Кинетическое и динамическое кинетическое расщепление рацемических аминов производными хиральных кислот тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

На правах рукописи

СОЛИЕВА Наталья Зоировна

КИНЕТИЧЕСКОЕ И ДИНАМИЧЕСКОЕ КИНЕТИЧЕСКОЕ РАСЩЕПЛЕНИЕ РАЦЕМИЧЕСКИХ АМИНОВ ПРОИЗВОДНЫМИ

ХИРАЛЬНЫХ КИСЛОТ

02 00 03 - Органическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Екатеринбург 2008

003447859

Работа выполнена в лаборатории асимметрического синтеза Института органического синтеза им И Я Постовского Уральского отделения Российской академии наук (г Екатеринбург)

Научный руководитель профессор, доктор химических наук

Краснов Виктор Павлович

Научный консультант

старшии научный сотрудник, кандидат химических наук Жданова Елизавета Александровна

Официальные оппоненты

профессор, доктор химических наук Шкляев Юрий Владимирович,

Институт технической химии, Пермь

профессор, доктор химических наук Сосновских Вячеслав Яковлевич, УрГУ, Екатеринбург

Ведущая организация

Институт химии Коми НЦ УрО РАН

Защита состоится «20» октября 2008 г в 15 00 на заседании диссертационного совета Д 212 285 08 в ГОУ ВПО «Уральский государственный технический университет им Первого Президента России Б Н Ельцина, по адресу ул Мира 28, третий учебный корпус УГТУ-УПИ, аудитория Х-420

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уральского государственного технического университета им Первого Президента России Б Н Ельцина

Ваш отзыв в одном экземпляре, заверенный гербовой печатью, просим направлять по адресу 620002, Екатеринбург, К-2, Уральский государственный технический университет Ученому секретарю совета Университета факс (343)375-41-35, e-mail orgchem@mail ustu ru Автореферат разослан «2D » сентября 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат химических наук ^'(Т А Поспелова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы Получение энантиомеров соединений различных классов является одной из важнейших и стремительно развивающихся областей органической химии Среди разнообразных методов синтеза стереоизомеров органических соединений особое место занимают методы разделения

В последнее десятилетие получили существенное развитие методы оптического кинетического разделения (КР) рацематов Метод КР основан на разности скоростей превращения индивидуальных стереоизомеров рацемата в реакциях с хиральным реагентом и/или катализатор ом Процессы КР могут входить в качестве составной части в более сложные процессы, например процессы динамического кинетического разделения (ДКР) Метод ДКР, позволяющий, по крайней мере, в принципе превратить смесь энантиомеров в оптически чистый продукт реакции привлекает в настоящее время самое пристальное внимание исследователей

Возможности методов КР активно изучаются Наиболее сложной проблемой его применения является невозможность предсказать заранее, насколько эффективным будет применение конкретного расщепляющего агента Поэтому исследование реакций КР и ДКР, позволяющих выявить факторы, определяющие стереохимический результат процесса, являются весьма актуальными

В последнее время в лаборатории асимметрического синтеза ИОС им И Я Постовского УрО РАН проводятся исследования, направленные на изучение закономерностей процессов КР под действием ацилирующих агентов Показано, что сравнительно простые по строению производные хиральных кислот (арилпропионовых кислот, аминокислот) могут служить эффективными реагентами для КР гетероциклических аминов

В настоящей работе изучены процессы ДКР, протекающие при синтезе пептидов методом смешанных ангидридов и возможность использования метода КР для разделения рацематов ряда хиральных аминов В качестве производных хиральных кислот были изучены оксазолоны N-ациламинокислот и хлорангидриды напроксена и И-тозил-^-пролина

Целью работы являлось изучение процессов КР и ДКР рацематов хиральных аминопроизводных под действием ацилирующих асимметрических реагентов, производных хиральных кислот, в первую очередь, аминокислот, определение влияния различных факторов на стереохимический результат реакции и разработка новых методов синтеза и анализа ряда практически важных продуктов

Настоящая работа выполнена как часть плановых научно-исследовательских работ, проводимых в Институте органического синтеза УрО РАН по теме «Разработка методов стереоселективного синтеза соединений различных классов с использованием оптически активных аминокислот и их производных» (Гос per № 01 2 00 1 05150), а также в рамках проекта РФФИ (грант № 00-03-32776 «Изучение механизмов и закономерностей процесса кинетического разделения стереоизомеров в ряду гидрированных производных бензоксазиЬа

и хинолина»), гранта «Поддержка ведущих научных школ» НШ 1766 2003 3 и Государственного контракта № 02 522 11 2003 «Разработка технологий получения и выпуск опытных партий синтетических препаратов, обладающих избирательным действием на генетический аппарат, с целью лечения заболеваний вирусной и опухолевой природы»

Научная новизна. Найдены условия взаимодействия 2-метил-4-фепилоксазол-5(4Н)-она с производными аминов, обеспечивающие быструю рацемизацию исходного соединения и позволяющие эффективно проводить процессы ДКР Впервые проведено сравнительное изучение ДКР в реакциях оксазолонов, полученных из Ы-ацетил-, М-трифторацетил- и ЬГ-(адамантан-1-карбонил)фенилаланина с эфирами (¿^-аминокислот Показано, что на диастереоселективность в синтезе дипептидов И-ацилфенилаланина из соответствующего оксазолона наибольшее влияние оказывает строение боковой цепи аминокомпоненты Природа (объем) эфирной группы аминокомпоненты слабо влияет на стереохимический результат реакции Увеличение объема ацильной группы приводит к уменьшению диастереоселективности процесса

Впервые показано, что введение хиральной М-ацильной группы, фрагмента (5)-напроксена, в молекулу аминокислоты, позволяет непосредственно наблюдать образование и взаимное превращение стереоизомеров 5(4Н)-оксазолона в процессе синтеза дипептидов методом смешанных ангидридов, а также влияние основания на этот процесс

Впервые проведено сравнительное изучение КР рацемических аминов и этиловых эфиров рацемических аминокислот в зависимости от их строения с помощью хлорангидрида напроксена Показано, что, в отличие от производных бензоксазина и хинальдина, существенного КР указанных соединений не происходит Исключение представляет анабазин (¿е 46%) Разработан оригинальный метод определения оптической чистоты анабазина методом ЯМР с предварительной дериватизацией

Практическая значимость. Для противоопухолевого препарата лизомустин разработан метод определения энантиомерной чистоты на основе анализа на хиральной стационарной фазе методом ВЭЖХ метилового эфира Ы2,М6-дифталоил-(5)-лизина, полученного из (5)-лизина, образующегося в результате гидролитического разложения лизомустина

Найдены условия реакции, обеспечивающие избирательное образование диастереомерного рацемата этилового эфира К-ацетил фенил аланилвалина, промежуточного продукта в синтезе противоопухолевого препарата цифелин Найдены условия реакции, обеспечивающие избирательное образование и высокий выход (БЯ'-ЯУ) диастереомерного рацемата этилового эфира Ы-{Ы-ацетил-4-[ди-(2-хлорэтил)амино]-фенилаланил}-валина, полупродукта синтеза цифелииа, позволяющие существенно повысить эффективность его получения

Апробация работы. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи, 1 патент и сделаны доклады с опубликованием тезисов на 16 международных и российских

конференциях

Структура и объем работы Диссертационная работа состоит из 4 глав и выводов, изложенных на 170 стр, включает 7 рисунков и 17 таблиц, список литературы (159 наименований) В первой главе приведен аналитический обзор литературы об использовании оксазол-5(4Н)-онов в стереоселективном синтезе

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 2. Исследование ДКР оксазолонов в реакции с производными аминов

В соответствии с целью работы были исследованы закономерности процессов ДКР при взаимодействии оксазолонов, полученных из производных Ы-ацилфенилаланипа, с различными аминопроизводными эфирами аминокислот, жирноароматическими и гетероциклическими аминами

Производные фенилаланина были выбраны по двум причинам Во-первых, эти соединения поглощают в УФ области спектра, поэтому их содержание легко молено определить методом ВЭЖХ с УФ детектированием Во-вторых, производное фенилаланина, сарнолизин, входит в состав ряда цитотоксических пептидов, применяемых в клинической онкологии

Известно, что сшггез пептидов методом смешанных ангидридов по классической двустадийной методике, заключающейся в проведении активации кислотной компоненты алкилхлорформатом в присутствии третичного основания и дальнейшей ее конденсации с аминокочпонентой, сопровождается существенной рацемизацией М-Ациламинокислоты, активированные по карбоксильной группе, легко циюшзуются в производные 5(4Н)-оксазолонов, которые, взаимодействуя с эфирами аминокислот, дают смеси диастереомеров пептидов В случае, если рацемизация 5(4Н)-оксазолона протекает быстро, стереохимический результат реакции определяется относительными скоростями взаимодействия стереоизомеров 5(4Н)-оксазолона с аминокомпоиентой и образование дипептида представляет процесс ДКР

2.1. ¡Ч-Ацетилфенилаланин в процессах ДКР

На примере 5(4Н)-оксазолонов, полученных из М-ацилфенилаланина, изучены факторы, определяющие стереохимический результат их взаимодействия с эфирами аминокислот, различающихся строением боковой цепи и эфирной группы Для проведения сравнительных исследований, первоначально были отработаны условия реакций ДКР Показано, что наилучшие результаты обеспечивает проведение процесса в тетрагидрофуране (ТГФ) с использованием 20 % мольного избытка триэтиламина (ТЕА)

Изучение влияния на диастереоселективность реакции строения боковой цепи аминокошкшенты реакции между 1 и эфирами аминокислот 4-12 проводили при температуре -13"С с последующим повышением до 20°С Время па стадии активации составило 30 мин,

после чего к полученному раствору добавляли гидрохлорид эфира аминокислоты, нейтрализованный эквимолярным количеством TEA и выдерживали в течение суток Реакционные смеси фильтровали, упаривали досуха, растворяли в хлороформе, промывали растворами соды, соляной кислоты и воды, а затем сушили сульфатом натрия Такая обработка реакционной смеси позволяла удалить исходные вещества, не изменяя состав и соотношение диастереомеров продуктов реакции Анализ смесей диастереомеров проводили методами ВЭЖХ и ЯМР 'Н спектроскопии Соотношение диастереомеров продуктов считали определенным правильно, если оба метода давали близкие результаты Такой подход обусловлен тем, что в ходе конденсации могли образоваться примеси неустановленной природы, которые могли исказить результаты анализа, наложившись на хроматографические пики диастереомеров, или их сигналы в спектрах ЯМР

Ph^f ОН-—•■Ph^y^(J\)CH2-/Pr + [NH(C2H5)3]CI

Ac-NH ТГФ,Е13Ы Ac-NH 2

1 I О

Et=N R X

PhCHj» I О T/0R' О R

hH

N^O 4-12 ' H "

T Ac-NH M О

/PrCHjOH +COj + Me 13a-21a

II33 fl H » О RY^OR' О R

NY° 4"12 AC-L H 5

Me 13b-21b

3b

4,13 R = Me, R' = Me, 5,14 R = Bn, R' = Me, 6,15 R = /Pr, R' = Me, 7,16 R = Me, R' = Et, 8,17 R = Bn, R' = Et, 9,18 R = (CH2)2-COOEt, R' = Et, 10,19 R = /Pr, R' = Et, 11,20 R = /Pr, R' = fBu, 12,21 R = /Pr, R' = Bn

a (S,S)-flnacTepeoMep, b (Я?,8)-диастереомер

Для отнесения сигналов использовали индивидуальные (Х^-диастереомеры 13я-21а, полученные методом, исключающим рацемизацию В этом случае применяли метилморфолин (ЫММ) в качестве третичного основания, время на стадии активации составляло 2 мин, все загружаемые в реакцию компоненты брали в эквимолярном соотношении Следует отметить, что, несмотря на все предосторожности, предпринятые с целью уменьшить рацемизацию, дипептиды содержали от 2 до 9% (Л,5^-диастереомера Перекристаллизация из ацетона приводит к выделению индивидуального (^б)-диастереомера

