Люминесцентные и тест-методы определения токсикантов, основанные на концентрировании в организованных системах тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

На правах рукописи

г

ГОРЯЧЕВА Ирина Юрьевна

ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЕ И ТЕСТ- МЕТОДЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИКАНТОВ, ОСНОВАННЫЕ НА КОНЦЕНТРИРОВАНИИ В ОРГАНИЗОВАННЫХ СИСТЕМАХ

02 00 02 - аналитическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук

□ОЗОб1182

Саратов - 2007

003061182

Работа выполнена на кафедре общей и неорганической химии химического факультета Саратовского государственного университета им Н Г Чернышевского

Официальные оппоненты

доктор химических наук, профессор Будников Герман Константинович доктор химических наук, профессор Гусакова Наталия Николаевна доктор химических наук, профессор Щеголев Сергей Юрьевич

Ведущая организация

Химический факультет Московского государственного университета им М В Ломоносова

Защита состоится 28 июня 2007 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 212 243 07 по химическим наукам при Саратовском государственном университете им Н Г Чернышевского (410012, Саратов, ул Астраханская, 83, СГУ, корп 1 химический факультет)

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Саратовского государственного университета

Автореферат разослан 21 мая 2007 г. Ученый секретарь диссертационного совета,

Научный консультант:

д х н, профессор Штыков Сергей Николаевич

доктор химических наук, доцент

В В Сорокин

Рост загрязнения объектов окружающей среды и пищевых продуктов эко- и био-токсикантами приводит к расширению списка нормируемых загрязнителей и ужесточению гигиенических нормативов их присутствия в объектах окружающей среды и продуктов питания Увеличение количества контролируемых показателей и требований к минимально определяемым концентрациям загрязнителей диктует необходимость разработки методик быстрого скрининга следовых количеств веществ в разных матрицах Для повышения производительности, снижения трудоемкости, уменьшения потерь особенно удачным может быть сочетание в едином аналитическом цикле стадий концентрирования и определения

Актуальным является поиск систем, позволяющих объединить стадии выделения и определения В идеале такие системы должны удовлетворять требованиям «зеленой химии», то есть не вносить дополнительного загрязнения в окружающую среду Этим требованиям удовлетворяют системы на основе поверхностно-активных веществ (ПАВ). Последние 30 лет ПАВ широко используются в аналитической химии, прежде всего, в различных вариантах спектроскопических и хроматографических методов В последние годы ПАВ используются для выделения из матрицы образца и концентрирования, однако в большинстве методов реализуется трудоемкое хроматографическое окончание анализа Другая перспективная система -антитела, которые широко применяются как для очистки и концентирования (например, иммуноафинные колонки, иммуносорбенты), так и для проведения иммунохимических методов анализа

Однако практически не существует работ, в которых уникальные возможности взаимодействия солюбилизат - молекула ПАВ и антиген-антитело использовались бы комплексно для объединения всех или нескольких стадий аналитического определения Объединение концентрирования с люминесцентным или визуальным детектированием позволит сократить время определения, упростить анализ, сократить число стадий

Цель работы - разработка подходов к повышению чувствительности и селективности определения полициклических ароматических углеводородов и микотоксинов с использованием взаимодействия солюбилизат - мицеллы ПАВ и антиген - антитело

В качестве аналитических методов использовались различные люминесцентные методы - флуориметрия, фосфориметрия при комнатной температуре (ФКТ), сенсибилизированная ФКТ, поляризационный флуоресцентный иммуноанапиз (ПФИА), а так же визуальное детектирование окраски, развивающейся в результате ферментативной реакции Методами концентрирования и выделения явились:

• концентрирование в объеме мицелл ПАВ,

• экстрагирование в фазу ПАВ в результате фазового разделения мицеллярных растворов (cloud-point extraction),

• иммуноафинное концентрирование

Для достижения поставленной цели необходимо было решить

следующие задачи

• Изучить спектральные и кинетические характеристики люминесценции полициклических ароматических углеводородов (ПАУ) в мицелярных растворах ПАВ, установить закономерности взаимодействия люминофоров с тушителями люминесценции в таких средах и рассчитать кинетические характеристики процессов, установить характер влияния природы и концентрации ПАВ, тушителя флуоресценции на дезактивацию возбужденных состояний люминофоров, найти условия, обеспечивающие наиболее эффективное взаимодействие люминофоров с тяжелым атомом в мицеллярных растворах ПАВ различной природы

• Провести сравнительное изучение возможностей селективного определения ПАУ методами флуоресценции, фосфоресценции и сенсибилизированной фосфоресценции

• Оценить аналитические возможности растворов анионных и неионных ПАВ как экстракционных систем для концентрирования токсикантов, разработать подходы к сочетанию в едином цикле стадий концентрирования и люминесцентного определения ПАУ в растворах анионных и неионных ПАВ

• Разработать пути практического применения сочетания концентрирования и иммунохимического детектирования для определения следовых количеств токсикантов в сложных окрашенных матрицах

Научная новизна:

• Предложен подход к повышению селективности определения ПАУ, основанный на переносе энергии в триплетном состоянии в мицеллярных растворах ПАВ,

• Выявлены факторы, определяющие влияние мицелл ПАВ и тяжелых атомов на дезактивацию синглетных и триплетных возбужденных состояний ПАУ,

• Проведено систематическое изучение экстракции с использованием растворов ПАВ Использование ПАВ позволяет избежать традиционных токсичных органических растворителей,

• Предложен подход, позволяющий на основе концентрирования и определения проводить неинструментальное иммунохимическое определение низких концентраций одного или нескольких токсикантов в окрашенных матрицах

Практическая значимость работы:

• Создан комплекс методик определения микотоксинов, ПАУ и их производных в различных матрицах, обоснованы принципы выбора аналитических методов для анализа сложных смесей

• Предложены методики разделения и концентрирования без применения традиционных токсичных органических растворителей, основанные на экстракции с использованием водных растворов ПАВ

• Реализовано неинструментальное иммунохимическое определение низких концентраций одного или нескольких токсикантов в окрашенных матрицах, основанное на сочетании концентрирования и определения в объеме геля

На защиту автор выносит:

• Принципы выбора мицеллярных систем, позволяющих достичь наиболее эффективное взаимодействие люминофоров с тушителем флуоресценции, выбранные с использованием в качестве зонда флуоресценции и фосфоресценции системы, обеспечивающие наиболее эффективное взаимодействие,

• Результаты изучения влияния структуры определяемых веществ и ПАВ на экстракцию из водных и неводных растворов и нахождение закономерностей, которые влияют на параметры экстракции и ее аналитические характеристики в сочетании с флуоресцентным и фосфоресцентным детектированием,

• Разработанные новые схемы анализа, основанные на извлечении вещества из водного или неводного раствора в фазу ПАВ с последующим люминесцентным определением,

• Новые подходы к сочетанию шагов очистка-концентрирование-определение для развития внелабораторных тест-методов

• Принципы оптимизации иммунохимических тест-методик для определения следовых количеств токсикантов в различных матрицах

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на I - V Всероссийских конференциях молодых ученых «Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии» (1997, 1999, 2001, 2003, 2005 Саратов), X Всероссийская конференция по химическим реактивам «Реактив-97» (1997 Москва), Международном конгрессе по аналитической химии (1997, Москва), I и II Всероссийских семинарах «Проблемы и достижения люминесцентной спектроскопии» (1998 и 2001, Саратов), XXIV Европейском конгрессе по молекулярной спектроскопии (1998, Прага), II Всероссийской научной конференции "Физические проблемы экологии (Физическая экология)" (1999, Москва), 37 Конгресс IUPAC «Frontiers in Chemistry Molecular Basis of the Life Sciences» (1999, Berlin), VII Всероссийской конференции «Органические реагенты в аналитической химии» (1999, Саратов), X Российско-Японском симпозиуме по аналитической химии (2000, Москва), XX международной конференции по фотохимии ICP XX (2001, Moscow), Международной конференции по люминесценции, поев 110-летию со дня рожд СИ Вавилова (Москва, 2001), Всероссийской конференции «Актуальные проблемы аналитической химии» (Москва, 2002), Международном форуме «Аналитика и аналитики» (2003, Воронеж), XIII Российско-немецко-уграинском симпозиуме по аналитической химии Argus'2003 (2003, Hamburg), Всероссийской конференции «Аналитика России» (2004, Москва), конференции «Молекулярное моделирование в химии, биологии, медицине»

(2004, Саратов), конференции «Разделение и концентрирование в аналитической химии» (2005, Краснодар), "Advances on genomics, biodiversity and rapid systems detection of toxigenic fungi and mycotoxins" (Monopol!, 2006), "The world mycotoxin forum" (2006, Cincinnati), 2nd International Conference on Natural Toxins (2006, Cairo), 34th International Symposium on Environmental Analytical Chemistry (Hamburg, 2006), «Rapid Methods Europe 2007» (2007, Noordwijkerhout)

Публикации. По теме данного исследования опубликовано 107 публикаций, в том числе 26 статей в международных и отечественных журналах, 18 в сборниках статей и 63 тезисов докладов международных и всероссийских конференций

Личный вклад автора заключается в теоретическом обосновании проблемы, постановке и решении основных задач исследования, проведении экспериментальных работ, обработке и интерпретации экспериментальных результатов Личный вклад автора в работы, выполненные в соавторстве и включенные в диссертацию, состоит в разработке теоретических и практических подходов, экспериментальном получении результатов, обосновании их практического применения, а так же систематизации, обобщении и анализе полученных результатов

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, девяти глав обсуждения результатов, выводов, списка цитируемой литературы (491 наименование) и списка сокращений Объем диссертации составляет 227 страниц, в том числе 129 рисунков и 56 таблиц.

Финансовая поддержка работы осуществлялась проектами РФФИ (97-03-33393а, 01-03-32649а, 02-03-06291 мае, 03-03-06537мас, 04-03-32946а, 05-03-34828МФа), Минобразования России (97-0-9 5-40, 00-5 0-253, 45166, 45432), Федерального агентства по науке и инновациям (контракт 02 513 11 3028), госбюджетной темой НИР (номер госрегистрации 01 20 0603509)

Глава 1 Флуоресценция полициклических ароматических углеводородов в растворах поверхностно-активных веществ

В первой главе приведены результаты изучения влияния мицелл и домицеллярных концентраций ПАВ на реакции полициклических ароматичских углеводородов (ПАУ) в возбужденном состоянии (образование эксимеров, дезактивация возбужденный синглетных состояний в присутствии ионов - тушителей флуоресценции) В качестве критерия эффективности взаимодействия использовались эффективность эксимерообразования пирена и снижение интенсивности флуоресценции ПАУ в результате взаимодействия с тушителями флуоресценции Приведены результаты изучения влияния различных факторов (природы и типа тяжелого атома, природы и концентрации ПАВ, температуры) на эффективность взаимодействия Спектральные характеристики люминесценции изученных

ПАУ, а так же константы скорости тушения флуоресценции Штерна-Фольмера приведены в табл 1.

Таблица 1

Спектральные и кинетические характеристики молекул ПАУ (С = в водно-мицеллярных растворах ДДС (С = 0,05 М)

4 10°М)

Люминофор НМ Хфл, нм ^•фосф, НМ КштФ Ю', л моль

Флуорен 296 312 447 -

Фенантрен 294 365 496 1,2 ±0,2

Нафталин 274 328 477 -

Пирен 336 397 597 4,9 ± 0,4

Бенз[а]ашрацен 360 395 604 3,4 ±0,3

Антрацен 342 402 678 4,3 ± 0,4

Хризен 324 408 515 1,7 + 0,1

Флуорантен 361 452 523 1,4 ±0,1

1-Бромпирен 342 407 620 0,25 ± 0,01

- тушитель Т1ЫОз

О ч--+

О 001 О 003

I --+—f — О 005 О 007 0 009

Рис

С (Тритон Х-100), М 1 Зависимость интенсивности флуоресценции мономеров

.а------1----

0 02 0 03 0 04 ОС

С (ДДС), м (1), эксимеров

(2)

эффективности образования эксимеров (3) пирена (С = 1 Ю М) от концентрации Тритона Х-100 (А) и ДДС (Б)

Эксимерообразование пирена, проявляющееся в виде широкой длинноволновой полосы в спектре флуоресценции, может служить моделью бимолекулярной реакции между двумя одинаковыми гидрофобными молекулами В качестве критерия эффективности эксимерообразования было использовано отношение интенсивности максимумов полос флуоресценции эксимеров (Хмакс = 480 нм) и мономеров (^.макс = 397 нм) В домицелярной области концентраций НПАВ в спектре флуоресценции пирена присутствует

только полоса эксимеров При увеличении концентрации НПАВ выше ККМ эффективность образования эксимеров снижается (рис 1А). Зависимость эффективности образования эксимеров от концентрации анионного ДДС проходит через максимум (рис 1Б)

Для изучения факторов, влияющих на эффективность взаимодействия между неполярными солюбилизированными в ядре молекулами и анионами-тушителями использовался процесс тушения флуоресценции Для количественного описания эффективности процесса тушения использовалось уравнение Штерна-Фольмера

у = 1 + Г0 [0] = 1 + [0],

где /0 и / — интенсивность флуоресценции в отсутствие и присутствии тушителя, соответственно, Кя - бимолекулярная константа скорости тушения, То - время жизни флуоресценции в отсутствие тушителя, КШт.Ф = Кч То - константа тушения Штерна-Фольмера, [О]— концентрация тушителя Для всех изученных систем зависимости Штерна-Фольмера носили прямолинейный характер, что свидетельствует о существовании в растворе одного типа люминофоров, одинаково доступного для тушителя При использовании статистики Пуассона показано, что и эксимерообразование, и тушение определяются распределением молекул между мицеллами

Изучение тушения флуоресценции в растворах индивидуальных ПАВ показало, что в мицеллах анионных ПАВ наиболее эффективное тушение осуществляется солями таллия (I) Константы Штерна-Фольмера тушения флуоресценции ПАУ приведены в табл 1 В мицеллярных растворах катионных ПАВ добиться эффективного тушения флуоресценции ПАУ не удалось, поскольку при повышении концентрации противоионов иода, обладающих наибольшей среди анионов константой спин-орбитального взаимодействия, наблюдалось помутнение растворов из-за образования нерастворимого иодида цетилтриметиламмония

Отсутствие заряда у мицелл НПАВ позволяет использовать в качестве тушителей флуоресценции и катионы и анионы В отличие от тушения в мицеллярных растворах ионных ПАВ, в растворах Тритона Х-100 эффективность тушения ионами таллия и иода близка Поскольку ионы таллия (I) эффективно взаимодействуют с молекулами ПАУ так же в растворах АПАВ, особое внимание было уделено тушению иодид-ионами Рассчитанные значения констант Штерна-Фольмера тушения флуоресценции пирена анионами иода представлены в табл 2

Сравнение констант тушения в ряду симметричных' катионов алкилпроизводных четвертичных аммониевых солей показывает, что для всех изученных НПАВ эффективность тушения флуоресценции снижается с ростом длины углеводородного радикала Эффективность тушения в случае (СН3)4Ы1 сопоставима с тушением иодидом калия Наиболее эффективное взаимодействие ионов иода с молекулами пирена наблюдается в случае использования длинноцепочечного ЦТАИ, что объясняется образованием

смешанных мицелл и наиболее тесным контактом солюбилизированных молекул пирена с иодид-ионами. Из сравнения констант Штерна-Фольмера тушения флуоресценции пирена иодидом калия и иодидом цетилтриметиламмония в мицеллярных растворах Тритон Х-100 и Тритон X-305, обладающих оксиэтиленовыми радикалами различной длины (10 оксиэтиленовых звеньев у Тритона Х-100 и 30 - у Тритона Х-305), можно предположить, что с ростом длины оксиэтиленовой цепи эффективность тушения уменьшается

Из сравнения констант скорости тушения флуоресценции пирена иодидом калия, иодидами четвертичных аммониевых солей и иодидом цетилтриметиламмония в мицеллярных растворах Твин-20 и Твин-80, отличающихся углеводородными радикалами, следует, что в случае более гидрофобного радикала Твин-80 эффективность тушения флуоресценции пирена для всех тушителей ниже Видимо, это объясняется понижением общей полярности микроокружения пирена в мицеллах Твин-80 по сравнению с мицеллами Твин-20, и как следствие, слабым взаимодействием полярного тушителя с люминофором

Наиболее эффективное тушение анионами иода, сопоставимое с тушением катионами таллия в мицеллах ДДС, наблюдается в случае неионного Твин-20 и тушителя цетилтриметиламмоний иодида (ЦТАИ)

Таблица 2

Значения констант Штерна-Фольмера тушения флуоресценции пирена (С = 4 Ю^М) анионами иода в растворах НПАВ (С = 0,003 М) (Кшт ф 10 , л моль ')

НПАВ Тушитель

К1 ССНзШ! (С2Н5)А'1 (С,н7)4т с1бн„(сн,)3т

Бридж-35 3,4 2,2 1,9 1,5 14

Тритон Х-100 3,0 1,8 0,87 0,72 13

Тритон Х-305 1,8 - - - 11

Твин-20 4,9 5,3 4,5 4,0 41

Твин-80 3,3 3,8 2,9 2,7 12

Проксамин-305 5,5 7,1 6,2 6,0 30

Проксанол-268 6,2 7,3 6,9 6,3 38

Проксанол-091 5,3 7,7 7,1 6,9 27

п = 5, Р = 0,95

Глава 2 Фосфоресценция и сенсибилизированная фосфоресценция полициклических ароматических углеводородов в растворах поверхностно-

активных веществ

Во второй главе обобщены результаты изучения фосфоресценции при комнатной температуре (ФКТ) и сенсибилизированной фосфоресценции (С-

ФКТ) ПАУ в мицеллярных растворах Спектры испускания фосфоресценции ПАУ находятся в более длинноволновой части спектра по сравнению со спектрами их флуоресценции, что связано с меньшей величиной энергии триплетного состояния молекул

Для изучения влияния различных факторов на интенсивность фосфоресценции молекул ПАУ в качестве люминесцентных зондов были выбраны молекулы незамещенного пирена и его бромзамещенного аналога 1-бромпирена Выбор последнего продиктован наличием в составе его молекулы внутреннего тяжелого атома брома, который позволяет наблюдать фосфоресценцию в отсутствие в растворе внешнего тяжелого атома и может быть использован в качестве зонда, чувствительного к присутствию в системе различных тушителей триплетного состояния Фосфоресценция 1-бромпирена, содержащего внутренний тяжелый атом, наблюдается в растворе всех типов ПАВ, в то время как фосфоресценция пирена в присутствии внешних тяжелых ионов таллия (I) - только в случае мицелл ДДС

Вследствие большого времени жизни триплетное состояние молекул очень чувствительно к присутствию в растворе тушителей, самым распространенным из которых является кислород В последние годы метод удаления кислорода с помощью сульфита натрия вытеснил другие способы, однако, это ограничило круг используемых внешних тяжелых атомов только катионами таллия (I) Показано, что при использовании сульфита натрия связывание кислорода и возникновение фосфоресценции наблюдаются только при предварительном облучении (стационарном или импульсном) мицеллярного раствора ПАУ Раствор, не подвергшийся предварительному освещению, сигнала фосфоресценции не дает Для установления влияния концентрации сульфита натрия на интенсивность фосфоресценции получены зависимости интенсивности фосфоресценции пирена и 1-бромпирена от концентрации обескислороживающего агента в растворе ДДС, ход которых, как видно из рис 2, различен

Непрерывный рост ФКТ в случае 1-бромпирена позволяет предположить, что увеличение концентрации сульфит-ионов способствует более глубокому удалению кислорода из мицеллярного раствора Присутствие максимума на зависимости для пирена может быть вызвано следующими причинами уменьшением локальной концентрации ионов таллия вблизи солюбилизированных молекул пирена, вследствие их частичного вытеснения с поверхности мицелл катионами натрия, а также образованием комплекса Т1503", который поглощает часть возбуждающего излучения в области 260 - 290 нм

Концентрация сульфита натрия влияет также на время жизни молекул ПАУ в триплетном состоянии время жизни сначала уменьшается, затем, при концентрации больше 0,01 М возрастает Этот процесс является прямым следствием вытеснения ионов таллия с поверхности мицелл, в результате чего скорость испускания фосфоресценции снижается и время жизни растет Таким образом увеличение концентрации сульфита натрия сопровождается

двум явлениями снижением скорости процесса интеркомбинационной конверсии Б)—>Т1, что приводит к уменьшению зеселенности триплетного состояния, а также снижением скорости процесса дезактивации триплетного состояния, проявляющемуся в увеличении времени его жизни

0 02

0 04

0 06

Рис 2 Зависимость интенсивности ФКТ пи-рена в присутствии нитрата таллия (С = 0,02 М) (1) и 1-бромпирена (С = 4 10"6 М) (2) от концентрации сульфита натрия, в растворе ДЦС (С = 0,05 М)

0 08 0 1 С (Ыа2503), М

Влияние природы и концентрации тяжелых атомов на интенсивность фосфоресценции молекул ПАУ в водно-мицеллярных растворах ПАВ было изучено на примере систем, для которых получены наибольшие значения констант скорости тушения флуоресценции Штерна-Фольмера (см гл 1) ионов таллия (I) в мицеллах ДЦС и ионов иода в смешанных мицеллах Твин-20 - ЦТА Полученные результаты приведены в табл 3

Таблица 3

Значения констант Штерна-Фольмера тушения флуоресценции тяжелыми атомам и относительная интенсивность фосфоресценции пирена (С = 4 106 М) в водно-мицеллярных растворах ДЦС (С = 0,05 М)

Тяжелый атом Соединение Мицеллы ПАВ КштФ'Ю3, л моль"1 1 1фОСф

I иодид калия - -

А8+ нитрат серебра 1,8 ±0,1 -

тГ нитрат ацетат трифторацетат тетрафенилборат сульфат ддс 4,9 ± 0,3 4,7 ± 0,3 4,2 ± 0,3 3,7 ± 0,2 1,6 ±0,1 0,98 1,0 0,90 0,81 0,46

г Твин-20 - ЦТА 4,1 ± 0,2 -

п = 5, Р = 0,95

При использовании в качестве тяжелого атома иона иода в смешанных мицеллах Твин-20 — ЦТА, несмотря на высокое значение константы тушения Штерна-Фольмера, фосфоресценция пирена не наблюдается Интенсивность фосфоресценции 1-бромпирена с ростом концентрации иода в растворе возрастает лишь незначительно, что, объясняется присутствием атома брома в самой молекуле, обуславливающем собственную ФКТ, а также отсутствием эффективного взаимодействия между молекулой люминофора и тяжелым атомом иода из-за оттеснения его сульфит-ионами с поверхности смешанных мицелл

На основании изучения кинетики затухания фосфоресценции ПАУ определены константы скорости тушения их триплетных состояний ионами таллия и константа скорости дезактивации триплетных состояний ПАУ Поскольку взаимодействие между молекулами пирена и катионами таллия осуществляется в мицеллярной фазе, при вычислении значения мицеллярной константы учитывали объем этой фазы Полученные значения мицеллярных констант для триплетных состояний некоторых ПАУ представлены в табл 4

Таблица 4

Значения констант скоростей затухания и тушения триплетных состояний пирена, бенз[а]антрацена и фенантрена (С = 4 10"6 М) ионами таллия в растворе ДДС

ПАУ С (ДДС), М (кфси+ к'), с 1 Кп"'', л/(моль с), х 103

0,02 79 2,1

Пирен 0,05 62 1,5

0,08 63 0,56

Бенз[а]антрацен 0,05 2,3 102 2,7

Фенантрен 0 05 5,2 102 23,1

Во второй части главы рассмотрены результаты изучения сенсибилизированной фосфоресценции при комнатной температуре (С-ФКТ) в мицеллах ПАВ С-ФКТ является результатом безызлучательного триплет-триплетного (Т-Т) переноса энергии от молекул донора к молекулам акцептора В качестве донора энергии использовали реагенты акридинового ряда (трипафлавин, акридиновый желтый и акридиновый оранжевый), акцепторами выступали полициклические ароматические углеводороды Для увеличения скорости процессов интеркомбинационной конверсии использовали внешние тяжелые атомы (нитрат таллия) Форма и положение спектров сенсибилизированной фосфоресценции не отличаются от спектров фосфоресценции, полученных при непосредственном возбуждении молекул ПАУ в полосе их синглет-синглетного поглощения

