Новый подход к снижению прооксидантной активности токсичных оловоорганических соединений с использованием "антиокислительных ловушек"

Грачева, Юлия Александровна

Новый подход к снижению прооксидантной активности токсичных оловоорганических соединений с использованием "антиокислительных ловушек" тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.08 ВАК РФ

Грачева, Юлия Александровна АВТОР

кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ

Москва МЕСТО ЗАЩИТЫ

2012 ГОД ЗАЩИТЫ

02.00.08 КОД ВАК РФ

Диссертация по химии на тему «Новый подход к снижению прооксидантной активности токсичных оловоорганических соединений с использованием "антиокислительных ловушек"»

Автореферат диссертации на тему "Новый подход к снижению прооксидантной активности токсичных оловоорганических соединений с использованием "антиокислительных ловушек""

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М.В. ЛОМОНОСОВА

Химический факультет

На правах рукописи

Грачева Юлия Александровна

НОВЫЙ ПОДХОД К СНИЖЕНИЮ ПРООКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ТОКСИЧНЫХ ОЛОВООРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ «АНТИОКИСЛИТЕЛЬНЫХ ЛОВУШЕК»

02.00.08 - химия элементоорганических соединений

Автореферат

диссертации па соискание ученой степени кандидата химических паук

11 ОКТ 2012

Москва - 2012

005053294

Работа выполнена на кафедре органической химии Химического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова

Научпый руководитель: Милаева Елена Рудольфовна,

доктор химических наук, профессор

Официальные оппоненты: Брегадзе Владимирович Иосифович,

доктор химических наук, профессор (Институт элементоорганических соединений имени А.Н. Несмеянова РАН, зав. лабораторией)

Шевцова Елена Феофановна,

кандидат химических наук (Институт физиологически активных веществ РАН, зав. лабораторией)

Ведущая организация: Федеральное государственное унитарное

предприятие «Государственный ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт химии и технологии элементоорганических соединений» (ФГУП ГНИИХТЭОС)

Защита диссертации состоится 24 октября 2012 г. в II00 на заседании Диссертационного Совета Д 501.001.69 при Московском государственном университете имени М.В.Ломоносова по адресу: 119991, Москва, Ленинские горы, Химический факультет, ауд. 446.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Химического факультета МГУ имени М.В.Ломоносова.

Автореферат разослан «24» сентября 2012 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор химических наук, профессор

Т.В. Магдесиева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Изучение механизма токсичности оловоорганических соединений RnSnXi „ представляет значительный интерес как с точки зрения снижения их токсического действия на организм в результате антропогенного воздействия, так и с целью поиска лекарственных препаратов цитотоксического действия. Данные соединения могут взаимодействовать с компонентами клеточных мембран, приводя к деструкции липидного бислоя, ускорять процессы ионного обмена через клеточные мембраны, ингибировать процессы окислительного фосфорилирования. Молекулярный механизм биологической активности RnSnX4 n, как правило, объясняют их способностью связываться с цистеиновыми и гистидиновыми аминокислотными остатками белков. Однако данные соединения участвуют также в биологических окислительных процессах. До настоящего времени недостаточно внимания уделялось роли органических групп, связанных с атомом металла в оловоорганических соединениях, в механизме токсичности. В металлоорганической химии хорошо известны процессы, приводящие к разрыву связи металл-углерод, одним из которых является гомолитический разрыв связи Sn-C, приводящий к образованию активных свободных органических радикалов. Эти активные частицы могут являться инициаторами цепных радикальных процессов, в том числе и пероксидного окисления липидов. Промотирование данного важного физиологического процесса приводит к апоптозу или некрозу клетки и является причиной многих патологий. Поэтому необходимо исследовать как процесс образования связи Sn-биосубстрат, так и процесс генерирования органических радикалов R", и найти новые методы детоксификации.

Цель работы заключается в изучении in vitro влияния оловоорганических соединений общей формулы RnSnXi-,, и их комплексов с 0,М,5-лигандами на биохимически значимые процессы: пероксидное окисление липидов с использованием ненасыщенных жирных кислот, биомембран, органов и тканей, функционирование ферментов антиоксидантной защитной системы, а также in vivo влияния на организм лабораторных животных.

В задачи работы входило: 1) комплексное сравнительное исследование активности оловоорганических соединений R„SnX4.n., различающихся числом и природой органических групп R, а также их комплексов с фосфохолином и тиоамидными лигандами, как моделей связывания олова с биосубстратами, в указанных выше процессах; 2) установление основных факторов, определяющих характер влияния природы органических радикалов R", бразующихся при гомолитическом разрыве связи Sn-C; 3) разработка способов снижения оксичного эффекта оловоорганических соединений в присутствии ингибиторов адикальных процессов полифункционального действия; 4) поиск противораковых агентов.

Научная новизна. Установлено, что одной из причин прооксидантной активности соединений RnSnX4.„ является вовлечение данных соединений в радикальный процесс, приводящий к разрыву связей Sn-C и образованию активных органических радикалов R", которые служат инициаторами цепного радикального процесса. Природа образующихся радикалов также оказывает влияние на прооксидантную активность оловоорганических соединений.

Доказано, что комплексы оловоорганических соединений с фосфохолином и тиоамидными лигандами ведут себя как прооксиданты, и эффект их промотирующего действия в пероксидном окислении ненасыщенных жирных кислот сравним с эффектом действия соответствующих оловоорганических соединений R„SnX4.„ или превышает его.

В работе предложен подход к снижению прооксидантного действия RnSnX4_„ с использованием полифункциональных органических соединений, содержащих как антиоксидантные группы, так и фрагменты, способные координировать металл (хелаторы). Для таких соединений принято условное название «антиокислительные ловушки».

Показано, что защитное действие in vivo свободного основания л<езо-тетракис(3,5-ди-/и/7£ш-бугил-4-гидроксифенил)порфирина и фосфонатов с фенольными группами, обусловлено особенностью их химического строения - наличия в молекулах 2,6-ди-трет-бутилфенольных фрагментов, выполняющих антиоксидантную функцию, а также свободного основания порфирина и остатков фосфоновой кислоты как хелаторов.

Установлено, что оловоорганические комплексы с тиоамидными лигандами проявляют высокую антипролиферативную активность против раковых клеток лейкосаркомы у крыс, при этом наблюдается корреляция с данными об их высокой прооксидантной активности, а также ингибирующей активности фермента липоксигеназа.

Практическая ценность. В работе предложен новый подход, заключающийся в использовании в качестве ингибиторов радикальных процессов, индуцированных R„SnX4_„, полифункциональных органических соединений, в состав молекул которых входят как хелатирующие так и антиоксидантные фрагменты (порфирины и фосфонаты, содержащие 2,6-ди-тре/и-бутил фенол). На основании полученных результатов, предложены способы снижения уровня пероксидного окисления липидов печени Asipensier guldenstadti Brandt добавлением (3,5-ди-т/?ет-бутил-4-гидроксифенил)метилендифосфоновой кислоты (Патент РФ RU № 2405032 С1 от 27.11.2010, Патент РФ RU № 2457240 от 27.07.2012.)

На основании данных о противоопухолевой активности комплексы оловоорганических соединений с гетероциклическими лигандами можно рассматривать в качестве перспективных фармакологических препаратов цитостатического действия.

Апробация работы. Основные результаты работы представлены на XIX и XVII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Россия, Волгоград, 2011, Казань, 2003), XXV, XXIV, ХХ1П Международной Чугаевской конференции по координационной химии (Россия, Суздаль, 2011, Россия, Санкт-Петербург, 2009, Украина, Одесса, 2007), 10Ih European Biological Inorganic Chemistry Conference (Греция, Салоники, 2010), IVth International Symposium on Bioorganometallic Chemistry (США, 2008), International Conference on Organometallic and Coordination Chemistry (Нижний Новгород, 2008), 2nd European Conference on Chemistry for Life Sciences (Польша, Вроцлав, 2007), 13й1 International Conference on Biological Inorganic Chemistry (Австрия, Вена, 2007), Vth Conference "Clusters-2006" (Россия, Астрахань, 2006), International Conference "Halchem-III" (Греция, Иоаниина, 2006).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 статей, 10 тезисов докладов, получено 2 патента.

Объем и структура диссертации. Материал диссертационной работы изложен на 160 страницах, включает 13 таблиц, 38 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитируемой литературы из 234 наименований.

Работа выполнена при поддержке РФФИ (гранты 08-03-00282-а, 09-03-00090-а, 10-03-0U37-a, 11-03-12088-офи м, 11-03-00402-а).

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Обзор литературы посвящен анализу известных данных о токсичности оловоорганических соединений, немногочисленных способах их детоксификации, а также поиску перспективных фармакологических препаратов на основе оловоорганических соединений.

2. Обс\жшше результатов

В работе изучено in vitro влияние различных оловоорганических соединений общей формулы R„SnX4-n и их комплексов с модельными биосубстратами на важные физиологические процессы: пероксидное окисление липидов с использованием ненасыщенных жирных кислот (Z-9-октадеценовая кислота), биомембран, органов и тканей, функционирование ферментов антноксидантной защитной системы (супероксиддисмутаза и каталаза), а также изучено in vivo влияние оловоорганических соединений на организм. Предложены новые способы снижения токсичного действия оловоорганических соединений в присутствии ингибиторов радикальных процессов полифункционального действия. Обнаружено цитотоксическое действие комплексов оловоорганических соединений с гетероциклическими лигандами.

2.1. Влиянпе оловооргапических соедппеппй и их комплексов па пероксидное окисление Z-9-октадеценовой кислоты как структурного фрагмента липидов

Оловоорганические соединения R„SnX4.„

В настоящей работе проведено комплексное исследование активности ряда оловоорганических соединений общей формулы R„SnXi -nj различающихся числом и природой органической группы R (п = 1-3; R = Me, Et, "Bu, Ph), в процессе пероксидного окисления Z-9-октадеценовой (олеиновой) кислоты как модельного субстрата LH. Кинетические исследования пероксидного окисления олеиновой кислоты кислородом проводили при 25, 37, 65, 90*С в присутствии R„SnX4.n по накоплению соответствующих гидропероксидов LOOH в течение 5 ч методом иодометрического титрования.

В интервале температур от 25 до 90'С концентрация LOOH возрастает в присутствии всех оловоорганических соединений по сравнению с экспериментом без добавок. На рис. 1 представлены кинетические кривые накопления LOOH в присутствии Me„SnX.t_n (п = 1-3) при 37'С. Активность метальных производных олова увеличивается с увеличением числа СНз групп в их молекулах. Кинетические параметры окисления олеиновой кислоты в присутствии RnSnX»-!! представлены в табл. 1. Кинетические кривые накопления гидропероксидов LOOH хорошо описываются экспоненциальными функциями, а их логарифмические анаморфозы (1пС/С0) имеют линейный характер, что соответствует

Рис. 1. Кинетические кривые накопления гидропероксидов олеиновой кислоты ЬООН в присутствии Ме^пОд-л: (1) олеиновая кислота без добавок; (2) МеЭпСЬ, (3) Ме25пС1;, (4) МеэЭпО (37'С, концентрация добавок 1 • 103 моль'л"1, барботирование воздуха).

Для всех соединений наблюдается соотношение >1 и д1 >1 во всем интервале температур (25-90'С), что позволяет сделать вывод о том, что скорость образования LOOH больше скорости их разложения в этих же условиях (табл. 1). Величины и достигают максимальных значений при температуре 37°С и уменьшаются с ростом температуры, что свидетельствует о промотирующей активности соединений олова в распаде образующихся гидропероксидов. Полученные результаты позволяют предположить, что причиной промотирующей активности ИлБиХ^,, является вовлечение данных соединений в радикальный процесс. Известно, что реакция Бц2 бимолекулярного гемолитического замещения у атома Бп протекает с большой легкостью. В связи с этим ускорение процесса окисления олеиновой кислоты может быть объяснено взаимодействием образующихся

реакции псевдопервого порядка.

5000 10000 15000 20000

пероксильных радикалов LOO' с оловоорганическими соединениями, что приводит к разрыву связей Sn-C и образованию активных органических радикалов R".

LOO- + R„SnX4H, -> Rn-iSnX4-„(OOL) + R' (1) Реакция замещения приводит к увеличению концентрации активных радикалов R", которые являются инициаторами цепного радикального процесса окисления LH. Число органических групп R в молекуле оловоорганического соединения влияет на активность соединения: с увеличением п активность возрастает (рис. 1).

Таблица I. Значения кинетических параметров к/К и Ч, для процесса накопления гидропероксидов олеиновои кислоты (LOOH) в присутствии оловоорганических соединений при различных

температурах

25'C 37'C (ВТ

Соединения k/k. q¡ k/k. 4i к/к„

Без добавок I i 1 1 1 1

MeSnCI, 1,6 1,13 1,59 1,55 1,01 I 22

Me.SnCI; 1,70 1,24 1,88 1,74 1,03 1 25

Me.SnCl 2,38 2,21 2,17 2,97 1,11 1,27

EtSnCI, 1,72 1,14 1,50 1,4 1,14 1 42

Et¡SnCIi 1,92 1,38 1,88 2,51 1,13 1 45

Et,SnCI 3,82 1.95 2,02 2,68 1,15 1 51

"Bu,SnCI2 1,74 1,4 1,46 1,33 1,14 1 39

"Bu,SnCI 1,81 1,5 1,58 1,42 1,17 1,48

PhSnCI, 1,65 1,36 1,52 1,69 1,09 1,29

Ph2SnCI, 1,68 1,46 1,87 1,92 1,12 1 37

Ph,SnCI, 2,05 1,67 1,93 2,64 1,18 1,56

, * ' ' --------'—пиди^иг/нм ¿иирипероксиоов оез оооавок'

< ~ в присутствии оловоорганических соединений;

Л, = (СГС„)/С0; С, - концентрация гидропероксидов через 5ч после начала окис чения ■ С - начальная концентрация гидропероксидов в опытах с добавками оловоорганических соединений-А0 - начальная величина для опытов без добавок; ц, = А/Аа

Так, например, относительная конечная концентрация ШОН при 37'С для Ме35пС1 в 1,3 раза выше по сравнению с Ме25пС12 и в 1,9 раза выше по сравнению с Ме8пС13. Такая закономерность прослеживается для всех оловоорганических соединений (Табл. 1).

