Микроэмульсионное инкапсулирование биологически активных веществ тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.11 ВАК РФ

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР "МИКРО- И НАНОКАПСУЛИРОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ-АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ".

2.1. МИКРОКАПСУЛИРОВАННЫЕ КОМПОЗИЦИИ В КОСМЕТИКЕ И ФАРМАЦЕВТИКЕ

2.2. СОЛЮБИЛИЗАЦИЯ И МИКРОЭМУЛЬГИРОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ.

2.2.1. Мицеллобразование и солюбилизация биоактивных веществ в неводных растворах ПАВ.

2.2.2. Получение и свойства микроэмульсий, содержащих белковые соединения.

2.2.3. Состояние белков в мицеллярных и микроэмульсионных системах.

2.3. ПОВЫШЕНИЕ БИОАДГЕЗИИ МИКРОКАПСУЛ

2.4. НАНОКАПСУЛИРОВАННЫЕ БЕЛКОВЫЕ СИСТЕМЫ. ЭЛЕМЕНТЫ НАНОТЕХНОЛОГИИ ОРГАНИЗОВАННЫХ БЕЛКОВЫХ СИСТЕМ

2.5. ВЫВОДЫ ПО ЛИТЕРАТУРНОМУ ОБЗОРУ

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1. ХАРАКТЕРИСТИКА ИСХОДНЫХ ВЕЩЕСТВ

3.2. МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.2.1. Методика фазовых исследований.

3.2.2. Методика микроэмульсионного инкапсулирования.

3.2.3. Методика фазовых исследований с использованием спектрофотометрического титрования.

3.2.4. Фотон - корреляционная спектроскопия.

3.2.5. Методика кондуктометрических исследований.

3.2.6. Методика электронно-микроскопических исследований.

3.2.7. Методика определения краевого угла смачивания.

3.2.8. Методика количественного определения белка.

3.3. МАТЕМАТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ЭКСПЕРИМЕНТА

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТА И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. АГРЕГАТИВНАЯ УСТОЙЧИВОСТЬ И СВОЙСТВА МИКРОЭМУЛЬСИЙ, СОДЕРЖАЩИХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА.

4.2. МИКРОЭМУЛЬСИОННОЕ ИНКАПСУЛИРОВАНИЕ БЕЛКОВ В ОБОЛОЧКУ ИЗ

БИОДЕГРАДИРУЕМЫХ ПОЛИМЕРОВ

4.3. ИЗУЧЕНИЕ ПЕРЕНОСА АЛЬБУМИНА ЧЕРЕЗ ПОЛИМЕРНУЮ ОБОЛОЧКУ

4.4. ПОВЫШЕНИЕ БИОСОВМЕСТИМОСТИ МИКРОКАПСУЛ ПРИРОДНЫМИ ПОЛИМЕРАМИ

5. ВЫВОДЫ:.

Актуальность. Микро - и нанокапсулирование биологически активных веществ (БАВ) - одно из наиболее интенсивно развивающихся направлений в технологии лекарственных и косметических средств. Традиционные методы микрокапсулирования позволяют получить полидисперсные частицы с размерами более 2 мкм. Использование микроэмульсий (лиофильных, монодисперсных систем) в технологии инкапсулирования БАВ позволило бы обеспечить их парентеральное (инъекционное) введение и импульсный режим высвобождения в организме. К сожалению, сведения о применении микроэмульсий для инкапсулирования БАВ немногочисленны и отрывочны.

Микроэмульсионное инкапсулирование — новый способ получения микрокапсулированных систем путем формирования оболочки на поверхности капель микроэмульсии. Закономерности возникновения микроэмульсионной фазы, формирования полимерной оболочки и выделения полученных микрокапсул предоставляют научную основу технологии микроэмульсионного инкапсулирования биологически активных веществ.

Закономерности межфазных явлений в микроэмульсионных системах, содержащих биологически активные вещества, водорастворимые полимеры или их комплексы позволяют расширить представления об образовании и устойчивости лиофильных дисперсных систем.