На рис 3 представлена зависимость интенсивности С-ФКТ пирена (кривая 1) от концентрации нитрата таллия Для сравнения на этом же рисунке (кривая 2) приведена зависимость интенсивности ФКТ пирена Из рисунка видно, что интенсивность сенсибилизированной фосфоресценции проходит через максимум (в области концентраций нитрата таллия 0,010-

0,025 М), после чего снижается Причина снижения интенсивности СФКТ при увеличении концентрации нитрата таллия состоит в уменьшении времени жизни триплетных состояний молекул донора, что уменьшает эффективность переноса энергии

На основании изучения дезактивации триплетных состояний молекул акцептора были рассчитаны константы затухания сенсибилизованной фосфоресценции и константы скорости тушения ионами таллия Показано, что константы затухания С-ФКТ совпадают с таковыми для ФКТ и не зависят от донора энергии В то же время, в случае сенсибилизированной фосфоресценции значения констант скорости тушения триплетных состояний ионами таллия выше, чем в случае фосфоресценции при непосредственном возбуждении Это связано, с тем, что таллий оказывает влияние на возбужденные состояния, как донора, так и акцептора

Рис 3 Зависимость интенсивности С-ФКТ (1) и ФКТ (2) пирена (С = 4 10"6 М) от концентрации нитрата таллия в растворе ДДС (С = 0,05 М) в присутствии сульфита натрия (С = 0,02 М) Донор - трипафлавин (С = 1,25 10-5М)

О 0 01 0 02 0 03

С(ТМОз),

Изучение влияния концентрации донора энергии на сенсибилизированную фосфоресценцию показало, что с ростом его концентрации увеличивается интенсивность С-ФКТ Одновременно с увеличением интенсивности наблюдается увеличение констант скорости затухания С-ФКТ наиболее интенсивна в области концентраций ДДС 0,04 -0,08 М, при дальнейшем увеличении концентрации ДДС константы скорости затухания уменьшаются

Глава 3. Распределение люминофоров и тушителей в водно-мицеллярных

растворах ПАВ

В данной главе представлены результаты применения тушения флуоресценции для расчета констант связывания ионов-тушителей и люминофоров с мицеллами и чисел агрегации смешанных мицелл

На первом этапе для систем, в которых реализуется наиболее сильное тушение флуоресценции, было изучено связывание ионов-тушителей с мицеллами Данное взаимодействие определяет возникновение ФКТ Для расчета констант связывания ионов-тушителей нами был выбран метод Скетчарда, в качестве флуоресцентного зонда использовали молекулы пирена, обладающего аномально большим временем жизни возбужденного состояния и высоким квантовым выходом флуоресценции В качестве сигнала, используемого для расчета по методу Скетчарда, использовали тушение флуоресценции молекул пирена при различных концентрациях ПАВ Рассчитанные значения констант связывания для систем, характеризующихся наиболее эффективным тушением флуоресценции пирена, приведены в табл 5

Сравнение констант связывания анионов иода с мицеллами цетилтриметиламмоний бромида (ЦТАБ) и смешанными мицеллами ЦТА-Твин-20 показывает, что константы имеют одинаковый порядок, однако связывание с катионными мицеллами сильнее Большие значения констант связывания можно объяснить электростатическим притяжением аниона иода в обоих случаях к поверхности мицелл, заряженных оположительно вследствие диссоциации ЦТАБ Значение рассчитанных констант связывания катионов таллия с мицеллами анионных и неионных ПАВ значительно больше, чем анионов, что указывает на более их эффективное взаимодействие с мицеллами и подтверждается литературными данными

Таблица 5

Значения констант связывания ионов-тушителей с мицеллами ПАВ различных типов

Ион-тушкгель Мицеллообразующий ПАВ К, л моль'1

ЦТАБ (5,0*0,3)10"

Твин-20-ЦТА (3,5 ±0,2) 10"

тГ ДДС Тритон Х-100 (2,1+0,1) 104 (5,7 ±0,3) 103

п = 5, Р = 0,95

На втором этапе работы изучали связвание в организованных системах при реализации С-ФКТ. Константы связывания ПАУ с мицеллами ДДС описаны в литературе (в частности для пирена константа связывания составляет 1,7 • 106 л моль"1), значений констант связывания акридиновых красителей в литературе не найдено

Для расчета констант связывания молекул акридиновых реагентов (трипафлавина, акридинового желтого, акридинового оранжевого) с мицеллами ДДС использовали метод, основанный на тушении быстрой флуоресценции люминофоров анионами иода, электростатически отталкивающимися от анионных мицелл, но способными взаимодействовать с катионнми формами указанных красителей Полученные значения констант приведены в табл 6

Как следует из приведенных значений констант связывания, реагенты акридинового ряда преимущественно солюбилизированы в мицеллах ДЦС. Видно также, что с ростом ионной силы раствора происходит значительное снижение констант связывания трипафлавина, что связано с конкуренцией с катионами натрия на поверхности мицелл ДЦС

Таблица б

Значения констант связывания реагентов акридинового ряда с мицеллами ДЦС

Ионная сила, М_Кс«, л моль

_ . 0,34 (1,7 ±0,7) 103

Трипафлавин ^ (8*7 ± 0,9) 103

Акридиновый желтый 0,16 (З,8±0,9)103 Акридиновый оранжевый_0,16_(1,5 ± 0,3) 103

п = 5,Р = 0,95

Глава 4. Люминесцентные методы определения токсикантов в растворах

В данной главе рассмотрено применение различных люминесцентных методов (флуоресценция, фосфоресценция, сенсибилизированная фосфоресценция, поляризационный флуоресцентный иммуноанапиз) для определения двух групп токсикантов - полициклических ароматических углеводородов и микотоксинов

В табл 7 представлены аналитические характеристики определения пирена на основе флуоресценции и ФКТ при непосредственном возбуждении, а также сенсибилизированной ФКТ в мицеллах Д ЦС

Таблица 7

Аналитические характеристики определения пирена

Флуоресценция ФКТ С-ФКТ*

ПрО.М 3,7 Ю"9 8 109-1 105 6,1 Ю-9 2 10"8-5 10"5 3,8 Ю-8 1 10"7 - 5 10"4

Область линейности, М

Нафталин (7 ± 1) 102 (7 ± 1) 102 >5 103

Флуорен (1,5 + 0,3) 102 (1,5 ±0,3) 102 >3,5 102

Факторы Фенантрен 10 ± 1 10 ± 1 >3,5 102

селектив- Хризен <0,5 <0,5 >3,5 102

ности Флуорантен 2 ± 1 4± 1 >3,5 102

Антрацен <0,5 4 ± 1 25 + 1

Бенз[а]антрацен <0,5 <0,5 <0,5

* - донор - трипафлавин

Как видно из представленных результатов, при переходе от флуориметрии к ФКТ и С-ФКТ предел обнаружения (ПрО) и интервал

линейности градуировочных графиков смещаются в область больших концентраций пирена, что связано, в первую очередь со снижением относительной интенсивности сигнала в методах ФКТ и С-ФКТ и устранением помех, вызываемых эксимерообразованием и перепоглощением излучения при высоких концентрациях

Поскольку ПАУ, как правило, присутствуют в различных объектах не индивидуально, а в виде сложной смеси, было проведено сравнительное изучение избирательности их определения люминесцентными методами Показано, что селективность определения ПАУ методами флуориметрии с ФКТ при их прямом возбуждении примерно одинакова, однако для некоторых ПАУ применение фосфориметрии позволяет добиться лучшей избирательности Это связано, с тем, что, во-первых, не все флуоресцирующие вещества фосфоресцируют, а во-вторых, с большей разницей длин волн максимумов полос фосфоресценции по сравнению с таковым для флуоресценции Применение С-ФКТ позволило резко улучшить селективность определения ПАУ Прежде всего, это относится к мешающим веществам, имеющим энергию триплетного уровня выше, чем у донора энергии (табл 7)

Другим подходом, использовавшимся для определения ПАУ, был поляризационный флуоресцентный иммуноанализ (ПФИА), основанный на конкуренции определяемых веществ и трейсеров (определяемое вещество или аналог, меченный флуоресцеином) за ограниченное число мест связывания со специфическими антителами. Насколько нам известно, вплоть до настоящего времени отсутствуют примеры применения ПФИА для определения ПАУ.

Поскольку ПАУ представляют собой большой класс молекул с различным числом конденсированных ароматических колец, для их определения нами были использованы три трейсера с разным числом колец Ы-( 1 -нафталин)этилендиамин 5-[[4, 6-дихлоротриацин-2-ил]амино] флуорес-цеин (Ы-нафт-ЭДА-ДТАФ), содержащий нафталиновый фрагмент с двумя конденсированными кольцами, 1-пиренбутират флуоресцеин тиокарбамилэтилендиамина (Пир-БК-ЭДФ) на основе молекулы пирена с четырьмя кольцами и 1-бензо[а]пиренбутират флуоресцеин-тиокарбамилэтилендиамина (БАП-БК-ЭДФ) на основе молекулы бенз[а]пирена, содержащей пять конденсированных колец Для определения ПАУ использовались моноклональные антитела БАП-13 и поликлональная овечья антисыворотка анти-ПАУ Из всего разнообразия молекул ПАУ были выбраны по одному представителю,-содержащему два, три, четыре и пять ароматических колец нафталин, антрацен, 1-пиренбутановая кислота и бензо[а]пирен, соответственно

Как видно из данных табл 8, моноклональные антитела БАП-13 не распознают маленькие ПАУ, содержащие два и три кольца (нафталин, антрацен) Комбинация этих антител с трейсерами Пир-БК-ЭДФ и БАП-БК-ЭДФ позволила определять бензо[а]пирен и 1-пиренбутановую кислоту Для обоих веществ чувствительность определения с трейсером Пир-БК-ЭДФ

оказалась выше, чем при использовании гомолитичной комбинации БАП-БК-ЭДФ — моноклональные антитела БАП-13 По контрасту к моноклональным антителам, поликлонапьные антитела позволяют проводить определение всех протестированных веществ Трейсеры с четырьмя и пятью кольцами (БАП-БК-ЭДФ и Пир-БК-ЭДФ) позволяют определять и большие, и маленькие ПАУ В тоже время комбинация овечьих поликлонапьных антител с трейсером Ы-нафт-ЭДА-ДТАФ позволяет распознавать только маленькие ПАУ В качестве примера на рис 4 приведены калибровочные кривые, полученные для этой пары иммунореагентов, а в табл 9 суммированы аналитические характеристики определения различных ПАУ

Таблица 8

Характеристики калибровочных кривых определения ПАУ

Монокл антитела БАП-13 Овечьи поликл антитела

Трейсер ПАУ 1С5о, нг/мл Про нг/мл Область линейное ти, нг/мл 1С50, нг/мл ПрО нг/мл Область линейное ти, нг/мл

Пир-БК- нафталин - - 990 116 300-2900

ЭДФ антрацен - - - 700 8 50-420

1-пиренбут к-та 32 12 10-120 410 83 120-1100

бензо[а]пирен 123 18 80-196 15 09 3-70

БАП-БК- нафталин - - - 630 46 180-2200

ЭДФ антрацен - - - 530 76 210-1360

1-пиренбут к-та 750 53 190-3000 94 3 8 10-630

бензо[а]пирен 520 42 120-2300 350 20 60-2200

Ы-нафт- нафталин - - - 42 1 1 9-200

ЭДА- антрацен - - - 114 34 30-470

ДТАФ 1-пиренбут к-та бензо[а1пирен - - ; _ -

- * - не детектируется

Рис 4 Калибровочные графики определения 1-пиренбутановой кислоты (1), бензо[а]пирена (2), антрацена (3) и нафталина (4) при использовании

моноклональных антител БАП-13 и трейсера Пир-БК-ЭДФ В/В0 -отношение поляризации

флуоресценции при некоторой концентрации аналита (В) к значению поляризации

флуоресценции в отсутствие аналита (Во) п = 3

0 01 0 1 1 10 100 1000 10000 100000

ПАУ, нг/мл

Пара моноклональные антитела БАП-13 / Пир-БК-ЭДФ позволяет получить высокие значения перекрестного реагирования (ПР) для некоторых, но не всех, ПАУ, содержащих 4 или 5 ароматических колец Эта пара иммунореагентов позволяет определять такие ПАУ как бензо[а]пирен, хризен, бенз[а]антрацен, пирен и индено[1,2,3-с(1]пирен в присутствии высоких концентраций небольших и относительно нетоксичных ПАУ, таких как флуорен, нафталин и антрацен При использовании поликлональных антител структура трейсера оказывает значительное влияние на селективность определения. Пара иммунореагентов поликлональные антитела / Ы-нафт-ЭДА-ДТАФ позволяет проводить более селективное определение группы небольших ПАУ, содержащих 2-3 ароматических кольца В тоже время, сочетание с Пир-БК-ЭДФ может быть использовано для групп-специфического определения всей группы ПАУ

Таблица 9

Аналитические характеристики определения ПАУ методом ПФИА при использовании различных комбинаций иммунореагентов

Антитела Трейсер Моноклональные антитела БАП-13 Поликлональные овечьи антитела

Пир-БК-ЭДФ Ы-нафт -ЭДА-ДТАФ Пир-БК-ЭДФ

ПАУ 1С50" (кг/мл) ПР (%) Ю50 (нг/мл) ПР(%) 1С50 (нг/мл) ПР(%)

Нафталин 1620 20 42 100 990 ' 42

Аценафтен 3630 <1 49 85 916 46

Аценафтилен 1800 1 8 63 66 3280 13

Флуорен >4000 <1 66 63 ИЗО 37

Антрацен >4000 <1 114 37 700 60

Фенантрен 3300 <1 270 16 306 137

Флуорантен 445 72 460 9 2570 16

Бенз[а]анграцен 275 11 >4000 <1 65 650

Хризен 145 22 >4000 <1 82 510

Пирен 310 10 _ ** - - -

Бенз[а]пирен 123 26 >4000 <1 15 2760

Бензо[Ь]флуорантен 360 89 >4000 <1 690 61

БензоВДфлуорантен >4000 <1 >4000 <1 834 50

Д ибензо[а,Ь] антрецен >4000 <1 >4000 <1 >4000 <1

Индеко[ 1,2,3-сс1]пирен 200 16 >4000 <1 1940 22

Бензо[§,Ь,1]перилен 520 62 >4000 <1 >4000 <1

1 -Пиренбугановая 32 100 >4000 <1 410 100

кислота

* Величина ГС50 соответствует концентрации аналита при 50%-ном связывании трейсера ** Измерения не проводились

Была оценена возможность применения разработанной методики для скрининга бенз[а]пирена как наиболее токсичного представителя класса ПАУ Для оценки точности методики и наличия возможного матричного эффекта образцы природной воды были загрязнены БАП в интервале 5 - 500 нг/мл Предварительный анализ образцов воды показал совпадение результатов с полученными в бидистиллированной воде, что говорит об

отсутствии естественного фона БАП Как показывает анализ представленных в табл 10 данных, матричный эффект природной воды отсутствует, что говорит о возможности применения предлагаемой методики для скрининга мест сильного загрязнения ПАУ и нефтепродуктами

Таблица 10

Нахождение БАП (%) в загрязненных образцах природной воды методом ПФИА (иммунореагенты поликлональные антитела / Пир-БК-ЭДФ)

Образец речной воды 1 Образец речной воды 2

Введено Найдено Открваемость Найдено Открываемость

(нг/мл) (нг/мл) (%) (нг/мл) (%)

- <1 <1

5 5 ±2 100 6 + 2 120

50 52 ±7 104 50 ±6 100

100 97 ±4 97 92 ±9 92

200 220 ± 10 110 220 ± 10 ИЗ

500 530 ±20 105 540 ± 20 107

Другой группой веществ, для определения которых разрабатывались люминесцентные методы определения, были афлатоксины Афлатоксин В1 (АфВ1) и его метаболиты афлатоксины В2, 01 и в2 являются одними из самых токсичных микотоксинов Спектральные характеристики флуоресценции афлатоксинов, как и многих других веществ, чувствительны к присутствию организованных сред В связи с этим нами было изучено влияние на флуоресценцию афлатоксинов В1, В2, О и наиболее широко используемых ПАВ (анионного ДДС и неионного ТХ-100) Наибольший эффект организованные среды оказывают на флуоресценцию АфВ1, гораздо слабее для афлатоксина 01, в случае афлатоксинов В2 и 02 интенсивность сигнала флуоресценции изменяется не значительно

Согласно литературным данным, концентрация АфВ1 в продуктах растительного происхождения всегда выше, чем его метаболитов афлатоксинов В2, 01 и 02, АфВ1 и исследовался в дальнейшей работе Было изучено влияние на флуоресценцию растворов АфВ1 присутствия ПАВ различной природы, катионных ЦТАБ и цетилпиридиний хлорида (ЦПХ), неионных Тритон Х-100, Твин-80 и Бридж-35, анионных ДДС, додецилсульфоната натрия (ДЦСО) и додецилбензолсульфоната натрия (ДДБСО) (рис 5) Как видно из представленных результатов, усиление флуоресценции наблюдается в присутствии ПАВ всех типов, максимальное усиление .флуоресценции наблюдается при наибольшей из .используемых концентраций ПАВ 0,01 М Однако, увеличение интенсивности флуоресценции приводит лишь к незначительному увеличению чувствительности и снижению ПрО В частности, при переходе от воды к раствору ДДБСО ПрО снижается с 9,7 нг/мл до 5,9 нг/мл, область линейности составляет 15 - 3,1 102 нг/мл

Для группового определения афлатоксинов использовался метод ПФИА. Оптимальной парой иммунореагентов были выбраны трейсер АфВ1

каброксиметилоксим флуоресцеин тиокарбамилэтилендиамином и специфические моиоклоиальные антитела Полученные характеристики предствалены в табл 11

I/

бп А

5 -4 3 ■ 2 -1 О

■Я

Тритон Х-100

Бридж- Твин-80 ЦтаБ 35

ЦПХ ДДС ДДСО ДДБСО

И 1 1(Г М, 10 3 М, 102М

Рис 5 Относительная интенсивность флуоресценции АфШ (С = 1 10"7 М) в присутствии ПАВ различной концентрации

Таблица 11

Характеристики калибровочных зависимостей определения афлатоксинов

Афлатоксин 1С 50 нг/мл ПрО, нг/мл Область линейности градуир графика, нг/мл ПР, %

АфВ1 33 2,6 11-100 100

АфВ2 36 4,0 13-84 92

АфС1 8,1 0,49 2,6 - 24 407

Афв2 24 1,4 5,1 - 120 137

Область линейности градировочных графиков близка для всех четырех представителей афлатоксинов, что связано с их сходным строением и специфичносью используемых антител ко всей группе афлатоксинов Таким образом, данный подход может быть использован для группового определения группы афлатоксинов

Глава 5 Экстракционное концентирование неионными поверхностно-активными веществами из водных сред

В настоящее время разработано большое количество методик анализа (хроматографические, люминесцентные, спектрофотометрические и др) основанных на определении анализируемых веществ в среде ПАВ В связи с этим актуальна разработка методов экстракционного концентрирования непосредственно в мицеллярных растворах Одним из относительно новых подходов является использование растворов поверхностно-активных веществ для проведения концентрирования (cloud point extraction), основанного на

фазовом разделении гомогенного раствора ПАВ на две изотропные фазы Одна из них - фаза малого объема насыщена ПАВ, вторая фаза - водная, также содержит ПАВ, концентрация которого близка к критической концентрации мицеллообразования Традиционно для проведения экстракции используют водные растворы неионных ПАВ, разделение которых на две фазы происходит при нагревании выше критической температуры Другие типы ПАВ с мицеллярной экстракции используются значительно реже Для изучения мицеллярной экстракции неионными ПАВ был выбран Тритон Х-100, обладающий удобной для реализации эксперимента температурой разделения фаз (Тер = 64 - 65 °С в оптимальных условиях) В целях определения оптимальных условий получения фазы ПАВ и достижения максимальной степени извлечения было изучено влияние состава раствора, а так же условий разделения, таких как время термостатирования, центрифугирования и т д Установлено, что оптимальная концентрация Тритона Х-100 лежит в интервале концентраций 0,03 - 0,04 М, оптимальная концентрация неорганических солей - 2-3 масс %

2 3 4 5

со (№С1), %

4 6

<а (ЫаС1), %

Рис 6 Зависимость температуры расслоения растворов (а) и относительного объема фазы Тритона Х-100 (б) от массовой доли ЫаС1 (С(Тритон Х-100) = 0,035 моль)

Таблица 12

Рассчитанные значения степени извлечения ПАУ растворами Тритона Х-100

Вещество Степень извлечения, %

Ка2504,2 % ЫаС1,2 % ЫаС1, 3 %

Антрацен 92 ± 6 % 53 ±5 66 ±5

Пирен 94 + 4 % 90 + 6 90 ±7

1-Бромпирен 93 ± 6 % 81 + 7 80 + 5

п = 5, Р = 0,95

Полученные в оптимальных условиях величины степени извлечения некоторых ПАУ представлены в табл. 12 Как видно из представленных данных, использование сульфата натрия позволяет получить большие значения степени извлечения, в сравнении с хлоридом натрия.

Была изучена возможность использования мицеллярной экстракции НПАВ для последующего люминесцентного определения ПАУ Оказалось, что рассеивание возбуждающего света фазой ПАВ осложняет флуоресцентное определение ПАУ Поскольку фосфоресценция находится в более длинноволновой области спектра, была предпринята попытка наблюдения фосфоресценции в фазе Тритона Х-100 Для этого, прежде всего, было изучено влияние тяжелых атомов на интенсивность флуоресценции ПАУ с целью оценить эффективность взаимодействия люминофоров и тяжелых атомов в мицеллярной растворе и фазе ПАВ В качестве тяжелых атомов использовались внутренний тяжелый атом брома (1-бромпирен), а также внешние тяжелые атомы различного заряда анионы иода (тетраметиламмоний йодид), катионы таллия (нитрат таллия), молекулы бромоформа Полученные значения констант Штерна-Фольмера тушения флуоресценции в растворе и фазе ПАВ приведены в табл 13

Таблица 13

Значения констант Штерна-Фольмера (л моль'1) тушения флуоресценции пирена в растворе и фазе Тритона Х-100

Тушитель Раствор Тритона Х-100 Фаза Тритона Х-100

Нитрат таллия (I) 38 ± 2 8,1 ± 0,7

Бромоформ (3,1 ±0,2) 103 (1,7 ±0,1) 103

ТМАИ 97 ±6 28 ±5

Как видно из данных, представленных в таблице, наибольшая эффективность тушения наблюдается в присутствии бромоформа Это свидетельствует о том, что незаряженный молекулярный тушитель наиболее эффективен в мицеллярных растворах и фазе Тритона Х-100 Независимо от заряда тушителя, в фазе Тритона Х-100 эффективность тушения ниже Это связано с тем, что в фазе ПАВ, обладающей высокой вязкостью, диффузионно-контролируемые реакции (к которым относится тушение флуоресценции в данных системах) протекают медленнее Это указывает на бесперспективность попыток наблюдения фосфоресценции в фазе ПАВ при использовании внешних тяжелых атомов

Изучение влияния сульфита натрия на интенсивность ФКТ 1-бромпирена в фазе Тритона Х-100 показало, что наибольшая интенсивность фосфоресценции наблюдается при концентрации сульфита натрия 0,02 М, также как и в случае фосфоресценции этих же растворов до экстракции Однако, влияние внешних тяжелых атомов (бромоформ и иодид ионы в виде иодида тетраметиламмония) на интенсивность фосфоресценции 1-бромпирена отсутствует.

