Новые подходы к синтезу метилированных сахаров и дезоксисахаров тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

РОССИЙСКАЯ АКАДЙШ НАУК ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ . ДАЛЬНЕВОСТОЧНОЕ ОТДЕЛЕНА ТИХООКЕАНСКИ ЛНСТШТ БЖОРГАНЛШЮЯ ХК.Ш

Ка пробах рукописи

ЕВТУШЕНКО 'Евгений Владимирович

НОВЫЕ ПОДХОДЫ К СИНТЕЗУ МЕТШ иРОБАННЫХ САХАРОВ И ДЕЗОКСИСАХАРОВ

02 .СО .10 - Биоорганическая химия, химия природных V. физиологически активных веществ.

Автореферат

диссертации ка соискание ученой степени доктора хишческих наук

Владивосток - 1932

Работа выполнена в Тихоокеанском институте биоорганическоЯ химии .Дальневосточного отделения РАН

заседании Специализированного совета Д.003.99.С1 по защите диссертаций е Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН по адресу: 690022, г.Владивосток, проспект 100-летин Владивостока, 159, ТИБСХ

С диссертацией модно ознакомиться в библиотеке ДВО РАН (г.Владивосток, проспект 100-летия Владивостока, 159, ДВГИ).

Научний консультант:

член-корреспондент РАН Сводов Ю.С.

Официальные оппоненты:

доктор химических наук Свиридов А.Ф.

доктор химических наук профессор Чирва В.Я.

доктор химических наук профессор Стоник В.А.

Институт биоорганической химии им.М.М.Шемякина РАН

Ведущее предприятие

часов на

Автореферат разослан апреля 1992 года.

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат химических наук

И. Прокопенко

í

Актуальность проблемы. В настоящее время не гизквает Ю7^иийч0мнения» 4X0 в основе функционирования бнологичэиких систем

лежа? специфические процессы узнавания между молекулами v; клетками. Изучение молекулярнкс механизмов биологического узнг.впчия свидетельствует о том, что особая роль в этих процессах чр'ткчд-леяит углезодсодертзщич биополимерам.

Полезным/ инструментами изучения биологического уз.чаьага'я могут быт,'-. модифицированные сахара, например, метил про »»иные сахара или дезоксисахара п реакциях конкурентного ннгибирования углеэод-белкового взаимодействия.

С другой стороны, заведомно образца метилированных оахаров требуются для установления структуры углеводсодергсаганх полимеров. Синтез метилированных Сахаров является технически трудной задачей и связан с разработкой регпосолективнкх подходов к замещении гидроксильных групп углеподов. Решение этой проблемы мочет быть с успехом использовано и для направленного cuitvoa других углеводных производных, з частности, дезоксисахаров и олигоса-харидоз.

Метиловые яфиры моносахаридоз часто встречается в прял-до в качестве компонентов глитскокъгаг-атов. Оки являются ценными соединениями при физико-химических исследованиях углеподних полимеров, т.к. воспроизводят фрагмент глипозидной свяон.

Опубликовано больяое количество робот, п^лью которгх «ркл-.-сг. изучение состава смесей, образугаихся при частичном г'!1Г"/лнр'.линии углеводов к выяснение относительной реакционней способности гидроксильтзс групп углевод»»*« молекул. Следует однако отм< т-w,, что бслышагстЕО работ noQBA'Wb «».сткктму veriuirí'-»: •«<••:•■} •■ц-rrr-,-водтч и-глоксом в щелочних условиях.

Попытки использования препаративной газожидкостной хроматографии (11ГЖХ) и препаративной жидкостной хроматогр?4>и" (ПНХ) для разделения смесей метилированных Сахаров были единичными и не составляли единого подходи. Поэтому разработка простых и удобниг методов синтеза метилированных Сахаров и дезоксисаха-ров представляется актуальной.

Цп_кь работы. Целью настоящей работы является изучение реакционной способности пщроксильных групп моиосахарвдоз в реакциях метилирования, разработка нового подхода к препаративному синтезу метилирова! ннх Сахаров и дезоксисахаров и использование их в качестве молекулярных моделей для опитопного картирования активных центров утлевсд-уснаитех белков.

Iкучная новизна. Впервые проведено систематическое изучение реакционной способности гидроксильных групп метилгликози-дов {/^ц -о-ксилопиранозы, <^|>-ь-арабинопиранозы, ^р -ь-раы-нопиранозы, -^-а-ликсопиранозы, <^-±,-<|укопиранозы, о^ -ь-арабинофу-ранозн, а также I,6-ангидро-5-в-глюкопиранозы и Т,2-изопропяли-ден-^'~1>-ксилофуранозы при метилировании в щелочнмх и нейтрально условиях, а также с погощью диазомэтана в присутствии солей переходник металлов и борной кислоты. Показано, что реакционная способность гидроксильных групп в моносахаридах зависит от эектронных и стерических факторов и условий проведения реакций. Реакционная способность гндроксильных групп при метилировании диазометаном определяется, в основном, электростатическими и пространственными эфйгктами. Гюмплексообразование моносахаридов с ионами переходных металлов и борат-ионами позволяет управлять реакционной способностью гццроксильылс групп.

Предложен новый подход к синтезу депоксисахаров на основе

частичного дезоксигенирования ацетатов ыетилгликозидов с последующим хроиатографическим разделением продуктов реакции.

Показано, что метиловые эфиры ыетилгликозидов могут использоваться для картирования активных центров зндоглюканаз.

С помощью метиловых эфиров моносахаридов определен механизм сорбции а-глюкозы и гомоморфных еГ, Сахаров на акцепторной участке Фермента /$-1,3-эндоглюканазы Л1У и показано, что сорбированная молекула сахара находится в конформации.

Показана перспективность использования метиловых сфиров Сахаров для эпитопной характеристики лектииов на примере лекти-на из мидии Сгепоту1Ииа егвуалиа.

Практическая ценность. В результате выполненной работы ььлс-нены основные закономерности частичного метилирования моносахаридов, что позволило использовать эти данные для региоселектив-ных синтезов большого числа заведомых образцов метилированных моносахаридов.

На основе данных по частичному метилированию моносахаридов и изучению возможностей ПГ'ЖХ и ШХ предложены эффективные препаративные синтезы метиловых эфироь ряда пентоз, гексоз, б-дезокси-гексоз, уроновых кислот и других производных моносахаридов.

Метилированные сахара широко использовались в Тихоокеанское институте биоорганической химии ДВО РАН и в других научных организациях в качестве стандартных соединений при структурном изучении углеводов и в качестве моделей для физико-хтшических и биологических исследований.

Разработаны препаративные синтезы рлда дидезоксисахапов, производных пентоз.

13

Распифрованы и приведены С-ЯМР спектры полученных метиловых

эфиров (.'.оносьхаридов, которие могут бить полезть!» при интер-ТЗ,- .-..п

цитации о-^и-г1 спектров углеводсодерхадих соединении.

Предложен ферментативный синтез ряда дисахаридов с и-глшо-эсй на невосстанивливгш&ем конце.

Апробация работы. Материалы работы были представлены и доложен и на 5-сй (г.Тбилиси, 1272 г.), 6-ой (г.Ростов-на-Дону,19У? г.), 7-п'и (г.Пущмпо, 1962 г.), 8-ой (г.Тбилясп, 1987 г.) Всесоюзных конференциях по химии и биохимии углеводов; на Всесоюзном симпозиуме гю биоорганической химии (г.Владивосток, 1975 г.), на 2-ом Йвропейсксм симпозиуме по углеводам и гликоконыогатам (г. Будапешт, ~19иЗ г.), на Симпозиуме СсВ по химии углеводов и их производных (г. Москва, 1983 г.), на 5-ой Международной конференции по хиыш и биохимии биологически активных природных продуктов (г.Варна, 1989 г.), на 12-ой Международной конференции по лек-тинам (г.Дэвис, 1990 г.).

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, о б сук деты результатов, экспериментальной части и выводов. Материалы диссертации изложены на 248 страницах, содержат 4 рисунка» 86таблиц и I схецу.Список цитируемой литературы включает 266 названий.

I. ЧАСТИЧНОЕ МЯЖИРОВАНЛй МОНОСАХАРДЦОВ.

1.1. Частичное метилирование моносахаридов в щелочных и нейтральных условиях.

Частичное метилирование кегил-уЗ-й-ксилопиранозида и метил-^5-ь-арабинолиранази.ца бшо изучено пятью методами. По соотношении мошксхилових эфиров при низких степенях замещения были опреде-;юны константы относительной реакционной способности гидроксиль-ных групп в этих соединениях (табл. I);

Г щелочннх условию: метода Хеуорса гздрохсильные гр.унпн при С-2 и С-4 в мет5'Л-£-1г-к.силопиренозиде обладают примерно равной реакционной способностью, наженьтая реакционная способности наблюдается у гидроксила при 0-3 (табл.1). Подобные результата получены при метилировании метил-/?-1>-ксилопиражзчда методом Куна о использованием окиси серебра, однако при метилировании по методу Куна с использованием окиси бария каибольыей реакционной способностью обладает гидроксг:л при С-4 (та,1л, I).

При частичном метилировании кетил-^-Ь-арабянспирлкоаидэ. наименьшая реакционная спэс эбность наблюдается у гидрокс:?ла при С-4 (табл. I), что, очевидно, определяется его аксиальный положением. Наибольшую реакционную способность б реакциях метилирования проявляет гидроксил при С-2.

Таблица I.

Константы относительной реакционной способности трех гпдроксилоз ыетял-^-о-ксялопиранозиД'- и метил-£-;,>-аробиьопиранозида в реакциях метилирования.

Метод

Хеуорса Купа (Ае^О) Куна (ВаО)

К> : К3 : ■ Кд

{ Р -Р-^-1_/3 - ь-

3,7 : I : 3,2 2,4 : I : 2 0,9 : 1 : 2

Ага

1,7 : I : 0,6 1,3 : I : 0.5 :,Г. : I : 0,0

■■Я' ''3' ~ константы относительной рзаяциокной способности гидрекеплов прй С-2, С-3 и С-4 пг-стьетст-венно.

