Модификация тонких эмульсионных пленок альфа-химотрипсина лецитином тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.11 ВАК РФ

В в е д е н и е.

I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Эмульсионные пленки.

1*1 Д. Димшш - динамические контакты в эмульсионных пленках.

1Д.2. Физико-химические свойства углеводородных пленок.

I.I.3. Пенные и эмульсионные пленки белков

1.2. Эмульсионные пленки - модели биологических мембран.

1.2.1. Бислойные липидные мембраны (БЛМ) -основные проблемы изучения физик о-хими-ческих свойств мембран

1.2.2. Модификация БЛМ белками.

1.2.3. Функциональная роль деформаций клеточных мембран (динамическое состояние)

П. ЭКСПЕРШЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ПД. Объекты исследования

П.2. Методы исследования.

П.2Д. Микроинтерференционный метод изучения эмульсионных пленок.

П.2ДД. Димшш эмульсионных пленок.

П*2.1.2. Плоскопараллельные тонкие пленки.

П.2.2. Исследование реологических свойств межфазных слоев.

П.2.3. Оптический метод изучения межфазных адсорбционных слоев

Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Ш.1. Условия образования и вытекания эмульсионных димшгов.

Ш.2. Устойчивые эмульсионные пленки о/-хшо трипсина

Ш.2.1. Изучение стандартных условий образования.

Ш.2.2. Образование эмульсионных пленок в многокомпонентных системах. Модификация эмульсионных пленок d -химотрипсина. 86 Ш.2.3. Способы образования тонких эмульсионных шгенок.

Ш.З. Реологические свойства межфазных слоев и устойчивость эмульсионных пленок .». &

Ш.3.1. Реологические свойства межфазных слоев

-химотрипсина.

Ш.З.2. Реологические параметры модифицированных межфазных слоев cL-химотрипсина лецитином.

Исследование предельно тонких жидких пленок (обычно чер -внх) обусловило значительные успехи коллоидной химии в разви тии представлений об устойчивости дисперсных систш. Развит термодинамический аппарат,описывающий метастабильную устойчи вость и особое состояние тонких слоев (Дерягин,Шелудко). На примере свободных пленок низкомолекулярных ПАВ экспериментально исследованы основные положения теории Д1Ф0* Возможность ра боты с черными пленками значительно расширила эксперименталь ные исследования в коллоидной химии: в таких системах экспери ментально можно определить физические толщины разрыва жидкости, установить тип устойчивой пленки и попытаться решить задачу исследования механизма разрушения мета стабильных пленок.В связи с большой технологической важностью разнообраз ных эмульсионных систем изучение элементарных эмульсионных пленок представляет актуальную задачу современной коллоидной химии. Подробное изучение особенностей формирования устойчивых эмульсионных пленок моделирует, на наш взгляд, и позволяет детально исследовать целый ряд явлений, сопровождающих коагуяя цию, коалесценцию, и получать, таким образом, ценную информа цию об элементарных стадиях, определяющих устойчивость эмуль сий.Эффективность изучения тонких слоев доказана также ре зультатами большого числа работ биофизического направления, в которых решаются вопросы, касающиеся принципов функционирования биомебраны, с использованием в качестве объекта тонких или чер- 5 ных пленок липидных компонентов, йяенно благодаря таким ис следованиям были развиты представления о работе ионных каналов, о функциональной роли латеральных фазовых переходов и сформулированы новые задачи выяснения роли белков в структурных переходах лилидного бислоя, транспортных свойствах и ферментативном катализе биомембран. Действительно, отражать свойства биомембран^ может только самоорганизущаяся тонкая пленка, состоящая из белков и лшщцов (варианты модели Сингера-Никольсона). Важную задачу представляет определение условий образования устойчивых белок-лшшдЕых пленок. В то же время,как отмечалось во многих исследованиях биофизического направле ния, эта задача остается до сих пор нерешенной, так как в целом не определены физико-химические закономерности,определяющие устойчивость таких структур, хотя опубликовано некоторое число работ, описывающие приемы встраивания белка в липидннй слой* Основной задачей данного исследования явилось изучение модификации тонких эмульсионных пленок белков липидагга.Несмотря на то, что основное внимание уделялось свойствам тонких пленок, имеющих специфическое значение для кол лоидной химии, автор пытался также ввделить закономерности, существенные при моделировании биомембран* Эмульсионные пленки,моделирующие поведение эмульсий типа масло/вода исследованы недостаточно полно. Хронологически исследования относятся к началу 1970-х годов и в первую оче редь здесь можно указать на работы Вудса с соавторами - в качестве стабилизатора используются ШШВ, и исследования В.Н, - 6 Измайловой с сотр. - в качестве стабилизатора используется белок.В данной работе, как и ранее, в качестве белкового ком понента использован о^-химотрипсин. В работе были поставле ны и изучены следующие вопросы:

- 129 -ВЫВОДЫ

1. Построена диаграмма состояния тонких эмульсионных шгенок оС -химотрипсина: в зависимости от рН и концентрации бежа реализуются четыре типа устойчивых шгенок различной толщины: черные, темно-серые, серые, светло-серые,

2. Построена общая фазовая диаграмма состояния эмульсионных белок-липидных и лишщ-бежовнх пленок, моделирующих эмульсии первого и второго рода. Показано, что устойчивость белок-липидных шгенок зависит от рН водной фазы и сохраняется до соотношения белок :липвд в системе 1:4 при рН 10,0 и 25:1 при рН 6,5.

3. Впервые обнаружено возникновение димплов в эмульсион -ных пленках оС -химотрипсина, Определены константы скорости утоньшения димшгов в зависимости от состава жидких фаз (белок в воде, лецитин в бензоле) и состояния межфазных слоев. Кон -станты скорости вытекания димплов стабильных эмульсионных пле

Q о Т О нок оС -химотрипсина 10 см'с . Введение лецитина (до 10$) приводит к возрастанию константы на два порщща(10"^см^*с~^).

4. Построены реологические кривые течения и рассчитаны реологические параметры межфазных адсорбционных слоев при составах жидких фаз, соответствующих образованию устойчивых эмуль -сионных пленок d -химотрипсина (черных и темно-серых) и смешанных белок-липидных пленок (черных). Установлена корреляция реологического поведения MAC с состоянием двухсторонних пленок и особенностями вытекания димплов.

5. Межфазные адсорбционные слои оС -химотрипсина на жидкой границе водный раствор - бензол отнесены к жидкокристаллическим структурам,

6, Показана возможность формирования смешанных белок-ли -ладных ( d -химотрипсин - лецитин ) межфазных слоев,Упруго-вязкие свойства слоев сохраняются до соотношения белок^липид в системе 100:1 ( рН 6,5 ) и 1:1 ( рН 10,0 ), В узком кон •» Ч . » ч центрационном интервале липидного компонента обнаружен лате. -ральный фазовый переход межфазных слоев с лотерей упруговязких свойств.

1У. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Для образования устойчивой пленки (эмульсии) необходимо, чтобы в системе двух несмешивающихся фаз возникла третья квазидвухмерная фаза. Эта возможность определяется составом жидких фаз: необходимо, чтобы была достаточно высокая концентрация основного стабилизатора. В случае cL-химотрилсина конс. центрация больше 1,6'10 мол1/л. Ранее в работах Измайловой с сотр. /105,119/ было показано скачкообразное увеличение устойчивости эмульсий типа масло/вода при концентрациях сывороточного альбумина ~ 10""^ моль/л. Во всех случаях степень заполнения границы раздела фаз белком во много раз превышает мономолекулярную /34/. При концентрациях ьС -химотрилсина ~ КГ® моль/л регистрируемый массолеренос белка на межфазную границу типа раствор-октан или раствор-бензол составляет примерно около 10 монослоев. Время формирования слоев по изменению адсорбции и предельного напряжения сдвига при этом составляет 30 минут. Это время гораздо больше диффузионного переног*лс, iff? где Г - адсорбция белка, Со - концентрация белка в водной фазе, Ф - коэффициент диффузии. Л -химотрилсина, I0""7 омЧ-1, Т - время. Чисто диффузионный перенос осуществлялся бы за время не более 10 минут. Несовпадение времен диффу -зии и образования слоя на межфазной границе позволяет отме -тить вклад процессов, мешающих закреплению поверхностно-активного компонента на границе раздела фаз.

