Разработка и оценка эффективности кинетических моделей тестирования биоантиоксидантов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.04 ВАК РФ

Журавлева Людмила Анатольевна

РАЗРАБОТКА И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ КИНЕТИЧЕСКИХ МОДЕЛЕЙ ТЕСТИРОВАНИЯ БИОАНТИОКСИДАНТОВ

02.00.04 — физическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Тюмень — 2006

Работа выполнена в Сургутском государственном университете на кафедре химии

Научный руководитель - д.х.н., профессор

Ушкалова Валентина Николаевна

Официальные оппоненты - д.т.н., профессор

Курина Лариса Николаевна

н.с., к.х.н,

Савинцев Юрий Петрович

Ведущая организация — Омский государственный университет

Защита состоится « 23 » ноября 2006 года в 15.00 часов на заседании диссертационного совета К212.274.04 при Тюменском государственном университете по адресу: 625003, г. Тюмень, ул. Перекопская, 15а, ауд. 118а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Тюменского государственного университета.

Отзыв на автореферат высылать по адресу: 625003, г, Тюмень, ул. Семакова, 10, ТюмГУ, химический факультет, ученому секретарю диссертационного совета Котовой Т.П.

Автореферат разослан « 22 » октября 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат химических наук

Котова Т.П.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Актуальность исследования обусловлена широким применением антиоксидантов в химической и пищевой технологиях, производстве лекарственных средств, для стабилизации полимерных материалов, автомобильного и авиационного бензинов, смазочных масел. В последнее время в связи с открытием свободнорадикаль-ного механизма многих патологий сформировалась новая область медицины — антиоксидантотерапия. Применение антиоксидантов в медицине связано не только с антиоксидантной активностью, но и с растворимостью препаратов в воде» нетоксичностью.

Расширение ассортимента антиоксидантов в технике и медицине возможно только на основе достоверных сопоставимых методов их тестирования. При этом особенно актуальной является разработка методов тестирования средств антиоксидантотерапии - биоантиоксидантов. Подбор нетоксичных водорастворимых антиоксидантов актуален также для новых направлений пищевой технологии и фармации, разрабатывающих водно-эмульсионные формы.

Все известные методы тестирования антиоксидантов делятся на кинетические и некинетические.

Некинетические методы отличаются тем, что используются не-стандартизированные субстраты, исследование ведут в некинетической области процессов окисления, а в качестве показателей используют концентрацию нестабильных пероксидов или вторичных продуктов. В качестве субстратов используют олеиновую кислоту или различные клеточные и субклеточные компоненты.

Кинетические методы позволяют количественно оценить антирадикальную активность соединений по величине константы скорости обрыва цепей или суммарную антиоксидантную активность по величине периода индукции. Однако в качестве субстратов чаще всего применяют углеводороды: этилбензол, кумол, что мало подходит для тестирования биоантиоксидантов, обладающих сложным механизмом действия. Известное применение в качестве субстратов эфиров высших ненасыщенных жирных кислот относится только к водонераствори-мым антиоксидантам.

В целом актуальность настоящей работы обусловлена необходимостью разработки кинетических методов тестирования водонераство-римых и водорастворимых биоантиоксидантов. Представляется актуальным сравнение эффективности разных кинетических моделей тестирования биоантиоксидантов и разработка практических рекомендаций к их применению.

Целью работы является разработка и оценка эффективности кинетических моделей тестирования растворимых и нерастворимых в воде биоантиоксидантов.

В процессе достижения цели в работе решались следующие задачи:

— разработка кинетической модели тестирования липидраство-римых биоантиоксидантов;

— разработка метода внешнего стандарта для оценки эффективности и механизма действия липидрастворимых биоантиоксидантов;

— исследование критериев оценки эффективности и механизма действия липидрастворимых биоантиоксидантов методом математического моделирования;

— разработка кинетической модели тестирования водорастворимых биоантиоксидантов по результатам исследования процессов мицелл ообразования и кинетики каталитического окисления водно-липид-ных субстратов; исследование критериев тестирования эффективности и механизма действия водорастворимых биоантиоксидантов;

— тестирование водорастворимых соединений классов фенолов, аминов, тиолов в условиях водно-липидной модели, оценка их эффективности и механизма действия с помощью разработанных критериев;

— сравнение водно-липидной и безводной кинетических моделей по информативности и области применения.

Научная новизна:

1. Разработаны две кинетические модели, которые позволяют производить поиск эффективных биоантиоксидантов не только среди традиционно исследуемых водонерастворимых соединений, но и среди природных и синтетических водорастворимых соединений, а также оценивать интегральную антиоксидантную активность всей совокупности компонентов биологического материала и биологических сред.

' 2. Разработана совокупность критериев оценки эффективности, механизма действия биоантиоксидантов с помощью метода внешнего стандарта, а также по величинам параметров аппроксимирующих функций и их производных. Это позволяет оценить периоды полного торможения и выхода на стационарный режим, участие ингибитора в обрыве, продолжении, разветвлении цепей, величины начальной и максимальной скоростей, минимальную критическую концентрацию, при которой биоантиоксидант не влияет на кинетику процесса, и максимальную критическую концентрацию, при которой биоантиоксидант проявляет высокую антиоксидантную активность.

3, Впервые показаны особенности механизма действия некоторых фенолов при каталитическом окислении водно-липидиых субстратов, высокая антиоксидантная активность водорастворимых лекарственных препаратов различного фармакологического действия, способных расширить ассортимент средств антиоксидантотерапии.

На защиту выносятся:

1. Обоснование метода внешнего стандарта для оценки эффективности и механизма действия во до не растворимых антиоксидантов.

2. Математический метод определения эффективности и механизма действия биоантиоксидантов.

3. Результаты разработки и оценки эффективности водно-липид-ной кинетической модели тестирования биоантиоксидантов.

4. Результаты тестирования водорастворимых биоантиоксидантов в зависимости от структуры, их обсуждение.

Практическая значимость работы заключается прежде всего в том, что предложены две кинетические модели, позволяющие тестировать антиоксидантную активность всей совокупности водо- и липидрас-творимых компонентов биологического сырья и тем самым расширять ассортимент нетоксичных биологических добавок и средств антиокси-дантотерапии.

В работе экспериментально доказана ант и о кс ид а нтн ая активность ряда гипотензивных, адреномиметических и желчегонных препаратов» что дает основание исслёдовать возможность расширения их фармакологического действия и терапевтического применения.

Водно-липидная кинетическая модель, разработанная соискателем, практически применима для тестирования синтетических и природных водорастворимых соединений, а кинетические и математические критерии позволяют всесторонне оценить эффективность и механизм действия антиоксидантов.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на международной, трех всероссийских» региональной, трех окружных, двух межвузовских научных и научно-практических конференциях. По результатам исследования опубликованы статьи в журналах «Вестник ТюмГУ» (Тюмень, 2006), «Вопросы современной науки и практики. Университет им. В.И. Вернадского» (Тамбов, 2006). Приняты в печать статьи в журнал «Кинетика и катализ» и «X им и ко - фармацевтический журнал», подана заявка на изобретение (дата поступления 24.05.2005, входящий № 017934, регистрационный № 2005115666).

Структура и объем диссертации Работа состоит из введения, четырех глав, выводов, списка литературы, приложения, методических рекомендаций- Библиографической список литературы включает 138 наименований, из которых 36 источников иностранной литературы. Материалы изложены на 147 страницах, содержат 54 рисунка и 34 таблицы, 10 приложений.

КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность темы диссертации, сформулированы цель работы, основные задачи исследования, научная новизна, практическая значимость, основные положения, выносимые на защиту.

В первой главе приведен обзор литературы, в котором изложены основы теории цепных радикальных процессов окисления углеводородов и их производных. Рассмотрены механизмы антиоксидантного действия различных классов соединений, критически оценены методы и результаты тестирования антиоксидантов, рассмотрен состав и биологические функции липидов, особенности их свободнорадикального окисления, представлена теория мицеллообразования, основы и особенности межфазного и мицеллярного катализа.

Во второй главе изложены методики получения этилолеата, металл инолеата, методики инициированного и каталитического их окисления, очистки растворителей и ингибиторов, физико-химические характеристики исследованных соединений, методики исследования процессов мицеллообразования.

В третьей главе приведены результаты всесторонней кинетической оценки эффективности модельной реакции тестирования липидра-створимых биоантиоксидантов в гомогенной среде. Обсуждены результаты тестирования антиоксидантной активности соединений и механизма их действия. Приведено обсуждение результатов тестирования эффективности и механизма действия двух биоантиоксидантов с учетом литературных данных.

В четвертой главе приведены результаты разработки водно-липидной кинетической модели и исследование ее эффективности для тестирования водорастворимых биоантиоксидантов. Приведены результаты исследования мицеллообразования в системах «вода — этшшшоле-ат», «вода — метилинолеат», «вода - цетилтриметиламмоний бромид», «вода - додоцелсульфонат натрия» и соответствующих трехкомпонент-ных систем.

Приведены результаты исследования кинетики окисления водно-липидных субстратов в зависимости от природы и концентрации катализатора. Приведены результаты выбора кинетических критериев оценки эффективности и механизма действия антиоксидантов в водно-липид-ной среде с помощью математической модели. Приведены результаты тестирования десяти соединений класса фенолов, аминов, тиолов, из которых восемь являются лекарственными препаратами. Дано обсуждение результатов в сравнении с литературными данными.

Приведены выводы.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Тестирование липидрастворимых биоантиоксидантов проводят в пробе этилолеата или метиллинолеата объемом 0,5-2 мл, растворенной в равном объеме хлорбензола, добавляют (2-60)-10~3 моль/л (по отношению к объему пробы) 2, 2'-динитрилазобисизомасляной кислоты (инициатор). Окисление проводят в термостатируемой при 60,0±0,2°С ячейке при непрерывном перемешивании. Волюмометрически фиксируют объем поглощенного кислорода во времени, строят кинетические кривые (КК). В указанных условиях проводят окисление в пробах с добавками тестируемых биоантиоксидантов.

Тестирование водорастворимых биоантиоксидантов проводят в пробе метиллинолеата или этилолеата и воды в соотношении 1 : 3 по объему в присутствии (1-5)-10~3 моль/л цетилтриметиламмония бромида и (1-2)-10~3 моль/л хлорида меди. Пробу насыщают молекулярным кислородом. Окисление проводят в термостатированной при 60,0±0,2°С ячейке манометрической установки при непрерывном перемешивании. Волюмометрически фиксируют объем поглощенного кислорода во времени, строят кинетические кривые (КК). В указанных условиях проводят окисление в пробах с добавками тестируемых биоантиоксидантов.

Для оценки эффективности и механизма действия липидрастворимых антиоксидантов предложено два подхода: метод внешнего стандарта и метод математического моделирования. Для оценки эффективности и механизма действия водорастворимых антиоксидантов использован метод математического моделирования. С этой целью в программе Microsoft Excel методом наименьших квадратов подбирают линии тренда и аппроксимирующие функции кинетических кривых с последующим дифференцированием последних. В результате получают график в виде линейных участков, по которым выбраны критерии эффективности и механизма действия биоантиоксидантов.

Этилолеат получали этерификацией олеиновой кислоты этанолом в щелочной среде с последующей очисткой и вакуумной перегонкой по стандартной методике. Метиллинолеат марки «х.ч.» использовали без дополнительной очистки. Ингибиторы и растворители подвергались очистке по стандартным методикам. Исследование мицеллообра-зования двух- и трехкомпонентных систем проводят по методу Ребин-дера и рефрактометрически.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

I. Обоснование метода внешнего стандарта для оценки эффективности н механизма действия водонерастворимых антноксидан-тов. В соответствии с известной схемой механизма инициированного окисления скорость окисления определяется выражением (1). Инициирование цепей:

СН3 СН3 СН3

си см сы

СН3 СН3

СН3-—>Л* + СИз-^Н

ск ск (0)

Продолжение цепей:

Я+02—^Я02 (1)

яо2 + ян > яоон+(2)

Разветвление цепей:

КООН к» >ЯО + НО (3.1)

2ЯООН > Я02 +ЯО + НгО (3.2)

Обрыв цепей:

Я + Я > М1 (4)

Я +Я01 >М2 (5)

яо2+яо2—^>мг (6)

О)

При известных К2 и К6 для метиллинолеата и экспериментальных значениях \у0 и [ЯН] вычислены \У1 для добавок инициатора 6-10-2,

6-10"3, 2-Ю-3 моль/л, равные 3-Ю"8; 3*10~9 и 1,7-1СГ9моль л"1*с-1, соответственно. Результаты подтверждены вычислением Щ по известному для метиллинолеата выражению

(2)

где [/] - концентрация инициатора,

/= 1,2 - эффективность выхода радикалов из «клетки» в растворах хлорбензола,

К{ — константа скорости инициирования (л моль^-с'1).