Промотирующее действие а^пХ^ в процессе окисления Ш зависит от температуры. Наибольший эффект можно наблюдать при добавке Ме35пС1 при 25 и 37'С. При повышении температуры до 65 "С значения к,!к„ для всех систем лежит в пределах 1-1,2. Полученные результаты хорошо коррелируют с кинетическими данными: с увеличением температуры значения А; и ц, также максимальны при 25 и 37'С. Уменьшение значений к,!к„ при увеличении температуры можно объяснить разложением ШОН в реакциях Г<„ЗпХ4-„ с гидропероксидами при высоких температурах:

ЬООН + И^пХ^ 1?п5пХ3_„(ООЬ) + НХ (2) Скорость образования гидропероксидов и скорость их разложения при 65'С имеют близкие значения. Начальные участки кинетических кривых близки линейным зависимостям

(рис. 2), что соответствует сопоставимости значений констант скоростей реакций R„SnX4.„

как с LOO", так и с LOOH.

Таким образом, все исследованные оловоорганические соединения промотируют пероксидное окисление олеиновой кислоты. Общий эффект влияния органических соединений Sn на процесс окисления олеиновой кислоты, как структурного фрагмента липидов, зависит от температуры процесса и проявляется в накоплении или расходовании начальных продуктов - гидропероксидов. Такой эффект может быть одной из составляющих общего механизма токсичности оловоорганических соединений.

Рис. 2. Кинетические кривые накопления гидропероксидов олеиновой кислоты ШОН в присутствии добавок: (1) олеиновая кислота без добавок, (2) Ме^пСЬ, (3) Е^пСЬ, (65'С, концентрация добавок Ы0"! моль л"1, барботирование воздуха).

О 2000 4000 6000 8000

Комплексы оловоорганических соединений с фосфохолином

Одним из маршрутов в механизме токсичности соединений К^пХд-п является возможность их взаимодействия с донорными группами в биологически значимых молекулах. В клеточных мембранах оловоорганические соединения могут взаимодействовать с фосфатными фрагментами биомолекул, образуя комплексы с координационными связями Бп-О при сохранении связей Бп-С. В этом случае атом Эп блокирован дополнительным лигандным окружением, а реакционноспособным участком молекулы комплекса является связь 8п-С, способная к

гемолитическому разрыву. Ме. 0 Ме II Э

0_Г 0

В связи с этим в данной части работы нами / / I

Ме Ан

исследовано влияние на пероксидное окисление и

олеиновой кислоты комплексов оловоорганических

соединений с фосфохолином* (РСЬо1) - короткоцепочечным аналогом фосфолипида [Н0Р(0)(0")0СН2СН2СН2Ы+(Ме)3], входящим в группу лицетинов. Для комплексов оловоорганических соединений с фосфохолином Ме8пС13-РСЬо1 (1), Ме25пС12-РСЬо1 (2), (Ме38пС1)2-РСЬо1 (3), РЬ5пС13-РСЬо1 (4), РЬ2ЗпС12-РСЬо1 (5), (РЬ3ЗпС1)2-РСЬо1 (6) при температуре, близкой к физиологической (37°С), наблюдается ускорение накопления гидропероксидов по сравнению с опытом без добавок (табл. 2, рис. 3).

»Комплексы были синтезированы к.х.н. Е.В. Григорьевым и предоставлены для дальнейших исследований

Прн этой температуре комплексы 1-6 ведут себя как прооксвданты, и эффект их промотирующего действия сравним с эффектом действия соответствующих оловоорганических соединений И^пХ^ или превышает его (табл. 1,2). Кинетические кривые накопления ШОН при 37"С в присутствии комплексов хорошо описываются экспоненциальными функциями, а их логарифмические анаморфозы представляют собой линейные зависимости с коэффициентами корреляции 0,93-0,98.

В табл. 2 представлены константы скорости к, и относительные величины к,1к„, рассчитанные для реакции псевдопервого порядка. Ускорение процесса наблюдается в присутствии всех исследуемых комплексов, причем величина их промотирующего эффекта возрастает с увеличением числа органических групп Я в молекуле.

Наибольший эффект ускорения окисления Ш наблюдается в присутствии комплексов Яз8пС12 РС1ю1, наименьший - ЯЗпСЬ'РСЬо! (II = Ме, РЬ).

При более высокой температуре (65'С) кинетические кривые приобретают Я-образный характер (рис. 4). Это свидетельствует о том, что скорость распада ШОН в присутствии комплексов Бп через определенный промежуток времени становится равной скорости их образования. Кинетические кривые Б-образного характера при 65'С с хорошей степенью точности описываются полиномами третьего порядка. Для количественного анализа использованы начальные участки этих зависимостей, соответствующие протеканию реакции окисления в течение ~ 3 ч, которые также описываются функциями е". Полученные данные показывают, что в начальный момент времени все комплексы ведут себя как прооксиданты, и эффект их действия сопоставим с эффектом соответствующих оловоорганических соединений.

О 5000 10000 15000 20000 с

Рис. 3. Кинетические кривые накопления гидроперокеидов олеиновой кислоты ШОН в присутствии добавок: (1) без добавок, (2) Ме8пС13-РСЬо1, (3) Ме,5пС|,-РСЬо1, (4) (Ме35пС1)гРС1ю1 (37'С, концентрация добавок 110 моль-л , барботированис воздуха).

5000 10000 15000 20000

Рис. 4. Кинетические кривые накопления гидроперокеидов олеиновой кислоты ШОН в присутствии добавок: (1) без добавок, (2) РЬБиОз-РСЬо!, (3) РЬ^пСЬ-РСЬо!, (4) (РЬ35г)С1)2-РСНо1, (65*С, концентрация добавок 1 10 моль-л , барботирование воздуха).

Таким образом, полученные результаты подтверждают предположение о том, что связывание оловоорганических соединений в комплексы с моделями фосфолипидов не предотвращает их промотирующего действия в процессе пероксидного окисления ненасыщенных жирных кислот. Ответственными за механизм этого действия могут являться образующиеся при разрыве связи С-Бп свободные органические радикалы.

Таблица 2. Кинетические параметры окисления олеиновой кислоты в присутствии комплексов оловоорганических соединений с фосфохолином Я^пСЦ-п-РСЬо! при 37 и 65 С

№ Добавки 31'С 65'С

к/к. «/ к/к, Ч.

Без добавок 1 1 1 1

1 МеБпОэ-РСЬо! 2,11 (1,59)* 2,06(1,55) 1,41 (1,01) 1,23 (1,22)

2 Мег5пС12-РСЬо1 2,15(1,88) 2,64(1,74) 1,51 (1,03) 1,31 (1,25)

3 (Ме38пС1)гРСКо1 2,14(2,17) 2,61(2,9) 1,63(1,11) 1.39 (1,27)

4 РЬЭпСЬ-РСНо! 2,12(1,52) 2,09(1,69) 1,44(1,09) 1,24(1,29)

5 РЬгвпСЬ-РСЬо! 2,25(1,87) 2,33(1,92) 1,59 (1,12) 1,22(1,37)

6 (РЬ,5пС1)г-РСЬо1 2,31 (1,93) 2,45 (2,64) 1,85(1,18) 1,49(1,56)

*в скобках приведены значения к/ко и Для соответствующих оловоорганических соединений

Комплексы оловоорганических соединений с гетероциклическими лигандами

Одним из установленных механизмов биохимической активности оловоорганических соединений является взаимодействие Эп с атомом Б цистеина или метионина в белках, что приводит к нарушению нативной структуры белка. Однако при этом связи Бп-С сохраняются. Исследование процесса пероксидного окисления олеиновой кислоты проводили для комплексов оловоорганических соединений 7-14 с гетероциклическими лигандами Ь'-Ь2 (£' = 2-меркаптопиримидин, Ь2 = 5-хлор-2-меркаптобензотиазол).*

I.»

Я = Ме(11),"Ви(12), Р^ (13) !? = №(»)

По данным РСА структуры соединений (рис. 5) представляют собой искаженный

октаэдр (11-13) и тригональную бипирамиду (10, 14).

•Комплексы были синтезированы М.Ы. ХамЬорои1ои, Э.К. Нафкакоц (Университет Иоаннины, Греция) и переданы для дальнейших исследований

Обнаружены два изомера с различными расстояниями Sn-N для всех комплексов. Результаты ИК и КР спектроскопии подтверждают цис-N,, цис-S2 -координацию вокруг иона Sn4- в случае комплексов 12, 13. Данные РСА и спектральные исследования комплексов олова свидетельствуют о том, что в молекулах этих соединений связи Sn-C пространственно доступны для атаки реагентами, в том числе, и радикалами LOO".

Рис. 5. Молекулярные структуры соединений 12,14.

Исследовано влияние оловоорганических комплексов 7-9 и 11-13 на накопление гидропероксидов олеиновой кислоты при 37 и 65"С. Показано, что действие всех соединений проявляется в увеличении содержания ШОН в начальный период времени. Представленные результаты демонстрируют влияние природы органической группы на активность соответствующих комплексов 1*25п£22 (рис. 6,7).

150

-140

2.130 н

2 120 °110

хюо о

-J 90

■ контроль

содержание

5000 10000 15000 20000

Рис. 6. Кинетические кривые накопления Рис. 7. Относительное

гидропероксидов олеиновой кислоты LOOH в гидропероксидов олеиновой кислоты-LOOH

присутствии добавок при 37'С: (1) олеиновая (% относительно контроля) без добавок и в

кислота без добавок, (2) Me2Sn¿22, (3) "Bu2Sn/Л, присутствии комплексов: 11 - Me2Sn¿'2 12 -

(4) Ph2Sn¿"2 (концентрация добавок ЫОЛгаль л'). °Bu2Sn£"2,13 - Ph,Sn¿-\, при 37*С через 5 ч.

Связывание оловоорганических фрагментов с атомами S в лиганде моделирует взаимодействие с SH-группами белков. Однако промотирующая активность комплексов, содержащих a-связь Sn-C, обусловливает возможность их взаимодействия с реакционноспособными пероксильными радикалами LOO-. Период полураспада образующихся радикалов R" может оказывать влияние на степень промотирования, т.е. чем

стабильнее образующиеся С-центрированные радикалы (Ме- < "Ви- < РЬ'), тем более эффективными промоторами окисления оказываются соответствующие комплексы. Такой эффект наблюдается в случае комплексов оловоорганических соединений с 5-хлоро-2-меркаптобензотиазолом 11-14, для которых производные, содержащие фрагмент - РИ^Бп оказались более активными, чем соответствующие метальные производные. Для доказательства образования радикалов в процессе гомолитического распада РЬ35пС1, МегЭпСЬ и их комплексов РЬзБп//' и Ме28п/Л мы изучили спектры ЭПР продуктов облучения (рис. 8). Полученные данные показывают, что во всех случаях генерируются радикальные частицы с близкими значениями g-фaктopoв сигналов в спектрах ЭПР.

Таким образом, включение оловоорганического фрагмента в комплекс с аналогом биосубстратов за счет образования связей .Чп-М, Бп-Б не устраняет инициирующей активности комплексов олова, а данные соединения, как и в случае комплексов с фосфохолином, являются прооксидантами пероксидного окисления олеиновой кислоты.

2.2. Применение «антиокислительных ловушек» для снижения прооксидантного действия оловоорганических соединений

Проявление оловоорганическими соединениями К„8пХ4.„ и их комплексами с О, N. Б - донорными лигандами прооксидантной активности за счет вовлечения в радикальные реакции и генерирования активных радикалов Я" предполагает использование ингибиторов радикальных процессов для снижения прооксидантного эффекта Л^пХ^,,. В качестве таких ингибиторов могут выступать 2,6-диалкилфенолы - биомиметики природного антиоксиданта - а-токоферола. С другой стороны для снижения токсичного действия металла применяют хелаторы. В работе предложен подход, заключающийся в использовании полифункциональных органических соединений, в состав молекул которых входят как хелатирующие фрагменты (лиганды - 1л§), так и антиоксидантные группы ингибитора 2,6-ди-т/7ст-бутилфенола (1пН). Для таких соединений в работе использовано условное название «антиокислительные ловушки» (схема 1).

Рис. 8. Спектры ЭПР растворов Ме2ЗпС12 (а), РЬзЭпС! (б), // (в), и их комплексов Ме.^п/ЛО ) и РЬ^п//' (д) в бензоле после облучения УФ. Облучение проводили ртуть-ксеноновой лампой в жидком азоте при 77 К, спектры регистрировали через 20 с после облучения.