*

Частичное метилирование метил-|3-1>-кеилопираноз:ида и кетил-р-Хг арабпнот.ранозида по методу Хакомори при низких степенях замещения приводит к результатам, подобным при использовании метода Хеу-орса. Однако значительные количества ди- и три-О-ыетиловых эфчров, указывающие на пропорциональность скорости и стопзни замещения, но Позволяют точно определять константы реакционной способности в этих случаях.

Для сравнения констант реакционной способности гидроксильных групп использовано частичное метилирование семи глмкозидоз по метода' Пурди в стандартных условиях до малой степени замещения. Константы относительной реакционной способности расчитаны по отношению к константе К4 метил-о^-с-ксилоппраноэида, принятой за единицу (табл. 2).

Таблица 2.

Константы относительной реакционной способности гидроксильных групп метилгликозидов в реакции метилирования по методу Пурди.

Метилгли-коэид I МоЛЯПНЫЙ % про-1 реагировавших I молекул •' I Суша первич-| ных констант 1 ч I : «3 : к4

и 32,6 3,8 1,6 : 1,2 : I

р, х>1 35,6 4,1 1,5 ; 1,2 ; 1.4

и Ага 37,1 4,3 2,1 : 1.5 : 0,7

р А га 33,1 4,2 . 3,3 : 0,9 : 0,6

■X 1 37,0 4,3 1,2 : 1.7 : 1,4

Л Наа 23,2 2,7 0,8 : 1,3 : 0,6

/] РЬа 33,3 3,0 1.9 ; 1.4 : 0,Ь

На основе представлений ¡-информационного анализа отметим, что

в мет1Ш-^-1гарабинопира!юзидах гицроксия при 0-4, имеющий аксиальное положение отличг.ется малой реакционной способностью, ¿го константа з и^-аноыерах раЕна 0,7 и 0,6 соответственно. В мет'/л-^-Э-л/.ксоп'-.тарояде к метил-с^-рамиогглраноэидв гкдроксид при С-2, аа-

нимагаий аксиальное положение, имеет пониженную реакционную способность по сравнению с экваториальным гидроксилом при С-2, на-З-ксилозидах. интересно, ото в в-рамнозади

пример, в метил

Кэ = 1,9, выше, чем в коилсзидах. Можно предположить, что Д 1 оффект в молекуле Д-рамнозида увеличивает нуклеофилыюоть кислородного ато^а при С-2, что приводит к большей реакционной способности второго пщроксила. Подобный эффект должен наблюдаться в ме-тил-^З-В-ликсопиранозиде и в метил-уЗ-и-маннопиранозиде. В и р,-аномерах метил-ь-рамнопиранозида К^ тлеет очень низкое значение, что, вероятно, вызвано стерическими препятствиями со стороны мэ-тильной группы при С-5.

Для расчета вторичт-гх констант реакционной способности гид-роксильнкх групп использовали результаты частичного метилирования монометиловых эфиров Стабл.З).

Таблица 3.

Частичное метильрование 2- и 3-0-метиловых эфиров ме-тклгликозидов р -ь-арабинозы, ^-в-ксилопиранозы и </-ь-рамнопиранозы по методу Пурди.

Исходный метиловый эфир_

Метиловые эфиры, % 2 I 3 1 2,3 I 2.4 1

3,4 { 2,3,4

г-Ме-р-Ь-Ага З-Ме-^-Ь-Ага

2-1Ле-р-Х)-Ху1 3_Ые-/>-1)-Ху1

3-Мв-вС-Ь-НЬа

40,1 - 33,3 23,0 - 3,5

- 18,1 56,5 - 7,2 18,2

28,4 - 27,6 38,0 - 6,0

- 72,6 13,3 - 13,9 0,2

56,2 - 27,9 14,3 - 1,6

- 84,2 13,3 - 2,1 0,4

Как видно из этих данных, при метилировании 2-0-метилового

о

эфира метил-Д-в-ксилоэида отношение К^ : - 1,3, что практически совпадает с отношением К^ : Кд ^ 1,2 11ри частичном метилировании

метил-/*-и-ксилопирашиида (табл. 2) и свидетельствует о том, что г этом случае метилирование второго гидроксила не влияет на реакционную способность третьего. Подобный факт имеет мосто и при метилировании 2-0-ыетллоБого вфира иетил-^-ь-раинопиранозида (табл.3). Метилирование 3-С-метилового эфира метил-^-з-ксилозиди в равной степени приводит к образованию 2,3- и 3,4-ди-О-ые'гилсзого офироз, что рез;:с отличается от результатов ^етгдаронс.ния 3-0-ыетилових ефиро!. метилгллкозидов р-ь-арабинозы и «¿-1>рамнозы. Последние метилируются, пр?имущественно, по второму гидроксилу (табл.3).

Представлялось также интересьым сравнить реакционную способность первичных и вторичных гидроксилькък групп моносахаридов в реакциях метилирования. Б качестве моделей бичи, использованы 1,2-изопропилчден-^-и-ксилоф/раноза и метил-г^-ь-арабкнофуранозид. Как видно из результатов, представленных в табл. 4, метилирование 1,2-изопрепчлиден-ч^-жеилофуранози иодистьш метилом в присутствии окиси серебра практически селектгаш идет с участием первичного гидроксила (К§ : К^ = 7,Ь).

. При метилировании г щелочных условиях реакционная способность определяется, в основном, не пространственными факторами, а нуклесфильнэстью двух.типов гидроксилов при С-3 и С-5, что и приводит к преимущественному замещению вторичного гццроксила. Отношение : Кд - 0,6,

Интересно, что метилирование метил-^-ь-арабинофуранозида /дистки метилом в присутствии окиси серебра демонстрирует примерно разную реакционную способность трех гидроксильньк групп, в то вре.хл как при метилировании дииетклеульфатем в щелочной средс наибольшая скорость замещения отмечается у гидроксила при С-2 (тьбл. 4).

Таблица 4.

Частичное метилирование I, 2-нзопропилцдея-^з) -кеилофуранозы и ыат('Л-^Ч>-арабинофуракози.

Условия метили- [________Метиловые ¿фирм, % _

рования___1 - I 2 { 3 I Т1 2.зТ5ХТ 5.5 I 2.3,"о

СЛ^ + ЛЕ.0 1.3 - 10,8 85,7 - .- 2,2 -

ССН3)2БО^НаОК 24,4 - 22,2 17,7 - _ 35,7 -ОН,-„¿-.О-Ага!

СЯ^ 49,5 13,4 1С,1 13,0 1,5 6,7 5,1 0,7

ССН3)220^ ааОН 32,4 25,2 5,6 7,9 16,7 9,0 2,6 0,4

Необходимо имйтв в зиду, что вследствие коьформационного равновесия даккьте по реакционной способности гидроксилов "интерпретировать достаточно сложно. Поэтому в качестве модели использовалась

также 2,6-ангидро-у^о-глюкогп1рлкоза с закрепленной ^ кояформа-цией.

Результаты частичного метилирования 1,6-гнгкдро-уЗ-->глюкот<ра-нозы и её монометиловых гфироЕ приведены в табл.5. Как видно из этих данных, метилирование диметилсульфато.м в щелочи приводит к довольно равномерному распределению заместителей с некоторым предпочтением для НО-2, что связано с больней нуклеофильчостмз образующегося аниона при С-2. При метилировали: йодистым метилом в присутствии окиси серебра значительную роль игра от стерпчесчие факторы. Низкая концентрация 3-0-метилсвого эфира в реакционной смеси (2/,) (табл.5) в атом случае зазвана пространственными затруднениями для 1Ю~3 со сто реки 0-1. 11рн метилнровекнн З-О-илтил^П'-.-Ч: эфира иодистым метилом в присутствии окиси серебра (тао.т.о) наглодается практически р*з.?.нэя реакционная способность для ¡й—^ и К'-4. В то же вррмя при метилировании с-'.">>/ сг^собг.м 2-С-.'«т:иовиго

: 1{3 = • а для 4-0-метилового эфира отношение : Кд =7,4. Этим и объясняется тот факт, что во фракции ди-О-метиловых эфиров 2,4-ди-О-метиловый эфир является практически основным продучтом реакции (табл. о).

Такш образом, видно, что при метилировании широко применяемыми в лабораторной практике методами различия в константах относительной реакционной способности для гидроксильных групп моносахаридов невелики, что не позволяет использовать эти методы для регио-селективного синтеза индивидуальных ыетиловых эфиров.

Таблица 5.

Частичное метилирование 1,6-ангидро-уЗ-ь-глвкопиранозы и её монометиловых эфиров.

Условия метилирования

Метиловые зфиры, %

I 5 > » I 2.3 1 2.» } 5.»{а.3.»

СН^о/А^О (СН5)2БС4/НаОН

А6-

V

СН^/ЛСрО

17,2 21,3 2,0 18,2 2,0 УМ 2,8 2,457,6 13,6 10,2 У,4- 3,6 3,3 2,0 0,3

62,8

59,0

7,3 29,9

25,3

24-,о 10,6

са^/лг^о

50,;

55,0 4,7 1,6

Т.2. Частичное метилирование моносахаридов диазо-метаном в присутствии кислот Льюиса.

Интересным, но в то жэ время мало разработанным в углеводной химии, является вопрос о возможности изменения реакционной способности гидроксильных групп Сахаров при комплексообразовании в растворах. Одним из немногих известных примеров таких реакций является метилирование моносахаридов диазометаном в присутствии солей переходных металлов.

Нами было изучено метилирование диазометаном и ^-ыетил-гликозидов I)-ксилозы, Ь-арабинозы, Ь-раынозы и ¿¿-метилгликози-дов Ь-фукозы и В-ликсозы в присутствии хлоридов ряда переходник металлов и борной кислоты в диоксане (Табл. 6-7). Как видно из приведенных данных, только хлориды цинка и церия катализируют замещение, в основном, по второму гидроксилу. При использовании других катализаторов во фракции ыоно-замещенных соединений преобладают 3-0-метиловые зфиры. И лишь в случае метил уз-ь-рамнопиранозида (табл. 7) все катализаторы ориентируют замещение по второму гидроксилу.