Константу скорости распада 2,2'-азобисизобутиронитрила вычислили

30000*300

по известному для метиллинолеата выражению - 3,14-1013с нг .

В соответствии с известной схемой механизма действия сильных ингибиторов скорость окисления определяется выражением

w =^[/гя]—^—. 0)

01 К, /[Jnfi] При известных скоростях инициирования, экспериментально определенных скоростях окисления метиллинолеата в присутствии различных концентраций добавок 2, 6-дитрет.бутил-4-метилфенола (иоио-ла), известного в качестве сильного ингибитора, вычислен параметр./?^, а в предположении2 вычислены значения константы скорости обрыва цепей К7. Очевидно, что при соответствии схемы механизма экспериментальным данным К? не должна зависеть от концентрации ионо-ла и скорости инициирования. Расчеты показали, что К7 во всех исследованных пробах остается постоянной, равной (2,6±0,3)104 л моль^'-с"1, и соответствует известным для ионола К? в этилбензоле. Получена линейная зависимость периодов индукции от концентрации ионола, которая подтверждает простой механизм действия ионола в металлинолеате.

Для оценки эффективности и механизма действия любых тестируемых ингибиторов выбран метод сравнения с кинетическими параметрами ионола, названный нами методом внешнего стандарта.

Далее этим методом исследована кинетика окисления метиллинолеата в зависимости от концентрации а-токоферола при разных скоростях инициирования. Путем сравнения кинетических кривых окисления метиллинолеата при одинаковых концентрациях ионола и а-токоферола (рис. 1) показана меньшая эффективности последнего. Показано, что параметр /К7 (табл. 1) зависит от скорости инициирования и концентрации а-токоферола. При увеличении этой концентрации в 10-100 раз параметр JK7 также падает примерно в 10-100 раз. Очевидно, что механизм действия а-токоферола более сложен по сравнению с ионолом. Более слабое торможение по сравнению с ионолом, вероятно, связано с участием а-токоферола в реакциях продолжения цепей, что сказывается и на эффективных значениях fKy.

R02 + InH Kl > ROOM + ln ; (7)

R02 + hi >MA\ (8)

In + RH > R + InH. (9)

Зависимость периодов индукции от концентрации а-токоферола имеет сложный характер (рис. 2). При низких концентрациях наблюдается линейный участок, который быстро искажается и имеет при более высоких концентрациях S-образный характер. Это согласуется с литературными данными о том, что в биомембранах а-токоферол может выполнять регулирующую роль в процессах свободнорадикального окис-

ления, В нашем эксперименте искажение линейной зависимости наблюдалось при концентрациях а-токоферола, близких к его содержанию в животных тканях (1-1моль/л).

Рис. 1. Кинетические кривые инициированного рис. 2. График зависимости периода

окисления м ети лл и пол еата: 1 - контроль; индукции т от концентрации а-токоферола

а-токоферол: 2 - НО-*; 3-4-10"*; 7- в-Ю"4; при и-Ю^моль-л-' с"1

ионол: 5 - 1-Ю"4; 6-410"4; 4-810~4моль/л ^

Таблица 1

Кинетические параметры окисления растворов метил линолеата в зависимости от концентраций инициатора и ннгнбитора

Концентрация а-токоферола, моль/л моль-л"1 с'1 Ж™ ——— /К7, л-моль"1 с'1

МЛ « 210"3 моль/л, IV, = (1,7±0>3)- 1 0Люльл~'-сГГа-ТФ1ч> = 2,3-10~" моль/л

5,0'10"6 1,7Ю"7 100,0 2,4-103

1,0-10"' 1,1 -10"7 64,7 1,9-] О3

2.5*10"1 8,5 10-® 50,0 9,8104

1,0-10-* 6,8*10"® 40,0 3,1*104

2,5-10™' 1,3 Ю*® 7,6 6,4-10"

4,0-10"4 1,3* 10"* 7,6 4,0 I О4

8,0-Ю-4 9,0-10"* 5,2 2,9 104

2. {У] = б-Ю"-* моль/л, = (3,0±0,2)-10^моль-л"'-с'*1, [а-ТФ],«, = 2,710"6 моль/л

1-10"6 9,7* 10"® 32,6 3,8 106

1-10° 8,5-10"® 28,5 4,3-103

мо-1 4,9-1 16,3 7,5*104

510"4 2,6* 10~® 8,8 2,8*104

7*10~* 1,4* 10"* 4,5 3,9*104

МО"3 1,2*10*® 4,1 3,0*104

3. [Л = 6-10"1 моль/л, И7, = (3,0±013}"Ю-8моль'Л~|-с"1, [а-ТФ]*р = 1,1 10"® моль/л

41<Г* 4,9-Ю"8 1,6 1,9*105

6- 1<Г* 4,0* 10"* 1,3 1,6-105

8-кг* 3,4-10"® 1,1 1,4*105

МО"3 3,3* 10"® 1,05 1,2*10'

З-Ю"3 4,0-10^ 1,2 3,2-104

6103 4,5-10"® 1,5 1,4-104

Таким образом, метод внешнего стандарта позволяет оценить суммарную эффективность антиоксиданта путем сравнения кинетических кривых, прогнозировать схему механизма его действия по величине параметра /К7 и исследования его зависимости от концентрации ингибитора.

Методом внешнего стандарта оценена эффективность гипотензивного лекарственного препарата капотена (1-[(25)-3-метилпропионил]-Ь-пролина)-тиола по своей природе. По кинетическим кривым установлено, что капотен менее эффективен, чем ионол (рис. 3).

('(ОД.м.ч5

I, мин

Рис. 3. Кинетические кривые окисления метиллииолеата в присутствии 1 10~3моль/л: 1 — капотен, 2 — ионол при = 3,0 1моль-л"'*с"1

«ю всю

ТОО 600 500 400 300 100 100 о

У{0,\м.ч>

у « о.ош*1 - одаа»

0 50 100 150 200 250 300

Рис. 4а. Кинетические кривые окисления метиллииолеата в присутствии: 1 — а-токоферола; 2 - нонола

Показано, что повышение концентрации капотена снижает его эффективность вплоть до промотирования процесса, а максимальная скорость возрастает. Эти факты, вероятно, связаны с участием капотена не только в продолжении, но и в инициировании цепей за счет связи Б-Н.

Показано, что параметр /К7 уменьшается обратно пропорционально концентрации (табл. 2), что подтверждает сложный механизм действия капотена, его вероятное конкурирующее участие в реакциях обрыва (8), продолжения (7) и зарождения цепей (реакции 0.1 и 0.2)

/г15я+ог д^*+И°\; (°л)

^з1+/гя я'+^н. (0.2)

Таблица 2

Кинетические параметры инициированного окисления раствора метиллииолеата в зависимости от концентрации капотена IV: = 3,0-10"9 мольмГЧ'1

Концентрация капотена, моль/л моль л"1 с 1 V?™ у с .. ^ — V /К7, л-моль*1 с"1

1-10^ 4,9-10"® 16,3 7,6-10ь

5-Ю"5 6,2-10"8 20,7 1,2-10*

5'Ю-4 6,810"* 22,7 1,1104

1-Ю"3 7,6-10"8 25,3 4,9-103

МО"2 1,4-Ю"7 46,7 2,7-102

Таким образом, на примере двух нетоксичных соединений — природного и синтетического — показана применимость метода внешнего стандарта для качественной и количественной оценки эффективности б иоантио ксида нтов.

2. Математический метод определения эффективности п механизма действия 6iioai mi оксида нто в. Для расширения критериев оценки эффективности и механизма действия б иоантио ксида нтов, увеличения точности предложен математический метод определения кинетических параметров. С этой целью в программе Microsoft Excel для кинетических кривых подбирались линии тренда и аппроксимирующие функции. Функции дифференцируют, получают несколько линейных участков, по положению которых (по отношению к оси абсцисс и по наклону) судят об эффективности ингибиторов и механизме их действия. Метод использовался для оценки информативности обеих кинетических моделей - безводной и водно-липидной для всех исследованных биоан-тиоксидантов.

На рисунке 4 приведены типичные результаты математической обработки кинетических кривых окисления металл и нолеата при lVt — = 1,7*1 (Г9 мольмГ'-с"1 в присутствии добавок ионола и а-токоферола в концентрации 4-Ю"4 моль/л. Показано, что при участии ингибитора только в обрыве цепей (ионол) кинетические кривые аппроксимируют одной параболой (рис. 4д, кривая 1). При этом ее начало соответствует периоду окончания полного торможения, а наклон - ускорению процесса.

* 0,0015х1.0,1073х +2,8667 № - 0,9958

t, мин

40

60

80

100 120

140

160

too

90

ю

то «а 9) 40

30 »

10 о

*«0,013»<>-3,2057« + 214

(, ми»

140

1» 160 <70 1«0 190 200 210

Рис. 46. Аппроксимация первого участка КК

окисления метиллннолеата в присутствии а-токоферола параболой с дисперсией 0,9958

Рис. 4в. Аппроксимация второго участка КК

окисления метиллннолеата в присутствии а-токоферола параболой с дисперсией 0,9986

300

250 у = 2.2857*-3

200 К? • 0,9999

150

100

50

Л мин

о ,---,—---1---1-------------.

1$0 гю 230 250 270 290

Рис. 4г. Аппроксимация третьего участка КК окисления метиллинолеата в присутствии а-токоферола прямой с дисперсией 0,9999

еИУ

Рис. 4л. Расчет кинетических параметров математическим методом: 1 — контроль; 2 - иоиол, 3 - а-токоферол

Для ингибиторов со сложным механизмом действия получают три линейных участка (рис. 4д, кривая 3). Экстраполяция первого и третьего участков на ось ординат позволяет вычислить начальную и максимальную скорости процесса, соответственно. Окончание первого участка соответствует периоду торможения (т^, окончание второго участка -периоду достижения максимальной скорости (т2), наклоны — ускорению (о, и а2). Характер аппроксимирующей функции и указанные параметры ее производной использованы в качестве критериев эффективности и механизма действия. В таблице 3 приведены для сравнения некоторые аппроксимирующие функции кинетических кривых окисления раствора метиллинолеата в присутствии ионола, а-токоферола и капотена.

Таблица 3

Аппроксимирующие функции кинетических кривых окисления метиллинолеата при И7,- = 3,0-ТО'9 моль'Л_1'С_1

1пН С1лН Функции Дисперсия

Ионол у « 0,0003x40,6225х-22,31 0,9982 3,7-10~7

а-токоферол 5-10^ = 0,00012х2+0,05х-1 у2=0,025х2-1,45х-13 у3=2,74х-186,8 0,9999 0,9997 0,9998 1,4-10~7 / 1,Ы0"5

Капотен У1=0,033х2+1,233х-8 у2=2,3728х-40,825 0,9989 0,9889 1,6-10"3

Исследование характера функций (общий вид Ьх-с-0) дает дополнительную информацию, предваряющую результаты дифференцирования: увеличение коэффициента а соответствует большей эффективности аутоускорения; коэффициент Ь не отражает особенности процесса; по величине коэффициента с можно судить о критической концентрации кислорода, при которой начинается процесс аутоускорения.

В результате проведенных исследований выбраны условия тестирования липидрастворимых аитиоксидантов путем термостатированного окисления проб растворов эфиров ненасыщенных жирных кислот в присутствии источника свободных радикалов, без ингибитора и в присутствии добавок ингибиторов, волюмометрического измерения концентрации поглощенного кислорода во времени.

Для оценки эффективности и механизма действия ингибиторов предложены метод внешнего стандарта и метод математического определения кинетических параметров и анализа механизма действия. Метод внешнего стандарта заключается в сравнении кинетических кривых и кинетических параметров, полученных для проб со стандартным ингибитором, участвующим только в обрыве цепей, например ионолом, и параметров, полученных для проб с тестируемым биоантиоксидантом. Метод математического анализа путем получения аппроксимирующей функции КК и ее производной позволяет более точно оценить период индукции, начальную и максимальную скорости, ускорение, а также эффективность и механизм действия биоантиоксидантов.

Метод математического моделирования оказался более универсальным и главным при оценке результатов тестирования водорастворимых аитиоксидантов.