Таким образом, использование мицеллярной экстракции с помощью неионного Тритона Х-100 позволяет проводить эффективное извлечение ПАУ, однако сочетание ее с дальнейшим люминесцентным определение ПАУ затруднительно

Глава 6 Экстракционное концентрирование растворами анионных ПАВ

из водных сред

Наиболее принципиальными преимуществами использования анионных ПАВ, в сравнении с неионными, являются, во-первых, отсутствие зависимости параметров экстракции от температуры, что позволяет исключить термостатирование и дает возможность экстрагировать термолабильные вещества, во-вторых, возможность разделения веществ не только на основе их полярности, но и на основе различного заряда

Однако, в настоящее время круг анионных ПАВ, применяемых для проведения экстракции, включает в себя лишь несколько веществ. Кроме того, все описанные в литературе методики связаны с сочетанием мицеллярной экстракции с хроматографическим определением веществ, что не пригодно для массового скринингового определения В связи с этим нам был расширен круг анионных ПАВ, используемых для проведения экстракции, и реализовано сочетание мицеллярной экстракции с последующим флуоресцентным определением Использовались следующие анионные ПАВ децилсульфонат натрия (ДС), додецилсульфат натрия (ДДС), додецилсульфонат натрия (ДЦСО) и додецилбензолсульфонат натрия (ДЦБСО)

В целях оптимизации условий экстракционного разделения для области сосуществования двух жидких фаз была изучена зависимость относительного объема фазы, насыщенной ПАВ, от концентрации ПАВ и соляной кислоты (рис 6) Из представленных результатов видно, что для всех изученных ПАВ рост концентрации соляной кислоты приводит к снижению объема фазы, насыщенной ПАВ, в результате более полного протонирования молекул ПАВ и снижения количества воды в фазе, насыщенной ПАВ С ростом концентрации ПАВ наблюдается увеличение объема фазы, насыщенной ПАВ Значения степени извлечения пирена, полученные в оптимальных условиях для различных ПАВ приведены в табл 14 Для дальнейшей работы был выбран ДДС, поскольку его использование позволяет получить фазу, насыщенную ПАВ, с низкой оптической плотностью, концентрационный диапазон фазового разделения максимален среди изученных ПАВ, степень извлечения не зависит от концентрации ПАВ и соляной кислоты, а также температуры в интервале 15-50 °С

0,4 0,20 М,

03

0.15М,

0,2

0,10 М"

0,1 0,05 М,

0

V»

8 9

С (НС1), м

С (НС1), м

0,6

'Н

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

0,02 М

6 7 С (НС1), М

0,8

0,6 ОДОМ

0,4 0,15 М

02 0,10 М

0 0,05 М

8 9

С (НС1), м

Рис 6 Зависимость относительного объема фазы, насыщенной ПАВ, от концентрации соляной кислоты при различных концентрациях ПАВ а) ДС б) ДДС в) ДДСО г) ДДБСО

Таблица 14

Степень извлечения пирена (С =1 10"5 М) при мицеллярной экстракции анионными ПАВ

ПАВ С (ПАВ), М С (НС1), М

дс 99 ±5 0,20 6,0-9,0

ДДС 92 ±4 0,05-0,20 3,0 - 8,0

ДДСО 95 + 5 0,075 М 4,0

Для оценки свойств фазы, насыщенной ПАВ, была изучена ее полярность В этих целях нами использовалось отношение интенсивности первого и третьего пиков колебательной структуры спектров флуоресценции пирена с длинами волн 372 и 383 нм, соответственно (отношение ///з) Установлено, что в изученном интервале концентраций ДДС (0,05 - 0,20 М) и соляной кислоты (4,0 - 7,0 М) отношение пиков ///} остается неизменным и составляет 0,95 Это меньше, чем в мицеллярном растворе ДДС (///з = 1,2) Уменьшение параметра ///} флуоресценции пирена при переходе от мицелл к фазе, насыщенной ПАВ, свидетельствует о меньшей полярности егомикроокружения в последнем случае Это может быть результатом снижения содержания воды в фазе ПАВ, в сравнении с мицеллярным раствором

Для оценки влияния концентрации экстрагируемого вещества на степень его извлечения изучали экстракцию пирена в концентрационной области 1 10'12 - 1 10"6 М Показано, что степень извлечения не зависит от

концентрации пирена и его производных Полученные в найденных оптимальных условиях значения степени извлечения (Я, %), коэффициентов распределения (Крас„), факторов концентрирования и метрологические характеристики определения ПАУ методом мицеллярной экстракции с флуориметрическим окончанием приведены в табл 15

Таблица 15

Характристики флуориметрического определения ПАУ с применением мицетлярной экстракции (С (НС1) - 6,0 М, С (ДДС) - 0,15 М)

Фактор Область i

ПАУ R, % Красп концентри -рования ПрО,М линейности, М

1 Аценафтен 67 ±5 8,6 3,5 1 10"v 2-Ю9- 1 Ю-4

2 Антрацен 82 + 3 20 4,3 4 10 9 2 10*— 1 Ю"4

3 Бенз[а]антрацен 87 ±4 29 4,6 2 10"" 5 10 11-1 10"4

4 Бенз[а]пирен 91 ±5 43 4,8 1 10 й 3 10"-1

5 Хризен 95 ±4 81 5,0 6 107 1-106-1 10"4

6 Дибенз[а,Ь]антрацен 93 ±4 57 4,9 1 108 2 10'-1104

7 Фенантрен 90 ±5 38 4,7 1 10 9 3 109 - 1 Ю-4

8 Пирен 92 + 4 49 4,8 1 КГ" 3 10 12 — 1 ю5

9 Флуорен 84 ±4 23 4,4 4 10 10 1 10'-2 10"5

10 Флуорантен 89 ±5 34 4,7 2 10"* 4 108 - 1 10"4

Из данных таблицы видно, что значения предела обнаружения ПАУ варьируются в широком диапазоне (от 6 10'7 М для хризена до 1 10"12 М для пирена) Представлялось интересным выявить факторы, влияющие на значение предела обнаружения ПАУ Наилучшая корреляция получена для зависимости ПрО от относительной интенсивности флуоресценции (рис 8) Для 8 из 10 изученных ПАУ существует линейная корреляция, описываемая

уравнением (R2 = 0 987) -log ПрО =19 2 IЦ' +55 Для ПАУ с относительной интенсивностью флуоресценции 0,2 - 1,0 предел обнаружения меньше 4 10"'° М При относительной интенсивности флуоресценции 0,1 -0,2 ПрО составляет 1 10"9 -1 10"8 М

Для установления дополнительных факторов, влияющих на экстракцию и аналитические характеристики метода были изучены ряд производных пирена (Табл 16) Как и в случае незамещенных ПАУ, степень извлечения увеличивается с ростом значения lg Ko/vj Из представленных данных видно, что значения ПрО минимальны для пирена и 1-пиренбутановой кислоты и максимальны для 1-бромпирена и 1-аминопирена, что связано с низкой интенсивностью флуоресценции и степенью извлечения, соответственно

14 12 -10 8

О

о . С 6 61

•? 4-

.3

1 9 7 ^

10 6 2 $

04

'А

Рис 7 Зависимость отрицательного логарифма предела обнаружения ПАУ от значения относительной интенсивности флуоресценции Нумерация ПАУ в табл 15

Таблица 16

Определение производных пирена методом мицеллярной экстракции с последующим флуоресцентным определением

Пирен

1-Бромпирен

1-Аминопирен

1 -Пиренкарбокси-альдегид

1 -Пиренбутановая кислота

ПрО, Про, Область линейности,

'л Ко/п М нг/мл М

1 00 92 ±4 5,17 1 10 12 3 10'12- 1 10"5

0,05 96 ±4 5,94 2 107 4 10"7- 1 10"4

1,72 71 ± 4 3,89 5 10"7 8 107 - 1 10"4

(0,71)

1,47 90 + 4 1 10 10 3 10",0-1 Ю"4

3,16 77 + 3 1 ю-'2 2 10 12-1 10"4

" в скобках приведены значения относительной интенсивности флуоресценции (1Ц') в кислой среде

Разработанная методика, использующая мицеллярную концентрацию ДЦС, была апробирована для определения бенз[а]пирена в водопроводной воде Определение ПАУ в водопроводной воде особенно актуально, поскольку основным источником ПАУ является не исходная вода, поступающая в водораспределительную систему, а загрязнения, образующиеся при контакте воды с трубами и смолами Результаты определения бензо[а]пирена методом введено-найдено в водопроводной воде приведены в таблице 17 Как видно из представленных данных, при добавке менее 1 нг/мл наблюдается большее количество бенз[а]пирена обнаружено больше, чем было введено в образец Это может свидетельствовать о присутствии бенз[а]пирена в анализируемом образце водопроводной воды Вид спектра флуоресценции свидетельствует о наличии слабой диффузионной полосы в области 370-430 нм (область флуоресценции бензо[а]пирена)

Таблица 17

Определение бенз[а]пирена в водопроводной воде методом введено-найдено (п = 4)

Введено Найдено Открываемость Я 8 О, %

нг в 3 мл нг/мл (нг/мл) (%)

0 0 <0,05 - 11

0,5 0,17 0,21 125 9,0

2,0 0,67 0,76 114 8,5

5,0 1,67 1,74 104 7,5

20 6,67 6,60 99 3,7

50 16,7 17,0 102 1,8

200 66,7 65,4 98 1,7

500 167 172 103 2,5

Таким образом, экстракция с помощью ДЦС из водных сред может быть использована в сочетании с последующим флуоресцентнм определением

Глава 7 Мицеллярная экстракция ПАУ из неводных сред и определение ПАУ в бензинах и почве, загрязненной бензином

Как показано 'в предыдущих главах, наибольшие возможности -для люминесцентного определения ПАУ представляет анионный ДЦС В предварительных экспериментах было изучено влияние добавок некоторых органических растворителей на спектральные характеристики поглощения, флуоресценции и фосфоресценции пирена в мицелпярных растворах ДЦС Как видно из представленных в табл 18 результатов, наименьшим влиянием на оптические свойства пирена в мицеллах ДЦС обладает гексан, в связи с чем его использовали для разработки методики определения ПАУ в почвах и бензине

Таблица 18

Уравнения регрессии для молярных коэффициентов поглощения, относительной интенсивности флуоресценции и фосфоресценции пирена в зависимости от концентрации органических добавок

Растворитель £(\~ 336 нм) 10"5 1д1 (А. = 397 нм) 1(Ьос4 (*• = 596 нм)

Ацетонитрил 18 С,сп+ 2 9 5,7 Сас„+ 1 4,2С,с„+1

Ацетон 1,3 С«с+ 2 9 0,05 С,с + 1 0,04 С,с + 1

Гексан 1,4 Сь + 2 9 0,01 Ск+ 1 0,03 Сн + 1

Этанол 0,8 Си + 2 9 0,96 С« + 1

* - фосфоресценция отсутствует

В качестве критерия загрязненности почв бензином использовался пирен Флуориметрическое определение пирена в экстрактах почвы и бензина не представляется возможным, поскольку в спектре наблюдается широкая бесструктурная полоса флуоресценции, обусловленная присутствием смеси ароматических и гетероциклических углеводородов Поэтому определять индивидуальные ПАУ позволяет лишь метод ФКТ

Первоначально проводили определение пирена в бензине и почвах высушивая аликвоту бензина, либо гексанового экстракта с последующем растворением сухого остатка в растворе ДЦС Для контроля правильности использовали метод ГХ-МС. Результаты определения пирена методами ФКТ и ГХ-МС в почве, загрязненной бензинами, представлены в табл 19

Таблица 19

Результаты определения пирена в почвах, загрязненных бензинами, фосфоресцентным и хроматографическим методами

ФКТ ГХ-МС

образец X ± Д X, мг/кг 5 X ± Д X, мг/кг 8 Рэксп ^ЭКСП

Бензин АИ-92 6,1 ±0,6 0,48 5,84 ± 0,30 0,24 4,2 1,9

Бензин А-76 1,5 ± 0,2 0,16 1,43 ±0,09 0,08 4,1 2,1

п = 5, Р - 0,95, Г„аб, = 6,39, 1„аб, = 2,31

Следующим шагом явилось сочетание экстракции непосредственно из бензина (органической фазы) в мицеллярный раствор ДЦС Для определения в бензине пирена, антрацена и флуорена сделана попытка использовать метод ФКТ, используя для этого различные способы заселения триплетного состояния ПАУ Разработанная методика основана на измерении интенсивности ФКТ пирена и флуорена при возбуждении их молекул стационарным и импульсным методами, соответственно, и тушении сигналов ФКТ акридинового оранжевого в присутствии молекул антрацена в результате триплет-триплетного переноса энергии возбуждения. Наблюдение аналитического сигнала проводилось в обескислороженном мицеллярном растворе ДЦС в присутствии соли таллия (I) Техника работы при этом отличалась от традиционной для мицеллярной экстракции, поскольку выделение происходило из неводной среды

Ввиду сложного и неоднородного состава бензинов, для изучения характеристик экстракции нами использовались модельные растворы ПАУ в гексане Как следует их представленных в табл. 20 результатов, степени извлечения ПАУ как из растворов индивидуальных, так и смеси всех трех ПАУ, практически одинаковы По ряду антрацен < пирен < флуорен наблюдается рост значения степени извлечения Эта тенденция совпадает с изменением растворимости этих ПАУ в воде и водных растворах ДЦС.

Экстрагирование ПАУ из бензина в мицеллярный раствор ДЦС и последующее фосфориметрическое определение выполняли по схеме, описанной выше для растворов ПАУ в гексане Отсутствие мешающего влияния посторонних компонентов контролировали, сравнивая значения констант скорости затухания фосфоресценции и времен жизни ПАУ в экстрактах бензинов и модельных растворах ДЦС, а также по результатам, полученным методом ГХ/МС Полученные результаты определения пирена, антрацена и флуорена в бензинах представлены в табл 21

Таблица 20

Значения степени извлечения антрацена, пирена и флуорена при мицеллярной экстракции раствором ДЦС из гексана (Спау = 1 * 10"4 М)

ПАУ Индивидуальные ПАУ Смесь пирена, флуорена и антрацена ^ЭКСП

Я±ДЯ,% Б 11±ДЯ,% 8

Антрацен 23 ± 1 0,65 22 ±2 0,82 1,62

Пирен 27 ±2 1,02 28 ±1 0,57 1,55

Флуорен 36 ±3 1,53 - - -

п = 5, Р = 0,95

Таблица 21

Результаты определения пирена, антрацена и флуорена в образцах бензинов люминесцентным и хроматографическим методами

ПАУ ФКТ КГХ/МС

Х±ДХ, мг/л в X ± Д X, мг/л Б

Бензин для зажигалок

Пирен 0,42 ± 0,06 0,053 0,38 ±0,01 0,010 2,00

Антрацен 0,095 ± 0,007 0,0064 • 0,0908 ±0,0009 0,00072 2,32

Флуорен 0,16 ±0,01 0,0086 0,168 ±0,004 0,0040 2,33

Бензен-растворитель-1

Пирен 1,8 + 0,1 0,11 1,91 +0,02 0,024 2,33

Антрацен 0,076 ± 0,005 0,0044 0,079 ±0,001 0,0010 2,06

Флуорен 0,25 ± 0,02 0,025 0,134 ±0,005 0,0042 14,2

АИ-92

Пирен 6,8 ± 0,4 0,52 6,41 ±0,06 0,044 2,13

Антрацен 1,41+0,07 0,06 1,41 ±0,02 0,021 0,00

Флуорен 5,4 ± 0,3 0,29 3,55 ± 0,03 0,025 16,9

АИ-76

Пирен 8,1 ±0,4 0,40 8,34 ± 0,08 0,075 1,59

Антрацен (1,21 ±0,05) х 102 4,98 (1,17 + 0,3) х 102 0,32 2,17

Флуорен 9,2 ± 0,7 0,59 5,63 ± 0,07 0,062 8,64

п = 7, Р = 0,95

Таким образом, впервые показана возможность экстракции ПАУ из органической фазы в мицеллярный раствор ДДС Разработаны фосфоресцентные методики определения содержания некоторых ПАУ в бензине и почвах Показано, что основой избирательности фосфориметрического определения ПАУ в сложном объекте может являться комбинирование различных способов возбуждения и заселения триплетного состояния, а также измерения фосфоресцентного излучения молекул

Глава 8. Иммунохимичесие тест-методы определения микотоксинов

Возможности использования организованных сред типа «гость-хозяин» для объединения в едином цикле очистки, концентрирования и определения токсикантовбыли продемонстрированы также на примере взаимодействия антиген-антитело В качестве объектов определения были выбраны микотоксины - токсичные продукты жизнедеятельности различных микроскопических грибов, поражающих сельскохозяйственную продукцию Наиболее часто пищевые продукты растительного происхождения загрязняют микотоксины группы афлатоксинов (афлатоксин В1, афлатоксин В2, афлатоксин G1, афлатоксин G2), охратоксины (прежде всего, охратоксин А)итд

В данной главе описана разработка тест-методов для внелабораторного скрининга охратоксина A (OTA) и афлатоксина В1 на основе визуальной детекции Метод объединил в себе очистку экстракта образца, концентрирование определяемого вещества и собственно его определение. В качестве подтверждающего метода использовалась жидкостная хроматография с тандемным масс-спектрометрическим детектированием Для определения микотоксинов использовалась трубка емкостью 1 мл, в которую помещали очищающий и детектирующий слои Детектирующий иммунослой представлял собой гель на основе сефарозы 4В с активированными CNBr группами Анализ проводился в формате конкурентного твердофазного иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител Показано, что приготовленные колонки дают воспроизводимые результаты как минимум в течение 2 мес при хранении при температуре + 4 °С в холодильнике

Рис 8 Различные варианты тест-колонки для проведения иммуноанализа 1 - детектирующий иммунослой, 2 - очищающий слой, 3 - конъюгат А - Детектирующий иммунослой находится внизу Процедура включает 7 шагов Б - Детектирующий иммунослой находится вверху Процедура включает 5 шагов В - Детектирующий иммунослой находится вверху, введен дополнительный фрит с коньюгатом Процедура включает 3 шага

Было апробировано и оптимизировано 3 процедуры проведения иммуноанализа, включающие семь, пять и три шага анализа Для каждой из схем была разработана соответствующая колонка (рис. 8)

В качестве объекта исследования были выбраны специи Capsicum ssp (красный перец, чили, кайенский перец, пили-пили, паприка), Piper spp (белый перец и черный перец), Myrtstica fragrance (мускатный орех), Zingiber officinale (имбирь), а так же лакрица Выбор обусловлен сложностью и разнообразием матрицы образца, а так же интенсивносью его окраски.

В качестве контрольной была выбрана концентрация ОТА 10 цг/кг в соответствии с максимально допустимым уровнем, обсуждаемым ЕС Варьирование условий показало, что получить данный контрольный уровень при использовании 0,5 мл экстракта позволяют разведения антител 1/100 и коньюгата с пероксидазой хрена 1/100, время развития окраски 5 мин после добавления субстрата Экстракцию проводили раствором метанол/3 % раствор бикарбоната натрия в соотношении 8 2 Для оптимизации очищающего слоя исследовались 7 сорбентов различной природы силикагель с привитыми группами пропилсульфоновой кислоты (катионообменная фаза), силикагель с привитыми

триметиламинопропильными группами (анионообменная фаза), силикагель с привитыми аминопропильными группами (анионообменная, нормальная фаза), силикагель (нормальная фаза), флорисил (нормальная фаза), силикагель с привитыми октадецильными группами (обращенная фаза) а так же стиролдивинилбензольный полимер (обращенная фаза) Установлено, что оптимальным является силикагель с привитыми аминопропильными группами

Для изучения возможностей данной системы в плане повышения чувствительности определения за счет концентрирования определяемого компонента, была изучена зависимость контрольного уровня от объема экстракта Показано, что использование разных объемов экстракта позволяет существенно варьировать контрольный уровень (рис 9) При увеличении объема экстракта контрольный уровень ОТА можно снизить

Контр ур

12 ЦГ/КГ

Объем раствора NaHC03 (3 %), мл

ю

♦

Объем экстракта, мл

Контр уровень

6

в

4

0,5 1,0 1,6

1,0 1,5 2,0

ОТА, цг/кг

10

5,0 2,0

2

0

О

05

Рис 9 Влияние объема экстракта на контрольный уровень ОТА

Для оптимизации условий анализа к различным видам специй были использованы по одному образцу красного перца (пили-пили), парики, чили, мускатного ореха, имбиря, черного перца и белого перца, для которых в предварительных экспериментах методом ВЭЖХ-МС/МС было показано отсутствие OTA Основное требование к методам скрининга - отсутствие ложноотрицательных результатов Поэтому для контроля возможного матричного эффекта для каждого из образцов проводился анализ незагрязненного образца и образца, содержащего 10 цг/кг OTA Полученные результаты показали, что при использовании колонки с детектирующим иммунослоем, расположенным внизу, интенсивная окраска образца, не содержащего OTA, и отсутствие окраски образца, содержащего 10 цг/кг OTA, наблюдаются только для специй семейства Capsicum ssp (красного перца, парики, чили) Таким образом, данный способ оказался не пригоден для определения OTA в части образцов

Таким образом, для скрининга OTA в образцах имбиря, мускатного ореха, черного перца и белого перца требуется применение другой процедуры. Среди большого количества рассмотренных вариантов в качестве оптимальной была признана колонка, в которой детектирующий иммунослой располагался сверху (рис. 86) и процедура анализа, включающая пять шагов. Расположение детектирующего иммунослоя сверху позволило избежать нежелательного влияния примесей, попадающих при промывании из вышележащих слоев в нижележащие При этом стадия связывания первичных антител проводилась при подготовке колонки Данный подход был использован для скрининга образцов специй Было показано полное отсутствие ложно отрицательных результатов, кроме того контрольный метод ВЭЖХ-МС/МС подтвердил как положительные так и отрицательные результаты

В целях дальнейшего упрощения и сокращения времени анализа была предложена процедура, включающая три шага Сокращение числа шагов стало возможным в результате включения в колонку дополнительного фрита, на который был нанесен конъюгат (рис 8в). Для предотвращения контакта конъюгата с буфером и детектирующим иммунослоем до проведения анализа, фрит располагался на расстоянии примерно 2 см над детектирующим иммунослоем

Для оптимизации процедуры введения конъюгата в колонку рассматривалось два пути - внесение конюъгата непосредственно в колонку на находящийся там чистый фритт, либо нанесение конъюгата на фритт, а затем помещение фритта в колонку Второй путь был выбран как- более удобный Общая продолжительность анализа составляет 5 мин, окраска развивается затем в течение еще 5 мин

Полученные с помощью данного тест-метода результаты представлены на рис 10. Для сравнения приведены результаты, полученные методом ЖХ-МС/МС Как видно, получено полное совпадение результатов тест-метода и подтверждающего метода

OTA, цг/кг

380-

360

уровень

Рис 10 Результаты определения OTA при использовании процедуры из трех шагов Результаты представлены как (-) - отрицательный результат - развитие синей окраски детектирующего иммунослоя, концентрация OTA < 10 цг/кг, (±) - отрицательный результат - развитие малоинтенсивной синей окраски детектирующего иммунослоя, концентрация OTA < 10 цг/кг, (+) — положительный результат - отсутствие окраски детектирующего иммунослоя, концентрация OTA > 10 цг/кг Результаты хроматографических методов представлены как концентрация в цг/кг

Для определения афлатоксина В1 был использован подход, состоящий из пяти шагов В качестве контрольной была выбрана концентрация АфВ1 5 цг/кг в соответствии с максимально допустимым уровнем, рекомендуемым ЕС Полученные результаты свидетельствуют, что исследованные образцы черно перца (5 образцов), белого перца (5 образцов), имбиря (5 образцов) и муската (5 образцов) не содержат АфВ1 и сумму четырех афлатоксинов выше контрольного уровня 5 цг/кг Среди изученных 17 образцов специй Capsicum ssp четыре содержали АфВ1 выше контрольного уровня Следует отметить идеальное совпадение результатов разработанного тест-метода с результатами подтверждающего метода ВЭЖХ-МС/МС

Глава 9 Разработка тест метода для одновременного определения нескольких

микотоксинов

Одной из тенденций современной аналитической химии является развитие методов, позволяющих одновременно определять несколько целевых компонентов образца за один аналитический цикл Это позволяет

снизить время и стоимость анализа Зачастую несколько микотоксинов присутствуют в образце одновременно, поэтому применение методов, позволяющих определять сразу несколько микотоксинов позволит существенно снизить продолжительность анализов и их стоимость Анализ литературы показал, что в настоящий момент неинтсрументальные методы для определения нескольких микотоксинов практически отсутствуют