Схема 1

окислительная деструкция, сопровождающаяся гомолнтнческнм разрывом I связи вп-С

НКГнбнТорПпН)

кн

«елжтор (Ый) 'Бп"-— М^С'^п")

антиокнслительные ловушки

В работе изучено пероксидное окисление олеиновой кислоты ПН в присутствии оловоорганических соединений Я^пСЦ., и ингибитора радикальных цепных реакций - 2,6-ди-/л/7е/я-бутилфенола. Кривые накопления гидропероксидов ЬООН на примере этильных производных олова в присутствии ингибитора представлены на рис. 9. Скорость накопления ЬООН существенно снижается при сравнении с процессом без добавок. Таким образом, присутствие 2,6-ди-т/?ет-бутилфенола существенно снижает прооксидантный эффект действия оловоорганических соединений. Снижение величины [МО"4 = (1,39 ± 0,16) ^ (1,84 ± 0,09)] в присутствии 2,6-ди-^ет-бугилфенола и Я^пСЦ-п (а = Е1, пВи) по сравнению со значением для самого фенола (к. Ю"4 = 1,73 ± 0,15) можно, по-видимому, объяснить возможностью регенерации антиоксиданта за счет восстановления 2,6-т-трет-бутилфеноксильного радикала. В этом случае образующиеся активные радикальные интермедиа™ СН3СН2' и СН3СН2СН2СН2- могут служить донорами атома Н для феноксильного радикала, образуя соответствующие апкены СН2=СН, СН3СН2СН=СН2. В результате, возрастает суммарный ингибирующий эффект 2,6-ди-т^ет-бутилфенола.

Рис. 9. Кинетические кривые накопления гидропероксидов олеиновой кислоты ШОП в присутствии добавок Е^пСЦ.,, и 2,6-ди-трет-бутилфенола: (1) без добавок, (2) Е^пС!, (3) ЕьБпСЬ, (4) Е15пС13 (65"С, концентрация добавок МО"3 моль л'1, соотношение добавок 1:1).

5000 10000 15000 20000

Пероксидное окисление г-9-октадеценовой кислоты в присутствии свободного основания л1езо-тетра(3,5-ди-трет-оутил^-гидроксифенил)порфирина и оловоорганических соединений

В работе изучена активность свободного основания порфирина с антиоксидантными 2,6-ди-/и/;£7н-бутфенольными фрагментами 15 в модельной реакции пероксидного окисления 7-9-октадеценовой кислоты. Для сравнения рассмотрено также свободное основание мезо-тетрафенилпорфирина 16 с фенильными заместителями, обладающее хелатирующей

активностью, но не содержащее антиоксидантных групп. Активность порфиринов 15 и 16 в пероксидном окислении олеиновой кислоты представлена на рис. 10. Добавка порфирина 15 с 2,6-ди-трет-бутилфенольными заместителями критически снижает уровень накопления гидропероксидов в сравнении с олеиновой кислотой без добавок на 96% (с 642 до 26 мМ). Соединение 16 с фенильными группами не оказывает существенного влияния на уровень накопления гидропероксидов, отношение к/ка близко к 1. Сравнение действия порфирина 15 и 2,6-ди-т/к>т-бутилфенола в соотношении 1:1 и 1:4 показало, что активность порфирина 15 как ингибитора сопоставима с действием четырех эквивалентов 2,6-ди-;и/х?т-бутилфенола. Таким образом, соединение 15 является эффективным ингибитором процесса пероксидного окисления, его антиоксидантный эффект определяется наличием четырех фенольных групп.

Присутствие эквимолярной смеси диалкильных соединений олова и порфирина 15 в олеиновой кислоте приводит к значительному снижению накопления гидропероксидов (рис. 11). Общее содержание ШОН через 4 ч более чем в 10 раз ниже, чем в эксперименте без добавок и составляет 7,6 и 8,4 % от контроля для Ме28пС12 и Еь8пС12 соответственно. Данные на рисунке 12 иллюстрируют активность фенольного порфирина 15, как антиоксиданта, способного также активно предотвращать прооксидантное действие БпСЬ и выступать одновременно как в роли ловушки для металла, так и ингибитора промотируемых им радикальных процессов окисления.

4000 8000 12000 16000 20000

4000 8000 12000 16000

Рис. 10. Кинетические кривые накопления Рис. 11. Кинетические кривые накопления гидропероксидов олеиновой кислоты ШОН в гидропероксидов олеиновой кислоты ЬООН в присутствии добавок: (1) без добавок, (2) 16, (3) присутствии смеси 15 и Я^пСЬ: (1) без добавок, 2,6-ди-трет-бутилфенол, (4) 15 (65'С, (2) Ме28пС12, (3) Й,ХпС12 (65'С, концентрация концентрация добавок 1-10'3моль- л'1). добавок МО'3 моль л"1, соотношение добавок

1:1).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что фенолсодержаший порфирин 15 проявляет антиоксидантную активность в модельной реакции окисления олеиновой кислоты, препятствуя накоплению гидропероксидов благодаря наличию 2,6-ди-трет-бутилфенольного фрагмента, как основному реакционному центру при взаимодействии с пероксидными радикалами. С другой стороны, можно предположить, что фенолсодержащий порфирин способен связывать ионы металлов за счет участия порфиринового кольца. Экпериментальные данные показывают, что в процессе пероксидного окисления олеиновой кислоты фенолсодержащий порфирин 15 действует как высокоэффективный ингибитор, снижая накопление ЬООН на 92 % через 3 ч окисления по сравнению с экспериментом без добавок. Добавка эквимолярного количества фенолсодержащего порфирина в реакционную смесь, содержащую 5пС1г, эффективно подавляет образование гидропероксидов и снижает скорость их накопления по сравнению с действием неорганической соли до -50 % через 3 ч окисления, выступая в качестве хелатирующего агента (ловушки) для ионов олова.

160 140 120 100 80 60 40 20 о

LOOH,

Рис. 12. Накопление гидропероксидов олеиновой кислоты LOOH в присутствии добавок: (1) без добавок, (2) SnCl2 , (3) - 15, (4) SnCl2 и 15 (65'С, 3 ч, концентрация добавок 1* 10'3моль#л~', соотношение добавок 1:1).

12 3 4

Спектральными методами (электронная спектроскопия поглощения, ЭПР) показано, что в присутствии агентов радикальной природы, к которым относятся, в частности, реакционноспособные пероксидные радикалы LOO", происходит отрыв атомов водорода от фенольных групп порфирина 15, образуется относительно стабильный бирадикал, который превращается в производное порфодиметендихинометида (схема 2, рис. 13), дальнейшее окисление которого приводит к образованию конечного продукта - ,кезо-тетракис(3,5-ди-трен1-бутил-4-хинометид)порфириногена. Стадии окисления обратимы и производные порфодиметендихинометида и порфириногена могут быть легко восстановлены до исходного порфирина. Таким образом, действие соединения 15 может не зависеть от присутствия RjSnCU в реакционной смеси. Однако значения к/к„ для смеси соединения 15 и R2S11X2 составляют 0,3 (R = Ме) и 0,15 (R = Et), и эти значения в обоих случаях ниже, чем для чистой олеиновой кислоты с соединением 15, для которой к/к0 составляет 0,69. Этот факт подтверждает, что именно процесс внедрения атома олова в порфириновое кольцо является результатом окислительного деалкилирования RiSnXi.

соответствующее окислению фенольных групп до производного дихинопорфодиметена в олеиновой кислоте (02, 65"С).

Таким образом, фенолсодержащий порфирин 15 может не только предотвращать окислительную деструкцию органических субстратов, но его можно рассматривать и как ловушку ионов металлов в связи с выраженной способностью к образованию комплексов с металлами за счет наличия N - координирующих центров.

Пероксидиое окисление Х-9-октадецеповой кислоты в присутствии 2,6-ди-трет-бутилфенолов, содержащих фосфонатные группы

Для ряда фосфорзамещенных производных 2,6-ди-трет-бутилфенола, содержащих одну, две или три фосфонатные группы (соединения 17-20), исследованы антиоксидантные свойства. Для сравнения использовали известные антиоксиданты 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (ионол) и 2,6-ди-

он

'Ви

'В и

д=о

Н'О ОЯ'

ко/

И = Н, Я* = Н (17) К = 51Че,, К' = Е|(18)

р=о /\ Н'О ОН'

К'= 11 (19)

р=о /\ КЧ) ОК'

Н'= Е1(20)

тре/л-бутилфенол. Также для сравнительного анализа было выбрано производное анизола -диэтиловый эфир (4-

метоксифенил)метилендифосфоно вая кислота, не содержащее фенолыюго фрагмента.

При окислении олеиновой кислоты при 37, 50, 65°С обнаружено, что соединения 17-20 обладают выраженной ингибирующей активностью в процессе образования первичных продуктов окисления - гидропероксидов ШОН. Антиоксидантный эффект этих соединений выше, чем у стандартного антиоксиданта ионола (30%) (рис. 14), с повышением температуры наблюдается возрастание антиоксидантной активности соединений. Наибольший эффект ингибирования достигается в случае соединений 17 (58%), 18 (48%), 20 (69%) при 37°С.

Изучен также процесс накопления конечных продуктов окисления олеиновой кислоты карбонильной природы с использованием тиобарбитуровой кислоты (ТБК-зависимые продукты). Соединения 17-20 также проявляют значительный антиоксидантный эффект, однако наибольшей активностью обладают соединения 18 и 20 (75 и 51% соответственно). Сравнивая антиоксидантную активность и устойчивость феноксильных радикалов, образующихся при окислении соединений 17-20, можно видеть, что не наблюдается прямой корреляции между устойчивостью феноксильных радикалов и антиоксидантной активностью.

Рис. 14. Антиоксидантная активность фенолов 1720 в процессе накопления гидропероксидов олеиновой кислоты 1.0011 при 37°С, (концентрация добавок 1'10"3моль*л"')

Так, устойчивость феноксильных радикалов по данным метода ЭПР* возрастает в следующем ряду: 17'<19'<18'<20\ Антиоксидантная активность соединений меняется следующим образом: 17<20=18=19. Из литературных данных известно, что такого рода зависимость можно объяснить возможным образованием хиноидной структуры (Схема 3, табл. 3). В этом случае малоактивный радикал ингибитора, участвующий в обрыве цепей реакции окисления субстрата, может образовываться как с участием гидроксильной группы фенольного фрагмента, так и при отрыве бензилыюго атома водорода. Обратимость процесса окисления в целом приводит к усилению ингибирующей активности данных соединений. Для соединения 20 возникновение подобной хиноидной структуры невозможно, и антиоксидантный эффект его действия ниже, но сравним с активностью ионола.

Таблица 3. Константы СТВ и величины g-фaктopoв радикалов, полученных при окислении соединений 18-20

g- фактор 2.0057

2.0049 2.0054

Схема 3

Радикал 18'

19" 20'

а, мТл

а(2Н)=0.17 а(Р)=3.97 а(1Н)= 1.0 о(2Н)=0.16 а(1Н)=0.14 а(1Р,)=2.88 а(1Р2) =2.67 а(2Н)=0.18 а(1Р,)=3.15 а(2Р:)= 0.93

•Спектры ЭПР были сняты в.н.с., к.х.н. В.Ю. Тюриным

Таким образом, фосфорзамещенные производные 2,6-ди-т^ет-бупшфенола 17-20, обладают выраженной ингибирующей активностью как в процессе образования первичных продуктов радикальных реакций окисления - гидропероксидов, так и конечных -карбонильных соединений.

In vitro пероксидное окисление липидов гомогенатов печени лабораторных животных

Для оценки влияния наиболее активных антиоксидантов - свободного основания тетра(3,5-ди-тре/и-бутил-4-гидроксифенил)порфирина 15 и (3,5-ди-т/>ет-бутил-4-гидроксифенил)метилендифосфоновой кислоты 19 на пероксидное окисление липидов в биологических объектах в настоящей работе проведены in vitro исследования на примере гомогенатов печени лабораторных крыс линии Wistar и рыб (Acipenser guldenstadti Brand)*. Для сравнительного анализа использованы также тетрафенилпорфирин 16 и диэтиловый эфир (4-метоксифенил)метилендифосфоновой кислоты 21, не содержащие фенольных групп.

Эффективность действия 19 и 21 оценивали по величине эффективности антиоксидантного действия (Е), которая рассчитывалась по формуле:

Е = ((С„-С,)/С„)-100%

где, С0 и С, - концентрация ТБК-зависимых продуктов в гомогенате печени в контрольном эксперименте и с добавкой соединений соответственно. В случае положительного значения Е тестируемое вещество проявляет антиоксидантное действие, при отрицательном значении -прооксидантное действие.

Эффективность действия соединений 19 и 21 существенно изменяется в ходе длительно протекающего процесса пероксидного окисления липидов в гомогенате печени и зависит от природы заместителя в пара-положении фенола (рис. 15). На начальном этапе (3 ч) наибольший эффект проявляет соединение 19, а также 2,6-ди-т/>еш-бутилфенол, однако затем эффективность антиоксидантного действия 2,6-ди-/и/>сти-бутилфенола снижается. Через 24 ч после начала эксперимента и далее максимальное действие оказывают фенолы 19 и 21, для которых величина Е несколько возрастает по мере протекания процесса.

■ 2,6-яи-трет-бутмлфенол

^ Ш ионол

Рис. 15. Эффективность (Е) соединений 19, 21 и 2,6-ди-трт-бутилфенола в пероксидном окислении липидов гомогенатов печени Acipenser guldenstadti Brandt в течение 3, 24, 48 и 72 ч (концентрация добавок 1-10'5моль-л"').

♦Образцы печени лабораторных крыс линии Wistar предоставлены биологическим факультетом МГУ имени М.В. Ломоносова; эксперименты с гомогенатами печени рыб {Acipenser guldenstadti Brand!) выполнены совместно с к.х.н. H.A. Антоновой (Астраханский государственный технический университет).

Для моделирования поведения соединений 19, 21 в условиях длительного окислительного процесса, промотированного МезБпОг, накопление ТБК-зависимых продуктов изучено в период времени от 1 до 48 ч (рис. 16).

