Липиды семян калины обыкновенной (Viburnum opulus L.) и их изменение при созревании, пониженной температуре и хранении тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК УФИМСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ИНСТИТУТ ОРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ

На правах рукописи

Каримова Альбина Рубилевяа

УДК 547.915:665.33

Липиды семян калины обыкновенной (Viburnum opulus L.) и их изменение при созревании, пониженной температуре и хранении

02.00.10 - Биоорганическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

У ФА-2005

Работа выполнена в Институте органической химии Уфимского научного центра Российской академии наук.

Научный руководитель:

кандидат химических наук, старший научный сотрудник Юнусова С. Г.

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Мифтахов М. С.

доктор химических наук, профессор Куковинец О. С.

Ведущая организация: Тихоокеанский институт биоорганической химии

ДВО РАН (г. Владивосток)

Защита состоится «7» октября 2005 г в 14 часов на заседании диссдпационного совета Д 002.004.01 в Институте органической химии УНЦ РАН по адресу: 450054, Башкортостан, г. Уфа, проспект Октября, 71.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Института органической химии УНЦ РАН

Автореферат разослан « 1» (ЛнТлЯрл, 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор химических наук

Ф. А. Валеев

2ÜOG-4

Т$Ъ&0 з pf/fé/

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Одной из важнейших задач, требующих решения, является рациональное использование побочных продуктов и отходов производств, связанных с растительным сырьем, т.е. комплексная переработка сырья, полное извлечение из него всех ценных компонентов.

В настоящее время пищевая промышленность перерабатывает плоды калины для получения джемов с товарным названием «Калина протертая с сахаром», семена являются отходом производства, которые практически не используются и сжигаются.

Работами по исследованию семян калины обыкновенной, проводимыми в лаборатории природных соединений Института органической химии Уфимского научного центра РАН, было показано, что семсна содержат сложный комплекс биологически активных соединений - липидов, белков и пигментов. Масло семян калины обыкновенной обладает прогивовоспалительным действием, стимулирует репаративную регенерацию кожи и слизистой оболочки желудка, а также является богатым источником полиненасыщенных жирных кислот, которым в последнее время придается очень большое значение для получения биологически активных пищевых добавок, широко применяемых для профилактики и лечения атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний. Все вышеизложенное позволяет рассматривать семена калины обыкновенной как сырьевой источник для производства широкого ассортимента продуктов различного функционального назначения.

Поэтому представляется актуальным и перспективным подробное изучение биологически активных компонентов семян калины, для целенаправленного поиска путей утилизации и многостороннею использования содержащихся в отходах биологически активных соединений.

Работа выполнена: в соответствии с планом научно-исследовательских работ Института органической химии УНЦ РАН по теме «Растительные биорегуляторы -алкалоиды и липиды некоторых растений, произрастающих в РФ» (per. номер № 01.20.00 13599); при финансовой поддержке Президента Российской Федерации (программа поддержки научных школ, грант H1LI-139.2003.3), Министерства промышленности, науки и технологий (государственный контракт № 41.028.1.1.2447, проект № 02-4207.2003).

Цель исследования. Изучение липидов семян калины обыкновенной в процессе онтогенеза, их изменение под влиянием низких температур и условий хранения. Определение биологической ценности семян калины, антиоксидантной активности пигментного комплекса. Выявление возможности использования в качестве кормовой добавки отхода пищевого производства - семян калины обыкновенной и проведение испытаний на одной из птицефабрик Башкортостана на интенсивность роста цыплят-бройлеров и яйценоскость кур-несушек.

Научная новизна. Подробно изучен состав нейтральных, полярных: глико- и фосфолипидов и липофильных компонентов семян калины обыкновенной и его изменение при созревании, под действием низких температур и хранении.

Проведен глубокий химический анализ липидов плодов калины обыкновенной трех

степеней зрелости. Обсуждена роль отдельных классов липидов в процессе

маслообразования. Охарактеризован состав жирных кислот всех ацилсодержащих классов

липидов трех степеней зрелости. В липидах раннезрелых семян обнаружены значительные

количества пальмитиновой (16:0) кислоты, содержание которой резко снижается к

моменту зрелости, что позволяет говорить об ее участии в биосинтезе ненасыщенных:

олеиновой (18:1) и линолевой (18:2) кислот. Выявлены ичиигорые1 закономерности в -----— л-------„„„„„„о РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ

процессе биосинтеза отдельных классов липидов.

БИБЛИОТЕКА J С. Петек 09

II nv I Í

Установлено, что действие низких температур приводит к нарушению метаболизма липидов: образованию оксиглицеридов в нейтральных липидах; значительному снижению общего содержания и отдельных классов полярных липидов; и, в конечном счете, к разрушению мембран. Выделены оксикислоты, входящие в состав оксиглицеридов, и установлена их структура. Показано, что кислоты данной структуры могли образоваться в результате окисления линолевой и олеиновой кислот.

Продолжительное хранение при комнатной температуре измельченных семян калины обыкновенной приводит к активизации процессов гидролиза во всех группах липидов. Хранение практически не оказывает влияние на содержание белка, состав аминокислот и i идроперекисное число.

Практическая значимость. Результаты исследования биологически активных природных компонентов отхода пищевого производства - семян калины обыкновенной, дали возможность предложить его в качестве кормовой добавки для цыплят-бройлеров на Турбаслинскую птицефабрику РБ. Установлено, что добавление 1% шрота калины в полнорационные комбикорма «Провими» оказывало воздействие на прирост живой массы, начиная с 8 - 10-дневного возраста, превышая контроль к концу опыта (45 дней) на 9%.

Испытания кормовой добавки на продуктивные и воспроизводительные качества кур-несушек показали, что добавление калины в количестве 1,5% к составу основного рациона кур-несушек в опытных партиях увеличивало сохранность птицы на 1,5%, а яйценоскость - на 1,6% по сравнению с контролем.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на П1 Всероссийском совещании «Лесохимия и органический синтез» (Сыктывкар, 1998 г.), на Молодежных научных школах по органической химии (Екатеринбург, 2000 г., 2002 г.), на I, П и Ш Всероссийских конференциях «Химия и технология растительных веществ» (Сыктывкар, 2000 г., Казань 2002 г., Саратов, 2004 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 статьи, 1 патент и тезисы 6 докладов на Всероссийских конференциях.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 151 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и приложения. Список цитируемой литературы состоит из 223 наименований. Работа включает 37 таблиц, 7 схем и 7 рисунков.

Автор выражает большую благодарность академику М.С. Юнусову за помощь и консультации при выполнении и написании работы.

2. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

2.1 Биологически ашивные компоненты семян калины обыкновенной -отхода пищевой продукции

2.1.1 Лнпиды и липофильные компоненты семян калины обыкновенной

Объектом исследования служил отход пищевого производства - семена (косточки) калины обыкновенной (основная масса) и в значительно меньших количествах - плодовая оболочка (поверхностная пленка). Изучали биологически активные компоненты: липиды, пигменты, белки. Более подробно в работе изучены липиды, определено содержание и биологическая ценность белков и антиоксидантная активность пигментов.

Масличность семян составляла П.7% от веса воздушно-сухого (в/с) сырья, содержание каротиноидов 0.054 мг/г. Все выделенные группы липидов (нейтральные и полярные) делили колоночной хроматографией (КХ) на отдельные классы соединений. Смешанные фракции, содержащие 2 или более класса, рехроматографировали препаративной ТСХ. Липиды идентифицировали по качественным реакциям, сравнением хроматографической подвижности с модельными образцами, по данным: ИК-, УФ-, ЯМР 'Й- и |3С-спектров, химическим превращениям.

Для анализа брали измельченные воздушно-сухие семена. Нейтральные липиды (HJI) выделяли экстракцией летролейным эфиром (табл. 1).

Таблица 1

Состав нейтральных липидов семян Viburnum opulus L.

Классы Содержание

№ % от массы % от массы

в/с сырья НЛ

Нейтральные липиды 11.70

1. Каротиноиды следы следы

2. Сложные эфиры тритерпеновых соединений (СЭТС) 0.16 1.4

3. Метиловые эфиры жирных кислот (МЭЖК) 0.04 0.3

4. Триацилглицериды (ТАГ) 9.97 89.6

5. Свободные жирные кислоты (СЖК) 0.30 2.7

6. Высокомолекулярные жирные спирты (ВЖС) 0.11 1.0

7. Диацилглицериды (ДАГ) 0.26 2.4

8. Стерины 0.13 ' 1.2

9. Моноацилглицериды (МАГ) 0.15 1.4

Как видно из таблицы, в масле преобладают омыляемые компоненты. Основным классом НЛ, как и во всех растительных маслах, являются ТАГ (до 90%).

Известно, чго любое растительное масло, кроме основных липидных, содержит в небольших количествах липофильные компоненты, находящиеся как в свободном виде, так и в связанном - в виде СЭТС. В нашем случае - это ВЖС и сгерины. Идентификацию ВЖС осущеавляли методами: ИК-спек гроскопии, хромато-масс-спектромегрии, получением ацетильных производных. Полученные данные свидетельствовали о том, что основными компонетами были спирты нормального строения: тетракоэан-1-ол, гексакозан-1-ол и октакозан-1-ол. Минорные компоненты представлены докозан-1-олом, пентакозан-1-олом и гешакозан-1-олом (табл. 2).

Хромато-масс-спектрометрический анализ фракции свободных стеринов указывал на наличие трех основных компонентов. Главным являлся р-ситостерин ([М]+414). Его масс-

спектр практически был идентичен таковому, описанному в литературе. Аналогичная картина наблюдалась и для кампестерина ([М]+ 400). Третий компонент с т/г 412 согласно масс-спектромегрическому распаду и литературным данным соответствовал изофукостерину.

Таблица 2

Состав липофильных компонентов нейтральных липидов семян Viburnum opulus L.

Липофильные компоненты Свободные, % Связанные, %

Высокомолекулярные жирные спиты (ВЖС1а

Основные компоненты:

1. С 24 (тегракозан-1 -ол) 19.4 -

2. С 26 (гексакозан-1-ол) 59.0 -

3. С 2g (октакозан-1 -ол) 17.1 -

Минорные компоненты:

4. С22 (докозан-1 -ол) 0.3 -

5. С25 (нентакозан-1-ол) 2.8 -

6. С27 (гептакозан-1 -ол) 0.7 -

7. С31 (гентриаконтан-1-ол) следы -

8. С34 (тетратриаконтан-1-ол) следы -

Стерины (4,4 -десметилстеролы)6 14.4е

1. р-ситостерин 76.5 87.2

2. изофукостерин 13.0 -

3. кампестерин 5.0 -

4. стигмастерин - 5.6

5. холестерин - 3.3

6. стигмастан-3-ол - 3.9

7. неидентифицированный 5.5 -

стерин с fMl+410

Тритерпеновые спирты (4.4 -лиметилстеролыУ 29.3е

1. а-амирин - 65.1

2. Р-амирин - 30.8

3. лупеол - 4.1

1 - от массы ВЖС; ь - от массы стеринов; е - от массы СЭТС; " - от массы тритерпеновых спиртов.

В продуктах гидролиза СЭТС были обнаружены жирные кислош и тритерпеновые соединения (ТС) - стерины и тритерпеновые спирты. Их идентификацию осуществляли хромато-масс-епектрометрическим методом. В составе стеринов идентифицировали: ¡3-ситостерин - главный компонент, в значительно меньших количествах присутствовали стигмастерин и холестерин. Качественный набор связанных и свободных стеринов семян калины отличался тем, что во втором случае присутствовал кампестерин вместо холестерина в первом. Тритерпеновые спирты состояли из а-амирина (основной компонент), р-амирина и лупеола. Наличие этих спиртов подтвердили получением ацетильных производных и хромато-масс-спектрометрическим анализом последних.

В жирных кислотах (табл. 3) наибольшими по содержанию во всех классах, за исключением СЭТС, являлись ненасыщенные олеиновая (18:1) и линолевая (18:2) кислоты.

Таким образом, масло семян калины можно отнести к высоконенасыщенному (до 97% ненасыщенных ЖК), по соотношению кислот 18:1, 18:2 и 16:0 оно близко к пищевым растительным маслам, например, подсолнечному и кукурузному.

Таблица 3

Состав жирных кислот ацилсодержащих классов нейтральных липидов семян Viburnum opulus L (%)

№ Кислоты £нл Классы

СЭТС МЭЖК ТАГ СЖК ДАГ МАГ

I. 12:0 сл. 0.4 сл сл сл 0.6 •2.6

2. 14:0 0.5 1.2 0.8 0.1 сл 0.8 2.7

3. 15:0 сл сл. сл - - - -

4. 16:0 2.0 62.2 14.1 1.9 4.0 3.7 4.0

5. 16:1 CII - - сл 0.3 0.5 0.7

6. 18:0 0.6 3.4 1.8 0.5 1.0 0.9 1.0

7. 18:1 42.5 27.1 55.3 44.3 32.0 36.9 36.9

8. 18:2 52.6 2.0 23.6 51.7 57.6 53.6 49.9

9. 18:3 1.8 - 3.3 1.5 5.1 3.0 2.2

10. 20:0 сл. 3.7 - - - - -

11. 21:0 сл. - 1.1 - - - -

ЖК 3.1 70.9 17.8 2.5 5.0 6.0 10.3

^иенасыш. ЖК 96.9 29.1 82.2 97.5 95.0 94.0 89.7

Для выделения полярных липидов (ПЛ) остаток после удаления НЛ экстрагировали смесью СНСЬ МеОН и КХ на силикагеле выделили ПЛ, которые разделили на фосфо-(ФЛ) и гликолипиды (ГЛ) В ФЛ идентифицировали 7 классов (табл. 4).

В Г Л - моногалактоз^1Диациш;шцериды (МГДГ) и дигалактозшгдиацилглицериды (ДГДГ), а также фракцию терпеновых кислот, которые были представлены двумя соединениями, олеаноловой и урсоловой кислотами примерно в равных соотношениях (50.5% и 49.5% соответственно) (табл 4). Последние идентифицировали в виде метиловых эфиров с помощью ГЖХ-анализа и по спектрам ЯМР 'Н и 3С, которые соответствовали таковым описанных соединений

Таблица 4

Состав полярных липидов семян Viburnum opulus L.

