Оксигенированные липиды отдельных представителей высших растений пяти семейств тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ
|
Гусакова, Светлана Дмитриевна
АВТОР
|
||||
|
доктора химических наук
УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ
|
||||
|
Ташкент
МЕСТО ЗАЩИТЫ
|
||||
|
1994
ГОД ЗАЩИТЫ
|
|
02.00.10
КОД ВАК РФ
|
||
|
|
||||
Р Г Б Ой
1 6 Я1Ш №Г3
АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ИНСТИТУТ БИООРГАНИЧЕСКОИ ХИМИИ им. академика А. С. САДЫКОВА
На правах рукописи
ГУСАКОВА Светлана Дмитриевна
УДК 547.915:547.47/48
ОКСИГЕНИРОВАННЫЕ ЛИПИДЫ ОТДЕЛЬНЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ ПЯТИ СЕМЕЙСТВ
02.00.10 — Биоорганическая химия, химия природных и физиологических активных веществ
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук
ТАШКЕНТ — 1994 г.
Работа выполнена в Ордена Трудового Красного Знамени Институте химии растительных веществ АН Республики Узбекистан.
Официальные оппоненты: — заслуженный деятель науки
РУз, доктор химических наук профессор Исмаилов А. И.,
— доктор химических паук, Иор-метова Г. Р.,
— доктор химических паук Разза-ков Р. Р.
Ведущая организация: Ташкентский государственный уни-
верситет.
Защита состоится «
у,1994 г. в часов в
актовом зале Института химии растительных веществ АН РУз на заседании специализированного совета Д 015.21.21 при Институте биоорганической химии им. академика А. С. Садыкова АН РУз.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биоорганической химии им. академика А. С. Садыкова АН РУз по адресу: 700143, Ташкент, Проспект академика X. М. Абдуллаева, 83.
Автореферат разослан « Л& »
1994 г.
Ученый секретарь »
специализированного совета с Т/ - , _
доктор химических наук Н. И. БАРАМ
ОВШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
чоблрмы. В настоящее время процессы свободно-радикального
перекисного окисления липидов рассматриваются как один из фундаментальных механизмом нарушения нормального метаболизма и структурно-функциональных свойств животной клетки. Представления о роли и значении процессов ферментативного и не ферментативного окисления липидов в растительных тканях нельзя считать окончательно сформированными, что в' большой степени объясняется недостаточностью сведений о составе и структуре продуктов липидного окисления.
Актуальность химического исследования оксигенированных липидов (ОЛ) растений обусловлена тем, что структурные данные имеют принципиальное значение для уточнения уже известных и выявления новых путей метаболизма ненасыщенных липидов, установления взаимосвязи между структурой ОЛ и их функцией в растении, для• понимания механизмов формирования фнтоиммунитета и адаптации растений к действию неблагоприятных факторов среды.
Изучение структуры вторичных ОЛ, образующихся при хранении и переработке промышленных сортоз масличных семян, важно для совершенствования технологии маслодобывания и повышения качества пищевого растительного масла.
Проявления некоторыми растительными липидами биологической активности и особых физико-химических свойств делает актуальным поиск промышленных источников их получения и использования в медицине и фитокосметике.
В развитие фундаментальных и прикладных исследований растительных липидов значительный вклад внести видные ученые А.Л.Маркман,. создавший школу по химии липидов, его последователи А.И.Глушенкова, А.У.Умаров, А.А.Абдурахимов и др., труды которых заложили основы глубокого исследования структуры, функции п практического использования этого класса природных соединений.
Азии, в том числе в хлопчатнике;
2) выделении ОЛ и оксигенированных жирных кислот (ЖК) нз растений, оп-
ределении их состава, идентификации известных и установлении строения новых соединений; ■ ■ .
3) исследовании влияния видовых и сортовых особенностей хлопчатника, инфицирования его патогенным грибом УеПісіШит (ІаЬІіае КІеЬ., хранения ті переработки хлопковых семян на состав и структуру природных и вторичных ОЛ; -
состояли в:
1) систематическом поиске ОЛ в растениях, в основном, флоры Центральной
4) поиске путей утилизации биоактивных липидов отходов промышленной переработки эфиромасличных и лекарственных растений.
Научная новизна. Разработан новый подход к изучению сложных спесей оксигенированных ЖК, основанный на сочетании масс-спектрометрии и ГЖХ на двух фазах триметилсилильных (ТМС) производных исходных и гидрированных эфиров узких фракций, позволяющий устанавливать состав и структуру компонентов.
Проведено сис-.ематическое исследование липидов 52 видов растений 14 семейств; у 11 видов найдены ОЛ, впервые получены данные о составе и структуре ОЛ семян 9 видов растений из 5 семейств, в том числе семян и листьев хлопчатника. Выделено и охарактеризовано 11 классов ОЛ, из них 3 новых бромсодер-жащнх класса: свободные ЖК, ди- и триацилглицерины. Установлена структура 53 новых эпокси-(эп-ЖК), гидрокси-(ОН-ЖК), дигидрокси-, оксо- и бромсодержащих (Вг-ЖК) кислот; у двух известных эп-ЖК определена абсолютная конфигурация. Выявлено хемотаксономические значение состава эп-ЖК запасных липидов в систематике растений.
Впервые изучены спектры ЯМР- 13С природных и синтетических Вг-ЖК и показана пригодность метода для установления положения и конфигурации атомов брома в их молекулах.
В семенах трех видов растений, в семенах и листях хлопчатника обнаружен новый тип аллильных ОН-ЖК, отнесенных по структурным признакам к продуктам взаимодействия ненасыщенных ЖК с синглетным кислородом ('02). Показано, что 1 Ог может образовываться в реакциях молекулярного Оа с полифенолом хлопчатника госсиполом. Высказано предположение об участии аллилных ОН-ЖК в :;нцитных реакциях хлопчатника против инфекция УегИсШшт 11аЬНае К1еЬ.
Предложены вероятные пути образования Вг-ЖК в ЕгетозШсЬуз тоШссеИоМез, УПгЖК к ОН-ЖК - в ОаЫрхЦ ЫШд, ОН-ЖК - в АсапНюрапах БезяНШогиз.
Найдено, что при хрансш:;] хлонкознх семян в производственных условиях окисление ненасыщенных липвдоз происходит как автокаталитически, так и с участием ферментов патогенной мшгрсфлоры. В инициировании автоокисленяя триацилгли-церинов хлопкового масла е процессе его рафинации, наряду с известными факторами, участвуют такке компоненты масла, способные активировать нолехуляриый 02. '
Практическая ценность рлбогн. На основе результатов исследования биоактивных липидов отходов переработки лекарсиеиных растений ШаароШюиш сагШато1(1е£ н ЛсоЫШга 1еисо$и>тит созданы два препарата - концентраты биологически активных липидов и липофильных веществ. Разработаны лабораторные регламенты их пол-
учения; разработаны и утверждены в М3 РУз ТУ Уз 7614-9-92 па экстракт И. саП1]ато1с1е5 и ТУ 64-7614-3535449-7-91 на липидный концентрат Ас. кисоэттит. Соответствующими подразделениями ИХРВ АН РУз проведены фармакологические и токсико-гигиенические испытания, показавшие положительное действие двух биодобавок на кожу и волосы и отсутствие токсического эффекта.
Биодобавка из отходов И. сагШато!с1е5 использована в составе нового ПМС детского ассортимента "Лимончики” (промышленный выпуск с 1991 г.). С биодобавкой из отходов Ас. кисс^отит созданы новые шампуни "Гузал" (промышленный выпуск с 1993 г.), "Аканта", питательный крем. "Гулноз".
Наработка препаративных форм двух биодобавок осуществляется на Опытном производстве ИХРВ АН РУз.
■ Настоящая работа является частью исследований, проводимых в Институте химии растительных веществ АН РУз по химическому изучению, поиску общих закономерностей структуры и состава растительных липидов и комплексной переработке семян хлопчатника (государственный регистрационный N 01860026966).
ной конференции по химии и биотехнологии биологически активных природных продуктов (Будапешт, 1983 г.); VII и VIII Советско-Индийском симпозиумах по химии природных соединений (Тбилиси, 1983 г.; Хайдерабад,1986 г.); V Международном симпозиуме по вертициллиуму (Ленинград,1990 г.); V Всесоюзном симпозиуме по фенольным соединениям (Таллин,1987 г.); Всесоюзном совещании "Физиолого-биохимические основы иммунитета к грибным болезням растений (Уфа, 1988 г.); I Всесоюзной конференции по физиологии и биохимии растительных липидов (Казань, 1991 г.). '
Основное содержание диссертации изложено в 34 статьях, 6 тезисах, 3 описаниях к Патентам РУз.
нописного текста, состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов (б разделов), экспериментальной части, заключения, выводов, библиографии, включающей 314 источников, приложения. В диссертации приведено 12 схем, Ю рисунков, 47 таблиц.
В ходе систематического исследования 52 видов растений, относящихся к 14 ботаническим семействам, в тканях 11 видов обнаружили ОЛ, тонкую структуру ОЛ анализировали у 9 видов 5 семейств. Выделение суммарных липидов из
[. Результаты исследования докладывались на: II Междунзрод-
Диссертация изложена на 273 страницах маши-
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Т’змсй, и/, очистку, последующее гиделенпе ОЛ проводили общепринятыми Р.
■ л'/пмдглспгл мгюдамп с сохраненном нативности структуры и ссстозз липидов. Идзнтифицироазли классы ОЛ на основании данных ТСХ, ГЖХ, качественных реакций, спектров ПК, УФ, ПМР, масс-спектра, щелочного и ферментативного іидрслизоа. В таблицах 1-3 приведены результаты структурного анализа ОЛ н оконгстіроаанинх ЖК.
Таблица 1
Сосгаї' и содержание оксигенированных лнпидоп и тканях изучении;: еидоз растений
N Вид растения, СЄМЄЙСТБО Орган Класс липида Число О <си-ЖК
ГГХТЄКїїЯ (% от массы тканей) ІІЗВССТ-* ИЫХ новых
1 2 3 4 5 6
1 тз Ulupr.Pl Шхіт) 5с- св °"й»Гш 2_
г 2ссигіпгг.а зіШгиіісоза (Рай.) ЙенсЗ., КїіГ-ЬогЬіассас Семена о?!»» Н! 13 2
3 ЕгипісзіасЬуд псіииссі-•о^сз В£!.,игпіассзе ■' - тт 2
4 ОгІссрзіз ЬіПсЗа Всспп. Ь.,1ашіасезс (0.7.3) 0 1 8 ¥
5 Пі!оші5 сгсорЫНа Кзг. сї Кіг.,1дійізссае 4 4 2
С П;1стІ$ гс£.сШ М.Рср., итплес.^с 0Н-ТАГ(0,58) -
і 7 Г:*:іпгх РаиЬспіапи; ІСе:с., .. Нп1і£спасс£>' лда 24° 1
І 5 І Оо"»у;:іит Ь., г Ь.Ьассде і:/ Сорг Ташкенг-1 Сег.ииа здореного ГЛСТСІЯ5Я Семена гнлтоного о» <8$, "оГ^ТАГ(0(1э5з) 16 І0 2 2
і ‘ЛІїСТЬЯ чет* ?ч''рОВМС ЛьСТЬ.Т ^егозиис ОН-ЖК (0,003) 5 16 57 8
| С< ;гтіигл їягхісип-пї •Ліг. П£ПОі1.иі, і Мліу^сє-Г1^ Семена біїШ-іїії а 2
. Сс.ли ч ;-ііг.'й 'нідсс рзстениГі ОЛ 5ьіл:і предстсалснії тр'чгцил-
'.Г,*1*!) с о,г..1::.:,.і сстсіхс*: схсигсняроозмных и дпу/:?, остатками
• Тагіпш'З З
:іоі:::г о!;г:;геш;рсг.;Г'ііі:-іе кислоти ьзукші:!-!): ';:i,r;orf о-’--т-^іИі■"
ill їт_г'_с - М _К;гшгл iV-li'-i'Vii..
