФ (2,5x10"*)М (cons!)

И Р-тр0ТИНЯ (1,89-хЮ"3) М (const) и их смесей с различными концентрациями

С„.тф =const=2,5x10^ М, т=160 мин, 0^.-1,89x10'' М, т=47 мин.

№ п/п Концек трация ФХ, Gwi*10 "3М т ад» МИН мин At = Ts — Хщд, мин (Дт/тщ^х 100% Начальная скорость окисления WO2m,»107 Мхе1 Макси-маль-ная скорость окисления Wo2MB:«10 Мхе"1

1 0 • - - - 1,5±,002 5,2±0,08

2 0,1 207 150,3 ±2,25 -56,7 -27,4 1,46±0,02 5,1±0,07

3 0,5 207 174,5 ±2,78 -32,5 -15,7 1,45±0,02 5,1±0,07

4 1,0 207 190,2 ±3,04 -16,8 -8,1 1,3±0,01 5,0±0,08

5 5,0 207 220,3 ±3,52 13,3 +6,4 0,49±0,007 4,9±0,07

6 10,0 207 236,5 ±3,30 29,5 +14,2 0,4±0,006 4,5±0,07

7 13,0 207 282,6 ±4,51 75,6 +36,5 0,35±0,005 4,2±0,06

Примечание: р<0,05

Полученные результата: могут найти применение в пищевой технологии, производстве лекарственных и косметических средств, включающих указанные природные соединения.

При окислении МО исследовали ингибирующее действие смесей Р-карОТИНа и нетоксичного синтетического АО (бис-З-л,-гидрокси-З,л,-дитрет.бутилфенил)-пропил сульфида) (СО-3) /Сорокина И.В., 1987/. ЛДя)> 10000 мг/кг. По своей структуре СО-3 относится к пространственно затрудненным бисфенолам, разделенным мостиковой алкилсульфидной группой (схема 1). Ранее было установлено, что АО проявляет антирадикальную активность (к7 =1,3x10 М хс )/Сторожок Н.М., Крысий А.П., 2001/, способен разрушать гидропероксиды без образования свободных радикалов /Гуреева Н.В., 2003/.

Исследовано ингибирующее действие индивидуального СО-3 и эффективность его бинарных смесей с Показано, что в присутствии индивидуального

АО зависимость величины периодов индукции от концентрации носит линейный характер (рис. 15 а). Указанная положительная корреляционная связь выполняется для большинства известных синтетических АО.

0 1 2 3 4 0,0 0,5 1,0 1,5 3,0 2,5 3.0 3,5 4,0 4,5

С(СО-3) 11»', М С(СО-З) 110*, м

Рис. 15 а Зависимость периодов индукци» Рис. 156 Зависимость периодов индукции от от концентрации СО-3, САибн=9)0х10'3М, концентрации СО-З при окислении МО Т=ЗЗЗК. в присутствии р-каротина, равными:

1 - (2,65x10'5) М; 2 - (1.13Х10-4) М, СА. ивн=9,0х10-3М,Т=ЗЗЗК.

При изучении действия этого соединения с постоянными добавками р-каротина показано, что концентрационные зависимости отклоняются от прямолинейности. На рис. В б видно наличие экстремумов на параллельных кривых с разным количеством Р-каротина. Обращает внимание, что брутго-ингибирующее действие смеси тем выше, чем ниже концентрация Р-каротнна. Полученные результаты свидетельствуют о том, что Р-каротин образует активные радикалы, которые взаимодействуют не только с субстратом, но и, по всей вероятности, с фенольным АО, приводя к его дополнительному расходованию.

В сравнении с действием индивидуального Р-каротина периоды торможения для системы, дополнительно включающей ингибитор фенольной природы (СО-3), существенно выше (табл.3).

Таблица 3

Зависимость кинетических параметров инициированного окисления смесей,

сод ержащих '-каротин и СО-3 от его концентр ации, С,.,ЕН:=9,0Х10'3 М, Т=ЗЗЗК

№ п/п Концентрация СО-3, СхЮЛм Период индукции смеси, мин Начальная скорость окисления, Шга^хЮ^Мхс1

Концентрация Р-каротина в смеси Концентрация Р-каротина в смеси

(2,65х10-5),М (11,Зх10'5),М (гфхЮ'^.М (113*10°), М

1 0,0 40,3±0,46 18,7±0,2 14,9±0,17 19,4±0,22

2 0,5 66,5±0,75 45,5±0,5 5,7±0,06 4,3±0,05

3 1,25 73,1±0,83 52,4±0,6 4,5±0,05 2,9±0,03

4 2,0 111,4±1,27 82,8±0,9 4,4±0,05 3,0±0,03

5 2,5 132,3±1,51 88,3±1,0 2,6±0,03 2,7±0,03

6 3.0 169,5±1,94 122,2±1,4 2,2±0,02 2,4±0,02

7 3,5 164Д±1,88 84,5±0,9 2,7±0,03 2,9±0,03

8 4,0 146,1±1,67 80,5±0,9 3,4±0,04 3,5±0,04

Примечание: р<0,05

Можно видеть, что при различном содержании p-каротина в смеси наиболее эффективными являются одни и те же концентрации бисфенола (2,5-3,5)* 10"4 М (рис. 156). Указанные концентрации можно рекомендовать дня практического использования в целях стабилизации процессов окисления липидных препаратов, содержащих ß-каротин (лекарств, пищевых добавок, косметических средств).

Работа поддержана грантом РФФИ 02-04-49452 и контрактом Федеральной целевой программы "Содействие интеграции высшего образования и фундаментальной науки" ("Интеграция") И 0566/1653.

ВЫВОДЫ

1. При окислении метилолеата в среде хлорбензола и в мицеллярной системе ли-пид-вода, стабилизированной добавками додецилсульфата натрия, исследовано ингибирующее действие природных пигментов (астаксантина, в сравнении с а-токоферолом. Установлено, что при разных условиях окисления зависимость ингибирующего действия от концентрации указанных веществ описываются кривыми с экстремумом. Установлены области концентраций, обеспе-чиваюнще максимальное ингибтртошее действие., составляющие для астаксантина, ß-каротишц о-токоферол"а' ( 1,5-12,0)^Ю^М, (0,25-0,75)* (1,25-3,50)*10"3М, соответственно. В мицеллярной системе действие биоантиоксидан-тов выше, чем в гомогенной среде.

2. Хемилюминесцентным методом изучена аншрадикальная активность астаксантина и p-каротина. Значение к; указанных каротиноидов составляет 1,3 х 105 М" 'ХС*1 и 1,4Х104 М-'хс1,, соответственно. Витамин D3 не проявляет аншрадикаль-ной активности. Показано, что с увеличением количества я- сопряжённых связей в открытой цепи соединений изопреноидного строения, при введении электроно-акцепторных заместителей (оксо- и гидроксигрупп) происходит усиление антирадикальной активности и брутто-ингибирующего действия.

3. Установлено, что холекальциферол (витамин не ингибирует процесс окисления, введение его в систему увеличивает скорость инициирования, начальную и максимальную скорости поглощения кислорода, кинетический показатель

характеризующий окисляемость.

4. Изучены кинетические эффекты совместного ингибирующего действия а-токоферола с астаксантином и витамином При одном и том же количестве а-токоферола зависимость изменения эффективности действия смесей от концентрации ß-каротина или атаксантина описывается U-образной кривой, а для смеси - холекальциферол носит линейный характер.

5. Показано, что при разных соотношениях в действии бинарных композиций а-токоферола с изопреноидами астаксантином, витамином возможно проявление аддитивности, эффектов синергизма или антагонизма. Показано, что на фоне проявления эффекта антагонизма происходит существенное увеличение скорости расходования а-токоферола при увеличении конценгранни витамина Dj И ß-каротина. Установлено, что при окислении в среде хлорбензола эффект синергизма в совместном действии а-токоферола с изопреноидами проявляется при соотношениях с витамином D3, ß-каротином, превышающих 100:1; 4:1. Для бинарной системы а-токоферол: астаксантин - в мицеллярной среде -эффект синергизма констатируется при соотношениях, больших 12:1.

6. Показано, что дополнительное включение фосфолипидов в бинарные системы витамина Е с р-каротином или холекальциферолом приводит к увеличению тормозящего действия композиций (до 60%). Найдены оптимальные молярные соотношения компонентов, обеспечивающие наибольшее брутто-ингибирующее действие композиции а-токоферол: витамшЩрсфатидияхолин, составившие 0,125 : 0,005: 1,00 соответственно. Для составляющих смеси а-токоферол: {$каротин: фосфатидилхолин оптимальными являются молярные соотношения 0,25:0,0075:1,00 соответственно.

7. Предложен способ увеличения эффективности индивидуального р-каротина за счет дополнительного введения нового синтетического ингибитора окисления (бис-3-(4-гидрокси-3,5-дитрет.бутил фенил)-пропил сульфид (СО-3) в количестве (2,5-3,5)* 10"4 М. Добавки синтетического антиоксиданта увеличивают эффективность ингибирования в 3-7 раз.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сторожок Н.М. Антиоксидантные свойства аурола/ Н.М. Сторожок, Н.В. Гурее-ва, Е.Н. Дарюхина и др // Химико-фармацевтический журнал- 2ОО2.-т.36.-№ 2.-е. 14-18.

2. Дарюхина Е.Н. Перспективы стабилизации окисления бета-каротина /Дарюхина Е.Н., Сторожок ИМ. //Медицинская наука и образование Урала. - 2004. - Т.ЗЗ-34.-№3-4.-С.190-191.

3. Дарюхина Е.Н. Молекулярные механизмы сочетанного действия а-токоферола и витамина D3 /Е.Н. Дарюхина, Е.Ю. Парис, Н.М. Сторожок //В сб. материалов международной конференции «Биоантиоксидант». - М. - 2002. - с. 153-155.

4. Дарюхина Е.Н.. Ингибирующие свойства астаксантина /Е.Н. Дарюхина, Н.М. Сторожок // В сб. материалов международной конференции «Биоантиоксидант». -М.-2002.-с. 155-157.

5. Сторожок Н.М. Изучение неаддитивности в совместном ингибирующем действии а-токоферола и (J-каротина /Н.М. Сторожок, В.Е., Кутузова, Е.Н. Дарюхина //В сб. «Биоантиоксидант». - Тюмень. - 1997. - с.34.

6. Сторожок Н.М.. Сравнение антиоксидантных свойств природных жирорастворимых витаминов /Н.М. Сторожок, Е.Н. Дарюхина // В сб. материалов международного симпозиума «Медицина и охрана здоровья». - Тюмень. - 1999. - с. 160.