№ Классы Содержание, %

Фосфапипиды 0.1а

1. N-ацилфосфатидилэтаноламин + НК* (N-ацил-ФЭ) 27.1*

2. Фосфатидилглицерин (ФГ) 12.0е

3. Кардиолипин (КЛ) 9.2®

4. Фосфатидилэтаноламин (ФЭ) 18.4В

5. Фосфатидилхолин (ФХ) + 28.5®

Фосфатидилинозит (ФИ)

6. Лизо-фосфатидилхолин (лизо-ФХ) 4.8®

Гликолипиды 0.3"

1. Моногалакгозилдиацишлицериды (МГДГ) 41.6е

2. Дигал акто ли диацилглш !.ериды (ДГДГ) 27.81,

3. Терпеновые кислоты 30.6е

(урсоловая и олеаноловая)

' - неидентифшдаровашгый компонент; а - от массы в/с сырья, ® - от массы ФЛ, 0 - от массы ГЛ.

Состав жирных кислот ФЛ (табл. 5) отличается от такового НЛ как набором ЖК, так и их соотношением в отдельных фракциях В ФЛ дополнительно идентифицированы 15:0, 151, 162, 171 кислоты Необходимо отметапъ достаточно высокое содержание насыщенных кислот во всех классах ФЛ по сравнению с НЛ за счет значительного увеличения содержания 16:0 кислоты Однако так же, как и в большинстве классов НЛ, во всех фракциях ФЛ превалирует 18 2 кислота и только в лизо-ФХ ее содержание сравнимо с содержанием кислоты 16 0.

Таблица S

Состав жирных кислот ацилсодержащих классов полярных липидов семян Viburnum opulus L{%)

№ Кислоты Классы

Ъ ©л N-ацил ФЭ ФГ КЛ ФЭ ФХ+ ФИ Лизо-ФХ £ I л МГДГ ДГДГ

1. 12:0 0.5 0.2 0.9 1.2 2.0 1.6 1.7 - - -

2 14:0 0.5 0.4 1.1 1.3 0.7 0.9 0.6 1.1 2.1 1.7

3. 15:0 - 0.5 0.4 0.2 - 0.2 0.2 2.8 - 0.7

4. 15:1 - 0.7 - - - 0.6 - - - -

5. 16:0 13.9 8.3 17.3 25.6 12.0 17.3 31.7 6.4 10.9 12.6

6. 16:1 0.6 0.8 1.0 1.3 1.0 1.2 2.9 0.9 следы 0.7

7. 16:2 - - - - - - 3.2 - - -

8. 17:1 - 0.7 - - - 2.1 - 1.0 1.4 0.5

9. 18:0 2.6 1.8 2.3 5.8 4.8 3.9 5.8 1.7 2.4 4.2

10. 18:1 24.7 27.1 25.8 18.0 24.4 23.0 17.3 31.7 31.8 33.0

11. 18:2 55.2 57.6 48.9 42.9 50.2 46.0 34.4 43.2 46.5 37.0

12. 18:3 2.0 1.9 2.3 3.7 4.9 3.2 2.2 8.9 1.5 5.6

13. 20:0 - - - - - - - 2.3 3.4 4.0

Енас.ЖК 17.5 11.2 22.0 34.1 19.5 23.9 40.0 14.3 18.8 23.2

£)гявс ЖК 82.5 88.8 78.0 65.9 80.5 76.1 60.0 85.7 81.2 76.8

В отличие от аципсодержахцих фракций НЛ и ФЛ, в ГЛ (табл. 5) идентифицирована кислота 20 0. В количественном соотношении отдельных кислот МГДГ и ДГДГ мало отличаются друг от друга, за исключением 18:2 кислоты, содержание которой в МГДГ значительно больше Также как и в ФЛ, в ГЛ наблюдается повышенное содержание насыщенных кислот, в основном за счет 16 0 кислоты.

2.1.2 Пигменты семян калины обыкновенной

Для выделения пигментов оставшийся после исчерпывающего удаления НЛ шрот экстрагировали этиловым спиртом Полученный экстракт (112% от веса в/с семян) представлял собой остатки липидов и сумму пигментов Для частичного их разделения на составляющие компоненты сгущенный экстракт разбавляли горячей водой и при небольшом нагреве переводили в раствор Последовательной реэкстракцией водного раствора последнего петролейным эфиром, диэтиловым эфиром, этилацетатом и бутанолом получили 4 фракции Диэтилэфирную, эти [ацетатную и бутанольную фракции проверили на антиоксидантную (аширадикальную) активность методом хемилюминесценции, который широко используется как экспресс-анализ для тестирования синтетических и природных органических объектов Из исследуемых образцов лишь этилацетатная фракция проявляла заметную ингибирующую активность.

Константы скорости взаимодействия (К7) а-токоферола, пигментов семян калины и ионола с пероксильными радикалами этилбензола были равны соответственно 2.8-106, 2.5-105 и 2.4-104 л/моль-сск, что указывало на то, что ингибирующая активность пигментов калины выше ионола, но ниже а-токоферола.

2.1.3 Белки семян калины обыкновенной

Для выделения белка навеску муки семян калины подвергали щелочной экстракции, выход липид-белкового изолята составил 16 - 18% от массы сырья. Белковых веществ в изоляче содержалось 28 - 29% или ~6% от веса в/с сырья.

Определение аминокислотного состава показало, что в белке семян калины обыкновенной присутствует 15 аминокислот, из которых 6 - треонин, валин, изолейцин, лейцин, фенилаланин и лизин являются незаменимыми. А количество такой дефицшной в природных источниках аминокислоты, как лизин, выше, по крайней мере, в 2 раза рекомендованных ФАО/ВОЗ (табл. 6).

Биологическая ценность изолята, проверенная на инфузориях по ошошению к свежему липофильно высушенному коровьему молоку, составила 64%.

Таблица 6

Аминокислотный cociau кислотного гидролизата липид-белкового изолят семян Viburnum opului L.

№ Аминокислоты Содержание

% (моль) % (весовой)

1. Аспарагиновая 10.43 6.0

2. Треонин 4.52 2.3 (2.8)

3. Серии 7.3 3.3

4. Глутаминовая 22.60 14.3

5. Пролин 6.84 3.4

6. Глицин 10.20 3.3

7. Алании 7.65 2.9

8. Валин 4.87 2.5 (4.2)

9. Метионин - - (2.2)

10. Изолейцин 4.87 2.8 (4.2)

11. Лейцин 10.55 6.0 (4.8)

12. Тирозин 10.43 8.2 (2.8)

13. Фенилаланин 9.97 7.1 (2.8)

114. Гистидин 5.45 3.6

15. Лизин 14.72 9.3 (4.2)

16. Аргинин 3.94 3.0

Таблица составлена без учета триптофана и цис теина.

В скобках указаны рекомендации ФАО/ВОЗ (Всемирная организация здравоохранения).

Таким образом, на основании проведенных исследований установлено, что семена калины обыкновенной - ценный источник таких биологически активных компонентов, как липиды, пигменты и белки.

2.2 Липиды и липофильные компоненты плодов калины обыкновенной в процессе их созревания

2.2.1 Динамика накопления линидов в процессе созревания плодов калины обыкновенной

Изучена динамика изменения линидов в процессе созревания плодов калины обыкновенной.

Изучен классовый состав нейтральных и полярных липидов глико- и фосфолипидов, липофильных компонентов, а также изменение состава жирных кислот в течение всего периода развития плодов калины обыкновенной На стадиях ранней и средней зрелости плодов семе!и практически невозможно было отделить от мякоти, поэтому для исследования брали семена вместе с мякотью, предварительно показав, что в мякоти HJI составляли лишь 0.04%, а ПЛ отсутствовали вовсе Таким образом, можно утверждать, что изучаемые нами липиды содержатся в семенах.

Для исследования были отобраны образцы плодов калины на трех стадиях созревания: 1 1 месяц после цветения, II - 2.5 месяца, III - 4 месяца после цветения, т.е. начало, середина и конец биологического созревания. Первая стадия (I) - начало формирования плодов: плоды мелкие, зеленые, жесткие, косточка не отделяется; вторая стадия (II) - незрелые плоды плоды крупные, желтовато-зеленоватого цвета, косточка и околоплодная мякоть сформированы, но плохо отделяются друг от друга; третья стадия (III) - зрелые плоды крупные ярко-красные ягода со сформировавшейся околоплодной мякотью и косточкой

По мере созревашя вес плодов увеличивается с 9 5 г/100 шт (I) до 59 0 г/100 шт (III). Одновременно с этим возрастает количество липидов' 20 мг/100 пгг абсол сухих плодов -образец I, 300 мг/100 шт - И, 1300 мг/100 шт - III Причем скорость маслообразования в первой половине созревания семян выше Так, в образце II количество липидов в 15 раз выше, чем в образце I Во второй фазе развития (от П к ПГ) липиды синтезируются в 4 раза медленнее

Кислотное число (КЧ) на ранней стадии составляет 22 7 мг КОН и в процессе созревания уменьшается до 1 5 мг КОН в зрелых семенах Содержание каротиноидов увеличивается с 1 4 мг/% (I) до 4 0 мг/% (III).

Содержание всех групп липидов как в относительных, так и в абсолютных количествах по мере созревания плодов увеличивается (рис 1). Наиболее значительные изменения наблюдаются в НЛ в первой фазе развития (в период от стадии I к стадии И).

1 g т

В нейтральные липиды 1,4 7,2 15,8

□гликолипиды 0,5 1 1,1

■ фосфолилиды 0,03 0,11 0,14

степень созревания

Рис. 1 Динамика изменения групп липидов в процессе созревания плодов УИтгпит ори1и°> I.

2.2.2 Классовый состав липидов плодов калины обыкновенной в процессе созревания

В НЛ всех образцов идентифицировали 8 классов соединений (табл 7) В рапнезрелых шюдах калины НЛ практически на 80% состоят из линорастворимтлх компонентов (72.8% СЭТС + 4 4% стеринов). Основным классом на ранней стадии развитая плодов являются сложные эфиры тритерпеновых соединений, содержание которых к концу созревания уменьшается до 2.0%, а количество триацилглицеридов постоянно растет, достигая максимума в зрелых плодах

Скорость их накопления наивысшая в период перехода от стадии I к стадии II, количество ТАГ за это время увеличивается в 33 раза (от 1 9% до 63 1%). Содержание всех остальных классов НЛ к концу созревания плодов уменьшается; для диацилглицеридов лот процесс идет неравномерно: в период перехода от стадии I к стадии II количество ДАТ" увеличивается в 2 раза, а затем снижается Содержание моноацилглицеридов значительно на ранней стадии развития плодов Эти данные дают основание предполагать, что в развивающихся плодах калины биосинтез ТАГ может осуществляться с участием промежуточных МАГ и ДАТ.

Таблица 7

Состав нейтральных липидов плодов Viburnum opulus L разной степени зрелости

№ Классы % от массы НЛ

I П Ш

1. Сложные эфиры тритерпеновых соединений (СЭТС) 72.8 27.7 2.0

2. Метиловые эфиры жирных кислот (МЭЖК) 5.8 0.8 0.1

3. Триацилглицериды (ТАГ) 1.9 63.1 93.1

4. Свободные жирные кислоты (СЖК) 6.0 1.2 0.8

5. Тритерленовые спирты (ТС) 0.9 0.7 0.6

6. Диацилглицериды (ДАТ) 1.6 3.2 1.3

7. Стерины 4.4 2.1 1.1

8. Моноацилглицериды (МАГ) 6.6 1.2 1.0

Свободные кислоты не являются определяющим классом липидной суммы раннезрелых плодов, и сравнимы по количеству с МАГ и МЭЖК. Последние до некоторой степени, возможно, являются продуктом метилирования свободных жирных кислот (СЖК) в процессе экстракции липидов смесью растворителей, содержащих метанол. Уменьшение содержания СЖК в процессе созревания плодов подтверждается снижением показателя КЧ Динамика изменения основных классов НЛ развивающихся плодов калины представлена на рис 2

Для каждого образца был изучен компонентный состав липофильных соединений -стеринов и тритерпеновых спиртов, находящихся в НЛ как в свободном виде, так и в составе СЭТС. Идентификацию свободных спиртов осуществляли методом масс-спегсгрометрии в сочетании с хроматографическим разделением, связанных - тем же способом, но после щелочного гидролиза соответствующих фракций СЭТС, выделяя спирты как неомыляемые компоненты с последующей очисткой препаративной ТСХ. Коэффициент достоверности 0 всех идентифицированных тритерпеновых соединений был в пределах от 90 до 97%.

степень созревания

□ СЭТС ВСЖК ИМАГ ИДАГ ЕЗТАГ

Рис. 2. Динамика изменения состава нейтральных липидов в процессе созревания плодов Viburnum opulus L.

Качественный состав дипофипьных соединений как в свободном, так и в связанном виде усложняется по мере созревания плодов (табл 8) В стеринах основным является Р-ситостерин, его количество в процессе созревания уменьшается; снижается содержание сгигмастерина, и в зрелых плодах связанный стигмастерин вообще не обнаруживается; кампестерин меняется незначительно, а содержание холестерина как свободного, так и связанного возрастает. Увеличивается количество связанного изофукостерина. Свободный изофукостерин, а также стигмастан-3-ол как в свободном, так и в связанном виде присутствуют только в зрелых плодах

Таблица 8

Состав липофияьных компонентов, содержащихся в свободном и связанном виде в нейтральных липидах плодов Viburnum opulus L. разной степени зрелости

Свободные, % Связанные, %

Тритерпеновые соединения I П Ш I П Ш

4,4'-десметилстеролы (стерины)"

1. р-ситостерин 94.3 93.2 88.7 87.6 82.0 76.1

2. кампестерин 4.3 4.5 4.5 6.3 5.8 5.6

3. изофукостерин - - 3.2 3.6 8.8 8.1

4. стигмастерин 1.4 1.6 0.8 0.8 сл. -

5. холестерин сл 0.7 0.5 1.7 3.4 5.7

6. стигмастан-3-ол - - 2.3 - - 4.5

4,4 '-диметилстеролы

(тритерпеновые спирты)6

1. а-амирии 78.9 88.2 71.4 75.2 80.8 64.9

2. р-амирин 21.1 11.8 15.0 22.7 17.2 21.7

3. 24-метшгек-циклоартаноя - - 11.7 - сл. 11.8

4. лупеол - - 1.9 2.1 2.0 1.6

" - % от общей массы стеринов; - % от общей массы тритерпеновых спиртов

Доминирующим компонентом тритерпеновых спиртов и свободных, и связанных на всех стадиях развития плодов калины является а-амирин, содержание которою к концу созревания плолов уменьшается, также как и (3-амирина. 24-метиленциклоартанол в свободном и в связанном виде и лупеол в свободном виде присутствуют только в зрелых плодах.