• З’.. 25 ~1-ОПЛї:.2 Э,1~>
1 іс,п-3л-і:-.і (7) .l-iini.iccaj 26 l:/-OU-13:2(V-3)
2 } 3,! -:-Зл-’ 3:3 (7, і 0) 27 16-OH-і 3:2 O', і 2)
3 Тр.-15,і3-3т;-13:-(9,12) 28 15-01113:3(9,12,iifi)
і 1 S. І {.3 л! ?:2 (9 <Е, і 21' (2) ) _и~ 29 !2-0H-20:0
5 1 !,1І-Зл-'20:1(! і) ЗО 1 !-0Н-20:Ц12Г:)
б Г/,Г'-Эп-70',2(11,1 « 31 17 -ОН-20:2(11,1 П
7 Malw.eaa 32 10,: і-ДкОЧ-ІҐ.:} (7)
3 *!-0Н-14:1 < і 0 Г? > _м. 33 13.11-ДііОН-і.0:2(7,!;!)
5 _т’_ 1! ! 7, ІЗ-Л :ОІІ-1 J 2С-\. 13)
ї № АгаНа;.:::.- Т Г 15,1 '"-Л ::0Н -! ї:2 'г‘, і 2)
11 ч.іії- і..:1 (і 031 lijlv.-.cm 36 1-МЗ-Ди0!1-'’0 О
12 3-С:м3:2(?,'^ /.rrJiact?; 37 (1
!3 9-0ГЫ 5:2(101?.! 3) M.:iv ir-r.c 33 17,;. - Д і.О; і':0:2(11 ,і .
1 і Гі-СГі-0:0 '' •
15 9-ОЇМ7:І«1Г"^ I':’.! vac с",-. зо КЗ-СО-Г,':!
і б V-OTi-K':;-’.!’'; : їпіг; гои 13 ?-CCMS:0
Г Г--І1-1 ■і! ! П-'-'Г* -1 :'1 '
І . гс'у^ог.гсг.'.ї 42 ’}■ СО-і£:і (1С j і
і 11 1-2,-,3~І-І7:.- ■ ' 43 і -J W - М- : >' :
< ■і 4 ! Ї-СО-Ї83 (З.
( і а .'■-‘■ЛІ- І ! .і , * ■; ч-::,асес.- ІЗ
V-ily^onac:.-:; ■і б 10-C0-lS::>f::r-,t2)
\ 19 j3-GR-17:2(!),i ІВ» 1 лиіпсеаг -17 і 2-СО-12:2(9,13:3)
і 20 С-СН-іЗ:.! ІГ‘; /.і' ’IbcSL’S •* J ?-СО-13:3(10Е,і2,і:;
1 31 7-ОП 17 ]2-СО-5 3:3(:),13Н,15)
1 гг 3-QH-tS:l (?) 11 Лї?с:;-аг 50 13-00-18:3(3,ПЕ,ІЗ)
Го!у2опасй?е ■3J. іб-С0-іС:3(?,!2,і::-'.)
23 П-ОН-18:1(9) ЬчгЛлсег'.г Dpar,;r.o,r:.es) 'іа зд: і
> iaivaeeas кііс.'шії.з
?0іугсз.чсе?« 52 3 ріітро- 5,10 -1’. 3: -1 3:0
24 6-011-13:2(9,12) Агяііассаг 33 3;:и)р(>,ар;:тро-?,! 0,12, і
!3-тетгяі>г-іг:Г; 1
1іе-кг.сг.
Laniiscca:;
Euuaorb/Kceas Lar.iaees ї І: чг.
Известные оксигенированные кислоты изученных видов растений
N Краткая Формула Семейство N Краткая Формула Семейство
Эпоксикислоты Lamiaceae
1 9,10-Эп-18:0 lamiaceae Malvaceae
2 9,10-Эп-18:1(12) 21 9-ОН-18:1 (10) Lamiaceae
3 12,13-Эп-18:1 (9) Malvaceae
4 12,13-Эп-18:2(9,15) Polygonaceae
5 15,16-Эп-18:2(9,12) 22 9-ОН-18:1 (12) 5 Семейств
6 14,15-Эи-20:1(11) 23 10-0Н-18:1 (8) 4 Семейства, искл.АгаИасеае
Моногид роксикислоты 24 12-ОН-18:1 (9) 5 Семейств
7 9-ОН-13:1 Malvaceae 25 9-0Н-18:2(10Е,12)
8 9-0Н-14Ю Lamiaceae 26 13-ОН-18:2(9,11Е)
9 ОН-14.2 Polygonaceae 27 10-0Н-18:2(8Е,12) Euphorbia-
10 9-0Н-15Ю Lamiaceae ceae,Lamiaceae,
П 9-ОН-15:! _и„ Polygonaceae
12 ОН-15:2 Polygonaceae 28 12-ОН-18:2(9,13Е) _м _
13 9-0Н-1б:0 или Lamiaceae 29 9-0Н-18:2(10Е,12Е) Lamiaceae
ОН-16Ю Malvaceae 30 9-0Н-18:3(10Е,12,15) -м-
Polygonaceae 31 13-0Н-18:3(9,11Е,15) -
14 9-ОН-16:1 Lamiaceae 32 16-0Н-18:3(9,12,14Е) •и- "
ОН-16:1 Polygonaceae 33 0Н-20Ю Malvaceae
15 ОН-16:2 . Polygonaceae
16 13-0Н-16:2(9,ИЕ) Lamiaceae 34 0Н-20:1
Malvaceae 35 14-0Н-20:1 (11) Lamiaceae
17 9-0Н-17:0 0Н-17.0 Euphorbiaceae Polygonaceae Дигидрокснкислоты Malvaceae
18 9-0Н-18:0 Euphorbiaceae 36 9,Ю-Дн0Н-18:0 Lamiaceae
' , - ■ Polygonaceae Polygonaceae
1 Malvaceae 37 9,Ю-ДвОН-18:1(12)
19 10-0H-1.8:Q 4 Семейства, 38 12,13-Ди0Н-18:1(9)
! искл.АгаПасеае 39 11,12-Ди0Н-20:0 Polygonaceae
120 12-011-18:0 4 Семейства, Оксокислоты
j искл.Polygo- 40 9-СО-18:2ЦОЕ,12) Lamiaceae
J naceae 41 13-00-18:2(9, НЕ) и
обычных ЖК. Наиболее сложными по составу и структуре оказались ОЛ представителей ceM.Lamiaceae.
1. Оксигенированные липиды Galeopsis bifida (сем. Lamiaceae).
1.1. Эпоксиацилдиацилглицерины (эп-ТАГ) и эпоксикислоты (эп-ЖК).
Эп-ТАГ давали положительную реакцию на эпоксид с этанольным раствором пикриновой кислоты, имели прозрачный УФ-спектр. В ИК-спектре, характерном для ТАГ, наблюдались полосы цис- (810, 825, 850 см'Ь и трапс-эпоксидов (890 см"1), транс-олефинов (960 см'1). Кислые продукты щелочного гидролиза являлись смесью н-ЖК и эп-ЖК в соотношении массовых частей й 2:1 [9, 26].
Эп-ЖК в виде метиловых эфиров (МЭ), разделив на фракции, анализировали методом ГЖХ на полярной (Reoplex 400) и неполярной (0V-1) фазах. Часть фракций гидрировали на Td/AI, исходные и гидрированные МЭ эп-ЖК перевели сначала в МЭ диОН-ЖК, затем в (бис)- триметилсилильные (диТМС) производные, которые исследовали ГЖХ на двух фазах и масс-спектрометрией.
Другую часть фракций окислили реагентом Рудлова по олефиновым связям, смесь МЭ моно- и диМЭ дикарбоновых фрагментов, в том числе эпоксидсодержащих, исследовали аналогично описанному.
В таблице 4 приведен состав и структура эп-ЖК G. bifda, б из которых идентифицировали с известными кислотами, б оказались новыми эп-ЖК. Преобладающие в смеси известные эп-ЖК V и VII были выделены в чистом виде и на основании сравнения их кривой ДОВ с таковой известных эп-ЖК (+)12(S), 13(Ю-эп-18:1(9) и (+)14(S), 15(R) -эп-20:1(11) сделали вывод
о том, что кислота V является (-) 12(R)f 13(S)-, а VII - (+)15(S),16(R)-3naH-тиомером.
Новые эп-ЖК О. bifida представляют собой транс-изомеры кислоты VII по эпоксидному кольцу (кислота VIII) и одной из олефиновых связей (IX), ее С|g - (II) и Cjq- гомолог (XII) , а также C1S - гомолог верноловой (I) и Сго- гомолог коронаробой (X) кислот. '
Структурные корреляции внутри эпоксидов, наряду с известными ферментами липидного метаболизма, позволили предположить возможные пути их биосинте
зл, указанные ка схеме 1, где в обозначении положения функциональных групп использована w-нумерация.
Схема 1
Предполагаемый механизм биосинтеза эпоксикислот G. bifida.
18:2(«,6,9)
с>5,7*эпоксид азл
CD6,7-Зп-18:1 (9)
е>6,7-Эп-16:1(9)
Таким образом, биосинтез ноимх оп->!(К возможен путем модификации молекул известных эпоксидоз.а именно, удлинением либо укорочением их цепи из ацетатную единицу. '
Структуру и состЕг, эп-ТЛГ G.biiida исс/издоиали матодами сте-реоспгцифическ.ого анализа и масс-спєктромсірии По данным стсуооаналилэ jn-ЖК VI! эашшаег в молекулах эп-ЧАГ предпочтительно V - sn-2- и меньше ?.п-3-, а V! - исключительно :n-2-r.e toxciuiq, z наОрр аіі-ТАГ включает 47 возмох-::ых молекулярных видов. Мгсс*спс; 5??.*-:<лриой подтвердили структуру 17 ос:;;.- ■ "ых видов с проойлгданіїцм (іас»ереоизомсріч« симметричных ,і несимметричных двукислотнш молекул, иалример, эп-18.2 - 12:2 - 10:2 [15].
Таблицв 4
Зпокснкисло'ш Оаіеоріії ШМа
N Структура зпоксіпаїедотн глсх, о/ /0 Дітпюстическне фрашеитьі МЗ диТМС . - зфчррв пипшзоксиппогізиоііілл!:
___ . Псхщн -ге Г!!Г’іи!'отт-:п.''
м+ А А * П * А * .. г. _
І Лт-ЗіьІ.бШЛ 1,2 111 173,275 271,373 173,2"»5 173,275!