Наибольшая селективность метилирования достигается при использовании в качестве катализатора солей сурьмы, олова, титана, причем соли сурьмы и олова отличаются очень близким действием. Лишь в случае метил-уЗ-Ь-рамнопиранозида (табл. 7) отношение 2- и 3-монометиловых эфиров при метилировании в присутствии БпС12< 2^0 и ЗЪС15 составляет 1,4 и 22 соответственно. • Накопление 3-0-ыетиловых эфиров в процессе реакции подтверждает образование двух типов циклических комплексов с участием цнс- и транс-вицинальных гидроксильных групп. Очевидно, что для 3-0-ме

тиловых эфиров образование циклических комплексов с атомом переходного металла невозможно. Это приводит к накоплении их в скеси и позволяет использовать данную реакции для прзпаративнох'о получения 3-0 -метиловых офиро в.

Таблица б.

Частичное метилирование метил-^-ь-рашопирнкозмда.

Катализатор 1 Метиловые офиры, %

» ■

1 - 2 3 4 2,3 2,4 3.4 2.3.4

н3ю3 22,2 62,8 11,0 3,С 1,0

гаС12 62,6 20,8 10,9 5,7

20,7 49,4 14,6 11,7 3,6

4,С 62,9 22,5 6,6 4,0

31,4 16,8 47,4 2,2 1,1 1,1

о Ъ 0! 2 63,0 26,1 5,5 •3,4

ЕпС^.г^о СеС13 83,о 2,3 13,7 0,5

0,3 69,7 19,8 6,3 3,9

■44,5 37,0 10,5

яъо13* 69,9 9,2 20,9

. зпС12 гн^о 59,3 9,4 о0,0 0,9 0,4

к Реакция проводилась в метаноле.

Из приведенных данных в табл. б и 7 видно, что при использовании йьС1^ и £пС12'2Н2с наиболее предпочтительное комплексо-образование б случае метил-с/- и ^-Ь-рамнопиранозвдов и метил ликсопиранозида имеет место матду цис-вицинальными гидроксилами при С-2 и С-3. Однако подобные комплексы обрадуются и для метилч/-и !>>-■ 1>ксилопиранозидоз (табл. 7), хотя цис-вицинальная система гидроксилоз в этих гликозидах отсутствует. В случае метил-^-Ь-г.рабинопиранозида набледается образование комплексов при ГО-2,3 и НО-3,4 примерно в равных отношениях* что видно из соотношения

Таблица 7.

Частичное метилирование метилгликовидов диазокете.ном.

Условия

реалии - !* ! » !" I 2.3 2,4 1 15.' I 2,3,4.

1 2 3 •+ 6 8

п3во3 58,3 18, о 20,7. 2,2

БЪСЗ.^ 5,3 78,7 3,6 11,5 ¿,0

ЗЪС13 5,0 81,3 12,4 0,4 0,9

ааС12.2Н20 72,7 15,0 1-1,0 0,9 0,2

СоС1? 4?5,0 48,1 8.Р

¿-З-ХуЯ.

Н3Б03 &2,5 13,2 16,5 5,9 1,7 0,1 0.1

ЗЬС13 64,9 2,2 30,8 0,5 1,5

Бпсяр-гя^р 33,7 2,2 12,2 1,0 0,6 0,1 0,?.

СеС1, У 72,?. 11,7 6,8 7,3

1-3-луХ I-

Н,ЗЭ, 1С0,0

39,* <!,В 7,5 1,3

епс^-г^о 80,3 3,4 7,7 0,4- 0,9 0 ,3

СеС13 40,8 37,0 10,2 10,0 1.1 0 .9

'-Ь-Ага ,-- —I

н3во3 2,3 0,5 55,3 53,8 5 Ь7

БЬС15 66,2 7,2 15Л 0.1

ЗаС1, -2:1£ 79,9 1,4- 10,7 5,2 ^ > 5 1,5

1.5,0 37,6 15,5 5,3

-Ь-а га —— I и ^

'у30? 35,3 У/,С: 21,1 1,0 V 9

67,0

■л, в

а-зсхг ?0,Ч V > " » ^ '1 Г-> 7 -

Продолжение таблицы 7

Условия ый- ! тилирования | 1 Метиловые эсли; ри, %

; 1 2 I ^ 1 3 1 ° 1 4! 2,3 | 2,4 | 3,4 } 2,3,4

¿-Ъ-Ъмо

3 ? 8ЬС1, впс^-г^о 0,7 79,2 9,2 8,9 1,0 1,0

70,1 2Д 23,8 0,4 3,3 0,2 0,1

71,0 3,8 19,6 3,5 о,е 0,7 0,5

СсС15 39,4 29,8 12,0 17,5 0,6 0,4 0,3

«¿-В-Ьух -1

31,3 58,4 7,4 2,9

БЪС1, 47,2 19,2 29,0 3,4 1.0 0,2

ЗпС1|. 2^0 66,8 8,0 2343 0,2 г,з 0,4

ОеСХ, 6,6 34,6 34,7 16,7 5,9 1,5

мопэметьловых афиров (табл.7), При метилировании мотм-у.^-1-ара-биноппрснозида в присутствии ЗЪС1^ преимущественно образуется комллекс с Н0-3,4, а при использовании ЗпС12 -2^0 преобладает коыпгехс с КО-2,3, что следует из пропорций монометкловкх эфчрсв (табл. 7). В случае метил-^-Ь-фукспиранэзида видно (табл.7), что з присутствии БЪС1 ^ преобладающа! является комплексообразова-ние с участием 110-2,3, причем этот комплекс с высокой регкоселек-тивностьи образует 3-0-ыетиловий эфир. Замена катализатора на

:-н2о приводит к образованию комплексов с НО-2,3 и Ю-3,4 в равных количествах.

При метил фэвании метилглькозидов в присутствии СеС1^ только в случае с метил-«'- и ^¿-раиногофанлзндаьм в когллексообрязо-гглгие вовлек-штед 110-2,3 (гг.бл. 5,7), у -.ют^лышх случаях в к?мп-лскссобрчзоБглнн с атомом цари,- участие все гидроксилч.

Однако региоселектившсть наблюдается только при метилировании метил-/5-з-ксщтопиралознда (табл. 7), что дает 2-0-метило виГ: эфир в количестве 6% ст фрэкии монометиловых офиров.

Известно, что сахара в водных растворах образуют комплексы с борной кислотой за счет координации цис-вицинальных гнд-роксилов. Табл. б и 7 подтверждают, что в диоксане также имеет место зта закономерность. Расстояние между атомами кислорода, связанными с тетраэдрическим атомом бора, как известно, равно 242 пм, что меныг.о аналогичного расстояния для олова. Поэтому борная кислота катализирует метилирование только цис-вицинальных групп. В метил-^-д-ксилопиранозиде такой системы нет,и комплек-сообразование не имеет места (табл. 7). Интересно отметить, что исключением является метил-^-Ц-ксилопираноз ид, где все гидрок-сильные группы участвуют в комплексообразовании (табл. 7).

Интерпретация данных частичного метилирования метилглико-зидов - довольно сложная задача. С цельи её упрощения мы изучили частичное метилирование ряда монометиловых эфиров метилгли-козидов (табл. 8). В этом случае возможно образование только одного циклического комплекса, и характер его раскрытия (региосе-лективность) определяется отношением образовавшихся ди-О-метило-вых эфиров. При метилировании меткл-2-0-метил-о/-Ь-рамнопиранози-да в присутствии БЬС1^ отношение констант реакционной способности третьего гидроксила к четвертому равно 7,5. Низкую реакционную способность Ю-4, вероятно, можно отнести за счет стеричес-чкого препятствия со стороны метильной группы при С-5. Метплиро- ■ вание метил-4-0-метнл-^-ь-рамнопираноз1!да в аналогичных условиях дает отношение : К3 «* I : 2,7. Можно предположить, что низкая реакционная способность Н012 связана с меньшей пространственной доступностью аксиального гидроксила. В то же время метилпро-

Таблица 8.

Частичное метилирование моноыетиловых эфиров метил-гликозидов диазомеганок в присутствии зьс.ц и СеС1;.

Соединение

| катализатор | _

Метиловые г,фиры.

.1*3.

2 Д

3,4 2,3,4

Р^е-у-Ь-НЬа ЯЪСХ3 СеС15 87,9 66,8 5,3 11,6 2,4 1,6 4,4

'Же-г^-Ь-ЯЬа Ьс01^ ' СвС13 78,9 27,0 10,0 72,8 11,1 С,2

БЪС13 СеС15 70,9 47,9 12,3 46,9 16,8 5,2

4-Г.е-</-!.-Дха СеС13 61,3 73,5 22,7 20,1 14,0 6,4 2,0

йоС1, СеС15 76,3 80,5 18,3 ■ 12,9 5,4 3,6

Жг-р-Ъ-Ших БЪС15 СэС15 61,5 96^3 за,5 3,7

гИе-^-Ь-Вис БЬС15 ВЪС13 33,2 61,3 3,5 5,5 79,5 17,0

вание иетил-4-0-ыетил-,^-Хг-раынопиранозида е присутствии Се01^ дает практически одинаковые пропорции ди-О-метиловых эфиров.

Метилирование метил-й-О-метил-о^-Ь-араби.нопиранозида в присутствии БЬС1^ демонстрирует близкую реакционную способность третьего и четвертого гидроксилов, несмотря на то, что последний имеет дксиальную конфигурацию, а использование СеС1^ даже увеличивает реакционную способность четвертого гидроксила по сравнению с третьим. Еще более интересный пример дает метилирование мет1!л-4-0-иетил-с/-Ь-арабинопираноэйда в присутствии БЬС]^. В этом случае ' Кд = 3,7, хотя оба гидроксила являются эквато-риальниш.