Микрокапсулы с оболочкой из биодеградируемых полимеров (поликапролактон, лактид-гликолид сополимеры и другие) применяют для получения фармацевтических форм. Однако они гидрофобны и имеют низкую совместимость с биологическими тканями (биосовместимость), а в микрокапсул иро ванных системах проблема повышения биосовместимости становится одной из основных. Разработка путей регулирования поверхностных свойств микрокапсул является важным в плане развития теоретических подходов о биодоступности биологически активных веществ.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с координационным планом РАН по коллоидной химии и физико - химической механике, планом научно-исследовательских работ РХТУ им. Д.И. Менделеева, и в рамках государственного заказа Министерства обороны РФ по договорам №ИК 8.14-234-2001 и №ИК 17.3-6-02. Цель работы. Установление закономерностей микроэмульгирования белков (выбранных в качестве модели БАВ), получения микрокапсул, покрытых оболочкой из биодеградируемых полимеров и разработка основ технологии микроэмульсионного инкапсулирования биологически активных веществ. Для достижения цели работы необходимо решить следующие задачи.

- выявить области существования микроэмульсий типа вода/масло, содержащих белки;

- установить оптимальные условия формирования оболочки биодеградируемых полимеров на поверхности капель микроэмульсий, содержащих белок;

- разработать способы регулирования биосовместимости микрокапсул, покрытых оболочкой из биодеградируемых полимеров;

- установить влияние условий микроэмульсионного инкапсулирования на параметры дисперсности полученных частиц;

- рассмотреть методы регулирования поверхностных свойств и химической устойчивости микрокапсул.

Научная новизна. Разработан новый способ получения микрокапсулированных систем. Комплекс полученных в работе данных и закономерностей предоставляет основу для научного обоснования метода микроэмульсионного инкапсулирования биологически активных веществ. выявлены области существования микроэмульсий обратного типа, содержащих белки. Показано, что в присутствии белков и водорастворимых полимеров фазовые границы микроэмульсий смещаются в область более низких температур. Образование полиэлектролитных комплексов не оказывает значительного влияния на область существования микроэмульсии;

- показано, что формирование оболочки биодеградируемого полимера на поверхности микроэмульсионных капель, содержащих белок, водорастворимый полимер или полиэлектролитный комплекс не зависит от состава водного ядра микрокапсул;

- установлено, что параметры дисперсности частиц при микроэмульсионном инкапсулировании значительно определяются свойствами микроэмульсии и/или условиями формирования оболочки биодеградируемого полимера;

- выявлены закономерности модифицирования поверхности микрокапсул водорастворимыми полимерами, что предоставляет возможность регулировать биодоступность биологически активных веществ или химическую стойкость частиц.

Практическая ценность. Комплекс полученных в работе данных и закономерностей предоставляет основу новой технологии производства практически монодисперсных частиц субмикронного диапазона с улучшенными поверхностными свойствами различного состава для фармацевтической, косметической и других отраслей промышленности.

Разработана методика микроэмульсионного инкапсулирования биологически активных веществ при пониженных температурах, что обеспечивает сохранность биологической активности лабильных, химически нестойких веществ.

Разработаны методики поверхностного модифицирования микрокапсул, полученных методом микроэмульсионного инкапсулирования, что позволяет регулировать биодоступность биологически активных веществ и химическую стойкость микросфер.

Все методики испытаны в Вирусологическом Центре НИИ Микробиологии Министерства Обороны Российской Федерации.

Апробация работы и публикации. Основные результаты работы опубликованы в 10 печатных работах, доложены на научной сессии МИФИ (Москва, 2002), XV Международной конференции молодых ученых по химии и химической технологии "МКХТ-2001" (Москва, 2001), международных симпозиумах "Arts Separatoria" к 7

Poland, 2001, 2002), "Молекулярный дизайн и синтез супрамолекулярных архитектур" (Казань, 2002), "ECIS-2002" (Париж, 2002), XIV международной конференции по химической термодинамике (Санкт-Петербург, 2002) и на семинаре в Институте кристаллографии РАН.

5. ВЫВОДЫ:

1. Разработана технология микроэмульсионного инкапсулирования биологически активных веществ биодеградируемыми полиэфирами и получения биосовместимых и кислотостойких микрокапсул.

2. Определены области существования микроэмульсий вода/АОТ/углеводород в зависимости от температуры, природы органической фазы, добавок гидрофильных биоактивных соединений и состава водной фазы. Найдены оптимальные концентрационные интервалы компонентов микроэмульсии [АОТ] = 1,5-3 % мае., [белок] ~ 0,5-0,7 % мае. и условия инкапсулирования w0 = 30-80, температура 10-30 °С.