Таблица 2 I

Влияние строения боковой цепи и природы эфирной группы аминокомпоненты на _диастереоселективность реакции_

№ соед Пептид Соотношение диастереомеров Выход, %

по данным ВЭЖХ, % по данным ЯМР 'H спектроскопии,%

S, S R,S s, s R.S

13а,b Ac-Phe-(S)-AlaOMe 41,6 58,4 44 56 56,3

14а,b Ac-Phe-(S>PheOMe 35,0 65,0 30 70 43,0

15а,b Ac-Phe-(£)-ValOMe 23,5 76,5 25 75 75,9

16a,b Ac-Phe-(5)-AlaOEt 39,1 60,9 40 60 89,0

17a,b Ac-Phe-(S)-PheOEt 31,3 68,7 34 66 66,3

18а,b Ac-Phe-(5)-Glu(OEt)2 31,0 69,0 сигналы перекрываются 70,4

19а,b Ac-Phe-(S)-ValOEt 25,1 74,9 26 74 73,3

20а,b Ac-Phe-(S)-ValO/Bu 27,0 73,0 29 71 57,0

21а,b Ac-Phe-(S)-ValOBn 30,0 70,0 31 69 66,0

Диастереоселективность процесса зависит от природы боковой цепи аминокомпоненты Во всех случаях были получены смеси диастереомеров с преобладанием (Л,5)-диастереомера 13Ь-19Ь соответствующего дипептида (табл 2 1) Наблюдается тенденция к увеличению количества (Л,£)-диастереомера с усложнением строения боковой цепи аминокомпоненты в ряду Ala < Phe < Glu < Val

Нами показано, что при проведении процесса при комнатной температуре в реакционной массе также преобладает (й.^-диастереомер дипептида {de от 31,2% (16а,Ь) до 58,4% (19а,Ь) по данным ВЭЖХ) и стереохимический результат практически не зависит от температуры Это позволило упростить процедуру пептидного синтеза, проводя его при комнатной температуре

При исследовании влияния природы эфирной группы анализ диастереомерного состава полученных смесей дипептидов 15, 19, 20, 21 проводили методами ВЭЖХ и ЯМР 'н спектроскопии, при этом диагностическими группами служили метальные группы валина (табл 2 1)

Из приведенных в табл 2 1 данных следует, что вне зависимости от строения эфирной группы в пептидах 15, 19, 20, 21 все полученные смеси обогащены (Л, 51) - ди астер е о м ер а м и (69-75%) Следует отметить также тенденцию к некоторому уменьшению диастереоселективности с ростом объема эфирной группы Таким образом, объем эфирной группы слабо влияет на стереохимический результат реакции, в отличие от влияния строения боковой цепи аминокислот По-видимому, стереодифференциация определяется взаимодействием наиболее близких к реакционным центрам групп, каковой в данном случае является боковая цепь аминокислоты

Отмечено, что характерным признаком принадлежности дипептидов к (S,S)- или (R,S)-ряду является величина Алв - разность химических сдвигов неэквивалентных протонов СН2-группы фенилаланина в спектрах ЯМР 'Н Для всех дипептидов N-ацетилфенилаланина имеет место соотношение Амлв » Assab Следует отметить, что в (Л,5)-дипептидах 15b, 19Ь -21Ь возрастает с увеличением объема эфирной группы R' в валине, тогда как в (S,S)-

SS

изомерах Д АВ практически равна нулю, за исключением случая R' = rBu

2 2 Изучение химизма реакции

Методом спектроскопии ЯМР 'Н и |3С нами получено прямое доказательство образования 5(4Н)-оксазолона в качестве промежуточного продукта в изученном процессе Для этого к раствору К-ацетил-(5)-фенилаланина и TEA в CDC13 при комнатной температуре добавляли эквимолярное количество этилхлорформата (ЭХФ) В спектре ЯМР помимо сигнала при 5 4,73 м д , относящегося к аСН протону исходного соединения 1, наблюдается сигнал С(4)Н оксазолона с химическим сдвигом 8 4,45 м д в виде дублета дублетов квартетов (^н, снв=6,7 Гц, Vc4H, она~4,7Гц, 5Jc*h сн3=2,0 Гц) Дублет метальной группы оксазолона регистрируется в области 2,09 м д с константой 2,0 Гц, тогда как в исходном соединении 1 этот сигнал проявляется в виде синглета при 1,96 мд Наличие дальнего спин-спинового взаимодействия через пять связей между протоном С(4)Н и протонами метальной группы при атоме С(2) доказано с помощью 2D эксперимента COSY-LR, оптимизированного для регистрации дальних протон-протонных КССВ Такое гомоаллильное взаимодействие является характерным признаком спектров ЯМР 'Н 5(4Н)-оксазолонов и ранее описано на примере 2,4-диметилоксазолона-5

В спектре ЯМР 13С оксазолона 3 сигнал углерода С(4) смещен в слабое поле 5 65,98 м д по сравнению с исходным соединением 1 (б^сн 54,31 м д), тогда как сигнал метальной группы сдвигается в сильное поле 5 13,96 м д (23,21 м д - в исходном) Отнесение сигналов протонированных атомов углерода подтверждено двумерным экспериментом HETCOR

Для количественной оценки относительной скорости образования и рацемизации оксазолона в процессе реакции в качестве модельного соединения был использован N-[(25)-2-(6-метоксинафтил-2)пропионил]-(25)-фенилаланин 22, который действием ЭХФ превращали в оксазолон 23 Реакцию между амидом 22, ЭХФ в присутствии TEA в растворе CDC13 проводили при комнатной температуре

(S,S)-23 (S,R)- 23

В результате реакции образовывались диастереомерные оксазолоны (5,5)-23 и {S,R)-23, которые возможно различить в ЯМР 'Н спектрах благодаря наличию двух асимметрических центров Характерными сигналами являются триплеты дублетов С(4)Н оксазолонового фрагмента 5 4,49 м д (VC4H, сн2 = 5,2 Гц, %4Н Сн шР = 1,0 Гц) и 5 4,51 м д (3JC4H сн2 = 5,2 Гц, 5Ус4ц, сн-Nap = 2,1 Гц) для (S,S)-23 и (5,/?)-23, соответственно (рис 2 1)

Рис 2 1 Фрагмент ЯМР 'Н (400 МГц) спектра соединения 23 в растворе CDCI3

При проведении реакции со стехиометрическим количеством TEA, суммарное содержание оксазолонов через 10 мин после смешения реагентов составило 40%, а соотношение (6',1У)-23 и (S,R)-23 83 17 Через 8 ч общее содержание оксазолонов увеличилось до 60%, а соотношение (^.^^З и (5,Л)-23 стало 60 40 Через 30 ч наблюдалась полная рацемизация При проведении реакции с 20% мольным избытком TEA, как скорость образования оксазолона, так и скорость его рацемизации существенно увеличились Уже через 10 мин после смешения реагентов суммарное содержание оксазолона 23 составило 98% При этом наблюдалась полная рацемизация Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что 2-замещенные 5(4Н)-оксазолоны образуются во время пептидного синтеза оптически чистыми, а затем рацемизуются в ходе реакции под действием основания

Введение хиральной N-ацильной группы, фрагмента (5)-напроксена, в молекулу аминокислоты позволило непосредственно наблюдать образование и взаимное превращение стереоизомеров 5(4Н)-оксазолона 23 в процессе синтеза дипептидов N-ацилфенилаланина методом смешанных ангидридов

2.3. Реакции ДКР N-трифторацетилфеннлаланина

В случае смешанных ангидридов трифторацетиламинокислот процесс рацемизации протекает через образование 2-трифторметилпсевдооксазолона-(5) 26 Нами изучены условия реакции ДКР при получении диастереомерных дипептидов N-трифторацетилфенилаланина температуры реакции, строения боковой цепи и защитной эфирной группы второй аминокислоты на стереохимический результат

. jf CICOOCHJPr . У jf ТА-Лн ТГФ, EtjN Tp._l

Ph T 0H Tr®EtN, Ph T 0 uCHj/Pr +[NH(C2H5)3]C|-TFA-NH ТГФ, Et3N TFA_NH

24 25 О R

О Ph-V^N^0^

Ph ph n RY^OR' TFA-NH H О Et,N -^ Йн,в-12/ 27a-33a

-PrCH2OH Ns^O X

•C02 CF3

26 TFA-NH H О

27b-33b

7,27 R = Me, R' = Et, 10,28 R = (Pr, R' = Et, 8,29 R = CH2Ph, R' = Et, 9,30 R = (CH2)2COOEt, R' = Et, 6,31 R = /Pr, R' = Me, 11,32 R = /Pr, R' = /Bu, 12,33 R = /Pr, R' = Bn a (S, S)-flnacTepeo.uep, b (/?,5)-диастереомер

Установлено, что в условиях проведения процесса, использованных для N-ацетилпроизводных, образуется значительное котичество этилового эфира Н-изобутилкарбомоил-(5)-валина, уретана, 34 и в реакционной смеси остается не вступивший в реакцию псевдооксазолон 26 В результате исследования влияния условий реакции (растворитель, время активации, избыток основания и тд) на процесс ДКР в синтезе пептидов N-трифторацетилфенилалашша было установлено, что наилучшие результаты обеспечивает использование температуры +40°С, времени на стадии активации 30 мин и 20%-ного избытка TEA. Специальным экспериментом показано, что в этих условиях отсутствует рацемизация аминокомпоненты

Обычно применяемый для анализа таких смесей метод ВЭЖХ оказался непригоден Поэтому анализ смесей диастереоизомеров проводили методами ГЖХ и ЯМР 'Н спектроскопии

Таблица 2 2

Диастереомерный состав дипептидов N-трифторацетилфенилаланина

№ соед Соотношение диастереомеров Выход, % Примечание (примесь побочного продукта, вес %)

по данным ГЖХ, % по данным ЯМР 'Н спектроскопии, %

S,S R,S S.S R,S

27а,b 66,9 33,1 69 31 77,6 -

28а,b - - 74 26 53,7 уретан 7,7, псевдооксазолон 12,8

29а,b 73,5 26,5 75 25 85,6 -

30а,b - - 66 34 65,9 -

31а,b 76,0 24,0 75 25 69,2 уретан 4,5, псевдооксазолон 1,5

32а, b 70,9 29,1 72 28 79,1 уретан 16,3

33а,b 62,4 37,6 63 37 83,5 уретан 5,5

Как видно из приведенных данных, во всех случаях образуется больше (5',5)-диастереомера дипептида Ы-трифторацетилфенилаланина Диастереоселективность реакции

незначительно зависит от природы боковой цепи (соединения 27а,Ь-30а,Ь) Наибольшее значение стереоселективности обнаружено в случае дипептида 29а,Ь, что, по-видимому, связано с влиянием ароматического кольца аминокомпоненты на устойчивость образующегося промежуточного комплекса

Влияние природы эфирной группы аминокомпоненты исследовано на примере эфиров валина, наиболее стерически затрудненной аминокислоты (соединения 28а,Ь, 31а,Ь-ЗЗа,Ь) Наибольшая диастереоселекгивиость наблюдается в случае использования в качестве защиты карбоксильной функции метильной группировки (соединение 31а,Ь) В целом, усложнение строения эфирной группы не приводит к существенному изменению диастереоселективности, за исключением бензилыюго производного