Полученные результаты показывают, что соединения проявляют антиоксидантное действие на всех этапах процесса, причем в отличие от контроля эффект снижения уровня окисления наблюдается уже на ранних этапах, несколько возрастая с увеличением длительности периода окисления. Е («о)

Рис. 16. Эффективность (Е) соединений 19 и 21 в присутствии Me2SnCl2 в пероксидном окислении лигшдов печени Acipenser guldensladti Brandt (концентрация добавок 1'10"3моль'л*', соотношение добавок 1:1)

Таким образом, показана выраженная эффективность действия 2,6-лк-трет-бутипфенолов с фосфонатными группами. Активность данных соединений может определяться не только наличием фенольной группы, но и присутствием хелатирующих фосфонатных фрагментов в их молекулах.

На рис. 17 представлена антиоксидантная активность порфирина 15, выполняющего одновременно роль антиоксиданта и ловушки металла в период выдерживания гомогената в инкубационной среде от 50% (1 ч) до 66% (48 ч). Эти данные свидетельствуют также о достаточной стабильности порфирина и о его пролонгированном действии. Добавление в инкубационную среду эквимолярных количеств "ВитЭпСЬ и порфирина 15 приводит к снижению выраженного прооксидантного действия оловоорганического соединения в среднем на 22%.

Рис. 17. Эффективность (Е) соединения 15 при длительном окислении липидов гомогенатов печени Acipenser guldenstadti Brandt, (концентрация добавок ЫОЛголь-л'1).

In vivo активность свободного основания тетра(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)порфирина в снижении токсичного действия хлорида триметилолова

Защита клеток от активных метаболитов кислорода в норме осуществляется действием ряда антиоксидантных ферментов, в том числе и мембрано-ассоциированных.

Первую линию защиты от свободных радикалов выполняют ферменты супероксиддисмутаза и каталаза. В случае, если система защиты «не справляется», это приводит к патологиям и некрозу клетки. Защитное действие фенолсодержащего порфирина 15 in vivo изучено на примере антиоксидантных ферментов каталазы и супероксидцисмутазы (СОД) для лабораторных крыс линии Wistar, которым перорально вводили хлорид триметилолова*. Изучено также общее содержание SH-групп, маркеров действия Me3SnCI на белки и глутатион органов крыс.

Полученные, результаты свидетельствуют о том, что при действии хлорида триметилолова СОД в печени и почках ингибируется практически полностью, 92% и 93% соответственно. Такая же доза порфирина практически не оказывает влияния на активность фермента. У животных, получавших добавки Me3SnCl и порфирина 15 в равных количествах, степень ингибирования фермента значительно меньше (рис. 18).

Аналогичная картина наблюдается и для каталазы (рис. 19), этот фермент также ингибируется при действии хлорида триметилолова, что свидетельствует об интенсивно протекающих параллельных процессах: включение оловоорганического соединения в метаболизм печени и почек, и выведение метаболитов. Через 24 ч в присутствии Me3SnCl наблюдается подавление активности каталазы и СОД, что, по-видимому, связано с нарушением нативной структуры белка и изменением активного и/или аллостерического центров ферментов.

Изучено также содержание свободных SH-групп. маркеров защитного действия порфирина по отношению к токсическому действию триметилоловохлорида in vivo (рис.20). Представленные результаты, свидетельствуют о том, что при действии Me3SnCl наблюдается критическое снижение содержания SH-групп белков в печени и почках.

контроль hle.SiiCI

Рис. 18. Относительная активность СОД в печени лабораторных крыс, через 24 ч после псрорального введения животным 5 мг-кг"' Ме3ЗпС1, порфирина 15 и их смеси в соотношении 1:1.

Рис. 19. Относительная активность каталазы в печени лабораторных крыс через 24 ч после перорального введения животным 5 мг-кг"1 Ме35пС1, порфирина 15 и их смеси в соотношении 1:1.

г vivo исследования проведены совместно с к.м.н. М.А. Додоховой (РГМУ).

Введение порфирина 15 обуславливает существенный защитный эффект при определении суммарного содержания тиольных групп. Наблюдается уменьшение содержания ЭН-групп при действии Ме3ЗпС1 и порфирина через 24 ч на 36 и 54 % в печени и почках соответственно.

Рис. 20. Относительное содержание вН-групп в печени лабораторных крыс через 24 ч после перорального введения животным 5 мг-кг"1 МезЗпС1, соединения 15 и их смеси в соотношении 1:1.

конфопь Me,SnCI

Следовательно, порфирин 15 снижает токсичное действие соединения олова на ферменты антиоксидантной защиты. Такой эффект объясняется особенностью химического строения порфирина, имеющего в своем составе 2,6-ди-/нр>еп?-бутилфенольные фрагменты, выполняющие роль антиоксиданта, и свободное основание порфирина как хелатора. Оловоорганические соединения являются не только эффективными прооксидантами, но и ингибиторами ферментов антиоксидантной защиты, что влияет на функциионально-метаболическое состояние организма и приводит к снижению компенсаторных возможностей организма в целом. Способность фенолсодержащего порфирина 15 коррегировать внутриклеточные антиоксидантные процессы в печени и почках, может свидетельствовать о его цитопротекторном действии.

2.3. Цитотоксическая активность комплексов оловоорганических соединений с гетероциклическими лигандами

Способность оловоорганических соединений накапливаться в клетке, а также их высокая токсичность позволяет рассматривать эти соединения в качестве перспективных фармакологических препаратов специфичного действия, в том числе, цитостатиков.

С целью установления возможного механизма действия мы изучили влияние комплексов оловоорганических соединений 7-14, 22, 23* с гетероциклическими лигандами

¿Л ь2, ь\

Ь на активность липоксигеназы, ключевого фермента, ответственного за окисление

арахидоновой кислоты до лейкотриенов, активных участников процессов развития опухолей.

I -\

I-Sn "

X = О (22), S (23)

'Комплексы синтезированы М.К ХашЫэроикш, Б.К. НафЧкакои (Университет Иоаннины. Греция) и предоставлены для дальнейших исследований

Влияние комплексов 7-14, 22, 23 на окисление линолевой кислоты ферментом липоксигеназа было изучено в интервале концентраций от 5 до 75 цМ. Полученные результаты сопоставлены с активностью известного препарата - цисплатина. В' присутствии всех комплексов наблюдается снижение ферментативной активности липоксигеназы по сравнению с цисплатином, который не проявляет столь значительного действия.

Полученные результаты подтверждаются значениями 1С50, которые составляют 14, 13 и 10 цМ для наиболее активных соединений 11, 12 и 13 соответственно (рис. 21). Дифенильное производное Бп 13 является наиболее эффективным ингибитором, значение 1С50 составляет 10 цМ.

Рис. 21. Концентрационная зависимость активности фермента липоксигеназы при окислении линолевой кислоты в присутствии комплексов 11-13 и цисплатина.

Очевидно, что ингибирующая активность комплексов зависит как от числа, так и от природы заместителей, связанных с атомом олова.

Для определения типа ингибирования фермента был использован метод стационарной кинетики при различных концентрациях субстрата (0,01 - 0,1 мМ) в присутствии и в отсутствие комплексов (концентрация добавки 15 цМ). Экспериментальные данные были обработаны графическим методом в координатах Лайнуивера - Берка. Показано, что для изученных соединений характерен смешанный механизм ингибирования фермента.

Для изучения взаимодействия комплексов 7-14, 22, 23 с белком был осуществлен компьютерный докинг, который подтвердил предположение о смешанном механизме ингибирования фермента, по которому могут образоваться как комплексы связывания ингибитора (I) с ферментом (Е) - EI, так и комплекс фермент-субстрат-ингибитор - ESI (рис. 22).

Все исследованные соединения 7-14, 22, 23 значительно ингибируют ферментативное окисление линолевой кислоты с участием липоксигеназы, однако соединение 7 демонстрирует значительно более низкую ингибирующую активность, что связано, по-видимому, с малыми значениями энергии связи образующихся комплексов ESI и EI.

Рис. 22. Сайты связывания комплексов 7 и 10 с липоксигеназой Для соединений 7-14, 22, 23 были проведены тесты на противораковую активность при различных концентрациях по отношению к клеткам лейкосаркомы мезенхимы лабораторных крыс линии ^(а?1, при этом осуществляли контроль раковых клеток в течение 24 ч после инкубирования исследованными соединениями. Данные по антипролиферативной активности комплексов по отношению к раковым клеткам саркомы представлены на рис. 23 в сравнении с цисплатином.

Рис. 23. Концентрационная зависимость выживших раковых клеток (%) лейкосаркомы крыс в присутствии комплексов 11-13 и цисплатина,

Показано, что все оловоорганические комплексы проявляют высокую антипролиферативную активность против раковых клеток лейкосаркомы у крыс, характер действия комплексов согласуются с данными о высокой ингибирующей активности по отношению к ферменту липоксигеназе. Значения 1С50 для представленных комплексов лежат в области наномолярных концентраций. Комплекс дифенилолова 13 демонстрирует высокую антипролиферативную активность и проявляет наиболее высокую ингибирующую активность по отношению к липоксигеназе (1С50 = 10 рМ).

Установлено, что комплексы 11-13 ингибируют фермент липоксигеназу в соответствии с такой же закономерностью, что и промотируют неферментативное пероксидное окисление олеиновой кислоты (рис. 7, 21). Проведенные исследования подтверждают корреляцию между антипролиферативной и ингибирующей активностями оловоорганических комплексов с тиоамидами, которая определяется не только геометрическими особенностями или числом и природой арильных и алкильных заместителей при атоме вп, но в значительной степени - природой органического гетероциклического лиганда.

Выводы

1. Показано, что оловоорганические соединения RrSnX4-n проявляют свойства прооксидантов в процессе пероксидного окисления Z-9-октадеценовой (олеиновой) кислоты LH как структурного фрагмента липидов. Причиной промотируклцей активности является вовлечение данных соединений в цепной радикальный процесс, характеризующийся взаимодействием пероксильных радикалов LOO' с оловоорганическими соединениями, что приводит к разрыву связей Sn-C и образованию инициаторов радикального процесса -активных алкильных радикалов R'.

2. Установлено, что связывание оловоорганических соединений в комплексы с фосфохолином как модели фосфолипидов, не предотвращает их прооксидантного действия. Эффект данного промотирующего действия сравним с действием соответствующих оловоорганических соединений R„SnX4.,,mra превышает его.

3. Показано, что образование оловоорганических комплексов с гетероциклическими лигандами за счет образования связей Sn-N, Sn-S не устраняет инициирующей активности комплексов олова, и данные соединения, как и в случае комплексов с фосфохолином, являются прооксидантами пероксидного окисления олеиновой кислоты.

4. В работе предложен новый подход, заключающийся в использовании полифункциональных органических соединений («антиокислительных ловушек»), в состав молекул которых входят хелатирующие фрагменты и антиоксидаитные группы ингибитора 2,6-ди-трет-бутилфенола для существенного снижения прооксидантного эффекта оловоорганических соединений.

5. Показано, что свободное основание .иезо-тетракис(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)порфирин обладает высокой антиоксидантной активностью в модельных системах, а также при действии на различные биологические объекты in vitro (крысы, рыбы) и существенно снижает токсичное действие хлорида триметиолова на ферменты антиоксидантной защиты каталазу и супероксиддисмутазу в печени и почках крыс in vivo.

6. Показана выраженная эффективность защитного действия 2,6-ди-трет-бутилфенолов с фосфонатными группами в присутствии оловоорганических соединений на биологических объектах in vitro (крысы, рыбы).

7. Обнаружена противоопухолевая активность комплексов оловоорганических соединений с гетероциклическими лигандами. Показано, что все оловоорганические комплексы проявляют высокую антипролиферативную активность против раковых клеток лейкосаркомы крыс, характер действия комплексов согласуется с данными о высокой ингибирующей активности по отношению к ферменту липоксигеназе и активности процесса пероксидного окисления олеиновой кислоты.

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах:

1. M.N. Xanthopoulou, S.K. Hadjikakou, N. Hadjiliadis, E.R. Milaeva, Yu.A. Gracheva, V.Yu. Tyurin, N. Kourkoumelis, K.C. Christoforidis, A.K. Metsios, S. Karkabounas, K. Charalabopoulos. Biological studies of new organotin(IV) complexes of thioamide ligands // Eur. J. Med. Chem., 2008, Vol. 43, P. 327-335.

2. H.A. Антонова, M.H. Коляда, В.П. Осипова, Ю.Т. Пименов, Н.Т. Берберова, В.Ю. Тюрин, Ю.А. Грачева, Е.Р. Милаева. Исследования антиоксидантных свойств фосфорилзамещенных фенолов // Докл. АН, 2008, Т. 419, №3, С. 342-344.

3. М.Н. Ксантопуло, С.К. Хаджикако, Н. Хаджилиадис, Н. Куркумелис, Е.Р. Милаева, Ю.А. Грачева, В.Ю. Тюрин, Л. Вергинадис, С. Каркабунас, М. Барил, И.О. Батлер. Изучение биологической активности комплексов оловоорганических соединений с 2-меркаптопиримидином // Изв. Акад. Наук. Сер. Хим. 2007. № 4, С. 751-757.

4. В.Ю. Тюрин, Ю.А. Грачева, Е.Р. Милаева, А.А. Прищенко, М.В. Ливанцов, О.П. Новикова, Л.И. Ливанцова, А.В. Маряшкин, М.П. Бубнов, К.А. Кожанов, В.К. Черкасов. Фосфорсодержащие производные 2,6-ди(т/;ет-бутил)фенола: антиоксидантная активность и свойства соответствующих феноксильных радикалов // Изв. Акад. Наук Сер. Хим, 2007, №4, С. 744-750.