7. Дарюхина Е.Н. Молекулярные механизмы сочетанного применения а-токоферола и витамина D3 /E.H. Дарюхина, Е.Ю. Парис, Б.А. Бердичевский, Н.М. Сторожок // В сб. материалов международного симпозиума «Медицина и охрана здоровья». - Тюмень. - 2000. - с.41.

8. Дарюхина Е.Н. Биоантиоксиданты изопреноидного строения /Е.Н. Дарюхина // В сб. материалов международного симпозиума «Медицина и охрана здоровья». -Тюмень.-2001.-с.71.

9. Дарюхина Е.Н. Совместное антиоксидантное действие астаксантина и <х-токоферола /Е.Н. Дарюхина // В сб. материалов международного симпозиума «Медицина и охрана здоровья». -Тюмень. - 2001. -с.71-72.

10. Дарюхина Е.Н. Закономерности расходования а-токоферола в присутствии витамина D3 /E.H. Дарюхина // В сб. материалов международного симпозиума «Медицина и охрана здоровья». - Тюмень. - 2002. - с. 86.

11. Сторожок Н.М. Особенности расходования альфа-токоферола в присутствии бета-каротина /Н.М., Сторожок, В.Е. Борисенко, Е.Н. Дарюхина и др. // В сб. материалов III международного симпозиума «Биологически активные добавки - нут-рицевтики и их использование с профилактической и лечебной целью при наиболее распространённых заболеваниях». - Тюмень. - 1997. - с. 103-104.

12. Сторожок Н.М. Модификация молекулярной структуры и уровня гидроперокси-дов под воздействием токоферола и фосфолипидов /Н.М. Сторожок, В.М. Игнатова, Е.Н. Дарюхина и др. // В сб. материалов X Международной конференции «Химия органических и элементорганических пероксидов». - М. -1998. - с.ЗО.

13. Гуреева Н.В. О взаимосвязи строения и активности природных и синтетических антиоксидантов /Н.В. Гуреева, Е.Н. Дарюхина, А.П. Крысин и др. // В сб. материалов международной конференции «Свободнорадикальные процессы: фармакологические, клинические, биологические аспекты». - С.-Пб. - 1999. - с. 814815.

14. Сторожок Н.М. Особенности антиоксидантного действия природных антиокси-дантов /Н.М. Сторожок, Е.Н. Дарюхина // В сб. Западно-Сибирского терапевтического форума «Актуальные вопросы диагностики, лечения, профилактики наиболее распространённых заболеваний внутренних органов» - Тюмень. - 2000. -с. 114.

15. Дарюхина Е.Н. Кинетическое обоснование стабилизации окисления липидов с применением р-каротина, а-токоферола и синтетического антиоксиданта СО-3 /Е.Н. Дарюхина, Н.В. Гуреева // В сб. Материалы XXXV юбилейной межвузовской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины». - Тюмень. - 2001.-е. 47-49.

16. Дарюхина Е.Н. Эффекты совместного ингибирующего действия а-токоферола и Р-каротина /Е.Н. Дарюхина // В сб. Материалы XXXV юбилейной межвузовской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины». - Тюмень. - 2001. - с. 49-51.

17. Дарюхина Е.Н. Сравнительное изучение антиоксидантных свойств астаксантина и /Е.Н. Дарюхина // В сб. Материалы XXXVI Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины». - Тюмень. - 2002. - с. 88-89.

18. Дарюхина Е.Н. Кинетические особенности окисления липидов в присутствии ас-таксантина /Е.Н. Дарюхина // В сб. Материалы XXXVII Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины». - Тюмень. - 2003. - с. 61.

19. Дарюхина Е.Н. Изучение механизма действия витамина D3 в процессе окисления модельных систем и липидов плазмы крови /Е.Н. Дарюхина, Е.Ю. Цветкова // В сб. Материалы XXXVIII Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины». - Тю-мень.-2004. - с. 81-82.

20. Сторожок Н.М. Межмолекулярные взаимодействия витамина D3 с а-токоферолом и фосфолипидами /Н.М. Сторожок, Е.Н. Дарюхина, Е.Ю. Цветкова // В сб. «Биоантиоксиданты». Научный вестник мед. акад. - Тюмень. - 2003. -с.36-43.

21. Дарюхина Е.Н., Сторожок Н.М. К вопросу о механизме антиоксидантного действия астаксантина /Е.Н. Дарюхин, Н.М. Сторожок // В сб. статей IV конгресса молодых учвных «Науки о человеке». - Томск. -2003. - с. 150-151.

ДАРЮХИНА ЕЛЕНА НИКОЛАЕВНА

02.00.04 - физическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Отпечатано в типографии издательского центра «Академия». Лицензия ИД №053 51 от 10.07.01 г. Подписано к печати 24.11.2004 г. Печать ризограф. Печ. листов 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 086

326*29

Содержание диссертации автор исследовательской работы: кандидата химических наук, Дарюхина, Елена Николаевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

ЧАСТЬ ПЕРВАЯ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 Особенности действия природных антиоксидантов

1.2 Химическое строение, биологическое и антиоксидантное действие Р-каротина и астаксантина

1.3 Химическое строение и биологическое действие витаминов группы D

1.4 Современные представления механизма свободнорадикального окисления липидов

1.5 Современные представления о механизмах синергизма и антагонизма в совместном действии антиоксидантов

1.6 Биологическая активность фосфолипидов и их роль в процессах пероксидного окисления липидов

ЧАСТЬ ВТОРАЯ (СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ) 2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1.1 Хемилюминесцентный метод определения ингибирующей активности соединений изопреноидного строения

2.1.2 Метод ИК - спектроскопии

2.1.3 Метод УФ - спектроскопии

2.1.4 Манометрический метод

2.1.5 Статистическая обработка экспериментальных данных

2.1.6 Определение скорости инициирования

2.1.7. Определение критической концентрации мицелообразования (ККМ) методом Ребиндера

2.1.8. Методика приготовления исследуемых растворов

2.1.9. Реактивы и их очистка

2.2 ИССЛЕДОВАНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ИНГИБИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ р-КАРОТИНА, АСТАКСАНТИНА И ВИТАМИНА D3 (ХОЛЕКАЛЫЩФЕРОЛА)

2.2.1 Характеристика модельной системы окисления, используемой для изучения ингибирующих свойств p-каротина, астаксантина и витамина D

2.2.2 Ингибирующее действие индивидуального p-каротина в гомогенной системе окисления

2.2.3 Изучение особенностей ингибирующего действия Р-каротина, астаксанина и а-токоферола в водно-эмульсионной среде

2.2.4 Изучение антирадикальной активности P-каротина, астаксантина и а-токоферола

2.2.5 Кинетика и механизм ингибирующего действия витамина D

2.3 КИНЕТИКА СОВМЕСТНОГО АНТИОКСИДАНТНОГО ДЕЙСТВИЯ а-ТОКОФЕРОЛА С р-КАРОТИНОМ, АСТАКСАНТИНОМ И ВИТАМИНОМ D

2.3.1 Кинетика совместного ингибирующего действия витамина D3 с а-токоферолом

2.3.2 Результаты изучения расходования а-токоферола при окислении систем, включающих индивидуальный АО и его смесь с витамином D3 методом УФ

- спектроскопии

2.3.3. Кинетические эффекты совместного действия P-каротина и а-токоферола

2.3.4. Кинетика расходования а-токоферола в бинарной смеси с Р- каротином при инициированном окислении МО

2.3.5. Кинетические эффекты совместного ингибирующего действия а-токоферола и астаксантина

2.4 СПОСОБЫ ПОВЫШЕНИЯ ОКИСЛИТЕЛЬНОЙ УСТОЙЧИВОСТИ БИНАРНЫХ СМЕСЕЙ, СОДЕРЖАЩИХ а-ТОКОФЕРОЛ И ПРИРОДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ИЗОПРЕНОИДНОГО СТРОЕНИЯ

2.4.1 Способ повышения окислительной устойчивости смеси, включающей атокоферол и витамин D

2.4.2 Исследование эффективности ингибирующего действия композиций а-токоферола, (3-каротина и фосфолипидов

2.4.3. Стабилизация смесей а-токоферола и Р-каротина с использованием серусодержащего ингибитора СО

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение диссертация по химии, на тему "Кинетические эффекты совместного ингибирующего действия α-токоферола с природными соединениями изопреноидного строения и фосфолипидами"

Актуальность проблемы. В настоящее время из природных источников выделено и идентифицировано множество соединений изопреноидного строения. К ним относят витамины группы D (D2 — D7), а также обширную группу природных пигментов - каротиноидов, включающих более 700 веществ /12, 20, 89, 93, 137, 205/. Каротиноиды, имеющие в своей структуре от 10 до 13 двойных связей, окрашены в оттенки желтого, розового, оранжевого, красного, фиолетового цвета. Находясь в природе минорных количествах, они определяют окраску многих растений и живых организмов. Ряд соединений этого класса синтезированы и стали объектом всестороннего изучения их физико-химических свойств, антиоксидантного(АО), биологического и лечебного действия.

Исследованию роли изопреноидов в процессе окисления посвящено ряд работ, касающихся преимущественно Р-каротина (провитамина А) /39, 74 , 76, 77, 151, 205, 206, 215, 217, 232, 234, 239, 240, 248, 290, 292, 294/ и витамина D2 /110, 140, 142/. Показано, что |3-каротин является ингибитором свободнорадикального окисления, а витамин D2 может инициировать этот процесс /110, 138, 139, 140/. Имеются единичные работы, в которых при изучении модельных систем, а также в опытах на животных отмечалась возможность инверсии и значительного усиления реакции окисления в присутствии высоких доз р-каротина /85, 151/ или витамина D2/61,110,140/.

При клиническом применении показано иммуномоделирующее, антиоксидантное действие p-каротина в малых дозах /30, 115, 156/, при длительном приеме высоких доз установлено увеличение риска и смертности от онкозаболеваний /183, 186, 246/. Эти данные указывают на необходимость дальнейшего изучения особенностей действия p-каротина, исследования характера зависимости доза-эффект.

Среди идентифицированных к настоящему аремени изопреноидов повышенный интерес вызывает астаксантин (3,3!-ДИГидрокси — 4,4'-дикето-бета-каротину) /20, 203, 243, 248, 293/ и холекальциферол (витамин D3) /40,42 /. В современной литературе имеются единичные данные об антиоксидантной активности астаксантина /243, 247, 248, 260/ и витамина D3 /40,42/, которые, однако, достаточно противоречивы.

Известно, что каротиноиды и витамины группы D в фосфолипидном бислое биологических мембран присутствуют вместе с а-токоферолом (а-ТФ) - основным природным антиоксидантом (АО) /188, 228, 235, 249/. В связи с этим немаловажным представляется изучение характера совместного действия каротиноидов и а-ТФ, являющихся важнейшими компонентами системы АО защиты клетки. В литературе имеются единичные сведения о возможности взаимодействия биоантиоксидантов в процессе окисления. Ранее были получены данные, констатирующие проявление в действии смеси p-каротина и а-ТФ либо эффектов синергизма/264, 271,290, 296/, либо антагонизма/148, 149,151/.