Таким образом, показано, что в случае синтеза дипептидов из рацемического Ы-трифюрацетилфенилаланина, в опичие от Ы-ацетилфенилаланина, преимущественно образуется (5,5}-диастереомер Такое различие в стереохимическом результате реакции связано с различной реакционной способности промежуточных оксазолонов 26 и 3 Таким образом, варьируя ЬГ-защитные группы фенилаланина, можно влиять на стереохимический результат ДКР при синтезе пептидов

2.4. Реакции ДКР 1Ч-(адаманта11-1-1сарбонил)фенилаланипа

Для исследования роли ЬГ-ацилыюй защитной группы в процессах ДКР нами проведены сравнительные исследования Ы-ацетильной и М-адамантан-1 -карбонильной групп Предполагалось, что последняя, в сил у своего объемного строения, может существенно повлиять на результат ДКР в синтезе дипептидов Кроме того, производные адамантана обладают разнообразной биологической активностью и такого рода пептиды могут представлять существенный интерес

Синтез исходного 1<[-(адамантан-1-карбонил)-(Л,^-фенилаланина 38 проводили путем ацилирования хлорангидридом адамантан-1-карбоновой кислоты 36 метиловою эфира (Л, 5)-фенилаланина с последующим омылением водно-ацетоновым раствором ЫаОН

Дипептиды 40a,b-43a,b синтезировали в растворе ТГФ в присутствии ЭХФ и 20% избытка TEA при комнатной температуре

О

О СН,РЬ О Я О В

^ I сюооа 14-^ мн7"10 А X + /-.XX

Adm-NH 3 Ас3т О ° Айт-ЫН н Ас1т-ЫН Н

38 39 40а-43а 40Ь-43Ь

И = 7,40 Ме, 8,41 СН2РЬ, 9,42 СН2СН2СООВ, 10,43 Рг а (5,5)-диастереомер, Ь (Я,5)-диастереомер

К образующемуся промежуточному оксазолону 39 добавляли растворы этиловых эфиров (5)-аминокислот, полученных нейтрализацией гидрохлоридов эфиров ТЕА Для отнесения сигналов в спектрах ЯМР 'Н и на ВЭЖХроматограммах использовали индивидуальные (5,5)-диастереомеры 40а - 43а, синтезированные в условиях, исключающих рацемизацию

Таблица 2 3

Диастереомерный состав и выходы дипептидов 40а,b - 43а,b

№ соед R Содержание диастереомеров Выход, % примечание

по данным ВЭЖХ, % по данным ЯМР 'Н спектроскопии, %

R,S 5,5 R,S S.S

40а,b Me 63,7 36,3 62 38 73,1 с 20% изб TEA

41а,b CH2-Ph 64,6 35,4 66 34 60,7 с 20% изб TEA

42а,b CH2CH2COOEt 66,6 33,4 64 36 63,9 с 20% изб TEA

43а,b ¡Рг 70,2 29,8 71 29 72,1 с 20% изб TEA

43а,b /Рг 67,2 32,8 68 32 81,1 без изб TEA

Как видно из данных табл 2 3, в синтезе соединений 40а,Ь - 43а,Ь образуются смеси, преимущественно содержащие (Я,5)-диастереомер дипептида Стереоселективность реакции зависит от строения боковой цепи аминокомпоненты, увеличивается в ряду А1а<РЬе=01и<Уа1 (¿е от 27,4 до 40,4% по данным ВЭЖХ), ко изменяется в меньшей степени, чем при реакциях Ы-ацетилфенилаланина с аминоэфирами 7-10 {(1е от 31,2 до 58,4%) По-видимому, объемная И-адамантан-1-карбонильная защитная группа создает пространственные затруднения для атаки аминокомпоненты с обеих сторон оксазолонового кольца, что приводит к уменьшению ¿е по сравнению с Ы-ацетильными производными

2 5 Теоретическое исследование ДКР (±)-2-метил-4-бензилоксазолона под действием

эфиров (5)-амииокислот

С целью выявления факторов, определяющих диастереоселективность процессов аминолиза энантиомеров 5(4Н)-оксазолонов проведено теоретическое исследование реакций 2-метил-4-бензилоксазолона с эфирами (5)-аминокислот с использованием комплекса квантово-химических методов В частности, проведено моделирование межмолекулярного взаимодействия энантиомеров 2-метил-4-бензилоксазолона на стадии преассоциации с

хиральным нуклеофилом'

Проведено моделирование геометрии комплексов «реагент-субстрат», выполненное методами молекулярной механики в комбинированных силовых полях ММЗ/Мега с вероятностным учетом возможности взаимодействия комплекса с его окружением в реакционной массе

Для структур комплексов, соответствующих глобальному минимуму полной энергии Etomi. произведен квантовохимический расчет энергетических и электронных характеристик ab initio методом Hartree-Fock 6-31 G (d,p) Специфика взаимодействий в системе «энантиомер оксазолона - нуклеофил» исследовалась посредством оценки экстремумов этектронной плотности р(г) (аг ед) в области межмолекулярного пространства пары взаимодействующих молекул Для этого проводился топологический анализ критических точек электронной плотности по алгоритму Бейдера в рамках программного пакета AIMPAC Найдены отличия геометрии комплексов энантиомеров За и ЗЬ с эфирами (S)-аминокислот Установлено, что диастереоселективность исследуемого процесса связана с усредненным значением электронной плотности в критических точках межмолекулярного пространства в комплексах с (5)-оксазолоном За с коэффициентом корреляции 0,92

Согласно расчетам, (5)-оксазолон За способен к межмолекулярным взаимодействиям с эфиром (5)-аминокислоты, при которых реакционные центры реагентов существенно удалены В отличие от него, (Л)-энантиомер ЗЬ образует Н-связи с участием реакционных центров, что увеличивает вероятность реакции ацилирования амина оксазолоном и, возможно, в некоторой степени определяет преимущественный выход (Л,5)-диастереомеров дипептидов Показано также, что оксазолон реагирует в конформации, в которой бензольное кольцо развернуто в сторону от оксазолонового

Вместе с тем, расчетные методы не дают полной картины взаимодействия стереоизомеров оксазолона с аминоэфирами Вероятно, это связано с малыми различиями в энергиях образования диастереомерных ассоциатов и требует дальнейшего изучения

2 б Исследование диастереоселективности взаимодействия первичных хиральных

аминов с оксазолоном

Нами было показано, что при проведении КР первичных хиральных аминов хлорангидридом напроксена, в отличие от производных хинолина и бензоксазина, разделения не наблюдается (Гл 3) Поэтому была исследована диастереоселективность процесса ацилирования (5>1-фенилэтиламина 44, (5)-1-(1-нафтил)этиламина 45, (25)-2-метил-1,2,3,4-тетрагидрохинолина 46 оксазолоном, образованным из Ac-(iR,iS)-Phe-OH

1 Эта часть работы выполнена к х н ЕВ Барташевич и А А Рыкуновым на кафедре органической химия Челябинского государственного университета

о

о 0 0 РМ2С о ^ Ас-Ж

Ас-Ж Ь Ас-ПН У 44-46 О

(Я5)-1 2 Ме РН^-^к

Ас-ЫН

й^Ч 47Ь - 49Ь

45,48, ЦЛ^ 46,49 а (ЗД-диастереомер II Ь (Я^-диастереомер

Ме

Реакцию с хиральными аминами проводили при комнатной температуре в ТГФ в присутствия 20% мольного избытка ТЕА Для отнесения сигналов в ЯМР *Н спектрах и пиков при ВЭЖХ-анализе использовали синтезированные индивидуальные (5'У)-диастереомеры Установлено, что, в отличие от пептидов М-ацетилфенилаланина, в которых преобладали (У?,5)-диастереомеры, полученные смеси диастереомеров амидов 47а,Ь и 48а,Ь содержали избыток (¿¡^-изомера (57,7% и 60,1%, соответственно) В случае получения амида 49а,Ь реакционная смесь содержит много побочных соединений и практически не содержит целевых диастереомеров 49а,Ь, что, вероятно, связано с большими пространственными трудностями, возникающими при взаимодействии амина 46 с оксазолоном 3

Диастереоселективность, хотя и небольшая по величине, наблюдаемая при взаимодействии оксазолона 3 с аминами 44 и 45 позволяет полагать, что продолжение этих исследований позволит найти новые агенты для разделения первичных хиральных аминов, например среди хирально стабильных стереоизомеров оксазолонов

Глава 3. Изучение КР рацемических аминов хлорангидридами (5)-(+)-напроксена и

1Ч-тозил-(5)-пролина

Ранее в лаборатории асимметрического синтеза ИОС им И Я Постовского УрО РАН предложен эффективный способ КР рацемических гетероциклических аминов (производных 2-метил-1,2,3,4-тетрагидрохинолина (й,5)-4б, 2,3-дигидро-3-метил-4Н-1,4-бензоксазина 50 и 2-метилиндолина 51), путем ацилирования хлорангидридом (5>(+)-напроксена 52.

Нами изучена возможность применения указанного подхода для КР рацемических аминов 53-56, которые можно рассматривать как структурные фрагменты аминов (К,5>46, 50, 51, а также некоторых других рацемических аминов 57, (Л,Я)-44, (К,Я)-45 и эфиров рацемических аминокислот - (Л,5)-10, с целью выяснения факторов, определяющих

стереохимический результат процесса

Ацилирование рацемических аминов (Д,5)-44 - (Л,£)-46, 53-57 хлорангидридом (5)-напроксена 52 проводили при мольном соотношении амин-хлорангидрид 2 1 в бензоле при комнатной температуре

КН бензол 20°С

(Я,5)-44 - (Я,5)-46, 53 - 57

+ Р?Н*НС1 58а,Ь - 65а,Ь

Я= (ад-46,58: 53,59: ын" ; 54,60:

\

м-

О

55,61: м

&о . о.

'^Ме N

; 56,62: 1 ; 57,63: 1

(Л,Л')-44, 64:

; (7?,5)-45, 65:

а: (5',5)-диастереомер Ь: (5",/?)-диастереомер

Отнесение стереоконфигурации диастереомерных амидов 59а,Ь, 61а,Ь, 64а,Ь, 65а,Ь проводили путем сравнения с амидами, полученными встречным синтезом из (51)-энантиомеров аминов (5)-53, (5)-55, 44, 45 (табл. 3.1).

Таблица 3.1.

Диастереомерный состав и выходы амидов 58а,Ь -65а,Ь

Содержание диастереомеров

№ соед. по данным ВЭЖХ, % по данным ЯМР'Н спектроскопии, % Выход, %

ад £ Я

58а,Ь 89,3 10,7 - - 82,0

59а,Ь 49,2 50,8 50 50 85,9

60а,Ь 55,4 44,6 57 43 87,0

61а, Ь - - 73 27 80,8

62а,Ь 44,9* 55,1* 43* 57* 75,4

63а,Ь 52,2* 47,8* - - ~78Л

64а,Ь 49,8 50,2 52 48 Щ8

65а,Ь ] 50,0 50,0 47 53 90,1 |

* без отнесения к конкретному диастереомеру

Амид 60а,Ь представлял собой масло и нам не удалось вырастить монокристалл одного из его диастереомеров, поэтому отнесение стереоконфигурации амида проводили следующим образом. Рацемический !Ч-фенил-(2/?,^)-2-бутиламин 54 ацилировали хлорангидридом М-тозил-(5)-пролина 66. Полученную смесь диастереомеров 67а,Ь разделяли с помощью флеш-хроматографии с последующей кристаллизацией изомеров и выращиванием монокристалла из раствора метанола.

Ме^А,

54

ЫН +

сАЛ

Ме

\_/ бензол

66

Ме.