5. E.R. Milaeva, V.Yu. Tyurin, D.B. Shpakovsky, O.A. Gerasimova, Zhang Jinwei, Yu.A. Gracheva. Organotins-promoted peroxidation of unsaturated fatty acids: a new antioxidative scavenger for promoters // Heteroatom Chem., 2006, Vol. 17, P. 475-480.

6. E.R. Milaeva, V.Yu. Tyurin, Yu.A. Gracheva, M.A. Dodochova, L.M. Pustovalova, V.N. Chernyshev. Protective effect of meso-tetrakis-(3,5-di-ter£-butyl-4-hydroxyphenyl)porphyrin on the in vivo impact of trimethyltin chloride on the antioxidative defense system // Bioinorg. Chem. Appl., 2006, P. 1-5.

7. E.R. Milaeva, D. Shpakovsky, Yu. A. Gracheva,. O.A. Gerasimova,. V.Yu. Tyurin, V. S. Petrosyan. Influence of metalloporphyrins on oleic acid peroxidation // J. Porphyrins Phthalocyanines, 2004, Vol. 8, P.701-706.

8. B.C. Петросян, Ю.А. Грачева, E.B. Григорьев, Е.Р. Милаева, Л. Пеллерито. Влияние оловоорганических соединений и их комплексов с фосфохолином на процесс перекисного окисления структурных фрагментов липидов // Ж. Орг. Хим., 2003, Т. 39, Вып.З, С. 384-387.

9. V.S. Petrosyan, E.R. Milaeva, Yu.A. Gracheva, E.V. Grigoriev, V.Yu. Tyurin, Yu.T. Pimenov, N.T. Berberova. The promoting effect of organotin compounds upon peroxidation of oleic acid// Appl. Organomet. Chem., 2002, Vol. 16, P. 655-659.

10. Ю.А. Грачева, В.Ю. Тюрин, Е.Р. Милаева, Н.Т. Берберова, Ю.Т. Пименов, B.C. Петросян. Перекисное окисление олеиновой кислоты в присутствии оловоорганических соединений // Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины. Сб. научных трудов. Издательский центр "Академия", Тюмень, 2002, С.89-91.

11. Н.Т. Берберова, В.П. Осипова, М.Н. Коляда, Н.А. Антонова, С.И. Филимонова, Ю.А. Грачева, А.А. Прищенко, М.В. Ливанцов, Л.И. Ливанцова, О.П. Новикова, Е.Р. Милаева, Н.С. Зефиров. Способ снижения уровня пероксидного окисления липидов печени добавлением (3,5-ди-тре/п-бутил-4-пщроксифенил)метилендифосфоновой кислоты. Патент РФ RU № 2405032 С1 от 27.11.2010.

12. Н.Т. Берберова, И.М. Чернушкина, В.П. Осипова, М.Н. Коляда, Ю.Т. Пименов, Ю.А. Грачева, А.А. Прищенко, М.В. Ливанцов, О.П. Новикова, Л.И. Ливанцова, Е.Р. Милаева, Н.С. Зефиров. Способ стабилизации липидов рыбных кормов. Патент РФ RU № 2457240 от 27.07.2012.

13. Ю.А. Грачева, М.А. Додохова, Е.Р. Милаева. Изучение in vivo активности порфирина с 2,6-ди-т/?ет-бутилфенольными группами в снижении токсического действии хлорида триметилолова // Тезисы XIX Менделеевского съезда по общей и прикладной химии, 2011, Волгоград 25-30 сентября, Т. 1, С. 495.

14. Ю.А. Грачева, Е.Р. Милаева Новый подход к снижению прооксидантной активности токсичных оловоорганических соединений с использованием «антиокислительных ловушек» // Тезисы XXV Международной Чугаевской конференции по координационной химии, 2011, Суздаль 6-11 июня, С. 430.

15. E.R. Milaeva, D.B. Shpakovsky, S.I. Filimonova, Y.A. Gracheva, E.F. Shevtsova, S.O. Bachurin, N.S. Zefirov. Novel metal based antioxidants as protectors against the oxidative stress // 10 European Biological Inorganic Chemistry Conference, 22-26 June, 2010, Thessaloniki Greece SL07.

16. E.R. Milaeva, V.Yu. Tyurin, Yu.A. Gracheva, D.B. Shpakovsky. Radical mechanism of organometallics toxicity. A novel approach to the detoxification. // IV International Symposium on Bioorganometallic Chemistry, Missoula, USA, 2008, 6-10 July, OP. 8.

17. Yu. Gracheva, V. Tyurin, V. Osipova, Yu. Piminov, E. Milaeva, E. Shevtsova. A novel antioxidant - 2,6-di-terf-butylphenol with phosphonate groups // International Conference on Organometallic and Coordination Chemistry, 2008, N. Novgorod, September 2-8, P. 36.

18. В.Ю. Тюрин, Ю.А. Грачева, Яохуань У, Е.Р. Милаева, М.П. Бубнов, К.А. Кожанов, В.К. Черкасов, Е.Ф. Шевцова. Фосфорсодержащие 2,6-ди-шрет-бутилфенолы как антиоксиданты и хелатирующие агенты // XXIII Международная Чугаевская конференция по координационной химии, 4-7 сентября 2007 г., Одесса. С. 373.

19. Ю.А. Грачева, В.Ю. Тюрин, Е.Р. Милаева, С.К. Хадьякакоу, Н. Хаджилиадис. Биологическая активность комплексов оловоорганических соединений с 2-меркаптопиримидином. XXIII Международная Чугаевская конференция по координационной химии, 4-7 сентября 2007 г., Одесса. С. 372.

20. V.Yu. Tyurin, Yu.A. Gracheva, A.A. Prishchenko, M.P. Bubnov, K.A. Kozhanov, V.K. Cherkasov, Yauhuan Wu, E.R. Milaeva. Phosphoryl substituted 2,6-di-iert-butyIph'enoIs: antioxidative activity and properties of the corresponding phenoxyl radicals // 2nd European Conference on Chemistry for Life Sciences. September 4-8, 2007 Wroclav, Poland. P. 200.

21. Yu.A. Gracheva, M.N. Xanthopoulou, S.N. Hadjikakou, N. Kourkoumelis, I. Verginadis, S. Karkabounas, V.Yu. Tyurin, E.R. Milaeva., N. Hadjiliadis. Biological activity of organotin(IV) complexes with 2-mercaptopyrimidine // 13,h International Conference on Biological Inorganic Chemistry. July 15-20, 2007, Vienna, Austria, P. 169

22. Yu.A. Gracheva, V.Yu. Tyurin, Jingwei Zhang, A.A. Prishchenko, M.V. Livantsov, O.P. Novikova, L.I. Livantsova, E.R. Milaeva. Phosphoryl substituted phenols as antioxidative scavengers for organotins in unsaturated acids peroxidation // Vth Conference " CIasters-2006", Russia, Astrakhan, September 4-8, 2006, P. 114-115.

Подписано в печать 18.09.2012 Формат 60x88 1/16. Объем 1.0 п.л. Тираж 150 экз. Заказ № 1239 Отпечатано в ООО «Соцветие красок» 119991 г.Москва, Ленинские горы, д.1 Главное здание МГУ, к. А-102

Содержание диссертации автор исследовательской работы: кандидата химических наук, Грачева, Юлия Александровна

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Оловоорганические соединения в окружающей среде

1.2. Токсичность оловоорганических соединений

1.3. Способы детоксикации оловоорганических соединений

1.4. Оловоорганические соединения - перспективные цитотоксичные агенты для клинического применения

Глава 2. Обсуждение результатов

2.1. Влияние оловоорганических соединений и их комплексов на пероксидное окисление Z- 9 - октадеценовой кислоты, как структурного фрагмента липидов

2.1.1. Влияние оловоорганических соединений на пероксидное окисление Z- 9 - октадеценовой кислоты

2.1.2. Влияние комплексов оловоорганических соединений на пероксидное окисление Z- 9 - октадеценовой кислоты

2.2.1. Пероксидное окисление Z- 9 - октадеценовой кислоты в присутствии 2,6 - ди-т/?ет-бутилфенола и оловоорганических соединений

2.2.2. Пероксидное окисление Z- 9 - октадеценовой кислоты в присутствии свободного основания тиезо-тетра(3,5-ди-т/9ет-бутил-4-гидроксифенил)порфирина и оловоорганических соединений

2.2.3. Пероксидное окисление Z- 9 - октадеценовой кислоты в присутствии 2,6-ди-трет-бутилфенолов, содержащих фосфонатные группы

2.2.4. In vitro пероксидное окисление липидов гомогенатов печени лабораторных животных

2.2.5. In vivo активность свободного основания тетра(3,5-ди-т/?ет-бутил-4-гидроксифенил)порфирина в снижении токсичного действия хлорида триметилолова

2.3. Цитотоксическая активность комплексов оловоорганических соединений с гетероциклическими лигандами

2.3.1. Влияние комплексов оловоорганических соединений на активность липоксигеназы

2.3.2. Изучение антипролиферативной активности комплексов оловоорганических соединений

Глава 3. Экспериментальная часть 120 Выводы 131 Список литературы

Введение диссертация по химии, на тему "Новый подход к снижению прооксидантной активности токсичных оловоорганических соединений с использованием "антиокислительных ловушек""

Широкое применение оловоорганических соединений общей формулы Кп8пХ4.п в различных областях является антропогенным фактором накопления этих веществ в окружающей среде.

Токсические эффекты оловоорганических соединений обусловлены несколькими факторами: ингибированием ферментных систем за счет связывания атома 8п с БН-группами белков; повреждением биомембран за счет липофильных свойств Кп8п4п; образованием реакционноспособных радикальных частиц при гомолитическом разрыве связи 8п-С; генерированием активных метаболитов кислорода (АМК); образованием токсичных метаболитов Ип8пХ4п и т.д. Следствием этих процессов является, общая высокая токсичность и неспецифичность действия оловоорганических соединений.

Объективная оценка химического загрязнения биоты требует более углубленного изучения молекулярных механизмов токсичности органических производных 8п и, в тоже время, является основой для поиска новых эффективных детоксицирующих агентов, обеспечивающих снижение экотоксикологического стресса, вызванного данными металлоорганическими соединениями.

С другой стороны способность оловоорганических соединений накапливаться в клетке, а также их высокая токсичность позволяет рассматривать эти соединения в качестве перспективных фармакологических препаратов специфичного действия, например, цитостатиков.

Цель настоящей работы заключается в изучении влияния оловоорганических соединений общей формулы К^пХ^п на биохимически значимые процессы, такие как пероксидное окисление липидов с использованием ненасыщенных жирных кислот, биомембран, ферментов антиоксидантной защитной системы, органов и тканей, а также процесс пролиферации.

Установлено, что одной из причин прооксидантной активности соединений RnSnX4n является вовлечение данных соединений в радикальный процесс, приводящий к разрыву связей Sn-C и образованию активных органических радикалов R", которые служат инициаторами цепного радикального процесса. Природа образующихся радикалов также оказывает влияние на прооксидантную активность оловоорганических соединений.

В работе предложен подход к снижению прооксидантного действия RnSnX4.n с использованием полифункциональных органических соединений, содержащих как антиоксидантные, так и хелатирующие группы. Для таких соединений принято условное название «антиокислительные ловушки».

Показано, что защитное действие in vivo свободного основания мезо-тетракис(3,5-ди-т/?ет-бутил-4-гидроксифенил)порфирина и фосфонатов с фенольными группами, обусловлено особенностью их химического строения - наличия в молекулах 2,6-ди-гарега-бутилфенольных фрагментов, выполняющих антиоксидантную функцию, свободного основания порфирина и остатков фосфоновой кислоты как хелаторов.

На основании полученных результатов в работе предложен новый подход, заключающийся в использовании в качестве ингибиторов радикальных процессов, индуцированных RnSnX4n, полифункциональных органических соединений, в состав молекул которых входят как хелатирующие так и антиоксидантные фрагменты (порфирины и фосфонаты, содержащие 2,6-ди-трега-бутилфенол). На основании полученных результатов, предложены способы снижения уровня пероксидного окисления липидов печени Asipensier guldenstadti Brandt добавлением (3,5 -ди-т/?ега-бутил-4-гидроксифенил)метилендифосфоновой кислоты (Патент РФ RU № 2405032 С1 от 27.11.2010, Патент РФ RU № 2457240 от 27.07.2012.)

Работа выполнена при поддержке РФФИ (гранты 08-03-00282-а, 09-03-00090-а, 10-03-01137-а, 11-03-12088-офи м, 11-03-00402-а).

Заключение диссертации по теме "Химия элементоорганических соединений"

Выводы

1. Показано, что оловоорганические соединения RnSnX^n проявляют свойства прооксидантов в процессе пероксидного окисления Z-9-октадеценовой (олеиновой) кислоты LH как структурного фрагмента липидов. Причиной промотирующей активности является вовлечение данных соединений в цепной радикальный процесс, характеризующийся взаимодействием пероксильных радикалов LOO' с оловоорганическими соединениями, что приводит к разрыву связей Sn-C и образованию инициаторов радикального процесса - активных алкильных радикалов R'.

4. В работе предложен новый подход, заключающийся в использовании полифункциональных органических соединений («антиокислительных ловушек»), в состав молекул которых входят хелатирующие фрагменты и антиоксидантные группы ингибитора 2,6-ди-трега-бутилфенола для существенного снижения прооксидантного эффекта оловоорганических соединений.

5. Показано, что свободное основание -мезо-тетракис(3,5-pyí-mpem-бутил-4-гидроксифенил) порфирин обладает высокой антиоксидантной активностью в модельных системах, а также при действии на различные биологические объекты in vitro (крысы, рыбы) и существенно снижает токсичное действие хлорида триметиолова на ферменты антиоксидантной защиты каталазу и супероксиддисмутазу в печени и почках крыс in vivo.