4

Подобный результат имеет место при метилирования матил-4-О-метил-^-ь-фукопиранозтща - К^ : ¡<3 = 4,7. Однако результаты метилирования метил-2-0-метил-о<^ь-фукоггаранозида (Кг, : Кд = 11,1:1) находятся в противоречии с результатами для метил-2-0-;/-1,-арэ- ■ бинопиранозида, и это трудно объяснити, учитывая одинаковую тон-фигурацию этих молекул. Метилирование метил-З-О-кетил-уЗ-^-кс;;-лопиранозида в присутствии ;;ъа1, и СаС17 дает =6,5 : 7

и 3,4 : I соответственно. При метилировании метнл-2-0-метил-^>~х,-рамнопиранозида в присутствии оЬ017 или СаС1^ единстзитгсм продуктом реакции является 2,3-ди-О-метилоБиГ; эфир.4

Как видно из табл. 7, при метилировании метил-^-ь-раылэ пи-ранозкда в присутствии бьсз.^ первоначально в реакционной смеси преобладает 2-0-метиловъ(й эфир, содержание которого достигает 78,'75. По мере пр-отекания реакции основным становится 2,3-ди-0-метиловый эфир (31,3% от общей смеси)'. Это хорошо согласуется с даннши табл. 8. Вряд ли можно объяснить подобные примеры рэгио-селективности сферическими препятствиями для реагирущих молекул.

Более вероятными являются стереоэлектроннне и глектростатические оффекты, определяющие подход СН^"1" к координированному кислород-ток/ атсму мзтчлглихоэида.

Для сравнения реакционной способности первичных л вгорнчг-гт гидроксипоз исследовали метилирование 1,2-изогга°¡пил ксилофурднозк и метил-^-Ь-арабинофуранозида (табл. 9).

При метилировании 1г присутствии хлористого олова сеноггпгм продуктов реякцпп бил метилоянЯ эфир. Это свидетельствует о легкое*1/ абрржчкпгея кс яокса атома олова с КО-3 н Ш-5- а боодяй гц^стран^г-:--':'«-? д. >. тупности перги-лого гедрокс!И1. 3 то ле время пр^сттл'-нтг расположение г:<дро!"п!'*ьмг>: групп н «рчЛиигфурлк-::!»'¿с !'•< С.'----.- ■•

приятствует образованию циклического комплекса. Это подтверждается меньшей скоростью метилирования по сравнению с 1,2-иэо-пропилкдон-^-ксилсф.уранозой и невысокой региоселективьзстью с некоторым предпочтением для первичного гидроксила (тэбл. 9).

Таблица 9.

Частичное метилирование 1,2-шопротш1ден-^-в-кс1'лофураиозы и метил^^-арабинофуранозкда диазошташм в присутствии катализаторов - кислот Льюиса.

Условия метили- !

рованил

Метилосно офирн, %

СН0Ц?/БаС12 (¿-Ъ-Ата. Г

сн2л2/зъс15 са2н2/й3вй5

СЛ2112/СеС13

1_=_15 ' ? ! ? I г,? | 2,5 I

13,9 85,6 . 2,5

•34,7 8,7 3,2 19г0 1,6 10,8 7,1 9,9

59,0 10,4 ?,5 1У,3 0,3 2,2 1,3' 0,2

72,8 7,4 4,8 12,0 0,4 1,4 1,2 -

1,6-Ангидро-$-.и-глюкопираноза представлязт модель, где все гндроксилы занимают аксиальное положение,и конформацио I тно е равновесие невозможно. Розультати метилирования ангидроглькозы в ' присутствии Бг.С12-2Н2о демонстрируют преимуществв^шсе образование 2- и 4-0-ьютилового эфирос (табл. 10), что мочою объяснить существование;.. промежуточного комплекса ионов олола с 1.0-2 и Ю-4.Низкое содержание 2,4-ди-0-иетилогого ;ф*ра говорит о тем.

3

что образовавшиеся 2- и 4-0-метиловые эфиры б дальнейшем с меньшей скоростью вовлекаются в метилирование с участием ¡10-3. Это может быть объяснено образованием менее стойкого комплекса мезду етомололова и атомами кислорода при С-1 и С-3.

Метилирование ангидроглюкоэы диазометаном в присутствии зьсх (табл.10) дает противоположные результаты.Основным компонентом среди мокометиловых пфиров является 3-0-метиловый эфир,что может быть объяснено образованием комплекса атома сурьмы с 0-3 и 0-1. Метилирование 3-0-метилового эфира (табл.10)поназывает равную реакционною способность Ю-2 и Ш-4.Метилироваьие 2- и 4-0-мети-лового эфиров в присутствии БЬС1^ протекает со значительной ре-гиоселективностыо по отношению к Ю-3 (табл.10),что свидетельствует в пользу образования промежуточного циклического комплекса с участием атома сурьмы и атомов кислорода при С-1 и С-3.

Таблица 10.

Частичное метилирование 1,6-ангидро-^-ц-глюкопиранозы и её монометиловых эфиров диазометаном в присутствии хлоридов олова и сурьмы.

Условия метили-

.Метиловые эйиры. %

рования ! - 2 3 4 2,3 2,4 3,4 2,3,4

А^-СИс

СН^/бпС^ 20,4 22,2 13,5 21,7 13,1 2,0 6,8 0,3

СЯ^/БЪС!^ 61,2 4,8 20,3 5,1 3,6 0,8 2,7 1,5

СН21Т2/8ЬС13 72,2 20,8 3,9 3,1

ЗЫе-А^-01с

1 СН^/ВЪС!^ 82,8 7,8 7,4 2,0

СН^/во«^ . 76,1 6,1 13,9 3,9

Ноино предположить, что высосал региоселективность при образовании 3-0-мзтиловых эфиров для ьиогих метилглико.зидов связана с более высоким отрицательным зарядом на атоме кислорода при С-3. Это предположение хорошо согласуется с высокой реакционной способностью гидрсксила при С-2 в метил-^-1,-рамюпира-

р

нозоде. ^нептно, что в атсй молекуле за счст Д -эффекта на атоме кислорода сосредоточена высокая электронная плотность. В результате содержание 2-0-ыетилового эфира в реакционной смеси прк метилировании £-рамнозида диазометаном б присутствии ¡ЗЪС!^ достигает 73,'ь (табл. 7).

Для проверки предположение' о важности на конечной стадии реакции электростатических взаимодействий мы провели метилирование метил-^-ь-рамнопиранозида в. метаноле, в присутствии и йяС12*2Н2с. • Как видно из табл. 6, при метилировании в'присутствии зъс:ц в дкоксано и метаноле К^ : &> составляет 2,8 и 2,3 соответственно, а в присутствии ЗаС12 2Н20 равно 6,0 и 3,2 соответственно. Использование более полярного растворителя (метанола) должно приводить к больпему экранированию заряженных атомов. Следовательно, уменьшение региоселектигности при переходе от диоксена к метанолу указывает на определяющую роль электростатических взаимодействий при раскрытии комплексов метилгли-козида с переходным металлом.

Ка основе полученных данных предложены удобные препаративные рогиссэлективнне синтезы метиловых эфиров ряда метилгликозидов (табл.11).

Учитывая, что метилирование метил-и£-о-ксилозида диазометаном в присутствии протекает рагиоселективно с высоким выходом 3-0-ыетилового эфира, мы.распространили эту реакция на ряд моносахаридов гомоморфны:: (¿-З-ксилозо .В результате с высоким вы-

ходом были получены 2,3- и 3,6-ди-0-метиловые гэфирн метил-^-о-глгакопиранозида из 2- и 6-0-метилевых пфиров метил-^-Э-глюкопи-ранозида соответственно. Кроме того, синтезирована 3-0-чэтшовнэ афиры метил-у'-ц-гликозидов и-глюкозы, в-хинобозн и метилового яфира д-глюкуронсвой кислоты (табл.II).

Таким образом видно, что предлагаемый подход нссит общий характер и ыодсег бкггь использован для всех гомоморфных изученным моносахаридов. В то же время необходимо отметить, что региосе-лектиный подход, основанный на активации гидроксильннч групп,хотя и оказывается полезным, не может привести к направленному синтезу разнообразных метилированных Сахаров. Для решения последней задачи перспективнее использовать хроматографическое разделение метиловых эфирее,образующихся при частичном метилировании моносахаридов .

Таблиц,а II.

Региоселектквный синтез метиловых эфиров мет ил г л и с з идо в • (СЛ^Г2 ^ З'оС!^).

Исходный глчкозид | Продукт реакции { Выход, Ч>

о/'-Ь-йЬа З-О-^о-рС-^-ЯЬа

,>'' -Ь-Уис 60

р -Ь-Ага 5-С-ие-/3-Ь-Ага

59

-Л-Ьух

-Ь-НЬа 2-С-Ие-^-Ь-Епа

70

с^-п-аго 2-и-Э~Ху]. 52

З-ц-Иъ-Х-Э-йХо .

62

6-0-Це —¿-В-й 1о 5,6-0 -Но 0-01с

и-З-Цих 5-с-.:о—/'-л-ФЯ /■V

С'

катализатсп

2. ПРЕПАРАТИВНАЯ ХРОМШГР/ЙШ МСТ1ШОВЫХ 8ФИГОВ ЫОНОСАХАРЗДОЗ.

Разделение проектов частичного метилирования моносахарвдэв, как уже говорилось выше, могло бы стать альтернативным синтезу подходом. К сохшлониа, невозможность предсказания хроматографи-ческих свойств конкретных соединений является основным препятствием при использовании-подобного подхода.

Моносахариды и их производные, содержащие свободные гидрок-сильные группы, обладают, как правиле, высокой полярностью. При использовании силикагеля в этом случае паблюдается нелинейная сорбция и образование так называемых "хвостов1'. Уменьшить полярность моносахаридов можно цутем модификации свободных гидрок-сильных групп. Однако трудно надеяться, что метиловые эфиры и в виде модифицированных производных, в общем случае, удастся разделить с помощью одной хроматографической процедуры. Подвижность метилированных Сахаров при хроматографии на силикагеле зависит от числа свободных гидрокс.ильных групп, поэтому первым этапом ыожет быть разделение смеси метилированных Сахаров на фракции одной степени замещения. Последующая модификация метиловых эфиров одной степени замещения позволяет получить набор соединений с меньшей полярностью, которые могут разделяться с помощью ЖХ и ГЖХ.

Из разнообразных производных для модификации метилированных моносахаридов были выбраны ацетаты. Это определяется легкостью процессов вцетилирования и деэацетилирования, использованием ацетатов метилированных метилгликозидов при структурном анализе. Другое важное преимущество ацетатов - их высокая летучесть, что нзобходимо для препаративной ГЖХ, а также низкая полярность, что позволяет, используя малополярные'системы, добиться хорошего

разделения смесей ацетатов метилированных Сахаров жидкостной хроматографией. В процессе выполнения этой работы были выяснены возможности ЖХ и ГЖХ при разделении метилированных Сахаров.