Тоэ

I

N.

Ме 67а

Тоэ

Ла

н+

, (Э)-Мар-С1

флещ-хроматогр. Ме \ АсОН М&1, бензол |

'Ме Ме МеО

67Ь <«-54

а: (3,5)-диастереомер, Ь. (5,Я)-диастереомер

Методом РСА была отнесена конфигурация фрагмента Ы-фенил-2-бутиламина в амидах 67а и 67Ь, исходя из известной конфигурации фрагмента (5)-пролина (Рис. 3.1). Кислотный гидролиз (Х,й)-диастереомера 67Ь, с последующим ацилированием (К)-54 хлорангидридом (5)-(+)-напроксена привело к получению (Х,Л)-диастереомера соединения 60Ь, что позволило отнести сигналы в спектрах ЯМР 'Н и пики на хроматограмме смеси диастереомеров по данным ВЭЖХ.

67а 67Ь

Рис. 3.1. Строение молекул амидов 67а и 67Ь по данным РСА

Для отнесения стереоконфигурации диастереомеров амида анабазина 61а,Ь был получен индивидуальный (¿".^-диастереомер, для чего использовали (5}-энантиомер анабазина 55. Обнаружено, что в коммерчески доступном образце (¿^-анабазина содержится примесь (Я)-энантиомера в количестве ¡3-15%.

Энантиомерная чистота анабазина может быть определена методом ЯМР 'Н спектроскопии после дериватизации хлорангидридом (ЛЗ-напроксена. Наиболее удобными для оценки стереоизомерной чистоты являются мультиплеты протонов у атома С2 фрагмента пиперидина: 5 5,63 и 5,75 м.д., (55}- и (¿^-диастереомеры, соответственно.

Исследование искусственных смесей энантиомеров анабазина показало, что предел обнаружения (Л)-анабазина в смеси с (5}-анабазином составляет менее 2% (Рис. 3.26).

ГТтг

-АЛ.

п к

а) индивидуальный 61а б) искусственная смесь в) коммерческий образец,

61а-61Ь 97 3 после дериватизации

Рис 3 2 Область сигналов Н2 протонов фрагмента пиперидина в спектрах ЯМР 'Н (400 МГц, с1т50-с!6, 130°С)

Приведенные в табл 3 I данные свидетельствуют о том, что для изученных рацемических аминов - структурных фрагментов соединений (й,£)-46, 50, 51, КР хлортгидридом (£)-(+)-напроксена не происходит Только в случае ацилирования анабазина 55 происходит КР с преимущественным образованием (5,6)-диастереомера {¿е 46% по данным ЯМР 'Н спектроскопии), но и в этом случае диастереоселективность значительно ниже, чем в случае аминов (/?,5)-46, 50, 51 (с1е до 80%) Полученные результаты свидетельствуют о том, *гго для реализации эффективного КР молекула амина должна, по-видимому, включать ароматический фрагмент Причем наилучшие результаты достигаются, если конформационная подвижность гетероциклического фрагмента дополнительно ограничена конденсированной ароматической системой

Нами изучена возможность КР эфиров рацемических аминокислот под действием хлорангидрида (^-напроксена 52

Ме н

Н^^СООЕ! Я

МеО

МеО

МеО

,СООЕ1

О Я 68а-71 а

Ме ц

О К 68Ь -71Ь

7, 68 Ме, 8, 69 СН2Р(1, 9, 70 СН2СН2СООЕ{, 10, 71 /Рг

а (5,5)-диастереомер, Ь (5,/?)-диастереомер

Реакцию ацилирования этиловых эфиров рацемических аминокислот (Л,5)-7 - (Л,5)-10 хлорангидридом напроксена 52 проводили в растворе бензола при комнатной температуре при мольном соотношении реагентов 2 1 Показано, что во всех случаях ацилирования этиловых эфиров аминокислот реакционная смесь содержит практически равное количество диастереомеров, с/е не превышает 10% Существенного КР эфиров аминокислот при действии хлорангидрида (¿)-(+)-напроксена не происходит

Указанное обстоятельство может быть использовано для определения стереоизомерной чистоты аминокислот и их эфиров Нами была предпринята попытка использовать этот метод для определения энантиомерной чистоты изомеров, входящих в состав препарата лизомустин 72 Однако, при дериватизации изомеров 72а, 72Ь хлорангидридом (5)-напроксена 52 в мягких условиях получена смесь большого числа соединений, анализ которой не представлялся возможным

В связи с этим, нами был разработан метод анализа, основанный на разложении смеси изомеров в воде с последующим выделением лизина, его фталоилированием, этерификацией метанолом и хроматографическим выделением на колонке фракции, обогащенной метиловым эфиром Ы2,М<-дифталоил-(5)-лизина 73, стереоизомерный состав которого определяли методом ВЭЖХ на хиральной стационарной фазе

PhtN

73

NPhl

чСООМе условия хир ВЭЖХ

72Ь

В качестве стандартных образцов использовали метиловые эфиры 1\т2,М6-дифталоил-(.5')-и -(Д,5)-лизина Определяемый минимум (й)-стереоизомера менее 0,5%

Хроматограмма метилового эфира Ы2,Ы6-дифталоил-(5)-лизина, полученного после разложения лизомустина как описано выше, имеет один пик, соответствующий (¿^-изомеру (т^ 32,4 мин) (Рис 3 3 а), в то время как метиловому эфиру К2,Ь16-дифталоил-(Л,5)-лизина соответствуют два хорошо разрешимых пика (тй 29,4 мин, 32,3 мин) (Рис 3 3 6)

а)

б)"

I

Рис 3 3 ВЭЖХ хроматограммы метилового эфира М2,К6-дифталоил-(5)-лизина (а) и метилового эфира М2^6-дифталоил-(Л,^-лизина (б)

Глава 4 Разработка нового метода получения субстанции препарата цифелин

Большой интерес представляют пептиды сарколизина, 4-[ди-(2-хлорэтил)амино]-фенилаланина Среди них практическое применение нашел цифелин, разработаный в РОНЦ

им Блохина РАМН Цифелин, этиловый эфир Ь?-{М'-ацетил-4-[ди-(2-хлорэтил)амино]-фенилаланил}-валина 75, представляет собой смесь двух диастереомерных рацематов (£,5'-(I) и ОЯТ?'-./?,5') (II) Содержание в смеси формы (I) составляет 1-2%, содержание формы (II) до 98% Возможны два пути синтеза цифелина

Первый - исходя из этилового эфира Ы-ацетилфенилаланилвалина 74, в котором соотношение диастереомерных рацематов соответствует составу в цифелине (^,Л'-Л,5")

= 98 2 В молекулу последнего в результате ряда реакций вводят бис-2-хлорэтильную группировку

О о 3?г

ЗН к, A /Pr<wCOOEt С(СООСН2-<Ргр.с jí J

Ac-nh nhs b3n тгф ac-NH H

(R,S)-1 (R,S)-10 (S,R'-R,S)-74

(S R'-R,S)-74

кристаллизация до 98% __ ^

(S,S'-R,R)-74

о <5 r

+ пгн ru/4_\=/ V^N COOEt

(S,S'-R,R>74 C,CH:CH* Ac.lH H

1-2%

(S,R-R,S)-75 + (S,S'-R,R)-75 до 98% 1-2%

Второй путь синтеза - используя в качестве исходных ацетилсарколизин 76 и гидрохлорид этилового эфира (Л,5)-валина (Д.ф-М Определение условий, позволяющих получить обогащенную смесь диастереомерного рацемата соединений 74 и 75,

представляло важную практическую задачу

/Р г

Д. ,PL ^COOEt ;PrCH,OCOCI R, Jl X

VXlH + T -----T^N COOEt

j,u mh и3мтгф д„ i h

Ac-NH NH2 Ac-ÑH

76 (R,S)-10 (S.S'-RR1)-75 (S, R'-R, S>75 = 21,4 78,6

i перекрист J EtOH

CI (S,S)-75 + (R,R>75

/=\ /—^ форма I

r= 1-2%

Cl (S,R1- 75 + (R,S)-7 5

форма II до 98%

Синтез соединения 74 проводили в различных условиях как с целью достижения максимальной диастереоселективности процесса в условиях ДКР, так и с целью уменьшения количества побочного продукта (уретана 34)

Варьировали растворитель, время и температуру на стадии активации и количество TEA Наилучшие результаты получены при проведении реакции в ТГФ, времени активации 30 мин, температуре 0°С и 20%-ном мольном избытке TEA соотношение диастереомерных рацематов по данным ВЭЖХ (S,R'-R.S') (S,S'-R,R') = 84,8 15,2, уретана не обнаружено

Использование в качестве растворителей хлороформа, толуола и хлористого метилена привело к худшим результатам

Второй способ синтеза цифелина 75 основан на использовании в качестве исходного ацетилсарколизина 76 и его конденсации с гидрохлоридом этилового эфира (Я,5)-валина (Д5)-10 При проведении реакции в стандартных условиях пептидного синтеза образуется смесь примерно равных количеств диастереоизомерных рацематов соединения 75, из которой целевой диастереомерный рацемат получают в результате перекристаллизации При этом теряется около половины дорогостоящего ацетилсарколизина Нами проведены исследования по подбору условий реакции ДКР с целью увеличения диастерсоселективноо и процесса и уменьшения количества побочных продуктов Следует подчеркнуть, что указанная задача не была тривиальной, поскольку атомы хлора бис-2-хлорэтиламиногруппы N-ацетилсарколизина лабильны и могут отщепляться под действием избытка TEA

В ходе экспериментов постоянными оставались время активации, 30 мин, и 20%-ный мольный избыток TEA, варьировались - растворитель (ТГФ и CHClj), температура на стадии активации (-13°С и 0°С) и время конденсации (6 ч и 22 ч)

Оптимальными условиями являются проведение реакции в ТГФ, время активации 30 мин, температура на стадии активации 0°С, время конденсации 22 ч и 20%-ный мольный избыток TEA Они приводят к удовлетворительным результатам как в диастереомерном отношении - (S,R'-R,S') (S,У-R,R') = 78,6 21,4, так и по чистоте (> 97%) и выходу (79%) целевой смеси диастереомерных рацематов Из полученной смеси диастереомерных рацематов после 1-2 перекристаллизации из спирта может быть получена субстанция оригинального противоопухолевого препарата цифелин

ВЫВОДЫ

1 Найдены условия взаимодействия 2-метил-4-фенилоксазол-5(4Н)-она с производными аминов, обеспечивающие быструю рацемизацию исходного соединения и позволяющие эффективно проводить процессы ДКР Проведено сравнительное изучение ДКР в реакциях оксазолонов, полученных из N-ацетил-, N-трифторацетил- и М-(адамантан-1-карбонил)фенилаланина с эфирами (^-аминокислот

2. Показано, что на диастереоселективность в синтезе дипептидов N-ацилфенилаланина из соответствующего оксазолона наибольшее влияние оказывает строение боковой цепи аминокомпоненты Природа (объем) эфирной группы аминокомпоненты слабо влияет на стереохимический результат реакции Увеличение объема ацильной фуппы приводит к уменьшению диастереоселективности процесса

3 Изучено влияние температуры на ДКР эфирами (5)-аминокислот Показано, что при проведении реакции при комнатной температуре в реакционной массе также преобладает (Л,5)-диастереомер и стереохимический результат практически не зависит от температуры

4 Введение хиральной кадильной группы, фрагмента (5)-напроксена, в молекулу аминокистоты позволило непосредственно наблюдать образование и взаимное превращение стереоизомеров 5(4Н)-оксазолона в процессе синтеза дипептидов М-ацилфешпалашша методом смешанных ангидридов, а также вишше основания на этот процесс