Целью настоящей работы являлось сравнительное изучение закономерностей окисления модельных систем в присутствии индивидуальных природных соединений изопреноидного строения ф-каротина, астаксантина, витамина D3), исследование кинетических эффектов их совместного действия с а

ТФ, поиск путей усиления эффективности в композиции с синтетическими АО и фосфолипидами.

Задачи исследования.

1. Исследовать кинетику инициированного окисления модельного субстрата метилолеата (МО) в присутствии индивидуальных Р-каротина, астаксантина и витамина D3. Выявить особенности брутто-ингибирующего действия веществ от концентрации всех исследуемых АО в среде неполярного растворителя (хлорбензола) и в микрогетерогенной системе, образованной добавками анионного ПАВ (додецилсульфата натрия).

3. Исследовать кинетические эффекты совместного ингибирующего действия бинарных смесей а-ТФ с p-каротином, астаксантином или витамином D3.

4. Количественно изучить кинетику расходования* а-токоферола в присутствии витамина D3 и p-каротина методом УФ- и ИК -спектроскопии.

5. Установить характер и кинетические закономерности совместного ингибирующего действия композиций, включающих дополнительно к к а-ТФ, Р-каротину или витамину D3 фосфолипиды (яичный фосфатидилхолин).

6. Показать возможности стабилизации систем, содержащих Р-каротин, при введении нового нетоксичного синтетического антиоксиданта - (бис-3-(4/-гидрокси-3/,5/-дитрет.бутил фенил)-пропил сульфида) (СО-3).

Научная новизна. Впервые изучены особенности ингибирующего действия астаксантина в модельной системе инициированного окисления метилолеата в микрогетерогенной системе, образованной добавками анионного поверхностно активного вещества (ПАВ) (додецилсульфата натрия) к водно-органической среде. Показан экстремальный характер изменения эффективности от количества астаксантина в системе окисления. Выявлены диапазоны концентраций, обеспечивающие максимальное торможение процесса. Установлено, что витамин D3 участвует в инициировании окисления. Впервые оценены константы элементарной реакции взаимодействия астаксантина с пероксильными радикалами (к7). Показано, что астаксантин проявляет антирадикальную активность, на порядок превосходящую активность Р-каротина. Холекальциферол в указанной реакции не активен.

В диссертационной работе впервые кинетически изучены эффекты совместного ингибирующего действия а-ТФ с p-каротином, астаксантином и витамином D3. Установлена общая для всех закономерность изменения эффективности действия композиций а-ТФ с Р-каротином, атаксантином или витамином D3. Было показано, что при разных молярных соотношениях в действии компонентов возможно проявление аддитивности, эффектов синергизма или антагонизма. При одном и том же количестве а-ТФ зависимость изменения эффективности от концентрации p-каротина или атаксантина описывается U-образной кривой, а для смеси а-ТФ - холекальциферол носит линейный характер.

Показано, что эффективность действия смесей зависит от молярных соотношений а-ТФ и полиена, количества в его структуре сопряженных я-связей. Выявлены соотношения концентраций а-ТФ и Р-каротина, астаксантина или витамина D3 в смесях, которые будут обеспечивать высокую эффективность совместного действия за счет проявления эффектов синергизма. Установлено, что синергизм в совместном действии а-ТФ с витамином D3 наблюдается при отношении их концентраций, превышающей 100:1, для композиций а-ТФ с (3-каротином - при молярном соотношении, большем чем 4:1. Для бинарной системы а-ТФ: астаксантин — область синергизма отвечает соотношению указанных компонентов, больших 12:1.

Предложен способ увеличения действия Р-каротина в композиции с новым синтетическим ингибитором окисления (бис-3-(4/-гидрокси-3/,5/-дитрет.бутил фенил)-пропил сульфид (СО-3) или яичным фосфатидилхолином (ФХ). Практическая значимость работы заключается в установлении концентрационных диапазонов, обеспечивающих максимальное ингибирование окисления в присутствии природных пигментов: Р-каротина, астаксантина. Сведения о максимальной эффективности этих соединений могут послужить основой для разработки новых рецептур составов, применяемых для стабилизации окисления липидных субстратов различного происхождения, лекарств, косметических средств, пищевых продуктов (масел, маргарина, йогуртов и других молочных продуктов). В расчете на липиды оптимальное содержание индивидуальных а-токоферола, астаксантина и Р-каротина должно составлять 0,3% и 0,095% , 0,003% соответственно.

Показано, что для обеспечения окислительной стабильности систем, включающих витамин D3, требуется дополнительное введение а-ТФ или его синергической композиции с фосфатидилхолином.

Результаты настоящей работы позволяют заключить, что применение в медицинской практике высоких доз p-каротина, астаксантина или витамина D3 может способствовать ускоренному расходованию основного природного АО - а-ТФ, что может привести к ослаблению антиоксидантной системы организма в целом и увеличению интенсивности пероксидного окисления липидов (ПОЛ) биологических мембран. Учитывая патогенетическое значение процессов ПОЛ должны быть проведены дополнительные фармакологические испытания действия разных доз Р-каротина, астаксантина и витамина D3, разработаны рекомендации их длительного безопасного применения.

Полученные в работе данные необходимо учитывать в технологии производства пищевых продуктов и нутрицевтиков, фармпрепаратов, косметики с целью длительного сохранения их биологической ценности и повышения окислительной устойчивости. Предложены способы стабилизации окисления смесей липидов с Р-каротином за счет дополнительного введения фосфолипидов или синтетического пространственно-затрудненного фенола (СО-3). Подобраны оптимальные соотношения компонентов, позволяющих значительно увеличить эффективность ингибирующего действия композиций.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на международной конференциии "Биоантиоксидант", Москва, 2002 г.; международных симпозиумах "Медицина и охрана здоровья" Тюмень, 1997, 1999, 2000, 2001, 2002, 2004 гг.; Ш международном симпозиуме "Биологически активные добавки - нутрицевтики и их использование с профилактической и лечебной целью при наиболее распространенных заболеваниях" Тюмень, 1997; международной конференции "Химия органических и элементорганических пероксидов", Москва, 1998 г.; V Национальном конгрессе "Человек и лекарство", Москва, 1998; международной конференции "Свободнорадикальные процессы: фармакологические, клинические, биологические аспекты", Санкт-Петербург, 1999; «Терапевтическом форуме», Тюмень, 2000 г.; региональных и всероссийских межвузовских конференциях молодых ученых и студентов "Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины", Тюмень, 2001, 2002, 2003, 2004 гг., VI конгрессе молодых учёных и специалистов «Науки о человеке», Томск, 2003 г.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Заключение диссертации по теме "Физическая химия"

126 ВЫВОДЫ

1. При окислении метилолеата в среде хлорбензола и в мицеллярной системе липид-вода, стабилизированной добавками додецилсульфата натрия, исследовано ингибирующее действие природных пигментов (астаксантина, Р-каротина) в сравнении с а-токоферолом. Установлено, что при разных условиях окисления зависимость ингибирующего действия от концентрации указанных веществ описываются кривыми с экстремумом. Установлены области концентраций, обеспечивающие максимальное ингибирующее действие, составляющие для астаксантина, Р-каротина, а-токоферола (1,5-12,0)х10"4М, (0,25-0,75)хЮ"4М, (1,25-3,50)х10"3М, соответственно. В мицеллярной системе действие биоантиоксидантов выше, чем в гомогенной среде.

2. Хемилюминесцентным методом изучена антирадикальная активность астаксантина и Р-каротина. Значение kj указанных каротиноидов составляет 1,3* Ю5 М^хс"1 и 1,4х104 М-'хс'1, соответственно. Витамин D3 не проявляет антирадикальной активности. Показано, что с увеличением количества к-сопряжённых связей в открытой цепи соединений изопреноидного строения, I при введении электроноакцепторных заместителей (оксо- и гидроксигрупп) происходит усиление антирадикальной активности и брутто-ингибирующего действия.

3. Установлено, что холекальциферол (витамин D3) не ингибирует процесс окисления, введение его в систему увеличивает скорость инициирования, начальную и максимальную скорости поглощения кислорода, кинетический показатель кг/V к6, характеризующий окисляемость.

4. Изучены кинетические эффекты совместного ингибирующего действия а-токоферола с Р-каротином, астаксантином и витамином D3. При одном и том же количестве а-токоферола зависимость изменения эффективности действия смесей от концентрации p-каротина или атаксантина описывается U-образной кривой, а для смеси а-ТФ - холекальциферол носит линейный характер.

5. Показано, что при разных соотношениях в действии бинарных композиций а-токоферола с изопреноидами (Р-каротином, астаксантином, витамином D3.) возможно проявление аддитивности, эффектов синергизма или антагонизма. Показано, что на фоне проявления эффекта антагонизма происходит существенное увеличение скорости расходования а-токоферола при увеличении концентрации витамина D3 и Р-каротина. Установлено, что при окислении в среде хлорбензола эффект синергизма в совместном действии а-токоферола с изопреноидами проявляется при соотношениях с витамином D3, Р-каротином, превышающих 100:1; 4:1. Для бинарной системы а-токоферол : астаксантин - в мицеллярной среде - эффект синергизма констатируется при соотношениях, больших 12:1.

6. Показано, что дополнительное включение фосфолипидов в бинарные системы витамина Е с Р-каротином или холекалыдаферолом приводит к увеличению тормозящего действия композиций (до 60%). Найдены оптимальные молярные соотношения компонентов, обеспечивающие наибольшее брутто-ингибирующее действие композиции а-токоферол : витамин D3: фосфатидилхолин, составившие 0,125 : 0,005 : 1,00 соответственно. Для составляющих смеси а-токоферол : Р~ каротин : фосфатидилхолин оптимальными являются молярные соотношения 0,25 : 0,0075 :1,00 соответственно.

7. Предложен способ увеличения эффективности индивидуального Р-каротина за счет дополнительного введения нового синтетического ингибитора окисления (бис-3-(4/-гидрокси-3/,5/-дитрет.бутил фенил)-пропил сульфид (СО-3) в количестве (2,5-3,5)* 10"4 М. Добавки синтетического антиоксиданта увеличивают эффективность ингибирования в 3-7 раз.

128

Список источников диссертации и автореферата по химии, кандидата химических наук, Дарюхина, Елена Николаевна, Тюмень

1. Абрамова Ж.И. Человек и противоокислительные вещества. - Наука. -Ленинградское отд-ние, 1985. - 230с.