2.1. Препаративная газожидкостная хроматография (ПГЖХ) метиловых эфиров моносахаридов.

Для разделения смеси ацетатов метиловых эфиров метил-уз-о-ксилопиранозида использовалась колонка (200 х 1,4 см), содержащая 10% бутандиолсукцината. Нагрузка на колонку достигала £00 мг смеси без заметного уменьшения эффективности разделения. Результаты препаративного разделения с помощью ГЖХ приведены в табл. 12.

Результаты препаративной ГЯХ ацетатов метиловых эфиров метил-^-ь-рамнопиранозида приведены в табл.13. На колонке с Q£-i наблюдается неполное разделение 2,3- и 2,4-ди-0-метилввых эфиров, а на колонке с ЕДС плохо делятся 3- и 4-0-метиловый эфиры. Вследствие этого на препаративной двухметровой БДС-колонке 3- и 4-0-метиловые эфиры выходили одним пиком. Поэтому колонка с ОМ-1 использовалась как вспомогательная, только для разделения 3- и 4-0-метилового эфиров.

Для получения 3- и 4-0-метиловых эфиров метил-,?/- Х^рамнопи-ранозида использовались два способа.. Первый заключался в том, что продукт частичного метилирования по методу Пурди метил-^-íi-рамнопиранозида с наибольшим содержанием 3-0-метилового эфира (26%) подвергался периодатному окислению. Все компоненты полученной смеси хорошо разделялись ПГЖХ на БДС-колонке. По второму способу смесь 3- и 4-0-метилового эфиров рамнозида, полученную с помощь» ПГЖХ, подвергали Ш на колонке с Полное разде-

ление в этом случае достигалось при нагрузке на колонку 100 иг смеси.

Таблица 12

Препаративная ПКХ* ацетатов метиловых эфиров метил-^б-в-ксило пираноэ ида.

Выход по методу метилирования

метильнкх групп | нение ! ! 1 нт I т ! !СН31Д)аО/Д!.&А ! 2ЗСи/1ГаОН ! СЯ51/А£20

! мг ! % ! мг I % ! мг ! %

2,3,4 УIII 0,19 27 4,5 НО 18,3 2 0,3

2,о XIII 0,64 56 9,3 31 5,2 8 1,3

2,4 + 3,4 ХВ'+ХУ 1,00 105 17,5 151 25,2 20 3,3

г X 1,72 53 8,8 46 7,7 68 п,з

з XI 2,83 40 6,7 0,5 36 6,0

4 XII 2,28 19 3,2 30 5,0 43 7,2

- IX 4,72 27 4,5 - - 186 31,0

* Нагругка на колонку (2СС к 1,4 см), содержащую 10% БДС, составляет 600 мг смеси ацетатов ыятиловых гэфирос- метил-5-£>-ксилопиранозида.

** Времена удерживания относительно ацетата 2,4-ди-0-метилозого эфира (Х1У) - 5,8 мин, БДС (10%), 160°С.

г\>

а>

Таблица 13

Препаративная ГЖХ* ацетатов метиловых сфиров метил-^ь-рамнопиранозида.

Полояе- • !Соеди4-_

ния ме- 1нение1 тильных ! ! RII_ групп 1 1 I I ! !

%*

Выход по методу

! |

{ ( Cd,.)pSO^/HaOH bri^I/Ag^OtHJO^

| колонка с БДС j колонка с БДС

мг

мг

%

смэсь J- и 4-и-метшю-вых гаЫров__

колонка с 0,?-1

I мг

2,3,4 3,4 2,4 2,3

3

4 2

УШ ХУ Х1У XIII

XI XII X IX

0,21 0,34 0,76

0,15 0,31 0,85

24 9

34

1,00 1,00 33 (6,4 мин) (2,3 мин)

1,41 1,63

1,56 2,40

2,25 2,56

3,23 3,20

32

53 2

8,0 3,0 11,3 И,О 10,7

17,7 0,7

I

4 13

26

130

0,3 1,3 4,3 8,7

43,3

30

31

30,0 31,0

55

* Нагрузка на колонку (2С0 х 1,4 см),содержащую 10% БДС, составляет 300 мг.смеси ацетатов метиловых эфиров метил-У-Хг-рамнопиранозида. Нагрузка на колонку (300 х 1,4 см), содержащую 3% qf-t,составляет 100 мг смеси .Температура термостата 150°С, испарителя - 30С°С.

** Колонки с БДС (10%), 140°С и QF-1 (Ж), 150°С.

2.2, Препаративная жидкостная хроматография метиловых эфироз моносахаридов.

Для разделения продуктов частичного метилирования моносахаридов использовалась колоночная хроматография на силикагеле. 3 этом случае за счет различий в хроматографической подвижности метилированных производных в один прием быки разделены смеси метиловых эфиров метилгликозидов (И)-ксилопиракозы, ^-Ь-рамно-пиранозы, -арабинопиранозы, -/-¿-арабинофуранозы и такке 1,2-и.з опропилиден-.^-ц-ксилофуранозы.

Дяя получения метиловых эфиров метил-2-ацетамвдо-2-де-зокси-/-1>-глюког1ираноэида использовалась другая стратегия. Поскольку метиловые эфиры гляжозаминида одной степени замещения между собор не разделяются (табл.14),то смесь метиловых эфиров, полученную при метилировании исходного глюкозаминида,разделяли на фракции одной степени замещения. Фракции моно- и ди-0-мзтило-вых эфиров глюкозэыикида ацетилироЕали и рехроматографировали на колонке с силикагелем. Ввиду значительных различий в хрсмато-графической подвижности (табл.14) достигалось полное разделение ацетатов метиловых эфиров глюкозэыинида на дециграммовом уровне.

1Х.Е1=Н2=Е3»Ао

У111.н1-н2"а3»сн:

3

Таблица 14

Хроматографическиз свойства меот.л-2-ацетамидо-2-дезокск-(¿-й-глюкопнрзноэида л его кетилсвих гфирсв.

Положение

п ?--] !----

метильных I Соединение ! я, ! Соединение ! А,

групп__!_! 1_I___!__^_

I 0,13 IX 0,65

3 II 0,28 X 0,40

4 III 0,31 XI 0,65 б 1У С,32 XII 0,55

3,4 У 0,52 XIII 0,4?

'3,6 У1 0,51 Х1У 0,39

4,6 .УН 0,52 ХУ 0,58

3,4,6 УШ 0,50 УШ 0,50

* Значения приведены для ацетатов.

Лцетилиролакие и дезацетилированне, являясь простой операцией, в дальнейшем использовались нами как один та ссноммх приемов п схемах разделения сложных смесей.

Аналогичный подход тапользовался для разделения иетилопчу

эфирог метилглияоскдов ¿-1-фукспиранозн, ^-Б-глгакопигячозн, Г,-а-

>

галгктспира;тозы^-Б-ианнопираюаы, а текке Х.б-зкгидро-й-зьглю-копирацозы. В этих случаях, как правиле, достигалось полное разделение метиловых пфиров едной степени замещения в виде зцетггзг-. ПГйХ использовалась для разделения мялскочпонентгл'х сг.'ссей с больпиш различиями во временах удегчиван^'я. Степень хр^узт'.гп.!-фнческого извлечение при лХ доотигяетл,-9С>', ярн ¡Глл л ЪО-'Л/*.

■ Ляя получение гсех метило е^ч &}чроп упонлвкх кисло г пгид.г.-лек синтез, оемзвпнний на пртая'.пчг'есксм скислдн^л ^.-г.-.^тг^о ■.!•• дгг кислородом б ирнсугстпии плат::ын на утло, когер- е тгр- -гз^-:-.■ илбкрлтельго с участи?« нздаичит." г.гд;> кс-.'ла.

гликозид уронопой кислоты под действием метанола переходит в метиловый гфтр, который затем подвергают частичному метилированию с последующим разделением продуктов реакции с помощью КХ.

Используя различия в .хп,ч;ат',грпфическсй подвижности метило-

лось получить все метиловые эфира, кроме 2,3- и 2,4-ди-О-метило-еого рфиров, но последние легко кристаллизуются из обычных растворителей.

метил (метил-^-а-глюкопиранозид) уроьата в тонком слое (табл.15) позволили разделить их на фракции равной степени замещения и частично внутри фракций, т.е. сразу получить 3-, 2,4-ди и 2,3,4-три-О-метяловкй пфиры с хорошим выходом. Большие различия в хро-матогррфической подвижности ацетатов 3,4- и 2,4-ди- и 2-,3- и 4-моно-0-метилового эфиров, соответственно, обеспечивают количественное разделение г»тих двух смесей на грзммовсм уровне.

вътх офиров метил -1>~галактопиранозид) уроната, нем уда-

Рязличия в хрочатографической подвижности метиловь'х ефиров

х.н'-а^-н'-н

■ч.аг.рЗ.

IX.Н =Е -Р.3»Аа

ССОСИз

3

XIV. Е1 -й5=СН5 , К2--Ас 2V.fi1-Ас,а2«к5-сц.

уш. к1

Табл. 15

Хроматографические свойства метил (метил-./-В-гляшопиранозид) уроиата и его метиловых пфиров.

Положения метилькьгх групп 1 Соеди- ! 1 нение ! I I V ! ! Нт ! Т (Соединение ! ! .. ,,, 1 ! йФ ! "

_ I 0,21 3,43 IX 0,44 1,67

2 II 0,33 1,70 X 0,33 1,27

3 III 0,36 1,00 XI 0,45 1,05

4 1У 0,33 1,14 XII 0,53 0,92

2,3 У 0,55 0,51 XIII 0,38 0,59

2,4 ■ У1 0,51 0,57 Х1У 0,40 0,78

3,4 УН 0,55 0,38 ХУ 0,59 0,35

2,3,4 УШ 0,78 0,19 УШ 0,42 0,19

*ТСХ в системе хлороформ-метанол (95:5) ТСХ в системе этилацетат-гексан (1:1)

Времена удерживания относительно 3-0-метилового эфира (III)-11,1 мин, НПГС (1,5«), 190°С.