5 Проведено сравнительное изучение КР рацемических аминов и этиловых эфиров рацемических аминокислот в зависимости от их строения с помощью хлорангидрида напроксена Показано, что существенного КР указанных соединений не происходит Исключение представляет анабазин ((¡г (З^-диастереомера соответствующего амида составляет 46%) Разработан метод определения оптической чистоты анабазина методом ЯМР с предварительной дериватизацией

6 Для противоопухолевого препарата лизомустин разработан метод определения энантиомерной чистоты на основе анализа на хиралыюй стационарной фазе методом ВЭЖХ метилового эфира Н2,К6-дифтало!1л-(5)-тизина, полученного из (5)-лизина, образующегося в результате гидролитического разложения лизомустина

7 Найдены условия реакции, обеспечивающие избиратечыюе образование диастереомерного рацемата этилового эфира М-ацетилфеннлаланилвалина, промежуточного продукта в синтезе противоопухолевого препарата цифелин Найдены условия реакции, обеспечивающие избирательное образование и высокий выход (5,Л'-Д,5") диастереомерного рацемата этилового эфира Ы-{К-ацетил-4-[ди-(2-хлорэтил)амино]-фенилаланил}-валина, полупродукта синтеза цифелииа, позволяющие существенно повысить эффективность его получения

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях. Статьи

1 Краснов В Л, Жданова Е А , Солиева Н 3 , Садрстдинова Л Ш, Букрина ИМ, Демин А М, Левит Г Л, Ежикова М А, Кодесс М И Изучение влияния боковой цепи эфиров а-аминокислот на диастереоселеетивность конденсации с 5(4Н)-оксазолоном в синтезе дипептидов с Ы-концевым^ацетилфениталанином Изв АН, сер Хны , 2004, №6,1278-1281

2 Жданова Е А , Солиева Н 3 , Садретдинова Л Ш , Ежикова М А , Кодесс М И, Краснов В П Изучение влияния алкильной группы сложных эфиров (5>валина на диастереоселективность их конденсации с Ы- ацетилфенилаланином методом смешанных ангидридов Изв АН, сер Хим , 2006, №5, 892-894

3 Солиева Н 3 , Жданова Е А, Садретдинова Л Ш , Левит Г Л, Кодесс М И, Краснов В П Кинетическое разделение рацемических аминов с помощью хлорангидрида (5*)-напроксена В сб Актуальные проблемы органического синтеза и анализа, Екатеринбург, УрО РАН, 2007, 76-84

Патенты

4 Краснов В П, Жданова Е А , Солиева Н 3, Букрина И М, Садретдинова Л Ш , Кодесс МИ, Смирнова ЛИ Способ получения дипептидов Патент РФ № 2002129518 Приоритет 04 ноября 2002 года

Работа доложена с опубликованием тезисов на научных конференциях

1 Кодесс М И, Жданова Е А , Букрина И М , Солиева Н 3 , Краснов В П Определение стереоконфигурации диастереомерных дипептидов N-ацетилфенилаланина 1D- и 2D-методами спектроскопии ЯМР Тезисы докладов конференции "Современные проблемы органической химии" Новосибирск, 2001, с 78

2 Солиева Н 3 , Жданова Е А , Букрина И М , Садретдинова ЛIII, Краснов В П Изучение влияния эфирной защитной группы в аминокомпоненте на процесс динамического кинетического разделения (ДКР) при синтезе дипептидов Тезисы докладов V Молодежной научной школы-конференции по органической химии Екатеринбург, 2002, с 176

3 Солиева Н 3 , Жданова Е А , Букрина И М , Садретдинова Л Ш , Краснов В П Изучение влияния боковой цепи аминокомпоненты на диастереоселективность в синтезе дипептидов N-ацетилфенилаланина Тезисы докладов V Молодежной научной школы-конференции по органической химии Екатеринбург, 2002, с 417

4 Krasnov VP, Potemkm VA, Zhdanova EA, Solieva NZ, Chupakhin ON Diastereoselectivity in the synthesis of dipeptides of N-acetylphenylalamne (theoretical investigation) Second Eurasian Meeting on Heterocyclic Chemistry Book of abstracts Novgorod the Great, 2002, p 33

5 Chupakhin О N, Krasnov V P , Zhdanova E A , Bukrina IM, Sadretdinova L Sh , Levit G L, Kodess MI Dynamic Kinetic Resolution via 5(4H)-Oxazolone Formation XXth European Colloquium on Heterocyclic Chemistry Book of abstracts Stockholm, Sweden, 2002, p 113

6 Жданова E A , Солиева H 3 , Букрина И M , Садретдинова Л Ш, Смирнова Л И, Краснов В П Использование динамического кинетического разделения для синтеза субстанции препарата цифелин Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» Российский Биотерапевтический Журнал, 2003, №1, с 22-23

7 Солиева Н 3 , Жданова Е А , Садретдинова Л Ш , Краснов В П, Ежикова М А Динамическое кинетическое разделение в синтезе пептидов фенилаланина Тезисы докладов на XVII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии Казань, 2003, с 272

8 Солиева Н 3 , Жданова Е А , Ежикова М А , Кодесс М И , Краснов В П Динамическое кинетическое разделение в синтезе дипептидов N-трифторацетилфенилаланина VII Молодежная научная школа-конференция по органической химии Тезисы докладов Екатеринбург, 2004, с 288

9 Bartashevich Е V , Rykounov А А , Zhdanova Е А , Solieva N Z , Krasnov V Р Theoretical

study of electronic characteristics of (4tf)-oxazoIone complexes with (S)-amino esters Abstracts of 7lh international seminar "Scientific advances in chemistry heterocycles, catalysis and polymers as driving forces" Ekaterinburg, 2004, p 141

10 Ежикова M A , Солиева H 3 , Первова M Г , Забелина О H , Кириченко В Е , Жданова Е А, Кодесс М И, Краснов В П Анализ диастереоизомерного состава дипепгидов N-трифторацетилфенилаланина Тезисы докладов VII конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока» Новосибирск, 2004, т 2, с 21

11 Солиева НЗ, Жданова ЕА, Садретдинова ЛШ, Краснов ВП Динамическое кинетическое разделение в синтезе Ы-(адамантил-1-карбонил)фенилаланилсо держащих дипептидов Тезисы докладов четвертой международной конференции молодых ученых по органической химии «Современные тенденции в органическом синтезе и проблемы химического образования» Санкт-Петербург, 2005, с 308

12 Кодесс М И , Ежикова М А , Солиева Н 3 , Жданова Е А , Левит Г Л , Бакулев В А , Краснов В П 'Н-ЯМР-анализ энантиомерной чистоты анабазина International symposium on advanced science in organic chemistry Book of abstracts Sudak, 2006, C-069

13 Краснов В П , Левит Г Л , Жданова Е А , Солиева Н 3 , Осинцев А В , Садретдинова Л Ш Оптическое кинетическое разделение аминов хлорангидридом (5)-напроксена International symposium on advanced science in organic chemistry Book of abstracts Sudak, 2006, C-081

14 Краснов В П , Левит Г Л , Жданова Е А , Солиева Н 3 , Садретдинова Л Ш , Чупахин О Н Кинетическое разделение рацемических производных пиперидина Труды Третьей международной конференции «Химия и биологическая активность азотсодержащих гетероциклов» Черноголовка, 2006, том 2, с 155

15 Солиева НЗ, Жданова ЕА, Садретдинова ЛШ, Ежикова МА, Кодесс МИ, Краснов В П Кинетическое разделение при ацилировании этиловых эфиров аминокислот хлорангидридом (5)-напроксена Тезисы докладов Первого российского Научного форума «Демидовские чтения на Урале» Екатеринбург, 2006, с 201

16 Жданова Е А , Солиева Н 3 , Левит Г Л , Тумашов А А , Гришаков А Н , Краснов В П Методы определения стереоизомерной чистоты лизина Тезисы Всероссийского симпозиума Хроматография и хроматомасспектрометрия Москва, 2008, с 98

Подписано в печать 15.09.2008. Формат бумаги 60x84 71в. Печать плоская. Уел печ л.1,5. Заказ № 284. Тираж 130 экз.

Типография "Уральский центр академического обслуживания". 620219, г. Екатеринбург, ул. Первомайская, 91

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Оксазол-5(4Н)-оны в стереоселективном синтезе (аналитический ^ обзор литературы).

1.1. Основные методы получения оксазол-5(4Н)-онов.

1.2. Рацемизация 5(4Н)-оксазолонов.

1.3. Стереоселективные реакции оксазолонов с раскрытием ^ д цикла.

1.3.1. Асимметрическое раскрытие цикла под действием ^ ^ хиральных катализаторов.

1.3.2. Стереоселективное раскрытие цикла под действием ^ хиральных реагентов.

1.4. Стереоселективные реакции оксазолонов, протекающие с ^ сохранением цикла.

Глава 2. Исследование ДКР оксазолонов в реакции с производными ^ аминов.

2.1. "Ы-Ацетилфенилаланин в процессах ДКР.

2.1.1. Влияние на диастереоселективность реакции строения ^ боковой цепи аминокомпоненты.

2.1.2. Влияние на диастереоселективность реакции природы ^ эфирной группы аминокомпоненты.

2.1.3. Влияние температуры на ДКР в синтезе дипептидов

2.2. Доказательство образования 5(4Н)-оксазолона.

2.3. Реакции ДКР ]М-трифторацетилфенилаланина.

2.4. Реакции ДКР №(адамантан-1 -карбонил)фенилаланина.

2.5. Теоретическое исследование ДКР (±)-2-метил-4- ^ бензилоксазолона под действием эфиров (^-аминокислот.

2.6. Исследование диастереоселективности взаимодействия ^ первичных хиральных аминов с оксазолоном.

Экспериментальная часть к главе 2.

Глава 3. Изучение КР рацемических аминов хлорангидридами (<S)-(+)- ^^ напроксена и Ы-тозил-(5)-пролина.

Экспериментальная часть к главе 3.

Глава 4. Разработка нового метода получения субстанции препарата цифелин.

Экспериментальная часть к главе 4.

ВЫВОДЫ.

Получение энантиомеров соединений различных классов является одной из важнейших и стремительно развивающихся областей органической химии. Это обусловлено в значительной мере потребностями фармацевтической промышленности, поскольку использование энантиомерно чистых лекарственных средств позволяет повысить их терапевтический эффект и одновременно снизить токсичность и побочное действие. Исключительно важным является также то, что разработка новых методов синтеза стереоизомеров хиральных соединений способствует развитию новейших методов тонкого органического синтеза и более глубокому познанию механизмов органических реакций.

Среди разнообразных методов синтеза стереоизомеров органических соединений особое место занимают методы разделения. Считается, что среди методов получения энантиомерно чистых соединений, используемых в промышленности, около 90 % составляют методы разделения и только около 10% методы асимметрического синтеза [1].

В последнее десятилетие получили существенное развитие методы оптического кинетического разделения (КР) рацематов. Метод КР основан на разности скоростей превращения индивидуальных стереоизомеров рацемата в реакциях с хиральным реагентом и/или катализатором. Большинство ферментативных реакций является реакциями КР. С использованием этого метода удалось получить значительное число энантиомеров соединений различных классов [2 - 5]. Процессы КР могут входить в качестве составной части в более сложные процессы, например процессы динамического кинетического разделения (ДКР) [6, 7]. Метод ДКР, позволяющий, по крайней мере, в принципе превратить смесь энантиомеров в оптически чистый продукт реакции привлекает в настоящее время самое пристальное внимание исследователей. Возможности метода КР далеко не исчерпаны. Однако наиболее сложной проблемой его применения является невозможность предсказать, насколько эффективным будет применение конкретного расщепляющего агента. Поэтому исследование реакций КР и ДКР, позволяющих выявить факторы, определяющие стереохимический результат процесса, являются весьма актуальными.