II ізиїл^плшалгії 0,4 442 131,233 311,413 131,233 315,417
Пі 9,10-311-13:0 3,0 Оте. 215,317 259,363 215,317 259,301
IV 9,10-3и-18:1(12) 2,0 472 213,315 259,361 215,317 259,361
V 12,13-Зп-18:1 (9) 29,3 472 173,275 299,401 173,275 301,403
VI Ї2,13-3п-15:2(9,15) 7,2 470 171,273 259,-101 173,275 301,403
VII 15,1б-3п-15:2(9,12) 52,8 470 131,233 339,111 131,233 343,445
VIII 0,1 473 131,233 339,441 131,233 343,4^.5
IX Ш£:Здаа;2І2їіЛ2>. 1,8 470 131,233 335,441 131,233 343,445
X 0,5 500 213,315 287,ЇЙ9 215,317 237,3:59
хг ! 4,15-9п-20:1 (Ш 1,5 500 173,275 327,'129 173,275 329,431
XII Ш^ЛОіИІ 1,0 493 ! 31,223 333,357 131,213 371,473
іА-ф,)з:мзіпи СН3...СНОІМС; Б-фр.'гмсн?і,'СЧОТМС...СООСН.,; ■■■■' Ил:і 10,1Г:-оп-13:2(9,12Г:] ’’
Подчеркнути ноаие гп-'іііч,
1.2. і;*; (ОП-ЛЛ1/,
Пі ЗП-ТЛГ 3.: Г'ЛО'::1]/ь':ігс-! -ч.уізлул'.г ПН Т'і -'Г з", (•‘"■'і':!!1!:, г. ку.і'? МЗ ТМС
Т"' : :;-’І'К гг.!:.”?;їтр,!ру(ол;дя
ш;гл-> слсдуіОїїї.іг гзі.і^єріістк:-:;.: УС>-спгкт;):..*гл?-( 233,5 им ((СЇЇ"СН)9, ); КіС-сяекгр: і’піакл: 9ЇЗ, 975, ССО (2, !■- л Е,Е-(СК-СН)а ), 1б-б£, 20Н! (Е-СН-=СШ, 1090, 3470(ОН); ДОВ (с 10,5 цг/3 мл, зтгнол): [с^ -[а]55..- -і3,43; «,43; іа]^» *-4,00; И1(И“ Н58; [с]и,“ +5,71 (У, 37]
Ді^аталл^іхг.ріоі’огио фраггеїлн оі-ахліпельного рз£іг;еп".г!:."л (Г.ІО.; /КІ.іпО^) МЗ ОН-ЖИ гтой фргкят- состозлк из (%, ГЛ'Х): 3:? С~;3;
5,5 Сп;а; о5,2 С9і0і: 5,3 С^ю ТМС зф::;м.; гкдрярскашшх МЗ ОН-Х.К по даний:-.! ГЖХ на двух фаза;: и. касс-сиектромвтрии представляли собой смесь восьми изомершлх 014-18:0 с положешге;-: ОН-груяіш от д 9 до Д16, а такає 14-ОН- и 17-011-20:0. Даиньїе по-
Гидроксикислоты фракции 2 Gaieopsis bifida
N Структура кислоты ГЖХ Масс-спектр
Reonlex400 0V-1 Фоагменты .m/z. (°L) *
ОВУ % ОВУ °/ /о А В
I 9-ОН-18:1 (10Е) 1,34 19,6 1,72 71,5 227(41) -
II 10-0Н-18:1 (8Е) - 271(13)
III 9-011-18:1(12) 1,48 6,3 227(41) 259(11)
IV 11-0H-I8:! (9) - 285(15)
V 12-ОН-18:1 (9) 187(17) 299(3)
VI 9-0Н-18:2(10Е,12) 1,82 30,2 225(50) 311(28)
VII 13-ОН 18:2(9,11Е)
VIII 10-0Н-18:2(8Е,12) 239(2) 271(13)
IX 12-ОН-18:2(9,13Е) 185(17) 325(4)
X 9-0Н-18:2(10Е,12Е) 1,86** 225(50) 311(28)
XI 14-0Н-18;2(9?15) 157(13) 353(5)
XII 15-0Н-18:2(9.12) 2,13 19,3 145(61) 339(10)
XIII 16-ОН-18.2(9.12) 2,25 131(30) 353(5)
XIV 9-0Н-18:3(10Е,12,15) 2,68 1,8 223(14) 311(28)
XV 13-ОН-18:3(9,11ЕД5)
XVI 14-0Н-20.1 (11) 187(17) 327(2)
XVII 15-ОН-[8:3(9.12.16Е) 3,03 5,5 2,26** 143(22) 365(1)
XII 15-0Н-18:2(9,12)5***
XVIII 16-ОН-18:3(9,12,14Е) 3,44 17,3 2,36 26,0 183(52) 351(15)
XIII 16-ОН-18:2(9,12)5***
XIX ]7-ОН-20:2П 1.14) 2,81 2,5 145(61) 367(3)
XVI 14-0Н-20:1 (11)5***
*т/г 73(100%);
♦•Частично разделенные пики;
‘••Порядок выхода соответствующего ТМС эфира на ОУ-1.
казали, что у насыщенных эфиров более четко определяется положение ОН-группы, набор изомеров и гомологов.
Состав и структура исходных ОН-ЖК этой фракции отражены в таблице 5, где А - СН -^-содержащий, а В - СООСН-^содержащий фрагменты. По совокупным результатам анализа всех фракций в OH-ТАГ G. bifida обнаружили 31 кислоту, аз них шесть ОН-ЖК, а также. кислота 13-ОН-17:2(9,11Е), предстаиляют собой новые соединения, алллльные ОН-ЖК I, И, VIII и IX впервые выделены из тканей высших растений. У диеновой кислоты 14-ОН-18:2(9?15) (XI, табл.5) с новым положением ОН-группы 11 одной из олефиновых связей при /i 15 позицию второй СН“СН не установили.
Обобшеиие собственных и литературных данных по структуре растительных ненасыщенных ОН-ЖК позволило классифировать их по четырем типам. Первых два типа составляют ОН-ЖК с группой СНОН-СН2-СН=СН (V, XII, XVI. XIX, табл.5, тип I) или СН0Н(С1Ь)п-2:з СН=СН (III, XIII, тип 2), образованные путем прямого гадроксилиропания соответствующего атома С пли путем гидратации СН=СН. Обе реакции требуют Ог и катализируются неспецифическими оксигсназами. Третий тип - это полиеновые ОН-ЖК с группой СНОН(СН=СН>2 в цис,трапе- или транс,транс-сопряжении (VI, VII, X, XIV, XV), биосинтезируемьте липоксигеназами. К типу 4 отнесли новые ОН-ЖК G.bifida со структурным элементом СНОНСП~СН, где гс-связь имеет цис-(IV) либо транс-кокфигурацига (I, И, VIII, IX, XI, XVII). Эти аллильные ОН-ЖК могли образоваться только при окислении ненасыщенных ЖК активированной формой Ог - спнглетпыи кислородом 1■,обнаружение их как природных соединений является первым химическим доказательством существования в растениях неферментативного окисления с помощью 'Oz- На схеме 2 показан возможный механизм образования некоторых ОН-ЖК G.bifida.
' Схема 2
Предполагаемые пути биосинтеза гидрексикислот G. bifida
14-ОН-20:1 (И) 13-011-17:2(9,11) 17-ОН-20:2(И,14)
йХокислеиис
(оксидачы)
12-ОН-18:1(9,12)
13-011-18:2(9,11)
15-01^18:2(9,12)
| 18:1(07] -
^18:2(9,12)1
>| 18:3(9,12,13Т|
9-ОН-18:1 (10) Ю-ОН-18:1(8) 12-ОН-18:! (9)
Ю-ОН-18:2 (8,12) 12-011-18:2(9,13)
15-011-18:3(9,12,16)
I .З.Полш ндроксилнрованныс липиды с дигидроксикислотами.
В УФ-спектре этих липидов имелось слабое поглощение при Агпэх 234 нм; ИК-спектр: v 1050, 1240(С-0-С), 1100, 3300 см'1 (втор.ОН); спектр ПМР, кроме сигналов протонов ацильных остатков,имел мультиплетные сигналы при 3,56, 4,07 (CH-OHV, 3,88 (СН20) и 5,02 (СНО) глицеринового остатка и при 4,3 м.д. (СНО-СО зстолида).
Кислые продукты щелочного гидролиза состояли из н-ЖК, ОН-ЖК, имеющих состав и структуру аналогичных кислот OH-ТАГ, и дигидроксикислот (диОН-ЖК). Последние перевели в триТМС эфиры по СООН- и ОН- группам и анализировали масс-спектрометрией (табл.6).
Из перечисленных в таблице б соединений диОН-ЖК Ш-V известны, остальные семь виц-диольные ЖК обнаружены впервые и по своей структуре соответствуют продуктам гидролитического распада эп-ЖК G.bifida (табл.4).
Таблица 6
Дигидрокснкислоты Galeopsis bifida
N Структура дигидрокснкислоты Диагностические ионы твиТМС эсЬиоов, m/z(%)
М+ (М-89) + А А, В пи’
1 10,11 -ДиОН-16:1(7) 502 413 173(70) 275(100) 329(7) -
II 13,14-Ди0П-16:2(7,10> 500 411 131(65) 233(47) 369(1) 340
III 9,10-Ди0Н-18:0 532 443 215(37) 317(2) 317 -
IV 9,10-Ди0Н-18:1 (12) 530 441 213(43) 315 -
V 12,13-Ди0Н-18:1(9) 173(70) 275(100) 357(1) 328
VI 12,13-ДиОИ-18:2(9,15) 528 439 171(15) 273(7)
VII 15,1б-Дн£)И-18:2(9,12) 131(65) ■ 283 397 368
VIII 14.15-ДнОН-20’.0 560 471 173(70) 275(100) 387 -
IX 14,15-Ди0Н-20:1 (11) 558 469 385 356
X 17,18-Ди0Н-20:2(11,14) 556 467 131(65) 233(47) 425 396
'Перегруппировочный ион: [(СН2СН=СН)2(СН2)„С(ОТМС)2Г'
Испытания острой токсичности оксигенированных ЖК G.bifida, проведенные в отделе фармакологии и токсикологии 1IXPB АН РУз, показали, что эп-, ОН- н диОН-ЖК проявляют токсический эффект.
1.4. Оксоацилдиацилглицернны (СО-ТАГ) и оксокислоти (СО-ЖК).
Качественная реакция СО-ТАГ и выделенных из них СО-ЖК на оксогруппу с раствором 2,4-ДНФГ была положительной. В УФ-спектре этих липидов имелось поглощение при Лша* 227 (СОСН=СН) и 270 нм (СО- и СО(СН=СН) ), что подтверждалось в МК-спектре сложными полосами карбонила и сопряженных этиленовых связей при 1745, 1700, 1635, 995 и 990 см МЭ СО-ЖК разделили методом Ag+-TCX на сумму ыоноеновых с диеновыми и триеновую фракцию, которые исследовали УФ-, ИК- и масс-спектрометрией. Часть кислот каждой фракции восстановили МаВН^ до ОН-ЖК, которые анализировали, как описано выше. В таблице 7 приведены совокупные результаты анализа.
Кроме конов, указанных в таблице 7, в масс-спектре МЭ СО-ЖК наблюдались пики ионов (М-15)+, (М-31)+ к (М-47)1", а диагности-
ческие фрагменты имели слабую интенсивность. Основную информацию о структуре СО-ЖК получили из спектров ТМС зфнров восстановленных кисло г. Все 15 С0-Ж1С представляют собой продукты последующего окисления соогьзтстиующих ОН-ЖК ’О.ЫН(1а; из них только изомерные 9(13)-СО-18:2 опнсйны в литературе, остальные относятся к новым соединениям [14, 19].
Структуру СО-ТАГ исследовали масс-спектрометрией и фермектолнзом. По этим данным установили, что оксоацильпые остатки локализуются в основном в 5П-3-положежш молекул ТАГ, минорные виды СО-ТАГ содержат остатки СО-ЖК и в 1ЕЯ-2-положении.
2. Оксигенированные липиды РЫопш огесрЫНа и РЬ.и^еШ.