**

Аналогичным путем были разделены и метиловые эфиры метил (ме-тил-^-в-маннопиранозид) уроната.

На основе проведенной работы становится ясным, что оптимальным подходом для получения метилированных Сахаров является частичный синтез с последующей ЖХ на силикагеле для разделения продуктов метилирования по степени замещения. Ацетилирование соединений одной степени замещения и последующая рехроматографня, как правило, обеспечивает полное разделение всех изомеров. Препаративная ГЖХ может использоваться в качестве дополнительного метода для разделения метилированных Сахаров с большими различиями в хроматографической подвижности.

Предлагаемый нами подход представлен на схеме:

мопс—

сахо-рад

С

частичное ме'1 илиро-взкие

¡ИХ по фрак-! -Г|ЦИЛМ одной 1 степей) [мегз

лям одной , гепени за-эгцения

апел- ИЛ пфиров лгнх

лиро- едкой сте-

вание пени заме-

щения

Он кокет быть распространен на другие модели в том случае, когда полуацетальшй гидрокскл защищен и образование аноиеров невозможно.

Все полученные соединения были хроматографически чистыми, идентификация проводилась с помощью спектроскопии ПМР^С.

3. ЧАСТИЧНОЙ ДЕЗОКСЙГЕНИРОВАН/Е ЖШГЛИКОЗЩ®.

Предложенный для синтеза метилированных Сахаров подход может быть распространен и на синтез дезоксисахаров. Чтобы избежать ыьогостадийности, связанной с предварительной защитой гидроксильньг/.групп, мы использовали частичное дезоксигениро-вание ацетатов метилгликозидов-6-дезоксигексоз сольватирован-нкми электронами в гексамзтаполе, содержащем 3% воды, с последующей хроматографией полученных дезоксисахаров. Различия в хрсматографичоской подвижности полученных дезоксисахаров (табл. 16) позволили с помощью колоночной хроматографии полностью разделить продукты дезоксигенирования метил-¿Дь-Рщ/нэгшранозида и получить в индивидуальном состоянии метил 2,6- и 3,6-дидезок-си-^-гС|-8рабино-гексопиранозиды и метил 4,6-дидезокси-^-ь-ликсо-гексоппранозид. Общий выход метилгликозидов дидезоксисахаров достигает 40%.

Частичное дезоксигенирование ацетата метил-/5-1)-хиновопи-ранозида и ввделение продуктов реакции проводили аналогичным гутем, за исключением того, что к реакционной смеси постоянно добавляли воду в ходе рзакции. сто предотвращало образование

С^ 0(Н3 I. ¡11«н--

М.--|/ ШЛ11-Е5.ОН,Й2=Й

я1 Я Х7.й1-йг--0'11к3=к

•/.я"1 »к2=кг'-он xx. в1 =я2=й?=слс

ОС'Н, /117 о ^

5 ух.нп=л,к'-=и-/=он х.л »й^-оас

уш . я1 =а2--сд, я5=н 311 .в1 =р.2»сас, а5 -н

Таблица 16.

Хроматографические свойства дидезоксллетилгликозидов -продуктов дезоксигенировакия ацетатов иетилглякоаидоэ /¡¿-Ъ-рамнопиранояи и ^П-з-хиновопираггазида.

дезоксизвена 1 V |Соединзние| а/ ¡Соединен"

2,6 II 0,21 .VI 0,25 X

3,6 III 0,15 УН 0,22 XI 0,об

4,6 1У 0,24 УП1 0,31 XII

и, о'»

'_ ТСХ в системе хлороформ-кетанол (5П:5) ТСХ в системе зтилацетат-ге."сак (1:1).

продуктов деструкции к способствовало увеличений вихода дщ'.с-зоксисахаров до 55£, Однако ноллчие б реакционно;! смг-с:; бол-:''.-нежелательно, так как она замедляет реадаш и практ-нпоки ¡.::\н7 остансгить её. Ьоьтхентрлцг.я исходного анеггата г гэкс-'л^тар'лл мочгот бьть доведена до б'о ичрг.с*я!<.1я нп ■"'.;•!'?■ г

ра.'злоления,

'Лдгостнор хссиатзгрл?;'',? м:< кръ.грг.г» част- (■'-

рованпя ацетата метил-р-ц-хиновопиранозида был выделен метил-3,4-д11-0-ацетил-2,б-дндезокси-^-в-арабино-гексош!ранозВД и сумма ацетатоЕ метил-3,6-дидезокси-уз-о-рибс- и 4,6-дидезокс;1-уЗ-1>-ксило-гексопиранозвдов. Последняя смесь после дезацетилчрова-ния с учетом больших различий в хроматографической подвижности (табл. 16) была легко разделена на индивидуальные соединения.

Так™ образом, видно, что предлагаемый подход может служить удобным методом получения трудксдостушшх дезоксисахаров.

4. 13С-Я:,1Р-СПйКТР0СК0ПИЯ ШНОСАХАРДЦОВ И ИХ МЖШИРО-

ванных производных.

13

В работе приведены в качестве справочного материала С-ЯЫР спектры изученных метилированных Сахаров. Представлялось интересным рассмотреть изменение химических сдвигов при метилировании 1,6-ангидро-г;- й-глюкопиранозы (табл. 17) и 1,2-изопропилиден-^-X) -ксилофуранозы (табл. 18).

в первом случае наблюдались следующие закономерности: ^-эффекты ео всех случаях были в интервале (-9.0 - +9,5 м.д, р> -Эффекты лежат в интервале от -1,9 до -3,7 м.д., причем наименьший у}-эффект на С-1 при метилировании НО-2 равен (-1,8) - (-1,9) м.д., наибольшее значение ^-эффекта на С-4 - при метилировании Ш-3 (-3,2) - (-3,7) м.д.; в остальных случаях оначення/Я-гйфек-тоь лед-ат в интервале от -2,2 дс -3,3 м.д. ^-Эффекты невелики и лекат ь интервале от чО,1 до -0,5 м.д. Наибольшего значения они достигает при метилировании НО-3 на С.-1 и С-5 (от -0,2 до -0,5 м.д.). В остальная случаях они л окат в интервале от чС,Г до -0,3 м.д.

Кет/л¡:роган,:е г.'лроксилов 1,2-;:о ^проп/лид^н-^-^-ксилофу-

Таблица 17.

Химические сдвиги С-ЯМР 1,6-ангидроглюкопиранозы и её метиловых эфиров.

Положения ме-тильнкх групп ! С1 1 | С2 I 1 I Ш ! « | С5 | } С6 |ме0-2 ! \ МеО-3 | МеО-4

А^-^З-ХМЯср 102,2 71,0 73,3 71,6 77,0 65,9

2 100,3 80,3 70,3 71,6 77,0 65,9 58,0

3 101,8 68,7 82,7 68,1 76,5 65,5 58,4

4 102,1 70,9 70,7 60,8 74,3 65,8 57,3

2,3 99,9 77,8 79,4 57,9 76,7 65,5 57,9 57,9

•2,4 100,2 80,2 68,1 80,9 74,0 65,9 58,1 57,3

3,4 101,7 68,7 80,0 77,6 73,9 65,5 58,0 57,0

2,3,4 99,9 77,8 77,1 77,3 73,8 65,6 58,1 58,1 57,1

Таблица 18.

Химические сдвиги *^С-ЯМР 1,2-изопропилиден-^-п-ксилофуранйзы и её метиловых эфиров.

I

Положения ме-' тильных гпупп | С1 ! \ С2 [ СЗ ! 04 ! « IС-чотвер-!СН3,ацэтонид-!тичные !ные '|МеО-3| ¡Ые0-5

- 105,1 85,4 74,6 81,8 60,С 113,2 25,8;26,3

3 105,2 84,2 81,9 81,4 59,7 113,2 25,9^26,3 58,2

5 105,1 85,3 74,8 80,4 70,7 113,2 25,8;26,3 59,2

3,5 105,2 84,4 8Т,Ь 79,6 70,4 113,2 25,9;26,3 58,2 59.3

ранозы (табл. 18) приводит к сдвигу в слабое поле на 7,0 - 7,3 м.д. длп С-3 и 10,7 м.д. для С-5 ( ^-оффекты). Сигналы 0-2 и С-4 при метилировании гадроксила при С-3 смещаются в сильное поле на 0,4 - 1,2 м.д. (^-эффекты). При метилировании гадроксила при С-5 наблвдается сдвиг сигнала С-4 на 1,4 - 1,8 м.д. в сильное поле, ^-сффекты невелики и лекат в интервале от 40,2 до -0,3 м.д.

5. ИСПОЛЬЗОВАНИЙ ШНОСАХАРЗД-ШХ ШДОЬ2Й ДЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКИ УГЛЕВОДНОЙ СПЕЦЖИЧШСТИ ЭНДОГЛДСАНАЗ И ЛЕКТИНД ИЗ МОРСКИХ МОМССКОВ.

Известно, что глюканазы, в частности,р-1,3-эндогл»камазы Л1П и Л1У из морского моллюска Зр1гш1а ЕаоЬ&х^пепв^е ' и ЛО из СЬ1ад1у£-. а1Ы<1из обладают гидролитической и транс-фсразшй активностью. Для того, чтобы выяснить, в какой степени изменение гидроксильных груш сахарного кольца скажется на узнавании сахара активным центром фермента, в качестве акцепторов использовали метилглнкоэиды и их метиловые эфиры, а в качестве субстрата ламинарин. При узнавании происходит образование промежуточного комплекса- й перенос остатка лашнарина на молекулу акцептора. Последующий вторичный гидролиз приводит к накоплению дисахарида. Результаты акцепторной способности производных моносахаридов приведены в табл. 19.

Из полученных данных видно, что для ферментов ЛО, ЛШ и Л1У наблвдается перенос глюкозильного донора на метилгликозиды в-глюкозы и в -ксилозы, но переноса на метилгликозиды с^-1)-манно-он, и ^З-ь-рамнозы и рада других монссахарид.ов не отмечается (табл.19). Это позволило сделать вывод, что акцептором является

Таблица 19.

Акцепторная способность*' метилгликозидов в реакциях транс-гликозилировакия, катализируемых ЛШ, Л1У и ЛО.