В последнее время в лаборатории асимметрического синтеза ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН проводятся исследования, направленные на изучение закономерностей процессов КР под действием ацилирующих агентов. Показано, что сравнительно простые по строению производные хиральных кислот (арилпропионовых кислот, аминокислот) могут служить эффективными реагентами для КР гетероциклических аминов [8-15].

В настоящей работе изучены процессы ДКР, протекающие при синтезе пептидов методом смешанных ангидридов и возможность использования метода КР для разделения рацематов ряда хиральных аминов. В качестве производных хиральных кислот были изучены оксазолоны N-ациламинокислот и хлорангидриды напроксена и >1-тозил-(£)-пролина.

Целью работы являлось изучение процессов КР и ДКР рацематов хиральных аминопроизводных под действием ацилирующих асимметрических реагентов, производных хиральных кислот, в первую очередь, аминокислот, определение влияния различных факторов на стереохимический результат реакции и разработка новых методов синтеза некоторых практически важных продуктов.

Настоящая работа выполнена как часть плановых научно-исследовательских работ, проводимых в Институте органического синтеза УрО РАН по теме: «Разработка методов стереоселективного синтеза соединений различных классов с использованием оптически активных аминокислот и их производных» (Гос. per. № 01.2.00 1 05150), а также в рамках проекта РФФИ (грант № 00-03-32776 «Изучение механизмов и закономерностей процесса кинетического разделения стереоизомеров в ряду гидрированных производных бензоксазина и хинолина»), гранта «Поддержка ведущих научных школ» НШ 1766.2003.3 и Государственного контракта № 02.522.11.2003 «Разработка технологий получения и выпуск опытных партий синтетических препаратов, обладающих избирательным действием на генетический аппарат, с целью лечения заболеваний вирусной и опухолевой природы».

Научная новизна. Найдены условия взаимодействия 2-метил-4-фенилоксазол-5(4Н)-она с производными аминов, обеспечивающие быструю рацемизацию исходного соединения и позволяющие эффективно проводить процессы ДКР. Впервые проведено сравнительное изучение ДКР в реакциях оксазолонов, полученных из Ы-ацетил-, И-трифторацетил- и ]Ч-(адамантан-1-карбонил)фенилаланина с эфирами (¿^-аминокислот. Показано, что на диастереоселективность в синтезе дипептидов Ы-ацилфенилаланина из соответствующего оксазолона наибольшее влияние оказывает строение боковой цепи аминокомпоненты. Природа (объем) эфирной группы аминокомпоненты слабо влияет на стереохимический результат реакции. Увеличение объема ацильной группы приводит к уменьшению диастереоселективности процесса.

Впервые показано что введение хиральной 1Ч-ацильной группы, фрагмента (6)-напроксена, в молекулу аминокислоты позволяет непосредственно наблюдать образование и взаимное превращение стереоизомеров 5(4Н)-оксазолона в процессе синтеза дипептидов методом смешанных ангидридов, а также влияние основания на этот процесс.

Впервые проведено сравнительное изучение КР рацемических аминов и этиловых эфиров рацемических аминокислот в зависимости от их строения с помощью хлорангидрида напроксена. Показано, что в отличие от производных бензоксазина и хинальдина существенного КР указанных соединений не происходит. Исключение представляет анабазин (<Ле 46%). Разработан оригинальный метод определения оптической чистоты анабазина методом ЯМР спектроскопии с предварительной дериватизацией.

Практическая значимость. Для противоопухолевого препарата лизомустин разработан метод определения энантиомерной чистоты на основе анализа на хиральной стационарной фазе методом ВЭЖХ метилового эфира

М2,М6-дифталоил-(5)-лизина, полученного из (5)-лизина, образующегося в результате гидролитического разложения лизомустина.

Найдены условия реакции, обеспечивающие избирательное образование («Х^'-ДЗ") диастереомерного рацемата этилового эфира 14-ацетилфенилаланилвалина, промежуточного продукта в синтезе противоопухолевого препарата цифелин. Найдены условия реакции, обеспечивающие избирательное образование и высокий выход (£,Я'-Я,£') диастереомерного рацемата этилового эфира ]М-{М-ацетил-4-[ди-(2-хлорэтил)амино]-фенилаланил}-валина, полупродукта синтеза цифелина, позволяющие существенно повысить эффективность его получения.

ВЫВОДЫ

1. Найдены условия взаимодействия 2-метил-4-фенилоксазол-5(4Н)-она с производными аминов, обеспечивающие быструю рацемизацию исходного соединения и позволяющие эффективно проводить процессы ДКР. Проведено сравнительное изучение ДКР в реакциях оксазолонов, полученных из N-ацетил-, N-трифторацетил- и №(адамантан-1-карбонил)фенилаланина с эфирами (¿^-аминокислот.

2. Показано, что на диастереоселективность в синтезе дипептидов N-ацилфенилаланина из соответствующего оксазолона наибольшее влияние оказывает строение боковой цепи аминокомпоненты. Природа (объем) эфирной группы аминокомпоненты слабо влияет на стереохимический результат реакции. Увеличение объема ацильной группы приводит к уменьшению диастереоселективности процесса.

3. Изучено влияние температуры на ДКР эфирами (¿^-аминокислот. Показано, что при проведении реакции при комнатной температуре в , реакционной массе также преобладает (R, ¿)-диастереомер и стереохимический результат практически не зависит от температуры.

4. Введение хиральной N-ацильной группы, фрагмента (¿)-напроксена, в молекулу аминокислоты позволило непосредственно наблюдать образование и взаимное превращение стереоизомеров 5(4Н)-оксазолона в процессе синтеза дипептидов N-ацилфенилаланина методом смешанных ангидридов, а также влияние основания на этот процесс.

5. Проведено сравнительное изучение КР рацемических аминов и этиловых эфиров рацемических аминокислот в зависимости от их строения с помощью хлорангидрида напроксена. Показано, что существенного КР указанных соединений не происходит. Исключение представляет анабазин (de (S, ¿^-диастереомера соответствующего амида составляет 46%). Разработан метод определения оптической чистоты анабазина методом ЯМР с предварительной дериватизацией.

6. Для противоопухолевого препарата лизомустин разработан метод определения энантиомерной чистоты на основе анализа на хиральной стационарной фазе методом ВЭЖХ метилового эфира 1Ч2,М6-дифталоил-(5)-лизина, полученного из (5)-лизина, образующегося в результате гидролитического разложения лизомустина.

7. Найдены условия реакции, обеспечивающие избирательное образование диастереомерного рацемата этилового эфира 1М-ацетилфенилаланилвалина, промежуточного продукта в синтезе противоопухолевого препарата цифелин. Найдены условия реакции, обеспечивающие избирательное образование и высокий выход (5,5') диастереомерного рацемата этилового эфира 1Ч-{ТЧ-ацетил-4-[ди-(2-хлорэтил)амино]-фенилаланил}-валина, полупродукта синтеза цифелина, позволяющие существенно повысить эффективность его получения.

1. Carey J.S., Laffan D., Thomson С., Williams M.T. Analysis of the reactions used for the preparation of drug candidate molecules // Org. Biomol. Chem. 2006. -V. 4.-P. 2337-2347.

2. Kagan H.B., Fiaud J.C. Kinetic resolution // Topic Stereochem. 1988. -V. 18.-P. 249-330.

3. Keith J.M., Larrow J.F., Jacobsen E.N. Practical considerations in kinetic resolution reactions // Adv. Synth. Catal. 2001. - V. 343 (1). - P. 5-26.

4. Robinson D.E.J.E., S.D. Bull S.D. Kinetic resolution strategies using non-enzymatic catalysts // Tetrahedron: Asymmetry. 2003. - V. 14. - P. 1407-1446.

5. Vedejs E., Jure M. Efficiency in nonenzymatic kinetic resolution // Angew. Chem. Int. Ed. -2005. -V. 44. -P. 3974-4001.

6. Ward R.S. Dynamic kinetic resolution // Tetrahedron: Asymmetry. 1995. -V.6 (7).-P. 1475-1490.

7. Pellissier H. Dynamic kinetic resolution // Tetrahedron. 2003. - V. 59 (42).-P. 8291-8327.

8. Kinetic resolution of (±)-2,3-dihydro-3-methyl-4#-l,4-benzoxazines with (^-naproxen / Charushin V.N., Krasnov V.P., Levit G.L. et al. // Tetrahedron: Asymmetry. 1999. -V. 10 (14). - P. 2691-2702.

9. Kinetic resolution of (±)-2-methyl-l,2,334-tetrahydroquinoline and (±)-2-methylindoline / Krasnov V.P., Levit G.L., Andreeva I.N., et al. // Mendeleev Commun. 2002. -V. 12 (1). - P. 27-28.

10. Kinetic resolution of (±)-2,3-dihydro-3-methyl-4i/-l,4-benzoxazine in thereaction with (5)-naproxen chloride: a theoretical study / Potemkin V.A., Krasnov V.P., Levit G.L., et al. // Mendeleev Commun. 2004. - V. 14 (2). - P.69-71.

11. Eliel E.L., Wilen S.H. Stereochemistry of organic compounds // J. Wiley & Sons, Inc., N.Y. 1^94. - 1267 p.

12. Noyori R., Tokunaga M., Kitamura M. Stereoselective organic synthesis via dynamic kinetic resolution // Bull. Chem. Soc. Jpn. 1995. — V.68 (1). - P. 3656.

13. Huerta F.F., Minidis A.B.E., Backvall J.-E. Racemisation in asymmetric synthesis. Dynamic kinetic resolution and related processes in enzyme and metal catalysis//Chem. Soc. Rev.-2001.-V. 30.-P. 321-331.

14. Пептиды. Основные методы образования пептидных связей / Под ред. Э. Гросса, И. Майенхофера // М.: Мир. 1983. - 421 с.

15. Steglich W. Fortschritte in der chemie der oxazolinone-(5) // Fortsch. Chem. Forsch. 1969. - V. 12. - P. 77-118.

16. Chen F.M.F., Benoiton N.L. H n.m.r. long-range coupling in 2,4-disubstituted-5(4H)-oxazolones and 4-alkyl-5(2H)-oxazolones generated therefromby the action of triethylamine I I J. Peptide Protein Res. 1987. - V. 30. - P. 683-688.

17. Wirth T. New strategies to a-alkylated a-amino acids // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1997. - V. 36 (3). - P. 225-227.

18. Stereoselective acylation of a racemic amine with Ca -methyl phenylglycine based dipeptide 5(4H)-oxazolones / Moretto A., Peggion C., Formaggio F. et al // Chirality. 2005. - V. 17. - P. 481-487.

19. Mukerjee A.K. Azlactones: retrospect and prospect // Heterocycles. 1987. -V. 26 (4).-P. 1077-1097.

20. Peptides-XI. Synthesis of peptides derived from alpha-methylalanine / Leplawy M.T., Jones D.S., Kenner G.W., Sheppard R.C. // Tetrahedron. 1960. - V. 11.-P. 39-51.

21. Steglich W., Hurnaus R. Uber den verlauf der Bergmann-Sternschen azlactonsynthese; 2-alkyliden-pseudooxazolone-(5) // Tetrahedron Letters. 1966. — V. 4.-P. 383-388.

22. McGahren W.J., Goodman M. Synthesis of peptide oxazolones and related compounds // Tetrahedron. 1967. - V. 23 (5). - P. 2017-2030.

23. Chen F.M.F., Kuroda K., Benoiton N. A simple preparation of 5-oxo-4,5-dihydro-l,3-oxazoles (oxazolones) // Synthesis. 1979. - V. 1. - P. 230-232.