Нами для одновременного определения нескольких анапитов был развит подход, основанный на использовании колонки, содержащей один очищающий слой и несколько детектирующих иммунослоев Для одновременного определения двух или нескольких веществ необходимо подобрать условия проведения экстракции и определения, позволяющие получить адекватный аналитический сигнал для всех определяемых компонентов В частности, для проведения экстракции АфВ1 использовались водно-метанольные растворы, перед введением в колонку аликвоту экстракта разбавляли водой Для экстракции OTA использовалась смесь метанола и 3 % раствора ЫаНСОз, экстракт впоследствии также разбавляли раствором бикарбоната натрия. Чтобы установить оптимальные условия очистки экстракта нами была изучена сорбция этих миктоксинов на сорбенте с привитыми аминопропильными группами Поскольку, как было показано ранее, на степень сорбции может влиять кондиционирование сорбента в буфере, использующемся для повышения стабильности детектирующего иммунослоя, было изучено извлечение микотоксинов не только сухим сорбентом, но и выдержанным в буфере Проводили сравнение поведения микотоксинов при использовании двух растворов- метанол/вода (1 4 об), рН 5,5 и метанол/3%NaHC03 в воде (14 об), рН 9 0 Изученный интервал концентрации микотоксинов в стандартных растворах составил 2-6 нг/мл При работе с раствором, содержащим NaHC03, наблюдается достаточно высокий процент извлечения OTA (рис 11) Однако при переходе к нейтральным водно-метанольным раствором происходит резкое снижение степени извлечения до 8 — 12 %. Таким образом, для работы с двумя микотоксинами одновременно пригодны растворы, содержащие бикарбонат натрия (рис 116)

Для работы были использованы два детектирующих иммунослоя -один на основе геля с привитыми первичными антителами, специфическими к АфБ1, другой - с антителами, специфическими к OTA Процедура анализа включала 5 шагов Концентрации реагентов соответствовали таковым, определенным для индивидуальных микотоксинов Вместо раствора индивидуального конъюгата использовалась смесь конъюгатов, каждый в оптимальном разведении

Сорок четыре образца специй были проанализированы с помощью предложенной методики Некоторые из образцов были проанализированы предварительно с помощью описанных ранее колонок, содержащих только один детектирующий иммунослой Во всех случаях результаты совпали с результатами определения индивидуальных микотоксинов, что позволяет

сделать выводы об отсутствии мешающего влияния друг на друга конъюгатов и детектирующих иммунослоев

100

во

60

40

20

0

B3AfB1 ЙОТА

Рис 11 Извлечение афлатоксина В1 и охратоксина А после пропускания растворов через слой силикагеля с привитыми аминопропильными группами сухой, кондиционированный в ФСБ в течение 1 часа, 1 дня и 10 дней а) раствор метанол/вода (1 4 об ), б) раствор метанол/3%ЫаНСОз (1 4 об)

Для проверки правильности результатов предлагаемого подхода часть образцов специй были проанализированы с помощью ЖХ-МС/МС Результаты обоих методов приведены в табл 22 Как видно из представленных результатов, контрольный метод подтвердил как положительные, так и отрицательные результаты иммунохимического тест-метода

В данной главе рассмотрены также перспективы применения колонок, содержащих несколько иммунохимических слоев В частности, описана колонка, содержащая несколько детектирующих слоев для определения одного аналита Слои отличаются между собой концентрацией привитых специфических первичных антител Так как чувствительность анализа напрямую связана с концентрацией антител, повышение их концентрации приведет к снижению чувствительности Один детектирующий слой позволяет получить информацию о присутствии (или отсутствии) определяемого вещества выше определенной концентрации, но не позволяет оценить, насколько высокой может оказаться концентрация этого вещества в случае его присутствия Таким образом, по количеству окрашенных слоев можно судить о том, насколько высокой может быть концентрация целевого аналита

Таблица 22

Определение АфВ1 и OTA в специях иммунохимическим тест-методом и ЖХ-МС/МС

Иммунохимический тест-метод ЖХ-МС/МС

Специи АфГО! OTA АфВ1, Total aflatoxms', цг/кг OTA,

(контр 5 цг/кг) (контр 10 цг/кг) цг/кг цг/кг

Паприка 1 ... --- _ь с _ d

Паприка 2 --- --- 1,7 2,4 6,3

Паприка 3 + + + + + + 6,8 8,0 17

Пили-пили 1 --- --- - - -

Пили-пили 2 --- --- - - 1,2

1 Красный перец 1 + + + + + + 8,2 9,1 15

Красный перец 2 + + + + + + 5,4 6,4 30

Чили 1 --- --- - - -

Чили 2 --- --- - - -

Чили 3 + + + + + + 17 21 19

Кайенский перец1 --- --- - - 1,3

Кайенский перец 2 --- --- 0,6 0,6 1,4

Имбирь 1 --- --- - - -

Имбирь 2 --- --- - - 2,3

Имбирь 3 --- --- - - 1,0

Мускат 1 --- --- - - -

Мускат 2 --- --- - 0,8 -

Мускат 3 --- --- 2,1 3,9 7,1

Черный перец 1 --- --- - - -

Черный перец 2 --- --- - - -

Черный перец 3 --- --- - - -

Белый перец 1 --- --- - - -

Белый перец 2 --- --- - - -

1 Белый перец 3 --- --- - - -

* Суммарное содержание афлатоксинов рассчитано как сумма концентраций АфВ1, АфВ2, Афв1 и АфС2

ь Концентрация АфВ1 < 0,5 цг/кг, с Концентрация каждого из афлатоксинов < 0,5 цг/кг, Л Концентрация OTA <1,0 цг/кг

Выводы

1 Выявлены основные закономерности, эффекты и особенности в системах люминофор - ПАВ и люминофор - тушитель люминесценции - ПАВ в мицеллярных водных растворах анионных, катионных и неионных ПАВ, позволяющие улучшить характеристики флуоресцентного определения ПАУ и дающие возможность проводить их определение методом фосфоресценции при комнатной температуре (ФКТ) и сенсибилизированной ФКТ Проведен и обоснован выбор доноров энергии, позволивших наблюдать перенос энергии в триплетном состоянии и сенсибилизованную фосфоресценцию ПАУ при комнатной температуре в мицеллах ДДС в присутствии внешнего тяжелого атома таллия (I)

2 Изучено влияние растворов ПАВ на эффективность взаимодействия ПАУ и тушителей флуоресценции В качестве критерия эффективности взаимодействия использовалось эксимерообазование пирена (для моделирования реакции межу одинаковыми гидрофобными молекулами, солюбилизированными в ядре мицелл) и снижение интенсивности (тушение) флуоресценции ПАУ (для моделирования процессов между гидрофобными молекулами и ионами) Установлено, что на эффективность обоих типов бимолекулярного взаимодействия влияет концентрация и тип ПАВ, тип и концентрация тушителя, температура При использовании статистики Пуассона показано, что и эксимерообразование, и тушение определяются распределением молекул между мицеллами

3 Изучены условия возникновения сенсибилизированной фосфоресценции и факторы, влияющие на ее интенсивность и время жизни Изучено влияние концентрации внешнего тяжелого атома на сенсибилизированную фосфоресценцию в мицеллярных растворах при комнатной температуре Показано, что роль ионов таллия (I) как тяжелого атома состоит в увеличении скорости следующих процессов

интеркомбинационной конверсии из возбужденного синглетного в триплетное состояние молекул донора, что приводит к увеличению заселенности триплетного состояния и отражается в снижении интенсивности флуоресценции в присутствии ионов таллия, излучательной дезактивации триплетных состояний молекул донора и акцептора, что отражается в сокращении времени жизни триплетных состояний в присутствии ионов таллия

Увеличение скорости этих процессов приводит к наблюдению следующих двух эффектов

появлению и росту интенсивности сигнала сенсибилизированной фосфоресценции ПАУ,

сокращению времени жизни триплетных состояний и увеличению констант скорости затухания сенсибилизированной фосфоресценции ПАУ с ростом концентрации таллия

4 Найдены оптимальные условия определения ПАУ методами флуоресценции, фосфоресценции и сенсибилизированной фосфоресценции в мицеллярных растворах ДДС и проведено сравнение аналитических характеристик указанных методов Впервые показано, что использование сенсибилизированной фосфоресценции позволяет повысить селективность определения ПАУ в их смеси без предварительного разделения Рассчитаны коэффициенты селективности определения пирена, антрацена и бензантрацена в модельных растворах и выявлены условия реализации метода сенсибилизированной фосфоресценции для селективного определения отдельных ПАУ. Показано, например, что использование метода сенсибилизированной ФКТ позволяет проводить определение пирена в присутствии более чем трехсоткратных избытков нафталина, флуорена, фенантрена, хризена,

флуорантена Впервые разработаны методики определения ПАУ методом поляризационного флуоресцентного иммуноанализа, оптимизированы условия специфического и групп-специфического определения Показано, при разделении сложных смесей люминесцентные методы позволяют проводить селективное определение на основе различий в спектральных и энергетических (энергия триплетного уровня) свойствах молекул, иммунохимические на основе пространственного строения

5 Разработаны экспресс-методики обнаружения и количественного определения следовых количеств токсикантов на основе сочетания концентрирования и определения в едином аналитическом цикле концентрирование с помощью мицеллярных растворов использовано в сочетании с люминесцентным определением в фазе ПАВ, иммуноафинное концентрирование в сочетании с твердофазным иммуноферментным анализом Разработанные методики использованы в анализе реальных объектов (вода, продукты питания, бензин, почва)

6 Найдены закономерности по влиянию природы и концентрации ПАВ и концентрируемых веществ на характеристики экстракционного извлечения из водных и неводных сред Установлены оптимальные условия фазового разделения и экстракционного концентрирования Впервые показана возможность экстракции ПАУ из органической фазы в мицеллярный раствор ДДС Впервые проведено систематическое изучение экстракции анионными ПАВ в кислой среде из водных растворов Показано, что мицеллярная экстракция позволяет достигать степени извлечения более 90 % и может успешно сочетаться с дальнейшим люминесцентным определением

7. Предложен подход, позволивший впервые сочетать иммуноафинное концентрирование в объеме геля, содержащего ковапентно связанные специфические антитела, с иммуноферментным определением на основе визуального детектирования На его основе разработаны быстрые неинструментальные тест-методы для внелабораторного визуального детектирования целевых анапитов в сложных окрашенных матрицах, позволяющие определять и варьировать контрольный уровень Показана применимость разработанного метода для определения индивидуальных микотоксинов охратоксина А и афлатоксина В1 (контрольные уровни 10 нг/г и 5 нг/г соответственно, согласно рекомендациям ЕС) в образцах специй (красный перец, чили, кайенский перец, паприка, пили-пили, черный перец, белый перец, имбирь, мускат), а так же для одновременного определения при использовании двух детектирующих слоев Представляется, что данный подход в перспективе может быть использован для определения индивидуальных веществ (пестициды, токсиканты и др) в сильноокрашенных матрицах, таких как кофе, какао, шоколад, фрукты и сухофрукты, вина

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации:

1 Штыков С H, Горячева И Ю Люминесцентная аналитическая спектроскопия в микрогетерогенных супра- и надмолекулярных самоассоциирующих организованных средах // Опт и спектроск 1997. Т 83 N4 С 698-703

2 Мельников Г В, Горячева И Ю, Штыков С H Фосфоресценция при комнатной температуре, сенсибилизированная триплет-триплетным переносом энергии в мицеллах додецилсульфата натрия // Докл акад наук 1998 Т. 361 N 1 С 72-73.

3. Shtykov S.N, Melmkov G V , Goryacheva I Yu Novel in selectivity of luminescence analysis triplet-triplet energy transfer in microheterogeneous organized media // Proc Intern Trace Analysis Symposium'98 (ITAS'98) July 31-Aug 3 Univ. of Tokyo, Japan, P 43-44

4 Левшин Л В, Штыков С H, Горячева И Ю, Мельников Г В Фосфоресценция молекул полициклических ароматических углеводородов в водномицеллярных растворах додецилсульфата натрия при комнатной температуре//Журн. прикл спектроск 1999 Т 66 N 2 С 201-204

5 Shtykov S N , Melmkov G V , Goryacheva I Yu The effect of external heavy atom on the sensitized room temperature phosphorescence in aqueous micellar solutions of sodium dodecysulphate// J Mol Struct 1999 V 482-483 P 699702

6 Мельников Г В, Штыков С H, Горячева И Ю Влияние внешнего тяжелого атома на сенсибилизированную фосфоресценцию полициклических ароматических углеводородов в мицеллах додецилсульфата натрия // Вопросы прикл физики Межвуз науч сб -Саратов Изд-во Сарат ун-та 1999 Вып 5 С 112-113

7 Горячева И Ю, Мельников Г В , Штыков С H, Пономарев А С Фосфориметрическое определение полициклических ароматических углеводородов в бензине // Журн анал хим 2000 Т 55 N 8 С 883-887

8 Горячева И.Ю , Мельников Г В , Штыков С H Акридиновые красители в триплетном состоянии как реагенты для избирательного люминесцентного определения полициклических ароматических углеводородов при комнатной температуре в мицеллах додецилсульфата натрия//Журн анал хим 2000 Т 55 N9 С 971-975

9 Мельников Г.В, Штыков С H, Штыкова Л.С, Горячева И Ю Сенсибилизированная фосфоресценция молекул пирена, усиленная эффектом тяжелого атома в микроэмульсии вода — гептан -додецилсульфат натрия - пентанол // Изв РАН Сер. хим 2000 Т 49 N 9 С 1529-1532

10 Melmkov G V , Shtykov S N , Goryacheva l.Yu Room temperature phosphorescence as indicator of triplet-triplet energy transfer between dyes and polycyclic aromatic hydrocarbons solubilised in anionic micelles / Eds V L

Derbov, L A. Melmkov, V P Ruabukho // Proc. SPIE Vol 4002 Bellingham,

2000. P 217-224

11 Мельников Г.В , Штыков С H , Горячева И Ю Влияние ионов таллия (I) на люминесцентные свойства акридиновых красителей в мицеллярных растворах додецилсульфата натрия // Проблемы оптической физики Матер междунар молодежи науч школы по оптике, лазерной физике и биофизике Саратов Изд-во Сарат ун-та 2000 С 122-124

12 Мельников Г В., Штыков С H, Горячева И Ю, Федоренко Е В Люминесцентные свойства акридиновых красителей в мицеллярных растворах додецилсульфата натрия, содержащих ионы таллия // Изв РАН Сер хим 2001 Т 50 N6 С 944-946

13 Melnikov G V , Shtykov S N , Goryacheva I.Yu Sensitized room temperature phosphorescence of pyrene in sodium dodecylsuphate micelles with triphaflavine as energy donor//Anal chim acta 2001 V. 439 N1 P 81-86

14 Штыков С H, Горячева И Ю , Мельников Г В. Мицеллярная экстракция полициклических ароматических углеводородов из водных и неводных сред // Структурообразование и межфазные явления в системах жидкость-жидкость Москва-Изд-во РХТУ им ДИ Менделеева 2001 С 292-302

15 Мельников ГВ, Штыков СН, Горячева ИЮ. Триплет-триплетный перенос энергии между трипафлавином и пиреном в водно-мицеллярных растворах додецилсульфата натрия // Изв вузов Хим и хим технол

2001.Т.44 N6 С 18-21.

16 Левшин Л В , Мельников Г В , Штыков С H , Горячева И Ю О факторах, определяющих процесс химического обескислороживания мицеллярных растворов ПАВ, в фосфориметрии при комнатной температуре // Журн физ хим 2002 Т 76 N4 С 707-711

17 Shtykov S N , Melnikov G V , Goryacheva 1 Yu , Fedorenko E V Possibilities of phosphorescence in micelles for direct determination of polycychc aromatic hydrocarbons at room temperature // 7th Russian-German-Ukrainian Analytical Symp (Argus'2001) Baikalsk July 30-Aug 5, 2001 Symp Proceedings P 40-42

18 Мельников Г В , Штыков С H , Штыкова Л С , Горячева И Ю , Абрамова Е.В Влияние состава водно-органических сред на эффективность образования эксимеров полициклических ароматических углеводородов в синглетных и триплетных состояниях//Журн физ. хим 2002 Т. 76 N10 С 1790-1793

19 Горячева И Ю , Мельников Г В , Штыков С Н. Влияние внешних тяжелых атомов на люминесцентные свойства молекул пирена в индивидуальных и смешанных мицеллах Тритона Х-100 и додецилсульфата натрия II Журн физ хим 2003 Т. 77 N2 С 281-284

20 Goryacheva I Yu , Shtykov S N , Melnikov G V, Fedorenko E V Analytical potentialities of sensitized room temperature phosphorescence for determination of polycyclic aromatic hydrocarbons // Environ Chem Lett 2003 V l.N l.P 82-85

21 Штыков С Н , Горячева И Ю , Штыкова J1 С Мицеллы и микроэмульсии в разделении и концентрировании // Журн анал хим 2003 Т 58, № 7, с 732-733

22 Горячева И,Ю, Штыков С.Н., Мельников Г.В Сенсибилизированная фосфоресценция в водных растворах организованных сред и ее аналитической значение // Органические реагенты в организованных средах Межв сб научн статей. Саратов Изд-во «Научная книга» 2003. с 168-173

23 Мельников Г.В , Штыков С Н , Горячева И Ю , Косарев А В , Штыкова J1С Применение фосфоресценции полициклических ароматических углеводородов для изучения диффузии кислорода в системе вода -мицелла ПАВ // Органические реагенты в организованных средах Межв сб научн. статей Саратов- Изд-во «Научная книга» 2003 С 157-161

24 Goryacheva I, Shtykov S , Fedorenko E , Melmkov G. Factors affecting on the analytical determination of polycychc aromatic hydrocarbons by sensitized room temperature phosphorescence // 8th Russian-German-Ukrainian Analytical Symp (Argus'2003) Hamburg Aug 31 - Sept 5, 2003 Proceedings. P 67-72

25 Горячева И Ю , Штыков С Н , Мельников Г В , Федоренко Е В Влияние внутреннего и внешнего тяжелых атомов на фосфоресценцию при комнатной температуре пирена в мицеллярных растворах ПАВ // Журн физ хим 2004 Т 78 N 12 С 2264-2267

26 Логинов А С, Пантелеева И В, Горячева И Ю Использование мицеллярной экстракции и помощью додецилсульфата натрия для люминесцентного определения пирена в водных средах// Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии Саратов, 2004, Научная книга 144-147

27 Goryacheva I Yu, Shtykov S N., Loginov A.S, Panteleeva IV Preconcentration and fluorimetric determination of polycychc aromatic hydrocarbons based on the acid-induced cloud-point extraction with sodium dodecylsulfate // Anal Bioanal Chem 2005 V. 382 N6 P. 1413-1418

28 Федоренко E В., Горячева И Ю Влияние добавок органических растворителей на спектральные характеристики пирена в мицеллярных растворах додецилсульфата натрия // Известия Сарат ун-та Сер Химия Биология Экология 2005 Т 5 N 1 С 56-58

29 Горячева И.Ю , Федоренко Е В , Панкин К Е Фосфориметрическое определение пирена в бензине и образцах почвы, загрязненных бензином //Журн анал хим 2006 Т 61 N 8 Р 876-879

30 Goryacheva 1 Yu , De Saeger S , Lobeau M , Eremin S A , Barna-Vetro I, Van Peteghem С Approach for ochratoxin A fast screening in spices using clean-up tandem immunoassay columns with confirmation by high performance liquid chromatography - tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) // Anal chim acta 2006 V 577 N 1 P 38-45

31 Горячева И Ю , Логинов А С , Лаврова Т H , Попов M А Экстракционное концентрирование анионными поверхностно-активными веществами в кислой среде//Журн анал хим 2007 Т62№5 С 459-464

32 Goryacheva I Yu , Shutaleva Е А , Suchanek M , Niessner R , Knopp D , Eremm S A Development of a fluorescence polarization immunoassay for polycychc aromatic hydrocarbons // Anal Lett 2007 40, N 7 Manuscript ID 232606

33 Goryacheva I Yu, De Saeger S , Nesterenko IS , Eremm S A , Van Peteghem С Rapid all-in-one three-step immunoassay for non-instrumental detection of ochratoxin A m high-colored herbs and spices // Talanta 2007. V 72. N 3. p 1230-1234

34 Goryacheva I Yu , De Saeger S , Delmulle В , Lobeau M , Eremin S A., Barna-Vetro I, Van Peteghem С Simultaneous non-instrumental detection of aflatoxin В1 and ochratoxin A using a clean-up tandem immunoassay column // Anal Chim Acta 2007. V 590 N 1 P. 118-124

ГОРЯЧЕВА Ирина Юрьевна

ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЕ И ТЕСТ- МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИКАНТОВ, ОСНОВАННЫЕ НА КОНЦЕНТРИРОВАНИИ В ОРГАНИЗОВАННЫХ СИСТЕМАХ

02 00 02 - аналитическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук

Подписано в печать 14 05 07 Формат 60x84 1/16 Объем 2 п л Тираж 120 экз Заказ 57

Типография Издательства Саратовского университета 410012, Саратов, Астраханская, 83

Глава 1 Флуоресценция полициклических ароматических углеводородов в растворах поверхностно-активных веществ

1.1. Спектральные характеристики флуоресценции 9 полициклических ароматических углеводородов

1.2. Эксимерообразование пирена в растворах ПАВ

1.3. Тушение флуоресценции полициклических ароматических 16 улеводородов в растворах индивидуальных ПАВ

1.4. Тушение флуоресценции полициклических ароматических 30 углеводородов в растворах смешанных ПАВ

Резюме к главе

Глава 2 Фосфоресценция и сенсибилизированная фосфоресценция 35 полициклических ароматических углеводородов в растворах поверхностно-активных веществ

2.1. Спектральные характеристики фосфоресценции молекул 36 полициклических ароматических углеводородов в мицеллярных растворах ДЦС

2.2. Влияние типа и концентрации ПАВ на интенсивность 37 фосфоресценции пирена и 1-бромпирена в водно-мицеллярных растворах ПАВ

2.3. Влияние концентрации сульфита натрия на интенсивность 38 фосфоресценции пирена и 1-бромпирена в водно-мицеллярных растворах ПАВ

2.4. Влияние природы и концентрации тяжелых атомов на 42 интенсивность фосфоресценции молекул полициклических ароматических углеводородов в водно-мицеллярных растворах ПАВ

2.5. Триплет-триплетный перенос энергии и 50 сенсибилизированная фосфоресценция полициклических ароматических углеводородов

Резюме к главе

Глава 3 Распределение люминофоров и тушителей в водномицеллярных растворах ПАВ

3.1. Определение констант связывания ионов-тушителей 66 флуоресценции с мицеллами ПАВ

3.2. Определение констант связывания реагентов акридинового 75 ряда с мицеллами ДЦС

3.3. Определение числа агрегации смешанных мицелл Тритон 78 Х-100 - цетилтриметиламмоний бромид методом тушения флуоресценции

Резюме к главе

Глава 4 Люминесцентные методы определения токсикантов в растворах

4.1. Определение полициклических ароматических 82 углеводородов методами флуориметрии и фосфориметрии

4.2. Флуоресцентное определение афлатоксинов в растворах 94 ПАВ

4.3. Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ 97 афлатоксинов

4.4. Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ 102 полициклических ароматических углеводородов

Резюме к главе

Глава 5 Экстракционное концентирование неионными поверхностно-активными веществами из водных сред

5.1. Изучение факторов, влияющих на фазовое разделение 112 растворов Тритона Х

5.2. Изучение факторов, оказывающих влияние на степень 113 извлечения ПАУ

5.3. Люминесценция полициклических ароматических 120 углеводородов в системе Тритон Х-100 - вода

Резюме к главе

Глава 6 Экстракционное концентрирование растворами анионных

ПАВ из водных сред 6.1. Фазовое разделение растворов анионных ПАВ

6.2 Изучение факторов, влияющих на степень извлечения пирена

6.3. Спектральные и аналитические характеристики определения полициклических ароматических углеводородов флуоресцентным методом в фазах, насыщенных ПАВ

Резюме к главе

Глава 7 Мицеллярная экстракция полициклических ароматических 143 углеводородов из неводных сред и определение ПАУ в бензинах и почве, загрязненной бензинами

7.1 Влияние добавок органических растворителей на 143 спектральные характеристики люминесценции

7.2 Фосфориметрическое определение пирена в бензине и 146 образцах почвы, загрязненных бензином

7.3 Мицеллярная экстракция полициклических ароматических 151 углеводородов из неводных сред в сочетании с последующим фосфоресцентным определением

Резюме к главе

Глава 8 Иммунохимические тест методы определения микотоксинов

8.1. Разработка устройства и оптимизация техники 15 9 эксперимента для определения микотоксинов в сложных окрашенных матрицах

8.2. Тест-метод для определения охратоксина А

8.3. Тест-метод для определения афлатоксина В1 181 Резюме к главе

Глава 9 Разработка тест метода для одновременного определения 185 нескольких микотоксинов

9.1. Примеры применения иммунохимических методов для 185 одновременного определения нескольких веществ

9.2. Оптимизация тест-метода для одновременного определения 187 двух определяемых веществ

9.3. Одновременное определение охратоксина А и афлатоксина 189 В1 в образцах специй

9.4. Перспективы применения тандемных колонок, содержащих 192 несколько детектирующих слоев, для мультианализа

Резюме к главе

Выводы

Список сокращений

Выводы

1. Выявлены основные закономерности, эффекты и особенности в системах люминофор - ПАВ и люминофор - тушитель люминесценции - ПАВ в мицеллярных водных растворах анионных, катионных и неионных ПАВ, позволяющие улучшить характеристики флуоресцентного определения ПАУ и дающие возможность проводить их определение методом фосфоресценции при комнатной температуре (ФКТ) и сенсибилизированной ФКТ. Проведен и обоснован выбор доноров энергии, позволивших наблюдать перенос энергии в триплетном состоянии и сенсибилизованную фосфоресценцию ПАУ при комнатной температуре в мицеллах ДДС в присутствии внешнего тяжелого атома таллия (I).