3. Установлены закономерности изменения размеров микрокапсул при варьировании мольного соотношения воды и ПАВ, и концентрации биодеградируемого лактид-гликолид сополимера. Концентрация полимера и w0 свыше оптимальных приводят к увеличению размеров образующихся частиц вследствие их агрегации. При инкапсулировании концентрация полимера в исходном растворе должна быть меньше 0,1% мае., a wG не более 50. Методом электронной микроскопии охарактеризовано влияние состава и характеристик микроэмульсии, условий фазового разделения (осаждения) полимера на дисперсность и форму микрокапсул, их агрегативное поведение в условиях испарения растворителя. Найденные закономерности являются основой для получения микрокапсул с регулируемой дисперсностью.

4. Обнаружено, что агрегативная устойчивость микрокапсул существенно зависит от природы растворителя ПЛГА, что обусловлено изменением состава ближней сольватной сферы микрокапсул.

5. Выявлены особенности комплексообразования желатины и анионного полиэлектролита (каррагинана). Найденное оптимальное соотношение каррагинана к желатине составляет 0,006 (мае.). Рассмотрены особенности образования полиэлектролитного комплекса от рН и соотношения полиэлектролитов. Установлены условия существования и параметры дисперсности микроэмульсий, содержащих изученные полиэлектролиты или их комплексы.

6. Совокупность данных о смачивании водой пленок лактид-гликолидного сополимера, желатины и их смешанных слоев свидетельствует о повышении биосовместимости микрокапсулированных частиц.

7. Полученные данные и установленные закономерности использованы при разработке методик получения микрокапсул с биоадгезивным покрытием и устойчивых к кислотной среде желудка.

1. Солодовник В.Д. Микрокапсулирование- М.: Химия, 1980,- 215с

2. Афанасьев А.Г. Микрокапсулирование и некоторые области его применения,- М.: Знание серия Химия, 3/1982,- 64с.

3. Muller R., Hildebrand G. (Ed.). Pharmazeutische technologie, Moderne Arzneiformen, WVG Stuttgart, 2, Ed. 1998.

4. Schreier H., Bouwstra J. Liposomes and niosomes as topical drug carriers // J. Control. Release.- 1994 -V.30 -P.l 15.

5. Imbert D., Wickett R. Topical delivery with liposomes // Cosmetics and Toiletries -1995.- V. 110, №9,- P.32 43.

6. Embiil K., Nacht S. The microsponges delivery system.//J. of Microencapsulation 19961. V.5.- P.575 588.

7. Loofison T. et all. Cyclodextrin drug delivery systems in dermatology // Int. J. Derm -1998 V.37.-P.241 -246.

8. Uekama K. et all. Cyclodextrin drug delivery systems // Chem. Rev 1998,- V.98-P.2045 - 2076.

9. Wehrle K., Gallagher E., Neville D P. Microencapsulated high-fat powders in bisquit production //Z.Lebensm Unters Forsch A 1999 - 208 - P.388 - 393.

10. O'Brien C.M., Gran H., Neville D P. Functionality of microencapsulated high-fat powders in wheat bread // Eur. Food Res. Technology 2000 - V.212 - P.64 - 69,

11. Bernard F. Gibbs, Selim Kermasha, Inteaz Alii, Catherine N. Mulligan. Encapsulation in the food industry: a review//J. of Microencapsulation 1999,- V.50, №3 - P.213 - 224.

12. Partanen R, Ahro M , Hakala M. et all. Microencapsulation of caraway extract in P-cyclodextrin and modified starches // Eur. Food Res. Technology 2002 - V.214 - P.242 -247.

13. Афанасьев А.Г. Прикладные и коллоидные аспекты применения микрокапсул. // Современные технологии в отрасли бытового обслуживания населения,- М.: Моск. технол. инс-та, 1991.-е. 248-264.

14. Adjuvanticity and protective immunity elicited by bordetella-pertussis antigens encapsulated in poly-(D,L)lactide-co-glycolide microspheres // Infection and immunity.-1995,- V.63, Iss 4 P.l 195 - 1200.

15. Mandal Т.К. Development of biodegradable drug delivery system to treat addiction // Drug Develop. Ind. Pharm- 1999 V.25, Iss 6 - P.773 - 779.