24. X-Ray diffraction structure determination of a novel peptide oxazol-5(4H)-one with a chiral carbon atom in the heterocyclic moiety / Toniolo C., Valle G., Formaggio F. et al. // J. Chem. Soc., Perkin Trans. I. 1991. - V. 1. - P. 3386-3388.

25. Synthesis and characterization of 4-ethoxymethylene-2-l.-naphthyl-5(4H)-oxazolone and its fluorescent amino acid derivatives / Koczan G., Csik G., Csampai A. et al. // Tetrahedron. 2001. - V. 57 (21). - P. 4589-4598.

26. Stock H.T., Turner N.J. Crystallisation-induced dynamic resolution ofdipeptide-derived 5(4H)-oxazolones // Tetrahedron Lett. 1996. - V. 37 (36). - P. 6575-6578.

27. Goodman M., Stueben K.C. Amino acids active esters. III. Base-catalysed racemization of peptide active esters // J. Org. Chem. 1962. - V. 27 (10). - P. 34093416.

28. Goodman M., Levine L. Peptide synthesis via active esters. IV. Racemization and ring-opening reactions of optically active oxazolones // J. Amer. Chem. Soc. 1964. -V. 86. - P. 2918-2922.

29. Goodman M., McGahren W.J. Optically active peptide oxazolones. Preliminary racemization studies under peptide-coupling conditions // J. Amer. Chem. Soc. 1965. -V. 87 (13). - P. 3028-3029.

30. Racemisierung bei der partial- und totalhydrolyse von peptiden / Weygand F., König W., Prox A. et al. // Chem. Ber. 1966. - V. 99. - P. 1443-1445.

31. Goodman M., McGahren W.J. Mechanistic studies of peptide oxazolone racemization // Tetrahedron. 1967. - V. 23 (5). - P. 2031-2050.

32. Investigations on the stereospecificity of peptide active phenyl ester formation and coupling / Kovacs J., Kisfaludy L., Ceprini M.Q., et al. // Tetrahedron. 1969. - V. 25. - P. 2555-2573.

33. Studies on the kinetics of racemization of 2,4-disubstituted-5(4H)-oxazolones / Slebioda M.A., St-Amand M.A., Chen F.M.F., Benoiton L. // Can. J. Chem. 1988. - V. 66. - P. 2540-2544.

34. Wodecki Z., Slebioda M., Kolodziejczyk A.M. Application of Polarimetrie detector for the high-performance liquid chromatographic determination of the optical purity of 5(4H)-oxazolones // J. of Chromatography. 1995. — V. 696. - P. 149-152.

35. Babu V.V., Ananda K. Synthesis of peptides employing Fmoc-/Boc/-Z-amino acid fluorides and activated commercial zinc dust // Letters in Peptide Science. -2000. — V. 7.-P. 41-46.

36. Daffe V., Fastrez J. Cyclodextrine-catalyzed hydrolysis of oxazol-5(4H)-ones // J. Chem. Soc., Perkin Trans. 2: Phys. Org. Chem. (1972-1999). 1983. - V.6.-P. 789-796.

37. De Jersey J., Runnegar M.T.C., Zerner B. Oxazolinones as enzyme acylating agents // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1966. - V. 25 (4). - P. 383388.

38. Bevinakatti H.S., Newadkar R.V., Banerji A.A. Lipase-catalysed enantioselective ring-opening of oxazol-5(4H)-ones coupled with partial in situ racemisation of the less reactive isomer // J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1990. -V. 16. - P. 1091-1092.

39. Патент WO 95/12573. Preparation of enantiomeric feri-leucine and analogues / Turner N., Winterman J., McCague R. Опубликовано 11.05.95. Приоритет GB 01.11.93. (Chemical Abstracts. - 1995. -V. 123. -P144633).

40. Патент US 5219731. Enzymic preparing of optically-active amino acid derivatives / Sih C.J. Опубликовано 15.06.93. Приоритет 01.11.91.- (Chemical Abstracts. - 1994.-V. 120.-PI05151).

41. Патент US 5541080. Method for preparing L-alpha-amino acids / Sih C.J. Опубликовано 30.07.96. Приоритет 01.11.91. (Chemical Abstracts. — 1996. - V. 125. -P165835).

42. Enzymatic asymmetric synthesis of a-amino acids. Enantioselective cleavage of 4-substituted oxazolin-5-ones and thiazolin-5-ones / Crich J., Brieva R., Marquart P., et al. // J. Org. Chem. 1993. - V. 58 (12). - P. 3252-3258.

43. Enhancement of Candida Antarctica lipase В enantioselectivity and activity in organic solvents / Parker M.-C., Brown S., Robertson L., Turner N. // J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1998. -V. 24. - P. 2247-2248.

44. Brown S., Parker M.-C., Turner N. Dynamic kinetic resolution: synthesis of optically active a-amino acid derivatives // Tetrahedron: Asymmetry. — 2000. V. 11 (8).-P. 1687-1690.

45. Quiro's M., Parker M., Turner N.J. Tuning Lipase Enantioselectivity in Organic Media Using Solid-State Buffers // J. Org. Chem. 2001. - V. 66 (15). - P. 5074-5079.

46. An Efficient Chemoenzymatic Approach to (S)-y-Fluoroleucine Ethyl Ester

47. Limanto J., Shafiee A., Devine P.N. et al. // J. Org. Chem. 2005. - V.70 (6). - P. 2372-2375.

48. Патент US 0234128. Process for preparing fluoroleucine alkyl esters / Devine P., Limanto J., Shafiee A., Upadhyay V. Опубликовано 20.10.05. Приоритет 14.04.04. (Chemical Abstracts. - 2005. - V. 143. - P367593).

49. Daffe V., Fastrez J. Enantiomeric enrichment in the hydrolysis of oxazolones catalyzed by cyclodextrins or proteolytic enzymes // J. Am. Chem. Soc.-1980.-V. 102 (10).-P. 3601-3605.

50. Daffe V., Fastrez J. Relationship between structure and stereospecificity in hydrolysis of oxazolones catalyzed with cyclodextrins // Polish journal of chemistry. 1982. - V. 56 (327). - P. 327-333.

51. Механизм гидролиза азлактонов. катализируемого комплексом Си (И) с (5)-2-(№бензилпролил)амино.бензальдоксимом / Белоконь Ю.Н., Бачурина И.Б., Тараров В.И., Сапоровская М.Б. // Изв. АН СССР. Сер. хим. 1992. - №3. -С. 536-545.

52. Liang J.J., Ruble С., Fu G.C. Dynamic Kinetic Resolutions Catalyzed by a Planar-Chiral Derivative of DMAP: Enantioselective Synthesis of Protected a-Amino Acids from Racemic Azlactones // J. Org. Chem. 1998. - V.63 (10). - P. 31543155.

53. Ruble C., Fu G.C. Enantioselective Construction of Quaternary Stereocenters: Rearrangements of O-Acylated Azlactones Catalyzed by a Planar-Chiral Derivative of 4-(PyrroIidino)pyridine // J. Am. Chem. Soc. 1998. - V. 120 (44).-P. 11532-11533.

54. Asymmetric alcoholysis of 2-phenyl-5(4//)-oxazolones by the catalytic mixture of cyclo(.S)-His-(5)-Phe. with chiral auxiliaries / Xie L., Hua W., Chan A. et al. //Tetrahedron: Asymmetry. 1999. - V.10 (24). -P. 4715-4728.

55. Gottwald К., Seebach D. Ring opening with kinetic resolution of azlactones by Ti-TADDOLates // Tetrahedron. 1999. - V. 55 (3). - P. 723-738.

56. Highly efficient dynamic kinetic resolution of azlactones by urea-based bifimctional organocatalysts / Berkessel A., Cleeman F., Mukherjee S. et al. // Angew. Chern. Int. Ed. -2005. -V. 44 (5). -P. 807-811.

57. Second-generation organocatalysts for the highly enantioselective dynamic kinetic resolution of azlactones / Berkessel A., Mukherjee S., Cleeman F. et al. // J. Chem. Soc., Chem. Commun.-2005.- V. 14.-P. 1898-1900.

58. Design and Synthesis of a New Type of Ferrocene-Based Planar Chiral DMAP Analogues. A New Catalyst System for Asymmetric Nucleophilic Catalysis / Seitzberg J.G., Dissing C., Sotofte I. et al. // J.Org. Chem. 2005. - V. 70 (21). - P. 8332-8337.

59. Barnes D.K., Campaigne E., Shriner R.L. The reaction of azlactones with secondary amines // J. Am. Chem. Soc. 1948. - V. 70. - P. 1769-1772.

60. Weygand F., Steglich W., Barocio de la Lama X. Über den sterischen verlauf der reaction von oxazolonen-(5) mit aminosaüreestern // Tetrahedron. 1966. - Suppl. 8 (I). - P. 9-13.

61. Steglich W., Frauendorfer E., Weygand F. Umwandlung von racem. tert.-Leucin in das £-enantiomere // Chem. Ber. 1971. - V. 104. - P. 687-690.

62. Frauendorfer E., Steglich W., Weygand F. Synthese von N-pivaloyl-Z-feri-leycyl-Z-valin, einem acyl-peptid mit hoher gruppenhäufung // Chem. Ber. 1973. -V. 106.-P. 1019-1022.

63. Antonovics I., Young G.T. The mechanism of racemisation during the coupling of acylpeptides // J. Chem. Soc., Chem. Comm. 1965. - V. 17. - P. 398399.

64. Direction of asymmetric induction in the reaction of pseudooxazolone-(5) with L-proline ester / Tomida I., Senda Sh., Kuwabara T. et al. // Agr. Biol. Chem. -1976. V. 40 (10). - P. 2033-2036.

65. Асимметрический синтез аминокислот путем каталитического восстановления азлактонов замещенных а-ациламиноакриловых кислот.

66. Сообщение 1. Получение S-фенилаланина / Карпейская Е.И., Годунова Л.Ф., Неупокоева Е.С., Клабуновский Е.И. // Изв. АН СССР. Сер. хим. 1978. - № 5. -С. 1104-1111.

67. Асимметрический синтез аминокислот путем каталитического восстановления азлактонов замещенных ациламиноакриловых кислот.

68. Сообщение 7. О восстановительном метанолизе 2-метил- и 2-фенил-4-бензилиденоксазолонов-5 / Годунова Л.Ф., Левитина Е.С., Карпейская Е.И., Клабуновский Е.И. // Изв. АН СССР. Сер. хим. 1981. - № 4. - С. 815-821.

69. Benoiton N.L., Kuroda К., Chen F.M.F. The dependence of asymmetricinduction on solvent polarity and temperature in peptide synthesis // Tetrahedron Lett. 1981. -V. 22 (35). - P. 3361-3364.

70. Schallenberg E.3 Calvin M. Ethyl thioltrifluoroacetate as an acetylating agent with particular reference to peptide synthesis // J. Am. Chem. Soc. 1955. - V. 77.-P. 2779-2782.

71. Use of N-trifluoroacetyl-protected amino acid chlorides in peptide coupling reactions with virtually complete preservation of stereochemistry / Jass P., Rosso V., Racha S., et al. // Tetrahedron. 2003. - V. 59 (45). - P. 9019-9029.

72. Steglich W., Höfle G. Reaktionen von Oxazolon-(5)-Anionen, III. Acylierung von oxazolonen-(5) mit carbonsäurehalogeniden, eine erweiterung der Dakin-West-reaction // Chem. Ber. 1969. - V. 102. - P. 883-898.