2. Активность некоторых механизмов естественного иммунитета при различной обеспеченности организма белых крыс витамином Д /К.Д. Плецитый, Н.В. Блажевич, О.Г. Переверзева, В.Б. Спиричев // Вопросы мед. хим. 1980. - №4. - С.512-516.

3. Алёшина Н.И. Влияние фосфолипидов на окисление метилового эфира олеиновой кислоты /Н.И. Алёшина, Е.Б. Бурлакова, С.Ф. Терехова // Биофизика. 1976. - Т.21. - №5. - С.944-945.

4. Антиоксидантная активность природных и синтетических хининов / Н.М. Сторожок, А.Я. Друлле, Я.Я. Логин и др. // Вопросы мед. химии. 1995. — Т.41. - №1.- С.21-24.

5. Антимутагенные свойства препаратов содержащих p-каротин /М.А. Шлянкевич, О.Б. Дризе, В.М. Хабибуллина и др. // Вопросы мед.химии. -1992. Т.38. - №6. - С.23-25.

6. Аристархова С.А. Храпова Н.Г. К вопросу об антирадикальной активности токоферолов / В сб.: «Биоантиокислители». М.: Наука, 1975. - С.196-199.

7. Астахова А.В. Побочные реакции и осложнения вызываемые витамином Д // Клиническая фармакология и терапия. 1995. -Т.4. -№1. -С.92-94.

8. Атаманчук Н.С. Острый Д гипервитаминоз у взрослых /Н.С. Атаманчук, Я.В. Оберемченко // Клиническая медицина. - 1984. - №8. - С. 113-114.

9. Афанасьев Ю.И. Боронихина Т.В. Витамин Е: значение и роль в организме // Успехи современной биологии. 1987. - Т. 104. - вып.З. - С.400-411.

10. Ю.Балаболкин М.И. Витамин Д и его роль в регуляции фосфорно-кальциевого обмена /М.И. Балаболкин, Э.Р. Хасанова, A.M. Мкртумян // Сов. медицина. -1988. №9. - С.42-46.

11. П.Бауман В.К. Особенности обмена кальция под влиянием различных доз витамина Д3 и его аналогов /В .К. Бауман, М.Ю. Валиниеце, Р.Е. Андрушайте // Физиологический журнал СССР им. Сеченова. 1988. -T.LXXIX. - №10. - С. 1484-1489.

12. Бауман В.К. Биохимия и физиология витамина D. Рига.: Зинатне. - 1989. — 480с.

13. Биленко М.В. Ишимические и реперфузионные повреждения органов. М.: Медицина, 1989.-368С.

14. Блажевич Н.В. Действие витамина Д на АТФ азную активность и стабильность мембраны эритроцитов /Н.В. Блажевич, В.Б. Спиричев // Вопросы мед. химии. -1966. -Т.12. -вып.4. - С.424-429.

15. Блажевич Н.В. Взаимодействие эргокальциферола с оксигемоглобином и цитохромом С /Н.В. Блажевич, В.Б. Спиричев // Биохимия. 1966. - Т.31. -№6. - С.1100-1105.

16. Блажевич Н.В. Изучение роли окислительных процессов в механизме гемолитического действия витамина D2. //В сб.: «Биоантиокислители», труды МОИП. М.: Наука - 1975. - Т.52. - С.61-64.

17. Бондаренко Л.Б. Кинетические закономерности процесса ингибирования 5-липоксигеназы 1,25-диоксивитамином Дз /Л.Б. Бондаренко, О.В. Харченко, И.А. Бутович // Хим. фарм. журнал. -1995. -№5. - С. 17-19.

18. Бородин Е.А. Теоретическое обоснование использования ненасыщенных фосфолипидов для восстановления структуры и функции повреждённых биологических мембран /Е.А. Бородин, А.И. Арчаков, Ю.М. Лопухин // Вестник АМН СССР. 1985. - №3. - С.84-90.

19. Богданов Н.Г. Экспериментальная витаминология. /Под ред. Ю.М. Островского Минск: Наука и техника, 1979. - С.58-79.

20. Бриттон Г. Биохимия природных пигментов: пер. с англ. М.: Мир. - 1986. — 422с.

21. Бурлакова Е.Б. Алесенко. А.В., Молочкина A.M. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте. М.: Наука, 1975. - 214с.

22. Бурлакова Е.Б. Исследование физико-химических свойств липидов при некоторых патологических состояний: Дис. . док. биол. наук. М., 1970. — 300с.

23. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты и синтетические ингибиторы радикальных реакций // Успехи химии. 1975. - Т.44. - №10. - С.874-886.

24. Бурлакова Е.Б. Роль липидов в процессе передачи информации в клетке //Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. М.: Наука, 1981. - С.23-34.

25. Бурлакова Е.Б. Исследование роли функциональных групп в действии фосфолипидов как синергистов окисления /Е.Б. Бурлакова, Н.М. Сторожок, Н.Г. Храпова// Биологические мембраны. 1990. - вып.7. - С.612-618.

26. Бурлакова Е.Б. Изучение суммарной активности природных антиоксидантов липидов хемилюминесцентным методом /Е.Б. Бурлакова, Н.М. Сторожок, Н.Г. Храпова // Биофизика. 1988. - Т.ХХХЗП. - вып.4. -С.584-588.

27. Бурлакова Е.Б. Крашаков С.А., Храпова Н.Г. Кинетические особенности токоферолов как антиоксидантов. Черноголовка.- 1992. - — 56с.

28. Бурлакова Е.Б. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты /Е.Б. Бурлакова, Н.Г. Храпова // Успехи химии. — 1985. — Т.54.-С.1540-1558.

29. Бурлакова Е.Б. Роль токоферолов в пероксидном окислении липидов биомембран /Е.Б. Бурлакова, С.А. Крашаков, Н.Г. Храпова // Биологические мембраны. 1998. -Т.15. - №2. - С.137-167.

30. Буюклинская О.В. Коррекция первичного и вторичного иммунодефицита синтетическим Р-каротином // Вопросы мед.химии.-1992.-Т.38.-№6.- С.31-33.

31. Вершинин А.О. Механизмы противоопухолевой активности каротиноидов /А.О. Вершинин, А.Н. Камнев // Вопросы мед.химии.- 1996.-Т.42.-№4.-С.275-277.

32. Взаимодействие а-токоферола со свободными жирными кислотами. Механизм стабилизации микровязкости липидного бислоя / А.Н. Ерин, Н.В. Горбунов, В.И. Скрыпин и др. // Биол. науки. 1987. - №1. - С.10-16.

33. Вишневский Ю.Б. Об изменениях активности фосфомоноэстеразы I при интоксикации витамином D2 // Вопросы мед. хим. 1972. - Т. 17. - №3. -С.321-324.

34. Вишневский Ю.Б. О нарушении обмена меди при взаимодействии на организм больших доз эргокальциферола // Вопросы мед. химии. 1974. -№1. - С.35-38.

35. Витамин А и перекисное окисление липидов: влияние недостаточности ретинола /И.Я. Конь, Л.Ш. Горгошидзе, О.Н. Васильева и др. // Биохимия -1986. Т.51. - №1. - С.70-76.

36. Влияние 24,25-диоксивитамина Дз на гиперкалыдаемическое действие 1а-оксивитамина Дз /В.К. Бауман, М.Д. Валиниеце, Р.Э. Андрушайте и др. // Хим-фарм. журнал. 1988. -Т.22. -№12. - С.1421-1426.

37. Влияние Р-каротина на динамику активности орнитиндекарбоксилазы в атрофической слизистой оболочке и в ткани полипов желудка /Ю.В. Букин, Ю.Г. Заридзе, В.А. Драудин-Крыленко и др. // Вопросы мед.химии.-1992.-T.38.-№6.-C.33-36.

38. Влияние окружения на реакционную способность Р-каротина по отношению к кислороду и свободным радикалам /О.Т. Касаикина, З.С. Карташёва, Т.В. Лобанова и др. // Биол. мембраны. 1998. -Т. 15. - №2. -С. 168-176.

39. Влияние D3 на свободнорадикальное окисление липидов в липопротеинах низкой плотности при D-гиповитаминозе /А.И. Кузьменко, Р.П. Морозова, И.А. Николенко, Г.В. Донченко // Укр. биохим. журн. 1999. - Т.71. - №5. -С.80-84.

40. Влияние Р-каротина на обмен липидов ядра и цитоплазматических мембран при хроническом воздействии у-излучения на млекопитающих /Л.Н. Маркевич, Н.И. Перепёлкина, Т.П. Кулагина и др.// В сб.: Биоантиоксидант.- М. 2002. - С.370-372.

41. Воскресенский О.Н. Влияние природных антиоксидантов на патологические процессы, связанные со старением // Итоги науки и техники. Общие проблемы биологии. 1986. - Т.5. - С. 163-201.

42. Гагарина А.Б. Кинетика образования перекисных соединений и окисей при окислении полиеновых соединений /А.Б. Гагарина, О.Т. Касаикина, Н.М. Эммануэль // Докл. АН СССР. 1974. - Т.214. - №1. - С.132-134.

43. Ганцев Ш.Х. Липатов О.Н. Бетта каротин в комплексном лечении злокачественных лимфов у детей и подростков // В мире лекарств.-1999.-№2.-С.38-41.

44. Гордиенко А.Д. Фармакологические и биохимические эффекты ненасыщенных фосфолипидов // Фармакология и токсикология. 1990. -Т.53. - №5. - С.78-81.

45. Голявин А.А. Изучение распада гидропероксида кумила присутствии ПАВ методом ЯМР спектроскопии /А.А. Голявин, З.С. Карташева, О.Т. Касаикина // В сб.: Современная химическая физика. Туапсе. - 2003.- С.98-99.

46. Гуреева Н.В. Кинетика и механизм сочетанного ингибирующего действия природных и синтетических антиоксидантов различного строения и перспективы усиления их эффективности в композиции с а-токоферолом: Дис. . канд. хим. наук. Москва, 2003. - 23с.

47. Дамбахер М.А. Остеопороз и активные метаболиты витамина D /М.А. Дамбахер, Е. Шахт // EUAR Publishers.- Basle. Switzerland. - 1996. - 119с.

48. Денисов Е.Т. Кинетика гомогенных химических реакций. М.: Высшая школа. - 1978.-367с.

49. Денисов Е.Т. Эммануэль Н.М. Кинетические критерии эффективности ингибиторов окисления // Кинетика и катализ. 1973. - Т.14. - С.823-829.

50. Денисов Е.Т. Области реализации различных механизмов ингибированного фенолами окисления углеводородов. М.: Наука. - 1983. -№2. - С.229-238.

51. Денисов Е.Т. Ингибирование цепных реакций /Е.Т. Денисов, В.В. Азатян -Черноголовка. 1997. - С. 114-179.

52. Дмитровский А.А. Экспериментальная витаминология. Ред. Островский Ю.М. - Минск: Наука и техника, - 1979. - С.131-175.