2. Изучено влияние растворов ПАВ на эффективность взаимодействия ПАУ и тушителей флуоресценции. В качестве критерия эффективности взаимодействия использовалось эксимерообазование пирена (для моделирования реакции межу одинаковыми гидрофобными молекулами, солюбилизированными в ядре мицелл) и снижение интенсивности (тушение) флуоресценции ПАУ (для моделирования процессов между гидрофобными молекулами и ионами). Установлено, что на эффективность обоих типов бимолекулярного взаимодействия влияет концентрация и тип ПАВ, тип и концентрация тушителя, температура. При использовании статистики Пуассона показано, что и эксимерообразование, и тушение определяются распределением молекул между мицеллами.

3. Изучены условия возникновения сенсибилизированной фосфоресценции и факторы, влияющие на ее интенсивность и время жизни. Изучено влияние концентрации внешнего тяжелого атома на сенсибилизированную фосфоресценцию в мицеллярных растворах при комнатной температуре. Показано, что роль ионов таллия (I) как тяжелого атома состоит в увеличении скорости следующих процессов: интеркомбинационной конверсии из возбужденного синглетного в триплетное состояние молекул донора, что приводит к увеличению заселенности триплетного состояния и отражается в снижении интенсивности флуоресценции в присутствии ионов таллия; излучательной дезактивации триплетных состояний молекул донора и акцептора, что отражается в сокращении времени жизни триплетных состояний в присутствии ионов таллия.

Увеличение скорости этих процессов приводит к наблюдению следующих двух эффектов: появлению и росту интенсивности сигнала сенсибилизированной фосфоресценции ПАУ; сокращению времени жизни триплетных состояний и увеличению констант скорости затухания сенсибилизированной фосфоресценции ПАУ с ростом концентрации таллия.

4. Найдены оптимальные условия определения ПАУ методами флуоресценции, фосфоресценции и сенсибилизированной фосфоресценции в мицеллярных растворах ДЦС и проведено сравнение аналитических характеристик указанных методов. Впервые показано, что использование сенсибилизированной фосфоресценции позволяет повысить селективность определения ПАУ в их смеси без предварительного разделения. Рассчитаны коэффициенты селективности определения пирена, антрацена и бензантрацена в модельных растворах и выявлены условия реализации метода сенсибилизированной фосфоресценции для селективного определения отдельных ПАУ. Показано, например, что использование метода сенсибилизированной ФКТ позволяет проводить определение пирена в присутствии более чем трехсоткратных избытков нафталина, флуорена, фенантрена, хризена, флуорантена. Впервые разработаны методики определения ПАУ методом поляризационного флуоресцентного иммуноанализа; оптимизированы условия специфического и групп-специфического определения. Показано, при разделении сложных смесей люминесцентные методы позволяют проводить селективное определение на основе различий в спектральных и энергетических (энергия триплетного уровня) свойствах молекул, иммунохимические на основе пространственного строения.

5. Разработаны экспресс-методики обнаружения и количественного определения следовых количеств токсикантов на основе сочетания концентрирования и определения в едином аналитическом цикле: концентрирование с помощью мицеллярных растворов использовано в сочетании с люминесцентным определением в фазе ПАВ; иммуноафинное концентрирование в сочетании с твердофазным иммуноферментным анализом. Разработанные методики использованы в анализе реальных объектов (вода, продукты питания, бензин, почва).

6. Найдены закономерности по влиянию природы и концентрации ПАВ и концентрируемых веществ на характеристики экстракционного извлечения из водных и неводных сред. Установлены оптимальные условия фазового разделения и экстракционного концентрирования. Впервые показана возможность экстракции ПАУ из органической фазы в мицеллярный раствор ДДС. Впервые проведено систематическое изучение экстракции анионными ПАВ в кислой среде из водных растворов. Показано, что мицеллярная экстракция позволяет достигать степени извлечения более 90 % и может успешно сочетаться с дальнейшим люминесцентным определением.

7. Предложен подход, позволивший впервые сочетать иммуноафинное концентрирование в объеме геля, содержащего ковалентно связанные специфические антитела, с иммуноферментным определением на основе визуального детектирования. На его основе разработаны быстрые неинструментальные тест-методы для внелабораторного визуального детектирования целевых аналитов в сложных окрашенных матрицах, позволяющие определять и варьировать контрольный уровень. Показана применимость разработанного метода для определения индивидуальных микотоксинов охратоксина А и афлатоксина В1 (контрольные уровни 10 нг/г и 5 нг/г соответственно, согласно рекомендациям ЕС) в образцах специй (красный перец, чили, кайенский перец, паприка, пили-пили, черный перец, белый перец, имбирь, мускат), а так же для одновременного определения при использовании двух детектирующих слоев. Представляется, что данный подход в перспективе может быть использован для определения индивидуальных веществ (пестициды, токсиканты и др) в сильноокрашенных матрицах, таких как кофе, какао, шоколад, фрукты и сухофрукты, вина.

СОКРАЩЕНИЯ И ОБОЗНАЧЕНИЯ

АПАВ - анионные поверхностно-активные вещества

АфВ1 - афлатоксин В1

АфВ2 - афлатоксин В2

Афв1 - афлатоксин G1

Афв2 - афлатоксин G2

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ВЭЖХ-МС - высокоэффективная жидкостная хроматография с массспектрометрическим детектором ВЭЖХ-МС/МС - высокоэффективная жидкостная хроматография с тандемным масс-спектрометрическим детектором ВЭЖХ-Фл - высокоэффективная жидкостная хроматография с флуоресцентным детектором ГХ - газовая хроматография

ГХ-МС - газовая хроматография с масс-спектрометрическим детектором

ДДБС - додецилбензолсульфат натрия

ДДБСО - додецилбензолсульфонат натрия

ДДС - додецилсульфат натрия

ДС - децилсульфат натрия

ЗФ - замедленная флуоресценция

ККМ - критическая концентрация мицеллообразования

КПАВ - катионные поверхностно-активные вещества

ОТА - охратоксин А

НПАВ - неионные поверхностно-активные вещества

ПАВ - поверхностно-активные вещества

ПАУ - полициклические ароматические углеводороды

ПДК - предельно допустимая концентрация

ПрО - предел обнаружения

ПФИА - поляризационный флуоресцентный иммуноанализ

ТСХ - тонкослойная хроматография

ФКТ - фосфоресценция при комнатной температуре

ЦТАБ - цетилтриметиламмоний бромид

ЦТАИ - цетилтриметиламмоний иодид

М] - концентрация мицелл

А - оптическая плотность раствора

Ет - энергия триплетного уровня молекулы

1фЛ - интенсивность флуоресценции

1М - интенсивность флуоресценции мономеров

1ЭКС - интенсивность флуоресценции эксимеров

1ф0Сф - интенсивность фосфоресценции

10 - интенсивность флуоресценции в отсутствии тушителя флуоресценции I - интенсивность флуоресценции в присутствии тушителя флуоресценции Iv - вертикальная составляющая флуоресценции Ih - горизонтальная составляющая флуоресценции

K0/w - коэффициент распределения октанол - вода Ксвяз константа связывания Кдисс - константа диссоциации Кщт-ф- константа тушения Штерна-Фольмера Кщ1ф- мицеллярная констаниа Штерна-Фольмера кДИф - константа скорости диффузионно-контролируемой реакции Ц - бимолекулярная константа скорости тушения kQB - константа тушения фосфоресценции в водной фазе kQM- константа тушения фосфоресценции в мицеллах к+ - константа скорости входа частицы в мицеллу к- константа скорости выхода частицы из мицеллы к0 - наблюдаемая константа затухания фосфоресценции кфС - константа испускания фосфоресценции в водной фазе кфСм - константа испускания фосфоресценции в мицеллярной фазе кпер- константа скорости переноса энергии п - число параллельных опытов N - число агрегации Р - доверительная вероятность Р(х) - вероятность нахождения в мицелле х частиц г - коэффициент корреляции R - степень экстракции, % S - синглетное состояние Si - основное синглетное состояние Si - первое возбужденное синглетное состояние Т! - триплетное состояние [Q] - концентрация тушителя.

Q> - количество частиц тушителя, приходящихся на одну мицеллу <Q> - среднее число молекул тушителя, приходящееся на одну мицеллу [Q]a- концентрация тушителя в водной фазе [Q\T- общая концентрация тушителя

Q>- среднее количество ионов тушителя, приходящихся на мицеллу

Q]a - концентрация ионов тушителя в водной фазе

Q]t - общая концентрация ионов тушителя в растворе а - степень диссоциации у - эффективность тушения s - молярный коэффициент поглощения

71 - вязкость

0tDA - эффективность переноса энергии X - длина волны, нм возб - длина волны возбуждения люминесценции

-исп - длина волны максимума испускания люминесценции

ХфЛ - длина волны максимума флуоресценции

ХфС - длина волны максимума фосфоресценции ц - среднее число частиц, приходящихся на одну мицеллу vM - молярный объем мицелл ПАВ

То - время жизни флуоресценции в отсутствие тушителя т0° - время жизни донора в отсутствие тушителей люминесценции t>fm° - квантовый выход флуоресценции в мицеллярном растворе fW0 - квантовый выход флуоресценции в водном растворе

1. Паркер С. Фотолюминесценция растворов. М.: Мир, 1972. 510 с.

2. Khuanga U., Selinger В.К., McDonald R. A study of surfactant Micelles with a fluorescent

3. Probe // Aust. J. Chem., 1976. Vol. 29. p. 1-12.

4. Rodgers M.A.J., da Silva E., Wheeler M.F. Quenching of fluorescence from pyrene in micellar solutions by cationic quenchers // Chem. Phys. Lett., 1978. V. 53. p. 165 169.

5. Atik S.S., Singer L.A. Nitroxyl radical quenching of the pyrene fluorescence in micellar environments. Development of a kinetic model for steady-state and transient experiments // Chem. Phys. Lett., 1978. V. 59, N 3. p. 519-524.

6. Aikawa M., Yekta A., Turro N. Photoluminescence probes of micelle systems. Cyclic azoalkanes as quenchers of 1,5-dimethylnaphthalene fluorescence // Chem. Phys. Lett., 1979. V. 68, N2-3.-p. 285-290.

7. Infelta P.P., Gratzel M. Channel-mediated monovalent cation fluxes in isolated sarcoplasmic reticulum vesicles // J. Chem. Phys. 1979. V. 70, N 1. p. 179-182.

8. Selinger В. K., Watkins A. R. Distributional effects on excimer formation in micellar surfactant solutions // Chem. Phys. Lett. 1978. V. 56, N 1. p. 99-104.

9. Rothenberger G., Infelta P. P., Gratzel M. Kinetic and statistical features of triplet energy transfer processes in micellar assemblies // J. Phys. Chem. 1979. V. 83, N 14. p. 1871-1876.

10. Brown W., Rymden R., Stam J., Almgren M., Svensk G. Static and dynamic properties ofnonionic amphiphile micelles: Triton X-100 in aqueous solution // J.Phys.Chem. 1989. V. 93, N6. p. 2512-2519.

11. Malliaris A., Le Moigne J., Strum J., Zana R. Temperature dependence of the micelle aggregation number and rate of intramicellar excimer formation in aqueous surfactant solutions // J.Phys.Chem. 1985. V. 89, N 12. p. 2709-2713.

12. Лакович Д. Основы флуоресцентной спектроскопии. Москва: Мир. 1986. 496 с.

13. Popov A.V. Stern-Volmer Law in Competing Theories and Approximations / Popov A.V., Gladkikh V.S., Burchtein A.I. //J. Phys. Chem. A. 2003. V. 107. p. 8177-8183.

14. Gehlen M. Spectral analysis of the fluorescence quenching kinetics in micelles with probe migration // Chem. Phys. 1997. V. 224. p. 275-279.

15. Tachiya M. Kinetics of quenching of luminescent probes in micellar systems. II // J. Chem. Phys. 1982. V. 76, N. 1. p. 340-348.

16. Gratzel M., Kalyanasandaram K. Kinetics and catalysis in microheterogeneous systems. Marcel Dekker, Inc., 1992.476 P.

17. Мак-Глинн С., Адзуми Т., Киносита М. Молекулярная спектроскопия триплетного состояния,- М.: Наука, 1972,544 с.

18. Khuanga U., Selinger В.К., McDonald R. A study of surfactant Micelles with a fluorescent Probe // Aust. J. Chem. 1976. V.29, N 1. p. 1-12.

19. Лурье Ю.Ю. Справочник по аналитической химии. М.: Химия, 1965. - 389 с.

20. Almgren М., Grieser F., Thomas J.K. Dynamic and static aspects of solubilization of neutral arenes in ionic micellar solutions // J. Am. Chem. Soc. 1979. V. 101, N. 2. p. 279-291.

21. Russel J.C., Wild U.P., Whitten D.G. The heptanol swollen micelle: fluorescence and absorption probe studies of size and solubilization properties // J. Phys. Chem. 1986. V. 90, N7. p. 1319-1323.

22. Grieser F., Tausch-Treml R. Quenching of pyrene fluorescence by single and multivalent metal ions in micellar solutions // J. Amer. Chem. Soc. 1980. V. 102, N 24. p. 7258-7264.

23. Химическая энциклопедия, Т. 2, Изд-во «Советская энциклопедия», М, 1990, стр 101.

24. Gratzel М., Thomas J.K. Dynamics of pyrene fluorescence quenching in aqueous ionic micellar systems. Factors affecting the permeability of micelles // J. Amer. Chem. Soc. 1973. V. 95. N21. P. 6885-6889.

25. Tringali A.E., Kim S.K., Brenner H.C. ODMR and fluorescence studies of pyrene solubilized in anionic and cationic micelles // J. of Luminescence 1999. V. 81, N 1. p. 85-100.

26. Pandey S., Acree W.E., Fetzer J.C. Cetylpyridinium chloride micelles as a selective fluorescence quenching solvent media for discriminating between alternant versus nonaltemant polycyclic aromatic hydrocarbons // Talanta 1997. V. 45, N 1. p. 39-45.

27. Blatt E. The Association Properties of Iodide with Cetyltrimethylammonium Bromide Micelles as Revealed by Steady State Fluorescence Quenching Measurements // Aust. J. Chem. 1987. V. 40. P. 201-207.

28. Saha S.K., Krishnamoorty G. Dogra S.K. Fluorescence quenching of 2-aninofluorene by cetylpyridinium chloride iodide ion and acrilamide in non-ionic micelles: Tweens // J. Photochem. Photobiol. A 1999. V. 121. N 3. p. 191-198.

29. Вережников B.H., Гермашева И.И., Викин Б.П., Балясников В.И., Панаева С.А. К вопросу о физическом смысле точки Крафта // Коллоидный журнал. 1981. Т. 43, N. 6. С. 1034-1040.

30. Гермашева И.И., Бочаров В.В., Гаевой Г.М., Вережников В.Н., Панаева С.А., Круть В.В. Температура начала мицеллобразования некоторых поверхностно-активных веществ (ПАВ) (точки Крафта) // Коллоидный журнал. 1980. Т. 42, N. 9. С. 1969 1975.

31. Гермашева И.П., Панаева С.А., Волков Ю.М., Кожанов Б.П., Боголепова Л.Ф. Влияние структуры некоторых ионных ПАВ на направление изменения параметров точки Крафта // Коллоидный журнал. 1985. Т. 47, N. 3. С. 472 -479.

32. Бочаров В.В., Гермашева И.П.О мицеллообразующей способности поверхностно-активных веществ // Коллоидный журнал. 1981. Т. 43, N. 6. С. 1168 1169.

33. Липатов Ю.С. Коллоидная химия полимеров. К.: Наукова думка. 1984. - 342 с.

34. Успехи коллоидной химии. Л.: Химия 1991. 400 с.

35. Шенфельд Н. ПАВ на основе окиси эитилена. Под ред. Н.Н. Лебедева. М.: Химия. 1982.268 с.

36. Diaz Garcia М.Е., Sanz-Medel A. Facile chemical deoxygenation of micellar solutions for room temperature phosphorescence // Anal. Chem. 1986. V. 58, N. 7. p. 1436-1440.

37. Boutilier G. D., Winefordner J. D. Influence of tipe and concentration of external heavy atoms upon phosphorescence lifetimes // Anal. Chem. 1979. V. 51, N. 9. p. 1391-1399.

38. Cline Love L.J., Habarta J. G., Dorsey J. G. The micelle-analytical chemistry interface // Anal. Chem. 1984. V. 56, N. 11. p. 1132A-1148A.

39. Kalyanasundaram R., Grieser F., Thomas J.K. Room temperature phosphorescence of aromatic hydrocarbons in aqueous micellar solutions // Chem. Phis. Lett. 1977. Vol. 51, N 3. p. 501-505.

40. Cline Love L.J., Skrilec M., Habarta J.G. Analysis by micelle-stabilized room-temperature phosphorimetry in solution // Anal. Chem. 1980. Vol.52, N 4. p. 754-759.

41. Skrilec M., Cline Love L. J. Micelle-stabilized room-temperature phosphorescence characteristics of carbazole and related derivatives // J. Phys. Chem. 1981. V. 85, N. 14. P. 2047-2050.

42. Segura Carretero A., Cruses Blanco C., Fernandez Gutierrez A. Experimental studies of the factors that influence 1-naphthaleneacetamide determination by micelle-stabilized room temperature phosphorescence // Analyst. 1997. V. 122. p. 563-566.

43. Murillo Pulgarin J., Garcia Bermejo L. Determination of the pesticide napropamide in soil, pepper, and tomato by micelle-stabilized room-temperature phosphorescence // J. Agric. Food Chem. 2002. V. 50, N. 5. p. 1002-1008.

44. Campiglia A. D., Vo-Dinh T.Rapid screening method for cocaine and benzoylecgonine in saliva samples // Anal. Chim. Acta. 1998. V. 372. p. 349-355.

45. Segura Carretero A., Cruses Blanco C., Fernandez Gutierrez A. Heavy atom induced room temperature phosphorescence method for the determination of the plant growth regulator P-naphthoxyacetic acid //J. Agric. Food Chem. 1998. V. 46, N 9. p. 3683-3686.

46. Segura Carretero A., Cruses Blanco C., Canabate Diaz В., Fernandez Gutierrez A. Room temperature phosphorimetric method for the determination of the drug naphazoline in pharmaceutical preparations//Analyst. 1998. V. 123. P. 1069-1071.

47. Badia R., Diaz Garcia M. E. Room temperature phosphorescence flow-through biosensing of anionic surfactants //Anal. Chim. Acta 1998. V. 371, N 1. p. 73-80.

48. Diaz Garcia M. E., De la Campa M. R. F., Hinze W., Sanz-Medel A. Room temperature phosphorescence decay of metal chelates in micellar media // Microchim. Acta 1988. V. 111. p. 269-282.

49. Hoshino H., Suzuki M., Kan'no M., Ohmachi Т., Yotsuyanagi T. Room temperature phosphorescence characteristics of platinum (II) chelate with 8-quinolinol derivatives in aqueous micellar solutions // Anal. Chim. Acta 2000. V. 407, N 1. p. 71-79.

50. De la Campa M.R.F., Diaz Garcia M.E., Sanz-Medel A. Room-temperature liquid phosphorimetry of the aluminium-ferron chelate in micellar media. Determination of aluminium // Anal. Chim. Acta 1988. V. 212. p. 235-243.

51. Sanz-Medel A., Martinez Garsia P. L., Diaz Garsia M. E. Micelle-stabilized room-temperature liquid phosphorimetry of metal chelates and its application to niobium determination // Anal. Chem. 1987. V. 59, N 5. p. 774-778.

52. Rollie M.E., Patonay G., Warner I.M. Autovated Sample Deoxygenation for Improved Luminescence Measurements / // Anal. Chem. 1987. Vol. 59, N 1. p. 180-184.

53. Виноградова E.H., Галлай 3.A., Финогенова З.М. Методы полярографического и амперометрического анализа. М: Изд-во Моск. ун-та, 1963 г.

54. Захарова Э.А., Князева Е.П., Даниэль ЛЛ.Применение фотоактивных комплексов железа (III) для дезактивации кислорода в вольтамперометрических методах анализа // Журн. анал. химии 1990. Т. 45, № 1. С. 88-93.

55. Nugara N.E., King A.D. Determination of ion permeability by fluorescence quenching // Anal.Chem. 1989. V. 61, N 13. p. 1431 1436.

56. Yanshung W., Weijin J. Rohna Z. Investigation of thallium complex formation with different anion in solution//Talanta 1994. V. 41, N 10. p. 1617-1621.

57. Hayon E., Treinin A., Wilf J. Electronic spectra, photochemistry and autooxidation mechanism of the sulfite-bisulfite-pyrosulfite systems/ The SO2', SO3', SO4* and SO5" radicals // J. Amer. Chem. Soc. 1972. V. 94, N 1. p. 47-57.

58. Turro N.J., Gratzel M., Braun A.M. Photophysikalische und photochemische prozesse in micellaren systemen //Angew. Chem. 1980. Vol. 92. P. 712-734.

59. Cline Love L.J., Habarta J.G., Skrilec M. Influence of analyte-heavy atom micelle dynamics on room-temperature phosphorescence lifetimes and spectra // Anal. Chem. 1981. V. 53, N 3. p. 437-444.

60. Hunter T.F., Szczepanski A.J., Pyrene triplet-state lifetimes in micellar solutions. Tetradecyltrimethylammonium bromide and sodium dodecyl sulfate // J. Phys. Chem. 1984. V. 88, N6. p. 1231-1236.

61. Boutilier G.D., McDonnell C.M., Rahn R.O. Inorganic probes for the phosphorimetric determination of nucleoside // Anal. Chem. 1974. V. 46, N 11. p. 1508-1511.

62. Ермолаев В.Л., Бодунов E.H., Свешникова Е.Б., Шахвердов Т.А. Безызлучательный перенос энергии электронного возбуждения. Д.: Наука. 1977. - 310 с.

63. Zander М., "Photochemistry" Academic press, New York, 1968. pp. 44-45.

64. Backstrom H.L.J., Sandros K. Acta. Chem. Scand., 1958, V.12, N 5. p. 823-832.

65. Donkerbroek J.J., Elzas J.J., Gooijer C., Frei R.W., Velthorst N.H. Some Aspects of Room-Temperature Phosphorescence in Liquid Solutions // Talanta 1981. V. 28. p. 717-723.

66. Donkerbroek J.J., Gooijer C., Velthorst N.H., Frei R.W. Sensitized room temperature phosphorescence in liquid solutions with 1,4-dibromonaphthalene and biacetyl as acceptors //Anal. Chem. 1982. Vol. 54, N 6. p. 891-895.

67. Wilkinson F. Luminescence in cytmistry; Bowen E.J., Ed.; D. Van Nostrand: Princeton, NJ, 1968; Chapter 4.

68. Kira A., Thomas J.K. Equilibria between triplet states of aromatic hydrocarbons // J. Phys. Chem. 1974. V. 78, N 2. p. 196-199.

69. Pandey K.K., Pant T.C. Diffusion modulated energy transfer // Chem. Phys. Lett. 1990. V. 170, N2-3. p. 244-252.

70. Scaniano J.C., Leigh W.J., Meador M.A., Wagner P.J. Sterically hindered triplet energy transfer // J. Amer. Chem. Soc. 1985. V. 107, N 21. p. 5806-5807.

71. Blyshak L.A. Warner I.M. Sensitized phosphorescence with anchored naphthoate energy donors in reversed micelles // Anal. Chem. 1990. V. 62, N 18. p. 1953-1958.

72. DeLuccia F.J., Cline Love L.J. Sensitized room temperature biacetyl phosphorescence via molecular organization// Anal. Chem. 1984. V. 56, N 14. p. 2811-2815.