Можно обозначить эти вклады энергетическим барьером адсорбции. По-видимому, природа энергетического барьера мо -жет быть связана с термодинамическим стремлением контактирующих жидких фаз к взаимному насыщению с выравниванием химиче -ских потенциалов компонентов в обеих фазах. Тем более, что в случае эффективных стабилизаторов в растворе основного стабилизатора происходит процесс солюбилизации второй фазы - повышение растворимости в шщелдярно-ассоциированных или глобулярных ПАВ, Солюбилизация бензола в растворах J.-химотрипсина изучена в работах /120,121/, В связи с этим структуры ПАВ в межфазном слое должны включать компоненты обеих фаз. Таким образом, образование межфазных слоев включает диффузию всех компонентов в объемные фазы и на поверхность раздела фаз,преодо -ление энергетического барьера, причины которого могут быть в турбулизации поверхности раздела фаз вследствие массопереноса и межфазное структурообразование. Приведенное обсуждение со -гласуется с развиваемыми теоретическими представлениями /122, 123,124,125/, Межфазные слои высокомолекулярных стабилизато -ров являются квазидвухмерными пленками, обнаруживающими в зависимости от условий нагружений вязкоупругое поведение. Однотипность реологического поведения высокомолекулярных стабилизаторов неоднократно обсуждалась /105/. Совокупность результатов, полученных в данной работе, позволяет отнести MAC сL -химотрипсина к лиотропным жидким кристаллам. При малых ско ростях деформирования межфазные слои ведут себя как очень вязкие жидкости. При больших скоростях деформирования возникают упругие деформации, однако короткоживущие с переходом выше & к вязкому течению разориентированных структур о вязкоетями на три порядка меньшими вязкости неразрушенной структуры слоя. Для того, что бы возникли устойчивые эмульсии или эмульсионные пленки, на межфазной границе необходимо образование упруговязких пленок. Тип устойчивых пленок - предельно тонких (черных) или серых зависит от структуры межфазного слоя. Г

Максимальная адсорбция при концентрации ~ 10 моль/л при близком к нулю заряде микроиона (рН 6-7) и при рН 10,0 постоянна и равна 1,2-1,5*10"® моль/w?. Это позволяет пола -гать постоянство толщины MAC, В то же время конечные толщины двусторонних пленок принципиально отличаются. По картинам ин -терференции можно заключить, что межфазный слой "течет" шесте с дисперсионной средой при рН 6,5 и "не течет" при рН 10,0. Для того, чтобы межфазный слой выдержал капиллярное давление Pg ~ 300 мН*м~^ в условиях получения пленок fy = ~ , где б' - межфазное натяжение, Л - радиус держателя пленки, 0,189 см, доля высокоэластического поведения слоя должна быть повышенная. При течении межфазных слоев при рН 6,5 дефекты о более 7,5 нЭД /молекулу неустойчивы вследствие быстрого их залечивания. Поэтому дисперсионная среда вытекает из слоя до образования черных пленок.

Специфика упруговязких свойств MAC, по-видимому, обус -ловливает возникновение димплов, поскольку для их образования нужно сочетание легкоподвижности границ ( ^ictd & ) и затор -моженности их (стерический фактор). Равномерно вытекающие

Q димплы имеют константы скорости вытекания порядка 10" см3/с. По мере уменьшения прочности межфазного слоя градиенты меж фазного давления могут превышать сдвиговое напряжение в слое, константа скорости вытекания димпла возрастает, что указывает на течение слоя, Важной функцией биомембраны является способность к об -разованию мембранных пузырьков, впячиванию в процессах фаго-и пиноцитоза. Димплы являются моделью этих явлений. Регулятором явления может быть компонент, вызывающий gtad б , например, адсорбция вещества, повышающего межфазное натяжение. В результате этого возникает стремление сократить область повышенного б' и поверхность стремится принять шарообразную форму. Уменьшение константы скорости утоньшения димшгов при встраивании лецитина на несколько порядков является дока за -тельством того, что специфическая деформация мембраны обус -ловлена определенными упруговязкими свойствами, которые изменяются при изменении состава мембраны. Переход в более жидкое состояние мембраны - это прекращение отделения пузырьков.

1. Derjaguin B.V., Kussakov M. Anomalous properties of Thin Polymolecular Films. --Acta physicochem. URSS, 1939» v. X, No. 1, p. 25-44.