Состав ОК-ЖК двух видов РЫоИ13 (сем. Ьаш1асеае) был простым, включал известные рицинолевую (12-011-18:1(5)), ее изомер 9-ОН-18:1(12) и две изомерные 9(13)-ОН-18:2 кислоты. Таким же простым был набор оксигенированных ЖК эп- и СО-ТАГ РН.огеорЫПа, состоящий по данным ГЖХ из кислот: 9,10-эп-18:0
- 27,1%; суммы 9,Ю-эп-18:1(12) и 12,13-эп-18:1(9) - 53%; 15,1б-эп-18:2(9,12) -4,0%; 12-СО-18:1 (9) - 15,6% и следовых количеств С0-18Ю. Повторяемость состава эп-ЖК запасных липидов у двух видов сем. Ьапнасеае и аналогичные литературные данные по нескольким видам сем. Алегасеаё позволили высказать мне-
Таблица 7
Оксокиелоты Оа1еор5’к ЫМа_______________________________
N Стуктура оксокислоты Характеристичные фрагменты, т/г (%)
МЭ оксокнслот МЭ ТМС эфиров ОН-ЖК
М+ (М-32)+ м+ А В
1 12-СО-17:1 (9) 296 (< 1) 2б4(<1) 370(<1) 173(3) 299(2)
2 9-00-18:0 Отс. 280 (< 1) Огс. 229(2) 259(6)
3 10-С0-18:0 215(3) 273(5)
4 9-СО-18:1 (10Е) 310(<1) 278(2) 384(1) 227(9) -
5 Ю-СО-18:1 (8Е) . 271(13)
6 И-СО-18:1(9) 285(16)
7 12-С0-18:1 (9) 187(30) 299(2)
8 9-С0-18:2(10Е,12) 308(1) 276(3) 382(<1) 225(20) ЗП(9)
9 13-СО-18:2(9,11Е) _н_
10 10-С0-18:2(8Е,12) м 239(8) 271(13)
11 12-СО-18:2(9,13Е) _» 185(10) 325(3)
12 9-СО-18:3(ЮЕ,12,15) 306(2) 274(5) 380(2) 223 (70) 311(52)
13 13-СО-18:3(9,11Е,15)
14 12-С0-18:3(9,13Е,15) 183(13) 351(10)
15 16-СО-18:3(9,12,14Е)
*т/г 55(100 %) в спектрах МЭ СО-ЖК, т/г 73(100%) в спектрах МЭ ТМС эфиров.
ние о возможности использования этого показателя как дополнительного хемотак-сономического признака в систематике растений [16].
3. Бромсодержащие липиды ЕгетозЦсЬуБ moIuccelloides.
В семенах E.moluccelloides (сем. Ьапиассае), наряду с ОН- и СО-ТАГ, обнаружили три новых класса липидов: бромсодержащие ТАГ, ДАГ и свободные ЖК. Локализацию Вг в этих липидах установили качественной пробой и по данным нейтронно-активационного, анализа, проведенного в Институте адеркой физики АН РУз. Вг-ЖК выделили из суммарных липидов, используя фракционирование МЭ общих ЖК с мочевинными комплексами,' ТСХ на силикагеле и основной АЬОз [1-4]. Установили структуру двух бромстеариновых ЖК.
МЭ диВг-18:0 был выделен в.виде масла: имел ИК-спектр, идентичный таковому МЭ 18:0. В ПМР спектре набдюдался мультиплег при 4,08 м.д. (2Н, СНВгСНВг). В масс-спектре значение М+с т/г 454/456/458 соответствовало брут-то-формуле СцН^ВггОг . 1
МЭ тетраВг-18:0 имел т.пл. 57-57,5°С (из гексана). В ПМР спектре наблюдались мультиплетные сигналы при 4.39 м.а. (2Н) прогонов группы СНКгСНгСНВг и 4,04 м.д. (2Н) протонов СНВгСНВгСНгСНВгСНВг. Молекулярная пасса М+ 610/612/614/616/618 (масс-спектр) отвечала брутто-формуле С19Н34ВГ4О2.
Эти результаты сравнили с аналогичными данными синтетических Вг-ЖК, полученных бронированием МЭ ЖК цис-18:1(9), транс-18:1 (9), цис,цис-18:2(9,12) и 11:1(10). Впервые сияли спектры ЯМР-13С природных и синтетических Вг-ЖК, где для большинства ядер С, не связанных с атомами Вг, получили разрешенные сигналы в области 14-41 м.д. В спектрах МЭ диВг-18:0 для атомов С-9 и С-10 имелись сигналы при 58,8 (эритро-изомер) или 58,9 м.д. (трео-кзомер), которые в условиях неполной протонной развязки давали дублетную структуру. В аналогичных спекрах МЭ тетраВг-18:0 сигналы ""чешних" атомов С-9 и С-13 проявлялись при 58,0, а "внутренних” атомов С-10 и С-12 - при 56,6 м.д. На основашш этих данных природные Вг-ЖК E.moluccelloides являются рритро-9,Ю-диВг-18:0 н зритро,зритро-9,Ю,12,13-тетраВг-18:0 кислотами.
По результатам панкреатического гидролиза остатки Вг-ЖК этерифицпрованы предпочтительно в sn-3-положении молекул Вг-ТАГ.
Поскольку в липидах некоторых видов ceM.Lamiaceae обнаружены компоненты, характерные для морских растительных п животных организмов, предположили, что в семенах E.moluccelloides также, как и в этих объектах, биогалогенцрованпе может происходить с участием бромпероксидазы, хотя нельзя, по-видимому, полностью исключить и неферментативпое присоединение Вгй к СН=СН по свободно-радикальному механизму (схема 3).
4. Гидроксикислоты Acanthopanax sessiliflonis.
Виды ceM.Araliaceae, к которому относится лекарственное растение Ac.sessilif-lorus,находятся в ботаническом родстве с Panax ginseng (женьшенем). При изучении нейтральных липидов семян ннтродуцированного в Ботаническом саду АН РУз Ac.sessiliflorus в составе кислот ТАГ и СЖК идентифицировали специфичные для семейства ЖК 18:1(6) и 18:1(7) и впервые у представителей этого семейства об-
Схема З
Предполагаемый механизм биосинтеза бромстеарююных кислот Е.тоіиссеїіоісіев
Путь I. Ионный механизм.
а) ІЇГ2 + НЮ;______________(гсм,:с"-".аи_____________> НВгО------------► Н* + ВгСГ
б) -СНСН- ■» 2ВгО~--------------Г—>. -СН-СН-
или (энзим « ВгСГ)
«■
Путь П. Свободно-радикальный механизм, а) 012 + ШО-----------------* НВгО + НВг
б) КСООЧ НБг--------------------- РХООН + Вт’
в) -СП-СП- + Вг' ---------------<- -СІІ-СН- + Вг’ ---------------*■ -СН-СП-
I і I
Вг Иг Вг
наружили ОН-ТАГ. ОН-ЖК по данным ИК- и Уф- спектров МЭ пх узких фракции, содержали цис,транс-сспряяхш:ые диеновые кислоты (V 950, 9Б0, 32003650 см *; Лпах 233,5 нм).
Анализ ТМС зфцров МЭ фракций ОН-ЖК методом ГЖХ на дъух фазах (БГ-10, ЗГС) показал присутствие 011-16:1, -16:2, -18:1 п -18:2 кислот. Из
мопохпрбеповых фрагментов окислительной деструкции (КГО^/ІШпОО фракции ОН-ЖК обнаружили (моль%): Сбо(81,8), Сю (9,3) и С<.о(9,6); из дпкарбоногп;.
- Сг.с(26,8), С70(27,8), Су\о(36,5) и Сю.о(4,7). Масс-слектрометричсские и газо-хроматографнческие данные по состасу н структуре ОН-ЖК даны £ таблице о.
Из 13 компоііспгоЕ ОН-ЖК Лс.еєззНіПопіз кислоты І, II, VIII, IX, XII и XIII (табл.Б) гігля.'отея косыми п ссїтагл;;юг почти 35% Оі массы ОН-ЖК. Среди пи.ч
- гидрокишронзподиие мимериых ЖХ 18:1(7) н 12:1(6) 121]. На осноиап.:.: прямо» корреляции между структуре:! ненасыщенных предшествующих ЖК и ;и гвдроксипромзоодных предположил;;, что биосинтез пошх ОН-ЖК Ас-гсязіІШоп: может осуществляться по схема 4.
Таблица 8
Гидроксккнслоты АсапНюрапах веззШПоги;
Структура %*. Диагностические фрагменты в масс-
N вдроксихнслоты ГХХ спектре МЭ ТМС эфиров, гг./ , г/ )„
Мт (М-31) Л В ...
I 6-0Н-16:1(1.?) 4,4 356 а) .325(3) 241(10) 217(10)
П 11-011-16:2(9,12) 13,1 354(5) 323(4) 239(16)
Ш 12-011-18:0 13,2 Отс. 355(3) 187(18) 301(13)
IV 7-011-18:0 257(10) 231(10)
V 6-011-18:0 271(12) 217(10)
VI 12-0Н-18:1 (9) 384(4) 353(3) 187(18) 299(4)
VII 9-0X1-13:1 (12) 227(17) 259(16)
VII! 7;ОН,!«:1(П1 4,9 255(5) 231(10)
IX 6-011-18:11121 269(4) 217(10)
X 13-051-13:2(9, НЕ) 47,5 382(18) 351(4) 225(44) 311(23)
XI 9-0Н-13:2(10Е,12) _
XII ЬОН-13:2(9.121 12 253(10 231(10)
хш 6-ОН-18:2(9,12) 267(10) _217<10).
Н 011 яе НТИ ^ И !1 И р с 3 " н н ы о "Ч5 -
*Созокупныо дзнныэ по ЗЕ-ЗО и ЭГС; **т/г 73(100 %),
С х“т 4
Прсдпонаг.'г!:ы5 механизм биоскитезч гидрохаш'слог
Лс.5е5"П;ЛоГ,!-;
6-ОН-15:Л(Э,!2) -------
0-011-16:1 0.2)
6-0К-11:0 7-ММ'!'О
Д 6( 7)-гидратации
18:1(6) 18:2(9,12) -......
А 6( 7)-тдроксилированп&
, 6-011-18:1(12) 7-0Н 13:1(Ш
9*Д£ГПЦрнрОЕе!тз
6-ОН-18:2(9,12)
7-011-18:2(9,12)
5. Гидроксикислоты Securinega suffruticosa.
Дальневосточный вид S.suffruticosa ceM.Euphorbiaceae, иптродуцированный в Ботаническом саду АН РУз, относится к лекарственным растениям. Виды этого семейства в качестве принципиальной ОН-ЖК содержат 12-ОН-18:1 (9) (рицннолевую), биосинтезируемую прямым гидроксилироаанпем атома С-12 кислоты 18:1(9).