3. Результаты разработки и оценки эффективности водно-липидноП кинетической модели тестирования биоантиоксидантов. При разработке водно-липидной кинетической модели тестирования водорастворимых аитиоксидантов исследованы мицеллярные свойства двух- и трехкомпонентных систем (см. с. 6). По результатам исследования выбран эмульгатор (цетилтриметиламмоний бромид), подобраны оптимальные соотношения компонентов, сделаны предложения о структуре мицелл:

[ <C17H31COOCH3)m n Н20 (n-x ){ (CH3)3NCI6H33}+ ]*" х { <CH3)3NC16H33} + int CI7H33COOC2H3] m [C16H33N(CH3)3r+ у H20^ ( m-x) Bf} x Br" Обе предполагаемые формулы мицелл включают воду в качестве адсорбционного или потенциалобразующего компонента, что согласуется с большим избытком воды как в эксперименте по оценке критической концентрации мицеллообразования, так и в окисляющихся пробах (мольное соотношение эфира и воды составляет 1 :60) и с ее высокой поляризуемостью. Избыток воды также определяет динамическое равновесие мицелл с разным числом агрегации. Для выбора катализатора исследована кинетика окисления метиллинолеата и этилолеата в зависимости от концентрации хлоридов или бромидов меди (II), кобальта (II), никеля (II), железа (II, Ш) (рис. 5). Показана наибольшая эффективность катионов меди, вызывающих наибольшее ускорение процесса при меньших концентрациях.

№(Ö,) Ю1 ..паи,-л'1 -с 1

Рис. Зависимость скорости окисления от концентрации катионов: 1 - Си1*; 2 - Ре2*-,

3 -/-е3*; 4- Со1+; 5 -.№'' при окислении металл ннолеата в водо-эмульсионной среде

Рис. 6. Кинетические кривые окисления этилолеата в водоэмульсионной среде при 60,0±0,2°С в присутствии 2' КГ'моль/л хлорида меди: 1 - контроль; 2 - МО"1; 3 - 2-10"5; 4 - 5 ■ 10"5; 5 - 1-10^; 6 - З Ю^моль/л ионола

На основе этих исследований выбраны условия тестирования водорастворимых антиоксидантов (см. с. 6).

Для определения особенностей механизма каталитического окисления водно-липидных моделей в предложенной кинетической модели исследована кинетика окисления этилолеата (рис, 6, кривая 1). Аппроксимация данной зависимости в программе Microsoft Excel позволяет выявить три участка на кинетической кривой; типичные результаты приведены на рисунке 7. Первый и третий участки аппроксимируют пря^ мыми линиями, второй - параболой. Дифференцирование полученных функций приводит к трем прямым: первая и третья с нулевым наклоном, наклон второго участка соответствует ускорению (рис. 7), экстраполяция первого и третьего участков на ось ординат определяет начальную и максимальную скорости процесса (табл. 4).

ол «3 Oil S.tt

0.tT

1.ti <UJ 0.1» о.» 0,0 т

OOS

dW dt

l, MUH

Рис, 7, Расчет кинетических параметров окисления этилолеата в водо-эмульсионной среде при 60,0±0,2°С в присутствии 210"3моль/л хлорида меди

_____I, мим

»О» 30» 400 МО

Рис. 8. Кинетические кривые каталитического окисления метиллинолеата при 60,0±0,2°С

в присутствии капотена: 1 - контроль; 2-1'1<Г*;3 - 110"5;4- 1*10™'; 5 - 1-Ю"1; 6-М0_1;7-110"1 моль/л

Полученные результаты позволяют прогнозировать механизм окисления эфира ненасыщенной жирной кислоты в присутствии ионов меди. Первый линейный участок дифференциальной кривой, вероятно, обусловлен участием катионов в реакциях зарождения цепей

ЛЯ + Л/е(и+,)+ ->М?в++/?'+//\ (0.2)

Второй участок соответствует разветвлению цепей, вероятно, без участия катионов меди по реакциям (3.1) и (3.2). Катионы меди (II), вероятно, участвуют в распаде гидропероксидов по реакции

ЯООН+Си2* ЯОг+Сии +Н\ которая не дает разветвления. Эффективность катализатора, вероятно, обусловлена сокращением первой стадии и периода накопления критических концентраций гидропероксидов.

Сравнение скоростей инициированного и каталитического окисления эфиров ненасыщенных жирных кислот показало, что скорость окисления водно-липидных субстратов в 1000-10000 раз выше, чем скорость окисления липидов в гомогенной среде (табл. 1, 4).

Далее для выбора критериев оценки эффективности ингибиторов с помощью водно-липидной модели был исследован метод внешнего стандарта. С этой целью исследована кинетика окисления этилолеата от концентрации ионола (рис. 6). По формулам (1) и (3) рассчитаны скорость инициирования и параметр /К7 (см. с. 7). Показано, что параметр /К7 менялся в зависимости от концентрации ионола и был в 100-1000 раз большим, чем известно из литературы. Полученные результаты говорят о более сложном механизме действия ионола в водно-липидной модели. Поэтому для выбора критериев эффективности биоантиокси-дантов применили указанную ранее математическую модель расчета кинетических параметров. Результаты расчета кинетических параметров окисления в присутствии ионола приведены в таблице 4.

Таблица 4

Кинетические параметры каталитического окисления этилолеата в присутствии ионола

Сг»н> моль/л IV моль-л"1-с"1 IV мольмг'-с*1 а2> моль-л-1-с Т), мин мин

Контроль (7,4±0,2)10~5 (1,3±0,1)-10^ (2,5±0,7)10~8 20±2 85±2

1 -10~5 (7,4±0,3)-10~5 (1,4±0,2)10"4 (2,2±056)-1(Г8 40±1 85±2

2-Ю"5 (4,9±0,4)-10~5 (8,6±0,3)10"5 (5,7±0,8)10-9 — 120±2

3-10"5 (1,8±0,2)10~5 (6,5±0,2)-10~5 (6,4±0,7)* 10~9 — 160±3

5-Ю"5 (2,4±0,4)-10~5 (9,5±0,3)-10~5 (6,2±0,6)-10~9 — 175±2

110^ (1,8±0,3)-10~5 (8,8±0,3)10~5 (6,2±0,7)10"9 — 210±2

5-10^ (1,4±0,4)-10-5 (8,1±0,1)10~5 (6,2±0,7)1(Г9 180±2 350±3

При концентрации ионола МО"5 моль/л наблюдается совпадение кинетических параметров с кинетическими параметрами контрольной пробы. Кривые аппроксимируют по трем участкам, что позволяет предполагать быстрое окислении ионола без последующего влияния продуктов его окисления или продуктов восстановления Си2* на кинетику процесса. Это позволяет оценить минимальную критическую концентрацию ингибитора, ниже которой окисление протекает по простому механизму и ингибитор участвует только в реакциях обрыва цепей.

При увеличении концентрации ионола кинетические кривые аппроксимируют по двум участкам: первый - параболой, второй - прямой, что свидетельствует об изменении механизма процесса: наблюдается уменьшение начальной и максимальной скоростей за счет превращения части катализатора в менее активную См1+. Постоянство ускорения свидетельствует об эффективном обрыве цепей на молекулах ионола. После выхода из периода ускорения процесс развивается со скоростями, пропорциональными концентрации невосстановленного катализатора. При концентрации ионола 5-Ю"4 моль/л кинетическую кривую аппроксимируют также тремя функциями. Наблюдается уменьшение всех кинетических параметров относительно контрольной пробы, что позволяет оценить максимальную критическую концентрацию ингибитора, при которой он проявляет высокие антиоксидантные свойства.

График зависимости периода индукции от концентрации носит экстремальный характер, что также свидетельствует о более сложном механизме действия ионола в водно-липидной модели.

Далее в водно-липидной кинетической модели исследовано влияние а-токоферола в интервале концентраций на кинетику и механизм каталитического окисления метиллинолеата (табл. 5). В присутствии всех исследованных концентраций а-токоферола наблюдается отсутствие периода торможения Т1.

Таблица 5

Кинетические параметры каталитического окисления метиллинолеата в присутствии а-токоферола

С/н//, моль/л IV начг МОЛЬ'Л"1'С-1 IV " шах» моль-л-|с-1 аг, мольмГ'-с 2 Т2, мин

Контроль (1,8±0,2)-1<Г* (2,5±0,3)10^ (2,8±0,5)-10~8 30±2

МО"8 (1,5±0,3)* 1 (2,3±0,4>10^ (2,3±0,6>10Г« 30±3

1-1СГ7 (1,3±0,2)-10-* (2,0±0,3)-10~4 (2,7±0,4)-10~* 35±2

110^ (1,1±0,2)-10^ (1,7±0,4)-10~4 (3,9±0,5)'Ю-8 40±5

1-Ю"5 (1,0±0,3)Ю"4 (1,6±0,2)-1<Г* (2,0±0,4)*10"8 60±2

МО"4 (0,9±0,3))0~* <1,4±0,3>10Г* (1,6±0,6)10"8 65±2

110"* (1,5±0,1)-10Г4 (2,5±0,3)10^ (8,^0,5)10"® 30±3

МО"2 (1,6±0,3>Ю^ (3,1 ±0,4)-10^ (1,1±0.6)-10~7 30±4

МОГ1 (1,7±0,2)-10^ (7,1±0,3)- Ю-* (3,3=ь0,4)-10~7 30±3

Более низкую критическую концентрацию (1-10"7 моль/л) а-токо-ферола по сравнению с критической концентрацией ионола можно объяснить низкой его окисляемостью, Слабое снижение максимальной скорости с увеличением концентрации а-токоферола свидетельствует о его более медленном окислении в присутствии катионов меди Си2', слабом восстановлении последней и меньшим влиянием на скорость инициирования.

Повышение максимальной скорости по отношению к контролю в присутствии МО-3; МО-2; МО"' моль/л биоантиоксиданта свидетельствует об участии а-токоферола в реакциях продолжения цепей. Величина ускорения возрастает с увеличением концентрации а-токоферола, что свидетельствует об участии биоантиоксиданта в реакциях разветвления цепей.

Таким образом предложенная кинетическая модель позволяет характеризовать а-токоферол как слабый ингибитор и тестировать биоан-тиоксиданты, сравнивая с кинетическими параметрами ионола.

4. Результаты тестирования водорастворимых бноаитиоксн-дантов в зависимости от структуры, их обсуждение. В условиях вод-но-липидной кинетической модели исследовано и оценено влияние различных концентраций капотена (рис. 8) на кинетику и механизм каталитического окисления метиллинолеата (табл. 6). Из таблицы видно, что добавка капотена 1-10"5 моль/л является критической и не влияет на кинетику окисления метиллинолеата, добавки от МО"4 до 1-Ю"1 моль/л вызывают эффективное торможение, линейно возрастающее с увеличением концентрации. Максимальная скорость практически постоянна, период выхода на стационарный режим увеличивается с ростом концентрации.

Таблица 6

Кинетические параметры каталитического окисления метиллинолеата в присутствии капотена

С/„я, моль/л IV " ИЯЧ1 моль-л^с"1 IV моль-л~1-с~1 МОЛЬ'Л~''С~2 мин мин

Контроль (1,8±0,2)-10~* (2,5±0,3)-!0"4 (2,8±0,5)*10~8 — 30±2

1-Ю"* (8,9±0,3)'Ю"5 (2,3±0,3)-10~4 (2,2±0>6)10~8 — 35±3

1-Ю"5 (8,8*0,2)10^ (2,4±0,2)-10^ (2,1±0,6)10~к — 40±5

ЫО^ (5,2±0,3)10_> ^бАОЗНО"4 (6,7±0,7)'10~8 30±2 50±4

МО"3 (4,0±0,4)10^ (2,5±0,2)'10^ (6,6*0,7)10-* 40±5 55±2

1-Ю"2 (8,6±0,3)10"* (2,2±0,3)10^ (3,3±0,8)10~8 50±2 130±3

1-Ю"1 (6,2±0,!)*10~7 (1,3±0,7)10"8 260±3 390±2

Полученные результаты свидетельствуют о высокой антиокси-дантной активности капотена в условиях водно-липидной модели.

Для оценки лекарственных препаратов - производных фенолов в выбранной кинетической модели исследована эффективность фенола. В таблице 7 приведены кинетические параметры окисления этилолеата в присутствии фенола.