Список источников диссертации и автореферата по химии, кандидата химических наук, Грачева, Юлия Александровна, Москва

1. Davies A.G. Tin organometallics. In Comprehensive Organometallic Chemistry III. /2007. Chapter 3.14. P. 809-883.

2. Haiduc I., Silvestru C. Metal compounds in cancer chemotherapy. // Coord.Chem. Rev. 1990. Vol. 99. P. 253-296.

3. Hoch M. Organotin compounds in the environment an overview. // Applied Geochem. 2001. Vol. 16. P. 719-743.

4. Pellerito C. Nagy L., Pellerito L., Szorcsik A. Biological activity studies on organotin(IV) complexes and parent compounds. // J. Organomet. Chem. 2006. Vol. 691. P. 1733-1747.

5. Milaeva E., Petrosyan V., Berberova N., Pimenov Y. Pellerito L. Organic derivatives of mercury and tin as promoters of membrane lipid peroxidation. // Bioinorg. Chem. Appl. 2004. Vol. 2. P. 69-91.

6. Saxena A., Huber F. Organotin compounds and cancer chemotherapy. // Coord. Chem. Rev. 1989. Vol. 95. P. 109-123.

7. Blunden S., Chapman A. Organotin compounds in the environment In: Organometallic compounds in the Environment. / Ed. P.J. Craig. Longman. 1986. P. 111-159.

8. Organometallic Compounds in the Environment. Ed. PJ. Craig. UK: Longman. 1986. 65 P.

9. Gilmour C.C., Tuttle J.H., Means J.C. In Marine and Estuarine Geochemistry. / Eds. Sigleo A.C., Haltori A. Chelsia: Lewis Publishers, 1985. P. 239-258.

10. Crompton T.R. Occurence and Analysis of Organometallic Compounds in the Environment. / John Wiley. New York. 1998. 248 P.

11. Chemistry of Tin. / Ed. Smith P.J. Chapman and Hall. 1998. 510 P.

12. Перечень рыбохозяйственных нормативов предельно допустимых концентраций (ПДК) и ориентировочно безопасных уровней воздействия (ОБУВ) вредных веществ для воды и водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение. М. ВНИРО, 1999. 211 С.

13. Cooney S.S. In The Biological Alkylation of Heary Elements. / Ed. Craig P.J. London: Royal Soc. Chem. 1988. 128 P.

14. Shi-Wen Yu, Li-Feng Yao, Xue-Fei Lin, Si-Ya Yang Theoretical studies on the reactions of thymine with six methylating agents. // Сотр. Theor. Chem. Vol. 972. 2011. P. 25-31

15. Jenkins R.O., Craig P.J., Francesconi K.A., Harrington C.F. Environmental and biological aspects of organometallic compounds. In Comprehensive Organometallic Chemistry III. II Eds. R.H. Crabtree, Mingos: Elsevier. 2007, Chap. 12.13, P. 603-661

16. Филенко О.Ф., Ларина O.B. Распределение по органам триалкилолово-хлоридов как фактор опрделяющий их токсичность для карпов. // Биол. науки. 1982. № 4. С. 54-57.

17. Kubilay N., Yemenicioglu S., Twigrul S., Salihoglu S. The distribution of organotin compounds in the north lastern Mediterranean. // Mar. Pollut. Bull. 1996. Vol. 32. № 2. P. 238-240.

18. Lin Т., Wu M., Deng J. A retrospective study of 148 cases with acute triphenyltin acetate intoxication: Abstr. North American Congress of Clinical Toxicology annual Meeting, Orlando. II J. Toxicol. Clin. Toxicol. 1998. Vol. 36. №5. P. 466-467.

19. Кочкин Д.А. Вопросы водной токсикологии. / М.: Наука. 1970. С. 121.

20. Balabaskaran S., Tilakarati К., Kumar Das V.G. Studies on the phytotoxic effects of some organotin (IV) compounds on the germination of themung bean seed Phaseolus cuereus. II Appl. Organomet. Chem. 1987. Vol. l.P. 347-353.

21. Handbook on Metals in Clinical and Analytical Chemistry. / Eds. Seiler H.G., Sigel A., Sigel H. New York: Marcel Dekker. 1994. P. 940.

22. Genetic Response to Metals. / Ed. B.Sarkar. New York: Marcel Dekker, 1995. P.504.

23. Некоторые вопросы токсичности ионов металлов. / Под ред. Зигель X., Зигель А. М.: Мир. 1993. С.366.

24. Smith P.J. Health and safety aspects of tin chemicals. In Chemistry of Tin. 1995. / Ed. P.J. Smith. Chapman & Hall. P. 429-441.

25. Tin and Organotin Compounds: a Preliminary Review. In Environ. Health Criteria. / 1980. Geneva: WHO P.15.

26. Tributyltin Compounds. In Environ. Health Criteria. / Geneva: WHO. 1990. P.116.

27. Экология человека. / Под ред. Н.А. Огаджаняна. М.: Крук. 1997. С.205

28. Davidson Т., Ке Q., Costa М. Selected Molecular Mechanisms of Metal Toxicity and Carcinogenicity In Handbook on the Toxicology of Metals (Third Edition) / Eds. G.F. Nordberg, B.A. Fowler, M. Nordberg, L.T. Friberg. Elsevier. 2007. P. 79-100.

29. Noda Т., Morita S., Yamano Т., Shimizu M., Nakamura Т., Saiton M., Yamada A. Teratogenicity study of tri-n-butyltin acetate in rats by oral administration. // Toxicol. Lett. 1991. Vol. 55.1.l.P. 109-115.

30. Bollo Т., Ceppa L., Cornaglia E., Nebbia C., Biolatti В., Daessto M. Triphenyltin acetate toxicity: a biochemical and ultrastructural study on mouse thymocytes. II Hum. Exp. Toxicol. 1996. Vol.15. P. 219-225.

31. Dacasto M., Nebbia C., Bollo E. Triphenyltin acetate (TPTA)-induced cytotoxicity to mouse thymocytes. // Pharmacol. Res. 1994. Vol. 29. I. 2. P. 179-186.

32. Raymond H.H., Pieters R.H., Bol M., Seinen W., Penninks A.H. Cellular and molecular aspects of organotin-induced thymus atrophy. // Hum. Exp. Toxicol 1994. Vol. 13. P. 876-879.

33. Raffray M., Cohon G. Bis(tri-n-butyltin)oxide induces programmed cell death (apoptosis) in immature rat thymocytes. // Arch. Toxicol. 1991. Vol. 65. P. 135-139.

34. Balabaskaran S., Tilakarati K., Kumar Das V.G. Studies on the phytotoxic effects of some organotin(IV) compounds on the germination of the mung bean seed Phaseolus aureus. // Appl. Organomet. Chem. 1987. Vol. 1. P. 347-353.

35. Kuthubutheen A.S., Wickneswari R., Kumar Das V.G. Structure-activity studies on the fungitoxicity of some triorganotin(IV) compounds. // Appl. Organomet. Chem. 1989. Vol. 3. P. 231-242.

36. Skarning C.R., Varhaug L.N., Fonnum F., Osmundsen H. Effects of in vivo treatment of rats with trimethyltin chloride on respiratory properties of rat liver mitochondria. II Biochem. Pharmacol. 2002. Vol. 64. P. 657667.

37. McCarty L.S., Ozburn G.W., Smith A.D., Bharath F., Orr D., Dixon D.G. Hypothesis formulation and testing in aquatic bioassays: a deterministic model approach. // Hydrobiol. 1989. Vol. 188/189. P. 533-542.

38. Tan L.P., Ng M.L., Kumar Das V.G. The effect of trialkyltin compounds on tubulin polymerization. // J. Neurochem. 1978. Vol. 31. P. 1035 -1041.

39. Aldridge W.N., Brown A.W. The Biological Properties of Methyl and Ethyl Derivatives of Tin and Lead. In the Biological Alkylation of Heavy Elements. / Ed. Craig P.J. Royal Soc. Chem. 1988. P. 147-163.

40. Ali Akhtar A., Upreti R.K., Kidwai A.M. Assessment of di- and tri-butyltin interaction with skeletal muscle membranes. // Bull. Environ. Contam. Toxicol. 1990. Vol. 44. P. 29-38.

41. Liu S.H., Shiau S.Y. Studies on the contracture inducing action of triphenyltin in the mouse diaphragm. // Eur. J. Pharmacol. 1994. Vol. 292. P. 95-101.

42. Ghais S. M., Ali B. Inhibition of glutathione S - transferase catalyzed xenobiotic detoxication by organotin compounds in tropical marine fish tissues. II Bull. Environ. Contam. Toxicol. 1999. Vol.62. P. 207.

43. Ершов Ю.А., Плетенева T.B. Механизм токсического действия неорганических соединений. / М.: Медицина, 1989. С. 197-200.

44. Smith P.S, Crowe A.S., Kumar Das V.G., Sohn D. Structure activity Relationships for some organotin molluscicides. // Pestie. Sci. 1979. Vol. 10. P. 412-422.

45. Шапиро A.3., Бобкова A.H. Влияние ядов противообрастающих покрытий на ферменты углеводного обмена некоторых организмов обрастания. I/ Гидробиол. журн. 1986. Т. 22. № 6. С. 79-82.

46. Mitura Haruo, Nagata Shinichi. Effect of NaCl on the toxicity of bis (tri— n-butyltin IV.) oxide for halotolerant Brevibacterium sp. Sap. S. // Toxicol. Environ. Health 1993. Vol.39. №3. P. 196-201.

47. Aschner M., Aschner J.L. Cellular and molecular effects of trimethyltin and triethyltin: Relevance to organotin neurotoxicity. // Neurosc. Biobehav. Rev. 1992. Vol. 16. P. 427-435.

48. Ali S.F., Labal C.P., Bondy S.C. Reactive oxygen species formation as a biomarker of methylmercury and trimethyltin neurotoxicity. // Neurotoxicol. 1992. Vol. 13. P. 637-648.

49. Fish R.H., Kimmel E.C., Casida J.E. Bioorganotin chemistry. Biological oxidation of tributyltin derivalives. II J. Organomet. Chem. 1975. Vol. 93. P. 1-4.

50. Prough R.A., Stalmach M.A., Wiebkin P., Bridges S.M. The microsomal metabolism of the organometallic derivatives of the group IV elements, germanium, tin and lead. И J. Biochem. 1981. Vol.15. P. 305.

51. Зенков H.K., Меньшикова Е.Б Активированные кислородные метаболиты в биологических системах. // Успехи совр. биол. 1993. Т. 113. № 3. С. 286-296.

52. Winston G.W. Oxidants and antioxidants in aquatic animals. Mini-review. // Сотр. Biochem. Physiol 1991. Vol. 100. P. 173-179.

53. Kimmel E.C., Fish R.H., Casida S.E. Bio organotin chemistry: Metabolism of organotin compounds in microsomal monoxygenase systems and in mammals. II J. Agris. Food Chem. 1977. Vol. 25. P. 1-9.

54. Kimmel E, Ohhira S., Matsui H., Nitta K., Subchronic stugy of the metabolism of triphenyltin in hamsters. // Vet. Hum. Toxicol. 1996. Vol. 38. P. 206-209.

55. Reader S., Louis R.S., Pelletier E., Denizeau F. Accumulation and biotransformation of tri-n-butyltin by isolated rainbow trout hepatocytes. II Environ. Toxicol. Chem. 1996. Vol. 15. №11. P. 2049-2052.

56. Fent K., Stegeman J.J. Effects of tributyltin in vivo on hepatic cytochrome P 450 forms in marine fish. И Aquat. Toxicol. 1993. Vol. 24. P. 219-240.

57. Oberdorster E., Rittschof D., Lie Blanc G.A. Alteration of 14C.-testosterone metabolism after chronic exposure of daphnia magna to tributyltin. // Arch. Environ. Contam. Toxicol. 1998. Vol. 34. P. 21-25.

58. Milaeva E., Petrosyan V., Berberova N., Pimenov Y., Pellerito L. Organic derivatives of mercury and tin as promoters of membrane lipid peroxidation. I/Bioinorg. Chem. Appl. 2004. Vol. 2(1-2). P. 69-91.

59. Томилов А.П., Каргин Ю.М., Черных И.Н. Электрохимия элементоорганических соединений (элементы IV, V и VI групп периодической системы). / М.: Наука. 1986. С. 286.

60. Michman М. The electrochemistry of alkyl compounds of germanium, tin and lead. Chapter 13. In The chemistry of organic germanium, tin and lead compounds. / Ed. S. Patai. John Wiley, Sons Ltd. 1995. P. 665-722.

61. Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты. // Yen. химии. 1985. Т. 54. С. 540-558.

62. Давыдова СЛ., Пименов Ю.Т., Милаева Е.Р. Ртуть, олово, свинец и их органические производные в окружающей среде. / Астрахань: Изд. АГТУ. 2001. 148 С.

63. Fish R.H., Kimmel Е.С., Casida J.E. Bioorganotin chemistry: Reactions of tributyltin derivatives with a cytochrome P-450 dependent monooxygenase enzyme system. II J. Organomet. Chem. 1976. Vol. 118. P. 41-54.

64. Wiebkin P., Prough R.A., Bridges J.W. The metabolism and toxicity of some organotin compounds in isolated rat hepatocytes. // Toxic. Appl. Pharmacol. 1982. Vol. 62. P. 409-420.

65. Ryo Yamauchi Vitamin E: Mechanism of Its Antioxidant Activity. // Food Set. Technol. Int. 1997. Vol. 3 (4). P.301-309.

66. Schwarz K. The cellular mechanism of vitamin E action; direct and indirect effect of a-tocopherol on mitochondrial respiration. // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1972. Vol. 203. P. 45-52.