По данным Г КХ и масс-спектрометрии ОН-ЖК семян S.suffruticosa, выделенные из OH-ТАГ, состояли в основном из известных компонентов, перечисленных в таблице 9 [22]. Кроме ионов ТМС эфиров МЭ известных ОН-ЖК, в масс-спектре наблюдались пики ионов (М-15) + , (М-31)+, (М-47)+ двух кислот ОН-17Ю и ОН-20:0, фрагменты распада которых указывали на расположение в цих ОН-грушш при С-12: m/z 173(30%), 301(11%) для 12-0Н-17:0 и 215(23%), 301 для 12-ОН-20Ю. Как и у бобов касторки (Ricinus communis), в составе ОН-ЖК этого вида отмечается высокий уровень рицинолевой ЖК (наиболее интенсивный фрагмент с m/z 187(40%) в спектре общих МЭ ТМС эфиров); присутствуют кислоты изорицинолевая (V, табл.9), насыщенные XII и XIV, соответствующие по положению ОН-группы возможным промежуточным продуктам в биосинтезе кислот VI и ■VII; диеновые XIII и IX с преобладанием изомера 9-ОН-18:2 (m/z 225, 18%) и
Таблица 9
Гидроксикислоты Securinega suffruticosa_____________________
N Структура кислоты ГЖХ N Структура кислоты ГЖХ
ОВУ* % гОВУ %
I 12-ОН-17:! (9) 2,8 0,8 IX 13-ОН-18:2(9,11Е) 4,2 ■ 77,4
II ОН-17:2 X 10-0H-1S:2(8E,12)
III 9-0Н-17:0 3,3 4,8 XI 12-0Н-18:2(9,13Е)
IV 12-0Н-17:0 XII 9-0Н-18:0 4,8 13,8
V 9-0Н-18:1 (12) 4,2 77,4 XIII 10-0Н-18:0
VI 10-0Н-18:1 XIV 12-0Н-18:0
VII 12-0Н-18:1 (9) XV 12-ОН-20Ю 6,8 3,4
VIII 9-0Н-18:2(10Е,12)
•Суд относительно С}л МЭ 18:0 на БЕ-ЗО. образованные липоксигеназным окислением; кислоты X и XI, относящиеся к продуктам 1 Оз-окисления, а также новые ОН-ЖК IV и XV, которые представляют
I
собой С>7- и Си-гомологи кислоты XIV. Ввиду преобладания изомерной ЖК 9-
ОН-18:2 липохсигепаза ceM.Euphorbiaceae сходна по позиционной специфичности с аналогичным энзимом семейств Lamiaceae, Solanaceae, Leguminosae..
Таким образом, состав и структура ОН-ЖК семян S.suffruticosa дают основание заключить, что в тканях представителей ceM.Euphorbiaceae окисление ненасыщенных ЖК может происходить с участием гидроксилирующей оксигеназы, липоксигеназы и с помощью ‘02. '
б. Гидроксилипиды Rumex Paulsenianus.
. Семена R.Pauisenianus (ceM.Foiygonaceae) содержали ОЛ, которые в ходе разделения нейтральных липидов методом КХ были элюированы в виде 5 фракций (ОЛ I-V). В ИК-спектре ОЛ-I имелись полосы колебаний ОН-групп (3300-3600, 109S), изолированной транс-СН=СН (S6.5), цис,транс-(СН=СН)2 (945, 980 см'1). Аналогичные спектры ОЛ-П-IV были сходны, исключая возрастающую от ОЛ-11 к ОЛ-V интенсивность полос колебаний С-0 (1060, 1250 см'1) и ОН-группы. В УФ-спектре ОЛ отмечалось слабое поглощение сопряженного диенового хромофора (234 нм).
Продукты щелочного гидролиза ОЛ I-V состояли из н-ЖК, ОН-и днОН-ЖК, при этом массовая доля гидроксикислот увеличивалась с увеличением полярности липидов от ОЛ-Ill к ОЛ-V. Спиртовую часть ОЛ не изучали. В составе ОН-ЖК R.Pauisenianus по данным масс-спектрометрии обнаружили 21 компонент [34]. Кислоты ОН-14:2, ОН -15:2, 0Н-16:0, 011-16:1, ОН-16:2 и 0Н-17:0 ввиду минорного содержания проявлялись в спектре ионами М+ (кроме насыщенных OH-.S'"' (М-15)+, (М-31)+ и (М-47)+. Расположение в них ОН- и СН=СН-групп не усга-новили. Состав остальных ОН-ЖК представлен в,таблице 10.
Кислота 111 оказалась новым изомером кислоты 0Н-17:2, обнаруженным нами в липидах О.bifida. IIo массе и по числу изомеров в смеси ОН-ЖК R.Pauisenianus преобладали гидроксимоноеиы, а среди них - изорицинолевая и рициколевая кислоты. К особенностям состава ОН-ЖК этого вида растения относится наличие всех возможных изомеров кислот 011-18:1 (XIV-XVII) и ОН-18:2 (XX, XXI), образованных окислением 1 Оа. Следует отметить, что в липидах R.Pauisenianus мы
Таблнца 10
Гидроксикислоты Ышпех РаиЬепіапиБ
N Структура гидроксикислоты Диагностические фрагменты,с./і(%)
А В
1 9-ОН-17:1(12) 213(14) 259(56)
и 12-011-17:1(9) 173(13) 299(16)
Ш 9-ОН-17:2(ЮЕ,12) 211(14) 311 (7)
IV 9-011-18:0 22908) 259(56)
V 10-0Н-18:0 215(8) 273(4)
VI 9-011-18:1(12) 227(58) 259(56)
VII 12-011-18:1(9) 187(46) 299(16)
УШ 9-0Н-18:1(10Е) 227(58) -
IX 11-0Н-18.1 (9) - 285(17)
X 10-0Н-18.1 (8Е) - 271(34)
XI 8-011-18:1(9) 241(13) -
XII 9-0Н-18:2(10Е,12) 225(8) 311(7)
XIII 13-011-18:2(9,НЕ)
XIV 10-0Н-18:2(811,12) 239(9) 271(34)
XV 12-011-18:2(9,ІЗЕ) 185(16) 325(1)
нашли аатрахшюиоаие ШЇГМїЛіТЬЇ [34], СПОСОоиіЛЄ, как известно, активирозагь
02.
ДиОН-ЖК И.РаиЬ'гдіа-пиз были представлены четырьмя ИЗЕЄЯГШМІІ
биц-диольшлми ЖК: 9,10-дн0Н-18:0; 9,Ю-дкОН-18:1(12); 12,13-дпОН-
18:1(9) и 11,12-днОН-20:0.
7. Оксигенированные липиды видов Оо^зурши.
7.1. Гидрохсилшіпдід семяи здорового и инфицированного вилтом хлопчатника
Оозауріиш Ьігаїїит.
. Б зрелых семеаах здорового хлопчатника сорта Тішпхііг-і, кг. гас кзгйспш:: зн-ТАГ, нашли и ОН-ТАГ (таол.1). ОН-ТАГ имели [«]її— 7,9 (с 0,3, хлориф'ерм.». По данішм Уф-гпектра содерх;анпг соиопженпих с-ОН-18:2 з смесг. ОН-ЖК составило 3,2%. Для анализа структуры ОН-ЖК О.ііігеиіилі исиользоваии масг-спе;;-тромгтршо високого разрешение их ТГ.'С производных с измерением точних кг;сс некоторых характеристичних фрагментов. Массу М1- и матсршіских исков оиределі:-Д’л методом мегпетабильной дефокусировки [10, 17). I! результате устаиогнлл структуру 16 ОН-ЖК, обнаружили одну диОП- н одну трц-ОН-ЖК (табл. 11). Гомологичные рицинолевой к изорицинолевон ОН-ЖК кислоты I к II, впервые обнаруженные именно у хлопчатника [10], относятся к новым соедипгшкм. В семенах этого же сорта, искусственно инфицированного патогеном УеПісіПііта сіаЬІіас, уровень ОН-ТАГ менллсу незначительно, состав и структура ОН-ЖК ие менялись.
■ . Таблица 11
Гидроксикислоты семян Оо55уріит ІіігБШит____________________
N Структура шдрокгихнслоты N Структура гидроксикислоты
1 9-011-17:1(12) IX 11-ОН-18:1 (9)
11 12-ОН-17.-1 (9) X 9-ОН-18:! (12)
III 9-0Н-17:2(10Е,12) XI 12-011-18:1 (9)
IV І0-0Н-18Ю XII 9-01М8:2(ЮЕ,12)
V 12-0Н-18:0 XIII 13-ОН-18:2(9,11Е)
VI 8-013-18:1 (9) XIV 10-0Н-18:2(8Е,12)
VII 10-0Н-18:1(8Е) XV ■ 12-011-18:2(9,13Е)
VIII 9-0Н-18:! (10Е) XVI 14-0Н-20:0Н(11)
7.2. Гидроксилнпнды семян шща О.техісзпшп.
- Пріі селсхщш сорта Ташхент-1 в качестве донора устойчивости была использована дикая форма хлопчатника О.техісапит уаг.легуоїшп, устойчивая к вертн-цимезному гилту. В семенах О.ілехісаііит напші те же ОЛ, что и у вида С.ІигсіНипі, однако при одинаковом с сортом Ташкент-1 содержании эп-ТЛГ уровень ОН-ТАГ п них был более чем в 3 раза т;же [24, 25]. Масс-спектрометрическим анализом ТМС эфиров установили, что состав и структура зп- и ОН-ЖК у двух видов хлопчатника также сходны.
Следовательно, видовые особенности хлопчатника не влияют па качественные составы ОЛ и оксигенированных ЖК, но отражаются на количественном содержании отдельных хласссв. .
7.3. Гндроксилшшды здоровых и инфицированных вилтом
листьев хлопчатника вида С-Шишит. ■
Биохимические процессы наиболее интенсивно протекают в молодых листьях, которые к более чувствительны к патогенным воздействиям, по сравнению со старыми листьями. В молодых здоровых листьях вилтоустойчивого сорта хлопчатника 175-Ф (образец 1) обнаружили п качестве ОЛ свободные 01І-ЖК ц содержащие их п'.дроксиацил-ацнлілицеринм (ОН-ДАГ). При искуственном инфицировании растепли грибом У.йсМіаи уровень ОЛ в листьях той же фазы вегетации (образец И) увеличивался почти п 2 раза (табл.1) [30, 33, 35, 39].' В здоровых листьях чувствительного сорта Ташкент-1 ОЛ отсутствовали, а в инфицированном образце они были представлены только ОН-ЖК с содержанием в 16 раз меньшим, чем з
аналогичном образце сорта 175-Ф.
Идентификацию классов ОЛ провели по данным ТСХ и масс-спектров ТМС эфиров смеси негидролнзованных и гидролизоианных ОН-ЖК и ОН-ДАГ. В УФ-спгктре МЭ ОН-ЛСК, выделенных кз ОЛ листьев двух сортов, присутстгозало слабое поглощение цнсдранс-коныогироранных днеиолов; п ИК-спсктре отмечалась интенсивная полоса колебаний транс-СН*=СН. Составы ОН-ЖК-1 п -II двух сортов установили, хроматографируя ТМС зфиры МЭ методом ГЖХ на полярной фазе, и масс-епктромегрней (табл. 12).
По совокупным данным ГЖХ и масс-спектрометрии в листьях устойчивого сорта преобладают четыре изомерные аллнльные ОН-18:1, присутствует последовательный ряд более низкомолекулярных, чем аллильная ЖК 9-ОН-18:1(ЮЕ), гомологов, а такхсе продукт ее удлинения 11-0Н-20:! (12Е). Гомологичные аллнльные моноены и 9-0Н16:2(10Е,12) кислота являются новым гидроксикислотами.