Таблица 7

Кинетические параметры каталитического окисления этилолеата в присутствии фенола

С}„н, моль/л IV МОЛЬ-Л~''С-1 IV моль-л^'с"1 "2, моль-л '-с 2 Т). мин Ъ* мин

Контроль (7,4*0,2)10^ О.З^ииог4 (2,5±0,7)10~8 20±2 85±2

210"* (7,4±0.3)-1(Г5 а.адг)-!»"4 (2,2±0,б)10~8 20±2 90±3

(2,8±0,1)*10~5 (6,8±0,2)-1<Г5 (4,1±0,5)10"9 30±3 120±2

МО""1 (2,7±0,2)-10-5 (5,5±0,3)-10~5 (4,4±0,5)10-9 50±2 150±3

5-1(Г' (2,6±0,3)10"5 (4,4±0,3)*10-5 (4,1 ±0,6)-Ю-9 80±2 180±2

НО* (1,6±0,4)-10-5 (3,6±0,2)'10-5 (5,2±0,8)10-9 120±2 210±2

Показано, что минимальная критическая концентрация фенола в 10-20 раз выше, чем у ионола, что свидетельствует о быстром расходовании катализатора под влиянием фенола. При соотношении катализатора и фенола 10: 1 наблюдается снижение максимальной скорости, что, вероятно, связано с быстрым его окислением, и далее процесс окисления развивается без участия ингибитора. Это подтверждается совпадением кинетических параметров (табл. 7) и функций. При всех других исследованных концентрациях фенола наблюдается снижение начальной и максимальной скоростей за счет превращения катализатора в менее активную Си1+. Постоянство ускорения свидетельствует об эффективности обрыва цепей на молекулах фенола. Представленные результаты позволили выявить дополнительные возможности разработанной кинетической модели для оценки механизма действия фенолов с более низкой антиоксидантной активностью, чем ионол.

Далее модель была использована для оценки антиоксидантной активности лекарственного препарата осалмида (2-гидрокси-1-(Ы-4'-гидро-ксифенил)бензкарбамида), применяемого как желчегонное средство.

При всех исследованных концентрациях осалмида наблюдается уменьшение начальной и максимальной скоростей процесса пропорционально концентрации осалмида, причем продукты окисления не участвуют в реакции обрыва цепей. Наблюдается пропорциональное увеличение эффективности периода ускорения с увеличением концентрации осалмида. Сравнение кинетических параметров показало, что осал-мид проявляет более высокую антиоксидантную активность, чем ионол в соответствующих концентрациях. Это, вероятно, связано с меньшей окисляем остью осалмида.

Таблица 8

Кинетические параметры окисления этилолеата в присутствии осалмида

моль/л И7 '' кач) мольл~'*с~1 IV гг та*! МОЛЬ-Л^'С"1 «2. моль-л '-с 2 Т1, мин мин

Контроль (7,4±0,2)*10~5 (1,3±0Д)10^ (2,5±0,7)-10~* 20±2 85±2

110^ (3,2±0,3)-10-5 (4,1±0,2)10-5 (2,2±0,7)10~9 — 90±3

5- 1(И (1,2±0,3)*10~5 (3,7±0,3)-10~5 (4,2*0,8)-10"9 60±2 120±2

МО"5 (5,9±0,1)10^ 0,1±0,2)-10~5 (3,5*0,6)10'* 100±3 210±2

Высокая эффективность торможения осалмида может быть связана с дезактивацией катализатора путем хелатообразования и влиянием заместителя в лора-положении, который имеет акцепторный характер:

В выбранных условиях исследовано влияние ряда водорастворимых лекарственных препаратов различного фармакологического действия на кинетику и механизм окисления этилолеата: парацетамола, эмок-сипина, метиддофы, адреналина, пирокатехина. В результате математической обработки получен ряд увеличения антиоксидантной активности производных фенола: парацетамол < эмоксипин < осалмид и производных пирокатехина: метилдофа < адреналин < пирокатехин. Общим эффектом аминов является снижение максимальной скорости процесса пропорционально увеличению концентрации. Различие состоит в том, что в присутствии одних аминов наблюдаются периоды полного торможения и аутоускорения, а в присутствии других окисление протекает без периодов индукции и аутоускорения. К аминам первой группы относятся адреналин, метилдофа, эмоксипин, к аминам второй группы можно отнести парацетамол.

Эффект аминов первой группы обусловлен их окислением гид-

ропероксидами по молекулярному механизму КООН + 1пН—_ >

При этом из системы выводятся гидропероксиды, что приводит к уменьшению максимальной скорости процесса. Отсутствие периодов торможения свидетельствует о том, что ингибитор и продукты его окисления не способны обрывать цепи. Полученные результаты свидетельствуют о том, что активность фенольного гидроксила полностью подавлена, возможно, за счет акцепторного характера заместителей у аминогруппы.

Проявление антиоксидантной активности адреналина, вероятно, связано с тем, что аминогруппа жирного характера не окисляется гид-ропероксидами по молекулярному механизму. Снижение максимальной скорости практически пропорционально концентрации ингибитора свидетельствует об участии продуктов их окисления в реакциях обрыва цепей. Очевидно, что окислению по молекулярному механизму подвергаются ароматические амины.

Изменение антиоксидантной активности эмоксипина по отношению к фенолу, вероятно, обусловлено конкуренцией реакций. При избытке катализатора по отношению к ингибитору активность эмоксипина сравнима с активностью фенола, при избытке эмоксипина по отношению к катализатору активность становится ниже, что, вероятно, обусловлено реакцией окисления амина гпдропероксидами по молекулярному механизму, но не реакцией обрыва цепей на фенольном гидроксиле.

Исследована эффективность пирокатехина. Показано, что характер кинетических кривых отличается от характера кинетической кривой контрольной пробы и всех ранее описанных фенолов. При соотношении катализатора и ингибитора 1 : 1 наблюдается большой период торможения, что, вероятно, связано с тем, что некоординированный пирокатехин действует как типичный сильный ингибитор. При более высоких концентрациях катализатора по отношению к ингибитору 20 : 1 наблюдается снижение концентрации пирокатехина как ингибитора за счет образования комплекса с катионами меди, которые оказываются более сильным катализатором, чем Сг?+. При всех исследованных концентрациях пирокатехина процесс окисления выходит на скорость, соответствующую процессу, катализированному комплексом ингибитора и катионов меди.

Таким образом, предложенная модель позволяет оценить процесс комплексообразования ингибитора и механизм их действия.

ВЫВОДЫ

1. Предложена кинетическая модель тестирования водонераство-римых биоантиоксидантов путем исследования кинетики инициированного окисления растворов эфиров ненасыщенных жирных кислот в хлорбензоле при 60,0±0,2°С в зависимости от концентрации и природы биоантиоксиданта.

Пробу эфира (этилолеата, метиллинолеата) в хлорбензоле в соотношении 1 : 1 (по объему) с добавкой инициатора 2, 2-азобисизобутиро-нитрила 1-4 мг/мл насыщают кислородом. Окисление проводят в термостатированной ячейке манометрической установки при 60,0±0,2°С.

Волюмометрически при непрерывном перемешивании определяют поглощение кислорода во времени в контрольной пробе и пробах с добавками б ио а нт ио кс ида нта,

2. Предложены критерии оценки эффективности и механизма действия биоантиоксидантов методом внешнего стандарта и с помощью математической модели. В качестве внешнего стандарта предложен ио-нол, в качестве критериев — минимальная и максимальная критические концентрации биоантиоксиданта; начальная и максимальная скорости процесса; периоды полного торможения и окончания ускорения; ускорение процесса.

3. По результатам исследования мицеллообразования двух- и трех-компонентных систем и каталитической активности солей ряда ¿/-элементов IV периода (См2+; /Л2+; Со2+; /ге2+; /*е3+) разработана кинетическая водно-липидная модель тестирования водорастворимых биоантиоксидантов. Пробу эфира (этилолеата или метиллинолеата) и воды в соотношении 1 :4 (по объему) с добавками хлорида меди и цетилтримети-ламмония бромида с конечными концентрациями (1-5)-10~3 моль/л насыщают кислородом. Окисление проводят в термостатированной ячейке манометрической установки при 60,0±0,2°С. Волюмометрически при непрерывном перемешивании определяют поглощение кислорода во времени в контрольной пробе и пробах с добавками биоантиоксиданта.

4. По результатам сравнения двух кинетических моделей выявлены различия эффективности ингибиторов в водно-липидной и безводных средах. Показано, что наиболее важный биоантиоксидант — а-токоферол эффективен в безводной среде и низко эффективен в водно-липидной.

5. Выявлены особенности механизма действия фенолов и аминов при каталитическом окислении водно-липидных субстратов. Показано, что фенолы с меньшей антирадикальной активностью, чем у ионола, быстро окисляются под действием катализатора.

6. С использованием водно-липидной кинетической модели впервые протестированы антиоксидантные свойства восьми водорастворимых лекарственных препаратов в зависимости от строения.

7* Показана высокая антиоксидантная активность капотена, осал-мида и адреналина в водно-липидной среде, что может служить основанием для расширения области их фармакологической активности.

Основное содержание изложено в следующих работах:

1. Журавлева Л.А. Исследование эффективности кинетической модели тестирования водорастворимых антиоксидантов / Л.А. Журавлева,

B.В. Крайник, В.Н. Ушкалова // Вестник ТюмГУ. - 2006. -№3, - С. 52-58.

2. Журавлева Л.А. Разработка метода тестирования средств антиоксида нтотерапии / Л.А. Журавлева, В.В. Крайни к, В.Н. Ушкалова // Вопросы современной науки и практики. Университет им. В.И. Вернадского. -2006.-№ 2. - С. 144-154.

3. Ушкалова В.Н. Химическое моделирование свободпоради-кального процесса окисления липидов биомембран / В.Н. Ушкалова, Н.В. Ионидис, Л.А. Журавлева И Медико-биологические и экологические проблемы здоровья человека на Севере: Мат-лы Всерос. науч,-лракт. конф. г. Сургут, 21-23 апр. 2000 г.: В 2 ч. - Сургут: Изд-во СурГУ, 2000. - Ч. 1. - С. 246-248.

4. Журавлева Л.А. Водно-эмульсионные системы как модели для изучения процессов окисления липидов биомембран // Научная молодежь - XXI веку: Мат-лы науч-практ. конф. г. Сургут, 21 апр. 2001 г. -Сургут: Изд-во СурГУ, 2001. - С. 46-47,

5. Журавлева Л.А. Структура мицелл в модельных реакциях липидов // Наука и инновации ХМАО: Мат-лы III окр. конф. г. Сургут, 29-30 нояб. 2002 г. - Сургут: Изд-во СурГУ, 2002. - С. 4-7.

6. Журавлева Л.А. Мицеллярный катализ в химии липидов / Л.А. Журавлева, И.Р. Мингазова, Д.А. Аждугов, И.В, Иванова И Наука и инновации XXI века: Мат-лы откр. окр. конф. г. Сургут, 27-28 нояб.

2003 г.: В 2 т. - Сургут: Изд-во СурГУ, 2004. - Т. 1. - С. 202-204.

7. Журавлева Л.А. Исследование кинетики ингибированного окисления липидных субстратов математическим методом // Экологические проблемы и здоровье населения на Севере: Мат-лы окр. науч-практ. конф, г. Сургут, 4 июня 2004 г. - Сургут: Изд-во СурГУ, 2004. -

C. 5-7.

8. Журавлева Л.А. Исследование антиоксидантной активности лекарственных препаратов // Медико-биологические и экологические проблемы здоровья человека на Севере: Мат-лы Межд. науч. конф. г.Сургут, 11-13 иояб. 2004 г. - Сургут: Изд-во СурГУ, 2004.-С. 337-339.

9. Журавлева Л.А. Исследование кинетических моделей тестирования биоантиоксидантов математическим методом // Наука и инновации XXI века: Мат-лы V откр. окружн. конф. г. Сургут, 25-26 нояб.

2004 г. - Сургут: Изд-во СурГУ, 2005. - С. 110-Ш.

10. Журавлева Л.А. Компьютерное исследование кинетических моделей тестирования антиоксидантной активности лекарственных препаратов / Л.А. Журавлева, В.В. Коростелева, O.A. Разуваева // Наука

и инновации XXI века: Мат-лы V откр. окр. конф. г. Сургут, 25-26 нояб.

2004 г. - Сургут: Изд-во СурГУ, 2005. - С. 112-113.

11. Журавлева JÍ.A. Кинетический анализ эффективности метода тестирования антиоксидантов // Менделеевские чтения: Мат-лы Всерос. конф. г. Тюмень, 26-28 мая 2005 г.- Тюмень: Изд-во ТГУ, 2005. -С. 150-153.

12. Журавлева J1.A. Кинетические эффекты а-токоферола в свободнорадикальном окислении липидных субстратов // Наука и инновации XXI века: Мат-лы VI откр. окр. конф. г. Сургут, 24-25 нояб.