67. Visioli F., Colombo C., Galli C. Oxidation of individual fatty acids yields different profiles of oxidation markers. // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1998. Vol. 245. P. 487-489.

68. Fuster M.D., Lampi A.M., Hopia A., Kamal-Eldin A. Effects of alpha-and gamma-tocopherols on the autooxidation of purified sunflower triacylglycerols. // Lipids. 1998. Vol. 33. N. 7. P. 715-722.

69. Grau A., Ortiz A. Dissimilar protection of tocopherol isomers against membrane hydrolysis by phospholipase A2. // Chem. Phys. Lipids. 1998. Vol. 91. N2. P. 109-118.

70. Шамовский И.Л., Яровская И.Ю. Исследование структуры комплекса молекул токоферола и арахидоновой кислоты методом теоретического конформационного анализа. // Биол. Мембр. 1990. Т. 7. С. 556-560.

71. Kellog E.W., Fridovich I. Liposome oxidation and erythrocyte lysis by enzymatically generated superoxide and hydrogen peroxide. // J. Biol. Chem. 1977. Vol. 252. N 19. P. 6721-6728.

72. Раманаускайте Р.Ю., Абронина И.Ф., Карасева Л.И., Сергеев А.В. Коррекция Р-каротином противоопухолевого иммунитета при экспериментальной химиотерапии злокачественных новообразований. // Бюлл. экспер. биол. мед. 1994. N 9. С. 295-297.

73. Ерин А.Н., Спирин М.М., Табидзе JI.B., Каган В.Е. Образование комплексов а-токоферола с жирными кислотами. Возможный механизм стабилизации мембран витаминов Е. // Биохим. 1983. Т. 48. N11. С. 1855-1861

74. Andersen Н., Andersen О. Effect of dietary alpha-tocopherol on lipid peroxidation indused by methyl mercuric-cloride in mice. // Pharmacol. Toxicol. 1993. Vol. 73. P. 192-201.

75. Verity M.A., Sarafian Т., Pacifici E.N.K., Sevanian A. Phosholipase A(2) stimulation by methyl mercury in neuron culture. // J. Neurochem. 1994.Vol. 62. P. 705-714.

76. Рогинский В. А. Фенольные антиоксиданты: реакционная способность и эффективность. / М.: Наука. 1988. С. 246.

77. Ершов В.В., Никифоров Г.А. Таутомерные превращения фенолов. // Yen. химии. 1966. Т. 35. №11. С. 1953-1985.

78. Kolthoff J., Chantooni М., Bhowmik S. Acid-base properties of mono-and dinitrophenols in acetonitrile. // J. Am. Chem. Soc. 1966. Vol. 88. №23. P. 5430-5439.

79. Manda E. Stable free radicals derived from 4-arylazo-2,6-di-teri-butylphenol.!I Bull. Chem. Soc. Jap. 1968. Vol. 41. P. 1743-1751.

80. Mlodnicka T. Metalloporphyrin-catalyzed oxidation of hydrocarbons with dioxygen. Metalloporphyrins in catalytic oxidations. / Ed. Sheldon R.A. New York: Marcel Dekker Inc. 1994. Vol. 9. P. 261-269.

81. Milano J., Day B.J. A catalytic antioxidant metalloporphyrin blocks hydrogen peroxide-induced mitochondrial DNA damage. // Nucl. Acids Res. 2000. Vol. 28. P. 968-975.

82. Patel M., Day B.J. Metalloporphyrin class of therapeutic antioxidants. // Trends Pharmacol Sci. 1999. Vol. 20 P. 359-368.

83. Farrell N. Metal Complexes as Drugs and Chemotherapeutic Agents. In Comprehensive Coordination Chemistry II. / Ed. J. A. McCleverty, T.J. Meyer. Elsivier. 2004. P. 809-840.

84. Pizarro A.M., Habtemariam A., Sadler P.J. Activation Mechanisms for Organometallic Anticancer Complexes. In Top. Organomet. Chem. {Medicinal Organometallic Chemistry). /2010. Vol. 32. P. 21-56.

85. Lippard S. Metals in medicine. In Bioinorganic chemistry. / Ed: I. Bertini, H.B. Gray, J. Valentine, USA: Univ. Science Books. 1994. P. 505.

86. Gielen M. Review: Organotin compounds and their therapeutic potential: a report from the organometallic chemistry department of the Free University of Brussels. // Appl. Organomet. Chem. 2002. Vol. 16. P. 481494.

87. Crowe A.J. The chemotherapeutic properties of tin compounds. // Drugs Fut. 1987. Vol. 12. P. 255.

88. Gielen M., Biesemans M., Willem R. Organotin compounds: from kinetics to stereochemistry and antitumour activities. // Appl Organomet. Chem. 2005. Vol. 19. P. 440-450.

89. Gielen M. Tin based antitumor drugs. // Coord. Chem. Rev. 1996. Vol. 151 P. 41-53.

90. Yang P., Guo M. Interactions of organometallic anticancer agents with nucleotides and DNA. // Coord. Chem. Rev. 1999. Vol. 189. P. 185-211.

91. Pellerito L., Nagy L. Organotin(IV)n+ complexes formed with biologically active ligands: equilibrium and structural studies, and some biological aspects. // Coord. Chem. Rev. 2002. Vol. 224. P. 111-150.

92. Hadjikakou S., Hadjiliadis N. Antiproliferative and anti-tumor activity of organotin compounds. // Coord. Chem. Rev. 2009. Vol. 253. P. 235-249.

93. Chasapis C., Hadjikakou S., Garoufis A., Hadjiliadis N., Bakas T., Kubicki M., Ming Y. Organotin(IV) Derivatives of L-Cysteine and their in vitro Anti-Tumor Properties. // Bioinorg. Chem. Appl. 2004. Vol. 2. P. 43-54.

94. Kaluderovic G. N., Paschke R., Prashar S., Gomez-Ruiz S. Synthesis, characterization and biological studies of 1-D polymeric triphenyltin(IV) carboxylates. UJ. Organomet. Chem. 2010. Vol. 695. P. 1883-1890.

95. Aw T., Nicotera P., Manzo L., Orrenius S. Tributyltin stimulates apoptosis in rat thymocytes. II Arch. Biochem. Biophys. 1990. Vol. 283 P. 46-50.

96. Viviani B., Rossi A., Chow S., Viviani P. Triethyltin interferes with Ca signalling and potentiates norepinephrine release in PC 12 cells. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1996. Vol. 140. P. 289-295.

97. Liu H.G., Wang Y., Lian L., Xu L. Tributyltin induces DNA damage as well as oxidative damage in rats. // Environ. Toxicol. 2006. Vol. 21. P. 166-171.

98. Lee R. Metabolism of tributyltin oxide by crabs, oyster and fish. // Marine Envir. Res. 1985. Vol. 17. P. 145-153.

99. Gielen M., Bouhdid A., Willem R., Bregadze V.I., Ermanson L.V., Tiekink E.R.T. X-ray structure of the dimeric bis(l,7-dicarba-closo-dodecaborane-l-carboxylato)-di-n-butyltin. oxide. // J. Organomet. Chem. 1995. Vol. 501. P. 277-281.

100. Siddiqi Z.A., Shahid M., Kumar S., Khalid M., Noor S. Synthesis, crystal structure and in vitro antitumor activity of carboxylate bridged dinuclear organotin(IV) complexes. // J. Organomet. Chem. 2009. Vol. 694, P. 3768-3774.

101. Gielen M. Synthesis, characterization and in vitro antitumor activity of di-and triorganotin derivatives of polyoxa- and biologically relevant carboxylic acids. II J. Inorg. Biochem. 2000. Vol. 79. P. 139-145.

102. Gielen M., Ma H., Bouhdid A., Dalil H., Biesemans M., Willem R. Di-n-butyl-, tri-M-butyl- and triphenyltin dl-terebates: synthesis, characterization and in vitro antitumour activity. // Metal-based Drugs. 1997. Vol. 4. P. 193-197.

103. Gomez-Ruiz S., Kaluderovic G., Prashar S., Hey-Hawkins S., Eric A., Zizak Z., Juranic Z, Study of the cytotoxic activity of di and triphenyltin(IV) carboxylate complexes. // J. Inorg. Biochem. 2008. Vol. 102. P. 2087-2096.

104. Wanli Kang, Xiaoyan Wu, Jianbin Huang. Synthesis, crystal structure and biological activities of four novel tetranuclear di-organotin(IV)carboxylates. // J. Organomet. Chem. 2009. Vol. 694. P. 2402-2408.

105. Banfeng Ruan, Yupeng Tian, Rentao Hu, Hopgping Zhou, Jieying Wu, Jiaxiang Yang, Hailiang Zhu. Synthesis, crystal structure and in vitro antibacterial activity of two novel organotin(IV) complexes. // Inorg. Chim. Act. 2011. Vol. 365. P. 473-479.

106. Barot G. Shahi K., Roner M., Carraher C. Synthesis, structural characterization and ability to inhibit cancer growth of organotin poly(ethyleneglycols). // J. Inorg. Organomet. Polym. 2007. Vol. 17. P. 595-603.

107. Carraher C., Roner M., Shahi K., Ashida Y., Barot G. Synthesis and initial cell lines results of organotin polyethers containingdiethylstilbestrol. II J. Inorg. Organomet. Polym. 2008. Vol. 18. P. 180188.

108. Gomez, E., Contreras-Ordonez G., Ramirez-Apan T. Synthesis, characterization and in vitro cytotoxicity of pentacoordinated tin(IV) complexes derived from aminoalcohols. // Chem. Pharm. Bull. 2006. Vol. 54. P. 54-57.

109. Cagnoli M., Alama A., Barbieri F., Novelli F., Bruzzo C., Sparatore F. Synthesis and biological activity of gold and tin compounds in ovarian cancer cells. // Anticancer Drugs. 1998. Vol. 9. P. 603-610.

110. Barbieri F., Cagnoli M., Alama A., Novelli F., Bruzzo C. Cytotoxicity in vitro and preliminary anti-tumor activity in vivo of a novel organotin compound. II Anticancer Res. 2000. Vol. 20. P. 977-983.

111. Barbieri F., Viale M., Sparatore F., Schettini G., Favre A., Bruzzo C., Novelli F., Alama A. Antitumor activity of a new orally active organotin compound: a preliminary study in murine tumor models. // Anticancer Drugs. 2002. Vol. 3. P. 599-604.

112. Alama A., Viale M., Cilli M., Bruzzo M., Novelli F., Tasso В., Sparatore F. In vitro cytotoxic activity of tri-/?-butyltin(IV)lupinylsulfide hydrogen fumarate (IST-FS 35) and preliminary antitumor. // Invest. New Drugs. 2009. Vol. 27. P. 124-130.

113. Брегадзе В.И., Глазун С.А. Металлосодержащие карбораны, проявляющие противоопухолевую активность. // Изв. Акад. Наук. Сер. Хим. 2007. №4. стр. 620-626.

114. Collinson S.R., Fenton D.E. Metal complexes of bibracchial Schiff base macrocycles. // Coord. Chem. Rev. 1996. Vol. 148. P. 19-40.

115. Rehman W., Baloch M.K., Badshah A. Synthesis, spectral characterisathion and bio-analysis of some organotin(IV) complexes. // Eur. J. Med. Chem, 2008. Vol.43. P.2380-2385.

116. W. Rehman, M.K. Baloch, A. Badshah Comparative Structural and Fungicidal Studies of Mono-Methyl Phthalate and Its Tin(IV) Derivatives. II Russ. J. Inorg. Chem. 2007. Vol. 52. P. 102-107.

117. Timerbaev A.R., Hartinger Ch.G., Aleksenko S.S., Keppler B.K. Interactions of antitumor metallodrugs with serum proteins: advances in characterization using modern analytical methodology. // Chem. Rev. 2006. Vol. 106. P. 2224-2248.

118. Louie A.Y., Meade T.J. Metal complexes as enzyme inhibitors. // Chem. Rev. 1999. Vol. 99. P. 2711-2734.

119. Attar K. Analytical methods for speciation of organotins in the environment. // Appl. Organomet.Chem. 1996. Vol. 10. P. 317-337.

120. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. / М.: Наука. 1972. 252 С.

121. Patai S. (Ed) The chemistry of organic germanium, Tin and lead compounds. / Chichester.Wiley. 1995. C. 311.

122. Girotti A.W. Mechanisms of lipid peroxidation. // J. Free Rad. Biol. Med. 1985. Vol. 1 P. 87-95.

123. Чудинова B.B., Алексеев C.M., Захарова Е.И., Евстигнеева Р.П. Перекисное окисление липидов и механизм антиоксидантного действия витамина Е. // Биоорг. Химия. 1994. Т. 20. С. 1029-1046.

124. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б., Шергин С.М. Окислительный стресс. Диагностика, терапия, профилактика. / Новосибирск: Изд. РАМН. Сибирское отделение. 1993. С. 181.

125. Эмануэль Н.М., Кузьмина М.Г. Экспериментальные методы химической кинетики. /М.: Изд. МГУ. 1985. С. 384.

126. Эмануэль Н.М., Денисов Е.Т., Майзус З.К. Цепные реакции окисления углеводородов в жидкой фазе. / М.: Наука. 1965. С. 375.

127. Рогинский В.А. Кинетические модели перекисного окисления в липидном бислое. // Молек. Биол. 1990. Т. 24. С. 1582-1589.

128. Lardy Н.А., A theory concerning the mechanism of fatty acid oxidation and of carbon dioxide fixation. // Proc. Nat. Acad. Sci. 1952. Vol. 38. P. 1003-1013.