53. Дулицкая Р.Ф. Фельдман Р.И. Практикум по физической и коллоидной химии. М.: Высшая школа. - 1978. - 296с.

54. Изучение потенциального канцеро протекторного действия р-каротина при экспериментальном гастроканцерогенезе /В.А. Драудин-Крыленко, Ю.В. Букин, А.А. Левчук и др. // Вопросы мед.химии.-1992.-Т.38.-№6. -С.36-39.

55. Изучение стабильности Р-каротина в комплексах с фосфолипидами /В.Л. Кулевская, О.А. Коренева, Ю.А. Лимаренко и др. // Хим-фарм. журнал. -2002. -Т.36. №1. - С.35-38.

56. Изучение биодоступности и фармакодинамики различных форм синтетического Р-каротина на добровольцах /Л.М. Якушина, Э.А. Малахова, Т.Н. Шкарина и др. // Вопросы мед. химии. 1995. - Т.41. - вып.4. - С.36-41.

57. Ингибирующее влияние отечественного синтетического Р-каротина и аскорбиновой кислоты на эндогенный канцерогенез мышей /Т.И. Сергеева, Л.А. Вакулова, Т.А. Жидкова и др. // Вопросы мед. химии. 1992. - Т.38. -№6. - С. 12-14.

58. Иммуномоделирующее действие препаратов витаминов А и Е при глубоком локальном охлаждении /Б.С. Утешев, И.Л. Бровкина, Н.А. Быстрова и др. // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2001. - Т.64. - №3. -С.56-60.

59. Иммунофармакокинетика синтетического Р-каротина /А.В. Сергеев, B.C. Ананьев, Л.А. Вакулова, Т.А. Жидкова и др. // Вопросы мед.химии.-1992. -Т.38. №6. - С.27-29.

60. Исследование антиоксидантного действия p-каротина на структурно-функциональные свойства эритроцитов крыс при действии экстремальных факторов /Л.С. Старикович, Я.И. Берниковская, Т.В. Выговская и др. // Биоантиоксидант. М. - 1998. - С.85.

61. Капитанов А.Б. Каротиноиды как антиоксидантные модуляторы клеточного метаболизма /А.Б. Капитанов, A.M. Пименов //Успехи современной биологии. 1996. - Т. 116. - вып.2. - С. 179-193.

62. Касаикина О.Т. Реакционная способность Р-каротина при взаимодействии со свободными радикалами /О.Т. Касаикина, А.Б. Гагарина, Н.М. Эммануэль // Известия АН СССР. 1975. - №10. - С.2243-2246.

63. Касаикина О.Т. Полифункциональные антиоксиданты на основе гидрированного хинолина. Эффективность торможения, реакционная способность, химические превращения в процессе окисления: Автореф. дис. . док. хим. наук. Черноголовка, 1992. - 45С.

64. Касаикина О.Т. Окисление полиеновых углеводородов // Хим. физика -1995. Т.14. - №10. - с.73-85.

65. Касаикина О.Т. Полиеновые соединения как акцепторы свободных радикалов /О.Т. Касаикина. З.С. Карташёва, А.Б. Гагарина // Изв. АН СССР, сер. хим. 1981. - Т.276. - №3. - С.536-540.

66. Козаченко А.И. Влияние аскорбата и а-токоферола на устойчивость Р-каротина к окислению/ А.И. Козаченко, С.М. Гуревич, Л.Г. Наглер // Бюл. экспер. биологии и медицины. 2000. - Т. 130. - №7. - С.59-62.

67. Колотилова А.И. Витамины. Химия, биохимия и физиологическая роль /А.И. Колотилова, Е.П. Глушанков. Ленинград. - Изд-во ЛГУ. -1976. — 247с.

68. Конь И.Я. Действие ретиноевой кислоты на перекисное окисление липидов в микросомах печени крыс in vitro /И.Я. Конь, Л.Ш. Горгошидзе // Бюл. экспер. биол. и мед. 1985. - №4. - С.428-429.

69. Козлов Ю.П. Свободные радикалы и их роль в нормальных и патологических процессах. М.: Изд-во МГУ. - 1973. - 174с.

70. Коррекция Р-каротином противоопухолевого иммунитета при экспериментальной химиотерапии злокачественных новообразований /Р.Ю. Раманаускайте, И.Ф. Абронина, Л.И. Карасева и др. // Бюл. экспер. биологии и медицины. 1994. - №9. - С.295-297.

71. К вопросу стабилизации липидных препаратов смесями витаминов Е, А, Р-каротина, лецитина /И.В. Кутузова, Н.М. Сторожок, И.П. Рудакова, А.И. Тенцова // Фармация.-1997.-№5.-С.17-19.

72. Козлов Ю.Т. Свободнорадикальное окисление липидов в биологических мембранах /Ю.Т. Козлов, B.C. Данилов, В.Е. Каган и др. М.: Изд. МГУ. -1972.-79с.

73. К токсикологии термостабилизатора СО-3 /И.В. Сорокина, А.С. Лапик, М.П.Долгих и др. // Изв. СО АН СССР, серия биол. науки 1987. - вып.1. -№6. -С.123-127.

74. Кребс Е.М. Липиды биологических мембран. М.: Наука. - 1982. - 340с.

75. Кудрицкая С.Е. Картиноиды плодов и ягод. Киев. - 1990.- 189с.

76. Кукес В.Г. Эссенциальные фосфолипиды в терапии заболеваний печени /В.Г. Кукес, Е.Т. Гнеушев, С.А. Потекаева; М. 1977. -250с.

77. Кухтина Е.Н. Особенности действия природных антиоксидантов в системах in vivo и in vitro и их роль в регуляции процессов перекисного окисления липидов: Дис. канд. хим. наук. -М., 1982. 194с.

78. Кулинский В.И. Биологическая роль глутатиона // Успехи современной биологии. 1990. - Т. 110. - вып. 1. - С.20-33.

79. Ладыгин В.Г. Биосинтез каротиноидов водорослей и его генетический контроль // Успехи современной биологии. 2001. - Т. 121. - № 3. -С .296317.

80. Ланкин В.З. Свободнорадикальные процессы при заболеваниях сердечнососудистой системы /В.З. Ланкин, А.К. Тихазе, Ю.Н. Беленков // Кардиология. 2000. -Т.40. - №7. -С.48-61.

81. Ланкин В.З. Свободнорадикальные процессы в норме и при патологических состояниях // Пособие для врачей: Издание второе, исправленное и дополненное. М., 2001. - С. 1-78.

82. Ласфарг Ж. Витамин D необходим (ст. из Франции) // Педиатрия. 1996. -№6. - С. 102-104.

83. Ленинжер А. Основы биохимии. М.: Мир, 1985. - Т.1. - 385с.

84. Луконькин И.Н. Эффекты синергизма в совместном антиоксидантном действии а-токоферола с производными пантоевой кислоты и L-карнитином: Дис. .канд. хим. наук. Москва, 2000. - 139с.

85. ЮО.Маслова Г.Т. Молекулярные механизмы защитного действия Р-каротина в условиях активации свободнорадикальных процессов /Г.Т., Маслова, Б.Ч. Сперанска, Г.С. Полюхович // Тез. докл. VI Междун. конф. «Биоантиоксидант» М. - 2002. - С.372-373.

86. Механизм соокисления Р-каротина и полиеновых жирных кислот /С.Б. Гомбоева, К.Б. Шумаев, Н.Н. Гесслер и др. // Докл. АН. 2001. - Т.377. -№3.-С.402-405.

87. Медико-биологические аспекты каротиноидов /А.В. Сергеев, Л.А. Вакулова, М.Я. Шашкина и др. // Вопросы мед. химии. 1992. - Т.38. - №6. -С.8-12.

88. Могоряну П. Д. Применение витамина Д и его метаболитов в педиатрической практике // Педиатрия. 1989. - №4. - С. 104-107;.

89. Юб.Наумов В.В. Кинетические характеристики реакций убихинонов и родственных соединений как антиоксидантов в модельных системах возрастающей сложности: Автореф. дис. . канд. хим. наук. Москва, 1985. -24с.

90. Надиров Н.К. Токоферолы и их использование в медицине и сельском хозяйстве. М.: Наука. - 1991.

91. Опыт использования стерилизованного молока, обогащенного Р-каротином в питании дошкольников Курска /Ю.А. Шеенко, С.А. Чупрынина, З.А. Бирюкова и др. // Вопросы питания. 2002. - Т.71. - № 3. — С.13-15.

92. Панасенко О.М. Каротиноиды и их окси-производные как физиологические перехватчики гипохлорита и пероксинитрита //Тез. докл. VI Междун. конф-ции «Биоантиоксидант». М. 2002. - С.441-442.

93. Перспективы применения Р-каротина как иммунотропного препарата /Д.Б. Утешев, А.В. Сергеев, Б.С. Утешев и др. // Иммунология. 1999. - №4. -С.17-19.

94. Иб.Перевозкина М.Г. Кинетика и механизм ингибирующего действия производных фенозана, салициловой кислоты и их синергических смесей с а-токоферолом и фосфолипидами: Дис. . канд. хим. наук. Тюмень, 2003. - 172с.

95. Перекисное окисление липидов в печени крыс при нетяжёлых формах недостаточности витамина А /Л.Ш. Горгошидзе, И .Я. Конь, С.Н. Кулакова и др. // Вопросы питания. -1986.- №5. С.45-50.

96. Плецитый К.Д. Активные метаболиты витамина D как регуляторы процессов пролиферации и дифференцировки. Сообщение I. Лимфоциты. // Вопросы мед. хим. 1988. - Т.34. - №5. - С.9-14.

97. Плецитый К.Д. Активные метаболиты витамина D как регуляторы процессов пролиферации и дифференцировки клеток моноцитарно-макрофагального ряда (обзор) // Вопросы мед. хим. 1990. - Т.36. - №5. -С.2-4.

98. Плецитый К.Д. Витамин А и его синтетические производные как стимуляторы противоопухолевого иммунитета // Вопросы онкологии.-1998.-Т.34. №11. - С.1283-1288.

99. Поберёзкина Н.Б. Биологическая роль супероксиддисмутазы /Н.Б. Поберёзкина, Л.Ф. Лосинская // Укр. биохим. журнал. 1989. - Т.61. - №2. — С. 14-27.

100. H.И., Рябченко, JI.M. Якушина и др.// Вопросы мед. химии. 1992.-Т.38. -№6. - С.47-49.

101. Роль глутатионзависимых пероксидаз в регуляции утилизации липопероксидов в злокачественных опухолях /Э.Г. Горожанская, В.Б. Ларионова, Г.Н. Зубрихина и др. // Биохимия. 2001. -Т.66. -вып.2. - С.273-278.