16. Greenway Т.Е., Eldridge J.H., Ludwig G. et all. Enhancement of protective immune-responses to Venezuelan equine encephalitis (Vee) virus with microencapsulated vaccine // Vaccine 1995,- V. 13, Iss 15 -P.l411 - 1420.

17. Ogawa Y. Injectable microcapsules prepared with biodegradable poly(a-hydroxy)acids for prolonged release of drugs // J. Biomater. Sci.-Polym. Ed 1997,- V.8.- P.391 - 409.

18. Hagan S.A., Coombes A.G.A., Garnett M.C., Dunn S.E. et all. Polylactide-Polyethylene glycol copolymers as drug delivery systems .1. Characterization of water dispersible micelle-forming systems // Langmuir.-1996,- V.12, Iss 9,- P.2153 2161.

19. Uchida Т., Shiosaki K., Nakada Y. Microencapsulation of hepatitis В core antigen for vaccine preparation // Pharm. Research 1998 - V. 15, № 11.

20. Jones D.H., McBride B.W., Farrar G.H. Polylactide-co-glicolide microencapsulation of vaccine antigens // J. of Biotechnology 1996 - V.44, №1-3 - P.29 -36.

21. Simmonnet J., Richard P., Ancilotti D., Hadjum C., Delvigne V. Encapsulation of vitamins enhances their delivery into skin. // World congree of dermatology Paris, 2002.

22. Simmonnet J., Richard P., L'Oreal, USP 591487.

23. Dodane V., Vilivalam V.D. Pharmaceutical applications of chitosan // PSTT 1998 -V.l, №6 - P.246-253.

24. Muller R, Mader K., Gohla S. Solid lipid nanoparticles (SLN).

25. Peira E., Marzola P., Podio V., Aime S., Sbarbati A., Gasco M R. In vitro and in vivo study of solid lipid nanoparticles loaded with superparamagnetic iron oxide // J. of Microencapsulation.- 2003.- V. 11, №1.- P.l9 24.

26. Bondi M. L., Fontana G., Carlisi В., Giammona G. Preparation and characterization of solid lipid nanoparticles containing cloricromene // J. of Microencapsulation.- 2003,- V. 10, №4,- P.245 250.

27. Schneider S., Feilen P., Cramer H., Hillgartner M. et all. Beneficial effects of human serum albumin on stability and functionality of alginate microcapsules fabricated in different ways // J. of Microencapsulation 2003 - V.20, №5 - P.627 - 636.

28. Strand B.L., Gaserad O., Kulseng В., Espevik Т., Skjak-Braek G. Alginate-polylysine-alginate microcapsules: effect of size reduction on capsule properties // J. of Microencapsulation 2002,- V.19, №5 - P.615 - 630.

29. Ко J.A., Park H.J., Park Y.S., Hwang S.J., Park J.B. Chitosan microparticle preparation for controlled drug release by response surface methodology // J. of Microencapsulation.-2003.-V.20, №6 P.791 - 797.

30. Kumbar S.G., Kulkarni A.R., Aminabhavi T.M. Crosslinked chitosan microspheres for encapsulation of diclofenac sodium: effect of crosslinking agent //J. of Microencapsulation.-2002,- V.19, №2 P. 173 - 180.

31. Korus J., Tomasik P., Lii C.Y. Microcapsules from starch granules // J. of Microencapsulation 2003 - V.20, №1.- P.47 - 56.

32. McGuire M R., Shasha B.S. Starch encapsulation of microbial pesticides // American Chemical Society Symposium Series 1995,- 595,- P.229-237.

33. Satturwar P.M., Mandaogade P.M., Dorle A.K. A novel method for preparation of Eudragit RL microcapsules //J. of Microencapsulation 2002 - V.19, №4 - P.407 - 413.

34. Leelarasamee N., Howard S.A., Malanga C.J., Ma J.K.H. A method for the preparation of poly lactic acid microcapsules of controlled particle size and drug loading // J. of Microencapsulation 1988 - v.5 - P. 147-157.

35. Embleton J.K., Tighe B.J. Polymers for biodegradable medical devices XI. Microencapsulation studies. characterization of hydrocortisone-loaded poly-hydroxybutyrate-hydroxyvalerate microspheres // J. of Microencapsulation 2002 - V.19, №6 - P.737 - 752.

36. Русанов А.И. Мицеллообразование в растворах поверхностно-активных веществ // С.-П.: Химия, 1992 -280с.