73. Cline Love L.J., Grayeski M.L., Noroski J. Room-temperature phosphorescence, sensitized phosphorescence and fluorescence of licit and illicit drugs enhanced by organized media // Anal. Chim. Acta. 1985. V. 170. p. 3-12.

74. DeLuccia F.J., Cline Love L.J. Effect of cyclodexrin cavity size on sensitization of room-temperature phosphorescence of biacetyl // Talanta 1985. V. 32, N 8A. P. 665-667.

75. Xie J.-W., Xu J.-G., Chen G.-Z. Sensitized room temperature phosphorescence of biacetyl in AOT reversed micelles dodecylammonium a-naphtylacetate as energy donor // Anal. Chim. Acta. 1996. V.319.N3. p. 231-238.

76. Xie J.W., Xu J.G., Chen G.Z. Sensitized room-temperature phosphorescence of biacetyl by naphthalene in micellar systems // Chem. J. of Chin Univ. 1994. V. 15, N 9. p. 1301-1304.

77. Xie J.W., Xu J.G., Chen C.Z. Studies on solubilization site of the triplet energy acceptor biecetil in normal micelles by using quenched RTP method // Chem. J. of Chin Univ. 1997. V. 18, N 10. p. 1602-1606.

78. Xie J.-W., Xu J.-G., Chen G.-Z. Тушение сенсибилизованной 1-бромнафталином ФКТ биацетила в мицеллах ЦТАБ // Huaxue xuebao = Acta chim. Sin. 1995. - Vol. 53, N 10. - P. 972-977.

79. Tanaka Т., Ogura S., Yamashita S. Energy transfer from the triplet state of 2-acetylnaphthalene to Eu3+ in micellar solutions // J. of Photochem. Photobiol., A 1990. V. 54, p.213-217.

80. Mwalupindi A.G., Blyshak L.A., Ndou T.T., Warner I.M. Sensitized room-temperature luminescence in reverse micelles using lantanide counterions as acceptors // Anal. Chem. 1991. V. 63, N13. p. 1328-1332.

81. Mwalupindi A.G., Ndou T.T., Warner I.M. Characterization of select organic analytes in reverse micelles using lantanide counterions as acceptors // Anal. Chem. 1992. V. 64, N 17, p. 1840-1844.

82. Femia R.A., Cline Love L.J. Micelle-stabilized room-temperature phosphorescence with synchronous scaning //Anal.Chem. 1984. V. 56, N 2. p. 327-331.

83. Gelade E., Schryver F.C., Energy transfer in inverse micelles // J. Am. Chem. Soc. 1984. V. 106, N 10. p. 5871-5875.

84. Yoshinori Y., Hisao M., I'Haya Y.J. Intermolecular energy nransfer of the spin polartized triplet state in frozed SDS micelles // Chem. Phis. Lett. 1984. V. 112, N 6. p. 559-562.

85. Ghosh S., Petrin M., Maki A.H. ODMR investigation of the donor-acceptor pair orientation from triplet-triplet energy transfer within frozen SDS micelles // J.Phys.Chem. 1986. V. 90, N8. p. 1643-1647.

86. Oliveros Е., Pheulpin P., Braun A.N. Comparative study the sensitized photooxidation of n-metyl phenothiazine in homogeneous and microheterogeneous media // Tetrahedron 1987. V. 43, N7, p. 1713-1724.

87. Glasle K., Klein U.K.A., Hauser M. Intermicellar exchange dynamics of solubilized reactants // J. Mol. Struct., 1982. V. 84. N 3-4. P. 353-360.

88. James A.D., Robinson B.H., White N.C. Dynamics of small molecule-micelle interactions: Charge and pH Effects on the kinetics of the interaction of dyes with micelles // J. Coll. and Interf. Sci. 1977. V. 59, N 2. P. 328-336.

89. Головина А.П., Сапежинская C.M., Рунов B.K., Левшин Л.В. Изучение состояния акридинового желтого в растворах в зависимости от кислотности среды // Журн. анал. хим. 1980. Т. 35, № 12. С. 2400-2404.

90. Villareal V., Brown A., Gomez A., Silverio C.F., Gomes F.A. Use of dual-marker form of analyis to estimate binding constants between receptors and lignds by affinity capillary electrophoresis // Chromatographic 2004. V. 60, N 1. P. 73-78.

91. Jansen В., Nierop K.G., Vrugt J.A., Verstraten J.M. (Uncertainty of overall binding constants of A1 with dissolved organic matter determined by the Scatchard approach // Water Res. 2004. V. 38. N 5 P. 1270-1280.

92. Cheng H.C. The influence of cooperativity on the determination of dissocition constants: examination of the Cheng-Prusoff equation, the Scatchard analysis, the Schild analysis and related power equations // Pharmacol. Res. 2004. V. 50, N 1. P. 21.

93. Ziemiecki H., Cherry W.R Association Constants and Reaction Dynamics of Metal Ions Bound to Anionic Micelles // J. Amer. Chem. Soc. 1981. V. 103, N 15. p. 4479-4483.

94. Grieser F., Tausch-Treml R. Quenching of pyrene fluorescence by single and multivalent metal ions in micellar solutions // J. Amer. Chem. Soc. 1980. V.102, N 24. p. 7258-7264.

95. Saha S.K. Krishnamoorty G. Dogra S.K. Fluorescence quenching of 2-aninofluorene by cetylpyridinium chloride iodide ion and acrilamide in non-ionic micelles: Tweens // J. Photochem. Photobiol. A 1999. V. 121, N3. P. 191-198.

96. Grieser F. Drummond C. the physicochemical properties of self-assembled surfactant aggregates as determined by some molecular spectroscopic probe techniques // J. Phys. Chem. 1988. V. 92, N. 20. p. 5580-5593.

97. Konuk R. Cornelisse J., McGlynn S.P. Fluorescence quenching of pyrene by Cu2+ and Co2+ in sodium dodecyl sulfate micelles // J. Phys. Chem. 1989. V. 93, N. 18. p. 7405-7408.

98. Quina F.H. Toscano V.G. Photophenomena in Surfactant Media. Quenching of a water -soluble fluorescence probe by iodide ion in micelle solutions of sodium dodecyl sulfate // J. Phys. Chem. 1977. V. 81, N 18. p. 1750-1754.

99. Popov A.V. Gladkikh V.S., Burchtein A.I. Stern-Volmer law in competing theories and approximations // J. Phys. Chem. A. 2003. V. 107. p. 8177-8183.

100. Сердюк А.И., Кучер Р.И. Мицеллярные переходы в растворах поверхностно-активных веществ Киев, Наукова думка, 1987,205 стр.

101. Kalyanasundaram К. Thomas J.K. Environmental effects on vibronic band intensities in pyrene monomer fluorescence and their application in studies of micellar systems // J. of Amer. Chem. Soc. 1977. V. 99, N 7. p. 2039-2043.

102. Evans D.F. Evans J. В., Sen R., Warr G. A comparison of counterion effects in surfactant and classical colloid systems // J. Phys. Chem. 1988. V. 92, N. 3. p. 784 790.

103. Turro N.J. Yekta A. Luminescent Probes for Detergent Solutions. A Simple Procedure for Determination of the Mean Aggregation Number of Micelles // J. Amer. Chem. Soc. 1978. V. 100, N18. p. 5951 -5952.

104. Carnero Ruiz C. Aguiar J. Interaction, stability and microenvironmental prorperties of mixed micelles of Triton-X 100 and и-alkyltrimethylammonium bromides: influence of alkyl chain length // Langmuir. 2000. V. 16, N 21. p. 7946 7953.

105. Saitoh T. Hoshino H., Yotsuyanagi T. Volume constraint effect on solute partitioning to Triton X-100 micelles in water // J. Chem. Soc. Faraday Trans. 1994. V. 90, N. 3. p. 479-486.

106. Haque M.E. Das A.R., Moulik S.P. Behaviors of sodium deoxycholate (NaDC) and polyoxyethylene tert-octylphenyl ether (Triton X-100) at the air/water interface and in the bulk // J. Phys. Chem. 1995. V. 99, N 38. p. 14032-14038.

107. James A.D. Robinson B.H., White N.C. Dynamics of small molecule-micelle interactions: Charge and pH Effects on the kinetics of the interaction of dyes with micelles // J. Coll. and Interf. Sci. 1977. V. 59, N. 2. p. 328-336.

108. Lemieux P.M., Lutes C.C., Santoianni D.A. Emissions of organic air toxics from open burning: a comprehensive review // Progress in Energy and Combustion Science, 2004. V. 30, N1. p. 1-32.

109. Ciganek M., Neca J., Adamec V., Janosek J., Machala M. A combined chemical and bioassay analysis of traffic-emitted polycyclic aromatic hydrocarbons // Science of The Total Environment 2004. V. 334-335, N 1. p. 141-148.

110. Schnelle-Kreis J., Gebefugi I., Welzl G., Jaensch Т., Kettrup A. Occurrence of particle-associated polycyclic aromatic compounds in ambient air of the city of Munich // Atmosph. Environ. 2001. V. 35, Suppl. 1. p. 71-81.

111. Pufulete M., Battershill J., Boobis A., Fielder R. Approaches to carcinogenic risk assessment for polycyclic aromatic hydrocarbons: a UK perspective // Regulatory Toxicology and Pharmacology 2004. V. 40, N 1. p. 54-66.

112. Ohura T, Amagai T, Fusaya M, Matsushita H. Polycyclic aromatic hydrocarbons in indoor and outdoor environments and factors affecting their concentrations // Environ. Sci. and Technol. 2004. V. 38, N 1. p. 77-83.

113. Fahnrich K.A., Pravda M., Guilbault G.G. // Immunochemical Detection Of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs). // Anal. Lett. 2002. V. 35, N 8. p. 1269-1300.

114. Wurl O., Obbard J.P. A review of pollutants in the sea-surface microlayer (SML): a unique habitat for marine organisms // Marine Pollut. Bull. 2004. V. 48, N 11-12. p. 1016-1030.

115. Tuhackova J., Cajthaml Т., Novak N., Novotny C., Mertelik J., Sasek V. Hydrocarbon deposition and soil microflora as affected by highway traffic // Environ. Pollut. 2001. V. 113, N 3. p. 255-262.

116. Simko P. Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in smoked meat products and smoke flavouring food additives // J. of Chromatogr. В 2002. V. 770, N 1-2. p. 3-18.

117. Stolyhwo A., Sikorski Z.E. Polycyclic aromatic hydrocarbons in smoked fish a critical review// Food Chem. 2005. V. 91, N 2. p. 303-311.

118. Moret S., Conte L.S. Polycyclic aromatic hydrocarbons in edible fats and oils: occurrence and analytical methods // J. of Chromatogr. A 2000. V. 882, N 1-2. p. 245-253.

119. Aragon P., Atienza J., Climent M.D. Analysis of organic compounds in air: A review // Crit. Rev. in Anal. Chem. 2000. V. 30, N 2-3. p. 121-151.

120. Santos F.J., Galceran M.T. The application of gas chromatography to environmental analysis // Trends in Anal. Chem. 2002. V. 21, N 9-10. p. 672-685.

121. Patra D. Applications and new developments in fluorescence spectroscopic techniques for the analysis of polycyclic aromatic hydrocarbons // Appl. Spectrosc. Reviews 2003. V. 38, N 2. p. 155- 185.

122. Knopp D., Seifert M., Vaananen V., Niessner R. Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in contaminated water and soil samples with immunological and chromatographic methods // Environmental Sci. and Technol. 2000. V. 34, N 10. p. 20352041.

123. Al-Haddad A. A selective method for the determination of benzoa.pyrene in soil using porous graphitic carbon liquid chromatography columns // Talanta 2003. V. 59, N 4. p. 845848.

124. Li Hou, Hian Kee Lee Application of static and dynamic liquid-phase microextraction in the determination of polycyclic aromatic hydrocarbons // J. of Chromatogr. A 2002. V. 976, N. 1-2. p. 377-385.

125. Garcia-Falcon M.S., Cancho-Grande В., Simal-Gandara J. Stirring bar sorptive extraction in the determination of PAHs in drinking waters // Water Research, 2004. V. 38, N 7. P. 16791684.

126. Popp P., Bauer C., Moder M., Paschke A. Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in waste water by off-line coupling of solid-phase microextraction with column liquid chromatography // J. of Chromatogr. A 2000. V. 897, N 1-2. p. 153-159.

127. Pensado L., Casais C., Mejuto C., Cela R., Optimization of the extraction of polycyclic aromatic hydrocarbons from wood samples by the use of microwave energy // J. of Chromatogr. A 2000. V. 869, N 1-2. p. 505-513.

128. Marlow M., Hurtubise R.J. Liid-liquid-liquid microextraction for the enrichment of PAH methabolites investigated with fluorescence spectroscopy and capillary electrophoresis // Anal. Chim. Acta 2004. V. 526, N 1 P. 41-49.

129. Williamson K.S., Petty J.D., Huckins J.N., Lebo J.A., Kaiser E.M. // HPLC-PFD determination of priority pollutant PAHs in water, sediment, and semipermeable membrane devices // Chemosphere, 2002. V. 49, N 7. p. 703-715.

130. Mao Ch., Tucker Sh.A., High-performance liquid chromatographic separation of polycyclic aromatic hydrocarbons using pyridinium chloride as a selective fluorescence quencher to aid detection // J. of Chromatogr. A, 2002. V. 966, N 1-2. p. 53-61.

131. Howerton S.B., Goodpaster J.V., McGuffin V.L. Characterization of polycyclic aromatic hydrocarbons in environmental samples by selective fluorescence quenching // Anal. Chim. Acta 2002. V. 459, N 1. p. 61-73.

132. Ravelet C., Grosset C., Montuelle В., Benoit-Guyod J. L., Alary J. Liquid chromatography study of pyrene degradation by two micromycetes in a freshwater sediment // Chemosphere 2001. V. 44, N7. p. 1541-1546.

133. Nirmaier H.-P., Fischer E., Meyer A., Henze G. Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in water samples using high-performance liquid chromatography with amperometric detection // J. of Chromatogr. A 1966. V. 730, N 1-2. p. 169-175.

134. Reemtsma Th. Liquid chromatography-mass spectrometry and strategies for trace-level analysis of polar organic pollutants // J. of Chromatogr. A 2003. V. 1000, N 1-2; p. 477-501.

135. Van Leeuwen S.M., Hayen H., Karst U. Liquid chromatography-electrochemistry-mass spectrometry of polycyclic aromatic hydrocarbons // Anal. Bioanal. Chem., 2004. V. 378, N 4. p. 917-925.

136. Moriwaki H., Ishitake M., Yoshikava Sh., Miyakoda H., Alary J.-F. Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in sediment by liquid chromatography-atmospheric pressure photoionization-mass spectrometry // Anal. Sci. 2004 V. 20, N 2. p. 375-377.

137. Cappiello A., Famiglini G., Mangani F., Palma P., Siviero A. Nano-high-performance liquid chromatography-electron ionization mass spectrometry approach for environmental analysis // Anal. Chim. Acta 2003. V. 493. N 2. p. 125-136.

138. Murahashi Ts. Comprehensive two-dimensional high-performance liquid chromatography for the separation of polycyclic aromatic hydrocarbons // Analyst 2003. V. 128, N 6, p. 611615.

139. Fialkov A.B., Gordin A., Amirov A. Extending the range of compounds amenable for gas chromatography-mass spectrometric analysis // J. of Chromatogr. A 2003. V. 991, N 2. p. 217-240.

140. Santos F. J., Galceran M. T. The application of gas chromatography to environmental analysis // Trends in Anal. Chem. 2002. V. 21, N 9-10. p. 672-685.

141. Ong R., Lundstedt S., Haglund P., Marriott Ph. Pressurised liquid extraction-comprehensive two-dimensional gas chromatography for fast-screening of polycyclic aromatic hydrocarbons in soil // J. Chromatogr. A 2003. V. 1019, N 1-2. p. 221-232.

142. Wolska L. Miniaturised analytical procedure of determining polycyclic aromatic hydrocarbons and polychlorinated biphenyls in bottom sediments // J. of Chromatogr. A 2002. V. 959, N 1-2. p. 173-180.

143. Librando V., Hutzinger O., Tringali G., Aresta M. Supercritical fluid extraction of polycyclic aromatic hydrocarbons from marine sediments and soil samples // Chemosphere 2004. V. 54, N8. p. 1189-1197.

144. Wang Zh., Li K., Fingas M., Sigouin L., Menard L. Characterization and source identification of hydrocarbons in water samples using multiple analytical techniques // J. of Chromatogr. A 2002. V. 971. N 1-2. p. 173-184.

145. Doong R., Chang S., Sun Yu. Solid-phase microextraction for determining the distribution of sixteen US Environmental Protection Agency polycyclic aromatic hydrocarbons in water samples // J. of Chromatogr. A, 2000. V. 879, N 2. p. 177-188.

146. Grynkiewicz M., Polkowska A., Namienik J. Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in bulk precipitation and runoff waters in an urban region (Poland) // Atmosphere. Environ. 2002. V. 36, N 2. p. 361-369.

147. Perez S., Guillamon M., Barcelo D. Quantitative analysis of polycyclic aromatic hydrocarbons in sewage sludge from wastewater treatment plants // J. of Chromatogr. A 2001. V. 938, N1-2. p. 57-65.

148. Polkowska A., Kot A., Wiergowski M., Wolska L., Woowska K., Namienik J. Organic pollutants in precipitation: determination of pesticides and polycyclic aromatic hydrocarbons in Gdask, Poland // Atmosphere. Environ. 2000. V. 34, N 8. p. 1233-1245.

149. Pettersson J., Kloskowski A., Zaniol C., Roeraade J. Automated high-capacity sorption probe for extraction of organic compounds in aqueous samples followed by gas chromatographic analysis // J. of Chromatogr. A 2004. V. 1033. N 2. p. 339-347.

150. Guidotti M., Giovinazzo R., Cedrone O., Vitali M. Determination of organic micropollutants in rain water for laboratory screening of air quality in urban environment // Environ. Internat. 2000. V. 26, N 1-2. p. 23-28.

151. Possanzini M., Di Palo V., Gigliucci P., Tomasi Sciano M.C., Cecinato A. Determination of phase-distributed PAH in Rome ambient air by denuder/GC-MS method // Atmospher. Environ. 2004. V. 38, N 12. p. 1727-1734.

152. Ochsenkuhn-Petropoulou M., Staikos K., Matuschek G., Kettrup A. On-line determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in airborne particulate matter by using pyrolysis/GC-MS // J. of Anal yt. Appl. Pyrolysis, 2003. V. 70, N 1. p. 73-85.

153. Mottier P., Parisod V., Turesky R. J. Quantitative determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in barbecued meat sausages by gas chromatography coupled to mass spectrometry // J. Agric. Food Chem., 2000. V. 48, N 4. p. 1160-1166.

154. Jira W. A GC/MS method for the determination of carcinogenic polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) in smoked meat products and liquid smokes // Eur. Food Res. Technol. 2004. V. 218, N2. p. 208-212.

155. Alzaga R., Montuori P., Ortiz L., Bayona J.M., Albaiges J. Fast solid-phase extraction-gas chromatography-mass spectrometry procedure for oil fingerprinting. Application to the Prestige oil spill. // J. of Chromatogr. A 2004. V. 1025, N 1. p. 133-138.

156. Bernabei M., Reda R., Galiero R., Bocchinfuso G. Determination of total and polycyclic aromatic hydrocarbons in aviation jet fuel // J. of Chromatogr. A 2003. V. 985, N 1-2. p. 197203.

157. King A. J., Readman J.W., Zhou J.L. Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in water by solid-phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry // Anal. Chim. Acta 2004, V. 523, N 2. p. 259-267.

158. Yoshiaki Ikarashi, Masa-aki Kaniwa and Toshie Tsuchiya, Monitoring of polycyclic aromatic hydrocarbons and water-extractable phenols in creosotes and creosote-treated woods made and procurable in Japan //Chemosphere 2005. V.60, N 9. p. 1279-1287.

159. Filipkowska A., Lubecki L., Kowalewska G. Polycyclic aromatic hydrocarbon analysis in different matrices of the marine environment // Anal. Chim. Acta 2005. V. 547, N 2. p. 243254.

160. Mandalakis M., Gustafsson O., Optimization of a preparative capillary gas chromatography-mass spectrometry system for the isolation and harvesting of individual polycyclic aromatic hydrocarbons // J. of Chromatogr. A 2003. V. 996, N 1-2. p. 163-172.

161. Marriott Ph.J., Haglund P., Ong R.C.Y. A review of environmental toxicant analysis by using multidimensional gas chromatography and comprehensive GC // Clin. Chim. Acta 2003 V. 328, N1-2. p. 1-19.

162. Gratz L.D., Bagley S.T., Leddy D.G., Johnson J.H., Chiu Ch., Stommel P. // Interlaboratory comparison of HPLC-fluorescence detection and GC/MS: analysis of PAH compounds present in diesel exhaust // J. of Hazard. Mater. 2000. V. 74, N 1-2. p. 37-46.

163. Marce R.M., Borrull F. Solid-phase extraction of polycyclic aromatic compounds // J. of Chromatogr. A 2000. V. 885, N 1-2. p. 273-290.

164. Howerton S.B., Goodpaster J.V., McGuffin V.L. Characterization of polycyclic aromatic hydrocarbons in environmental samples by selective fluorescence quenching // Anal. Chim. Acta 2002. V. 459, N 1. p. 61-73.

165. Garguilo M.G., Thomas D.H., Anex D.S., Rakestraw D.J. Laser-induced dispersed fluorescence detection of polycyclic aromatic compounds in soil extracts separated by capillary electrochromatography // J. of Chromatogr. A 2000. V. 883, N 1-2. p. 231-248.

166. Guiteras J., Beltran J.L., Ferrer R. Quantitative multicomponent analysis of polycyclic aromatic hydrocarbons in water samples // Anal. Chim. Acta 1998. V. 361, N 3. p. 233-240.

167. Patra D., Sireesha L., Mishra A.K. Characterization and investigation of polycyclic aromatic compounds present in petrol, diesel, kerosene and 2T oil using excitation emission matrix fluorescence // Indian J. of Chem. A 2001. V. 40 (A), p. 374 -379.

168. Patra D., Mishra A.K., Recent developments in multicomponent synchronous fluorescence scan analysis, Trends in Anal. Chem.2002. Vol. 21. N 12. p. 787 -798.

169. JiJi R.D., Cooper G.A., Booksh K.S. Excitation-emission matrix fluorescence based determination of carbamate pesticides and polycyclic aromatic hydrocarbons // Anal. Chim. Acta 1999. V. 397. N 1-3. p. 61-72.

170. Beltran J. L., Ferrer R., Guiteras J. Multivariate calibration of polycyclic aromatic hydrocarbon mixtures from excitation-emission fluorescence spectra // Anal. Chim. Acta, 1988. V. 373, N2-3. p. 311-319.

171. Patra D., Mishra A.K., Investigation on simultaneous analysis of multicomponent polycyclic aromatic hydrocarbon mixtures in water samples: a simple synchronous fluorimetric method // Talanta 2001. V. 55, N 1. p. 143-153.

172. Романовская Г.И., Пивоваров B.M., Чибисов A.K. Возможности метода синхронной спектрофлуориметрии в люминесцентном анализе многокомпонентных смесей // Журн. аналит. химии 1987. т.42, № 8. С. 1401-1406 .

173. Andrade-Eiroa A., Vazquez-Bianco E., Lopez-Mahia E., Muniategui-Lorenzo S., Prada-Rodriguez D. Modeling of inner filter effect in synchronous spectrofluorimetry by using partial least squares // Analysis, 2000. Vol. 28. N P. 148-154.

174. Patra D. Simple luminescence method for estimation of benzoa.pyrene in a complex mixture of polycyclic aromatic hydrocarbons without a pre-separation procedure // Luminescence 2003. V. 18, N 2. p. 97 -102.

175. Biggs W.R., Fetzer J.C., Analytical techniques for large polycyclic aromatic hydrocarbons: a review // Trends in Anal. Chem. 1996. V. 15, N 4. p. 196-206.

176. Dissanayake A., Galloway T.S. Evaluation of fixed wavelength fluorescence and synchronous fluorescence spectrophotometry as a biomonitoring tool of environmental contamination // Marine Environ. Research 2004. V. 58, N 2-5. p. 281-285.