2. Pranks1 S., Mysels K.J. On the "dimpling" during the approach of two interfaces. J.Phys.Chem., 1962, v. 66,p. 190-191*

3. Hartland S., Robinson J.D. A Model for an Axisymmetric Dimpled Draining Film. J.Colloid Interface Sci., 1977, v. 60, No.1, p. 72-81.

4. Platikanov D. Experimental Investigation on the "Dimpling" of Thin Liquid-Films. J.Phys.Chem.f 1964, v. 68, p. 3619-5625.

5. Allan E.S., Charles G.E., Mason S.G. The approach of gas Bubbles to a gas/liquid interface. J.Colloid Interface Sci., 1961, v. 16, No.2, p. 150-165.л M M

6. Sheludko A. Uber das Ausfliessen der Losung aus Schaumfilmen.- Kolloid.Z., 1957, v. 155, No.1, S. 39-41.

7. Nakamura M., Uchida E. Thinning Phenomena of the Dimplebetween a Horizontal Glass Plate and an Air Bubble in Water.- J.Colloid Interface Sci., 1980, v.78, No.2, p. 479-484.

8. Кругляков П.М., Ровин Ю.Г. Физико-хииия черных углеводородных пленок.- М.: Наука, 1978. 182 с.

9. Hadgson T.D., Woods D.R. The effect of surfactants oilthe coalescence of a drop at an interface II. J.Colloid Interface Sci., 1969, v. 50, No.4, p. 429-446.

10. Кругляков П.М., Корецкий А.Ф., Соколовская И.П., Ровин Ю.Г., Мякина Т.В. Критическая концентрация образования черных пятен и работа адсорбции ПАВ.- Изв.СО АН СССР, сер. хим., 1976,.XI, с. 17-23.

11. Зонтаг Г., Штренге К. Коагуляция и устойчивость дисперсных систем.- Л., Химия, 1973. 150 с.

12. Булавченко А.И., Кругляков П.М., Белослудов В.Р. Влияние поверхностного заряда на энергию ван-дер-ваальсового взаимодействия в черных углеводородных пленках.-Коллоидн.ж., 1982, т.44, X 3, с.540-543.

13. Булавченко А.И. Влияние гидрофильных ПАВ на расклинивающее давление в черных углеводородных пленках и их устойчивость.-Дис. . канд.хим.наук.- Новосибирск, 1981, 186 с.

14. Г7. Кругляков П.М., Ровин Ю.Г., Багавеев И. А.,Корецкий А.Ф. Толщина, структура и константы Гамакера в черных углеводородных пленках в водной среде.- В кн.: Поверхностнее слои в тонких пленках и устойчивость коллоидов.- М.: Наука, 1974, с.140-146.

15. Кругляков П.М., РовинЮ.Г., Багавеев И.А.,Корецкий А.Ф. Черные углеводородные пленки в водной среде, Ш, Влияние природа органической фазы на толщину и межмолекулярное взаимодействие.-Нзв.СО АН СССР, сер. хим., 1972, №3, с. 11-19.

16. Haydon D.A., Taylor J.L. Contact angles for thin lipid films and the determination of London-van der Waals forces.- Nature, 1.968, v. 217, p. 739-740.

17. Кругляков П.М., Ровин Ю.Г., Корецкий А.Ф. Черные углеводородные пленки в водных средах. П. Экспериментальное определение констант Гамакера.- Изв. СО АН СССР, сер. хим.,1972, №2, с.14-20.

18. Кругляков П.М., Булавченко А.И. Влияние электрического по -ля на устойчивость черных углеводородных пленок.- В кн.: Физико-химия модельных клеточных мембран. Владивосток,изд. ДВНЦ АН СССР, 1981, с.64-77.

19. Derjaguin B.V., Churaev N.V. Disjoining Pressure of Thin Layers of Binary Solutions. J.Colloid.Interface Sci., 1977, v. 62, p. 369-380.

20. Ash S.G., Findenegg G.H. Calculation of the interaction energy between two parallel adsorbing planes immersed in a solution composed of molecules of different size. -Trans.Faraday Soc., 1971, v. 67, p. 2122-2128.

21. Osmond D.M., Yincent В., Waite I.A, Steric stabilizations a reappraisal of current theory. Colloid Polymer.Sci.,1975, v. 253, P. 678-682.

22. Ямпольская Г.П., Рангелова H., Платиканов Д. .Измайлова В.Н. Свободные черные шгенки белков.- Биофизика, 1977,т*22,с. 954-957.