37. Фролов Ю.Г. Курс коллоидной химии. Поверхностные явления и дисперсные системы М. Химия, 1989 - 399с.

38. Atwood D., Florence A T. Surfactant systems: their chemistry, pharmacy and biology // Bristol, 1983.

39. Eicke H.F., Parfitt G.F. Interfacial phenomena in the apolar media // Surfactant science series -N.-Y., 1987,- V.21.-416p.

40. Микроэмульсии. Структура и динамика // Под редакцией С.Е. Фридберга и П.

41. Ботореля,- М.: Мир, 1990,- 320с.

42. Winsor P.A. Solvent propeties of amphophilic compounds // Butterworths, London, 1954.

43. Robb I D. Microemulsions //New-York. Plenum Press 1982

44. Eicke H.F.// J.Colloid Interfase Sci 1979 - V.68 - P.440.

45. Kim V., Hilfiker R., Eicke H.F. Excess adsoфtion of hydrocarbons on the oil/water interfase in НгО/АОТ/oil microemulsions in the presens of additives // J. of Colloid and Interfase Science 1988,- V.121, №2,- P.579-584.

46. Eicke H.F. Aggregation in surfactant solution: formation and properties of micelles and microemulsions // Pure & Appl. Chem- 1980, V.52 P.1349-1357.

47. Гауровиц Ф. Химия и функции белков,- М.: Мир, 1965.

48. Измайлова В Н., Ямпольская Г.П., Сумм Б Д. Поверхностные явления в белковых системах.-М.: Химия 1988,-240с.

49. Уайт А., Хендлер Ф. и др. Основы биохимии М.: Мир, 1981, Т. 1, Т.З.- 1700с.

50. Мадюскина JI.JI., Полищук А.Я., Заиков Г.Е. Биоразлагаемые полимеры и их применение в современной медицине //Пластические массы.-1999,- №9,- С.43 — 46.

51. Paracchia M.N., Desmaele D., Couverur P., d'Angelo J. Sinthesis of a novel poly-(MePEG cyanoacrylate со -alkyl cyanoacrylate) amphiphilic copolymer for nanoparticle technology // Macromolecules-1997 - V.30 - P.846 - 851.

52. Pean J.M., Boury F., Venier Julienne M.C. // Pharm. Research - 1999 - V.16 - P. 1294.

53. Malzert A., Boury F., Saulnier P., Benoit J. P., Proust J.E. Interfacial properties of mixed polyethylene glycol/poly (D,L lactide-co-glycolide) films at the air/water interface // Langmuir.- 2000 - V.16 - P. 1861 - 1867.

54. Jeong В., Bae Y.H., Kim S.W. Thermoreversible gelation of PEG-PLGA-PEG nriblock copolymer aqueous solution // Macromolecules 1999 - V.32 - P.7064 - 7069.

55. Nakahama K., Rfwagichi H., Fujimoto K. A novel preparation of nonsymmetrical microspheres using the Langmuir Blodgett technique // Langmuir - 2000 - V. 16 - P.78827886.

56. Wang K., Li L.S., J.L. Feng et all. // Chin. Med. J.- 1993 V.106.- P.441 - 445.

57. Si-shen Feng, Li Mu, Bing -Hung Chen, Pack D. Polymer nanospheres fabricated with natural emulsifiers for clinical administration of an anticancer drug paclitaxel // Material science and Engin 2002,- P.766 - 772.

58. Quellet С., Eicke H.F. Mutual gelation of gelatin and water in - oil microemulsions // Chimia.- 1986 - V.40.- P.233 - 238.

59. Baneijee S., Premchandran RTata M. et all. Polymer precipitation usig a micellar nonsolvent: the role of surfactant polymer Interactions and the development of a microencapsulation technique//Ind. Eng. Res - 1996 -V.35 -P.3100-3107.

60. Литвинова Т.П., Грядунова Г.П., Давигора И.В. Медицинские капсулы,- М., 1974.

61. Nam Y. S., Park Т. G. Protein loaded biodegradable microspheres based on PLGA-protein bioconjugates // J. of Microencapsulation 1999 - V. 16, №5 - P.625 - 637.

62. Freitas S., Walz A., Merkle H. P., Gander B. Solvent extraction employing a static micromixer: a simple, robust and versatile technology for the microencapsulation of proteins // J. of Microencapsulation 2003.- V. 20, №1,- P.67 - 85.