102. Рогинский В.А. Фенольные антиоксиданты: реакционная способность и эффективность. М.: Наука, 1988. — 247с.

103. Рогинский В.Ф. Полностью обратимое редокспревращение 2,6-диметокси1.4-бензохинона, индуцированное аскорбатом /В.Ф. Рогинский, Г. Брухельт// Фармакология и токсикология. 1990. - №6. - С.3-10.

104. Рубайло В.Л., Маслов С.А. Жидкофазное окислении непредельных соединений. М.: Химия. - 1989. - 224с.

105. Святкина К.А. К вопросу о применении больших доз витамина D в профилактике и лечении рахита /К.А. Святкина, С.Н. Якубова, П.С. Гуревич //Педиатрия. 1971. - №12. - С.14-16.

106. Свободнорадикальное окисление липидов подавляет ферментативную конверсию p-каротина в витамин А /Н.Н. Гесслер, С.Б. Гомбоева, К.Б. Шумаев, В.Я. Быховский, В.З. Ланкин // Бюл. экспер. биологии и мед. -2001. Т.131. - №5. - С.532-534.

107. Сергеев А.В. Создание лечебно-профилактических средств на основе каротиноидов // Вопросы мед. химии. 1992. - Т.38. - №6. - С.4-5.

108. Сергеев А.В. Разработка средств активной профилактики рака на основе витаминных препаратов и лечебно-профилактических продуктов /А.В. Сергеев, А.Б. Сыркин, М.А. Шлянкевич // Вопросы мед. химии.-1992. Т.38. - №6. - С.5-8.

109. Сергеев А.В. Иммуномоделирующая антиканцерогенная активность каротиноидов // Вопросы мед. химии. 1992. - Т.38. - №4. - С.42-43.

110. Сергеев И.Н. Роль витамина Е в обмене и рецепции витамина D /И.Н. Сергеев, Ю.П. Архапчев, В.Б. Спиричев // Биохимия. 1990. - Т.55. - вып.11. - С.1989-1994.

111. Сергеев А.В. О симпозиуме «Каротиноиды в онкологии» // Вопросы питания. 1993. - №5. - С.63-64.

112. Сергеев И.Н. Обмен и регуляция витамина Д // Вопросы мед. хим. 1989. -Т.35.-вып.1. - С.2-11.

113. Смирнов М.И. Витамины. М.: Медицина. - 1974. - С.89-150.

114. Спиричев В.Б. Биологическая роль жирорастворимых витаминов /В.Б. Спиричев, И.Я. Конь // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Физиология человека и животных. М. - 1989. - Т.37. - 226с.

115. Спиричев В.Б. Изучение механизма токсического действия витамина D2 // Витамины. Киев. - 1971. - вып.6. - С.64-91.

116. Спиричев В.Б., Блажевич Н.В. К вопросу о механизме гемолитического действия витамина Дг. Образование перекисей липидов /В.Б. Спиричев, Н.В. Блажевич // Вопросы мед. хим. 1968. - Т.14. -№4. -С.371-375.

117. НО.Спиричев В.Б. Биохимические механизмы гипервитаминоза D: Автореф. дис. д-ра биологических наук. М., 1977. - 62с.

118. Спиричев В.Б. Биохимическая диагностика D-гипервитаминоза и его лечение токоферолацетатом /В.Б. Спиричев, Н.В. Блажевич, И.М.Раскин //Вопросы мед. химии. 1966. - Т. 15. - С. 123-127.

119. Спиричев В.Б. Превращение эргокальциферола в водной среде /В.Б. Спиричев, А.Г. Милосердова, Т.А. Зиновьева // Биохимия. 1971. - №36. -С.489-496.143 .Справочник биохимика /Д.Досон, Д. Эллиот, У. Эллиот, К. Джонс М.: Мир, 1991.-540с.

120. Сравнительное изучение антиоксидантной активности витаминов Е, А и 0-каротина /И.В. Кутузова, Н.М. Сторожок, И.П. Рудакова, А.И. Тенцова // Фармация.-1997.-№4.-С. 15-18.

121. Сравнительное изучение гемолитического действия витаминов группы Д /А.И. Деев, Д.Х. Бикетова, В.Б. Спиричев, Н.В. Блажевич // Вопросы мед. хим. 1979. - №5. - С.617-622.

122. Сравнительная биологическая активность 1,25-диоксивитамина Дг и его 5,6-транс-изомера /М.Ю. Валиниеце, В.К. Бауман, Д.А. Бабарыкин, Н.А. Богословсий, Т.А. Кисельникова // Хим фарм. журнал. - 1986. -№3. -С.263-268.

123. Сравнительное изучение биологической активности и токсического действия 1а-оксихолекалыдаферола и эргокальциферола на крысах /В.Б. Спиричев, Н.В. Блажевич, Н.А. Богословский и др. // Вопросы мед. хим. -1978. №5. - С.679-689.

124. Сторожок Н.М. Исследование совместного антиоксидантного действия Р-каротина и витамина А с а-токоферолом /Н.М. Сторожок, И.В. Кутузова // Хим-фарм. журнал. 1995. - №12. - С.37-41.

125. Сторожок Н.М. Ингибирующие эффекты а-ТФ с Р-каротином или витамином А при окислении эфиров полененасыщенных жирных кислот / Н.М. Сторожок, И.В. Кутузова // Вопросы мед. химии. 1996. - Т.42. - №1.-С.15-21.

126. Сторожок Н.М. О роли и механизме действия фосфолипидов в процессе окисления природных систем, содержащих антиоксиданты // Вопросы питания. 1996. -№2. - С.25-28.

127. Сторожок Н.М. Межмолекулярные взаимодействия компонентов природных липидов в процессе окисления: Дис. . док. хим. наук. — М., 1996.-372с.

128. Сторожок Н.М. Синергический эффект антиоксидантов и фосфолипидов при окислении природных липидов /Н.М. Сторожок, Е.Б. Бурлакова, Н.Г. Храпова //Вопросы питания. 1990. - №4. - С.53-58.

129. Сторожок Н.М. Антиоксидантное действие новых аналогов пробукола и их композиций с а-токоферолом /Н.М. Сторожок, А.П. Крысин, Н.В. Гуреева// Вопросы мед. химии. 2001. - Т.47. - №5. - С.517-525.

130. Струков В.И. Побочные и токсические реакции на витамин Д /В.И. Струков, Н.А. Барлыбаева // Педиатрия. 1980. - №3. - С.56-57.

131. Таранова А.Г. Каротиноидный состав сыворотки крови разных групп населения и влияние на него пищевых продуктов, обогащенных бета — каротином: Автореф. дисс. . канд-та мед. наук. Москва, 1998. - 23с.

132. Тихазе А.К. p-каротинсодержащие препараты увеличивают антиоксидантный потенциал печени и миокарда /А.К. Тихазе, Г.Г. Коновалова, В.З. Панкин // Бюл. экспер. биологии и медицины. 1999.-Т.128. - №9. - С.324-326.

133. Тихазе А.К. Свободнорадикальное окисление липидов при атеросклерозе и антиоксидантная коррекция нарушений метаболизма липопероксидов: Автореф. дисс. док. мед. наук. Москва, 1999. -48с.

134. Торможение процесса окисления Р-каротина соединениями ряда гидрированного хинолина /О.Т. Касаикина, А.Б. Гагарина, Ю.А. Иванов, Э.Г. Розанцев // Известия АН СССР. 1975. - №10. - С.2247-2251.

135. Утешев Б.С. Иммуномоделирующее и антиоксидантное действие р-каротина и эссенциале при нарушении липидного обмена /Б.С. Утешев, Ф.Я. Байбурин, Л.Г. Прокопенко //Экспериментальная и клиническая фармакология. 1998. - Т.61. - №2. - С.41-44.

136. Фенольные биоантиоксиданты /Н.К. Зенков, Н.В. Кандалинцева, В.З. Ланкин, Е.Б. Меньшикова, А.Е. Просенко; Новосибирск: СО РАМН, 2003. - 328с.

137. Хроническая интоксикация витамином Д /В.М. Ермоленко, В.Б. Спиричев, Т.М. Рождественская, Н.В. Блажевич и др.// Терапевтический архив. 1984. -T.LVI. - №7. -С. 120-125.

138. Халмурадов А.Г., Тоцкий В.Н., Чаговей Р.В. Транспорт жирорастворимых витаминов. Киев. - Наукова думка, 1980.- 213с.

139. Храпова Н.Г. Система природных антиоксидантов и возможность направленного воздействия на неё синтетическими ингибиторами: Автореф. дисс. д-ра хим. наук. Москва, 1988. — 49с.

140. Храпова Н.Г. Кинетические особенности действия токоферолов как антиоксидантов // Биофизика. 1977. - Т.22. - №3. - С.463-442.

141. Храпова Н.Г. Определение антирадикальной активности веществ природного происхождения методом хемилюминесценции // Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vivo и in vitro. М.: Наука, 1992.-С.8-15.

142. Хрестова H.JI. Изучение биологической активности витамина D3 в липосомах /Н.Л. Хрестова, Л.И. Апуховская, Н.М. Турина // Хим. фарм. журнал. 1990. - Т.24. - №11. - С.52-55.

143. Цепалов В.Ф., Харитонова А.А., Гладышев Г.П., и др. Определение констант скорости и коэффициентов ингибирования фенолов -антиоксидантов с помощью модельной цепной реакции // Кинетика и катализ. 1977. - Т. 18. - вып.5. С. 1261-1267.

144. Чибиляев Т.Х. Исследование комбинированной лекарственной формы р-каротина с витаминами и антимикробными препаратами /Т.Х. Чибиляев, В.А. Вайнштейн, С.М. Сапожкова // Хим фарм. журнал. - 1998. - Т.32. - №2. - С.34-37.

145. Шашкина М.Я. Биодоступность каротиноидов /М.Я. Шашкина, П.Н. Шашкин, А.В. Сергеев // Вопросы мед. химии.-1999. №2. - С. 105-116.

146. Шейко Л.Д Возможность использования бета-каротина в качестве лечебно-профилактического средства в репродуктивной токсикологии /Л.Д. Шейко, В.П. Машина, С.Л. Балезин // Проблемы репродукции. 2001. - Т.7. -№6.-С.37-41.

147. Шеренешева Н.И. Модифицирующий эффект каротиноидов на канцерогенез преджелудка у крыс, индуцированных N-Meraji-N'-HHTpo-N-нитрозогуанидином /Н.И. Шеренешева, В.Е. Финько, В.М. Шелепова // Вопросы мед. химии. 1992. - Т.38. - №6. - С.21-23.

148. Шеренешева Н.И. Антиканцерогенная активность каротиноидов // Вопросы питания. 1993. - №4. - С. 13-17.