23. Платиканов Д., Ямпольская Г.П., Рангелова Н., Ангарска 1., Боброва Л.Е.^Измайлова В.Н. Свободные черные пленки белков. I. Концентрация образования и механическое равновесие.-Коллоид.ж., 1980, т.42, Л 5, с.893-897.

24. Ангарска Ж.К., Ямпольская Г.П., Измайлова В.Н. .Боброва Л.Е. Образование и устойчивость пенных черных пленок глобуляр -ных белков.- Коллоид .ж., 1980, т. 42, $ 3, с.424-430.

25. Измайлова В.Н., Ямпольская Г.П., Ангарска Ж., Боброва Л.Е., Туловская З.Д. Свойства свободных черных пленок белков.

26. В кн.: Физико-химия модельных клеточных мембран. Влади -восток, Изд. ДВНЦ АН СССР, 1981, с.16-41.

27. Измайлова В.Н., Ангарска Ж.К.,Ямпольская Г.П.,Туловская З.Д. Реологические свойства адсорбционных слоев о£-химо -трипсина на границе водный раствор бежа воздух в уело -виях образования черных пленок.- Коллоид.ж., 1961, т.43, №1,0.155-161.

28. Димитрова Б., Ангарска Ж., Боброва Л.Е., Ямпольская Г.П., Измайлова В.Н. О двух типах ленных пленок d-химотрипсина.- Вестн. Моск. Ун-та, сер;2, Химия, 1982, т.23, $ 5, с.476-480.

29. Богачева Е.Н. Закономерности формирования и разрушения межфазных адсорбционных слоев и эмульсионных пленок (/-химотрипсина.- Дисс. . канд. хим.наук, М., 1981, с.155.

30. Ямлольская Г.Н., Богачева Е.М., Измайлова В.Н. Адсорбция

31. Л -химотрипсина на жидких границах раздела фаз.-Колл.ж., 1982, т.44, 116, c.II5I-II56.

32. Измайлова В.Н., Нефедова Е.Н., Туловская З.Д. ,Ямпольская Г.М. Долговечность межфазных адсорбционных слоев высокомолекулярных стабилизаторов на жидких границах раздела фаз.-Колловд.ж., 19619 т.43, № I, с.161-168.

33. Gorter Е., Grendel Е. On bimolecular layers of lipids ontthe chromocytos of the blood. J.Experimental Med., 1925, v. 41, No.4, p. 439-443.

34. Danielli J.E., Dawson H. A contribution to the theory of permeability of thin films. J.Cell.Comp.Physiol.,1935, v. 5, No.4, p. 495-508.

35. Singer S.J., Nicolson G.L. The fluid mosaic model of the structure of cell membranes. Science, 1972, v.175, p. 720-731.

36. Ивков В.Г., Берестовский Г.Н. Динамическая структура ли -пидного бислоя.- М.:Наука, 1981. с.296.

37. Ивков в.Г., Берестовский Г.Н. Лишщный бислой биологиче -ских мшбран.- М#: Наука, 1982, с.224.

38. Маркин B.C., Чизмаржев Ю.А. Ивдуцированный ионный транс -порт.-М.: Наука, 1974, с.251.

39. Tien H.Ti. Bilayer lipid membrane (BLM)j theory and practice. N.Y., Narcell Dekker, 1974, 655 p.

40. Tien H.Ti. Black lipid membranes in aqueous media: Inter-facial free energy measurements media: ar.cl effect of surfactants on film formation and stability. J.Phys. Chem., 1967, v. 71, p. 3395-5401.

41. Pettiplace R., Andrews D.W., Haydon D.A. The thickness, composition and structure of some lipid bilayers and natural membranes. J.Membrane Biol., 1971, v. 5, N0.3, p.277-296.

42. Benz R., Frolich 0., Lauger P., Montal M. Electrical capacity of black lipid bilayers made f&om monolayers. -Biochim.Biophys.Acta, 1975, v. 394, p. 323-334.

43. Kremer J.M.H., Aqterof W.G.M., Wiezsema P.H. The influence of interfacial properties on the stability of black lipid films. J.Colloid Interface Sci., 1977, v. 62, p.396-405.