63. Katti D. Preparation of albumin microspheres by an improved process // J. of Microencapsulation -1999 V. 16, №2 - P.231 - 242.

64. Garcia J.T. Comparative degradation study of biodegradable microspheres of poly-(D,L-lactide-co-glycolide) with polyethyleneglycol derivates // J. of Microencapsulation 1999 -V.16, №1.-P.83 -94.

65. Puri N., Jones A.B., Kou J.H., Wyandt C M. Release of bovine serum albumin from preformed porous microspheres of poly-(L-lactic acid) // J. of Microencapsulation 2000 -V.17, №2,- P.207 - 214.

66. Jameela S R., Suma N. Misra A., Raghuvanshi R. Poly-(epsilon)-caprolactone microspheres as a vaccine carrier//Current Science 1996 - V.70, Iss. 7 - P.669-671.

67. Jameela S R., Suma N., Jayakrishnan A. Protein release from poly-(epsilon)-caprolactone microspheres prepared by melt encapsulation and solvent evaporationtechniques a comparative-study // J. Biomater. Sci-Polym. Ed - 1997 - V.8, Iss. 6 - P.457466.

68. Uchida Т., Goto S., Foster T P. Particle-size studies for subcutaneous delivery of poly (lactide-co-glycolide) microspheres containing ovalbumin as vaccine formulation // J. of Pharmacy and Pharmacology 1995 - V.47, Iss 7 - P.556-560.

69. Witschi C., Doelker E. Peptide degradation during preparation and in-vitro release testing of poly(L-lactic acid) and poly(D,L)-Iactic-co-gIycoIic acid microparticles // Int. J. Pharm.- 1998 -V. 171, Iss. 1-P. 1-18.

70. Zambaux M.F., Bonneaux F., Gref R., Dellacherie E., Vigneron C. Preparation and characterization of protein C-loaded PLA nanoparticles // J. Control. Release 1999 - V.60, Iss. 2-3,- P. 179-188.

71. Quellec P., Gref R., Perrin L., Dellacherie E., Sommer F., Verbavatz J.M., Alonso M.J. Protein encapsulation within PEG-coated nanospheres -1 physicochemical characterization //J. Biomed. Mater. Res - 1998 - V.42, Iss. 1,- P.45-54.

72. Tobio M.,Gref R., Sanchez A., Langer R., Alonso M.J. Stealth PLA-PEG nanoparticles as protein carriers for nasal administration // Pharm. Research 1998 - V.15, Iss 2 - P.270 -275.

73. Johansen P., Moon L., Tamber H., Merkle H P., Gander В., Sesardic D. Immunogenicity of single-dose diphtheria vaccines based on PLA/PLGA microspheres in Guinea-pigs // Vaccine 1999,- V.l 8, Iss. 3-4,- P.209 - 215.

74. Kurz M., Eichelberger В., Greinix H. et all. Platelet antibodies and fever their association in multitransfused patients with hemato-oncological diseases // Infusions Therapie -1999,- V.26, Iss. 1 -P.34 - 36.

75. Diaz R.V., Llabres M., Evora C. One-month sustained-release microspheres of 1-125 bovine calcitonin in-vitro in-vivo studies // J. Control. Release - 1999 - V.59, Iss. 1.- P.55 -62.

76. Iwata M., Tanaka Т., Nakamura Y , Mcginity J.W. Selection of the solvent system for the preparation of poly-(D,L-lactic-co-glycolic acid) microspheres containing tumor-necrosis-factor-a (TNF- a) // Int. J. Pharm.- 1998,- V.160, Iss. 2 P. 145-156.

77. Yan C.H., Rill W.L., Malli R., Hewetson J. et all. Dependence of ricin toxoid vaccine efficacy on the structure of poly-(lactide-co-glycolide) microparticle carriers // Vaccine.-1995- V.13, Iss 7,- P.645 -651.

78. Gander В., Wehrli E., Alder R., Merkle H P. Quality improvement of spray-dried, protein-loaded D,L-PLA microspheres by appropriate polymer-solvent selection // J. of Microencapsulation, v. 12, Iss. 1, 1995, pp. 83 97.