149. Шляпинтох В.Я. Карпухин О.Н., Постников JI.M. Хемшпоминесцентные методы исследования медленных химических процессов 1966. - М. - Наука.- 138с.

150. Шокина Н.И. О метаболизме витамина Д (обзор литературы) // Вопросы охраны материнства и детства. 1975. - Т.20. - №4. - С.57-60.

151. Шипицина Л.П. АТФ азная активность и дыхание митохондрий в условиях D2 - витаминной интоксикации // Вопросы мед. химии. - 1967. -№6. - вып.2. - С.601-603.

152. Шишкина Л.Н. Определение антиокислительной активности индивидуальных веществ и липидов на метилолеатной окислительной модели // Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vitro и in vivo. М.: Наука, 1992. - С.26-30.

153. Albanes D. (3-carotene and lung cancer: a case study // Am. J. Clin. Nutr. 1999.- Vol.69. P. 1345-1350.

154. Ames B.N., Shigenaga M.K., Hagen M.H. Oxidants, antioxidants and the degenerative desseases of aging // Proc. Nat Acad Sci. USA. 1993. - Vol.90. №17. -P.7915-7922.

155. Aviram M. Modified forms of low density lipoprotein affect platelet aggregation in vitro // Trombs Res. 1989. - Vol.53. - P.561-567.

156. Baker D.L., Krol E.S., Jacobsen N. et al. Reaction of beta-carotene with cigarette smoke oxidant. Identification of carotenoid oxidation products and evalution of prooxidant / antioxidant effect // Chem. Res. Tocxicol. 1999. -Vol.12.- №6. -P.535-543.

157. Barclay L.R.C., Vingvist M.R. Membrane peroxidation: inhibiting Effects of Water soluble antioxidants on phospholipids of different charce tipes // Free Rad Biol et Med. - 1994. - Vol.16. - №6. - P.779-788.

158. Barclay L.R.C., Ingold K.U. Autoxidation of a model membrane: A comparison of the autoxidation of egg lecithin phosphatidylcholine in water and in chlorbenzene // J. Am. Chem. Soc. 1980. Vol.102. - №26. -P.7792-7794.

159. Beyer R.E. The participation of coenzyme Q in free radicals production and antioxidation // Free Radical Biol, and Med. 1990. - Vol.8. - P.545-565.

160. Boveris A., Cadenas E., Stoppani A.O.M. Role of ubiquinonen in the mitochondrial generation of hydroge peroxide // Biochem. J. 1976. - Vol.156. -№2. - P.435-444.

161. Brigelius -Flohe R., Traber M.G. Vitamin E: function and metabolism // FASEB journal. 1999. - Vol.13. - P. 1145-1155.193 .Burton G.W., Ingold K.U. P-Carotene: An unusual type of lipid antioxidant // Science. 1984. - Vol. 224. - №91841. - P.569-573.

162. Burkart V., Grob-Eick A., Bellmann K. et al. Suppression of nitric oxide toxicity in islet cells by a-tocopherol // FEBS Lett. 1995. - Vol.364. - P.259-263.

163. Cadenas E. Mechanisms of oxygen activation and reactive oxygen species detoxification // Oxidative stress and antioxidant defenses in biology.-N.Y. — 1995-№4.-P. 1-61.

164. Cadenas E., Sies H. Low level chemiluminescence as an indicator of singlet molecular oxygen in biological system. // Methods Enzymol. 1984. - Vol.105. -P.221-231.

165. Cadenas S., Barja G. Resveratrol, melatonin, vitamin, and PBN protect against renal oxidative DNA damage induced by the kidney carcinogen КВгОз //Free Redical Biology & Medicine. 1999. - Vol.26. - №11-12. - P.1531-1537.

166. Cook N.C., Samman S. Flavonoids chemistry, metabolism, cardioprotective effects, and dietary sources // J. Nutr. Biochem. - 1996. - Vol.7. P. 66-67.

167. Cooney R.V., Franke A.A., Harwood P.J. et al. gamma-Tocopherol detoxification of nitrogen dioxide-superiority to alpha-tocopherol // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - Vol.90. - P.1771-1775.

168. Denisov E., Denisova T. Handbook of Antioxidants: Bond Dissociation Energies, Rate Constants, Activation Energies and Enthalpies of Reactions. CRC Press, Boca Raton, 2000/

169. Di Mascio P., Kaiser S., Sies H. Licopene as the most efficient biological carotenoid singlet oxygen quencher // Arch. Biochhim. Biophys. 1989. -Vol.274. - P.532-538.

170. Di Mascio P., Devasagayam T.P.A., Raiser S., Sies H. Carotenoids, tocopherols, and thiols as biological singlet molecular oxygen quenchers // Biochem. Soc. Trans. 1990. - Vol. 18. - P. 1054-1056.

171. Edge R., Truscott T.G. Carotenoids -FreeRadical Interactons // Spectrum. -2000.-P. 12-20.

172. Edge R., Truscott T.G. Prooxidant and antioxidant reaction mechanisms of carotene and radical interactions with vitamins E and С // Nutr. 1997. - №13. — P.992-994.

173. Ekiel I.H., Hughes L., Burton G.W. et al. Structure and Dynamics of a-Tocopherol in Model Membranes and in Solution: A Broad-Line and High-Resolution NMR Studi // Biochemistry. 1988. - Vol.27. - №5. -P. 1432-1440.

174. Foote C.S., Denny R.W. Chemistry of singlet oxygen VII. Quenching by P-carotene // J. Am. Chem. Soc. 1968. - Vol.90. -P.6233-6235.

175. Frankel E.N. Chemistry of free radicals and singlet oxidation of lipids // Prog. Lipid Res. 1985. - Vol.23. - P. 197-221.

176. Frei В., Stocker R. and Ames B.N. Antioxidant defenses and lipid peroxidation in human blood plasma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. - Vol.85. -P.9748-9752.

177. Fridovich I. Superoxide dismutases // J.Biol. Chem. 1989. -Vol. 1.264. -P.7761-7764.

178. Fiyer M.J. The mechanism of apoptosis, cell membrane lipid peroxidation and a novel in vivo function for antioxidant vitamin E (a-tocopherol) //Redox Report. -1995.-Vol.1.-P.159-161.

179. Fukuzama K., Hayashi K., Suruki A. Effect of a-tocopherol analog on lysosome membranes and fatty acids monolayers // Chem. Phys. Lipids. 1977. -Vol.18. -№1. - P.39-48.

180. Goodwin T.W. The biochemistry of the carotenoids // London: Chapman and Hall. 1984. - Vol.2. - P.173-195.

181. Grabtree D.V., Adler A.J. Is P-carotene an antioxidant // Med. Hypotheses. -1997.- Vol.48.-P. 183-187.

182. Handelman G.J., Kuijk F.J.G.M., Chatlerjee F., Krinsky N.I. Characterization of Products formed during the autoxidation of P-carotene // Free Rad. Boil, et Med. -1991. Vol. 10. - №6. - P.427-437.

183. Halpner A., Handelman G., Harris J. et al. Protection by vitamin С of loss of vitamin E in cultured rat hepatocytes // Arc. of Biochem. and Biophys. 1998. -Vol. 359. -№2. - P.305-309.

184. Halliwell В., Gutterridge M.C. The antioxidants of human extracellular fluids // Arch. Biochem. Biophys. -1990. -Vol.280. P. 1-8.

185. Helsing E. Vitamins In: Meylers side effects of drugs. -1992. -P.968

186. Hildebrant D.H., Terao J., Rito M. Phospholipids plus tocopherols; increase soybean oil stability // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1984. - Vol.61. - №3. - P.552-555.

187. Hudson В J., Chavan M. Phospholipids as antioxidant synergists for tocoferols in the autoxidation of edible oils // Lebensm., Wiss. + Techond. 1984. - Bd.17. -№4. - S.191-194.

188. Kaiser S., Di Mascio P., Murphy M.E., Sies H. Quenching of singlet molecular oxygen by tocopherols // Antioxidants in therapy and Preventive Medicine. -N.Y.: Plenum Press. 1990. - P. 117-123.

189. Kasaikina O.T., Vedutenko V.V., Kashkay A.M., Kortenska V.D., Boneva M.I., Yanishlieva N.V. Kinetic model for p-carotene and lipid cooxidation // Oxidation Communications.- 2002. Vol.25. - №2. - P. 232-243.

190. Kaul N., Devaraj S., Jialal I. Alpha-tocopherol and atherosclerosis // Exp. Biol. Med. 2001. - Vol.226. - №1. - P.5-12.

191. Kennedy T.A., Liebler D.C. Peroxyl radical scavenging by P-carotene in lipid bilayers // J. Biol. Chem. 1992. - Vol.267. -P.4658-4663.

192. Kodicek E. Turnover and distribution of vitamin D and its made of action. In: The transfer of calcium and stroncium across biological membranes. New York. -1963.-P.185.

193. Koga Т., Moro K., Terao J. Protective effect of a vitamin E analog, phosphatidylchromanol, against oxidative hemolysis of human erythrocytes // Lipids. 1998. - Vol.33. - №6. - P.589-595.

194. Kontush A., Spranger Т., Reich A., Baum K., Beisiegel U. Lipophilic antioxidants in blood plasma as markers of atherosclerosis: the role of alfa-carotene and gamma-tocopherol // Atherosclerosis. 1999. - Vol.144. - №1. -P.l 17-122.

195. Krinsky N.I. Antioxidant Functions of carotenoids // Free Rad. Biol, et Med. -1989. Vol.7. - №6. - P.617-635.

196. Krinsky N.I., Deneke S.M. The interaction of oxygen and oxy-radicals with carotenoids // J. Natl. Cancer Inst. 1982. - Vol.69. - P.205-210.

197. Krinsky N.I. Actions of carotenoids in biological systems // Annu. Rev. Nutr. -1993.-Vol.13.-P.561-587.

198. Lass A., Sohal R.S. Electron Transport-Linked Ubiquinone-Dependent Recycling of a-Tocopherol Inhibits Autooxidation of Mitochondrial Membranes // Archives of Biochemistry and Biophysics. 1998.- Vol.352. - No.2. - P.229-236.

199. Liebler D.C. In Carotenoids in Human Health Antioxidant Reactious of Carotenoids // Eds. L.M. Canfield. N.Y., N.Y. Acad. Sci., - 1993. - P.20-31.

200. Lim B.P.L., Nagao A., Tanaka K., Suzuki Т., Takama K. Antioxidant activity of xanthophylls on peroxyl radical-mediated phospholipid peroxidation // Biochemica et Biophysica Acta. 1992. - Vol.1126. - P. 178-184.

201. Linden V., Seelig M. Multiple factors in the hyperlipidaemia of hypervitaminosis D // Br. Med. J.- 1975. -4. P.166.

202. Marcinkowska E. A run for membrane vitamin D receptor // Biol Signals Recept. 2001. - Nov-Des. - Vol.10. -l6. - P.341-349.