44. White S.H., Petersen D.C., Simon S., Yafuso Ш. Formation of planar bilayer membranes from lipid monolayers s a critique. Biophys.J., 1976, v. 16,p.481-489.

45. White S.H. Formation "solvent-free" black lipid membranes from GMO in squalene. Biophys.J., 1978,v.25,p.557-547.

46. Huang С.Н. Studies on phosphatidylcholine vesicles:

47. Shomo N., Bentz J. On the applicability of DLVQ theory to cation-induceed aggegation of phosphatidylserine vesicles. J.Colloid Interface Sci., 1980, v. 74, No. 1, p. 295-297.

48. Kasper A.M., Helmkamp I. Protein-Catalyzed Phospholipid Exchange between Gel and Liquid Crystalline Phospholipid Vesicles. Biochemistry, 1981, v. 20, No.1, p.146-151.

49. Benz R., Janko K. Voltage-induceed capacitance relaxation of lipid bilayer membrane composition. Biochim.Biophys. Acta, 1976, v. 455» P. 721-758.

50. White S.H. Thickness changes in lipid bilayer membranes.ч - , ,- Biochim.Biophys.Acta, 1970, v. 196, p. 354-357.

51. White S.H., Thompson Т.Е. Capacitance, area and thickness variations in thin lipid films. Biochim.Biophys.Acta, 1971, v.36, No.3, p. 385-396.

52. Wobschall D. Bilayer membrane elasticity and dynamic response. J.Colloid Interface Sci., 1971,v.36,No.3,p.385-96.

53. Wobschall D. Voltage dependence of bilayer membranes.

54. J.Colloid Interface Sci., 1972, v.40, No.3, p.417-423.

55. Пасечник В.И. .Кузнецова E.C. Зависимость модуля упругостив плоскости мембраны от величины деформации.- Биофизика, 1977, т.22,' 3 5, с.941-942.

56. Evans E.A., Waugh R. Osmotic correction to elastic area compressibility measurements on red cell membrane.

57. Biophys.J., 1977, v. 20, No.3, pv 307-313.

58. Пасечник В.И., Гианик Т. Упругие свойства бислойных мембран в направлении, перпевдикулярном плоскости мембраны.-Коллоид.ж., 1977, т.38, 16 6, с.1180-1188.

59. Пасечник В.И., Гианик Т. Опенка вязкоупругих свойств биологических мембран по изменениям на бислоях.- Биофизика,1978, т.23, В 6, с. I005-I0I0.

60. Пасечник В.И. О модели упругой бислойной мембраны.-Биофи-зжа, 1980, т.25, Л 2, с.265-269.

61. СолтонМ. Молекулярная бактериология.- В кн.: Молекулярная микробиология.- М.: Мир, 1977, с.420-453.

62. Микельсаар X., Северина И.Й., Скулачев В.П. Фосфолипиды и ркислительное фосфорилирование.- Усд. соврем.биологии, 1974, т.78, Л 3, с.348-370.

63. Биохимичеокая термодинамика /Пер. с англ./ Под ред Л .Джонса. М.: Мир, 1982 , 440 с.

64. Small D.M. Liquid Crystals in Living and Dying Systems. -J.Colloid Interface Sci., 1977, v. 38, No.3, p. 581-602.

65. Izmailova V.N., Jampolskaya G.A., Maso V.K. Interaction of surface-active macromolecules with non-polar substances in aqueous solutions. In: Progress of the international conference on Colloid and Surface Science,Budapest,1975,v.1.

66. Ксенжек O.C., Коганов M.M., Ревод B.C. Исследование взаимодействия цитохрома с бислойными мембранами.- Биофизика,1977,1. J& 4, с.616-620.

67. Repke Н., Bercri A., Matthies Н. Incorporation of brain membrane proteins into planar bilayer lipid membranes. -Acta Biol, et Med. Ger., 1980, v. 39, No.6, p. 657-663.

68. Cristna P., Urs B. Interaction of human red cell membrane acetylcholinesterase with phospholipids. Biochim.Biophys. Acta, 1981, v. 640, No.1, p. 339-364.

69. Sergio S. et al. A kinetic and structural study of two-»-step aggregation and fusion of neutral phospholipid vesicles promoted by serum albumin at low pH. Chem. Phys.Lipids, 1981, v. 28, No.2, p.> 165-180.