2005 г. - Сургут: Изд-во СурГУ, 2006. - С. 1S9-192.

13. Журавлева Л.А. Методические подходы к оценке кинетических эффектов окисления липидных субстратов в присутствии координационных соединений / В.В. Крайник, Л.А. Журавлева // Наука и инновации XXI века: Мат-лы VI откр. окружн. конф. г. Сургут, 24—25 нояб. 2005 г. - Сургут: Изд-во СурГУ, 2006.-С. 192-193.

Приняты в печать и заявлены:

Журавлева Л.А., Ушкалова В.Н. Кинетический способ тестирования антиоксидантов: Заявка на патент. Принята 24.05.2005; входящий № 017934; регистрационный № 2005115666.

Журавлева Л.А. Эффективность липидиой кинетической модели тестирования биоантиоксидантов / Л.А. Журавлева, В.Н. Ушкалова // Кинетика и катализ. — 2006 (0,4 п.л.).

Ушкалова В.Н. Исследование антиоксидантных свойств капотена кинетическим методом / В.Н. Ушкалова, Л.А. Журавлева И Хим.-фарм. журнал. -2006. - (0,5 пл.).

Журавлева Людмила Анатольевна

РАЗРАБОТКА И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ КИНЕТИЧЕСКИХ МОДЕЛЕЙ ТЕСТИРОВАНИЯ БИОАНТИОКСИДАНТОВ

02.00.04 - физическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Оригинал-макет подготовлен в редакционном отделе издательского центра СурГУ в авторской редакции т.: (3462) 23-25-75

Подписано в печать 12.10.2006 г. Формат 60*84/16 Печать трафаретная. Усл. печ. л. 1,45. Уч.-изд. л. 1,1 Тираж 120. Заказ № 107

Отпечатано в полиграфическом отделе издательского центра СурГУ ул. Лермонтова, 5, г. Сургут т./ф.: (3462) 32-33-06

Сургутский государственный университет ул. Энергетиков, 14, г. Сургут ХМАО Тюменской области, 628412 т./ф.: (3462) 52-47-00» 52-47-29

Введение.

Глава 1. Теория свободнорадикального окисления.

1.1. Общая теория цепных разветвленных процессов окисления органических соединений.

1.2. Теоретические представления о механизме ингибирования.

1.3. Мицеллообразование. Основы и особенности межфазного и мицеллярного катализа.

1.4. Окисление углеводородов в присутствии мицелл и в двухфазных водно-органических системах.

1.5. Фракционный, жирно-кислотный состав и биологическая активность липидов.

1.6. Особенности кинетики и механизма окисления липидов и их жирно-кислотных компонентов.

1.7. Методы тестирования эффективности антиоксидантов.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Получение и очистка эфиров ненасыщенных жирных кислот.

2.2. Очистка инициатора.

2.3. Очистка растворителей.

2.4. Очистка ингибиторов.

2.5. Схема и принцип работы манометрической установки.

2.6. Методики окисления.

2.7. Методики определения критической концентрации мицеллообразования.

Глава 3. Результаты исследования эффективности кинетических моделей тестирования биоантиоксидантов в гомогенной среде.

3.1. Обсуждение результатов.

Глава 4. Результаты исследования эффективности водно-липидной кинетической модели тестирования биоантиоксидантов.

4.1. Исследование мицеллообразования водно-липидных систем.

4.2. Подбор катализатора.

4.3. Подходы для расчета кинетических параметров и оценки эффективности ионола при каталитическом окислении этилолеата.

4.4. Исследование эффективности и механизма действия а-токоферола при окислении метиллинолеата в условиях водно-липидной модели.

4.5. Исследование эффективности фенола и его производных при каталитическом окислении этилолеата.

4.5.1. Исследование эффективности и механизма действия осалмида при каталитическом окислении этилолеата.

4.5.2. Исследование эффективности и механизма действия эмоксипина при каталитическом окислении этилолеата.

4.5.3. Исследование эффективности и механизма действия парацетамола при каталитическом окислении этилолеата.

4.6. Исследование эффективности и механизма действия пирокатехина при каталитическом окислении этилолеата.

4.6.1. Исследование эффективности и механизма действия адреналина при каталитическом окислении этилолеата.

4.6.2. Исследование эффективности и механизма действия метилдофы при каталитическом окислении этилолеата.

4.7. Исследование эффективности и механизма действия капотена при каталитическом окислении метиллинолеата.

4.8. Обсуждение результатов.

Выводы.

Настоящая работа посвящена исследованию эффективности липидной и водно-липидной кинетических моделей и подбору критериев тестирования во-донерастворимых и водорастворимых биоантиоксидантов.

Актуальность темы. За 90 лет после патентования гидрохинона в качестве стабилизатора окислительной деструкции акролеина области применения антиоксидантов значительно расширились. Антиоксиданты применяют в химической технологии, для стабилизации автомобильных, авиационных видов топлива и смазочных масел, в пищевой и фармацевтической промышленности. За этот период установлен радикально-цепной механизм окисления углеводородов и их производных и механизм действия многих ингибиторов в этих условиях.

С развитием радиобиологии в 50-х годах XX века появились представления о радикально-цепном механизме не только радиационного поражения, но и развития других патологий. К настоящему времени сформировалась теория свободнорадикального механизма развития большинства патологий путем нарушения проницаемости биомембран при изменении интенсивности окисления липидов. Эти научные достижения стимулировали широкое применение антиоксидантов в медицине. Но прогресс в антиоксидантотерапии, применении антиоксидантов в пищевой, фармацевтической технологиях требует разработки сопоставимых и достоверных методов тестирования биоантиоксидантов.

К биоантиоксидантам предъявляются требования их нетоксичности и эффективности в биологических средах.

Все существующие методы тестирования антиоксидантов делятся на кинетические и некинетические. Для некинетических методов известно использование суспензии митохондрий в фосфатном буфере и оценка результатов тестирования хемилюминесцентным методом [9]. Предполагается, что хемилюми-несценция связана с окислительно-восстановительными реакциями. Однако суть этого явления однозначно не установлена, так как свечение могут давать соединения разной химической природы [13; 30; 48; 62].

Показана возможность тестирования биоантиоксидантов путем аскорбат-зависимого окисления олеиновой кислоты в присутствии солей железа (II), аскорбиновой кислоты и растворов испытуемых веществ. В качестве субстратов используют также микросомы, суспензию желточных протеинов в фосфатном буфере, модельные системы липосом, сформированные из раствора яичного лецитина в глициновом буфере. Эффективность биоантиоксидантов в этих моделях оценивают по величине отношения периодов образования определенных концентраций пероксидов и гидроксидов в контрольной пробе и проб с биоанти-оксидантом [89].

Недостатком всех перечисленных методов является низкая точность из-за использования в качестве показателя окисляемости концентрации таких неустойчивых продуктов, как пероксиды. При этом в пробах со слабыми ингибиторами, способными участвовать в распаде гидропероксидов, могут быть зафиксированы высокие значения отношений периодов индукции. Применение аскорбиновой кислоты также может вносить неточности в результаты тестирования, так как известно, что она служит восстанавливающим агентом катионов Fe3+ и способна к синергизму с рядом фенолов и ароматических аминов.

Недостатком этих методов также является трудность стандартизации субстратов, и поэтому невозможность повторить результаты экспериментов.

С целью увеличения точности и информативности методов тестирования биоантиоксидантов широко используют в качестве кинетических моделей растворы углеводородов, таких как кумол, этилбензол, стирол. Кинетические параметры процессов окисления этих соединений хорошо изучены, что позволяет оценить эффективность антиоксидантов и биоантиоксидантов по величине константы скорости обрыва цепей [17; 26; 57]. В этилбензоле и стироле определены значения константы скорости обрыва цепей для токоферолов и убихинонов [24; 25; 27; 51; 96]. Однако использование углеводородов для тестирования антиоксидантов для биологических и пищевых субстратов ограничено большой разницей в структуре и механизмах окисления углеводородов и липидов.

В качестве модельных субстратов для оценки эффективности антиокси-дантов для пищевых продуктов, масляных основ фармацевтических препаратов известно использование процессов инициированного окисления безводных растворов олеатов, линолеатов [100]. Кинетика и механизм окисления эфиров высших ненасыщенных жирных кислот достаточно хорошо изучены, что позволяет использовать эти субстраты в качестве модельных для тестирования липидрастворимых биоантиоксидантов [10; 74-76; 78; 115].

Модель для тестирования биоантиоксидантов должна удовлетворять следующим условиям; а) реакция окисления должна протекать с высокой скоростью, что обеспечивается температурой проведения эксперимента (при 60,0±0,2°С); б) реакция должна протекать в кинетической области (не зависеть от скорости перемешивания окисляемого субстрата); в) необходимо исключить соокисляемость компонентов системы.

В целом актуальность настоящей работы обусловлена необходимостью разработки кинетических методов тестирования водорастворимых и водонерас-творимых биоантиоксидантов.

Особенно актуальным представляется разработка и оценка эффективности модели для тестирования водорастворимых биоантиоксидантов. Именно водорастворимые нетоксичные соединения могут применяться для антиоксидан-тотерапии, торможения процессов окисления водных биологических и пищевых субстратов. Представляются актуальными сравнение эффективности разных кинетических моделей тестирования биоантиоксидантов и разработка практических рекомендаций по их применению.

Цели и задачи исследования. Целью работы является разработка и оценка эффективности кинетических моделей тестирования растворимых и нерастворимых в воде биоантиоксидантов.

В процессе достижения цели в работе решались следующие задачи:

1) разработка кинетической модели тестирования липидрастворимых биоантиоксидантов;

2) разработка метода внешнего стандарта для оценки эффективности и механизма действия липидрастворимых биоантиоксидантов;

3) исследование критериев оценки эффективности и механизма действия липидрастворимых биоантиоксидантов методом математического моделирования;

4) разработка кинетической модели тестирования водорастворимых биоантиоксидантов по результатам исследования процессов мицеллообразования и кинетики каталитического окисления водно-липидных субстратов;

5) исследование критериев тестирования эффективности и механизма действия водорастворимых биоантиоксидантов;

6) тестирование водорастворимых соединений классов фенолов, аминов, тиолов в условиях водно-липидной модели, оценка их эффективности и механизма действия с помощью разработанных критериев;

7) сравнение водно-липидной и безводной кинетических моделей по информативности и области применения.

Научная новизна:

1. Разработаны две кинетические модели, которые позволяют производить поиск эффективных биоантиоксидантов не только среди традиционно исследуемых водонерастворимых соединений, но и среди природных и синтетических водорастворимых соединений, а также оценивать интегральную антиок-сидантную активность всей совокупности компонентов биологического материала и биологических сред.

2. Разработана совокупность критериев оценки эффективности и механизма действия биоантиоксидантов с помощью метода внешнего стандарта, а также по величинам параметров аппроксимирующих функций и их производных. Это позволяет оценить периоды полного торможения и выхода на стационарный режим, участие ингибитора в обрыве, продолжении, разветвлении цепей, величины начальной и максимальной скоростей, минимальную критическую концентрацию, при которой биоантиоксидант не влияет на кинетику процесса, и максимальную критическую концентрацию, при которой биоантиоксидант проявляет высокую антиоксидантную активность.

3. Впервые показаны особенности механизма действия некоторых фенолов при каталитическом окислении водно-липидных субстратов, высокая анти-оксидантная активность водорастворимых лекарственных препаратов различного фармакологического действия, способных расширить ассортимент средств антиоксидантотерапии.

Практическая значимость работы заключается в том, что предложены две кинетические модели, позволяющие тестировать антиоксидантную активность всей совокупности водо- и липидрастворимых компонентов биологического сырья и тем самым расширить ассортимент нетоксичных биологических добавок и средств антиоксидантотерапии.

В работе экспериментально доказана антиоксидантная активность ряда гипотензивных, адреномиметических, желчегонных препаратов, что дает основание исследовать возможность расширения их фармакологического действия и терапевтического применения.

Водно-липидная кинетическая модель, разработанная соискателем, практически применима для тестирования синтетических и природных водорастворимых соединений, а кинетические и математические критерии позволяют всесторонне оценить эффективность и механизм действия антиоксидантов.

Разработан оригинальный способ тестирования антиоксидантов и расчета кинетических параметров. Доказана антиоксидантная активность ряда гипотензивных, адреномиметических лекарственных препаратов и возможность их применения в антиоксидантотерапии.