177. Hua G., Killham K., Singleton I. Potential application of synchronous fluorescence spectroscopy to determine benzoa.pyrene in soil extracts // Environ. Pollut. 2006. V. 139, N 2. p. 272-278.

178. Jonsson G., Sundt R.C., Aas E., Beyer J. An evaluation of two fluorescence screening methods for the determination of chrysene metabolites in fish bile // Chemosphere 2004. V. 56, N 1. p. 81-90.

179. Giessing A.M.B., Mayer L.M., Forbes T.L. Synchronous fluorescence spectrometry of 1-hydroxypyrene: a rapid screening method for identification of PAH exposure in tissue from marine polychaetes // Marine Environ. Research 2003. V. 56, N 5. p. 599-615.

180. Li Y.Q., Huang X.Z., Rapid determination of five polynuclear aromatic compounds in a mixture by derivative non-linear variable-angle synchronous fluorescence // Fresenius J. Anal. Chem. 1997 V. 357. p. 1072-1075.

181. Li-Fang He, Dan-Li Lin, Yao-Qun Li, Micelle-sensitized constant-energy synchronous fluorescence spectrometry for the simultaneous determination of pyrene, benzoa.pyrene and perylene // Anal. Sci. 2005. V. 21. p. 641-645

182. Ferrer R., Beltran J.L., Guiteras J. Multivariate calibration applied to synchronous fluorescence spectrometry. Simultaneous determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in water samples // Talanta 1998. V. 45, N 6. p. 1073-1080.

183. Whitcomb J.L., Bystol A.J., Campiglia A.D. Time-resolved laser-induced fluorimetry for screening polycylic aromatic hydrocarbons on solid-phase extraction membranes // Anal. Chim. Acta 2002. V. 464, N 2. p. 261-272.

184. Selli E., Zaccaria C., Sena F., Tomasi G., Bidoglio G. Application of multi-way models to the time-resolved fluorescence of polycyclic aromatic hydrocarbons mixtures in water// Water Research 2004. V. 38, N 9. p. 2269-2276.

185. Litani-Barzilai I., Bulatov V., Gridin V.V., Schechter I. Detector based on time-resolved ion-induced voltage in laser multiphoton ionization and laser-induced fluorescence // Anal. Chim. Acta 2004. V. 501. N 2, p. 151-156.

186. Fernandez-Sanchez J.F., Segura Carretero A., Cruces-Blanco C., Fernandez-Gutierrez A. Highly sensitive and selective fluorescence optosensor to detect and quantify benzo a. pyrene in water samples // Anal. Chim. Acta 2004. V. 506, N 1. p. 1-7.

187. Vo-Dinh Т., Fetzer J., Campiglia A.D. Monitoring and characterization of polyarometic compounds in the environment // Talanta 1998 V. 47. p. 943-969.

188. Mastral A.M., Garcia Т., Lopez J.M., Murillo R., Callen M.S., Navarro M.V. Where are the limits of the gas-phase fluorescence on the polycyclic aromatic hydrocarbons analysis? // Polycyclic Aromatic Compounds 2004. V. 24, N. 4-5. p. 325 332.

189. Шпольский Э.В. Электронные квазиленейчатые спектры органических соединений и их применение к анализу следов веществ // Журн. прикл. спектроск. 1967. Т 7, N 4. С. 492-497.

190. Шпольский Э.В., Ильина А.А., Юшкова JI.A. Спектры флуоресценции коронена в замороженных растворах // Доклады акад. наук СССР 1952. Т 8, N 6. С. 935-938.

191. Garrigues Ph., Budzinski Н. Recent analytical advances in Shpol'skill spectroscopy // Trends Anal. Chem. 1995. V. 14, N 5. p. 231-239.

192. Yu S.J., Campiglia A.D. Direct determination of dibenzoa.l.pyrene and its four dibenzopyrene isomers in water samples by solid-liquid extraction and laser-excited time-resolved Shpol'skii spectrometry // Anal. Chem. 2005. V. 77, N 5. p. 1440-1447.

193. Yu L.J., Li Y.Q., Sui W. Analysis of PAHs by Shpol"skii fluorescence spectra in low temperature // Spectrosc. spectr. analysis 2002. V. 22, N 5. p. 819-821.

194. Kozin I., Gooijer C., Velthorst N.H., Hellou J., Zitko V. Isomer-specific detection of PAHs and PAH metabolites in environmental matrices by Shpol'skii luminescence spectroscopy // Chemosphere 1992. V. 33, N 8. p. 1435-1447.

195. Luthe G., Scharp J., Brinkman U. A. Th., Gooijer C. Monofluorinated polycyclic aromatic hydrocarbons in Shpol'skii spectroscopy // Anal. Chim. Acta 2001. V. 429, N 1. p. 49-54.

196. Luthe G., Es-Sbai H., Gooijer C., Brinkman U. A. Th., Ariese F. Monofluorinated polycyclic aromatic hydrocarbons as internal standards in Shpol'skii spectroscopy: 1-fluoropyrene as an example // Anal. Chim. Acta 2002. V. 459, N. 1. p. 53-59.

197. Kozin I., Gooijer C., Velthorst N.H. Shpol'skii spectroscopy as a tool in environmental analysis for amino- and nitro-substituted polycyclic aromatic hydrocarbons: A critical evaluation // Anal. Chim. Acta 1996. V. 333, N 3. p. 193-204.

198. Bystol A.J., Yu Sh., Campiglia A.D. Analysis of polycyclic aromatic hydrocarbons in HPLC fractions by laser-excited time-resolved Shpol'skii spectrometry with cryogenic fiberoptic probes // Talanta 2003. V. 60, N 2-3. p. 449-458.

199. Bystol A.J., Whitcomb J.L., Campiglia A.D. A novel approach for solid-liquid extraction laser-excited time-resolved Shpol'skii spectrometry // Talanta 2002. V. 57, N. 6. p. 1101 -1111.

200. Arruda A.F., Yu Sh., Campiglia A. D. Shpol'skii spectroscopy at the interface of two non-polar microenvironments: a novel approach for the analysis of polycylic aromatic compounds // Talanta 2003. V. 59, N 6. p. 1199-1211.

201. Bystol A.J., Campiglia A.D., Gillispie G.D. Time-resolved laser-excited Shpol'skii spectrometry with a fiber-optic probe and ICCD camera // Appl. Spectrosc. 2000. V. 54, N 6. p. 910-917.

202. Ariese F., Gooijer C., Velthorst N.H., Hofstraat J.W. Shpol'skii spectrofluorimetric determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in biota // Anal. Chim. Acta 1990. V. 232. p. 245-251.

203. Jin W., Liu C.S. Study of five polycyclic aromatic hydrocarbons by chemical deoxygenation micelle-stabilized room-temperature phosphorimetry // Microchem. J. 1993. V. 48, N. l.p. 94-103.

204. Ramos G.R., Khasawneh I.M., Garsia-Alvares-Coque M.C., Winefordner J.D. Room-temperature phosphorimetry of polyaromatic hydrocarbons with organized media and paper substrare: a comparative study // Talanta 1979. V.35, N 1. p. 41-46.

205. Cline Love L.J., Skrilec M. Micelle stabilized room temperature phosphorescence // Solution Behavior of Surfactants. Theoretical and Applied Aspects. Plenum Press. N.Y. 1982. V.2. P.1065-1082.

206. Cline Love L.J., Skrilec M. Room temperature phosphorescence in micellar solution // Int. Lab. 1981. V.ll,N3.p. 50-55.

207. Blyshak L.A., Rossi T.M., Patonay G., Warner I.M. Cyclodextrin-modified solvent extraction for polynuclear aromatic hydrocarbons // Anal. Chem. 1988. V. 60. p, 2127-2131.

208. Scypinski S., Cline Love L.J. Room temperature phosphorescence of polynuclear aromatic hydrocarbons in cyclodextrins // Anal.Chem. 1984. V.56, N 2. p. 322-327.

209. Vo-Dinh Т., Gammage R.B., Martinez P.R. Analysis of a workplace air particulate sample by synchronous luminescence and room-temperature phosphorescence // Anal. Chem. 1981. V. 53. p. 253-258.

210. Ramasamy S. M., Hurtubise R. J. Energy-gap law and room-temperature phosphorescence of polycyclic aromatic hydrocarbons adsorbed on cyclodextrin/sodium chloride solid matrices // Appl. Spectrosc. 1996. V. 50, N. 1. p. 115-118.

211. Vo-Dinh Т., Lue Yen E., Winefordner J.D., Heavy-atom effect on room temperature phosphorimetry // Anal. Chem. 1976. V. 48, N 8. p. 1186-1188.

212. Perry L.M., Campiglia A.D., Winefordner J.D. Room temperature phosphorescence of PAH on matrix-modified solid substrates // Anal. Chem. 1989. Vol. 61, N 20. p. 2328-2330.

213. Ward J.L., Walden G.L., Winefordner J.D. A review of recent uses of phosphorimetry for organic analysis // Talanta 1981 V. 28. p. 201-207.

214. Cline Love L.J., Skrilec M. Organization and dynamics of pyrene and pyrene lipids in intact lipid bilayers. Photo-induced charge transfer processes // Anal. Chem. 1981. V.53. p. 1872-1875.

215. Ramis Ramos G., Khasawneh I.M., Garcia-Alvarez-Coque M.C., Winefordner J.D. Continuous monitoring of transport by fluorescence on cells and vesicles // Talanta 1988. V. 35, N1. p. 41-46.

216. Kim H., Crouch S.R. Zabik M.J., Selim S.A. Environmental factors affecting micellar stabilized room-temperature phosphorescence lifetimes // Anal. Chem. 1990. V. 62, N 21. p. 2365-2369.

217. Almgren M. Lofroth J.E., Van Stam J. Fluorescence decay kinetics in monodisperse confinements with exchange of probes and quenchers // J. Phys. Chem. 1986. V. 90. p. 4431— 4437.

218. Tachibana M., Tani K., Koizumi H. J. of Inclusion Phenomena and macrocyclic Chemistry 37(2000) 209-218.

219. The Toxicology of Aflatoxins: Human health, Vetirinary and Agricaltural Significance, Academic Press, New York, 1994.

220. СанПин 2.3.2.1078-01. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов.

221. Commission Regulation (ЕС) No. 466/2001 of 8 March 2001 setting maximum levels for certain contaminants in foodstuffs, Off. J. Eur. Communities L77/1,16.111.2001.

222. Jaimez J., Fente C.A., Vazquez B.I., Franco C.M., Cepeda A., Mahuzier G., PrognonP. Application of the assay of aflatoxins by liquid chromatography with fluorescence detection in food analysis // J. Chromatogr. A 2000. V. 882, N 1-2. p. 1-10.

223. Akiyama H., Goda Y., Tanaka Т., Toyoda M. Determination of aflatoxins Bl, B2, G1 and G2 in spices using a multifunctional column clean-up // J. Chromatogr. A 2001. V. 932, N 12. p. 153-157.

224. Blesa J., Soriano J.M., Molto J.C., Mann R., Manes J. Determination of aflatoxins in peanuts by matrix solid-phase dispersion and liquid chromatography // J. Chromatogr. A 2003. V. 1011, N 1-2. p. 49-54.

225. Asis R., Di Paola R.D., Aldao M.A.J. Determination of aflatoxin B-l in highly contaminated peanut samples using HPLC and ELISA // Food agric. immunol. 2002. V. 14, N 3. p. 201-208.

226. Holcomb M., Thompson H.C., Cooper W.M., Hopper M.L. SFE Extraction of Aflatoxins (BI, B2, Gl, and G2) from Corn and Analysis by HPLC // J Supercrit. Fluids. 1996. V. 9, N 2. p. 118-121.

227. Mably M., Mankotia M., Cavlovic P., Tam J., Wong L., Pantazopoulos P., Calway P., Scott P.M. Survey of aflatoxins in beer sold in Canada // Food Addit. Contam. 2005. V. 22, N 12. p.1252-1257.

228. Kok W.Th. Derivatization reactions for the determination of aflatoxins by liquid chromatography with fluorescence detection // J. Chromatogr. В 1994, V. 659, N 1. p. 127137.

229. Rastogi S., Das M., Khanna S.K. Quantitative determination of aflatoxin Bl-oxime by column liquid chromatography with ultraviolet detection // J. Chromatogr. A 2001. V. 933, N 1-2. p. 91-97.

230. Elizalde-Gonzalez M.P., Mattusch J., Wennrich R. Stability and determination of aflatoxins by high-performance liquid chromatography with amperometric detection // J. Chromatogr. A 1998. V. 828, N 1-2. p. 439-444.

231. Catharino R.R., de Azevedo Marques L., Silva Santos L., Baptista A.S., Gloria E.M., Calori-Domingues M.A., Facco E.M.P., Eberlin M.N. Aflatoxin Screening by MALDI-TOF Mass Spectrometry // Anal. Chem. 2005. V. 77, N 24. p. 8155-8157.

232. Ventura M., Gomez A., Anaya I., Diaz J., Broto F., Agut M., Cornelias L. Determination of aflatoxins Bl, Gl, B2 and G2 in medicinal herbs by liquid chromatography-tandem mass spectrometry // J. Chromatogr. A 2004. V. 1048, N 1. p. 25-29.

233. Xiulan S., Xiaolian Z., Jian Т., Zhou J., Chuc F.S. Preparation of gold-labeled antibody probe and its use in immunochromatography assay for detection of aflatoxin Bl // International J. Food Microbiology. 2005. V. 99, N 2. p. 185- 194.

234. Carlson M.A., Bargeron C.B., Benson R.C., Fraser A.B., Phillips Т.Е., Velky J.T., Groopman J.D., Strickland P.T., Ко H.W. An automated, handheld biosensor for aflatoxin // Biosens. Bioelectron. 2000. V. 14, N 10-11. p. 841-848.

235. Nasir M.S., Jolley M.E. Development of a fluorescence polarization assay for the determination of aflatoxins in grains // J. Agric. Food Chem. 2002. V. 50, N 11. p. 31163121.

236. Stroka J., Anklam E. Development of a simplified densitometer for the determination of aflatoxins by thin-layer chromatography // J. Chromatogr. A 2000, V. 904, N 1-2. p. 263-268.

237. Papp E., H-Otta K., Zaray G., Mincsovics E. Liquid chromatographic determination of aflatoxins // Microchem. J. 2002 Vol. 73, N 1. p. 39-46.

238. Lin L., Zhang J., Wang P., Wang Y., Chen J. Thin-layer chromatography of mycotoxins and comparison with other chromatographic methods // J. Chromatogr. A 1998. V. 815, N 1. p. 3-20.

239. Perrin M.F. Polarisation de la lumiere de fluorescence. Vie moyenne des molecules dans l'etat excite // J. Phys. Radium 1926. V. 7. p. 390-401.

240. Weber G. Polarization of the fluorescence of macromolecules // Biochem. J. 1952. V. 51. p.155-167.

241. Dandliker W.B., de Saussure V.A., Review article: Fluorescence polarization in immunochemistry // Immunochem.1970. V. 7. p. 799-828.

242. Watson R.A.A., Landon J., Shaw E.J., Smith D.S. Polarization fluoroimmunoassay of gentamicin // Clin. Chim. Acta 1976. V. 73. p. 51-55.

243. Maragos C.M., Plattner R.D. Rapid fluorescence polarization immunoassay for the mycotoxin deoxynivalenol in wheat // J. Agric. Food Chem. 2002. V. 50. p. 1827-1832.

244. Maragos C.M., Jolley M.E., Nasir M.S. Fluorescence polarization as a tool for the determination of deoxynivalenol in wheat // Food Addit. Contam. 2002. V. 19. p. 400-407.

245. Nasir M.S., Jolley M.E. Development of fluorescence polarization assay for the determination of aflatoxins in grains // J. Agric. Food Chem. 2002. V. 50. p. 3116-3121.

246. Maragos C.M., Jolley M.E., Plattner R.D., Nasir M.S. Fluorescence polarization as a means for determination of fumonisins in maize //J. Agric. Food Chem. 2001. V. 49. p. 596-602.

247. Shim W.B., Kolosova A.Y., Kim Y.J., Yang Z.Y., Park S.J., Eremin S.A., Lee I.S., Chung D.H. Fluorescence polarization immunoassay based on a monoclonal antibody for the detection of ochratoxin A // Intern. J. Food Sci. Technol. 2004. V. 39. p.829-837.

248. Maragos C.M., Kim E.K. Detection of zearalenone and related metabolites by fluorescence polarization immunoassay // J. Food Protect. 2004. V. 67. p. 103 9-1043.

249. Price, C.P. Newman, D.J. Principles and Practice of Immunoassay, 2nd Ed. New York, USA: Grove's Dictionaries. 1997.

250. Hennion, M. and Barcelo D. Strengths and limitations of immunoassays for effective and efficient use for pesticide analysis in water samples: A review // Anal. Chim. Acta 1998. V. 362, N1. p. 3-34.

251. Fahnrich, K.A., Pravda, M. and Guilbault, G.G. Immunochemical detection of polycyclic aromatic hydrocarbons // Anal. Lett. 2002. V. 35. p. 1269-1300.

252. Herikstad, B.V., Ovrebo, S., Haugen, A. and Hagen, I. Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in urine from coke-oven workers with a radioimmunoassay // Carcinogenesis 1993. V.14. p. 307-309.

253. Yadavalli, V.K. and Pishko M.V. Biosensing in microfluidic channels using fluorescence polarization // Anal. Chim. Acta 2004. V. 507. N 1, p. 123-128.

254. Ius, A., Bacigalupo, M.A., Roda, A. and Vaccari, C. Development of a time-resolved fluoroimmunoassay of benzo(a)pyrene in water // Fresenius J. Anal. Chem. 1992. V. 343. p. 55-56.

255. Fahnrich, K.A., Pravda, M. and Guilbault G.G. Disposable amperometric immunosensor for the detection of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) using screen-printed electrodes // Biosens. Bioelectron. 2003. V. 18. p. 73-82.

256. Moore E.J., Kreuzer M.P., Pravda M., Guilbault G.G. Development of a rapid single-drop analysis biosensor for screening of phenanthrene in water samples // Electroanalysis 2004. V. 16. p. 1653-1659.

257. Scharnweber Т., Fisher M., Suchanek M., Knopp D., Niessner R. Monoclonal antibody to polycyclic aromatic hydrocarbons based on a new benzoa.pyrene immunogen // Fresenius J. Anal. Chem. 2001. V. 371. p. 578-585.

258. Szekacs A., Le H.M., Knopp D., Niessner R. A modified enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for polyaromatic hydrocarbons // Anal. Chim. Acta 1999. V. 399. p. 127-134.

259. Li K., Woodward L.A., Karu A.E., Li Q.X. Immunochemical detection of polycyclic aromatic hydrocarbons and 1-hydroxypyrene in water and sediment samples // Anal. Chim. Acta 2000. V. 419. p. 1-8.

260. Matschulat D., Deng A., Niessner R., Knopp D. Development of a highly sensitive monoclonal antibody based ELISA for detection of benzoa.pyrene in potable water // Analyst 2005. V. 130, N 7. p. 1078-1086.

261. Kramer P.M. A strategy to validate immunoassay test kits for TNT and PAHs as a field screening method for contaminated sites in Germany // Anal. Chim. Acta 1998. V. 376. p. 311.

262. Nording M., Freeh K., Persson Y., Forsman M., Haglund P. On the semi-quantification of polycyclic aromatic hydrocarbons in contaminated soil by an enzyme-linked immunosorbent assay kit // Anal. Chim. Acta 2006. V. 555. p. 107-113.

263. Nording M., Haglund P. Evaluation of the structure/cross-reactivity relationship of polycyclic aromatic compounds using an enzyme-linked immunosorbent assay kit // Anal. Chim. Acta 2003. V. 487. p. 43-50.

264. Barcelo D., Oubina A., Salau J.S., Perez S. Determination of PAHs in river water samples by ELISA // Anal. Chim. Acta 1998. V. 376. p. 49-53.

265. Kim I.S., Ritchie L., Setford S., Taylor J., Allen M., Wilson G., Heywood R., Pahlavanpour В., Saini S. Quantitative immunoassay for determining polyaromatic hydrocarbons in electrical insulating oils // Anal. Chim. Acta 2001. V. 450, N 1. p. 13-25.

266. Fritcher, D.L., Mazet, J.A.K., Ziccardi M.H. and Gardner I.A. Evaluation of two direct immunoassays for rapid detection of petroleum products on marine birds // Marine Pollut. Bull. 2002. V. 44. p. 388-395.

267. Rubio S., Perez-Bendito D. Supramolecular assemblies for extracting organic compounds // Trends in Anal. Chem. 2003. V. 22, N 7-8. p. 470 485.

268. Carabias-Martinez R., Rodnguez-Gonzalo E., Dominguez-Alvarez J., Garcia Pinto C., Hernandez-Mendez J. Prediction of the behaviour of organic pollutants using cloud point extraction // Journal of Chromatogr. A 2003. V. 1005, N 1. p. 23-34.

269. Delgado В., Pino V., Ayala J.H., Gonzalez V., Afonso A.M. Coupling micelle-mediated extraction using mixtures of surfactants and fluorescence measurements with a fiber-optic for the screening of PAHs in seawater // Analyst 2005. V. 130. p. 571-577.

270. Rukhadze M.D., Tsagareli S.K., Sidamonidze N.S., Meyer V.R. Cloud-point extraction for the determination of the free fraction of antiepileptic drugs in blood plasma and saliva // Anal. Biochem. 2000. V. 287. p. 279-283.

271. Sanz-Medel A., Fernandez de la Campa M.R., Blanco Gonzalez E., Fernandez-Sanchez M.L. // Spectrochim. Acta В 1999. V. 54, N 2. p. 251-287.

272. Purkait M.K., Baneijee S., Mewara S., DasGupta S., De S. Cloud point extraction of toxic eosin dye using Triton X-100 as nonionic surfactant // Water Research 2005. V. 39, N 16. p. 3885-3890.

273. Jin X., Zhu M., Conte E.D. Surfactant-mediated extraction technique using alkyltrimethylammonium surfactants: extraction of selected chlorophenols from river water // Anal. Chem. 1999. V. 71, N 2. p. 514-517.

274. Crick E.W., Conte E.D. Alkyltrimethylammonium surfactant-mediated extractions: characterization of surfactant-rich and aqueous layers, and extraction performance // J. Chromatogr. A 2000. V. 877, N 1-2. p. 87-93.

275. Tong A., Dong J.-J., Li L.-D. Aqueous two-phase extraction system of sodium perfluorooctanoate and dodecyltriethylammonium bromide mixture and its application to porphyrins and dyes //Anal. Chim. Acta 1999. V. 390, N 1-3. p. 125-131.

276. Tong A., Wu Y., Tan Sh., Li L.-D., Akama Y., Tanaka Sh. Aqueous two-phase system of cationic and anionic surfactant mixture and its application to the extraction of porphyrins and metalloporphyrins // Anal. Chim. Acta 1999. V. 369, N 1-2. p. 11-16.

277. Sicilia D., Rubio S., Perez-Bendito D. Evaluation of the factors affecting extraction of organic compounds based on the acid-induced phase cloud point approach // Anal. Chim. Acta 2002. V. 460, N1. p. 13-22.

278. Merino F., Rubio S., Perez-Bendito D. Acid-induced cloud point extraction and preconcentration of polycyclic aromatic hydrocarbons from environmental solid samples // J. Chromatogr. A 2002. V. 962, N 1-2. p. 1-8.

279. Watanabe H., Tanaka H. A non-ionic surfactant as a new solvent for liquid—liquid extraction of zinc(II) with l-(2-pyridylazo)-2-naphthol // Talanta 1978. V. 25, N 10. p. 585589.

280. Bordier C. Phase separation of integral membrane proteins in Triton X-114 solution // J. Biol. Chem. 1981. V. 256. p. 1604-1607.

281. Hinze W.L., Pramauro E. A critical review of surfactant-mediated phase separations (cloud-point extractions): theory and applications // CRC Crit. Rev. Anal. Chem. 1993 V. 24. p. 133-177.

282. Piycek J., Ciganek M., Simek Z. Development of an analytical method for polycyclic aromatic hydrocarbons and their derivatives // J. Chromatogr. A 2004. V. 1030, N 1-2. p. 103-107.

283. Назаркина С.Г., Буланова A.B., Ларионов О.Г. Твердофазная. экстракция полиароматическх углеводородов с использованием полимерных сорбентов // Журн. Анал. Химии 2001. Т. 56, N 4. р. 394-397.