73. Steglich W., Höfle G. Reaktionen von Oxazolon-(5)-Anionen, IV. Basenkatalysierte acylierungen von trifluormethyl-pseudooxazolonen-(5) // Chem. Ber. 1969. - V. 102. - P. 899-903.

74. Steglich W., Höfle G. Zum mechanismus der Dakin-West reaction // Tetrahedron Lett. 1968. - № 13. - P. 1619-1624.

75. Steglich W., Höfle G. Über eine einfache darstellung von acyloxazolonen5. aus 5-acyloxy-oxazolonen II. Mitteilung über hypernucleophile acylierungskatalysatoren // Tetrahedron Lett. 1970. - № 54. - P. 4727-4730.

76. Enantioselective TADMAP-catalyzed carboxyl migration reactions for the synthesis of stereogenic quaternary carbon / Shaw S.A., Aleman P., Christy J. et al. // J. Am. Chem. Soc. 2006. - V. 128 (3). - P. 925-934.

77. Reaktionen von Oxazolon-(5)-Anionen, VIII. a-Substituierte aaminosäuren durch alkylierung von oxazolin-5-onen / Kübel B., Gruber P., Hurnaus R. et al. // Chem. Ber. 1979. - V. 112. - P. 128-137.

78. Steglich W., Kübel B., Gruber P. Thermolyse von oxazolin-5-onen, IV. Über fuhrung a-nitrophenyl-substituierter 3-oxazolin-5-one in 1-acyloxyindazole und (o-nitrophenyl)ketone // Chem. Ber. 1973. - V. 106. - P. 2870-2876.

79. Wegman H., Steglich W. Sterisch gelenkte Michael-Addition von oxazolin-5-on-anionen an aktivierte doppelbindungen; synthese von 1,4-dicarbonylverbindungen und y-oxonitrilen // Chem. Ber. 1981. — V. 114 (7). - P. 2580-2594.

80. A new synthesis of functionalized 2-alkylidenetetrahydro-5-furanones by tandem alkylation and translactonization reactions of 5(4H)-oxazolones / Canella R., Clerici F., Gelmi M.L. et al. // J. org. Chem. 1996. - V. 61 (5). - P. 1854-1856.

81. Trost B.M., Ariza X. Catalytic asymmetric alkylation of nucleophiles: asymmetric synthesis of a-alkylated amino acids // Angew. Chem., Int. Ed. Engl. -1997.-V. 36 (23).-P. 2635-2637.

82. Trost B.M., Lee C.B. A new strategy for the synthesis of sphingosine analogs. Sphingoffungin F // J/ Am. Chem. Soc. 1998. - V. 120 (27). - P. 68186819.

83. Патент WO 98/46578. The preparation of enantiomerically enriched oxazolones and a,a-disubstituted amino acids / Trost B.M., Piquer J.A. -Опубликовано 22.10.98. Приоритет US 11.04.97. (Chemical Abstracts. 1998. -V. 129. -P316549).

84. Trost B.M., Ariza X. Enantioselective allylations of azlactones with imsymmetrical acyclic allyl esters // J. Am. Chem. Soc. 1999. - V. 121 (46). - P. 10727-10737.

85. Trost B.M., Lee C.B. gem-Diacetates as carbonyl surrogates for asymmetric synthesis. Total syntheses of sphingoffungins E and F // J. Am. Chem. Soc.-2001.-V. 123 (49).-P. 12191-12201.

86. Padwa A., Wetmore S.I.Jr. Studies on the photoextrusion of carbon2dioxide from the A -oxazolin-5-one system // J. Am. Chem. Soc. 1974. - V. 96 (8). -P. 2414-2421.

87. Padwa A., Gingrich H.L., Lim K. Regiochemistry of intramolecular munchnone cycloadditions: preparative and mechanistic implications // J., Am. Chem. Soc. 1982. - V. 47. - P. 2447-2456.

88. Characterization of a stable carboxylic acid intermediate from 1,3-dipolar cycloaddition of a munchnone with 1,2-dicyanocyclobutene /• Maryanoff C.A., Karach C.B., Turchi I J. et al. // J. Org. Chem. 1989. - V. 54. - P. 3790-3792.

89. Peddibhotla S., Jayakumar S., Tepe J.J. Highly diastereoselective multicomponent synthesis of unsymmetrical imidazolines // Org. Lett. 2002. - V. 4 (20).-P. 3533-3535.

90. Peddibhotla S., Tepe J.J. Multicomponent synthesis of highly substituted imidazolines via a silicon mediated 1,3-dipolar cycloaddition // Synthesis. 2003. -№9.-P. 1433-1440.

91. Peddibhotla S., Tepe J.J. Stereoselective synthesis of highly substituted A'-pyrrolines: exo-selective 1,3-dipolar cycloaddition reactions with azlactones // J. Am. Chem. Soc. 2004. - V. 126 (40). - P. 12776-12777.

92. Изучение влияния боковой цепи аминокомпоненты на диастереоселективность в синтезе дипептидов N-ацетилфенилаланина /

93. Солиева Н.З., Жданова Е.А., Букрина И.М., и др. // Тезисы докладов V Молодежной научной школы-конференции по органической химии.-Екатеринбург . 2002. - С. 417.

94. Dynamic Kinetic Resolution via 5(4#)-Oxazolone Formation / Chupakhin O.N., Krasnov V.P., Zhdanova E.A., et al. // XXth European Colloquium on Heterocyclic Chemistry. Book of abstracts. Stockholm, Sweden. - 2002. - P. 113.

95. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность амидов напроксена с производными аминокислот / Левит Г.Л., Аникина Л.В., Вихарев Ю.Б., и др. // Хим.-фарм. Ж. 2002. - Т. 36 (5). - С. 13-16.

96. Динамическое кинетическое разделение в синтезе дипептидов N-трифторацетилфенилаланина / Солиева Н.З., Жданова Е.А., Ежикова М.А., и др. // VII Молодежная научная школа-конференция по органической химии. Тезисы докладов. Екатеринбург. — 2004. - С. 288.

97. Динамическое кинетическое разделение в синтезе ^пептидов фенилаланина / Солиева Н.З., Жданова Е.А., Садретдинова Л.Ш., и др. // Тезисы докладов на XVII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии. Казань. - 2003. - С. 272.

98. Theoretical study of electronic characteristics of (4//)-oxazolonecomplexes with (S)-amino esters / Bartashevich E.V., Rykounov A.A., Zhdanovath • •

99. E.A., et al. // Abstracts of 7 international seminar "Scientific advances in chemistry:heterocycles, catalysis and polymers as driving forces". Ekaterinburg. — 2004. - P. 141.

100. Генетический алгоритм для прогноза строения и свойств молекулярных агломератов в органических веществах / Гришина М.А.,

101. Барташевич Е.В., Потемкин В.А., Велик А.В. // Ж. Структ. X. 2002. - Т. 43 (6). -С. 1128-1133.

102. Bader, R. F. W. Atoms in Molecules: A Quantum Theory // Clarendon Press, Oxford. 1990. - 532 p.

103. Гершкович А.А., Кибирев В.К. Химический синтез пептидов // Киев: Наук, думка, 1992. с.

104. Humphlett W.I., Wilson C.V. Formation and properties of isocyanates derived from amino ester hydrochlorides // J. Org. Chem. 1961. - V. 26 (7). - P. 2507-2510.

105. Efficient large (ca. 40 g) laboratory scale preparation of (S)- and (R)-valine tert-butyl esters / Levit G.L., Krasnov V.P., Bukrina I.M., et al. // Tetrahedron: Asymmetry. 2002. - V. 13 (17). - P. 1911-1914.

106. Eliel E.L., Wilen S.H. Stereochemistry of organic compounds // J. Wiley & Sons, Inc., N.Y. 1994. - 1267 p.

107. Keith J.M., Larrow J.F., Jacobsen E.N. Practical considerations in kinetic resolution reactions // Adv. Synth. Catal. 2001. - V. 343 (1). - P. 5-26.

108. Haeffner F., Norin T. Molecular modelling of lipase catalysed reactions. Prediction of enantioselectivities // Chem. Pharm. Bull. 1999. - V. 47 (5). - P. 591600.

109. Spivey A.S., Maddaford A. Asymmetric catalysis of acyl transfer by Lewis acids and nucleophiles. A review // Org. Prep. Proced. Int. 2000. — V. 32 (4). -P. 331-366.

110. Vedejs E., Daugulis O. 2-Aryl-4,4,8-trimethyl-2-phosphabicyclo-3,3,0.octanes: reactive chiral phosphine catalysts for enantioselective acylation // J. Am. Chem. Soc.- 1999.- V. 121 (24).-P. 5813-5814.

111. Nonenzymatic kinetic resolution of racemic alcohols through aninduced fit» process / Kawabata Т., Nagato M., Takasu K. et al. // J. Am. Chem. Soc.- 1997.-V. 119 (13).-P. 3169-3170.

112. Kinetic resolution of alcohols catalyzed by tripeptides containing the N-alkylimidazole substructure / Miller S.J., Copeland G.T., Papaioannou N. et al. // J. Am. Chem. Soc. 1998. - V. 120 (7).-P. 1629-1630.

113. Robinson D. E. J. E., Bull S. D. Kinetic resolution strategies using non-enzymatic catalysts // Tetrahedron: Asymmetry. 2003. - V.14. - P. 1407-1446.

114. Демин A.M. Амиды (6)-напроксена и других хиральных кислот. Синтез, разделение стереоизомеров и биологическая активность: Диссертация на соискание ученой степени канд. хим. наук. Екатеринбург, 2005. - 161 с.

115. Кинетическое разделение рацемических аминов с помощью хлорангидрида (5)-напроксена / Солиева Н.З., Жданова Е.А., Садретдинова Л.Ш., и др. // Сб. Актуальные проблемы органического синтеза и, анализа. -Екатеринбург, УрО РАН. 2007. - С. 76-84.

116. Оптическое кинетическое разделение аминов хлорангидридом (S)-напроксена / Краснов В.П., Левит Г.Л., Жданова Е.А., и др. // International symposium on advanced science in organic chemistry. Book of abstracts. Sudak. — 2006.-C-081.

117. Методы определения стереоизомерной чистоты лизина / Жданова

118. Е.А., Солиева Н.З., Левит Г.Л., и др. // Тезисы Всероссийского симпозиума. Хроматография и хроматомасспектрометрия. Москва. - 2008. - С. 98.

119. Краснов В.П., Жданова Е.А., Смирнова Л.И. Синтез и биологическая активность амидов и пептидов 4-бис-(2-хлорэтил)амино.-£)/,-, L- и /)-фенилаланина / Успехи химии. 1995. - Т. 64 (11). - С. 1121-1138.

120. Доклиническое и клиническое исследование нового противоопухолевого препарата — таблетки цифелина / Оборотова H.A., Смирнова Л.И., Зимакова H.H. и др. // Российский онкологический журнал. -2001.-№5.-С. 46-48.

121. Оборотова H.A. Противоопухолевые субстанции и лекарственные формы, созданные в РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН / в кн. Экспериментальная онкология на рубеже веков под ред. Давыдова М.И., Барышникова А.Ю. Москва. 2003. - С. 5-58.

122. Патент РФ № 2033154. Радиопротекторное средство / Ватулина Г.Г., Алексеева Л.В., Краснов В.П. и др. Приоритет от 13.08.1990 г. Бюлл. изоб. № 11,20.04.1995.

123. Патент РФ № 2233289. Способ получения дипептидов / Краснов В.П., Жданова Е.А., Солиева Н.З. и др. Приоритет от 04.11.2002 г. Опубликовано 27.07.04. Бюлл. №21.

124. Данные элементного анализа получены сотрудниками группы элементного анализа ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН под руководством к.х.н. Баженовой Л.Н.