Метилгликозид

Ш1

Выход п1 оду стоп трансгликозили-_ррвакия

Л1У

ЛО

йЗ.ср,^

сюр р>

<5и1р Л

гаагор Л. ГЛсНАор 'А вМзС1с.ЛАор г/.

Ху1р</.

\ъ .

й1с идр и. 2КеХу1р р ЗИе'Лср </ Galpo¿ Гиор ^ Иалр ^

411еХу1р р> 2,4ие22у1р П 3*!оХу1р р. НЬар^ Й'аар р, Ага Г Л Агар ^ Агир р

++ + ++ ++ ++ ++ ++ ++

++

++

+ Т +

♦ т +■»•

++ ++

и-

-г "Г ++Ч-

+ +Г ++

++ ++ ++

* Оценка с помощью ТСХ (предел ц/рствктмы-юстн мотодч с ++* ++ 20-Х"!, и-ЛО ',.

.лн^игурапля спхзрш.'х ест :*.т •<•■«, ярирод:<ея: V - я-'сг

«МсЗАв, XVI.,ЧЧ1, -.ач, 2<|1.:д

¿•а,

моносахарид, гомоморфный и-глюкозе, а заместитель при С~5 и конфигурация аномерного метоксила особой роли не чграют.

При определении в молекуле моносахарида зпитопов связывания было найдено, что фермент узнает 2- и б-0-метиловые гфирз з-глмкозы и 2-0-метиловый афкр Б-кгилозы, но не узнает 3- и 4-0-иетиловые эфиры в-ксйлозы к 3-0-метиловый эфир и-глюкозы. ¿1з отого слезет, что гидроксильные группы при С-2 и С-6 не принимают участия в образовании водородных связей с ферментом, водородные связи образуются с гидроксилами при С-3 и С-4. 2то предположение нашло подтверждение в реакции трансгликозилирова-ния с использованием метилгликозидов с^-й-хикоеозы и 2-дезокси-^/-в-глюкозы, в результате которой происходит перенос глюкозиль-ного донора (в данном случае ламинаринолигосахаридов) и накопи ление дисахаридов с 2- и 6-дезокси-■''-глюкозой на восстанавливающем конце вследствие вторичного гидролиза (табл. 19).

Тот факт, что в реакцию трансгликозилирования в качестве акцептора не вступает нет ил о-манно пи рано з ид (табл.19) можно объяснить, предположив, что молекула моносахарида сорбируется на энзиме не в предпочтительной кон^ормации ^С^ а в альтернативной ^С^-конформации, в которой экваториальное положение гкд-роксила маннозы при С-2 создает препятствие для её сорбции в активном центре фермента.

¡■'окно предположить, что из множества возможных конфорнерэв, вероятно, только один обладает способностьююаимодействовать с фермента'.:. К сожаления, определить конформацию реагирующей молекулы трудно. Однако для 1,6-ангидро-р-гексоз конформ&ция "С^ серого закреплена внутренней ангидросвязью. При использовании в качества акцепторов Г.б-пнгицро-^-^гллкозы и I,г,-ангидрэ-у^-;;-пли.тпуы был" показано (табл. 20'), чт? реакция трансглинозили-

1.Е1=я,а2=осн3,н5-оя,в'|'"СЯ2ин У11.Й1-П2=В4=Н,Е3-ОН

И.Е1=0СЯ5,Е2=Н4=Н,Е5=0Я ' ' VIII. н1=си3, н2=н"-=л,в3=сш

1И.е1=н,е2>осн5,н5=сн,н4=он5 хх.в1-н4=н,к2=си3..г3-ои

17.й',=н,е2=осн3,е5-и,й^сн2ол х.н'1-в2=в4«н,в3=осд3

у.к1-)1,н2=00>1;.,е5=оя,н'=ооосн3 х1.в1*в2=в3=н,в4=0я 71.к1=и,н2=н5=ссн3,в4=сн20н

Пунктиром обозначен участок моносахарида, существенна, для взаимодействия с ферментом.

рования, катализируемая Л1У, протекает только с ангидроглюкозой. Зтот факт подтверждает, что для реакции акцептора с ферментом атомы С-3 и С-4 пиранозного кольца моносахарида должны иметь I- и 2)-конфигурацию соответственно. В 1,6-ангидро-^3-1)-галактсье эти атомы оба имеют /.-конфигурацию, и вследствие этого, реакция с ферментом не происходит.

Далее было показано, что 3- и 4-0-метиловые эфиры 1,6-ан-гидро-у]-П-глюкозы в реакцию не вступают, в то вреня как при взаимодействии 2-0-метилового эфира с ферментом наблюдается образованно дисахарцца, но с меньшей эффективностью, чем д.,я ан-гидроглюкозы (табл. 20).

Такиы образом, определен участок связывания в молекуле ак-

Таблица 20

Интенсивность реакции грансглихозшшроБания, катализируемой Л1У *

——- !■■■■■ .....' ■ 114 ■ '■ ■!!■■■■ I ■■ !■ mm I-IH — I ■ Ч—■■ —»■■ I ■ II !■ II I .1 I I I I I ■ — III.

Акцептор Образование продуктов

j трансгликозилировачия

1,0-Ангвдро-/3-1)-глоколираноза (УН) ++

1,б-Анг,'дро-3-0-»!ет!'л-3 -1>-глскопири-коза (IX) '

1,6-Л| пчодро -4-0 -мет ил-ß -D-глюко пира-нсза (X)

1,6-Ангидро-(5->-гзлакгопираноэа (XI)

* Обозначения как в табл.19.

Таблица 21.

Еьксд и свойства-олигосахаридов - продуктов реакции трансгликооилировашя акцепторов 1-УII, катьлизирумюй Л1У.

Соединение |- Выход j № I ** I j Т.пл.С | £0? .град.

I Olciil-vJGlOjbiie 60 16,3 99-101 +81,6(с 0,3)

IX 'Glc;3"-~ 3Xylp1Ue 35 e,8 121-123 -48,5 (с 0,8;

III GIcl'1— 3ÜuW.1Me ад 10,5 •195-196 +•100,3(0 0,4)

III G.T.o)31-» 3Glcß1—^J^uiwllie' 20 4,9 сироп ■»■37,2 (с 1,2)

¿.II Glc/J-i— 3ülc51— 30lcß1 —

JQuiilUe 22 2,9 сироп +26,2 (о 1,3)

IV. Glc/И ~3(2<Ю1с)((1Ие 42 11,0 97-99 +64,1 (0 1,4)

V. ülcj31-» JClctUUe^lMo 1? 4,9 сироп +100,2 (о 0,4)

VI. Glc j31 — j> (2ileül3 У 1üe 32 9,0 132-133 +73,2 (с 1,4)

VII. 30 ?,5 79-81 -57,3 (о 0,5)

16 В расчете на акцептор.

цептогч и предложена вероятная конформация, з которой акцептор вступает в реакцию трансгликоэилировачил. Для гиясчего'н типа связывания образующихся дисэхаркдов реакцию проводил:) а препаративном варианте, используя в качестве акцепторов ряд соединений (1-У11). Образующиеся дисахариды бнли гццелекы кидкоетной колоночной хроматографией на силикагеле (табл. 21) и идент:гфи-

то

цированы С-ЯМР-спектроскопией.

В результате установлено, чго во всех случаях имеет место перенос гликезильюго донора на гидроксильнуп группу при С-3 акцепторной молекулу с образованием р -г.такозидной связи с последующим гидролизом до накопления олигосахаридов, Таким образом, учитывая сложность и многоступенчатость олигосахаридных синтезов, связанных с временными защитами, данную реакции можно предложить в качестве фермэптатквного подхода для синтеза ^-1',3-связанных ¡диегхаридов с остатком о-глюкозь' на нозосота-начлизающем конце.

Для оценки зпитопней специфичности галамюзо-сппциФкчее-кого лектина из шздии Сгелспу Шма егауапиь использовалась реакция конкурентного ингибированил агглютинации хчьток карциномы Ерлиха. Нами бнло показано, чтз ингибирутцей сгоссбкост^э, кроме Е-галзптозы, обладают мзтил-^- и ^-галактог.иранэз'.у?:, е также 2-0-мотиловнй афкр метил-Й-з-галактопчраьтгнда. Б то ае время при использовании метил-^-^-хоткопираьозищч метил-р-х,-арабиноптфанозида, а тагсте 3-, 4- к б-моно-О-лоэтлоиж эмиров меткл-уг-С-галактепнранознда подобий эффект отсутствует, '-к, пт'-х данных видно, чго для связывания узнающего саЯга лектгн? с производными в-галактозу необходимо одновременное наличие свободных .гидроксилынте групп при С-3, С-4 г С -С н »:слокуло носахлркц'л. Использование ие-гтаигровантэс сахг.р«п прлдот-.вллмсв перс11ектипн:д; для определится способа сз.тат-иь--;я у!го с■;{"■—

ту лектнн.ч с гидрэксильнчми Группами моносахаридного звена и •<пг,;ет быть полезным, для Солее тонкой характеристики специфичности лектинов.

вшоды.

1. Получени новые данные по реакционной способности гид-ро!гсил[.них групп метилгликозидов ¡^|3-1>--ксилопиранозы, ^р -Ь-арабичопиртнозы, -ь-рамнопиронозы, а^-и-ликсопиранозы, с^-Ь-'[укопщиюзы, ,1 -ь-арабинофуранозы, а также 1,6-ангидро-^-1>-глюкопиранозы и 1,2-изопропилид:?н-^-1>-1:силофуранозы при метилировании в щелочных и нейтральных условиях, а также диазомеганом в присутствии солей переходных ыеталлоз и борной кислоты.

2. Показано, что реакционная способность гидроксильных гчупп в ;;оноса:'аридр"<: зависит от электронны,с и стеричзских факторов и условий проведения реакций. Реакционная способность гидроксильних групп при метилировании диазсметаной определяется, в основном, электростатическими и пространственными еффектами. Копплексообразование моносахаридов с атомами переходных металлов и горной кислотой позволяет изменять реакционную способность гидпоксилькнх. групп.