70. Vitello L. A water-soluble model for intrinsic membrane proteins. Biochim.Biophys.Acta,1979»v.557,Р•331-339•

71. Boggs J.M. Intermolecular Hydrogen Bonding between Lipids: Influence on Organization and Function of Lipids in Membranes. Can.J.Biochem., 1980, v. 58, No.10,p.755-770.

72. Melchior D.L., Steim J.M. Lipid-associated thermal events in biomembranes. Progress in Surface and Membrane Science, 1979» v. 13, p. 211-296.

73. Waksmann A. et al. Translocation of proteins through biological membranes. Biochim.Biophys.Acta, 1980, v. 604, No.3, P. 249-296.

74. Ангарска Ж.К., Ямпольская Г.П., Боброва Л.Е.,Измайлова В.Н. Электростатические эффекты при образовании пенных черных пленок глобулярных белков.- Коллоид.®., 1980, т.42, Ш 3,с.424-429.

75. Измайлова В.Н., Ангарска Ж.К., Ямпольская Г.П.,Туловская З.Д. Механизм разрушения адсорбционных слоев белков, сформированных на границе раздела раствор-воздух.-Коллоидн.ж.,1980, т.42, №3, е.554-596.

76. Birktoff J.G., Blow D.M. Structure of crystalline c/-chymo-tripsin. J.Mol.Biol.1, 1972, v.68, No.2, p. 187-240.

77. Smille L.B., Furka A., Parker C.O. Structure of chymotryp-sinogen В compared with, chymotrypsinogen A and trypsinogen. Nature, 1968, v. 218, p. 343-346.

78. Imahori K., Yoshida H., Hashizume H. Secondary structure of protein molecules. Biochim.Biophys.Acta, 1960, v. 415,p. 380-381.

79. Blow D.M. Study of Л -chymotrypsin by X-ray diffraction. J.Biochem., 1969, v. 112, p. 261-268.

80. Недев K.H., Волков Р.И., Хургин Ю.И. Гидратация поверхностного слоя молекулы <Л -химотрипсина. Биофизика, 1974, т. 19, с. 983-986.

81. Недев К.Н., Хургин Ю.И. Исследование поверхностного слоя белковой глобулы.-Молекул, биол., 1975, т.9, с.761-767.

82. Юрьев Ю.К. Практические работы по органической химии. М.: Изд-воМГУ, 1969, с.252.

83. Кейтс М. Техника липидологии. М.: Мир, 1976.

84. Scheludko A. Thin liquid films. Adv.Coll.Interface Sci., 1967, No.1, p. 391.

85. Manev E., Scheludko A., Exerova D. Effect of surfactant concentration on the critical thickness of liquid films. -Colloid-Z., 1974, v.252, No.7-8, p. 586-593.

86. Vrij A. Spontaneous rupture thin liquid films. Discuss.г / .

87. Faraday Soc., 1962, v. 42, p. 23-28.

88. Vrij A., Overbeck J*Th.G. Rupture of thin liquid films due to spontaneous fluctuations in thickness. J.Amer. Ghem.Soc •, 1968, v.90, p. 3074-3079.'

89. Лавдсберг Г.С. Оптика.- М.: Наука, 1976, с.120-131.

90. Scheludko A. Sur certains particularites des lames mousseuses II. Stabilite cinetique, epaisseur critiqueet epaisseur d'equilibre. Proc.Koninkl.Nederl.Acad.Wet.1. V 1962,v. B65, p. 87-96.

91. Exerova D., Nicolova A., Tacharieva M. Common black and

92. Newtonian film formation. J.Colloid Interface Sci., 1981, v. 81, No.2, p. 419-429.

93. Ребицдер П.А. Избранные труды. Поверхностные явления в дисперсных системах.- М.: Наука, 1974, с.268.

94. Измайлова В.Н., Ребиндер П.А. Структурообразование в белковых системах.-М.: Наука, 1974, с.268.

95. Ламери Р., Билтонен Р. Термодинамические и кинетические аспекты конформаций белков в связи с физиологическими функциями.- В кн.: Структура и стабильность биологических макромолекул. Пер. с англ/Под ред. Волькенштейна М.В./ М.: Мир, 1973, с.7-174.

96. Коломыткин О .В., Ермишкин Л.Н. Электропроводность липидных мембран в присутствии протеолитических ферментов и их субстратов.- Биофизика, 1976, т.21,.» 6, с.1008-1012.