203. Mayne S. Т., Handelman G.J., Beecher G. P-carotene and lung cancer in haeavy smokers plausible relationship // J. Natl. Cancer Inst. -1996. -Vol.88. - P. 15131515.

204. Miki W. Biological functions and activities of animal carotenoids // Pure Appl. Chem. 1991.- Vol.63. - P. 141-146.

205. Miller, N, Sampson, J., Candeias, L.P., Bramley, P.M., Rice-Evans, C.A. Antioxidant activites of carotenes and xanthophylls //FEBS Lett. 1996. -№384. - P.240-242.

206. Morris D.L., Kritchevsky S.B., Davis C.E. Serum carotenoids and coronary heart disease the lipid Research Clinics Coronary Primary Prevention. // JAMA. -1994. - Vol.272. - P. 1439-1441.

207. Mortensen A., Skibsted L.H., Willnow A., Everett S.A. Re-appraisal of the tocopheroxyl radical reaction with P-carotene: evidence for oxidation of vitamin E by the p-carotene radical cation // Free Radical Res. 1998. - Vol.28. - P.69-80.

208. Moyad M.A., Brumfield S.K., Pienta K.J. Vitamin E, alpha and gamma-tocopherol and prostate cancer // Semin Urol Oncol. - 1999. - Vol.17. - №2. -P.85-90.

209. Mogilevich M.M., Pliss E.M. Oxidation and Oxidative Polymerization of Unsaturated Substances. Chemistry, Moscow, 1990.

210. Nagaoka S., Okauchi Y., Urono S. et al. Kinetic and ab initio study of the Prooxidant effect of Vitamin E. Hydrogen abstraction from fatty acid esters and Egg Yolk lecithin // J. Am. Chem. Soc. 1990. - Vol. 122. - №24. - P.8921-8924.

211. Nair P.P., Partnalk R.N., Housurerth J.W. Cellular transport and binding of d-a-tocopherol // Tocopherol oxygen and biomembranes. London. - 1978. - P.121-130.

212. Nakagawa K., Fujimoto K., Miyazawa T. P-Carotene as a high-potency antioxidant to prevent the formation of phospholipid hydroperoxiides is red blood cell of mice // Biochim. et biophys. acta. 1990. - Vol.1299. - P. 110-116.

213. Free Radical Biologi & Medicine. 1993. - Vol.15. - P.377-384.263.01cott M.S., Kuta E.J. Basic substances as synergism for fat antioxidants //

214. Free Rad. Biol, et Med. 1995. - Vol.19. - №5.-P.575-581.

215. Packer J.E., Slater Т.Е., Willson R.L. Direct observation of a free radicalinteraction between vitamin E and vitamin С // Nature. 1979. - Vol.278. -№5706. - P.737-738.

216. Palozza P., Norman I., Krinsky N. The inhibition of radical initiated peroxidation of microsomal lipids by both a-tocopherol and P-carotene // Free Radical Biologi & Medicine. 1991. - Vol.11. - P.407-414.J

217. Pallozza P., Krinsky N.I. Antioxidant effects of carotenoids in vivo and in vitro- an overview // Methods in Enzymology. Vol.213. - N. Y.: Acad. Press. - 1992.- P.403-420.

218. Palozza P., Galviello G., Bartoli G.M. Prooxidant activity of p-carotene under 100% oxigen pressure in rat liver microsomes // Free Rad. Biol et Med. 1995. -Vol.19. - №6. - P.887-892.

219. Pat. 93/13751 WO, МКИА К 9/127, 31/20/. Kapil M., Lopez-Berestein G., Lenk R., Hayman A. Formulation and use of carotenoids in treatment of cancer.

220. Perocco P., Paolini M., Mazzulo M. et al. Beta-carotene as enhancer of cell transforming activity of powerful carcinogens and cigarette smoke condensate on BALB / с 3T3 cells in vitro // Mutat. Res. - 1999. - Vol.440. - №1. - P.83-90.

221. Percy M.E. Catalase: an old enzyme with a new role? A review // Can. J. Biochem. and Cell. Biol. 1984. - Vol.62. - P.1006-1014.

222. Peto R., Poll R., Buckley J., Sporh M.B. Can Dietary beta-carotene materially reduce human cancer rates // Nature. 1981. - Vol. 290. - №19. - P.201-208.

223. Pobezhimova T.P., Voinikov V.K. Biochemical and physiological aspects of ubiquinone function // Membr. Cell Biol. 2000. - Vol.13. - P.595-602.

224. Reiter R.J., Tan D., Poeggeler B. et al. Melatonin, free radicals and cancer initiation // Advances in Pineal Research. Vol.7. - London: John Libbey & Company Ltd., 1994. - P.211-228.

225. Richards D.M.C., Dean R.T., Jessup W. Membrane proteins are critical targets in free radical mediated cytolysis // Biochim. et biophys. acta. 1988. - Vol.946. -P.281-288.

226. Salem N.J., Kim H.Y., Yergey J.A. Docdosahexaenoic acid: membrane function and metabolism. In: Simopoulos A. P., Kiffer R.R., Martin R., Eds. The health effects of polyunsaturated fatty asids in seafoods.- 1993. Academic press, N. Y., P.263-317.

227. Sandstrom P.A., Tebbey P.W., Cleave S.V., Buttke T.M. Lipid hydroperoxide induce apoptosis in cell displaying, a HTV-associated glutathione peroxidase deficiency //J. Biol. Chem. 1994. - Vol.265. - P.798-801.

228. Scott G. Atmospheric oxidation and antioxidants // Amsterdam New York. Elsevier. 1965.-350 P.

229. Seifter E., Mendecki J., Hollzman S. et al. Role vitamin A and beta-carotene in radiation protection: relation to antioxidant properties // Pharmacol. Ther. 1988. -Vol. 39. - №13. - P.357-365.

230. Seifter E., Rettura G., Padawer J. et. al. Morbility and mortality reduction by sypplemental vitamin A or beta-carotene in CBA mice given total-body gamma-radiation // J. Natl. Cancer Inst. 1984. -Vol. 73. - №5. - P.l 167-1177.

231. Shikawa, Yuki E. Reaction Product from various Tocopherols with Trimethylamine Oxide and Their Antioxidative Activities // Agric. Biol. Chem. — 1975. -V.39. №4. - P.851-857.

232. Sies H., Sharov V.S., Klot L.O., Briviba K. Glutathione peroxidase protects against peroxynitrite-mediated oxidations // J. Biol. Chem. — 1997. Vol.272. — P.27812-27817.

233. Suarna C., Dean R.T., Stocker R. The reactivity of tocotrienols and other lipid -soluble antioxidants towards peroxyl radicals // Lipid Soluble Antioxidants: Biochemistry and Clinical Applications. - Basel: Birkhauser Verlag. - 1992. -P. 17-26

234. Terao J., Yamauchi R., Murakami H. and Matsushita. Inhibitory effect of tocopherols and P-carotene on singlet oxygen-initiated photooxidation of methyl linoleate and soybean oil // Food Precess Presery. 1980. - Vol.4. - P.79-93.

235. Terao J., Yamauchi R., Shirai M. et al. Protection by quercetin and quercetin 3-0-beta-D- glucuronide of peroxynitrite-induced antioxidant consumption in human plasma low-density lipoprotein // Free Radic. 2001. - Vol.36. - №6. — P.925-931

236. Terao J. Antioxidant Activity of P-Carotene-Related Carotenoids in solution // Lipids. 1989. - Vol.24. - №7. - P.659-661.

237. Terao J., Boey P.L., Ojima F., Nagao A., Suzuki E., Takama K. Astaxanthin as a chain-breacing antioxydant in phospholipid peroxidation In.: Oxigen Radicals. -Elsevier Science Publishers Amsterdam. 1992. - P. 657-660.

238. Terao J. Role of carotenoids in the antioxidant defenses on human blood plasma In. All rigst reserved Flontiers of reactive oxigen species in biology and medicine. 1994. - P.329-332.

239. Torel J., Cillard J., Gillard P. Antioxidant activity of flavonoids and reactivity with peroxy radical // Photochemistry. 1986. - Vol.25. - P.383-385.

240. Tesoriere L., Bongiomo A., Pintaudi A.M. et al. Synergistic Interactions between Vitamin A and Vitamin E against Lipid Peroxidation in Phosphatidylcholine Liposomes // Archives of Biochemistry and Biophysics. -1996. -Vol.326. №1. - P.57-63.

241. Tsuchihashi H., Kigoshi M., Inatsuki M., Niki E. Action of p-carotene as an antioxidant against lipid peroxidation // Arch. Biochem. Biophys. -1995. -Vol.323.-P.137-147.

242. Uyesaka N., Hasegawa S., Ishioka N. et al. Effects of superoxid anions on red cell deformability and membrane preteins // Biorheology. 1992. — Vol.29. -P.217-229.

243. Van Staden A.M., Van Rensburg S.E., Anderson R. Vitamin E protects mononuclear leukocyte DWA against damage mediated by phagocyte derived oxidants // Mutat. Res. - 1993. - Vol.288. - P.257-262.

244. Varga S.I., Novak Z., Pataki L. et al. The influence of antioxidants on the oxidative stress of red blood cells // Clin. Chim. Acta. 1992. -Vol.205. - P.241-244.

245. Wassal S.R., Yang R.C., Wand L., Pholps T.M. Magnetic Resonanse studies of the Structural Role of vitamin E in Phospholipid Model Membranes // Bull. Magnetic Resonanse. 1990.- Vol.12. - №1. - P. 127-134.

246. Wayner D.D., Burton G.W., Ingold K.U. The relative contributions of vitamin E, urate, ascorbate and proteins to the total peroxyl radical-trapping antioxidant activity of human blood plasma // Biochem. et Biophys. acta. 1987. - Vol.924. -P.408-419.

247. Wendel A. Enzymes acting against reactive oxygen // Enzymes Tools and Targets. - Basel: Karger. - 1988. - P. 161-167.

248. Young R.H., and Brewer D.R. The mechanism of quenching of singlet oxygen, in Singlet Oxygen: Reactions with Organic Compounds and Polymers, ed. by Randy В., and Rabek J.F., John Wiley & Sons, Ltd, Chichester. 1978. - P.36-47.

249. Zhang P., Omaye S.T. Antioxidant and prooxidant roles for beta-carotene, alpha-tocopherol and ascorbic asid in human lung cancer // Toxical. In Vitro. -2001. Vol.15. - №1. - P.13-24.

250. Zhou Y. C., Zheng R.L. Phenolic compounds and an analog as superoxide anion seavengers and antioxidants // Biochem. Pharmacol. - 1991. - Vol.42. -P.l 177-1179.158