3. Предложены р^гиоселективные еннтезн 3-0-метиловых эфиров и.?т 1лгл»коп»рпнозидов ¿/-/-рамнозы, е/-Хгфукозы,|3-1>-арабинозы, л-г-ксилозы, ^-о-ликссзп, с(-в-глгакозы, е/-1>-хиновсзы и метилового ся пра [./-гг-глпкуронов'-'й гтелоты, Я-О-метпловых эф/.ров метилгли-козчдоп^-о-ксилозы и^-ь-рамчооч, 2,3-ди-О-метилсвнх эфиров мотилглигозидов /З-Ь-рж.чозн, с<;'-в-глюкозы и 3,£-ди-0-мэт:шЛП5Гс

г ф ¡1-1 мет •1.1-т 1-д -глюка пмп^коз идя.

4. Разработаны синтиг.н мегиловых .'•,п«(У>п мзтилглккозидсв ряда

нентоз, гексоз, б-дезоксигексоз,уронов].тх кислот, 2-;щетг<мп-до-2-дезокси-х>-глюкоз11, а тагсле 1,2-иэопрошишцен-, .'-а-кс^ло-фуранозн и 1,6-ангидро-^-и-глюкози на основа частичного мс-тк--лировашш исходных моносахаридов и хроматографии 1!слу1.енш;.<. смесей.

5. Предложен новый подход к синтезу дизоксисахароь путем частичного дезоксигенирования ацзтатов метг.лгликозицов с последующим хроматографическим разделением полученных дезокеиса-харов. Разработана синтезн метилгексопиранозидов 2,6- и 3,6-дидезокси-^-Ь-арабинозы; 4,6-дидезокси-1^-1-л;1Ксозы; 2,б-диле-зокси-^-в-арабннозн; З.б-дидезокси-^-в-рибозьт и 4,6-дцдезокси-р -О-ксилозн.

13

6. Получены и интерпретированы новые С-ЛМР спектры ыеги-ловнх офиров моносахаридов.

7. Показана принципиальная возможность использовании метилированных Сахаров для картирования активных центров 3H.jj.o-глюканаз. С помощью метиловых офиров моносахаридов определен механизм сорбции В-глюкозы и гомоморфных ей Сахаров ни акцепторном участке фермента ^3-1,3-зндоглюканазы Л1У и показыю, что сорбированная молекула моносахарида находится в ^С^ кон-формации.

8. Предложен ферментативный синтез ряда дисахаридов о В-глюкозой на невосстанавливающом конце.

9. С помочь» метилированных Сахаров определена зпптолшя специфичность лектина из МИДИИ СгепотуШиэ graya.nu а.

Основные результат» диссертации изложен» в следующих работах:

1. Gvotlov iu.S., ¿vtushecJco i!.V.' i'artial me thylatiou of carbohydrates;. Pert. X. Me thyl-^3-X)-xylcpiraaor.id3 // Carbohydr.HeB. 1973. V. 27, Hn 1. P. 169-174.

2. Svtusheako B.V., Ovodov iu.o. Uicropreparative gas-liquid

ohi ojato^rapby of methylated sugars.Pi-eparative separation of partial m&thylation products iron mcthyl-^-D-xylopyranoside// J. ChromBtogr. 1974. V. 97, 1. P. 99-102.

3. Квтушзпко ¿.Б., Оводов Ю.С. Частичное метилирование ыетил-гликозидов // Химия природ.соедин. 1975,№ 6. С. 682-686.

4. Евтушенко ¿.В., Оводов Ю.С. Новый способ получения -¿етил-уЗ-L-рамнопиранозида // Химия ьрирод. соедин. 19/6, № I. С. 87-88.

5. Йвтудонко К.В., Оводов Ю.С. Частичное метилирование углеводов. Частичное метилирование ыетил-|5-Ь-арабинопирансзида // Химия природ, соедин. IS77, № 6. С. 753-755.

6. Евтушенко ¿.В., Вахрушева Н.М., Оводов Ю.С. Ыикропрепаративная газожидкостная хроматография продуктов частичного метилирования метил-о^-ь-рамнопиранозида // Химия природ, соедин. I97S, № С. 142-144.

7. ¿vtueb&ako S.V., VaknruaLava if.bJ., Ovodov Xxx.S. Preparative liouid colunx. chromatography of math}. ethers of methyl „¿-L-rhamaopyranoside // J. Chrcjiatogr. 1980. V. 196. P.331-

333.

8. Евтушенко S.B., Оводов Ю.С. Частичное метилирование метил—d-глюкопираьозида. I. Нидксстная хроматография три-О-метиловых афиров иетил-^-с-глпкопиранозида // Химия природ.соедин.1982,

•»I.C. M-2I.

4¡5

9. Ег 'ушэнко ¿.В., Оводов Ю.С. Частичное метилирование четип-^-D-глшслиранозида. П. Препаративная жидкостная и геэо;гид-костная хроматогррфия ацетатов моно- и ди-0-метилоь1*х эфиров мет ил - гл кж о пи pa но з ида /'/ Химия природ- соедин. 19С2, I. С. I8-2I.

Ю. Йвтупенко 15.В., Оводов Ю,С. Газожидкостнал хроматография углеводов // Химик природ, соедин. 1984, 4. С. 4II-42s.

13

11. Евтушенко Й.В., Овсдов Ю.С. Новые симезы и лпектрн С метиловых &фкров метил-^^.-арАбинспиранозида // Химия лрн-род. соедин. 1985, »2. С. 178-181.

12. Евтушенко ¿3.13., Калинозокий Л.И., Оводов Ю.С. Новые синтезы метиловых эфиров метил-^-Ь-фукопипанозида // Химия природ, соедин. 1995, № 3. С. 339-312.

13. Ильин С.Г., Решетняк М.В., Евтушенко «¡.В. Кристаллическая и молекулярная структура метил-Л-ь-арабинопиранозиде. // Химия природ, соедин. 1985, № 5. С. 606-610.

14. Евтушенко Й.В., Плисова 12.¡0., Оводов С.С. Лрепоратитжтй синтез метиловых эфиров метил-^-1)-г&лантопчранозида // Биоорган, химия. I9E6. T.I2, № ТО. С. I366-I37I.

15. Евтушенко В.В., Оводов Ю.С. Синтез метиловых эфиров мет.чл (метил-о^-й-глккопираноэид) уронэта // Химия природ, соедин. 1987I. С. 35-27.

16. Евтушенко Е.В., Оводов Ю.С. Синтез мвтилоенх эфппоп мстил (метгл-у'^-о-галактопиракозид) уронг.тэ /7 Химия природ.соедин.

1987, № 1.0 . 37-39.

17. Евтушенко Е.В., Оводоз Й.С. Частично? метилирование 1,2-изо-пропздидон^-^-ксилс^урапо™ /./ Xvwis природ. еоед:«». I9t¿7, v- i. q. 132-133.

ТУ. ¡ínrynwKO .-¡.В., Опгдоо i?.С. •">•? :дс:-к>- ""¡np'v и-^-л

Ы'^нл-^-и-маннопиранозид) уроната // Химия природ.специи. 1987, 1Г> 2. С. 203-205. I'1. |'1рту%'011ко ¿.В., Плнсова iil.U., Оводов Ю.С. Синтез метровых рфяроп иетил-2 -онстахг.1до-2-дезокси-л-2>-глюкопираноэида // Хитап природ, сосдкн. 1907, Р 6. С. 767-790. lipтугопко ¿.В., Оводов Ю.С. Региоселективное метилирование мптнлгликочидпв диазометаном в прчсутстпич солей переходных метnглов и борной кислотк Ц Деп. ЫШЛЫ. 19b1;. К> 6С64-В87. С. I-I5.

П. Дглутечко й.В., Краена С.о., Оводоо Ю.С. Синтез метиловых гф-рэв »'етил-.х'-^-арабинофуршюзида и их ацетатов // Биоор-глн. химия. 1969. т.15, № 4. С. »34-537. ?<!. зппгпшоеш т.н., Евтушенко s.b., «¡пякова л.л. Исследопание • трпюгликозилпрующей способности ондо-1,3-р-глюканаз. III. Акцепторная спепчгЬгтность эш;о-1,3-]3-глюканаз из морских моллюсков п реакциях трансгликозидирования по отношению к рчяличч'-м уотилгликозидам // Биоорган, химия. 1989. T.I5, !,< 9. С. 1206-1214. 23. ¿vturhonl о ¿.V., tiljakova L.A. Snzywio ByothcEia of some diFacchatldes wj.th p -(1 3) linkages containing B-glu-ccee on non-reducing end // In : Conference Proceedings. i'ii'tn Intbrnoticnal Conference on Chemistry

and Bioteclmoloi'-:,- of Biological Active natural Products.

vV;r! .. V. г. 473-Ч-77. 24. лпту.тчкп В., 0п:цор Ю.С. Синтез метил 2,6- и 3,6-дидезокси-

tr.'-ir-;1 г-.бш'огохсопнранозидоп и 4¿—дидезокси-^Ь-ликсогексопи-

Р--.(вдо1-,г.я // Химии пргрод. соедин. JS90. Г-> 3. С. 320-322.

Iv tuPiif.-.k > '..V., .Ьочпуг "iu.il., Ovodova it.G., Cvodov Yu.S. ¿pi-

♦o:)if: fi *i♦ у of i;:il4ctos' -specific l'-c'in iron nmeeel

Cronomytllus irrayaaus //la : 12-th International Lectin Conference. Davis. 19У). Atatraots. P. 65.

26. Евтушенко ¿¡.В., Оводов B.C. Получение индивидуальных тетра-и триметилових эфиров метил-о^-гьыаниопиранозида и их ацетатов // Биоорган, химия. 1991. ТЛ7, № 7. С. 973-975.

27, Евтушенко Й.В., Оводов Ю.С. Частичное метилирование 1,6-ан-

>анозы // Биоорган, химия. 1991. Т.17,

Евтушенко Евгений Владимирович

НОВЫЕ ПОДХОДУ К СИНТЕЗУ МЕТИЛИРОВАННЫХ САХАРОВ И ДЕЗСКСИСАХАРОВ

Авторефера т

Подписано к печати 30,03.92 г. Формат 60x04/16. Усл.п.л. 3,03. Уч.-изд.л. 2,27. Тира« 100 экз. Заказ 20. Бесплатно.

Отпечатано в офсетно-ротапринтном цехе РИО ДВО РАН 690600, Владивосток, Ленинская, 50