97. Буевич Ю.А., Липкина Э.Х. 0 разрыве тонких жидких пленок.-Колловдн.ж., 1978, т.40, « 2, с.201-206.

98. Манев Е., Шелудко А., Эксерова Д. Критические толщины разрыва и образования черных пятен в микроскопических водных пленках.-Изв.Болг.АН,хим.науки, 1972, т.5, Ш 4,с.585-595.- 143

99. Sidorova M.-, Nedjalkov M., Platikanov D. Highly concentrated solution of surfactants and nature of black foam films. God.Sof.University, 1975, v.66, p.315-321.

100. Эксерова Д., Шелудко А. За връзката между концентрацията на на обрузуване на черни пятна в мшсроскопични пенни ципии завиоимостата на повъерхностного напряжение от концентрацията' на пенителя.- Изв.Болг.АН, Физико-химия, 1963, т*3, с.79-87.

101. Кругляков П.М., Ровин Ю.Г., Корецкий А.Ф. Об аномальных свойствах черных углеводородных пленок в жидкой среде. -Тезисы докладов 17 научной конференции. Новосибирск, Ин-т неорганической химии, 1972, с.66.

102. ИЗ. Кругляков П.М., Ровин Ю.Г., Корецкий А.Ф. Многослойные черные углеводородные пленки в водной фазе.- В сб.: Поверх -ностные силы в тонких пленках и устойчивость коллоидов. М.: Наука, 1974, о.147-149.

103. Bruil H.G., Lyklema J. Statification in free liquid films. Nature Phys.Sci., 1971, v.233, p. 19-20.

104. Журков С.М., Томашевский Э.С. Некоторые проблемы прочно -сти твердого тела.- M.-I.: Изд-во АН СССР,1959, с.58-67.

105. Friberg S., Jansson P.O. Surfactant Association Structure and Emulsion Stability. J.Colloid and Interface SciV, 1976, v. 55, N0.5, p.- 614-623.

106. Измайлова В.Н., Письменная Г.М., Туловская З.Д. Исследо -вания кинетики коалесценции углеводородных капель, стабилизированных сывороточным альбумином в концентрированных эмульсиях.- Вестн. Моск.ун-та, сер. химия, 1978, т.19,с. 473-478.

107. Ямпольская Г.П. Исследование солюбилизации углеводородов в растворах белков.- Автореф. дисЪ. на соискание ученой степени кацц. хил.наук. М., 1968, 25 с.

108. Волынская А.В. Исследование гидрофобных взаимодействий глобулярных белков с углеводородами.- Автореф. дисс. на соискание учен, степени кацд. хим.наук.М., 1970.

109. Ruckenstein Е., Krishnan R. Svollen micellar models for solubilization. J.Colloid a. Interface Sci., 1979,v. 71, No.2, p. 321-335.

110. Ruckenstein E., Krishnan R. The Equilibrium Radius and the Domain of Existence of Miегоemulsion. J.Colloid a. Interface Sci., 1980, v. 76, No.1, p. 188-200.

111. Ruckenstein E., Krishnan R. Effect of Electrolytes and Mixtures of Surfactants on the Oil-7/ater Interfacial Tension and Their Role in Formation of Microemulsions. J.Colloid a. Interface Sci., 1980, v. 76, No.1,p. 201-211.

112. Ruckenstein E., Krishnan R. The Equilibrium Radius of Microemulsions Formed with Ionic Surfactants. J.Colloid a. Interface Sci., 1980, v. 75, No.2, p. 476-492.

113. Биологические мембраны, под ред. ГГарсонса Д.С., пер. с англ., М., 1978

114. Поликар А. Поверхность клетки и ее микросреда. Пер. с франц., М., 1975

115. Райхень А.С. Электромикроскопическое изучение внутриклеточного пищеварения в кишечных клетках иксодового кле -ща.- Цитология, 1978, т.20, Л 2, с.145-150.

116. Маркин B.C., Козлов М.М. Механизмы слияния клеток.-Биофизика, 1983, т.28, Л I, с.72-77.

117. Гелвданд В.Й. Реакция поверхности нормальных и опухоле -вых клеток с углеводсодержащими белками.- Автореф.дисс. на соискание ученой степени кавд. биол. наук, М., 1975, 20 с.