129. Davies A.G. Organotin Chemistry. / New York: Wiley-VCH. 1997. C. 240.

130. Porter N.A., Mills K.A., Carter R.L. A mechanistic study of oleat autooxidation: compecting peroxyl H-atom abstraction and rearrangement. II J. Am. Chem. Soc. 1994. Vol. 16. P. 6690-6696.

131. Kumar Das. V.G., Kuthubutheen A.S., Balabaskaran S., Nq Seik Weng. Some recent structural results and biological work on organotin (IV) compounds. II Main Group Met. Chem. 1989. Vol. 12. P. 389-424.

132. Davies A.G., Smith P.J. Tin. In Comprehensive Organometallic Chemistry. / Eds. G.Wilkinson, F.A.S. Gordon, E.W. Abel. Pergamon Press. 1982. Vol. 2. P. 519-627.

133. Brokenshire J.L., Ingold K.U. The free-radical reaction of tri-n-butyltin hydride with peroxides. II J. Chem. Kinetics. 1971. Vol. 3. P. 343-357.

134. Разуваев Г.А., Вязанкин P.C., Дьячковская O.C. Реакции перекисных соединений с органическими производными кремния, олова и свинца. II Журн. общ. хим. 1962. Т. 32. С. 2161-2169.

135. Вязанкин Н.С., Разуваев Г.А., Круглая О.А.(Щепеткова). Реакции перекисей с гексаэтилдистаннаном и гексаэтилдисиланом. // Изв. АН СССР, С ер.хим. 1962. №. 11. С. 2008-2014.

136. Arakawa Y. Tin and Immunity. // Biomed. Res. Ttrace Elements. 1995. Vol. 6. P. 57-90.

137. Arakawa Y. Cellular and Biochemical Aspectes of Antitumor activity of Organotin Compounds. In Main group Elements and Their Compounds. / Ed. Kumar Das V.G. New Dehli. India: Narosa. 1996. P. 422-445.

138. Barbieri R., Silvestri A., Giuliani A.M., Piro V., Di Simone F., Madonia G. Organotin compounds and deoxyribonucleic acid. // J. Chem. Soc. Dalton trans. 1992. P. 585-590.

139. Iwata T., Kimura Y., Tsutsumi K., Furukawa Y., Kimura S. The effect of various phospholipids on plasma lipoproteins and liver lipids in hypercholesterolemic rats. // J. Nutr. Sei. Vitaminol. 1993. Vol. 39 (1). P. 63-71.

140. Petrilli L., Caruso F., Rivarola E. Infrared and moessabauer spectroscopy and the crystal and molecular structure of (pyrimidine-2-thionato)triphenyltin. // Main Group Met. Chem. 1994. Vol. 17, P. 439436.

141. Organic Peroxides. / Eds. Niki N., Ando W. New York: Wiley J. 1992. P. 342.

142. Cao Chengjing, Zhang Shuzhen, Zhang Xian, Toxicological study of four hindered phenol antioxidants. // Beijing Yixueyuan Xuebao. 1982. 14(2). P. 105-109. Chemical Abstract 97: 194124q.

143. Federal Register. 1998. Vol. 63. № 166. P. 45715-45716.

144. Federal Register. 1992. Vol.57. № 209. P. 48723-48724.

145. Federal Register 1986. Vol. 51. № 249. P. 47011-47012.

146. Federal Register 1982. Vol. 47. № 34. p. 30241.

147. Watts N. Bisphosphonate treatment of osteoporosis. // Clinics in Geriatric Medicine. 2003. Vol. 19. P. 395-414.

148. Fung H.B., Stone E.A, Piacenti F.J. Tenofovir disoproxil fumarate: A nucleotide reverse transcriptase inhibitor for the treatment of HIV infection. // Clin. Therap. 2002. Vol. 24. P. 1515-1548.

149. Frampton J.E. Risedronate on two consecutive days per month. // Drugs and Aging 2009. Vol. 26. P. 355-362.

150. Hershko C. Novel approaches in the treatment of iron overload. // Semin. Hematol. 2005. Vol. 42. P. 2-4.

151. Denisov E., T. Denisova. Handbook of antioxidants: bond dissociation energies, rate constants, activation energies and enthalpies of reactions. / New York: CRC Press. 1995. P. 231.

152. Розанцев Э.Г., Шолле В.Д. Органическая химия свободных радикалов. / Изд. Химия. 1979. С. 162.

153. Kabe Y., Ohmori М., Shinouchi К., Tsuboi Y., Hirao S., Azuma M., Watanabe H., Okura I., Handa H. Porphyrin accumulation in mitochondria is mediated by 2-oxoglutarate carrier. // J. Biolog. Chem. 2006. Vol. 281. P. 31729-31735.

154. Ozawa Т., Hanaki A. Incorporation of some metal ions into polyvalent porphyrins. // Inorg. Chim. Acta. 1987. Vol. 130. №2. P. 231-233.

155. Строев E.H., Макарова В.Г. Практикум по биологической химии. /М.: Высшая школа. 1986. С. 279.

156. Milgrom L.R. The facile aerial oxidation of a porphyrin. // Tetrahedr. 1983. Vol. 39. №23. P. 3895-3898.

157. Golder A J., Milgrom L.R., Nolan K.B., Povey D.C. Importance of macrocyclic ring deformation in the facile aerial oxidation of phenolic porphyrins. // J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1987. Vol. 23. P. 17881790.

158. Милаева E.P. Окисление лиганда как способ внутримолекулярной активации металлокомплексов. II Изв. АН, Сер. хим.2001. №4. С. 549562.

159. Davies В.Е. Environmental Geochemistry and Health. 11 Environ. Geochem. Health. 1999. Vol. 21. P. 291-297.

160. Александров А.И., Бубнов H.H.,. Лазарев Г.Г, Лебедев Я.С., Прокофьев А.И., Сердобов М.В. Образование радикальных пар при фотовосстановлении пространственно-хинонов фенолами в замороженных растворах. // Изв. АН СССР. Сер. Хим. 1976. Р. 515519.

161. Ершов В.В., Никифоров А.А., Володькин, Пространственно-затрудненные фенолы. / М.: Химия. 1972. С. 352.

162. Geloso М.С., Corvino V., Cavallo V., Toesca A., Guadagni E., Passalacqua R., Michetti F. Expression of astrocytic nestin in the rat hippocampus during trimethyltin-induced neurodegeneration. // Neurosci. Lett. 2004. Vol. 357. P. 103-107.

163. Muller F.L., Lustgarten M.S., Jang Y., Richardson A., Van Remmen H. Trends in oxidative aging theories. // Free Radio. Biol. Med. 2007. Vol. 43 (4). P. 477-503.

164. McCord J.M., Fridovich I. Superoxide dismutase: the first twenty years (1968-1988). // Free Radic. Biol. Med. 1988. Vol. 5 (5-6). P. 363-369.

165. Chelikani P., Fita I., Loewen P.C. Diversity of structures and properties among catalases. // Cell. Mol. Life Sci. 2004. Vol. 61 (2). P. 192-208.

166. Kook S.C., Wong K., Ng Meng, Kumar Das V.G. Evaluation of the genotoxic potential of six triorganotin compounds by the mouse micronucleus and spermhead abnormality. // Appl. Organomet. Chem. 1991. Vol. 5. P. 409-415.

167. Fridovich I. Superoxide dismutases. // Ann. Rev. Biochem. 1975. Vol. 44. P. 147-159.

168. Gadd G.M. Microbial interactions with tributyltin compounds: detoxification, accumulation, and environmental fate. // Science Tot. Environm. 2000. Vol. 258. P. 119-127.

169. Sergent O., Morel I., Cillard J. Involvement of metal ions in lipid peroxidation: biological implications In Metal ions in biological systems. / Eds: Sigel, H. Sigel A., New York: Marcel Dekker. 1999. Vol. 36. P. 251287.

170. Ketterer B. Detoxication reactions of glutathione and glutathione transferases. //Xenobiotika. 1986.Vol. 16. P. 957-973.

171. Mannervir B. Enzymatic basis of detoxication. / Ed. Jakoby W.B. N.Y.: Acad.press. 1980. V.2. P. 229.

172. Molloy K.C. Bioorganotin compounds. In The Chemistry of Metal-Carbon Bond. /Ed. F.R. Hartley. London: Wiley. 1989. Vol. 5. P. 465.

173. Tsangaris J.M., Williams D.R. Tin in pharmacy and nutrition. // Appl. Organomet. Chem. 1992. Vol. 6. P. 3-18.

174. Gyurcsik B., Nagy L. Carbohydrates as ligands: coordination equilibria and structure of the metal complexes. // Coord. Chem. Rev. 2000. Vol. 203. P. 81-149.

175. Sarafian T.A. Methylmercury-induced generation of free radicals: biological implications. In Metal ions in biological systems. / Eds. Sigel A, Sigel H. New York: Marcel Dekker. 1999. Vol. 36. P. 415-444.

176. Gielen M., Tiekink E.R.T. The use of metals in medicine. In Metallotherapeutic drugs and metal-based diagnostic agents. / Eds. M. Gielen, E.R.T. Tiekink, John Wiley & Sons. 2005. P. 212.

177. Roberts J. J., Pascoe J.M. Cross-linking of complementary strands of DNA in mammalian cells by antitumour platinum compounds. // Nature. 1972. Vol. 235. P. 282-284.

178. Tiano L., Fedeli D., Moretti M., Falcioni G. DNA damage induced by organotins on trout-nucleated erythrocytes. // Appl. Organomet. Chem. 2001. Vol. 15. P. 575-580.

179. Yang Z., Bakas Т., Sanchez-Diaz A., Charalabopoulos K., Tsangaris J., Hadjiliadis N. Interaction of Et2SnCl2 with 5'-IMP and 5'-GM. // J. Inorg. Biochem. 1998. Vol. 72. P. 133-140.

180. Knapp M.J., J.P. Klinman M.J. Kinetic studies of oxygen reactivity in soybean lipoxygenase-1. // Biochem. 2003. Vol. 42. P. 11466-11475.

181. Zha S., Yegnasubramanian V., Nelson W.G., Isaacs W.B., De Marzo A.M. Cyclooxygenases in cancer: progress and perspective. // Cancer Lett. 2004. Vol. 215. P. 1-20.

182. Samuelsson В., Dahlen S.E., Lindgren J., Rouzer C.A., Serhan C.N. Leukotrienes and lipoxins: structures, biosynthesis, and biological effects. // Science. 1987. Vol. 237. P. 1171-1176.

183. Kreich M., Claus P., Direct Conversion of linoleic acid over silver catalysts in the presence of H2: an unusual way towards conjugated linoleic acids. // Angew. Chem. Int. 2005. Vol. 44. P. 7800-7804.

184. Segel I.H. Biochemical calculations. / N.Y.: J. Wiley & Sons Inc. 1976.

185. Sheldrick G.M. SHELX97, Program for the Solution of Crystal Structures, Gottingen University, Gotinngen (Germany). 1997.

186. Гордон А., Форд 3. Спутник химика. / M.: Мир. 1976. С. 541.

187. Gal A.E., Fash F.J. Preparation of phosphorylcholine from phosphorylcholine chloride calcium salt. II Lipids. 1977. Vol. 12. P. 314315.

188. Grigoriev E.V., Pellerito L., Yashina N.S., Pellerito C., Petrosyan V.S. Organotin(IV) chloride complexes with phosphocholine and dimyristoyl-L-a-phosphatidylcholine. // Appl. Organomet. Chem. 2000. Vol. 14. P. 443-448.

189. Schmiedgen R., Huber F., Silvestri A., Mario Rossi G., Barbieri R. Diorganotin(IV) 2-mercaptopyrimidine complexes. // Appl. Organomet. Chem. 1998. Vol. 12. P. 861-871.

190. Susperreguia J., Baylea M., Legerb J.M., Delerisa G. Synthesis, structure and trypanocidal activity of dibutyltin derivatives of 2-mercaptobenzoxazole and 5-chloro-2-mercaptobenzothiazole. // J. Organomet. Chem. 1998. Vol. 556. P. 105-110.

191. Adler A.D., Longo F., Finarelli J., Goldmacher J., Assour J., Korsakoff L. A simplified synthesis for meso-tetraphenylporphine. // J. Org. Chem. 1967. Vol. 32. N2. P. 476.

192. Horeczy J.T., Hill B.N., Walters A.E., Schutze H.G., Bonner W.H. Determination of trase metals in oils. // Anal. Chem. 1955. Vol. 27. P. 1899-1903.

193. Прищенко А.А., Ливанцов М.В., Новикова О.П., Ливанцова Л.И., Взаимодействие замещенных бензальхлоридов с эфирами фосфористой кислоты. // Журн. Общ. Химии 2006. Vol. 76. С. 871872.

194. Васильев В.П. Аналитическая химия. / М.: Высшая школа, 1989. Т.1. с. 285.

195. Янишлиева Н., Скибида Н., Майзус 3., Попов А. О скорости и механизме зарождения цепей при окислении метиловых эфиров олеиновой, линолевой, линоленовой кислот. // Изв. Отд. Хим. Наук. Болгар. АН. 1971. т. 4.С. 110-115.

196. Fatemi S.H., Hammond E.G. Analysis of oleate, linoleate and linolenate hydroperoxides in oxidized ester mixtures. // Lipids. 1980. Vol. 15. P. 379-385.

197. ArgusLab. Thompson M.A. Seattle. Planaria Software. WA 98155

198. Protein Data Bank, http://www.rcsb.org/pdb/

199. Wang R., Lai L., Wang S. Further development and validation of empirical scoring functions for structure-based binding affinity prediction. II J. Сотр. Aided Mol. Design 2002. Vol. 16. P. 11-26.

200. Stewart J J.P. Optimization of parameters for semiempirical methods. // J. Comput. Chem. 1989. Vol. 10. P. 209-220.