Апробация работы. Основные результаты доложены на Всероссийских Менделеевских чтениях «Д.И. Менделеев и Сибирь: История и современность» (Тобольск, 1999), Всероссийской научно-практической конференции «Медико-биологические и экологические проблемы здоровья человека на Севере» (Сургут, 2000), межвузовской конференции «Научная молодежь-XXI веку» (Сургут,

2001), в сборнике научных трудов (Сургут, 2001), на III окружной конференции «Наука и инновации Ханты-Мансийского автономного округа» (Сургут, 2002), IV окружной научно-практической конференции «Наука и инновации XXI века» (Сургут, 2003), Всероссийской научной конференции «Экологические проблемы и здоровье населения Севера» (Сургут, 2004), Международной научной конференции «Медико-биологические и экологические проблемы здоровья человека на Севере» (Сургут, 2004), V окружной конференции «Наука и инновации XXI века» (Сургут, 2004), VI окружной конференции «Наука и инновации XXI века» (Сургут, 2005). По результатам исследования опубликованы статьи в журналах «Вестник ТюмГУ» (Тюмень, 2006), «Вопросы современной науки и практики. Университет им. В.И. Вернадского» (Тамбов, 2006).

Публикации. По результатам экспериментов опубликовано 13 печатных работ, в том числе приняты в печать статьи в журнал «Кинетика и катализ» и «Химико-фармацевтический журнал», подана заявка на изобретение (дата поступления 24.05.2005, входящий № 017934, регистрационный № 2005115666).

ВЫВОДЫ

1. Предложена кинетическая модель тестирования водонерастворимых биоантиоксидантов путем исследования кинетики инициированного окисления растворов эфиров ненасыщенных жирных кислот в хлорбензоле при 60,0±0,2°С в зависимости от концентрации и природы биоантиоксиданта. Пробу эфира (этилолеата, метиллинолеата) в хлорбензоле в соотношении 1 : 1 (по объему) и добавкой инициатора 2, 2'-азобисизобутиронитрила 1-4 мг/мл насыщают кислородом. Окисление проводят в термостатированной ячейке манометрической установки. Волюмометрически при непрерывном перемешивании определяют поглощение кислорода во времени в контрольной пробе и пробах с добавками биоантиоксиданта.

2. Предложены критерии оценки эффективности и механизма действия биоантиоксидантов методом внешнего стандарта и с помощью математической модели. В качестве внешнего стандарта предложен ионол, в качестве критериев -минимальная и максимальная критические концентрации биоантиоксиданта, начальная и максимальная скорости процесса, периоды полного торможения и окончания ускорения, ускорение процесса.

3. По результатам исследования мицеллообразования двух- и трехкомпо-нентных систем и каталитической активности солей ряда ^-элементов IV периода

О -i- О Л О -4- О Л- -2

Си ; Ni ; Со ; Fe ; Fe ) разработана кинетическая водно-липидная модель тестирования водорастворимых биоантиоксидантов. Пробу эфира (этилолеата или метиллинолеата) и воды в соотношении 1 : 3 (по объему) добавками хлорида меди и цетилтриметиламмония бромида с конечными концентрациями л

1-5)-10 моль/л насыщают кислородом. Окисление проводят в термостатированной ячейке манометрической установки при 60,0±0,2°С. Волюмометрически при непрерывном перемешивании определяют поглощение кислорода во времени в контрольной пробе и пробах с добавками биоантиоксиданта.

4. По результатам сравнения двух кинетических моделей выявлены различия эффективности ингибиторов в водно-липидной и безводных средах. Показано, что наиболее важный биоантиоксидант - а-токоферол эффективен в безводной среде и низко эффективен в водно-липидной.

5. Выявлены особенности механизма действия фенолов и аминов при каталитическом окислении водно-липидных субстратов. Показано, что фенолы с меньшей антирадикальной активностью, чем у ионола, быстро окисляются под действием катализатора.

6. С использованием водно-липидной кинетической модели впервые протестированы антиоксидантные свойства восьми водорастворимых лекарственных препаратов в зависимости от строения.

7. Показана высокая антиоксидантная активность капотена, осалмида и адреналина в водно-липидной среде, что может служить основанием для расширения области их фармакологической активности.

1. Абрамзон А.А. Поверхностно-активные вещества. Синтез, анализ, применение / А.А. Абрамзон, Л.П. Зайченко, С.И. Файнгольд. Л.: Химия, 1988. - 200 с.

2. Абрамзон А.А. Поверхностные явления и поверхностно-активные вещества: Справочник / А.А. Абрамзон, Л.Е. Боброва, Л.П. Зайченко и др.; Под ред.

3. A.А. Абрамзона и Е.Д. Щукина. 2-е изд., испр. и доп. - Л.: Химия, 1984. - 392 с.

4. Аристархова С.А. Изучение ингибирующей активности токоферолов / С.А. Аристархова, Е.Б. Бурлакова, Н.Г. Храпова // Известия АН СССР. Сер. хим. 1972. - № 12. - С. 2714-2718.

5. Бабаекин П.М. Определение липидных спектров сыворотки и цельной крови методом прямой денситометрии тонкослойных хроматограмм // Лечебное дело. 1977. - № 7. - С. 406-407.

6. Байрамов В.М. Основы химической кинетики и катализа / Под ред.

7. B.В. Лукина. -М.: Академия, 2003. 256 с.

8. Белых П.Д. Связь солюбилизации органических веществ с их мольным объемом / П.Д. Белых, А.А. Абрамзон // Коллоидн. журн. 1976. - Т. 48, № 5.1. C. 856-861.

9. Березин И.В. Физико-химические основы мицеллярного катализа / И.В. Березин, К.И. Мартинек, А.К. Яцимирский // Успехи химии. 1973. - Т. 42, № 1. -С. 1729-1756.

10. Большаков Г.Ф. Образование гетерогенной системы при окислении углеводородных топлив. Новосибирск: Наука, 1990. - 248 с.

11. Бурлакова Е.Б. Изучение суммарной активности природных антиоксидантов липидов хемилюминесцентным методом / Е.Б. Бурлакова, Н.М. Сторожок, Н.Г. Храпова // Биофизика. 1988. - Т. 33, вып. 4. - С. 584-588.

12. Бурлакова Е.Б. Кинетические особенности токоферолов как антиоксидантов: Препринт / Е.Б. Бурлакова, С.А. Крашаков, Н.Г. Храпова. Черноголовка, 1992. - 56 с.

13. П.Бурлакова Е.Б. О влиянии боковой фитильной цепи токоферолов на окислительные реакции, протекающие в липидах / Е.Б. Бурлакова, Е.Н. Кухти-на, И.К. Сарычева // Биохимия. 1982. - Т. 47, вып. 6. - С. 987-992.

14. П.Бурлакова Е.Б. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты / Е.Б. Бурлакова, Н.Г. Храпова // Успехи химии. 1985. - Т. 54, вып. 9.-С. 1540-1558.

15. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. М.: Наука, 1972. - 249 с.

16. Власов В.М. Межфазный катализ в реакциях ароматического нуклео-фильного замещения // Журн. орган, химии. 1998. - Т. 34, вып. 9. - С. 1367-1377.

17. Воробьев Е.В. Исследование влияния меди и ее соединений на эффективность аминного антиоксиданта // Известия Гомельского гос. ун-та. 2003. -№5.-С. 132-135.

18. Гаевский В.Ф. Исследование кинетики окисления толуола на кобальт-бромидном катализаторе / В.Ф. Гаевский, Н.П. Евлиненко, К.И. Матковский // Нефтехимия. 1974. - Т. 14, № 2. - С. 256-262.

19. Гладышев Г.П. Тестирование химических соединений как стабилизаторов полимерных материалов / Г.П. Гладышев, В.Ф. Цепалов // Успехи химии. -1975. Т. 44, вып. 10. - С. 1830-1850.

20. Государственная фармакопея СССР / Под ред. М.Д. Машковского. -М.: Медицина, 1987. 333 с.

21. Грибанов Г.А. Микротонкослойная хроматография фосфолипидов сыворотки крови и их количественное определение с помощью малахитового зеленого / Г.А. Грибанов, С.А. Сергеев, А.С. Алексеенко // Лечебное дело. 1976. -№ 12. - С. 724-727.

22. Грибанов Г.А. Экспресс-микроанализ общих липидов сыворотки крови и их фракций / Г.А. Грибанов, С.А. Сергеев // Вопр. мед. химии. 1975. -Т. 21, №6.-С. 652-655.

23. Данилов A.M. Проблемы окислительной стабильности вторичных дие-тиллятных топлив // Нефтехимия. 1992. - Т. 4. - С. 374.

24. Демлов Э. Межфазный катализ / Э. Демлов, 3. Демлов. М.: Мир, 1987.-485 с.

25. Денисов Е.Т. Ингибирование цепных реакций / Е.Т. Денисов, Н.М. Эмануэль, В.В. Азатян. Черноголовка: ИХФ РАН, 1997. - 370 с.

26. Денисов Е.Т. Кинетика гомогенных химических реакций. М.: Высш. школа, 1988.-391 с.

27. Денисов Е.Т. Константы скорости гемолитических жидкофазных реакций. М.: Наука, 1971.-711 с.

28. Денисов Е.Т. Механизмы гемолитического распада молекул в жидкой фазе // Итоги науки и техники. Сер. «Кинетика и катализ». 1981. - Т. 9. - С. 1.

29. Денисов Е.Т. Химическая кинетика: Учебник для вузов / Е.Т. Денисов, О.М. Саркисов, Г.И. Лихтенштейн. -М.: Химия, 2000. 568 с.

30. Дунаева А.Н. Определение жирно-кислотного состава спектра фракций липидов крови // Лаб. дело. 1983. - № 10. - С. 57-59.

31. Едимечева И.П. Взаимодействие пространственно-экранированных фенолов и хинонов с органическими радикалами / И.П. Едимечева, Н.И. Островская, Г.И. Полозов, О.И. Шадыро // Журн. общ. химии. 2005. - Т. 75, № 4. -С. 632-635.

32. Журавлев А.И. Спонтанная биохемилюминесценция животных тканей // Биохемилюминесценция. Т. 58. -М.: Наука, 1983. С. 2-29.

33. Захаров И.В. Механизм каталитического аутоокисления этилбензола и тетралина в присутствии солей кобальта и брома // Кинетика и катализ. 1974. -Т. 15, №6.-С. 1457.

34. Касаикина О.Т. Ингибирующая активность природных фенольных ан-тиоксидантов в процессах окисления липидных субстратов / О.Т. Касаикина,

35. B.Д. Кортенска, Э.М. Маринова, И.Ф. Русина, Н.В. Янишлиева // Известия РАН. Сер. хим. 1997. -№ 6. - С. 1119-1122.

36. Кеда Б.И. Определение содержания высших жирных кислот в сыворотке крови людей методом газовой хроматографии / Б.И. Кеда, А.Е. Хомяков // Лаб. дело. 1975. - № 2. - С. 87-90.

37. Кимура Т. Мицеллярный катализ и его применение в органической химии // Хёмен. 1976. - Т. 14, № 89. - С. 449-463.

38. Костова Н.З. Влияние растворения углеводородов на мицеллообразование в водных растворах мыл при различных температурах / Н.З. Костова, З.Н. Маркина, П.А. Ребиндер, А.Е. Кузьмина // Коллоид, журн. 1971. - Т. 33, № 1. - С. 75-85.

39. Крепе Е.М. Липиды клеточных мембран. Л.: Наука, 1981. - 339 с.

40. Критчфилд Ф. Анализ основных функциональных групп в органических соединениях. М: Химия, 1965. - 207 с.

41. Кудрин А.Н. Свободнорадикальное перикисное окисление липидов -триггерный молекулярный механизм инфаркта миокарда и ингибирование его селеном, а-токоферолом и их комбинацией / А.Н. Кудрин, А.Х. Коган,

42. C.М. Николаев // Человек и лекарство: 3-й Рос. нац. конгр. Москва, 16-20 апр. 1996 г.-М., 1996.-С. 30.

43. Мартинек К. Кинетическая теория и механизмы мицеллярных эффектов в химических реакциях / К. Мартинек, А.К. Яцимирский, А.В. Левашов, И.В. Березин // Мицеллообразование, солюбилизация и микроэмульсии. М.: Мир, 1980. - С. 224-246.

44. Миргородская А.Б. Влияние мицеллярных растворов ПАВ на реакционную способность длинноцепочных аминов / А.Б. Миргородская, Л.А. Кудрявцева, Ю.Ф. Зуев, Н.Н. Вылегжанина // Журн. физ. химии. 2002. - Т. 76, № 11. - С. 2002.