В фосфолипидах (табл. 9) на ранней стадии зрелости идентифицировано 7 классов соединений. Качественный набор компонентов по мере созревания плодов усложняется и в зрелых обнаружено еще 2 класса - фосфатидилэтаноламин (ФЭ) и его лизо-аналог (лизо-ФЭ). Фосфатидилсерин (ФС) идентифицировали только в плодах средней степени зрелости.

Таблица 9

Состав полярных липидов плодов Viburnum opulus L. разной степени зрелости

Классы Содержание %

I II III

Фосфолипиды"

1. N-ацил-фосфолипиды (N-ацил-ФЛ) 23.1 10.2 4.6

2. Кардиолипин (КЛ) 1.0 1.9 3.9

3. Фосфатидилглицерин (ФГ) 0.2 1.6 2.0

4. Фосфатидилэтаноламин (ФЭ) - - 21.2

5. Фосфатидилхолин (ФХ) 68.2 69.6 303

6. Лизо-фосфатидилэтаноламин (лизо-ФЭ) - - 2.7

7. Лизо-фосфатидилхолин (лизо-ФХ) 2.5 1.3 1.3

8. Неидентифицированный компонент - 8.3 10.6

9. Фосфатидилсерин (ФС) - 2.6 -

10.Фосфатидилилинозит (ФИ) следы 0.7 19.0

11. Фосфатидная кислота (ФК) 5.0 3.8 4.4

Гликолипиды"

1. Ацил-моногалактозилдиацилглицериды (Ас-^МГДГ) 13.1 24.2 21.4

2. Моногалактозилдиацилглицериды (МГДГ) 34.2 34.9 40.6

3. Дигалактозилдиацилглицериды (ДГДГ) 20.8 29.6 25.0

4. Сульфохиновозилдиацилглицериды (СХВДГ) 31.9 11.3 13.0

1 - % о I массы ФЛ; 6 - % от массы ГЛ.

Содержание каждого класса ФЛ оценивали снектрофотометрическим методом. Основным во всех образцах был фосфатидилхолин (ФХ), количество которого в процессе созревания уменьшалось примерно вдвое. Уменьшалось и содержание минорного компонента - лизо-фосфатидилхолина (лизо-ФХ), в го время как содержание кардиолипина (КЛ), фосфатидилинозита (ФИ) и фосфатидилглицерина (ФГ) возрастало, а фосфатидной кислоты (ФК) практически не менялось.

Из всех трех образцов гликолипидов выделено и идентифицировано 4 компонента (табл. 9). Наибольшим по содержанию на всех стадиях созревания являлись МГДГ, их количество в процессе биосинтеза возрастает. Содержание Лс-МГДГ и ДГДГ сначала увеличивается, а затем уменьшается, хотя и остается выше первоначального. Содержание СХВДГ в период перехода от стадии I к стадии И падает почти втрое, а затем немного повышается.

2.2.3 Состав жирных кислот липидов плодов калины обыкновенной в процессе созревания

В липидах плодов калины обыкновенной доминирующими компонентами жирных кислот являются 18:1 и 18:2 и в малых количествах (<2%) присутствует 16:0. В данном исследовании мы попытались проследить, как меняется жирнокислотный состав различных классов липидов плодов калины обыкновенной по мере их созревания.

Качественный набор жирных кислот по мере созревания плодов упрощается во всех классах НЛ и ГШ (табл. 10, 11). В раннезрелых плодах в Хнл (табл. 10) идентифицировано 12 ЖК, к концу созревания их количество сокращается до 8 (табл. 10, рис. 3).

Как видно (табл. 10, 11, рис. 3), во всех липидных классах наблюдается одна и та же закономерность: по мере созревания плодов происходит снижение содержания насыщенных кислот (16:0, 18:0) и накопление ненасыщенных (18:1 и 18:2).

Пальмитиновая кислота в значительных количествах содержится во всех классах НЛ и ПЛ лишь на ранних стадиях развития плодов и но мере их созревания резко уменьшается, заметным ее содержание остается лишь в ДЛГ и СЭТС. Характер изменения минорных насыщенных кислот имеет примерно ту же закономерность, за исключением 22:0 в СЭТС и в ГШ.

В динамике изменения ненасыщенных 18:1 и 18:2 кислот наблюдается обратная тенденция, своего максимального значения они достигают к моменту зрелости плодов. Что касается линоленовой (18:3) кислоты, в заметных и значительных количествах она идентифицирована во всех классах липидов только на ранних стадиях (образец I) и по мере созревания содержание ее резко надает, в отдельных классах липидов образца Ш она отсутствует вообще. Исключение составляют только СЭТС, в которых содержание этой кислоты практически не изменяется.

На основании полученных и литературных данных можно предположить, что и в нашем случае 16:0 и 18:0 кислоты принимают участие в биосинтезе ненасыщенных 18:1 и 18:2 кислот. Скорость образования 18:1 кислоты в липидных классах, имеющих отношение к биосинтезу ТАГ (ДАГ, МАГ и сами ТАГ), а также в ГЛ и ФЛ наибольшая от I к II стадии созревания. В этот же период происходит и наибольшее накопление липидов. Доминирующей ненасыщенной кислотой в зрелых плодах НЛ является 18:1 кислота. Что же касается линолевой кислоты, то наибольшее ее накопление от I к II наблюдается только в СЖК, МАГ и МЭЖК. В ПЛ ее содержание постоянно увеличивается, в ГЛ зрелых плодов ее количество сравнимо с 18:1, а в ФЛ - линолевой кислоты в образце III почти в 4 раза больше олеиновой. К моменту зрелости плодов значительное количество насыщенных кислот (табл. 10,11) остается в СЭТС, СЖК, ДАГ, МАГ, а также в ПЛ, однако, содержание этих классов липидов в зрелых семенах очень незначительно, что не оказывает большого влияния на общее содержание насыщенных и ненасыщенных кислот.

Таким образом, на основании проведенного исследования установлено, что по мере созревания плодов калины обыкновенной происходит накопление как нейтральных, так и полярных: глико- и фосфолипидов, причем скорость образования наивысшая в первый период (от I к II) развития плодов, в это же время происходит и наибольший рост содержания триацилглицеридов. Насыщенные жирные кислоты в больших количествах присутствуют в ацилсодержащих липидах только на ранних стадиях развития, и по мере созревания плодов содержание их падает, а ненасыщенных - увеличивается. В ТАГ, ДАГ, МАГ, ГЛ и ФЛ в начале созревания присутствует в больших количествах линоленовая кислота, содержание которой уменьшается почти до следовых в зрелых плодах, что может являться одним из диагностических признаков зрелости плодов калины. Эти данные находятся в соответствии с литературными но биосинтезу липидов в плодах и семенах высших растений.

Таблица 10

Состав жирных кислот ацилсодержащих классов нейтральных липвдов плодов Viburnum opulus L.

разной степени зрелости (%)

образцы классы НЛ жирные кислоты

12:0 14:0 15:0 16:0 161 170 18:0 18:1 18:2 18:3 21:0 22:0 ^насыад ^tesiac

I II III Енл 0.4 0.1 сл. 1.8 0.6 сл. 0.3 сл. 47.3 8.5 1.8 сл. 02 сл сл. 2.9 24.5 50.7 53.4 10.6 38.8 44.8 5.4 сл. сл. 4.9 сл 1 7 1 3 сл. 59 5 10.5 1.8 40.5 89.5 98.2

I II III сэтс 0.4 сл. 1.0 1 3 1.7 03 сл 55.4 46.8 26.6 сл. 3.3 сл. сл 4.1 2.0 17.2 27.9 32.5 10.7 11.4 26.4 3.4 4.1 3.9 42 сл. 6.5 8.9 68 7 56.6 37.2 31.3 43.4 62.8

I II III мэжк 0.5 0.4 40 3.2 сл. 46 39.5 20.9 7.8 - 4.9 сл сл. 15.7 33.9 62.5 12.1 26.8 29.7 55 4.6 сл. 5 1 28 8 1 7 4 сл. 66 7 34.7 7.8 33.3 65.3 92.2

I II III ТАГ 0.4 сл. сл 10 0.3 сл. 05 сл. 19.4 8.9 1.4 0.4 0.2 2.5 26.1 51.8 56.9 32.4 37.9 38.5 17.3 сл. 1.1 - сл. 11 1 9 23 8 10.3 3.5 76.2 89.7 96.5

I II III сжк 0.3 сл. сл. 0.4 0.5 2.1 0.3 62.7 25.0 8.1 _ сл. сл 0.7 сл 27.0 31.8 53.4 6.6 37.8 35.7 2.7 сл. сл. сл. 4.9 63.7 30.4 10.9 36.3 69.6 89.1

I II III ДАТ сл. 0.2 1.8 0.6 сл. 09 03 41.4 22.7 19.8 - 0.9 1.7 3.7 сл. 12.6 47.2 51.5 23.7 24.6 22.8 15.0 2.7 3.3 - сл. 36 48.7 25.5 23.4 51.3 74.5 77.6

I Я III МАГ 0.3 0.3 сл. 59 0.3 сл. 3.6 0.5 35.4 22.7 9.0 сл. 3.4 7.1 2.3 5.1 0.6 10.2 51.6 55.7 7.1 16.9 33.0 27.7 1.3 - 55.0 31.5 11.3 45.0 68.5 88.7

Нейтральные липиды

60 .......- -

I И III

стадии созревания

Гликолипиды

стадии созревания

Фосфолипиды

60

3 40

I 0}

-о о о

20

Яг^.

стадии созревания

-•■16:0 —а -18:1 —» -18:2 ——18:3

Рис. 3. Динамика изменения основных жирных кислот в группах липидов в процессе созревания плодов Viburnum opulus L

Таблица 11

Суммарный состав жирных кислот гликолииидов и фосфолипидов плодов Viburnum opulus L разной степени зрелости (%)

№ Кислоты £ гл Е фл

I II [П I И III

1. 12:0 1.3 сл. сл. 0.2 сл. 0.2

2. 14:0 2.3 2.0 0.8 1.0 0.9 0.7

3. 15:0 1.8 сл. 0.2 0.5 - -

4. 16:0 21.4 15.0 10.8 50.8 34.8 25.8

5. 16:1 2.2 сл. сл. сл. - -

6. 17:0 5.0 сл. 0.9 4.1 0.9 0.5

7. 18:0 3.7 сл. сл. 3.8 сл. сл.

8. 18:1 8.6 31.9 34.3 7.6 37.2 14.1

9. 18:2 27.9 34.3 38.6 13.6 21.7 53.9

10. 18:3 16.6 8.5 4.5 8.3 1.9 1.5

11. 21:0 9.2 2.7 - 9.1 - -

12. 22:0 сл. 5.6 9.9 1.0 2.6 3.3

^•насыщ ЖК 44.7 25.3 22.6 70.5 39.2 30.5

^ненасыщ ЖК 55.3 74.7 77.4 29.5 60.8 69.5

2.3 Влияние пониженной температуры на состав липидов семян калины обыкновенной

Для установления оптимальных сроков сбора плодов калины обыкновенной было изучено влияние пониженной температуры окружающей среды на липидный состав семян.

С этой целью были собраны плоды калины обыкновенной в ноябре месяце, когда внешняя температура понижалась до -10 - 20°С (образец П). Изучали состав: нейтральных, полярных: глико- и фосфолипидов. липофильных компонентов, а также состав жирных кислот. Полученные результаш сравнивали со зрелыми семенами из плодов, собранных в октябре до заморозков (образец Г) (см. главу 2.2).

После заморозков за счет усыхания околоплодника вес плодов снижался с 59.0 г (образец I) до 51.0 г (образец II). Несколько увеличивались масличность семян: 15.4% от массы абсолютно сухих семян в I и 16.0% в П, показатель КЧ: 1.5 мг КОН (I) и 2.5 мг КОН (II) и уменьшалось содержание каротиноидов: с 4.0 мг/% (I) до 3.4 мг/% (П)

В НЛ (табл. 12) образца II значительно снижалось содержание липофильных компонентов в свободном и связанном виде (тритерпеновые спирты, стерины, СЭТС), а также ГАГ и МАГ. Количество ДАГ увеличивалось в 2 раза и появлялся новый класс соединений - оксиглицериды (11%), не обнаруженный нами в семенах, собранных до заморозков.

Таблица 12

Состав нейтральных липидов ссмян Viburnum opulus L. Образец 1 - плоды, собранные до заморозков; Образец II - плоды, собранные после заморозков

№ Классы % от массы НЛ

Образец I Образец II

1. Сложные лфиры тритерпеновых соединений (C1TC) 2,0 0,7

2. Mci иловые эфиры жирных кислот (МЭЖК) 0,1 0,1

3. Триацилглицериды (ТАГ) 93,1 83,2

4. Свободные жирные кислоты (СЖК) 0,8 0,9

5. Тритсрпеновые спирты (TTC) 0,6 сл.

6. Стсрины 1,1 1.0

7. Лиацилглицериды (ДАГ) 1,3 2,6

8. Оксиглицериды - 10,9

9. Моноацилглицериды (MAI") 1,0 0,6

В литературе существует мнение, чго при охлаждении в растениях активизируются ферменты - ацилгидролазы и мембранные липиды первыми принимают на себя удар, подтверждением этого явилось значительное снижение в образце II содержания ГЛ и ФЛ, количество которых уменьшилось соответственно в 10 и в 1000 раз (табл. 13), т.е. ФЛ разрушаются практически полностью.

Таблица 13

Состав полярных липидов семян Viburnum opulus L.

Образец I - плоды, собранные до заморозков;

Образец П - плоды, собранные после заморозков

Классы Содержание, %

Образец I Образец II

Фосфолипиды 0.14* 0.7x10"3*

1. N-ацил-фосфолипиды (N-ацил-ФЛ) 4.6 43.4

2. Кардиолипин (КЛ) 3.9 12.1

3. Фосфатидилглицерин (ФГ) 2.0 33.7

4. Фосфатидилэтаноламин (ФЭ) 21.2 4.8

5. Фосфатидилхолин (ФХ) 30.3 3.6

6. Лизо-фосфатидилэтаноламин (лизо-ФЭ) 2.7 следы

7. Лизо фосфатидилхолин (лизо-ФХ) 1.3

8. Неидентифицированный компонент 10.6 следы

9. Фосфатидилинозит (ФИ) 19.0 следы

10. Фосфатидная кислота (ФК) 4.4 2.4

Гликолипиды IX 0.13*

1. Ацил-моногалактозилдиацилглицериды (Ас-МГД1 ) 21.4 18.6

2. Моногалактозилдиацилглицериды (МГД1 *) 40.6 30.3

3. Дигалактозилдиацшплицериды (ДГДГ) 25.0 38.9

4. Сульфохиновозилдиацилглицериды (СХВДГ) 13.0 12.2

* - от массы в/с сырья.