В результате инфицирования листьев содержание б них именно аллильных ОН-18:1, в особенности 9-ОН-изомера, повышается наиболее заметно. Таким образом,
Таблица 12
Гидроксикислоты листьев хлопчатника сорта 175-Ф______________
N Структура гидроксикислоты ГЖХ, % от массы МЭ ТМС эФнпоч N Структура гадракспкислоты ГЖХ, % от массы МЭ ТМС эсЬиоов
I II I II
1 9-ОН-12:1 (10Е> 2,6 2,1 13 Ю-0Н-18Ю 22,2 36,2
2 9-ОН-13:1 (10Е) 5,5 4,9 14 12-011-18:0
3 ОН-14:0 11,3 5,8 15 9-011-18:1 (10Е)
4 2-0Н-14:! (10Е) 16 11-011-18:1 С9)
5 9-ОН-15Ю 14,6 12,2 17 10-0Н-18:1(8Е)
6 9-ОН-15:1 (10Е) 13 8-0Н-18:1 (9)
7 ОН -16:0 15,2 9,1 19 9-ОН-18:1(12) 2,5 6,3
8 9-0Н-16:! (10Е) 20 12-ОН-18:1(9)
9 9-0Н-1б:2(10Е,12) 14,3 4,7 21 9-0Н-18'.2(10ЕД2) 3,5 2,2
10 13-ОТГ-16:2(9,11Б) 22 13-ОН~18:2(9,11Е)
11 9-0Н-17:1 (10Е) 6,8 23 0Н-20:0 5,7 7,0
12 12-ОН-17.-1 (9) 2,3 2,7 24 11 -0Н-20.1 (12Е)
в молодых листьях хлопчатника устойчивого сорта ОН-ЖК представлены в основном продуктами неферментативного фотосенсибилизированного окисления олеи-
новой кислоты 18:1(9) с помощью 1 Ог. Усиление неферментативного окисления в ответ на грибную инфекцию можно рассматривать как защити) ю реакцию фотосинтетических тканей устойчивого сорта хлопчатника.
В инфицированных листьях чувствительного сорта состав ОН-ЖК был более простым (И компонентов), аллильные ОН-18:1 и кислота 13-ОН-18:2 отсутствовали, хотя обнаруживались их высоко- и низкомолекулярные гомологи; уровень кислоты 9-ОН-18:2 был почти в 3 раза выше, чем в таком же образце устойчивого сорта. В соответствии с результатами степень устойчивости (чувствительности) сорта хлопчатника к инфекции У.(1аЬНае влияет на качественный состав ОЛ и ОН-ЖК и на содержание отдельных ОН-ЖК в тканях листьев.
7.4. Генерация госсиполом активных форм кислорода.
Известны фенолы, ■ у которых способность индуцировать окислительные реакции объясняется фотодинамической генерацией ими ! Ог. Поскольку в листьях хлопчатника присутствует специфический для этого растения полифенольный пигмент госсииол, мы исследовали фотодинамические свойства госсипола как возможного генератора '02 в реакциях образования аллильных ОН-ЖК методом ЭПР.
Установили, что освещение госсипола и его растворов в ненасьиценных липидах видимым светом в аэробных условиях индуцирует образование стабильных катион-радикалов пигмента, регистрируемых ЭПР в виде характерного сигнала слН^б э и g-фaктopoм 2.002 (госсипол) илидН=б э (липид + госсипол). Эксперименты с изменениями интенсивности и длительности освещения, с насыщением мощностью микроволнового ноля, литературные данные о свойствах ион-радикалов и механизме их взаимодействия с молекулярным Ог позволили представить следующую вероятную схему фотовзаимодействия госсипола с кислородом [27, 28].
Схема 5
Вероятный механизм фоговзаимодействия госсипола с Ог
Госсипол + 1и< -------------> Госсипол* (возбужденный госсипол)
1. Госсипол* + 02 — -> [Госсипол* • Ог]-----------> [Госсипол ■ ‘су ------->
Госсипол + 1 02
-м- . .
I , + Ы< . , _
II. Госсипол* + О -------------► [Госсипол*. О, ] '*: Госсипол + О'
1 * - Ъу г
8. Оксигенированные липиды хранившихся хлопковых семян, • образованные с участием патогенной микрофлоры.
При хранении масличных семян в производственных условиях в их насыпи развиваются процессы самосогревания, инициируемые патогенной микрофлорой (плесенями хранения). Исследовали ОЛ хлопковых семян, ядра которых при хранении на Ташкентском масложиркомбинате подвергались наибольшим изменениям по качеству и внешнему виду (дефектные семена). Результаты сравнивали с ОЛ неповрежденных хранившихся семян [23]. В дефектных семенах обнаружили (% от массы нейтральных липидов): 0,4 - эп-ТАГ; 1,8 - ОН-ТАГ; следы - эпОН-ТАГ;
1,6 - диОН -ТАГ и следы трнОН-ТАГ, тогда как в неповрежденных семенах -только 0,3 - эп-ТАГ и 2,4 - ОН-ТАГ. Состав оксигенированных ЖК дефектных семян по данным спектров ИК, УФ, ГЖХ на двух фазах и масс-спектрометрик исходных и и гидрированных продуктов, кроме 13 природных ОИ-ЖК, найденных нами в зрелых хлопковых семенах (табл. 11), включал 20 компонентов вторичного происхождения (табл. 13). ■
Таблица 13
Вторичные оксигенированные кислоты дефектных хлопковых семян
N Структура кислоты N Структура кислоты
I ОН-14.0 XI 12,13-ДиОН-17:1 (9)
II 0Н-15:0 XII 9,10-Эп,13-0Н-18:1 (И)
Ш ОН-1б:0 хш 12,13-Эп,9-ОН-18:1(Ю)
IV 13-ОН-1?:2(9,П) XIV 9,10*Ди0Н-18:0
V . • 9,10-Эп,13-0Н-17:1(Ш XV 9,10-Ди0Н-18:1 (12)
VI 12,13-Эп,9-ЬН-17:1 (10) ‘ XVI 12,13-Ди0Н-18:1(9)
VII , . 9,10-Ди0Н-17:0 XVII 9,13гДнОН-18:1(1й)
VIII 9,13-ДиОН-17:1 (10) XVIII 9,13-Ди0Н-18:1(11)
IX 9,13-ДиОИ-17:1(11) XIX 9,10,13-Три0Н-18:0
X 9.10-Ди0Н-17:К12) XX 9,12,13-Тги0Н-18:0
Структура вторичных оксигенированных ЖК позволяет сделать вывод о характере окислительных процессов, имеющих место при самосогревании масличных семян. Так, зпОН-ЖК и неыщиналыше диОН-ЖК с примерно равным соотношением изомеров (V н VI; XII и XIII; VIII п IX; XVII и ХУШ, табл.13) могли
появиться в результате автоокисления ТАГ с остатками ЖК 18:1 и 18:2, тогда как вицинальные диОН-ЖК с преобладанием 12,13-диОН-изомеров (XI, XVI) относятся к продуктам окисления этих же ненасыщенных ТАГ липоксигеназами патогенной микрофлоры.
9. Оксигенированные липиды, образующиеся при рафинации хлопкового масла.
Для выявления степени изменения ненасыщенных липидов хлопковых семян в .процессе их переработки исследовали ОЛ сырого хлопкового масла, масла, рафинированного водной щелочыо с последующей обработкой отбельной глиной, и двух образцов соапстоков, отобранных на Ташкентском масложиркомбинате.
В рафинированном масле нашли те же классы ОЛ, что и в сыром (эп-, оксо-, ОН-, эпОН-и диОН-ТАГ), но с меньшим содержанием ОН- ТАГ (за счет их легкого удаления водной щелочыо) и более высоким - эп-ТАГ, которые появляются дополнительно в ходе последующего контакта масла с отбельной глиной. Состав оксигенированных ЖК рафинированного хлопкового масла приведен в таблице 14.
' Таблица 14
Оксигенированные кислоты рафинированного хлопкового масла (ГЖХ, % от массы)
Кислота, включая изомеры . % Кислота, включая изомеры %
9,10-Эп-17:0 транс-9, Ю-Эп-18:0 Эп-17:1 транс-Эп-18:1 (2 изомера) цис-9,10-Эп-18:0 цис-Эп-18:1 (2 изомера) СО-18:1 (4 изомера) СО-18:2 (2 изомера) 0,3 1.7 0,9 3.0 1.8 39,2 2,4 11.0 ОН-17:1 (2 изомера) ОН-17:2 (2 изомера) 0Н-18Ю (2 изомера) 0Н-18:1 (б изомеров) ОН-18:2 (2 изомера) Эп0Н-18:1 9,10-Ди0Н-18;0 ДиОН-18:1 (4 изомера) 0,2 0,2 19,6 0,4 0,5 18,8
Наличие в рафинированном масле транс-эпоксидов с примерно равным содержанием изомеров и эпОН-ЖК свидетельствует о том, что процесс рафинации сопровождается автоокислением ненасыщенных липидов молекулярным Ог, а широкий набор аллилышх ОН- и СО-18:1 - на их фотосенсибилизированное окисление с
участием 1 Ог, инициируемое липофялышмн компонентам!! млела С фотодшгамиче-скими свойствами.
10. Биоактивные липиды отходов переработки эфиромасличных и лекарственных растений.
Лаванда (Lavandula vera L.) и шалфеи (Salvia setsrea L.) - культивируемые зфл-ромаелнчные виды, используемые для получения эфирных масел. Наши исследования показали, что отходы, остающиеся после удаления эфирного масла, являются источником биоактивных липидов [11]. Экстракты из отходов лаванды и шалфея содержат 4-10% каротиноидов, до 16% свободных ЖК, в том числе 30-40% кислоты 18:3, 9-12% - 18:2 (витамины F), 3-6% фитостеролов и трнтер-пенолов, до 30%, фосфо- и гликоллпидов. В производственных образцах восков из отходов этих видов растений, кроме собственно восковых эфиров и хлорофиллов, обнаружили также эфиры ЖК с трптерпснолами и фиюстеролами, что делает их пригодными не только для косметических, но и для фармацевтических целей.
Таблица 15
Состав отходов переработки Rh.carthamoides (1) и Ac.leucostomum (11)______________
N Класс веществ % от массы N Жирная кислота ГЖХ,%
1 11 I 11
1 Углеводороды 2,3 0,3 1 8:0 - Следы
2 Каротнноиды - 0,9 2 10:0 - -"-
3 Сложные эфиры Ж К со сте- 4,4 7,2 3 12:0 2,1 0,1
ролами и тритерленолами 4 13:0 1,4 Следы
4 Этиловые эфиры ЖК 1,0 8,2 5 X - 0,3
5 Триацилглицерины 3,6 Следы 6 14:0 1,5 0,4
6 Свободные ЖК 6,6 7 15:0 1,3 0,3
7 Алкаиолы 4,0 18,2 8 16:0 35,8 18,8
8 Тритерпенолы 3,3 9 16:1 7,4 2,8
9 Стеролы 6,0 10 16:2 • - 0,6
10 Хлорофиллы - 0,4 11 17:0 0,9 Следы
11 Ксантофиллы - 0,5 \2 18:0 2,1 7,5
12 Диацилглицерины 2,3 - 13 18:1 10,9 29,9
13 Моноацилглицерины 1,8 - 14 18:2 33,1 36,7
14 Гликолипиды Следы 17,1 15 18:3 3,5 2,6
15 Измененные хлорофиллы - 16 20:0 - Следы
16 Фосфолипиды+измененные - 39,7 ‘ 17 22:0 - _
хлорофиллы
17 Дубильные вещества 1,6 -
18 Флавоноиды 27,6 -
19 Алкалоиды - 1,5
20 Неидентифицированные 41,5
Корни и корневища Rhaponticum carthamoides (Willd.) IJjin. (ceM.Asteraceae) и мдземная часть Aconitum leucostomum Worosch. (ceM.Ranunculaceae) являются ■ллрьем для получения лекарственных препаратов стероидной и алкалоидной приводы.
Смолообразные отходы Rli.cartliamoides и Ac.leucostomum разделили на отдель-ше классы веществ сочетанием методов КХ и ТСХ, количество каждого класса зценили гравиметрически, липиды и липофильные компоненты идентифицировали то спектральным и хроматографическим данным, сравнением с известными соеди-тениями и литературными данными. Состав отходов показан в таблице 15. Результаты позволили рекомендовать использовать эти отходы как биодобавки в средства зытовой химии и фитокосмегики.