45. Мукерджи ПЛ. Широкий мир мицелл / ПЛ. Мукерджи, КЛ. Миттел // Мицеллообразование, солюбилизация и микроэмульсии. -М.: Мир, 1980. С. 131.

46. Некипелова Т.Д. Влияние природы ПАВ на положение молекул 6-R-2, 2, 4-триметил-1, 2 дигидрохинонов в мицеллах // Известия РАН. Сер. хим. -1994,-№5.-С. 948-951.

47. Опейда И.А. Окисление алкиларенов в присутствии н-бутилпиридиний бромида / И.А. Опейда, Н.М. Залевская // Нефтехимия. -1989. Т. 19, № 2. - С. 244.

48. Паничева Л.П. Кинетические аспекты окисления алкилароматических углеводородов в эмульсиях / Л.П. Паничева, С.А. Паничев, Е.А. Турнаева, В.А. Тур-наев, А.Я. Юффа // Кинетика и катализ. 1996. - Т. 37, № 3. - С. 402-407.

49. Реутов О.А. Органическая химия: Учеб. пособие для вузов: В 2 ч. / О.А. Реутов, А.Л. Курц, К.П. Бутин. М.: Изд-во МГУ, 1999. - Ч. 1. - 560 с.

50. Рогинский В.А. Исследование ингибиторов перекисного окисления липидов акцепторов алкильных радикалов // Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vitro и in vivo. - М., 1992. - С. 48-53.

51. Рогинский В.А. Кинетика аутоокисления эфиров полиненасыщенных жирных кислот / В.А. Рогинский, И.В. Уткин // Кинетика и катализ. 1991. -Т. 32, вып. 4.-С. 814-819.

52. Рогинский В.А. Фенольные антиоксиданты. М.: Наука, 1988. - 247 с.

53. Русанов А.И. Мицеллообразование в растворах поверхностно-активных веществ. Л.: Химия, 1992. - 280 с.

54. Русанов А.И. Термодинамика мицеллярных растворов // Успехи коллоид. химии и физ.-хим. механики. 1992. - С. 54-60.

55. Рыхленко А.А. Электронномикроскопическое исследование мицелляр-ных растворов ПАВ в воде и октане / А.А. Рыхленко, Т.С. Трушкина, А.А. Аб-рамзон, А.К. Сироткин // Коллоид, журн. 1987. - Т. 49, № 1. - С. 192-196.

56. Сводный прайс-лист: Лекарственные средства // Фарминдекс. 2002. -№35.-С. 74-203.

57. Семенов Н.Н. Цепные реакции. М.: Наука, 1986. - 535 с.

58. Сирота Т.В. Влияние поверхностно-активных веществ на окисление парафиновых углеводородов / Т.В. Сирота, О.Т. Касаикина // Нефтехимия. -1994.-Т. 34, №5.-С. 467-472.

59. Скурихин И.М. Химический состав пищевых продуктов / Под ред. И.М Скурихина, В.А. Шатерникава. М.: Легкая и пищ. пром., 1984. - 327 с.

60. Современные направления исследований цепных жидкофазных реакций окисления // Проблемы кинетики элементарных химических реакций: Сб. ст. / Сост. Н.М. Эмануэль. М.: Наука, 1973. - С. 1-58.

61. Старке Ч.М. Межфазный катализ. Химия, катализаторы и применение. -М.: Мир, 1991.- 158 с.

62. Сторожок Н.М. Взаимосвязь между ингибирующими свойствами и активностью феноксильных радикалов антиоксидантов различного химического строения / Н.М. Сторожок, Н.В. Гуреева, А.П. Крысин, В.Е. Борисенко,

63. И.Ф. Русина, Н.Г. Храпова, Е.Б. Бурлакова // Кинетика и катализ. 2004. -Т. 45, №4.-С. 519-527.

64. Уайт А. Основы биохимии: В 3 т. / А. Уайт, Ф. Хендлер, Э. Смит, Р. Хилл. -М.: Мир, 1981.-Т. 3.- 1878 с.

65. Ушкалова В.Н. Кинетика окисления липидов. Аутоокисление // Кинетика и катализ. 1984. - Т. 25, № 2. - С. 283-286.

66. Ушкалова В.Н. Кинетика окисления липидов. Инициированное окисление // Кинетика и катализ. 1983. - Т. 24, № 6. - С. 1311-1315.

67. Ушкалова В.Н. Кинетика реакций, перспективных для тестирования гомолитических свойств липидов // Бюлл. эксперим. биолог, и мед. 1984. -Т. 48, №9.-С. 384.

68. Ушкалова В.Н. Контроль перекисного окисления липидов / В.Н. Ушкалова, Н.В. Ионидис, Г.Д. Кадочникова, З.М. Деева. Новосибирск: Изд-во НГУ, 1993. - 181 с.

69. Ушкалова В.Н. Методы тестирования окислительной стабильности, антиоксидантной активности липидов // Вопр. питания. 1986. -№ 1. - С. 9-15.

70. Ушкалова В.Н. Окислительная деструкция жирно-кислотных компонентов в пищевых липидах // Вопр. питания. 1986. - № 4. - С. 7-13.

71. Ушкалова В.Н. Окислительная стабильность липидов муксуна / В.Н. Ушкалова, Н.В. Ионидис // Вопр. питания. 1985. - № 1. - С. 57-61.

72. Ушкалова В.Н. Содержание, антиоксидантная активность и стабильность токоферолов в пищевых липидах // Вопр. питания. 1986. - № 3. - С. 10-17.

73. Ушкалова В.Н. Стабильность липидов пищевых продуктов. М.: Агро-промиздат, 1988. - 153 с.

74. Фендлер Е. Мицеллярный катализ в органических реакциях: кинетика и механизм / Е. Фендлер, Дж. Фендлер // Методы и достижения в физико-органической химии. М.: Мир, 1973. - С. 222-361.

75. Харитонова А.А. Кинетический анализ свойств антиоксидантов в сложных композициях с помощью модельной цепной реакции / А.А. Харитонова, З.К. Козлова, Б.Ф. Цепалов, Г.П. Гладышев // Кинетика и катализ. 1979. — Т. 20, №3,-С. 593-599.

76. Хомяков А.Е. Содержание высших жирных кислот и общих липидов в сыворотке крови больных острым панкреатитом / А.Е. Хомяков, Б.И. Кеда // Клинич. медицина. 1974. - Т. 52, № 11. - С. 70-78.

77. Цепалов Г.П. Тестирование химических соединений как стабилизаторов полимерных материалов / Г.П. Цепалов, В.Ф. Гладышев // Успехи химии. -1975. Т. 44, № 10. - С. 1830-1850.

78. Чернова З.К. Мицеллярная экстракция как способ управления аналитическими реакциями / З.К. Чернова, С.Ю. Доронин, JI.M. Козлова, А.Н. Панкратов, О.И. Железко // Журн. аналитич. химии. 2003. - Т. 58, № 7. - С. 714-715.

79. Шибаева JI.B. Кинетика жидкофазного окисления кумола, катализируемого ацетатом кобальта в обращенных мицеллах / JI.B. Шибаева, Н.Г. Арико, Н.И. Мицкевич // Известия АН БССР. Сер. хим. 1984. - № 4. - С. 22-26.

80. Шибаева JI.B. Окисление кумола, катализируемое ацетатом кобальта в мицеллярных системах / JI.B. Шибаева, Н.Г. Арико, Н.И. Мицкевич // Известия АН БССР. Сер. хим. 1985. - № 3. - С. 18-20.

81. Штыков С.Н. Поверхностно-активные вещества в анализе. Основные достижения и тенденции развития // Журн. аналитич. химии. 2000. - Т. 55, № 7. - С. 679-686.

82. Эмануэль Н.М. Кинетика и механизм реакций жидкофазного окисления углеводородов // Известия АН СССР. Сер. хим. 1974. - № 5. - С. 1056-1072.

83. Эмануэль Н.М. Курс химической кинетики / Н.М. Эмануэль, Д.Г. Кнорре. М.: Высш. школа, 1984. - 400 с.

84. Эмануэль Н.М. Механизм каталитического действия комплексов меди о-фенантролином в реакциях аутоокисления / Н.М. Эмануэль, A.M. Сахаров, И.П. Скибида // Известия АН СССР. Сер. хим. 1975. - № 12. - С. 2692-2699.

85. Эмануэль Н.М. Химическая и биологическая кинетика // Успехи химии. -1981. Т. 50, №10. - С 1721-1809.

86. Янишлиева Н. О скорости и механизме зарождения цепей при окислении метиловых эфиров олеиновой, линолевой и линоленовой кислот / Н. Янишлиева, И. Скибида, 3. Майзус // Известия АН Болгарии. Сер. «Химия». 1971. -Т. 4.-С. 1-4.

87. Angelo A.J. Identification of lipoxygenase-linoleate decomposition products by direct gas chromatography-mass-spectrometry / A.J. Angelo, N.G. Legendre, H.P. Dupuy // Lipids. 1980. - V. 15, № 1. - p. 45-49.

88. Bading H.T. Aroma compounds from butter with Gold-Storage oxidation deters and from autooxidized fatty acids // Neth. Nilk. Dairj. J. 1970. - V. 24. - P. 61-63.

89. Barthel G. Peroxide value determination-comparison of some methods / G. Barthel, W. Grosch//J. Amer. Oil. Chem. Soc. 1974. - V. 51, № 12. - P. 540-544.

90. Bondet V. Behavior of phenolic antioxidants in a partitioned medium: Focus on linoleic acid peroxidation induced by iron/ascorbic acid system JAOCS // J. Amer. Oil Chem. Soc. 2000. - V. 77, № 8. - P. 813-818.

91. Bukharkina T.V. Kinetic model of ethyl benzene oxidation catalysed by manganese salts / T.V. Bukharkina, O.S. Grechishkina, N.G. Digurov, N.V. Krukov-skaya / Org. Proce. Res. and Dev. 2003. - V. 7, № 2. - C. 148-154.

92. Bimton С. A. Micellar Catalysis and Ingibition. Sources of Rate Enhace-ments in Functional and Nonfunctional Micelles // Pure and Appl. Chem. 1977. -V. 13, №5. -P. 519-540.

93. Burton G.W. Autoxidation of biological molecules. I. The Antioxidant activity of vitamin E and related chainbreaning phenolic antioxidantsin vitro / G.W. Burton, K.U. Ungold // J. Amer. Chem. Soc. 1987. - V. 103, № 21. - P. 6472-6477.

94. Cook B.N. Chemical Approaches to the Investigation of Cellular Systems / B.N. Cook, C.R. Bertozzi // Bioorganic and Medicinal Chemistry. 2002. - № 10. -P. 829-840.

95. Cui Jian Huaxue xuebao / Jian Cui, Zhao-Long Li, Xiao-Yin Hong // Acta chim. sin. 2004. - V. 62, № 12. - P. 1095-1100.

96. Decker E.A. Transition metal and hydroperoxide interactions INFORM // Int. News Fats, Oils and Relat. Mater. 2001. - V 12, № 3. - P. 251-256.

97. Faas F.H. Red blood cell and plasma fatty acid composition in diabetes mellitus / F.H. Faas, F.Q. Dang, K. Kemp et al. // Metabolism. 1988. - V. 37, № 8. -P. 711-713.

98. Fatemi S.H. Analysis of Oleate, Linoleate and Linolenate hydroperoxides on Oxidized Ester Mixtures / S.H. Fatemi, E.G. Hammond // Lipids. 1980. - V. 15. №5.-P. 379-385.

99. Fujio K. Size of Micelles of 1-Dodecylhyridinium Cloride in Agueous NaCl Solutions / K. Fujio, S. Ikerda // Bull. Chem. Soc. Jap. 1992. - V. 65, № 5. -P. 1406-1410.

100. Gorelik S. Oxymyoglobin oxidation and membrane lipid peroxidation imitated by iron redox cycle: prevention of oxidation by enzymic and nonenzymic antioxidants / S. Gorelik, J. Kanner // J. Arg. and Food Chem. 2001. - V. 49, № 12. - P 5945-5950.

101. Greene B.E. Relationship between ТВ A nubbers and inexperianced panelists assessments of oxidizen flavorin cooked beef / B.E. Greene, T.N. Cumuze // J. Food Sci. 1982. - V. 47, № 1. - P. 52-54.

102. Henderson S.K. The Autoxidation of linoleates at elevated temperatures / S.K. Henderson, A. Witchwoot, W.W. Nawar // J. Amer. Oil. Chem. Soc. 1980. -V. 57, № 12.-P. 409-413.