79. Thomasin С., Ho N T., Merkle H P., Gander B. Drug microencapsulation by PLA/PLGA coacervation in the light of thermodynamics 1 - overview and theoretical considerations // J. Pharm. Sci.- 1998,- V. 87, Iss. 3 - P.259 - 268.

80. Odonnell P.B., Mcginity J.W. Preparation of microspheres by the solvent evaporation technique // Advan. Drug Delivery Rev.- 1997 V. 28, Iss. 1.- P.25 - 42.

81. Okada H. One-month and 3-month release injectable microspheres of the LH-Rh superagonist leuprorelin acetate // Advan. Drug Delivery Rev 1997 - V. 28, Iss. 1- P.4370.

82. Kader A., Jalil R. Effect of physicochemical factors on the release kinetics of hydrophilic drugs from poly-(L-lactic acid) (L-PLA) pellets // Drug Develop. Ind. Pharm.-1998- V.24, Iss. 6,- P.535 539.

83. Polakovic M., Gorner Т., Gref R., Dellacherie E. Lidocaine loaded biodegradable nanospheres П modeling of drug-release // J. Control. Release - 1999 - V.60, Iss. 2-3 -P.169 - 177.

84. Готлиб Ю.Я., Даринский A.A., Светлов Ю.Е. Физическая кинетика макромолекул. Л.: Химия.-1986.-272 с.

85. Unicor SP. Technical manual М , 1997 - 38 p.

86. Crewe A.V., Wall J., Welter L.M.//J. Appl. Phys 1968,- V.39 - P.5861.

87. Лабораторные работы и задачи по коллоидной химии // Под ред. Фролова Ю Г и Гродского А.С.- М.: Химия, 1986,- 216с.

88. Практикум по технологии косметических средств: биологически активные вещества в косметике.// Под ред. Пучковой Т В. и Кима В.- М., 2004.

89. Eicke H.F., Hilfiker R., Holz M.//Helv. Chim.acta- 1984 V.67, №2.- P.361.

90. Eicke H.F., SharmaM.K. //Z. Naturforsch.- 1980,- V.35a- P. 1395.

91. Eicke H.F., Christen H.// J. Colloid Interface Science- 1974,- V.48- P.417.

92. Эскин B E. Рассеяние света растворами полимеров и свойства макромолекул Л.: Наука, 1986.

93. Eicke H.F. On the cosurfactant concept //J. Colloid and Interface Science 1979 - V.68, №3,- P.440 - 450.

94. Martchenko O.N., Kolotuhina T.A., Kim V. Microemulsion nanoencapsulation of bioactive substances // In: Proceed. 2 Intern. Symp. "Molecular design and synthesis of supramolecular architectures".- Kazan, 2002 P. 100.

95. Baras В., Benoit M. A., Gillard J. Influence of various technological parameters on the preparation of spray-dried poly(epsilon-caprolactone) microparticles containing a model antigen // J. of Microencapsulation 2000.- V. 17, №4 - P.485 - 498.

96. Sah H., Chien Y.W. Degradability and antigen-release characteristics of polyester microspheres prepared from polymer blends // J. of Appl. Polymer Science.- 1995,- V.58, Iss 1.- P. 197 206.

97. Sun S.W., Jeong Y.I., Jung S.W., Kim S.H. Characterization of FITC-albumin encapsulated poly-(D,L-lactide-co-glycolide) microspheres and its release characteristics // J. of Microencapsulation 2003 - V.20, №4,- P.479 - 488.

98. Чернышева Ю.В. Полимерные системы на основе биосовместимых полиэфиров и производных сополи(акрил)метакрилатов для микрокапсулирования биологически активных соединений // автореферат диссер. канд. хим.наук. М., 2003г.

99. Рахимбаев Ш.М., Рахимов P.M. К вопросу о закономерностях и механизме действия флокулянтов суспензий // Труды Среднеазиатского НИИ геологии и минерального сырья.- Ташкент, 1976.- №33.- С.65 67.

100. Силос И.В., Шабанова Н.А. Взаимодействие неионогенных ПАВ с анионными полиэлектролитами в водных растворах // Коллоидный журнал.- 1991,- Т.53, №1,-С.164 -167.

101. Martchenko O.N., Kolotuhina Т А., Kim V. Microemulsion nanoencapsulation of bioactive substances // Proceed. XVI Internal Symp. "Ars Separatoria 2002". Poland, Borowno, 2002,- P. 125 - 126.