Заморозки оказывают влияние и на классовый состав мембранных липидов (табл. 13). В ГЛ образца II снижалось содержание гликолипидов, содержащих моносахариды: Ас-МГДГ, МГДГ и СХВДГ. Причем, содержание МГДГ уменьшалось на 10% и почти на 14% возрастало количество гликолипидов с дисахаридами - ДГДГ.

Снижение содержания ФХ, ФЭ и ФИ (соответственно в 10 раз, в 4 раза и в 19 раз) и возрастание количества ФГ и диФГ (кардиолипина) в 16 раз и в 3 раза соответственно наблюдалось в ФЛ образца II (табл. 13). Количество ФК уменьшилось в 2 раза.

В составе ЖК апилсодержащих классов НЛ семян, собранных после заморозков, очень значительных изменений по сравнению с семенами, собранными до того, не наблюдалось.

В ГЛ и ФЛ значительные изменения были в содержании насыщенных и ненасыщенных ЖК (табл. 14). В образце II общий уровень насыщенных ЖК увеличивался в 2 раза как в ГЛ, так и в ФЛ. В ГЛ содержание 16:0 возрастало в 2 раза, а 18:0 - в 22 (т.е. о г следовых до 22%); в ФЛ количество 16:0 не менялось, а 18:0 увеличивалось от следовых до 36%. Изменение содержания олеиновой кислоты практически не происходило, а содержание линолевой снижалось в ГЛ в 2.5 раза, в ФЛ в 6 раз. Количество линоленовой (18:3) кислоты в ФЛ возрастало в 4 раза.

Таблица 14

Суммарный состав жирных кислот гликолипидов и фосфолипидов семян Viburnum opulus L (%) Образец I - плоды, собранные до заморозков;

Образец II - плоды, собранные после заморозков

№ Кислоты 2 ГЛ Z фл

Образец I Образец II* Образец 1 Образец II

12:0 сл. 0.4 0.2 сл.

2. 14:0 0.8 0.7 0.7 сл.

3. 15:0 0.2 сл. - -

4. 16:0 10.8 20.4 25.8 26.6

5. 16:1 сл. сл. - -

6. 7. 17:0 0.9 сл. 0.5 сл.

18:0 сл. 22.3 сл. 36.4

8. 18:1 34.3 35.2 14.1 18.9

9. 18:2 38.6 14.7 53.9 8.9

10. 18:3 4.5 4.7 1.5 6.6

11. 20:0 - 1.6 - -

12. 22:0 9.9 - 3.3 2.6

^иасыш ЖК 22.6 45.4 30.5 65.6

^ненасыш. ЖК 77.4 54.6 69.5 34.4

* - кроме указанных, в жирных кислотах ГЛ образца II присутствовала

9-оксооктадекановая кислота.

2.3.1 Структура оксикислот

В ИК-спектре оксиглицеридов наблюдались полосы колебаний ОН-группы при 3200 -3600 см"1 и сложноэфирной группы при 1744 см"'. В ИК-спектре продукта мягкого щелочного гидролиза сохранилась полоса колебания, соответствующая ОН-группе, исчезла полоса, характерная для сложноэфирной группировки, и появилась при 1714 см"1, характерная для валентных колебаний карбонильной группы карбоновых кислот.

На ТСХ продукта гидролиза присутствовало 2 пятна, одно из которых соответствовало но своей подвижности СЖК, а другое - рицинолсвой кислоте (12-окси-октадец-9-еновой), выделенной из касторового масла. После метилирования были получены МЭ нормальных жирных кислог (МЭНЖК) и МЭ, Rf которых совпадал с R/МЭ рицинолевой кислоты. Полученные продукты метилирования с помощью I П'СХ разделили на МЭПЖК, которые идентифицировали с помощью ГЖХ-анализа, и МЭ предположительно оксикислот. Состав МЭНЖК (%) был представлен: 12:0 (0.4); 14:0 (0.2); 15:0 (сл.); 16:0 (11.8); 17:0 (0.2); 18:0 (сл.); 18:1 (59.3); 18:2 (22.6); 18:3 (1.7); 22:0 (3.8) кислотами.

В УФ-спектре МЭ оксикислот наблюдалось поглощение при 232 им, характерное для сопряженной системы двойных связей (диены). Получение силиловых производных оксикислот привело к резкому изменению их полярности Для идентификации оксикислот, входящих в состав оксиглицеридов, воспользовались хромато-масс-спектрометрическим методом анализа. Оксикислогы анализировали в виде ТМС-производных их МЭ.

Согласно данным хромато-масс-спектрометрического анализа оксикислогы представляли собой достаточно сложную смесь продуктов окисления. Из-за сложности состава проидентифицировать удалось только основные компоненты (рис. 4): 1. 5-оксо-9-гидроксиоктадека-6,12-диеновая; 2. 5-оксо-11-гидроксиоктадец-9-еновая; 3. 15,17-октадекадиеновая кислоты, а также насыщенные ди- и тригидроксикислоты: 4. 9,10-дигидроксиоктадекановая; 5. 9,10,18-тригидроксиоктадекановая; 6. 9,10,11-тригидрокси-октадекановая и 7. 10,11,12-тригидроксиоктадекановая кислоты. Обнаруживаются также продукты деградации жирных кислот разной степени ненасыщенности: 9-оксононановая, октандикарбоновая, нонандикарбоновая и дскандикарбоновая кислоты.

В масс-спектре кислоты 1 наблюдались основные пики с m/z 73 (100%), 129 (40%), 227 (70%), 271 (35%). Для идентификации кислоты важны пики с m/z 271,227,129. Анализ спектра указывал на наличие в соединении двух двойных связей - карбонильной и исходной - гидроксильной группы у С<>. Тот факт, что пик иона с m/z 227 более чем в 2 раза интенсивнее пика с m/z 271, говорил о наличии одной из двойных связей в аллильном положении к C-OTMS-группировке у Сб и С7. Пик иона с m/z 271 обусловлен разрывом связи С9 и С10. Вторая двойная связь, учитывая небольшую интенсивность пика с m/z 271, не находится в аллильном положении к исходной гидроксильной группе и, скорее всего, находится между 12 и 13 углеродными атомами. Пик иона с m/z 129, вероятно, обусловлен наличием карбонильной группы у Cs.

Аналогичным образом идентифицировали кислоту 2 с основными характеристичными пиками с m/z: 73 (100%), 299 (50%), 129 (25%). В масс-спектре кислоты 3 наблюдались пики с m/z: 294 [М]+(25%), 263 [М-31]+ (10%), 220 1М-31-43Г (5%) и пики фрагментных ионов с m/z: 95 (45%), 67 (100%), что дало основание идентифицировать ее как 15,17-октадекадиеновую кислоту.

В масс-спектре кислоты 4 основными были пики с m/z: 73 (100%), 215 (30%), 259 (30%). Одинаковая интенсивность пиков с m/z 215 и 259 указывала на наличие в соединении двух OII-групп в положении 9 и 10.

Для кислоты 5 пики с m/z: 259 (70%) и 303 (30%) можно было объяснить исходя из структуры триоксидекановой кисло [Ы с расположением исходных гидроксильных трупп в положении 9, 10 и 18. Неучастие терминальной гидроксильной 1руипы во фрагментации может объяснять ее положение у C]g. Структуры кислот 6 и 7, согласно данным масс-спектра, представляли собой два изомера по положению гидроксильных групп. В спектрах этих соединений наблюдались пики фрагменшых ионов с m/z: 201 (45%), 259 (30%) и 187 (50%), 273 (30%) для 6 и 7 соответственно, что указывало на структуры 9,10,11- и 10,11,12-тригидроксиоктадекановых кислот.

OTMS о

СНз ■ (СН2)4 - CII = СТ1 - (СН2)2|- сн|сн2-сн = сн1. С5. (СН2)2 - сн2 -

bxd —ОСНз

271 ^ 129

1. 5-оксо-9-гидрокси-6, 12-октадекадиеновая;

OTMS о

СНз • <СН2)6} ОН - СН = СН - (СН2Ь f С5- (СН2)з -

'----------1----------ÜCI13

299 129

2. 5-oKco-l 1-гидро|сси-9-01сталеценовая;

17 15

сн2 = сн-сн = сн-сн2

Si^ О

" 11 II

СН2 - СН2 - (CH2h- СН2 - с

263

13 12

СН2 СН2

ОСНз

67'

3. 15,17-октадекадисновая;

SMTO OTMS

110 . |9 О

СНз - СН2 - (СН2)6 - СН f СН - СН2 - (СНг)5 - СН2 - С С

ОСНз

215 - - 2S9

4. 9,10-дигндроксиоктадекановая;

SMTO OTMS

lio I I 9 JO

SMTO - CH2 - CH2 - (СН2>6 - СН \ СН - СН2 - (CH2)s - СН2 - СГ

ОСНз

303~~ 259

5. 9,10, 18-тригидроксиоктадекановая;

SMTO OTMS

IИ .10 I» о

снз - сн2 - (cihh-cnj сн |аысн2)6 - сн2 - с СОСНз

201 OTMS 259

6. 9,10,11-григндроксиоктадекаиовая;

SMTO OTMS

112 i 11 . lio JQ

СНз - (СН2>5 - СН СН СН - СН2 - (CH2)<¡ - сн2 - с^

I ОСНз

187 OTMS 273

7. 10,11,12-григидроксиоюгалекаиовая.

Рис. 4. Хромато-масс-спектрометрические характеристики триметилсилиловых производных метиловых эфиров оксикислот.

2.4 Изменение биологически активных компонентов при хранении семян калины обыкновенной

Кормовая добавка - семена калины обыкновенной использовалась на птицефабрике для кормления цыплят-бройлеров вместе с основным кормом в измельченном виде. В связи с этим необходимо было изучить влияние продолжительного хранения материала в измельченном виде в естественных условиях на состав природных компонентов.

При длительном хранении семян в них могут идти процессы гидролиза, приводящие к накоплению в липидах свободных жирных кислот, и окисления, как автоокисления, так и липоксигсназного, которому, в первую очередь, подвергаются ненасыщенные ЖК.

Для исследования брали 1 кг семян калины обыкновенной, измельчали и оставляли на хранение на 11 месяцев при комнатной температуре (20-25°С), естественной влажности окружающей срсды и в темноте (образец I). Параллельно в этих же условиях закладывали на хранение неизмельченные семена (образец II). Изменения различных биохимических показателей для образца I фиксировали ежемесячно в течение 11 месяцев, а для II только один раз но истечении всею периода хранения. Пулевой образец измельченных семян исследовали сразу после измельчения. В семенах определяли основные показатели: влажность, масличность (свободные липиды), содержание каротиноидов, белков; в масле -кислотное, i идроперекисное число (табл. 15).

Таблица 15

Изменение некоторых показателей семян и масла (свободные липиды) Viburnum opulus L при хранении в естественных условиях

Ме- Влаж- Масличность Кислотное Гидронере- Каротиноиды, мг% Белок,

сяц ность, % на абс.сухое вещество, % число, mi КОН кисное число, % актива. Ог в семенах, %

в масле в семенах

ОБРАЗЕЦ I(измельченныесемена)

0 7,7 13,1 7,2 0,018 45,0 5,9 5,0

1 5,7 12,2 10,4 0,021 47,0 5,7 5,5

2 5,3 12,1 10,8 0,023 35,5 4,3 5,5

3 7,7 13,0 11,5 0,031 31,0 4,0 4,9

4 8,1 13,9 12,3 0,030 25,4 3,5 5,0

5 8,5 13,9 17,6 0,029 25,0 3,4 6,0

6 8,8 14,1 22,0 0,041 28,0 3,9 5,0

7 9,0 14,5 28,3 0,058 29,6 4,3 5,0

8 9,3 14,5 32,8 0,06 29,6 4,3 5,5

9 6,7 14,8 39,1 0,065 27,6 4,0 5,9

10 7,0 14,8 40,0 0,055 27,3 4,0 5,3

11 7,7 15,1 42,0 0,09 21,7 3,3 5,8

ОБРАЗЕЦ II (неизмельченные семена)

11 7,1 15,3 9,8 0,08 17,0 2,6 5,6

Как видно из таблицы, в образце I влажность семян меняется неравномерно. Исходная влажность их составляет 7.7% (семена закладывались на хранение в феврале месяце), затем снижается и с мая, когда прекращается отопительный сезон и увеличивается естественная влажность, начинает повышаться. В результате гидролитических процессов кислотное

число масла возрастает в 6 раз, увеличивается масличность, вероятно, за счет высвобождения жирных кислот не только из свободных, но и связанных и прочносвязанных липидов. В первую очередь процессам гидролиза, по-видимому, подвергаются триацилглицериды, подтверждением этого служат результаты ТСХ масел всех образцов, а также литературные данные. Процент активного кислорода (гидроперекисное число) в масле в процессе хранения меняется очень незначительно с некоторой тенденцией к повышению, возможно, это связано с наличием пигментов, обладающих антиоксидантными свойствами (см. гл. 2.1.2). Количество каротиноидов за этот же период хранения в обоих образцах уменьшается, но в измельченных, согласно данным ТСХ, они представлены в основном каротиноидами с кислородсодержащими функциональными группами, возможно, ксантофиллами. Содержание белка в семенах сохраняется в пределах 5-6%. Аминокислотный состав белкового изолята семян, определенный в начале, середине и конце хранения, практически не меняется, за исключением небольшого увеличения содержания глутаминовой кислоты.

При определении состава жирных кислот установили, что в измельченных семенах по мерс хранения по чти в 5 раз увеличивается содержание насыщенных жирных кислот, значительно уменьшается содержание 18:2 кислоты. Объясняется это тем, что, по-видимому, гидролизу подвергаются не только свободные (нейтральные липиды), но связанные (ПЛ) и прочносвязанные липиды. Известно, что в ГШ растений количество насыщенных ЖК выше, чем в НЛ. Данное предположение подтвердили определением ЖК состава всех вышеперечисленных групп липидов.

Таким образом, продолжительное хранение при комнатной температуре измельченных семян калины обыкновенной, отхода пищевой продукции, приводит к активизации процессов гидролиза во всех группах липидов, в то время как содержание белка и их аминокислотный состав практически не меняется. Под влиянием пигментов, обладающих антиоксидантными свойствами, неизменным остается и гидроперекисное число.