Создана препаративная форма двух видов биодобавок липидной природы, разработаны и утверждены ТУ и лабораторные регламенты. Биологическими исиыта-1иими подтверждено их положительное действие на кожу и волосы и отсутствие токсического эффекта. С использованием биодобавки из Rh.carthamoides составлена зецептура нового пеномоющего средства для детей "Лимончики" (промышленный шпуск с 1991 года), с биодобавкой из Ac.leucostomum - рецептуры новых шам-туней "Аканта”, "Гузал" (промышленный выпуск с 1993 года) и питательного крема 'Гульноз" [40, 42, 43].
ВЫВОДЫ
1. Проведено систематическое исследование оксигенированных липидов и окси-енированных жирных кислот 9 видов растений пяти семейств: Araliaceae, luphorbiaceae, Lamiaceae, Malvaceae и Poly- gonaceae. Разработан новый подход к шализу структуры и состава сложных смесей гидроксикислот, основанный на со-гетании масс-спектрометрии и газохроматографического анализа на двух фазах ■риметилсилильных производных исходных и гидрированных эфиров узких фракций.
2. Выделено и охарактеризовано 11 классов оксигенированных лииидов, в том теле новые бромсодержащие классы: свободные жирные кислоты, ди- и триацил-
глицернны. Идентифицирована 41 известная оксигенированная кислота и установлена структура 53 новых , в том числе эпоксп-, шдроксн-, дигндрокси-, оксо- I! бромсодержащих жирных кислот.
3. Впервые установлен стереоизоїирмин сотгз эноксиацчл - дкэшчг «щгркиоз ымли Galeopsis bifida н найдено преоб.мдаїшг несимметричных а сншгетрл'шгл:: двукпслоіаих молекулярних видов. Оаі-гделгпа структура 6 нозых ио;;ег;;а^;к диеновых зпокешшелот с длиной цепи в 16, 18 и 20 атимо'-з углерода,на:-траис-конфпгу рацией оксираноиого цикла. Установлена абсолютная конфігурації:; дзух известных оіїокскккслот. Выявлено, чїо состаз основних зпоксикнслот 'запас -ных липидов !.іа>::ет служить дополнительном хенотаксономичгским признаком сімейства. Предложена вероятная схема биосинтеза зиоксикислот Galeopsis bifida г.; иепгсы.'цешшх предшественников.
4. ИгследоЕаны гндроксилшшды б еидсе растении, сіруктурно охарактеризо-
вано 25 новых гидроксикислот с длиной цепи от 12 до 20 атоме:: углерода і: сггпеиыэ нгиасыщенпосгн 0-3. У пргдэтагитечей четырех семейств, п тем т..ел -у хлопчатника, обнаружен новый тип иеиасьїцхіших гпдро'.хии.слот с ачлглі ::і ir £м'калс*с1г.1си г::дрокс:іял при г.зулирсва'іііс." ц::е- ”.~к трапа- с:.
а.кассии;..! ааогв-тста:;:: се Сі^упур;;.:::,! ?: апг-а: к г; ^гл'.и
ііСііас.»ц-,Сі(іііаА ::ptск.ллііі,іи; п.-морсдс:.-
По:.аа;;на возможность образован u „тітліяасю инслорода ь агакала ютпчагайка госсииоіа с »голс::улtpiii;я їьслородс;і. Ііі*сгп"г,п~ і\~-яаксьие об участі::: аллш;ы;ых іидрзхаьіотогпсзіж кислот з заш.кіки* роакщ:>:-хлопчатника против VerticiUiuai dahlias ,
Предложены вероятные схемы биалпиезі пюрог.сикиллэт Galeopsis bifida i Acaui!:onar.ax scssiiifloi us.
5. Определена структур:.' 7 иазых дигидроксипислог іголіхшд:іоі'.с;;л:іг.о. лишдов Galeopsis bifida как ввцшігльшлх диодов, с длиной цепи в 36, II і: Т атомом углерода и степенью ненасыщенностн 0-2.
6. Изучены монооксоацилдкацилглицерины семян Galeopsis bifida и установлен, структура 13 новых оксохислот рада Сп и Ci8, имеющих степень неласыщенност
0-3 и аллилыгое расположение.кетогруппы при С9-С13 и С16. Найдена предпочтительная локализация оксоацильных остатков в зп-З-положении триацнлглицерннов.
7. Впервые из семян высших растений (ЕгешозШсЬуэ то1иссе11оЫе$) выделены зритро-9,10-дибром- н эритро,эритро-9,10,12,13- тетрабромстеариногая кислоты; изучены спектры ЯМР-13С природных н синтетических бромсодержащих жирных кислот и показано, что этот метод применим для установления положения и конфигурации атомов брома в их молекулах. Предложена вероятная схема образования бромстеариновых кислот Егетоз1асЬуз тс1иссе!1ок1е5.
3. Установлены состав и структура оксигенированных липидов хранившихся семян хлопчатника технических сортов. Найдены 33 оксигенированных кислоты, в том числе зпокси-, оксо-, эпокснгидрокси-, моно-, ди- и тригндроксисодержащих. Эп:ми данными подтверждено, что в процессе хранения масличных семян окисление ненасыщенных липидов происходит как автокаталитнчески, так и с участием ферментов патогенной микрофлоры.
9. Впервые получены данные о тонкой структуре автоокисленных лнпидоз, образующихся при щелочной и адсорбционной рафинации хлопкового масла. Вы* яалеяо, 'гго процесс рафинации сопровождается свободно-радикальным и фото-см'хибнлизированным окислением, инициируемым липофильнымп компонентами ?!псла с фотодннамнческимн свойствами.
10. Па основе биоактивных липидов отходов переработки лекарственных рас-чтггий ЕЬзрспй'сшп саШщтоЫез н ЛсошНнп 1еиссзЮ1"1Щ1 созданы два препарата, ис-гчуи-зозаини.ч в качестве биодобавок в состагах новых промышленно г;’пускаемых средств флтокосмешхя: пеномоющего средства детского ассортимента "Лк:-£сяч!гг.я" п кпмпуней 'Тугад', "Аканта", а такте питательного крема
*'уд5Л*о У\
Основное содержание диссертации отражено в следующих работах:
I. Гусакова С.Д., Умаров А.У. Масла ссмян Z,i?.ipltora pedicellata и Hrcmostachy; moluccelloides.- Химия природ.соедин,- 1975.- N3. - С.324-328.
2. Гусакова С.Д., Умаров А.У. Дибром- и тетрабромстеариновые кислоты масла семян Eremostachys moluccelloides.- Химия природ, соедин,- 1976.- N6.- С.717-723.
3. Тыщенко А.А., Гусакова С.Д., Степаниченко Н.Н. Спектры ЯМР- С бром-производных жирных кислот.- Химия природ.соедин.-1977.- N1.- С.26-30.
4. Панекина Т.В., Гусакова С.Д., Табак М.Я., Умаров А.У. Нейтральные липиды семян Eremostachys moluccelloides.- Химия природ, соедин,- 1978.- N1,- С.44-48.
5. Гусакова С.Д., Умаров А.У. Масла семян ceM.Labiatae.- Химия природ.соедин.-1978,- N1- С.57-63.
6. Юнусова С.Г., Назарова И.П., Гусакова С.Д., Глушенкова А.И. Липидный состав семян инфицированного вилтом хлопчатника.- Химия природ.соедин.- 1980.-N3,- С.319-325.
7. Степаненко Г.А., Гусакова С.Д., Умаров А.У. Состав экстрактов оболочек л вдра семян Nepeta patmonlca к Lavandula vcra.- Химия природ.соедин.- 1980.- N5.-С.614-620,
8. Степаненко Г.А., Гусакова С.Д., Умаров А.У. Липиды семян Carum carvi и Foemculum vulgare.- Химия природ.соедин.- 1980.- N6,- С.827-828.
9. Гусакова С.Д., Винокуров И.И., Умаров А.У. Эпокси- и окси- кислоты масла семян Galeopsis bifida.- Химия природ.соедин.- 1981.- N3,- С.288-295.
10. Юнусова С.Г., Гусакова С.Д., Рашкес Я.В. Масс-спектрометрическое изучение скснкислот хопкового масла.- Химия природ.соедин.- 1981.-144,- С.436-443.
II. Хомова Т.В., Гусакова С.Д. Липиды экстрактов сырья и отходов производства лавандового и шалфейного масел. -Масло-жир. пром-сть. -1981.- N10.- С.ЗО-ЗЗ.
12. Юнусова С.Г., Гусакова С.Д. Влияние степени зрелости хлопковых семян на липидный состав.- Химия природ.соедин.- 1982.- N1. - С.40-44.
13. Юнусова С.Г., Гусакова С.Д., Умаров А.У. Стереоспецифический анализ триацилглицеролов хлопкового масла.- Химия природ.соедин.- 1982.- N4,- С.430-433.
14. Gusakova S.D. New Oxo Fatty Acids from Galeopsis bifida.- Abstracts of Papers of Second International Conference on Chemistry and Biotechnology of Biological Active of Natural Products. Budapest.- 1983,- P.174.
15. Хомова T.B., Гусакова С.Д., Умаров А.У. Структура триацили эпоксиацил-диацнлглицеролов семян Galeopsis bifida.- Химия природ.соедин.- 1983.- N2,- С.232-233.
16. Асилбекова Д.Т., Гусакова: С.Д., Умаров А.У. Нейтральные липиды семяи Phlomis oreophilla и Ph. regelii.- Химия природ, соедин.- 1983.- N5.- С.561-565.
17. Гусакова С.Д., Юнусова С.Г., Рашкес Я.В., Глушенкова А.И. Новые окси-кислоты липидов Gossypium hirsutum.- Тезисы докл.VII Советско-Индийского симпозиума по химии природных соединений. Тбилиси.- 1983.- С.102-103.
18. Гусакова С.Д., Степаненко Г.А., Асилбекова Д.Т., Мурдохаев Ю.М. Липиды некоторых лекарственных растений.- Растит.ресурсы.- 1983.- T.XIX.- Вып.4.- С.444-455.
19. Гусакова С.Д., Хомова Т.В. Новые оксокислоты масла семян Galeopsis bifida.-Хлмия природ.соедин.- 1984.- N3,- С.286-291.
20. Хомова Т.В., Гусакова С.Д., Глушенкова А.И., Шляпникова A. ft. Состав
носков из отходов производства лавандового и шалфейного масел.- Химия природ.соедин.- 1984.- N6.- С.707-712. '
21. Асилбекова Д.Т., Гусакова С.Д., Глушенкова А.И. Липиды плодов Acanthopanax sessiliflorus.- Химия природ.соедин.- 1985. - N6.- С.760-765.
22. Юнусова С.Г., Гусакова С.Д., Глушенкова А.И. Липиды семян Securinega suffruticosa.- Химия природ.соедин,- 1986,- N3.- С, 277-286.
23. Гусакова С.Д., Юнусова С .Г., Черненко Т.В., Назарова И.П., Глушенкова А.И. Липиды дефектных хлопковых семян и влияние микрофлоры на их состав.-Химия природ.соедин.- 1986.- N6.- С.677 -686.
24. Gusakova S.D., Yunusova S.G., Stepanichenko N.N., Glushenkova A.I. Lipids of Gossypium mexicanum Seeds.- Abstracts of Papers of VIII Indo-Soviet Symposium on the Chemistry of Natural Products. Hyderabad.- 1986,- P.49.
25. Юиусопа С.Г., Гуслкоиг. С.Д., Степасичен^о П.П.. Хо.шур.1до:..л 1Л., Глушенкова А.И. Лштди ссмкк Ооздурймл тгхюлш-и.- Хьмиа прирсд.со.ч.,;:.! - 1957.-Ш,- С.57-6?.. .