103. Hyde S. On The Variation of Microstructure within Surfactant Solutions // Progr. Colloids and Polym. Sci. 1990. -№ 82. - P. 236-242.

104. Kaibara K. Dispersion behavior of oleic acid in agueousmedia: Frommi-celles to emulsions // Colloid and Polum. Sci. 1997. - № 8. - P. 777-783.

105. Keceli T. Ferric ions reduce the antioxidant activity of the phenolic fraction of virdgin olive oil / T. Keceli, M.H. Gordon // J. Food Sci. 2002. - V. 67, № 3. - P. 943-947.

106. Komajda M. Cardiac insufficiency: what treatment, what dose, for which patients, converting enzyme inhibitors and diuretics // Arch Mai Coeur Vaiss. 2000. -№2.-P. 6-13.

107. Li C.T. Evaluation of lipid oxidation in aminal fat / C.T. Li, M. Wick, N.G. Marriott // Spec. Circ. Ohio State Univ. // Ohio Agr. Res. and Dev. Cent. 1999.-№ 172.-P. 38-43.

108. Lomanno S.S. Effect of heating temperature and time on volatile oxidative decomposition of linolenate / S.S. Lomanno, W.W. Nawar // J. Food Sci. 1982. -V. 47, №3,-P. 744-746.

109. Muller N. Temperature Dependence of Critical Mcelle Concentrations and Heat Capacities of Micellization for Ionic Snrffactants // Langmuir. 1993. - V. 9, №7.-P. 96-100.

110. Neff W.E. Quantitative analyses of hidroxystearate isomers from hydroperoxides by high pressure liguid Chromatography of autoxidized and photosensitized oxidized fatty esters / W.E. Neff, E.N. Frankel // Lipids. -1980. V. 15, № 8. - P. 587-590.

111. Pileni M.P. Reverse Miceiie as Microreactors // J. Phys. Chem. 1993. -V. 97, №27.-P. 6961-6973.

112. Sanjeev K., Effekt of Solubilized Amines on the Structural Trnsition of Cetyl-trim ethylammonium Bromide / K. Sanjeev, K. Kirti // J. Amer. Oil Chem. Soc. -1994. V. 71, № 7. - P. 763-766.

113. Trevino S.F. Structure of triglyceride microemulsion: a smallangle neutron scattering study / S.F. Trevino, R. Joubran, N. Parris, N.F. Berk // J. Phys. Chem.1998. V. 102, № 6. - P. 953-960.

114. Umbreit W. Manometric Techniges / W. Umbreit, R. Burris, G. Staufter. -Burges Publ. Co. Minneapolis Minn., 1964. P. 24-36.

115. Wheatley R. Some recent trends in the analytical chemistry of lipid peroxidation. Trac. // Trends Anal. Chem. Ref. Ed. 2000. - № 19. p. 617-628.

116. Williams C.L. Mass transfer of a solubilizate in a micellar solution and across an interface / C.L. Williams, A.R. Bhakta, P. Neorgi // J. Phys. Chem. B.1999. V. 103, № 16. - P. 3242-3249.

117. Yanishlieva N. Natural antioxidants in lipid oxidation / N. Yanishlieva, E. Marinova // Bulg. Chem. Commun. 2003. - V. 35, № 2. - P. 79-91.

118. Yoshikiyo M.R. Size Distribution of Anionic Surfactant Micelles // Phys. Chem. 1985. - V. 89, № 13. - P. 2923-2928.

119. Zachariasse К.A. Intramolecular Excimier Formation with Diarylalkane-sasa Microfluidity Prode for Sodium Dodecyl Sulphate Micelles // Chem. Phys. Letters. 1978. - V. 57, № 3. - P. 429-432.

120. Zhao J. NMR Study of the Transformation of Sodium Dodecyl Sulphate Micelles / J. Zhao, B.M. Fung // Langmuir. 1993. - V. 9, № 5. - P. 1228-1231.

121. Содержание липидов в различных фракциях гомогената печени крыс,%

122. Локализация Содержание, --- Ядро Митохондрии Микросомы Супернатантобщих липидов к сухой массе клеток 15-20 30-40 25-35 20-30к общему содержанию в клетке 9 50 35 6в том числе нейтральных липидов: 3 1 0 68- фосфолипидов 93 93 94 28- холестерина 5 6 6 4

123. Фосфолипидный состав мембран клеток печени крыс, %

124. Тип мембран ФХ ФЭА кл ФИ ФС СМ Другие

125. Ядерная 57,0 26,0 0 3,9 5,5 6,3 1,3

126. Митохондриальные: 41,0 35,0 8,0 7,0 0 2,4 6,6- внутренние 38,0 38,0 10,0 2,0 0 0,8 11,2- внешние 45,0 30,0 0 8,0 0 4,4 12,6

127. Ретикулярные: 59,0 24,0 0 9,0 0 4,2 3,8- гладкого ЭР 55,0 22,0 0 7,0 0 12,3 3,7- шероховатого ЭР 60,0 23,0 0 9,0 0 3,9 4Д

128. Плазматическая 43,0 20,0 0 7,0 4,0 23,0 3,0

129. Лизосомальные 42,0 21,0 0 6,0 0 16,0 15,0

130. Аппарата Гольджи 45,0 17,0 0 9,0 4,2 12,0 12,8

131. Содержание фосфолипидов в субклеточных фракциях мозга белых крыс,от суммы фосфолипидов

132. Фракции фосфолипидов Гомогенат Ядра Митохондрии Микросомы Миелин1. ФИ 2,0 3,6 2,4 2,2 1,81. СМ 4,2 9,7 3,9 7,2 7,9

133. ФХ 37,4 35,8 36,9 40,4 30,4

134. ФС 14,0 13,8 11,0 14,4 14,1

135. ФЭА 39,9 35,7 37,3 35,5 36,6кл 1,5 0 7,8 0 1,51. ФК 1,0 1,4 0,7 0,3 1,1

136. Физиологические значения содержания фракций липидов в сыворотке, плазме и цельной крови человека, мг/дм3

137. Жирно-кислотный состав липидов фракций крови доноров

138. Кислота Соде ржание кислоты, %

139. Сыворотка крови Плазма крови Эритроциты1. До Си 0,2-3,0 0,1 1,31. Cl4:0 0,7-1,7 и 4Д1. Cl4:l 0,2-0,6 0,1 0,31. Cl4:2 0,4 0 01. Cl5-.0 0,3-0,8 0,5 1,21. Cl5:l 0,2-0,5 0,2 0,91. Cl5:2 0,5 0 ^ 0

140. С 16:0 21,0-27,0 21,2-21,3 19,9-32,41. Cl6:l 2,8-6,0 1,0-2,7 2,51. Cl6:2 1,1-1,2 0 01. Cl7:0 0,3-1,1 0,9 1,01. С 17:1 0,5-1,1 0,5 0,91. Cl7:2 0,3-0,6 0 0

141. Cl8:0 6,4-9,9 8,5-19,4 15,6-16,9

142. Cl8:l 20,3-25,8 17,0-25,4 17,5-18,6

143. Cl8:2 21,0-34,3 27,9-31,5 11,9-12,21. Cl8:3 1,2-1,5 0,9 0,81. C20:0 0,7-1,0 0 01. Сг0:1 0,9-1,0 0 01. Сг0:2 0,7-0,8 0 0

144. C20:3 0,7-1,0 1,8-2,1 1,2-1,8

145. Жирно-кислотный состав липидов печени человека, %

146. Состав жирных кислот Фракции липидов

147. Фосфолипиды Триглицериды Эфиры холестерина

148. До С14 3,3±0,3 1,3±0,2 1,8±0,3

149. Cl4;0 5,2±0,8 3,0±0,9 4,3±0,9

150. Cl5:0 3,2±0,8 1,6±0,5 4,5±0,8

151. Cl5:l 0,5±0,1 0,5±0Д 0,9±0Д

152. Cl6:0 21,4±3,6 30Д±1,7 25,2±2,6

153. Cl6:l 4,3±1,2 5Д±0,8 5,3±0,7

154. Cl7:0 0,8±0Д 1,0±0Д 3,4±0,6

155. Cl7:l 2,4±1,0 1,0±0Д 2,4±1,0

156. Clg:0 18,5±4,8 14,0±1Д 10,8±2,2

157. Ci8;l 20,7±2,2 33,4±3,6 24,4±4,8

158. Cl8:2 13,5±2,8 8,5±1,2 14Д±3,0

159. Cl8:3 6,2±0,5 0,5±0,2 2,9±0,31. Итого: насыщенные 47,0±1,0 51,0±0,4 50,0±0,6мононенасыщенные 27,9±0,7 40,0±0,9 33,0±1,3полиненасыщенные 19,7±1,4 9,0±0,6 17,0±1,3

160. Состав основных жирно-кислотных компонентов фосфатидилхолинов и фосфатидилэтаноламинов субклеточных фракций печени крыс, %

161. Субклеточная фракция Состав жирных кислот, %16:0 18:0 18:1 18:2 20:4 22:6 Другие1. Фосфатидилхолины

162. Митохондрии 27,0 21,6 13,0 12,4 17,7 2,9 5,6

163. Микросомы 24,5 21,0 12,3 17,7 15,8 0,7 5,3

164. Аппарат Гольджи 34,7 22,5 8,7 18,1 14,5 0 0,9

165. Плазматическая мембрана 36,9 31,2 6,4 12,9 ПД 0 0,91. Фосфатидилэтаноламины

166. Митохондрии 26,6 27,3 12,0 5,4 22,0 3,2 3,5

167. Микросомы 22,6 23,4 9,8 10,3 23,1 7,2 2,3

168. Аппарат Гольджи 33,5 31,8 5,1 10,0 18,3 0 1,1

169. Плазматическая мембрана 25,5 33,2 10,4 8,7 17,4 0 2 Л

170. Состав основных жирно-кислотных компонентов сфингомиелинов субклеточных фракций печени крыс, %

171. Субклеточная фракция Состав жирных кислот, %16:0 18:0 18:1 18:2 22:0 24:0 24:1митохондрии 26,0 7,2 12,5 13,9 0 29,3 0аппарат Гольджи 24,8 10,0 1Д следы 13,6 35,5 0плазматическая мембрана 24,3 11,6 следы следы 7,3 37,9 0

172. Графический способ расчета

173. Схема расчета периода индукции

174. Формула Название Внешний вид, р, г/мл М, г/моль Г С t" С Растворимость

175. C17H33COOC2H5 этилолеат (ЭО), 9- этилоктадеценоат маслянистая жидкость. 0,867 310,6 184-185 бензол, хлороформ, этанол, эфир

176. С17Н31СООСН3 метиллинолеат (MJI), 9, 12 -метилокгадекадиеноат желтая маслянистая жидкость 0,889 294,2 211-212 бензол, хлороформ, этанол, эфир

177. О" фенол, карболовая кислота, гидроксибензол бесцветные тонкие длинные игольчатые кристаллы со своеобразным запахом, розовеет на воздухе, 1,054 (45°С) 94 42,3 181 растворимость в воде (1 : 20), легко растворим в спирте, эфире, жирных маслах

178. СНз ОН СНз 1 Т 1 3 сн3|| Л СНз СН3 ионол, 2, 6- дитрет. бутил-4-метилфенол белый или со слегка желтоватым оттенком кристаллический порошок 220,19 65-68,5 легко растворим в спирте, бензоле, хлороформе, эфире, не растворим в воде

179. ОН'? оьц 1 1 3 NC—с—N=N— С—CN 1 1 СН3 СНз 2, 2'-азобисизобутиро-нитрил (АИБН) белое кристаллическое вещество 164,2 103-104 растворим в этиловом спирте, ацетоне, практически не растворим в воде1. U)

180. Ос<" N Н сн сн2 СНз SH капотен, 1-(28)-3-метил-пропионил.-Ь- пролин кристаллические иглы 205 ^ разя 220-222 растворим в воде, ограниченно растворим в спирте и бензоле, не растворим в эфире

181. Тестирование антиоксидантной активности водо- и липидрастворимых компонентов биоматериала1. Методика анализа

182. Для анализа используют гомогенаты растительных или животных биоматериалов с целью изучения антиоксидантной активности суммы водорастворимых и водонерастворимых компонентов.

183. В аналогичных условиях определяют поглощение кислорода в контрольной пробе (без добавок гептанового экстракта).1. Методика анализа

184. В аналогичных условиях определяют поглощение кислорода во времени в контрольной пробе (без добавок водорастворимого экстракта.

185. Рис. М.1. Расчет кинетических параметров: 1 контроль, 2 - исследуемый липидрастворимый (водорастворимый) компонент биоматериала