ВЫВОДЫ

1. Впервые охарактеризованы основные биологически активные компоненты - липиды, белки и определена антиоксидантная активность пигментов семян калины обыкновенной, отхода пищевой продукции. 2 Изучены изменения нейтральных, полярных липидов и липофильных компонентов в процессе созревания плодов калины обыкновенной. Установлено, что наивысшая скорость накопления липидов происходит в первый период развития плодов. Основным классом липидов раннезрелых семян являются сложные эфиры гритерпеновых соединений. Качественный состав липофильных компонентов по мере созревания плодов усложняется.

3. Определен состав жирных кислот ацилсодержащих классов липидов на всех стадиях развития плодов. В липидах раннезрелых плодов обнаружены значительные количества насыщенных жирных кислот, в основном пальмитиновой, содержание которой по мере развития снижается. Высказано предположение, что в семенах калины биосинтез олеиновой и линолевой кислот осуществляется с участием пальмитиновой и стеариновой.

4. Установлено, что действие низких температур окружающей среды приводит к изменению липидного метаболизма: образованию в НЛ оксиглицеридов, к значительному снижению содержания ГЛ, ФЛ и изменению их классового состава.

5. Определена структура оксикислот, входящих в состав оксиглицеридов. Идентифицировано шесть кислот с кислородсодержащими функциями: две из них

кетогидрокси-: 5-оксо-9-гидрокси-6,12-октадекадиеновая и 5-оксо-11-гидрокси-9-октадеценовая; одна дигидрокси-: 9,10-дигидроксиоктадекановая и три тригидроксикислоты: 9,10,18-тригидрокси-, 9,10,11 -тригидрокси- и 10,11,12-тригидроксиоктадекановые кислоты.

6. Изучено влияние продолжи 1ельного хранения семян калины обыкновенной на биологически активные компоненты. Установлено, что хранение семян в течение 11 месяцев приводит к активизации процессов гидролиза в липидах, в то время как содержание белка, их аминокислотный состав и гидронерекисиое число практически не меняются.

Материалы диссертации опубликованы в работах:

1 Юнусова С.Г., Зинурова Э.Г., Юнусов М.С., Галкин Е Г., Каримова А.Р. Липиды семян калины обыкновенной (Viburnum opulus L.) II Изв АН. Сер. хим. - 1998. - № 6. - С. 12391243.

2. Каримова А.Р.. Юнусова С.Г., Масленников С.И., Галкин Е.Г., Юнусов Т.С.,

Шерешовец В.В. , Юнусов М.С. Липиды, липофильные компоненты и биологически активные фракции семян Viburnum opulus L. II Химия природ, соедин. - 2000. - № 6. - С. 447-450.

3. Каримова А.Р., Юнусова СЛ ., Галкин Е.Г., Федоров Н.И., Юнусов М.С. Липиды и липофильные компоненты плодов калины обыкновенной (Viburnum opulus L) в процессе созревания // Изв. АН. Сер. хим. - 2004. - № 1. - С. 235-240.

4. Юнусова С.Г., Каримова А.Р., Цырлина Е.М., Юнусов М.С., Денисенко О.Н. Изменение биологически активных компонентов при хранении семян Viburnum opulus II Химия природ, соедин. - 2004. - № 5. - С. 349-351.

5. Решение о выдаче naicnia на изобретение or 25.04.05 по заявке № 2004103117/13. Приоритет от 03.02.2004. Кормовая добавка для цыпляг-бройлеров и кур-несушек / Абдрахманов И.Б., Гадиев P.P., Гизатуллин P.C., Гумарова Г.А., Ишбулдин В.Б., Юнусов М.С., Юнусова С.Г., Муринов Ю.И., Каримова А.Р., Цырлина Е.М.

6. Юнусова С.Г., Зинурова Э.Г., Каримова А.Р., Пухлякова O.A., Юнусов М.С. Липиды некоторых лекарственных растений // Ш Всероссийское совещание «Лесохимия и органический синтез)»: Тез. докл. - Сыктывкар, 1998. - С. 97.

7. Каримова А.Р., Юнусова С.Г., Юнусов М.С. Сложные эфиры семян калины обыкновенной И Молодежная научная школа по органической химии: Тез. докл. -Екатеринбург, 2000. - С. 294.

8. Юнусова С.Г., Каримова А.Р., Зинурова Э.Г., Юнусов М.С., Галкин Е.Г., Масленников С.И., Юнусов Т.С. Химический состав и биологическая активность семян калины обыкновенной // Всероссийская конференция «Химия и технология растительных веществ»: Тез. докл. - Сыктывкар, 2000. - С. 159.

9 Каримова Л.Р., Юнусова С.Г., Юнусов М.С. Нейтральные липиды семян калины обыкновенной ранней и средней степени зрелости // V Молодежная научная школа-конференция по органической химии: Тез. докл. - Екатеринбург, 2002. - С 220.

Ю.Каримова А.Р., Юнусона С.Г., Федоров Н.И, Юнусов М.С. Нейтральные и полярные липиды плодов калины обыкновенной ранней и средней степени зрелости // II Всероссийская конференция «Химия и технология растительных веществ»: Тез. докл. -Казань, 2002. - С. 72.

11. Каримова А.Р., Юнусова С.Г., Юнусов М.С. Биологически активные компоненты семян калины обыкновенной // III Всероссийская конференция «Химия и технология растительных веществ»: Тез. докл. - Саратов, 2004. - С. 141-143.

Лицензия на издательскую деятельность № Б848184 or 21.04.99 г. Сдано в набор 27.07.2005 г. Подписано в печать 29.07.2005 г Формат 60x84'/i6. Усл.печл. 1,56. Бумага офсетная Гарнитура Times. Тираж 100 экз. Заказ № 04-17. Печать методом ризографии.

Типография ГУЛ НИИБЖД РБ 450005, Уфа, ул. 8 Марта, 12/1.

f«

к,

Р15411

РНБ Русский фонд

2006-4 18360

( V»

/

и

- Список сокращений.

Введение.

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1 Биосинтез липидов.

1.1.1 Биосинтез триацилглицеридов.

1.1.2 Биосинтез фосфолипидов и гликолипидов.

1.1.3 Биосинтез жирных кислот.

1.2 Изменение липидного состава семян/плодов высших растений в процессе созревания.

1.2.1 Маслообразование в семенах и плодах различных культур.

1.2.2 Изменение содержания нейтральных и полярных липидов.

1.2.2.1 Изменение состава нейтральных липидов.

1.2.2.2 Изменение состава полярных липидов.

1.2.3 Изменение содержания липофильных компонентов.

1.2.4 Изменение состава жирных кислот липидов семян/плодов различных культур.

1.3. Влияние низких температур на липидный метаболизм.

1.4. Биологически активные компоненты различных видов калины.

ГЛАВА 2. Обсуждение результатов

2.1 Биологически активные компоненты семян калины обыкновенной отхода пищевой продукции.

2.1.1 Липиды и липофильные компоненты семян калины обыкновенной.

2.1.2 Пигменты семян калины обыкновенной.

С,- '

2.1.3 Белки семян калины обыкновенной.

2.2 Липиды и липофильные компоненты плодов калины обыкновенной в процессе их созревания.

2.2.1 Динамика накопления липидов в процессе созревания плодов калины обыкновенной

2.2.2 Классовый состав липидов плодов калины обыкновенной в процессе созревания.

2.2.3 Состав жирных кислот липидов плодов калины обыкновенной в процессе созревания.

2.3 Влияние пониженной температуры на состав липидов семян калины обыкновенной.

2.3.1 Структура оксикислот.

2.4 Изменение биологически активных компонентов при хранении семян калины обыкновенной.

2.5 Кормовая добавка для цыплят-бройлеров и кур-несушек.

ГЛАВА 3. Экспериментальная часть.

Выводы.

Флора России - еще недостаточно изученный богатейший источник биологически активных веществ, на основе которых можно создать новые лекарственные препараты, биологически активные добавки для широкого применения в фармацевтической, косметической и пищевой промышленностях. В последнее время в мире резко возрос интерес к фитопрепаратам и к получению на их основе различных пищевых и кормовых добавок, производство которых в настоящее время испытывает значительный подъем. Пищевая и медицинская продукция, полученная на основе растительных источников, как правило, менее токсична, а ее производство является, зачастую, экономически более выгодным и экологически более чистым, чем производство синтетических препаратов. Более того, 30 — 60% препаратов, применяемых в медицине для лечения различных видов заболеваний, имеют растительное происхождение.

Одной из важнейших задач, требующих решения, является рациональное использование побочных продуктов и отходов производств, связанных с растительным сырьем, т.е. комплексная переработка сырья, полное извлечение из него всех ценных компонентов.

Калина обыкновенная {Viburnum opulus L., сем. Caprifoliaceae) - V растение, которое широко распространено практически на всей территории России. В народной медицине нашли применение кора и плоды калины. Из коры калины выделены иридоиды, тритерпеноиды, катехины, оксикумарины, флавоноиды. В плодах обнаружены антоцианы, катехины, хлорогеновая кислота, пектиновые вещества, углеводы, тритерпеноиды, полисахариды, органические кислоты [1, 2]. В настоящее время пищевая промышленность перерабатывает плоды калины для получения джемов с товарным названием «Калина протертая с сахаром», семена являются отходом производства, которые практически не используются и сжигаются.

Работами по исследованию семян калины обыкновенной, проводимыми в лаборатории природных соединений Института органической химии Уфимского научного центра РАН, было показано, что семена содержат сложный комплекс биологически активных соединений - липидов, белков и пигментов. Масло семян калины обыкновенной обладает противовоспалительным действием, стимулирует репаративную регенерацию кожи и слизистой оболочки желудка [3], а также является богатым источником полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), которым в последнее время придается очень большое значение для получения биологически активных пищевых добавок, широко применяемых для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Все вышеизложенное позволяет рассматривать семена калины обыкновенной - отход пищевой продукции как сырьевой источник для производства широкого ассортимента продуктов различного функционального назначения, природный ресурс и химический потенциал которого до настоящего времени используется нерационально и не полностью.

Поэтому представляется актуальным и перспективным подробное изучение биологически активных компонентов семян калины, отхода пищевой продукции, для целенаправленного поиска путей утилизации и многостороннего использования содержащихся в отходах биологически активных соединений. Для определения оптимальных сроков сбора сырья, максимально обогащенного БАВ, целесообразно было изучить изменение одного из основных компонентов семян - липидов в процессе их созревания, под действием низких температур и хранения. Данные по липидному составу семян калины обыкновенной в литературе отсутствуют.

Эта работа является частью исследований, проводимых в лаборатории природных соединений ИОХ УНЦ РАН, по теме «Растительные биорегуляторы - алкалоиды и липиды некоторых растений, произрастающих в РФ» (per. номер № 01.20.00 13599). Работа выполнена при финансовой поддержке Президента Российской Федерации (программа поддержки научных школ, грант НШ

139.2003.3), Министерства промышленности, науки и технологий (государственный контракт № 41.028.1.1.2447, проект № 02-4207.2003).

Цель исследования. Изучение липидов семян калины обыкновенной в процессе онтогенеза, их изменение под влиянием низких температур и условий хранения. Определение биологической ценности семян калины, антиоксидантной активности пигментного комплекса. Выявление возможности использования в качестве кормовой добавки отхода пищевого производства -семян калины обыкновенной и проведение испытаний на одной из птицефабрик Башкортостана на интенсивность роста цыплят-бройлеров и яйценоскость кур-несушек.

Научная новизна работы заключается в следующем.

Впервые подробно изучен состав нейтральных, полярных: глико- и фосфолипидов и липофильных компонентов семян калины обыкновенной и его изменение при созревании, под действием низких температур и хранении.

Проведен глубокий химический анализ липидов плодов калины обыкновенной трех степеней зрелости. Обсуждена роль отдельных классов липидов в процессе маслообразования. Охарактеризован состав жирных кислот всех ацилсодержащих классов липидов трех степеней зрелости. В липидах раннезрелых семян обнаружены значительные количества пальмитиновой (16:0) кислоты, резко уменьшающейся к моменту зрелости, что позволяет говорить об ее участии в биосинтезе ненасыщенных: олеиновой (18:1) и линолевой (18:2) кислот. Выявлены некоторые закономерности в процессе биосинтеза отдельных классов липидов.

Установлено, что действие низких температур приводит к нарушению метаболизма липидов: образованию оксиглицеридов в нейтральных липидах; значительному снижению общего содержания и отдельных классов полярных липидов, и, в конечном счете, к разрушению мембран. Выделены оксикислоты, входящие в состав оксиглицеридов, и установлена их структура. Показано, что кислоты данной структуры могли образоваться в результате окисления линолевой и олеиновой кислот.

Впервые охарактеризован состав основных биологически активных природных соединений из семян калины обыкновенной - липидов, белков и пигментов, что дало возможность оценить его биологическую значимость. Комплексный подход к переработке плодов калины, основанный на оптимальном использовании его возможностей, как ценного сырьевого источника, позволит:

• повысить эффективность переработки плодов за счет расширения ассортимента выпускаемой продукции;

• снизить загрязнение окружающей среды;

• создать широкий ассортимент функциональных технологических, пищевых, кормовых и биологически активных добавок.

Практическая значимость.

Проведены испытания кормовой добавки из шрота семян калины обыкновенной на Турбаслинской птицефабрике РБ на цыплятах-бройлерах. Установлено, что добавление 1% шрота калины в полнорационные комбикорма «Провими» оказывало воздействие на прирост живой массы, начиная с 8 - 10-дневного возраста, превышая контроль к концу опыта (45 дней) на 9%.

Испытания кормовой добавки на продуктивные и воспроизводительные качества кур-несушек показали, что при добавлении калины в количестве 1,5% к составу основного рациона кур-несушек в опытных партиях увеличивало сохранность птицы на 1,5%, а яйценоскость - на 1,6% по сравнению с контролем.

ВЫВОДЫ ф 1. Впервые охарактеризованы основные биологически активные компоненты

- липиды, белки и определена антиоксидантная активность пигментов семян калины обыкновенной, отхода пищевой продукции.

2. Изучены изменения нейтральных, полярных липидов и липофильных компонентов в процессе созревания плодов калины обыкновенной. Установлено, что наивысшая скорость накопления липидов происходит в первый период развития плодов. Основным классом липидов раннезрелых семян являются сложные эфиры тритерпеновых соединений. Качественный состав липофильных компонентов по мере созревания плодов усложняется.