284. Рорр P., Bauer С. Wennrich L. Application of stir bar sorptive extraction in combination with column liquid chromatography for the determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in water samples // Anal. Chim. Acta, 2001 Vol. 436, N 1. P. 1-9.

285. Garcia-Falcon M.S., Cancho-Grande В., Simal-Gandara J. Minimal clean-up and rapid determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in instant coffee // Food Chemistry, 2005. V. 90, N 4. p. 643-647.

286. Knopp D., Seifert M., Vaananen V., Niessner R. Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in contaminated water and soil samples with immunological and chromatographic methods // Environ. Sci. and Technol. 2000. V. 34, N 10. p. 2035-2041.

287. Fedotov P.S., Bauer Coretta, Popp P., Wennrich R. Dynamic extraction in rotating coiled columns, a new approach to direct recovery of polycyclic aromatic hydrocarbons from soils // J. Chromatogr. A 2004. V. 1023, N 2. p. 305-309.

288. Sosa Ferrera Z., Padron Sanz C., Mahugo Santana C., Santana Rodriguez J.J. The use of micellar systems in the extraction and pre-concentration of organic pollutants in environmental samples // Trends in Anal. Chem. 2004. V. 23, N 7. p. 469-479.

289. Whitcomb J.L., Bystol A.J., Campiglia A.D. Time-resolved laser-induced fluorimetry for screening polycylic aromatic hydrocarbons on solid-phase extraction membranes // Anal. Chim. Acta 2002. V. 464, p. 261-272.

290. Marlow M., Hurtubise R.J. Liquid-liquid-liquid microextraction for the enrichment of polycyclic aromatic hydrocarbon metabolites investigated with fluorescence spectroscopy and capillary electrophoresis // Anal. Chim. Acta 2004. V. 526, N 1. p. 41—49.

291. Casero I., Sicilia D., Rubio S., Perez-Bendito D. An Acid-Induced Phase Cloud Point Separation Approach Using Anionic Surfactants for the Extraction and Preconcentration of Organic Compounds //Anal. Chem. 1999. V. 71, N 20. P. 4519-4526.

292. Capek I. Fate of excited probes in micellar systems // Adv. Colloid Interface Sci. 2002. V. 97, N1-3. p. 89-147.

293. Dong. D.C., Winnik M.A. The Py scale of solvent polarity. Solvent effects on the vibronic fine structure of pyrene fluorescence and empirical correlations with Et and Y values // Photochem. Photobiol. 1982. V. 35. p. 17-21.

294. Verschueren K. Handbook of Environmental data on organic chemicals, 4lh edn., Wiley, New York, 2001.

295. Yansheng W., Weijun J., Rohua Z., Changsong L., Sushe Z. Determination of the pesticide carbaryl by chemical deoxygenation micellar-stabilized room temperature phosphorescence //Talanta 1994. V. 41, N. 10. p. 1617-1621.

296. Long-Di L., Wen-Qing L., Ai-Jun T. Eserine and other tertiary amine interactions with Torpedo acetylcholine receptor postsynaptic membrane vesicles // Spectrochim. Acta A: Mol. Biomol. Spectrosc. 2001. V. 5, N 6. p. 1261 1270.

297. Madichie C., Greenway G.M., McCreddy T. On the intramicellar fluorescence quenching rate constant in cylindrical micelles // Anal. Chim. Acta 1999. V. 392, N 1. p. 39-46.

298. Aislabie J., Balks M., Astori N., Stevenson G., Symons R. Polycyclic aromatic hydrocarbons in fuel-oil contaminated soils, Antarctica // Chemosphere. 1999. V. 39. p. .2201-2207.

299. Ma L.L., Chu S.G., Wang X.T. , Cheng H.X., Liu X.F., Xu X.B. Polycyclic aromatic hydrocarbons in the surface soils from outskirts of Beijing, China // Chemosphere. 2005. V. 58. p. 1355-1363.

300. Nadal M., Schuhmacher M., Domingo J.L. Levels of PAHs in soil and vegetation samples from Tarragona County, Spain // Environ. Pollut. 2004. Vol.132. P. 1-11.

301. Chun C.L., Lee J.-J., Park J.-W. Solubilization of PAH mixtures by three different anionic surfactants // Environ. Pollut. 2002. V. 118, N 3. P.307-313.

302. Химия нефти и нефтехимические синтезы. Сб. статей под ред. Сарбаева Г.Г. Алма-Ата: "Наука", 1970,274 с.

303. Инструкция по определению и возмещению вреда (ущерба), причиненного в результате деградации, загрязнения и захламления земель. Госкомитет РФ по охране окружающей среды. Госкомитет РФ по ресурсам и землеустройству. М.: 1998, С. 35.

304. Майстренко В.Н. Эколого-аналитический мониторинг суперэкотоксикантов / Майстренко В.Н., Хамитов Р.З., Будников Т.К. М.: Химия. 1996. 319с.

305. Clement R., Yang P. Koester С. Environmental analysis // Anal. Chem. 1999. V. 71. p. 257R-292R.

306. Chang M.-C., Huang C.-R., Shu H.-Y. Effects of surfactants on extraction of phenanthrene in spiked sand // Chemosphere. 2000. V. 41. p. 1295-1300.

307. Kipopoulou A.M., Manoli E., Samara C. Bioconcentration of polycyclic aromatic hydrocarbons in vegetables grown in an industrial area // Environ. Pollut. 1999. V. 106. p. 369-380.

308. Binet P., Portal J.M., Leyval C. Fate of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) in the rhizosphere and mycorrhizosphere of ryegrass // Plant and soil. 2000. V. 227. p. 207-213.

309. Linhardt В., Hoist H., Christensen Т.Н. Comparison of Soxhlet and shakeextraction of polycyclic aromatic hydrocarbons from coal tar polluted soilssamploed in the field // J. Environ. Anal. Chem. 1994. V. 57, N. 1. p. 9-19.

310. Marvin C.H., Allan L., McCarry B.E. A comparison of ultrasonic extraction and Soxhlet extraction of polycyclic aromatic hydrocarbons from sediments air particulate material // Int. J. Environ. Anal. Chem. 1992. V. 49, N. 4. p. 221-230.

311. Hechler U. Comparison of different extraction methods for the determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in soil / Hechler U., Fischer J., Plagemann S // Fresenius J. Anal. Chem. 1995. V. 351, N. 6. p. 591-592.

312. Шивли, Дж. Качественное и количественное определение компонентов бензина. М.: ГОСИНТИ-1960.-256 с.

313. Дерффель К. Статистика в аналитической химии. М.: Мир, 1994.267 с.

314. Mackay D., Shiu W.Y. // J. of Chem. and Eng. Data 1977. V. 22, N 4. p. 399.

315. European Commission. 2002. Commission Regulation 472/2002 of 12 March 2002 amending Regulation (EC) N. 466/2001 setting maximum levels for certain contaminants in foodstuffs. Official Journal of the European Communities L75:18-20.

316. European Commission. 2004. Commission Regulation 683/2004 of 13 April 2004 amending Regulation (EC) No 466/2001 as regards aflatoxins and ochratoxin A in foods for infants and young children. Official Journal of the European Communities L106:3-5.

317. European Commission. 2005. Commission Regulation 123/2005 of 26 January 2005 amending Regulation (EC) N. 466/2001 as regards ochratoxin A. Official Journal of the European Communities L25:3-5.

318. Entwisle A.C., Williams A.C., Mann P.J., Slack P.T., Gilbert J. Liquid chromatographic method with immunoaffinity column cleanup for determination of ochratoxin A in barley: collaborative study // JAOAC Int. 2000. V. 83, N 6. p. 1377-1383.

319. Araguas C., Gonzalez-Penas E., Lopez de Cerain A. Study on ochratoxin A in cereal-derived products from Spain // Food Chem. 2005. V. 92, N 3. p. 459-464.

320. Iamanaka B.T., Taniwaki M.H., Menezes H.C., Vicente E., Fungaro M.H.P. Incidence of toxigenic fungi and ochratoxin A in dried fruits sold in Brazil // Food Addit. Contam. 2005. V.22,N 12. p. 1258-1263

321. Meyvaci K.B., Altindsli A., Aksoy U., Eltem R., Turgut H., Arasiler Z., Kartal N. Ochratoxin A in sultanas from Turkey I: Survey of unprocessed sultanas from vineyards and packing-houses // Food Addit. Contam. 2005. V. 22, N 11. p. 1138-1143.

322. Brera C., Grossi S., Miraglia M. Interlaboratory study for ochratoxin A determination in cocoa powder samples // J. Liq. Chromatogr. Rel. Technol. 2005. V. 28, N 1. p. 35-61.

323. Amezqueta S., Gonzalez-Penas E., Murillo M., Lopez de Cerain A. Validation of a high-performance liquid chromatography analytical method for ochratoxin A quantification in cocoa beans // Food Addit. Contam. 2004. V. 21, N 11. p. 1096-106.

324. Bonvehi J.S. Occurrence of ochratoxin A in cocoa products and chocolate // J. Agric. Food Chem. 2004. V. 52, N 20. p. 6347-6352.

325. Fazekas В., Tar A., Kovacs M., Aflatoxin and ochratoxin A content of spices in Hungary // Food Addit. Contam. 2005. V. 22, N 9. p. 856-863.

326. Nesheim S., Stack M.E., Trucksess R.M., Eppley J. Rapid solvent-efficient method for liquid chromatographic determination of ochratoxin A in corn, barley," and kidney: collaborative study // JAOAC Int. 1992. V. 75, N 2. p. 481-488.

327. Larsson K., Moller T. Liquid chromatographic determination of ochratoxin A in barley, wheat bran, and rye by the AOAC/IUPAC/NMKL method: NMKL collaborative study // JAOAC Int. 1996. V. 79, N 5. p. 1102-1105.

328. Belli N., Marin S., Sanchis V., Ramos A.J. Review: Ochratoxin A (OTA) in wines, musts and grape juices: Occurrence, regulations and methods of analysis // Food Sci. Technol. Int. 2002. V. 8, N 6. p. 325-335.

329. Blesa J., Soriano J.M., Molto J.C., Manes J. Concentration of ochratoxin A in wines from supermarkets and stores of Valencian Community (Spain) // J. Chromatogr. A 2004. V. 1054, N1-2. p. 397-401.

330. Shephard G.S., Fabiani A., Stockenstrom S., Mshicileli N., Sewram V. Quantitation of Ochratoxin A in South African wines // J. Agric. Food Chem. 2003. V. 51, N 1. p. 1102-1106.

331. Papachristou A., Markaki P. Determination of ochratoxin A in virgin olive oils of Greek origin by immunoaffinity column clean-up and high-performance liquid chromatography // Food Addit. Contam. 2004. V. 21, N 1. p. 85-92.

332. Visconti A., Pascale M., Centonze G. Determination of ochratoxin A in domestic and imported beers in Italy by immunoaffinity clean-up and liquid chromatography // J. Chromatogr. A 2000. V. 888. N 1-2. p. 321-326.

333. Wiecki L.C., Wiczynska G., Kwiecien A., Ochratoxin A: an improvement clean-up and HPLC method used to investigate wine and grape juice on the Polish market // Food Addit. Contam. 2005. V. 22, N 2. p. 158-162.

334. Rosazy C.A.R., Magnolix C.E., Fragay M.E., Dalcerox A.M., Santanaz D.M.N. Occurrence of ochratoxin A in wine and grape juice marketed in Rio de Janeiro, Brazil // Food Addit. Contam. 2004. V. 21, N 4. p. 358-364.

335. Berente В., Moricz A., H.-Otta K., Zaray G., Leko L., Racz L. Determination of ochratoxin A in Hungarian wines // Microchem. J. 2005. V. 79, N 1. p. 103-107.

336. Aresta A., Palmisano F., Vatinno R., Zambonin C.G. //J. Agric. Food Chem. 2006. V. 54. p. 1594.

337. Lindenmeier M., Schieberle P., Rychlik M. Quantification of ochratoxin A in foods by a stable isotope dilution assay using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry // J. Chromatogr. A 2004. V. 1023, N 1. p. 57-66.

338. Sorensen L.K., Elbask Т.Н. Determination of mycotoxins in bovine milk by liquid chromatography tandem mass spectrometry // J. Chromatogr. В 2005. V. 820, N 2. p. 183196.

339. Kokkonen M., Jestoi M., Rizzo A. Determination of selected mycotoxins in mould cheeses with liquid chromatography coupled to tandem with mass spectrometry // Food Addit. Contam. 2005. V. 22, N 5. p. 449-456.

340. Yu F., Chi Т., Liu В., Su C. Development of a sensitive enzyme-linked immunosorbent assay for the determination of ochratoxin A // J. Agric. Food Chem. 2005. V. 53, N 17. p. 6947-6953.

341. Matrella R., Monaci L., Milillo M.A., Palmisano F., Tantillo M.G., Ochratoxin A determination in paired kidneys and muscle samples from swines slaughtered in southern Italy // Food Control 2006. V. 17, N 2. p. 114-117.

342. Alarcon S.H., Micheli L., Palleschi G., Compagnone D. Development of an electrochemical immunosensor for ochratoxin A // Anal. Lett. 2004. V. 37, N 8. p. 1545-1558.

343. Shim W.B., Kolosova A.Y., Kim Y.J., Yang Z.Y., Park S.J., Eremin S.A., Lee I.S., Chung D.H. Fluorescence polarization immunoassay based on a monoclonal antibody for the detection of ochratoxin A // Int. J. Food Sci. Tech. 2004. V. 39, N 8. p. 829-837.

344. Ngundi M.M., Shriver-Lake L.C., Moore M.H., Lassman M.E., Ligler F.S., Taitt C.R., Array biosensor for detection of ochratoxin A in cereals and beverages // Anal. Chem. 2005. V. 77, N l.p. 148-154.

345. Santos E.A., Vargas E.A. Immunoaffnity column clean-up and thin layer chromatography for determination of ochratoxin A in green coffee // Food Addit. Contam. 2002. V. 19, N 5. p. 447-458.

346. Pittet A., Royer D. Rapid, low cost thin-layer chromatographic screening method for the detection of ochratoxin A in green coffee at a control level of 10 ng/kg // J. Agric. Food Chem 2002. V. 50, N 2. p. 243-247.

347. Ventura M., Anaya I., Broto-Puig F., Agut M., Cornelias L. Two-dimensional thin-layer chromatographic method for the analysis of ochratoxin A in green coffee // J. Food Protect. 2005. V. 68, N9. p. 1920-1922.

348. Danks C., Ostoja-Starzewska S., Flint J., Banks J.N. The development of a lateral flow device for the discrimination of OTA producing and non-producing fungi // Aspects Appl. Biol. 2003. V. 68, N1. p. 21-28.

349. Cho Y.J., Lee D.H., Kim D.O., Min W.K., Bong K.T., Lee G.G., Seo, J.H. Production of a monoclonal antibody against ochratoxin A and its application to immunochromatographic assay // J. Agric. Food Chem. 2005. V. 53, N 22. p. 8447-8451.

350. De Saeger S., Van Peteghem C. Flow-through membrane-based enzyme immunoassay for rapid detection of ochratoxin A in wheat // J. Food Protect. 1999. V. 62, N 1. p. 65-69.

351. De Saeger S., Sibanda L., Desmet A., Van Peteghem C. A collaborative study to validate novel field immunoassay kits for rapid mycotoxin detection // Int. J. Food Microbiol. 2002. V. 75, N 1-2. p. 135-142.

352. Sibanda L., De Saeger S., Van Peteghem C. Device and method for detecting the presence of an analyte, International Patent Application No. PCT/EP02/01496 (2001).

353. Lobeau M., De Saeger S., Sibanda L., Barna-Vetro I., Van Peteghem C. Development of a new clean-up tandem assay column for the detection of ochratoxin A in roasted coffee // Anal. Chim. Acta 2005. V. 538, N 1-2. p. 57-61.

354. Fazekas В., Tar A., Kovacs M. Aflatoxin and ochratoxin A content of spices in Hungary // Food Addit. Contam. 2005. V. 22, N 9. p. 856-863.

355. Aboul-Enein H.Y., Kutluk O.B., Altiokka G., Tuncel M. A modified HPLC method for the determination of ochratoxin A by fluorescence detection // Biomed. Chromatogr. 2002. V. 16, N 7. p. 470-474.

356. Jorgensen K. Occurrence of ochratoxin A in commodities and processed food A review of EU occurrence data// Food Addit. Contam. Suppl. 1 2005. p. 26-30.

357. Thirumala-Devi K., Mayo M.A., Reddy G., Emmanuel K.E., Larondelle Y., Reddy D.V.R., Occurrence of ochratoxin A in black pepper, coriander, ginger and turmeric in India // Food Addit. Contam. 2001. V. 18, N 9. p. 830-835.

358. Trullols E., Ruisanchez I., Rius F.X. Validation of qualitative analytical methods // Trends in Anal. Chem. 2004. V. 23. p. 137-145.

359. Lobeau M., De Saeger S., Sibanda L., Barna-Vetro I., Van Peteghem C. Application and validation of a clean-up tandem assay column for screening ochratoxin A in cocoa powder // Food Addit. Contam. 2007. V. 24, N 4. p. 398^105.

360. Commission Decision 657/2002 of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results. Official Journal of the European Communities L 221/8 (August 17).

361. Martins M.L., Martins H.M., Bernardo F. Aflatoxins in spices marketed in Portugal // Food Addit. Contam. 2001. V. 18, N 4. p. 315-319.

362. Bircan C. The determination of aflatoxins in spices by immunoaffmity column extraction using HPLC // Intern. J. Food Sci. Technol. 2005. V. 40, N 9. p. 929-934.

363. Tabata S., Kamimura H., Ibe A., Hashimoto H., Iida M., Tamure Y., Nishima T. Aflatoxin contamination in food and foodstuffs in Tokio 1986-1990 // J. AOAC International 1993. V. 76. p.32-35.

364. Akiyama H., Goda Y., Tanaka Т., Toyoda M. Determination of aflatoxins Bl, B2, G1 and G2 in spices using a multifunctional column clean-up // J. Chromatogr. A 2001. V. 932 p. 153-157.

365. Ferreira I., Mendes E., Oliveira B. Quantification of Aflatoxins Bl, B2, Gl, and G2 in Pepper by HPLC/Fluorescence // J. Liq. Chromatogr. Rel. Technol. 2004. V. 27, N 2. p. 325334.

366. Takino M., Tanaka Т., Yamaguchi K., Nakahara T. Atmospheric pressure photo-ionization liquid chromatography/mass spectrometric determination of aflatoxins in food // Food Addit. Contain. 2004. V. 21, N 1. p. 76-84.

367. Erdogan A. The aflatoxin contamination of some pepper types sold in Turkey // Chemosphere 2004. V. 56. p. 321-325.

368. Stroka J., van Otterdijk R., Anklam E. Immunoaffinity column clean-up prior to thin-layer chromatography for the determination of aflatoxins in various food matrices // J. Chromatogr. A, 2000. V. 904 p. 251-256.

369. Reddy S.V., Kiran Mayi D., Uma Reddy M., Thirumala-Devi K., Reddy D.V.R. Aflatoxins Bl in different grades of chillies (Capsicum annum L.) in India as determined by indirect competitive ELISA // Food Addit. Contam. 2001. V. 18, N 6. p. 553-558.

370. Martins M.L., Martins H.M., Bernardo F. Aflatoxins in spices marketed in Portugal // Food Add. Contam. 2001. V. 18, N 4. p. 315-319.

371. Stanley S.M.R., Ching Foo H. Screening for basic drugs in equine urine using direct-injection differential-gradient LC-LC coupled to hybrid tandem MS/MS // J. Chromatogr. В 2006 V.836, N. 1. p. 1-14.

372. Suryawanshi S., Singh S.K., Gupta R.C. A sensitive and selective HPLC/ESI-MS/MS assay for the simultaneous quantification of 16-dehydropregnenolone and its major metabolites in rabbit plasma // J. Chromatogr. В 2006. V. 830, N 1. p. 54-63.

373. Guan F., Uboh C.E., Soma L.R., Luo Y., Rudy J., Tobin T. Detection, quantification and confirmation of anabolic steroids in equine plasma by liquid chromatography and tandem mass spectrometry // J. Chromatogr. В 2005. V. 829, N 1. p. 56-68.

374. Shao В., Zhao R., Meng J., Xue Y., Wu G., Hu J., Tu X. Simultaneous determination of residual hormonal chemicals in meat, kidney, liver tissues and milk by liquid chromatography-tandem mass spectrometry // Anal. Chim. Acta 2005. V. 548, N 1. p.41-50.

375. Cong L. Huang В., Chen Q., Lu В., Zhang J., Ren Y. Determination of trace amount of microcystins in water samples using liquid chromatography coupled with triple quadrupole mass spectrometry // Anal. Chim. Acta 2006. V. 569, N 1. p. 157-168.

376. Biagini R.E., Murphy D.M., Sammons D.L., Smith J.P., Striley C.A., MacKenzie B.A. Development of multiplexed fluorescence microbead covalent assays (FMCAs) for pesticide biomonitoring // Bull. Env. Contam. Toxicol. 2002. V. 68. p.470-477.

377. Samsonova J.V., Rubtsova M.Y., Kiseleva A.V., Ezhov A.A., Egorov A.M. Chemiluminescent multiassay of pesticides with horseradish peroxidase as a label // Biosens. Bioelectron. 1999. V. 14. p.273-281.

378. Rubtsova M.Y., Samsonova J.V., Egorov A.M., Schmid R.D. Simultaneous determination of several pesticides with chemiluminescent immunoassay on a multi-spot membrane strip // Food Agric. Immunol. 1998. V. 10. p. 223-235.

379. Gonzalez-Martinez M.A., Puchades R., Maquieira A. Comparison of multianalyte immunosensor formats for on-line determination of organic compounds. Anal. Chem. 2001. V. 73. p.4326-4332.

380. Colbert D.L., Childerstone M. Multiple drugs of abuse in urine detected with a single reagent and fluorescence polarization // Clin. Chem. 1987. V. 33. p. 1921-1923.

381. Caslavska J., Allemann D., Thormann W. Analysis of urinary drugs of abuse by a multianalyte capillary electrophoretic immunoassay // J. Chromatogr. A 1999. V. 838. p. 197211.

382. Kokkonen M., Jestoi M., Rizzo A. Determination of selected mycotoxins in mould cheeses with liquid chromatography coupled to tandem with mass spectrometry // Food Addit. Contam. 2005. V. 22. p.449^56.

383. Sagawa N., Takino Т., Kurogochi S. A simple method with liquid chromatography/tandem mass spectrometry for the determination of the six trichothecene mycotoxins in rice medium // Bioscience biotechnol. biochem. 2006. V. 70. p.230-236.

384. Takeda Y., Isohata E., Amano R., Uchiyama M. Simultaneous extraction and fractionation and thin layer chromatographic determination of 14 mycotoxins in grains // J Assoc Off Anal Chem 1979. V. 62. p. 573-578.

385. Gertz C., Boschemeyer L. A screening method for the determination of various mycotoxins in food. Z. Lebensm Unters Forsch. 1980. V. 171, N 5. p.335-40.

386. Van der Gaag В., Spath S., Dietrich H., Stigter E., Boonzaaijer G., Van Osenbruggen Т., Koopal K. Biosensors and multiple mycotoxin analysis // Food Control 2003. V. 14. p. 251254.

387. Sapsford K.E., Ngundi M.M., Moore M.H., Lassman M.E., Shriver-Lake L.C., Taitt C.R., Ligler F.S. Rapid detection of foodborne contaminants using an Array Biosensor // Sensors and Actuators В 2006. V. 113. p.599-607.

388. Schneider E., Usleber E., Martlbauer E., Dietrich R., Terplan G. Multimycotoxin dipstick enzyme immunoassay applied to wheat. Food Addit. Contam. 1995. V. 12. p.387-393.

389. Schneider E., Curtui V., Seidler C., Dietrich R, Usleber E., Martlbauer E. Rapid methods for deoxynivalenol and other trichothecenes // Toxicol. Lett. 2004. V. 153. p. 113-121.

390. Abouzied M.M., Pestka J.J. Simultaneous screening of fumonisin Bi, aflatoxin B., and zearalenone by line immunoblot: a computer-assisted multianalyte assay system // Journal AOAC International 1994. V. 77, N 2. p. 495-501.

391. Pestka J.J. High-performance thin-layer chromatography ELISAGRAM application of a multi-hapten immunoassay tp analysis of the zearalenone and aflatoxin mycotoxin families // J. Immunol. Methods 1991. V. 136. p. 177-183.