26. Асилб’г.о^л Д.Т., Гусаком С.Д., Молссгса Г.П., Рлушгмкоса А.И. Но;.ыс о:0:;!сэ;:-:з X:::::.:: ::г;::рзд.гс.""!:':.- 1927.- М2.- С.22-1 231.
'Л. 7ыЩ'л:>м Л А., Гусак.- :• С .Д., И :зг,;,г;.;а П.П.. Глутг:;.-.сач *». Фг,;одп-ил-кчсскис з.'-фпли 11 кошмиопт:.-'. сенлц >:ло«чипшк<ь- Хтл«г 1ц;;'.;'зд.ссед!ы.-1357.- N3.- С.354-360.
28. Тышекко А.А., Гусакова С.Д., Илза^окп П.П., Глуигеикел.". Л.И. <р.»то;з:ду-пзрамагкетизм в госсшюле и :< его расторг.*.- Текшем доклЛ' 15:сс..-) • шалого сн:1ПОя;:у.-:й ..о ;.:о.ли|-:м г.;.;-.д:т.1;”':.‘!1{.Се1;1Г.:>: 1 Г-<57. -
С. 110.
'.14. Гус;’!.о:-:; С.Д, Астагко.,:) Д.',"., иг.л.по'л.ц li.il., Х::ыо..: Т.К.. '1ышви%-: Л.:' ,Г.:уи1С:;кс:-.; Л.К. П:,:1.л.;:л;.. .~да::;,;и.. I. ии::с|110^ и;.'м: :.ло.! ■ ■
пгссс г ; пгр.-чгибсекп.- Химк,, I,рмрод.^с?,1ля.- 133';!.- Ш.- С.4?.-.»0.
Ю. Юиуо»)::.; С!'., Гусами-: С.Д., Ми^гали-акш Х.Т., ГУем;-И'-',. С.Л , ^ 10. Мет,'6 .и..::-:доу ; /-кегьлх ■<_ ;скг: ■:.г■:;: лг.-- :
П'ПС ::г^л,- Т;:д?-;.”. Л■ 'лг.:',..'г со:-
>:ог.ь: 1:мму.'1кге1а ; гт>о;:им (ю.!;сал;;ч г^сса'п^Г.Уф,.- £9о£.- С.И'.'..
М. ЛсшСемиа Д.Т., Гус<т.сй,- С.Д., »Ьгг;о;;. П.П., Мухп*:глок. Х.С., г
АЛ., Гг-у.а‘:.:::'о;1с. А.И. Сост ;.7:с с;г,,сл1-ил,-ч клро;;. - Ха;'!:..- п;-и г. г ■ сл-
едки.- 1988.- Н->.- С.502-50и.
32. Хомоиа Т.Н., ГУсакогз Г.Д, Глуя'гк/озг А.И. /илшд'» Пг.шех сллГггп:-.-Хишш природ соедин.- 1955-.- N2,- С.224-225.
53. Юнусоьа С.Г., Гусекоьа С.Д., Мпрмэдичит Х.Т., Глуи^жкй Л.И., Уеии.ог. С.Л., Пкрамоз Ю. Лнпщш ллс*ьс.\ •.слоптлш:;;: сорта 175-Ф.- Хпмки п.-яра.-.сг,-СДШ1.- 1989.- N2.- С.285-286.
34. Хомова Т.В., Гусакова С.Д., Глушенкова А.И. Лкш:дц плодов Иишгх РаЫзешапш.- Химия природ.соедин.- 1590,- N5.- С;б04-611.
35. Fyccsosa С.Д., ГОнусега С.Г., Глушенкова А.И. Окпсшшис липиды листьез г-ялтоустойчлгсго сорт.", хлопчатника.- Тезисы докл. V Международного симпозиума по Еертпциллиуму.Летшград.- 1990.- С.52.
35. Асплбекога Д.Т., Гусаком С.Д., Глушенкова Л.II. Нояые мирные гидроксп-ьтслокл Acniilhopnnnx sessiliRorus.- Химия природ, соедин,- 1991.- N5.- С.616-519.
37. Гусакова С.Д., Асилбекова Д.Т. Гидроксикислотн запасных липидов-Galeopsis ‘uifida.- Химия природ.соедин.- 1991.- N6.- С.744-753.
■ .40. Русакова С.Д., Хорога Т.П., Глушенкова А.И. Окснгеннровзнные кислоти сгнасннх л-лндсв Rumex Paulsenlamis.- Химия природ, соедин.- 1991.- N6.- С.762-765. .
39. Гусаком С.Д., Юиуссга С.Г., Глушенкова АЛ!. Окисленные липиды лнсіьез
хлопчатника.- Химия природ соедин.- 1992.- N1,- С.31-35. •
40. Хомова Т.П., Гусакова С.Д., Глушенкова А.И. н др. Пеномоющее средство для детей. .По.тотяггелытое решение от 22.04.1992г. на заявку М 1929917/3014/034 па Пат.РУз.
41. Юнусова С.Г., Гусаком С.Д., Мнрзаазнмова Х.Т., Глушенкова А.И., Усманов С.А., Икрамов Ю. Действие вилтовой инфекции на нейтральнее липиды лкстьеп хлопчатника.- Химия природ.соедин.- 1992.- N5,- С.474-183.
42. Xovora Т.П., Гусаком С.Д., Глушечксга А.И. и др. Способ получения биологически сктитшх еєщ’стн пз растительного сі;рья. Положительное решение от 15.04.1993г. на заявку N 00 0 0 066/1(0 091) га Пат.РУз.
•53. Кпм М.П., Хсмсея Т.В., Гусахоза С.Д. п др. Средство для мытья голос. Пологсигел: ное ряшешіе or 13.05.1993г. па ::аг~::у П С0С0112/1(0153) :п Пат.ГУс.
БЕШ ОИЛАГА МАНСУБ БАЪЗИ ЮКСАК УСИМЛНКЛАРНИНГ ОКСИДЛАНГАН ЛИПИДЛАГИ
Гусакова Светлана Дмитриевна
Биоорганнк киме, табиий ва физиологик фаол моддалар кимеси мутахассислиги.
Araliaceae, Euphorbiaceae, Lnrniaceae, Malvaceae ва Polygonaceae оиласига маису6 9та усимлик турининг оксидланган липидлари (ОЛ) урганнлди. Гидроксикислоталар тузилнши ва мураккаб аралашмаларининг таркибини аницлашда уларнинг кичик фракцияларини дастлабки ва гидрогенлаигак кислоталар триметилсилил з^осилалари куринишида масс-спектр >^амда икки хил фазали газ-суюклик хроматографияси билан таз^лил ^илишга асосланган янги услуби ишланди. 11 турга мансуб ОЛ, шу жуиладан янги, соф \олдаги бромланган ег кислоталар ва уларнинг ди- ва триа-цилглнцеритари тузилиши ани^анди.
Молекуласида эпокси, оксо, гидрокси, 2та гидрокси, 2та ва 4та бром группалари сянлаган 53та янги кислоталар тузилиши урганилди, 41та маълум кислоталар ту-зилиши тасди|у1анди. Загира липидлардаги асосий эпоксикислоталар миедорий таркибини усимликлар оиласи учун 1$шимча хемотаксономик белги сифатида ^уллаш мумкинлиги курсатилди. Lamiaceae оиласига мансуб усимлик турларида эпокси-, гидрокси- ва бромкислоталар, Araliaceae оиласига мансуб турда гидроксикислоталар биосинтезинииг э>;тимолий схемаси таклиф цилинди.
4та оилага мансуб усимлик турларида, шу жумладан пахта барги ва уругида тузилиш белгилари буйича туйинмаган кислоталарнинг ферментларсиз 1 Ог билан оксидланиши натижасида ^осил буладиган моддалар турига тегашли янги гидроксикислоталар типи топилди. Бу кислоталарни пахтада Verticillium dahliae Kleb. пато-генига царши х,имоя реакцияларида иштироки курсатилди. Пахта пигмент» госсиполнинг фотодинамик з^оссаси анинланди ва унинг актив кислород форма-сини фотогенерациялаш эцтимолий механизми тавсия этилди. Пахта уруги техпик сортларини cayiam жарайннда *осил буладиган иккиламчи ОЛ тузилиши ва таркиби у’рганилнб, уруг ферментлари ва могор замбуругининг иккиламчи оксидланиш жа-райнларига таъсири аник^панди. Пахта егининг ишцорий ва адсорбцион рафинация
шароитларвда у,осил булган иккиламчи ОЛ аницланди ва ег липофил бирикмалари бу му^итда фотосенсибиллашган оксидлашш жараенига туртки балади, деган ху-лосага келинди. •
Rltaponticum carthamoides ва Aconitum leucostomum доривор Усимликларшш цайта ишлага чи^инднларининг биологяк фаол липидлари Урганилиб, улар асосида 2та биологик кушимча топилди ва янги фитокосметика воситалари "Лимончалар” (1991 йил ишлаб чик;арилган), "Гузал" (1993 йил), "Аканта" шампуни ва "Гульноз" креми рецептураларига киритилди.
OXICENATED LIPIDS OF SOME HIGHER PLANTS FAMILIES
Gusakova Swetlana Dmitrievna
Speciality - bioorganic chemistry, chemistry of natural a.id physiological active compounds
Oxigenated lipids (OL) of 9 plant species of five families: Araliaceae, Euphorbiaceae, Lamiaceae, Malvaceae and Polygonaceae were studied. New approach to an analysis of a structure and composition of complex hydroxy acid mixtures founded on the combination of mass spectrometry and two phase GC of trimethylsilyl derivatives of narrow fractions of starting and hydrogenated esters has been woiked out. The structures of
11 OL classes were established including new brominated free fatty acids and containing them di- ,md triacyhlyceroles. -11 known oxygenated acids were identificated and structures of 53 new ones have been determined .including epoxy-, hydroxy-, dihydroxy-, oxo-, dibrom- and tet- rabromcontaining acids. '
It was revealed that the composition of main epoxy acids of storage lipids may serve as additional chenutaxcnomic sign of a family. Probable biosynthetic schemes have been offered for epo^xy, hydroxy, bromo acids in Lamiaceae species and hydroxy acids in one Araliaceae species.
!n the representatives of four families including in cotton leaves and seeds there was found new type of hydroxy acids attributed on structural signs to the products of nonenzymatic oxidation of unsaturated precursors with the aid of *02. Their parti-
clpation have been shown in cotton plants protective reactions against pathogenic fungus Verticiilium dahiiae Kleb.. Photodynamic properties of cotton plants pigment gossypol were determined and possible mechanism of photogeneration of oxygen active forms by gossypol has been suggested.
On the basis of the structure and the composition of sscondary OL found in storage cotton seeds of Industrial varieties there was revealed enzyme action of cotton seeds and storage moulds on secondary oxidation proceeded in these conditions. The structures of secondare OL formed on alkaline and adsorbed refining of cotton seeds oil were determined and there was drawn a conclusion about the participation of oil lipiphilic components in the Initiation of photosensitized oxidation in the process of the refining.
As a result of the Investigation of bioactive lipids from industrial waste of medicinal plants Rhaponticum carthamoides and Aconitum leucos'.omuin there have been created two bioadditions Introduced in the new phytocosmetics: shampoos "Limonchiki" (industrial output with 1991 year), "Guzal" (industrial output with 1993 year)," Akanta" and cream "Gul’noi".
ІТолшісапо n пг'ізті,—
Формат бумаги 60x84',',,,. Пу.пга nmoi рафекая Ks I.
Початі. .РОТАПРИНТ», Обі. с а Л*7 Тираж Л*7;,,;,.
Закал .3 J-S
Типография издательства .фан» АН Рив,б.™*, V.Cckmct.hi 700170. Ташкент, пр. ,4 Горького, 71!