3. Определен состав жирных кислот ацилсодержащих классов липидов на всех стадиях развития плодов. В липидах раннезрелых плодов обнаружены значительные количества насыщенных жирных кислот, в основном пальмитиновой, содержание которой по мере развития снижается. Высказано предположение, что в семенах калины биосинтез олеиновой и линолевой кислот осуществляется с участием пальмитиновой и ^ стеариновой.

4. Установлено, что действие низких температур окружающей среды приводит к изменению липидного метаболизма: образованию в НЛ оксиглицеридов, к значительному снижению содержания ГЛ, ФЛ и изменению их классового состава. I

5. Определена структура оксикислот, входящих в состав оксиглицеридов. Идентифицировано шесть кислот с кислородсодержащими функциями: две из них кетогидрокси-: 5-оксо-9-гидрокси-6,12-октадекадиеновая и 5-оксо-11-гидрокси-9-октадеценовая; одна дигидрокси-: 9,10-дигидрокси-октадекановая и три тригидроксикислоты: 9,10,18-тригидрокси-, 9,10,11-тригидрокси- и 10,11,12-тригидроксиоктадекановые кислоты.

6. Изучено влияние продолжительного хранения семян калины обыкновенной на биологически активные компоненты. Установлено, что хранение семян в течение 11 месяцев приводит к активизации процессов гидролиза в липидах, в то время как содержание белка, их аминокислотный состав и гидроперекисное число практически не меняются.

1. Иванов В.Д., Ладыгина Е.Я. Химический состав различных видов калины (Viburnum L.) // Фармация. 1983. - Т. 32. - № 1. - С. 65-70.

2. Растительные ресурсы СССР / Отв. ред. П.Д. Соколов. Л.: Наука, 1990. - Т. 5.-С. 16-20.

3. Зарудий Р.Ф. и др. Влияние масла калины на синтез и содержание нуклеиновых кислот в тканях желудка // Тез. докл. II Росс. Нац. Конгр. «Человек и лекарство» (Москва, 10-15 апреля 1995 г.), 1995. С. 235.

4. Kennedy Е.Р. Biosynthesis of complex lipids // Fed. Proc. Am. Soc. Exp. Biol. -1961.-V. 20.-P. 934-940.

5. Gunstone F.D. Books and reviews on lipids // Prog. Chem. Fats Lipids. 1977. -V. 15.-P. 75-95.

6. Gurr M.I. The biosynthesis of triacylglycerols // The Biochemistry of Plants. Ed. P.K Stumpf, E.E. Conn. New York: Academic Press, 1980. - V. 4. - P. 205-249.

7. Harwood J.L., Russell N J. Lipids in Plants and Microbes. London: George Allen and Unwin, 1984. - 162 p.

8. Slack C.R., Browse J.A. Synthesis of storage lipids in developing seeds // Seed Physiology. Ed. D.R. Murray. Orlando, FL: Academic Press, 1984. - P. 209-244.

9. Stymne S., Stobart A.K. Triacylglycerol biosynthesis // The Biochemistry of Plants. Ed. P.K. Stumpf. New York: Academic Press, 1987. - V. 9. - P. 175-214.

10. Harwood J.L. Lipid metabolism in plants // Critical Reviews in Plant Science. -1989.-V. 8.-P. 1-44.

11. Browse J., Somerville C. Glycerolipid synthesis: biochemistry and regulation // Ann. Rev. of Plant Physiol, and Plant Mol. Biol. 1991. - V. 42. - P. 467-506.

12. Harwood J.L., Page R.A. Biochemistry of oil synthesis // Designer Oil Crops. Ed. DJ. Murphy. Weinheim: VCH, 1994. - P. 165-194.

13. Miquel M., Browse J. Lipid biosynthesis in developing seeds // Seed Development and Germination. Ed. J. Kigel, G. Gilili. New York: Dekker, 1995. -P. 169-193.

14. Ohlrogge J., Browse J. Lipid biosynthesis // The Plant Cell. 1995. - V. 7. - P. 957-970.

15. Lehner R., Kuksis A. Biosynthesis of triacylglycerols // Progr. Lipid Res. 1996. -V. 35.-P. 169-201.

16. Harwood J.L. What's so special about plant lipids? // The Lipid Handbook. Ed. F.D. Gunstone, J.L. Harwood, F.B. Padley. London: Chapman and Hall, 1998. - P. 1-26.

17. Triki S., Demandre Ch., Mazliak P. Biosynthesis of triacylglycerols by developing sunflower seed microsomes // Phytochemistry. 1999. - V. 52. - P. 5562.

18. Salas J.J., Sanchez J., Ramli U.S., Manaf A.M., Williams M., Harwood J.L. Biochemistry of lipid metabolism in olive and other oil fruits // Progr. Lipid Res. -2000.-V. 39.-P. 151-180.

19. Parkin K.L. Biosynthesis of fatty acids and storage lipids in oil-bearing seed and fruit tissues of plants // Food Science and Technology. V. 117 (Food Lipids). Ed. C.C. Akoh, D.B. Min. New York: Marcel Dekker, Inc., 2002. - P. 909-965.

20. Gurr M.I. and others. Studies on seed-oil triglycerides. Triglyceride biosynthesis and storage in whole seeds and oil bodies of Crambe abyssinica II Eur. J. Biochem. -1974. V. 43. - № 2. - P. 281-290.

21. Евстигнеева Р.П. и др. Химия биологически активных природных соединений / Под ред. Н.А. Преображенского, Р.П. Евстигнеевой. М.: Химия, 1976.-С. 353.

22. Griffiths G., Stymne S., Stobart A.K. The utilisation of fatty-acid substrates in triacylglycerol biosynthesis by tissue-slices of developing safflower and sunflower cotyledons // Planta. 1988. - V. 173. - P. 309-316.

23. Slack C.R., Campbell L.C., Browse J.A., Roughan P.G. Some evidence for the reversibility of choline phosphotransferase-catalysed reaction in developing linseed cotyledons in vivo // Biochim. et Biophys. Acta. 1983. - V. 754. - P. 10-20.

24. Mazliak P. Glyco- and phospholipids of biomembranes in higher plants // Lipids and Lipid Polymers in Higher Plants. Ed. M.Tevini, H.K. Lichtenthaler. Berlin: Springer-Verlag, 1977. - P. 48-74.

25. Gurr M.I., Harwood J.L. Lipid Biochemistry. London: Chapman and Hall, 1991. -P. 246-387.

26. Schneider M. Phospholipids // Lipid Technologies and Applications. Ed. F.D. Gunstone, F.B. Padley. New York: Marcel Dekker, Inc., 1997. - P. 51-78.

27. Mudd J.B. Phospholipid biosynthesis // The Biochemistry of Plants. Ed. P.K. Stumpf, E.E. Conn. New York: Academic Press, 1980. - V. 4. - P. 249-282.

28. Moore T.S. Phospholipid biosynthesis // Ann. Rev. Plant Physiol. 1982. - V. 33.-P.-235-259.

29. Mazliak P., Jolliot A., Bonnerot C. Biosynthesis and metabolism of phospholipids // Biochemistry and Metabolism of Plant Lipids. Ed. J.F.G.M. Wintermans, PJ.C. Kuiper. Amsterdam: Elsevier Biomedical Press B.V., 1982. - V. 8. - P. 89-98.

30. Kinney A.J. Phospholipid headgroups // Lipid Metabolism in Plants. Ed. T.S. Moore. Boca Raton, Fl: CRC Press, 1993. - P. 259-284.

31. Benson A.A. The plant sulfolipid // Advances in Lipid Research. Ed. R. Paoletti, D. Kritchevsky. New York: Academic Press, 1963. - V 1. - P. 387-394.

32. Joyard J., Douce R. Galactolipid synthesis // The Biochemistry of Plants. Ed. P.K. Stumpf, E.E. Conn. New York: Academic Press, 1987. - V. 9. - P. 215-274.

33. Joyard J. and others. Origin and synthesis of galactolipid and sulfolipid headgroups // Lipid Metabolism in Plants. Ed. T.S. Moore. Boca Raton, Fl: CRC Press, 1993.-P. 231-258.

34. Harwood J.L. Sulfolipids // The Biochemistry of Plants. Ed. P.K. Stumpf, E.E. Conn. New York: Academic Press, 1980. - V. 4. - P. 301-320.

35. Mudd J.B., Kleppinger-Sparace K.F. Sulfolipids // The Biochemistry of Plants. Ed. P.K. Stumpf, E.E. Conn New York: Academic Press, 1987. - V. 9. - P. 275289.

36. Kleppinger-Sparace K.F., Mudd J.B. Biosynthesis of sulfoquinovosyldiacyl-glycerol in higher plants // Plant Physiol. 1990. - V. 93. - P. 256-263.

37. Васьковский B.E. Липиды // Соросовский образовательный журнал. 1997. - № 3. - С. 32-37.

38. Hilditch Т.Р., Williams P.N. The Chemical Constitution of Natural Fats. -London: Chapman and Hall, 1964. 745 p.

39. Gunstone F.D. Fatty acid structure // The Lipid Handbook. Ed. F.D. Gunstone, J.L. Harwood, F.B. Padley. London: Chapman and Hall, 1986. - P. 1-24.

40. Smirnov B.P. Fatty acid synthesis from acetate by spinach chloroplasts // Biokhimiya. 1960. - V. 25. - P. 419-426.

41. Stumpf P.K. Lipid metabolism in higher plants // Nature. 1962. - V. 194. - № 4834.-P. 1158-1160.

42. Mudd J.B., McManus T.T. Metabolism of acetate by cell-free preparations from spinach leaves // J. Biol. Chem. 1962. - V. 237. P. 2057-2063.

43. James A.T. The biosynthesis of long-chain saturated and unsaturated fatty acids in isolated plant leaves // Biochim. et biophys. acta. 1963. - V. 70. - № 1. - P. 9-19.

44. Hawke J.C., Stumpf P.K. Fat metabolism in higher plants. The biosynthesis of saturated and unsaturated fatty acids by preparations from barley seedlings // J. Biol. Chem. 1965. - V. 240. - № 12. - P. 4746-4752.

45. Majerus Ph. W., Vagelos P.R. Fatty acid biosynthesis and the role of acyl carrier protein // Advances in Lipid Research. Ed. R. Paoletti, D. Kritchevsky. New York: Academic Press, 1967. - V 5. - P. 1-33.

46. Родионов B.C. Биосинтез высших жирных кислот в изолированных хлоропластах // Успехи современной биологии. 1968. - Т. 66. - вып. 2 (5). — С. 155-172.

47. Gurr M.I., Robinson M.P., James A.T. The mechanism of formation of polyunsaturated fatty acids by photosynthetic tissue // Eur. J. Biochem. 1969. - V. 9.-P. 70-78.

48. Stumpf P. K. Biosynthesis in developing seeds // Lipids and Lipid Polymers in Higher Plants. Ed. M. Tevini, H.K. Lichtenthaler. Berlin: Springer-Verlag, 1977. -P. 75-84.

49. Stumpf P. K. Biosynthesis of saturated and unsaturated fatty acids // The Biochemistry of Plants. Ed. P.K. Stumpf, E.E. Conn. New York: Academic Press, 1980.-V. 4.-P. 177-204.

50. Stumpf P. K. and others. Biosynthesis of fatty acids in a leaf cell // Biochemistry and Metabolism of Plant Lipids. Ed. J.F.G.M. Wintermans, P.J.C. Kuiper. -Amsterdam: Elsevier Biomedical Press B.V., 1982. V. 8. - P. 3-11.

51. Harwood J.L. Fatty acid metabolism // Ann. Rev. of Plant Physiol, and Plant Mol. Biol. 1988. - V. 39. - P. 101-138.

52. Heinz E. Biosynthesis of polyunsaturated fatty acids // Lipid Metabolism in Plants. Ed. T. S. Moore. Boca Raton, Fl: CRC Press, 1993. - P. 33-90.

53. Ohlrogge J.B., Jaworski J.G., Post-Beittenmiller D. De novo fatty acid biosynthesis // Lipid Metabolism in Plants. Ed. T. S. Moore. Boca Raton, Fl: CRC Press, 1993.-P. 3-32.

54. Griffiths G., Harwood J.L. Fat synthesis in cacao (Theobroma cacao) // Biochemical Society Transactions. 1989. - V. 17. - № 4. - P. 688-689.

55. Кейтс M. Техника липидологии: Пер. с англ. М.: Мир, 1975. - С. 9.

56. Маркман A.JI. Химия липидов. Ташкент: АН УзССР, 1963. - С. 5-8.

57. Харченко JI.H. Биологическая роль запасных липидов семян растений и возможность изменения их жирнокислотного соства // Физиология и биохимия культурных растений. 1980. - Т. 12. - № 1. — С. 70-81.

58. Sims R.P.A., Gregor W.G., Plessers A.G., Mes J.C. Lipid changes in maturing oil-bearing plants. I. Gross changes in safflower and flax // J. Amer. Oil Chem. Soc. -1961. V. 38. - № 6. - P. 273-276.

59. Sims R.P.A., Gregor W.G., Plessers A.G., Mes J.C. Lipid changes in maturing oil-bearing plants. II. Changes in fatty acid composition of flax and safflower seed oils // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1961. - V. 38. - № 6. - P. 276-279.

60. Chandra K.S. Studies on the changes in fatty acid composition in developing seeds. I. Recinus communis II J. Amer. Oil Chem. Soc. 1964. - V. 41. - № 4. - P. 251-254.

61. Mc. Killican M.E. Lipid changes in maturing oil-bearing plants. IV. Changes in lipid classes in rape and crambe oils // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1966. - V. 43. - № 7.-P. 461-465.

62. Norton G., Harris J.F. Compositional changes in developing rape seed (Brassica napus L.) // Planta. 1975. - V. 123. - № 2. - P. 163-174.

63. Gurr M.I., Blades J., Appleby R.S. Studies on seed-oil triglycerides. The composition of Crambe abyssinica triglycerides during seed maturation // Eur. J. Biochem. 1972. - V. 29. - № 2. - P. 362-368.

64. Weber E.J. Lipids of maturing grain of corn (Zea mays L.). I. Changes in lipid classes and fatty acid composition // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1969. - V. 46. - № 9. -P. 485-488.

65. Weber E.J. Lipids of maturing grain of corn (Zea mays L.). II. Changes in polar lipids // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1970. - V. 47. - № 9. - P. 340-343.

66. Jellum M.D. Developmental changes in fatty acid composition of oil in kernel fractions of corn {Zea mays L) II J. Amer. Oil Chem. Soc. 1970. - V. 47. - № 7. - P. 245-248.

67. Privett O.S., Dougherty K.A., Erdahl W.L., Stolyhwo A. Studies on the lipid composition of developing soybeans // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1973. - V. 50. - № 12.-P. 516-520.

68. Garcia J.M., Quintero L.C., Mancha M. Oil bodies and lipid synthesis in developing soybean seeds // Phytochemistry. 1988. - V. 27. - № 10. - P. 30833087.

69. Palmer M. A., Bowden B.N. Variations in sterol and triterpene contents of developing Sorghum bicolor grains // Phytochemistry. 1977. - V. 16. - № 4. - P. 459-463.

70. Robertson J.A., Chapman G.W., Wilson J.R. Relation of days after flowering to chemical composition and physiological maturity of sunflower seed // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1978. - V. 55. - № 2. - P. 266-269.

71. Grewal S.S., Sukhija P.S., Bhatia I.S. Polar lipid composition during sunflower {Helianthus annuus) seed development // Biochem. Physiol, Pflanzen. 1978. - V. 173.-P. 11-16.

72. El-Shami S.M., Hassanein M.M., Murui T. Hassan El-Mallah M. Studies on changes in patterns of fatty acids, sterols and tocopherols of oil during seed maturation of oil crops. I. Sunflower seeds // Grasas у Aceites. 1994. - V. 45. - № 4.-P. 227-231.

73. Lehrian D.W., Keeney P.G. Changes in lipid components of seeds during growth and ripening of cacao fruit // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1980. - V. 57. - № 2. - P. 6165.

74. Griffiths G., Harwood J.L. The regulation of triacylglycerol biosynthesis in cocoa (Theobroma cacao) L. // Planta. 1991. - V 184. - P. 279-284.

75. Pattee H.E., Purcell A.E., Johns E.B. Changes in carotenoid and oil content during maturation of peanut seeds // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1969. - V. 46. - № 11.-P. 629-631.

76. Sanders Т.Н. Effects of variety and maturity on lipid class composition of peanut oil // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1980. - V. 57. - № 1. - P. 8-11.

77. Юнусова С.Г., Гусакова С.Д. Влияние степени зрелости хлопковых семян на липидный состав // Химия природ, соедин. 1982. - № 1. - С. 40-43.

78. Юнусова С.Г., Гусакова С.Д. Влияние степени зрелости хлопковых семян на жирнокислотный состав липидов // Химия природ, соедин. 1982. - № 1. - С. 44-48.

79. Жеребин Ю.Л., Колесник А.А., Богатский А.В. Исследование липидов некоторых сортов ягод винограда в процессе созревания // Физиология и биохимия культурных растений. 1984. - Т. 16. - № 3. - С. 243-248.

80. Cherif A., Drira A., Marzouk В. Lipid formation in olive fruit {Olea europea L.) II Advances in the Biochemistry and Physiology of Plant Lipids. Ed. L.-A. Appelqvist, C. Liljenberg. Amsterdam: Elsevier Biomedical Press, 1979. - V. 3. -P. 399-402.

81. Ajana H., El Antari A., Hafidi A. Fatty acids and sterols evolution during the ripening of olives from the Moroccan Picholine cultivar // Grasas у Aceites. 1998. -V. 49.-№5-6.-P. 405-410.

82. Ajana H., El Antari A., Hafidi A. Evolution of biometric parameters and chemical composition of olives from the Moroccan Picholine variety during fruit ripeness // Grasas у Aceites. 1999. - V. 50. - № 1. - P. 1-6.

83. Sambanthamurthi R., Sundram K., Tan Y.-A. Chemistry and Biochemistry of Palm Oil // Progr. Lipid Res. 2000. - V. 39. - P. 507-558.

84. Ichihara K., Suda Y. Lipid biosynthesis in developing perilla seeds // Phytochemistry. 2003. - V. 63. - P. 139-143.

85. Cherif A. and others. Kernel fatty acid and triacylglycerol composition for three almond cultivars during maturation // J. Amer. Oil Chem. Soc. 2004. - V. 81. - № 10.-P. 901-905.

86. Whitaker B.D. Changes in the steryl lipid content and composition of tomato fruit during ripening // Phytochemistry. 1988. - V. 27. - № 11. - P. 3411-3416.

87. Прокофьев A.A. О жирообразовании у растений // Успехи современной биологии. 1955. - Т. 39. - вып. 2. - С. 129-137.

88. Appelqvist L.-A. Biochemical and structural aspects of storage and membrane lipids in developing oil seeds // Recent Advances in the Chemistry and Biochemistry of Plant Lipids. London: Academic Press, 1975. - P. 247-286.

89. Кальман Я., Рем К.Г. Наглядная биохимия: Пер. с нем. М.: Мир, 2000. - С. 56-57.

90. Moreau Р and others. Lipid trafficking in plant cells // Progr. Lipid Res. 1998. -V. 37.-№6.-P. 371-391.

91. Grunwald C. Plant sterols // Ann. Rev. Plant Physiol. 1975. - V. 26. - P. 209236.

92. Schaller H. The role of sterols in plant growth and development // Progr. Lipid Res.-2003.-V. 42.-P. 163-175.

93. Harwood J.L. Plant acyl lipids: structure, distribution, and analysis // The Biochemistry of Plants. Ed. P.K. Stumpf, E.E. Conn. New York: Academic Press, 1980.-V. 4.-P. 1-55.

94. Kochhar S.P. Influence of processing on sterols of edible vegetable oils // Progr. Lipid Res. 1983. - V. 22. - P. 161-188.

95. Goad L.J. The biosynthesis of plant sterols // Lipids and Lipid Polymers in Higher Plants. Ed. M.Tevini, H.K. Lichtenthaler. Berlin: Springer-Verlag, 1977. - P. 146168.

96. Mandava N.B. Plant growth promoting brassinosteroids // Ann. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1988. - V. 39. - P. 23-52.

97. Fujioka S., Sakurai A. Brassinosteroids // Nat. Prod. Rep. 1997. - V. 14. - P.l-10.

98. Fujioka S., Sakurai A. Biosynthesis and metabolism of brassinosteroids // Physiol. Plant. 1997. - V. 100. - P. 710-715.

99. Heupel R.C. and others. Sterol composition and biosynthesis in sorghum: importance to developmental regulation // Lipids. 1986. - V. 21. - № 1. - P. 69-75.

100. Daguet D. Phytosterols: highly promising compounds // Lipid Technol. 2000. -V. 12.-№4.-P. 77-80.

101. Iton Т., Tamura Т., Matsumoto Т. Srerol composition of 19 Vegetable Oils // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1973. - V. 50. - № 4. - P. 122-125.

102. Eldin A. K., Appelqvist L.-A. Variations in the composition of sterols, tocopherols and lignans in seed oils from four sesamum species // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1994. - V. 71. - № 2. - P. 149-156.

103. Fischer Chr., Holl W. Free sterols, steryl esters and lipid phosphorus in needles of Scot's pine (Pinus sylvestris L.) II Lipids. 1991. - V. 26. - № 11. - P. 934-939.

104. Тютюнников Б.Н. Химия жиров. M.: Пищевая промышленность, 1974. — С. 408-430.

105. Stumpf Р.К. Biosynthesis of saturated and unsaturated fatty acids by maturing Carthamus Tinctorius L. seeds // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1975. - V. 52. - № 9. -P. 484A-490A.

106. Kates M. Plant phospholipids and glycolipids // Advances in Lipid Research. Ed. R. Paoletti, D. Kritchevsky. New York: Academic Press, 1970. - V 8. - P. 225262.

107. Kuiper P.J.C. Environmental changes and lipid metabolism of higher plants // Physiol. Plant.- 1985.-V.-64.-P. 118-120.

108. Harwood J.L. Environmental factors which can alter lipid metabolism // Progr. Lipid Res. 1994. - V. 33. - № \-2. - P. 193-202.

109. Mazur P. Freezing injury in plants // Ann. Rev. Plant Physiol. 1969. - V. 20. -P. 419-448.

110. Lyons J.M. Chilling injury in plants // Ann. Rev. Plant Physiol. 1973. - V. 24.1. P. 445-466.

111. Yoshida S., Sakai A. Phospholipid degradation in frozen plant cells associated with freezing injury // Plant Physiol. 1974. - V. 53. - P. 509-511.

112. Nishida I., Murata N. Chilling sensitivity in plants and cyanobacteria: the crucial contribution of membrane lipids // Ann. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1996. -V. 47.-P. 541-568.

113. Campos P.S. and others. Electrolyte leakage and lipid degradation account for , cold sensitivity in leaves of Cqffea sp. plants 11 J. Plant Physiol. 2003. - V. 160. - P.283.292.

114. Dubey R.S. Photosynthesis in plants under stressful conditions // Handbook of Photosynthesis. Ed. M. Pessarakli. New York: Marcel Dekker Inc., 1997. - P. 859875.

115. Lyons J.M., Wheaton T.A., Pratt H.K. Relationship between the physical nature of mitochondrial membranes and chilling sensitivity in plants // Plant Physiol. -1964.- V. 39.- P.262-268.

116. Lyons J.M., Asmundson C.M. Solidification of unsaturated/saturated fatty acid mixtures and its relationship to chilling sensitivity in plants // J. Amer. Oil. Chem. Soc.- 1965.-V.-42.-P. 1056-1058.

117. Raison J.K., Lyons J.M. Chilling injury: a plea for uniform terminology // Plant Cell Envirom. 1986. - V. 9. - P. 685-686.

118. Raison J.K., Orr G.R. Proposals for a better understanding of the molecular basis , of chilling injury // Chilling Injury of Horticultural Crops. Ed. C.Y. Wang. Florida

119. USA): CRC Press, Boca Raton, 1990. P. 145-164.

120. Kaniuga Z. and others. Changes in fatty acids of leaf polar lipids during chilling-and post-chilling rewarming of Zea mays genotypes differing in response to chilling // Acta Physiologiae Plantarum. 1999. - V. 21. - № 3. - P. 231-241.

121. Palva E.T. and others. Biological mechanisms of low temperature stress response: Cold acclimation and development of freezing tolerance in plants // JIRCAS Working Report. 2002. - P. 9-15.

122. Whitaker B.D. Changes in lipids of tomato fruit stored at chilling and nonr chilling temperatures // Phytochemistry. 1991. - V. 30. - № 3. - P. 757-761.

123. Welti R. and others. Profiling membrane lipids in plant stress responses. Role of phospholipase Da in freezing-induced lipid changes in Arabidopsis II J. Biol. Chem. -2002. V. 277. - № 35. - P. 31994-32002.

124. Harwood J.L. Environmental effects on plant lipid biochemistry // Plant Lipid Biosynthesis. Fundamentals and Agricultural Applications. Ed. J.L. Harwood. -Cambridge: University Press, 1990. P. 305-347.

125. Yu H.-L., Willemot C. Inhibition of eukaryotic galactolipid biosynthesis in mature-green tomato fruits at chilling temperature // Plant Science. 1996. - V. 113. -P. 33-41.

126. Yu H.-L., Willemot C. Effect of chilling on lipid biosynthesis in tomato pericarp disks // Plant Science. 1997. - V. 125. - P. 21-30.

127. Galliard T. Degradation of acyl lipids: hydro lytic and oxidative enzymes // The Biochemistry of Plants. Ed. P.K. Stumpf. New York: Academic Press, 1980. - V. 4. -P. 85-116.

128. Parkin K.L., Kuo S.-J. Chilling-induced lipid degradation in cucumber (Cucumis sativa L. cv. Hybrid C) fruit // Plant Physiol. 1989. - V. 90. - P. 1049-1056.

129. Whitaker B.D. Lipid changes in mature-green bell pepper fruit during chilling at 2°C and after transfer to 20°C subsequent to chilling // Physiologia Plantarum. -1995.-V. 93.-P. 683-688.

130. Harris P., James A.T. The effect of low temperatures on fatty acid biosynthesis in plants // Biochem. J. 1969. - V. 112. - P. 325-330.

131. Murata N. Molecular species composition of phosphatidylglycerols from chilling-sensitive and chilling-resistant plants // Plant Cell Physiol. 1983. - V. 24. -P. 81-86.

132. Murata N., Yamaya J. Temperature-dependent phase behavior of phosphatidylglycerols from chilling-sensitive and chilling-resistant plants // Plant Physiol. 1984. - V. 74. - P. 1016-1024.

133. Wu J., Browse J. Elevated levels of high-melting-point phosphatidylglycerols do not induce chilling sensitivity in an Arabidopsis mutant // The Plant Cell. 1995. -V. 7.-P. 17-27.

134. Roughan P.G. Phosphatidylglycerol and chilling sensitivity in plants // Plant Physiol. 1985. - V. 77. - P. 740-746.

135. Raison J.K., Wright L.C. Thermal phase transitions in the polar lipids of plant membranes. Their induction by disaturated phospholipids and their possible relation to chilling injury // Biochem. Biophys. Acta. 1983. - V. 731. - P. 69-78.

136. Mudd J.B. Lipids: structure and function // The Biochemistry of Plants. Ed. P.K. Stumpf. New York: Academic Press, 1980. - V. 4. - P. 509-534.

137. Raison J.K. Membrane lipids: structure and function // The Biochemistry of Plants. Ed. P.K. Stumpf. New York: Academic Press, 1980. - V. 4. - P. 57-83.

138. Бергельсон Л.Д. Мембраны, молекулы, клетки. М.: Наука, 1982. - С. 2224.

139. Williams J.P., Khan M.U., Wong D. Fatty acid desaturation in mono-galactosyldiacylglycerol of Brassica napus leaves during low temperature acclimation // Physiologia Plantarum. 1996. - V. 96. - P. 258-262.

140. Лось Д.А. Молекулярные механизмы холодоустойчивости растений // Вестник Российской Академии Наук. 2005. - Т. 75. - № 4. - С. 338-345.

141. Kodama Н. and others. Fatty acid desaturation during chilling acclimation is one of the factors involved in conferring low-temperature tolerance to young tobacco leaves//Plant Physiol.- 1995.-V. 107.-P. 1177-1185.

142. Norman H.A., Krizek D.T., Mirecki R.M. Changes in membrane lipid and free fatty acid composition during low temperature preconditioning against S02 injury in coleus // Phytochemistry. 2001. - V. 58. - P. 263-268.

143. Parkin K.L. and others. Chilling injury. A review of possible mechanism // J. Food Biochem. 1989. - V. 13. - P. 127-153.

144. Blee E. Phytooxylipins and plant defense reactions // Progr. Lipid Res. 1998. -V.37.-№ l.-P. 33-72.

145. Zhuang H., Barth M.M., Hildebrand D. Fatty acid oxidation in plant tissues // Food Science and Technology. Y. 117 (Food Lipids). Ed. C.C. Akoh, D.B. Min. -New York: Marcel Dekker, Inc., 2002. P. 413-464.

146. Kleiman R., Spencer G.F. Gas chromatography-mass spectrometry of methyl esters of unsaturated oxygenated fatty acids // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1973. - V. 50.-P. 31-38.

147. Frankel E.N., Neff W.E. Analysis of autoxidized fats by gas chromatography-mass spectrometry. IV. Soybean oil methyl esters // Lipids. 1979. - V 14. - № 1. -P. 39-46.

148. Frankel E.N. Lipid Oxidation // Progr. Lipid Res. 1980. - V. 19. - № 1-2. - P. 1-22.

149. Бурлакова Е.Б., Храпова Г.Г. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты // Успехи химии. 1985. - Т. 54. - вып. 9. - С. 15401558.

150. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. - 252 с.

151. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте. М.: Наука, 1975. - С. 214.

152. Shewfelt R.L., Purvis А.С. Toward a comprehensive model for lipid peroxidation in plant tissue disorders // Hort. Science. 1995. - V. 30. - P. 213.

153. Graner G., Hamberg M., Meijer J. Screening of oxylipins for control of oilseed rape (Brassica napus) fungal pathogens I I Phytochemistry. 2003. - V. 63. - P. 8995.

154. Флора СССР. М.-Л.: Сельхозгиз, 1958. - Т. 23. - С. 443-448.

155. Лесков А.И., Никонов Г.К., Шретер А.И. В кн.: Атлас лекарственных растений СССР. - М.: Изд-во мед. лит, 1962. - С. 212-213.

156. Тхэсоп Т. Лекарственные растения. М.: Медицина, 1987. - С. 250-251.

157. Гридина С.Б., Скворцова Р.И. Пищевая ценность ягод дикорастущей калины Кемеровской области / М-во высшего и среднего спец. образования РСФСР. Кемеровский технологический ин-т пищевой промышленности. —

158. Кемерово, 1986. 7 с. - Рукопись деп. в Arpo НИИТЭИ Пищепром. 23.12.86, № 1471.-8 с.

159. Евтухова О.М., Теплюк Н.Ю., Леонтьев В.М., Иванова Г.В. Содержание биологически активных соединений в плодах калины и жимолости, произрастающих в Красноярском крае // Химия растительного сырья. 2000. -№ 1. - С. 77-79.

160. Спрыгин В.Г., Кушнерева Н.Ф. Калина новый нетрадиционный источник олигомерных проантоцианидинов // Химико-фармацевтический журнал. - 2004. - Т.38. - № 2. - С. 41-45.

161. Иванов В.Д., Ладыгина Е.Я., Комиссаренко Н.Ф. Аминокислотный состав различных органов калины обыкновенной Viburnum opulus L. // Фармация. -1985.-T. 34.-№5.-С. 8-10.

162. Каминская A.B., Деркач А.И., Степанова Т.А., Комиссаренко Н.Ф. Химическое исследование Viburnum sargenta Koehne II Растительные ресурсы. -1994. T. 30. - № 3. - С. 60-63.

163. Сдобникова Л.А. и др. Жирнокислотный состав липидов некоторых лекарственных растений // Химия природ, соедин. 1981. - № 6. - С. 793-795.

164. Лобанова A.A., Сысолятин C.B., Сакович Г.В., Зимина В.Г. Масло плодов Viburnum opulus L. // Химия растительного сырья. 1999. - № 4. - С. 101-103.

165. Шретер А.И., Муравьева Д.А. Пакалн Д.А., Ефимова Ф.В. Лекарственная флора Кавказа. М.: Медицина, 1979. - С. 117-119.

166. Okada J., Koyama J. Fatty acid composition from oil of Viburnum awabuki seeds II J. Japan Oil Chem. Soc. 1969. - V. 18. - № 8. - P. 480-483.

167. Иванов В.Д., Иванов В.П., Бобылев Р.В., Ладыгина Е.Я. Жирнокислотный состав липидов калины обыкновенной (Viburnum opulus L.) II Фармация. 1984. -T. 33.-№4.-С. 26-28.

168. Муравьев И.А., Шатило B.B. Отходы ягод клюквы Oxycoccus quadripetalus Gilib. как источник получения урсоловой кислоты // Растительные ресурсы. -1972.-Т. 8. № 1. - С. 104-106.

169. Шапиро Д.К. Целебные культуры перспективное направление в садоводстве. - Минск: Наука и техника, 1978. - С. 10-12.

170. Rios M.Y., Gonza'les-Morales A., Villarreal M.L. Sterols, triterpenes and biflavonoids of Viburnum jucundum and cytotoxic activity of ursolic acid // Planta Medica. 2001. - V. 67. - № 7. - P. 683-684.

171. Семенов А.А. Очерк химии природных соединений. Новосибирск: Наука, 2000. - С. 262-268.

172. Иванов В.Д., Ладыгина Е.Я. Изучение химического состава плодов калины обыкновенной Viburnum opulus L.ll Фармация. 1983. - Т. 32. - № 3. - С. 13-15.

173. Majumder P.L., Bagchi A. Chemical constituents of Viburnum cotinifolium.l'/ J. Indian Chem. Soc. -1981. V. 58. - № 12. - P. 1121-1122.

174. Каминская A.B., Деркач А.И., Степанов Т.А., Комиссаренко Н.Ф. Оксикоричные кислоты плодов Viburnum sargentii II Химия природ, соедин. -1994.-№5.-С. 677.

175. Kagawa М. and others. Oleanane-type triterpenes from Viburnum awabuki II Phytochemistry. 1998. - V. 47. - № 6. - P. 1101-1106.

176. Machida K., Kikuchi M. Studies of the constituents of Viburnum species. Six new triterpenoids from Viburnum dilatatum. II Chem. Pharm. Bull. 1999. - V. 47. -№ 5. - P. 692-694.

177. Fukuyama Y., Minami H., Fujii H., Tajima M. Triterpenoids from Viburnum suspensum И Phytochemistry. 2002. - V. 60. - № 8. - P. 765-768.

178. Юнусова С.Г., Зинурова Э.Г., Юнусов M.C., Галкин Е.Г., Каримова А.Р. Липиды семян калины обыкновенной (Viburnum opulus L.) И Изв. АН. Сер. хим. 1998. - № 6. - С. 1239-1243.

179. Каримова А.Р., Юнусова С.Г., Масленников С.И., Галкин Е.Г., Юнусов Т.С., Шерешовец В.В., Юнусов М.С. Липиды, липофильные компоненты и биологически активные фракции семян Viburnum opulus L. II Химия природ, соедин. 2000. - № 6. - С. 447-450;

180. Щербаков В. Г. Биохимия и товароведение масличного сырья. М.: Агропромиздат, 1991. - 304 с.

181. Полякова A.A., Хмельницкий P.A. Введение в масс-спектрометрию органических соединений. М.: Химия, 1966. - С. 80.

182. Бейнон Д. Масс-спектрометрия и ее применение в органической химии: Пер. с англ. М.: Мир, 1964. - С. 351.

183. Будзикевич Г., Джерасси К., Уильяме Д. Интерпретация масс-спектров органических соединений: Пер. с англ. М.: Мир, 1966. - С. 44.

184. Вульфсон Н.С., Заикин В.Г., Микая А.И. Масс-спектрометрия органических соединений. М.: Химия, 1986. - С. 312.

185. Шталь Э. Хроматография в тонких слоях: Пер. с нем. М.: Мир, 1965. - С. 475-492.

186. Budzikiewicz H., Wilson J.M., Djerassi С. Mass spectrometry in structural and stereochemical problems. XXXII. Pentacyclic triterpenes // J. Amer. Chem. Soc. -1963. V. 85. - № 22. - P. 3688-3699.

187. Фокина Г.А., Белова H.B. Газожидкостная хроматография тритерпеноидов. II. Производные пентациклических спиртов и кислот. Анализ кислот из растительных экстрактов // Химия природ, соедин. 1975. - № 6. - С. 735-739.

188. Коровин A.B., Ткачев A.B. Синтез хиноксалинов, конденсированных с тритерпенами, производных урсоловой кислоты и бетулина // Изв. АН. Сер. хим. 2001. - № 2. - С. 292-297.

189. Sakai К. and others. New cytotoxic oleanane-type triterpenoids from the cones of Liquidamber styraciflua II J. Nat. Prod. 2004. - V. 67. - P. 1088-1093.

190. Гончарова Н.П., Исамухамедов А.Ш., Глушенкова А.И. Глико- и фосфолипиды плодов Elaeagnus angustifolia II Химия природ, соедин. — 1993. -№5.-С. 646-651.

191. Шляпинтох В.Я., Карпухин О.Н., Постников М.М. Хемилюминесцентные методы исследования медленных химических процессов. М.: Наука, 1966. -300 с.

192. Храпова Н.Г. Исследование синтетических и природных антиоксидантов. -М.: Наука, 1992.-110 с.

193. Аристархова С.А., Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Изучение ингибирующей активности токоферола // Изв. АН. Сер. хим. 1972. - № 12. - С. 2714-2718.

194. Методические рекомендации для использования экспресс-метода биологической оценки продуктов и кормов. М.: ВАСХНИЛ, 1990.

195. Каримова А.Р., Юнусова С.Г., Галкин Е.Г., Федоров Н.И., Юнусов М.С. Липиды и липофильные компоненты плодов калины обыкновенной (Viburnum opulus L.) в процессе созревания // Изв. АН. Сер. хим. 2004. - № 1. - С. 235240.

196. Mathur J.M.S. Pathway of triglyceride biosynthesis during seed ripening // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1970. - V. 47. - № 3. - P. 100-101.

197. Vaskovsky V.E., Kostetsky E.Y., Vasendin I.M. A universal reagent for phospholipid analysis // J. Chromatogr. 1975. - V. 114. - № 1. - P. 129-141.

198. Radwan S.S., Mangold H.K. The lipids of plant tissue cultures // Advances in Lipid Research. Ed. R Paoletti, D. Kritchevsky. New York: Academic Press, 1974. -V. 14.-P. 171-205.

199. Ганстон Ф.Д. Жирные кислоты // Общая органическая химия: Пер. с англ. / Под ред. Н.К. Кочеткова. М.: Химия, 1986. - Т. 11. - С. 31-32.

200. Kinter М. Analytical technologies for lipid oxidation products analysis // J. Chromatogr. 1995. - V. 671. - P. 223-236.

201. Жизнеспособность семян: Пер. с англ. / Под ред. М.К. Фирсовой. М.: Колос, 1978.-415 с.

202. Гусакова С.Д., Юнусова С.Г., Черненко Т.В., Назарова И.П., Глушенкова А.И. Липиды дефектных хлопковых семян и влияние микрофлоры на их состав // Химия природ, соедин. 1986. - № 6. - С. 677-686.

203. Юнусова С.Г., Каримова А.Р., Цырлина Е.М., Юнусов М.С., Денисенко О.Н. Изменение биологически активных компонентов при хранении семян Viburnum opulus II Химия природ, соедин. 2004. - № 5. - С. 349-351.

204. Решение о выдаче патента на изобретение от 25.04.05 по заявке № 2004103117/13. Приоритет от 03.02.2004. Кормовая добавка для цыплят-бройлеров и кур-несушек / Абдрахманов И.Б., Гадиев P.P., Гизатуллин Р.С.,

205. Гумарова Г.А., Ишбулдин В.Б., Юнусов М.С., Юнусова С.Г., Муринов Ю.И., Каримова А.Р., Цырлина Е.М.

206. Hettman Е. Modern Methods of Steroid Analysis. New York: Academic Press, 1973.-P. 138.

207. Вульфсон H.C., Заикин В.Г. Масс-спектрометрический метод определения положения двойной связи в непредельных стероидах // Успехи химии. 1973. -Т. 42. - вып. 8. - С. 1379-1414.

208. Головкина JI.C., Русинова Г.В., Петров A.A. Масс-спектрометрия насыщенных углеводородов // Успехи химии. 1984. - Т. 53. - вып. 9. - С. 1493-1522.

209. Руководство по методам исследования, технохимическому контролю и учету производства в масложировой промышленности. Д.: ВНИИЖ, 1965. -Т. 2.-С. 146.

210. Руководство по методам исследования, технохимическому контролю и учету производства в масложировой промышленности. Л.: ВНИИЖ, 1965. -Т. 2.-С. 152.

211. Технохимический контроль и учет производства в маслодобывающей и жироперерабатывающей промышленности. М.: Пищпромиздат, 1958. - Т. 1. -С. 306.

212. Лимарь P.C., Сахарова О.В. Быстрый спектрофотометрический метод определения пигментов листьев // Методы комплексного изучения фотосинтеза. 1973. - вып. 2. - С. 260-267.

213. Масленников С.И. Анализ механизма жидкофазного ингибированного окисления методом асимптотических приближений и экспериментальная проверка полученных соотношений: Дисс. . канд. хим. наук. Уфа, 1989. -210 с.

214. Kaliakin L.A., Maslennikov S.I., Komissarov V.D. The method of asymptotic approximations as applied to analyzing the mechanism of inhibited liquid-phase oxidation // Inter. J. Chem. Kinetics. 1993. - V. 25. - P. 681-700.

215. Полюдек-Фабиньи P., Бейрих Т. Органический анализ. JI.: Химия, 1981. -253 с.

216. Lowry О.Н. and others. Protein measurement with folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951. - V. 193. - P. 265-275.

217. Маршелл P., Инглис А., Фонтана А. Аналитические методы // Практическая химия белка: Пер. с англ. М.: Мир, 1989. - С. 296.

218. Физер Л., Физер М. Реагенты для органического синтеза. М.: Мир, 1970. -Т. 1.-С. 242.

219. Черненко Т.В., Талипова М., Глушенкова А.И., Умаров А.У., Рахимов Д. Липиды хлопкового ядра // Химия природ, соедин. 1983. - № 4. - С. 435-438.

220. Ульченко Н.Т., Мухамедова Х.С., Глушенкова А.И., Набиев А.А. Липиды плодов шиповника // Химия природ, соедин. 1995. - № 6. - С. 799-800.

221. Газизов Ф.Ю., Исамухамедов А.Ш., Акрамов С.Т. Изучение фосфолипидов хлопчатника сорта 159-Ф в процессе его развития // Химия природ, соедин. -1980. № 4. - С. 485-488.