Особенности определение стероидов в биологической жидкости газохроматографическим методом тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. методы подготовки пробы, практическое значение. Получение стероидных профилей мочи с использованием насадочных колонок.

1.1.1. Ферментативный гидролиз конъюгатое.

1.1.2. Очистка для повышения избирательности хроматографирова-ния.

1.1.3. Немодифицированные стероиды.

1.1.4. Дериватизация

1.1.5. Кислотный гидролиз конъюгатое.

1.1.6. Автоматизированные методы

1.1.7. Совершенствование техники хроматографирования.

1.1.8. Дальнейшее развитие метода.

1.2. Экстракция.

1.2.1. Экстракция типа жидкость/жидкость

1.2.2. Твердофазная экстракция.

1.2.3. Сверхкритическая экстракция.

1.3. Гидролиз.

1.3.1. Кислотный гидролиз.

1.3.2. Ферментативный гидролиз

1.3.3. Лммонолиз.

-21.3.4. Метанолиз.

1.3.5. Сольволиз.

1.4 Дериватизация

1.4.1. Силъигъные производные 2. Циклические диэтилсилиловые производные.

1.4.3. TMSenol-TMS производные

1.4.4. Аллилдиметилсилильные производные

1.4.5. Одновременное силжирование и метоксилирование.

1.4.6. Фторпроизводные.;.

1.4.7. Гептафторбутилъные производные

1.4.8. 3,5-Бис-трифторметилбензоильные производные.

1.4.9. Перфторацилъные производные

1.4.10. Смешанные ТМС - фторпроизводные.

1.4.11. Производные циклобората

1.4.12. Ацильные производные.

1.5. Газовая хроматография с использованием капиллярных колонок 37 1.5.1 Библиотека газохроматографических параметров.

1.6. Автоматизация и компьютеризация.

1.7. Диагностическое значение стероидных профилей мочи 7.1. Абсолютные нормы

1.7.2. 21 -Гидроксилазный дефицит.

1.7.3. 11-Гидроксилазный дефицит.:.

-31.7.4. Комбинированный 2 l-гидроксилазный и 11-гидроксилазный дефи

1.7.5. Дефицит 3-дегидрогеназы

1.7.6. 17а-Гидроксилазный дефицит

1.7.7. 17,20-Лиазный дефицит.

1.7.8. Комбинированный 17а-гидроксилазный и 17,21-десмолазный дефицит

1.7.9. Кортизол-11-дегидрогеназный дефицит (11-DH)

1.7.10. Кортизон редуктазный дефш^ит

1.7.11. 5 а-Редуктаза.

1.7.12. СП синдрома Иценко-Кушинга.

1.7.13. Синдром Конна.

1.7.14. Фракции глюкоронидов и сульфатов.

1.7.14. Беременность

1.7.15. Гестоз.

1.7.16. СП новорожденных.

1.7.17. Эстрогенные СП.

1.7.18. Рак.

1.7.19. Уремия.

1.7.20. Другие области применения СП.

1.8. Постановка задачи

ГЛАВА II МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА

2.1. Приборы и оборудование.

2.1.1. Хроматограф.

2.1.2. Модернизация хроматографа JIXM

2.1.3. Подготовка насадочных колонок.

2.1.4. Подготовка сорбента

2.1.5. Подготовка капиллярных колонок

2.1.6. Условия хроматографирования

2.2.1. Используемые реагенты

2.2.2. Подготовка растворителей и способы их очистки.

2.2.3. Устройство для проведения гидролиза

2.2.4. Другое оборудование

ГЛАВА III количественные аспекты подготовки объекта исследования к анализу.

3.1. Экстракция конъюгатов стероидов.

3.2. Комбинированный с экстракцией гидролиз конъюгатов стероидов

3.2.1. Выбор растворителя.

3.2.2. Исследование влияния кислоты

3.2.3. Исследование влияния температуры

3.2.4. Усовершенствование методики проведения гидролиза

-53.3. Очистка образца

3.3.1. Техника эксперимента.

3.3.2. Очистка раствором бикарбоната натрия.

3.3.3. Очистка дистиллированной водой

ГЛАВА IV. получение дериватов стероидов и их газохроматографиче-ское определение

4.1. Получение производных.

4.1.1. Методика эксперимента.

4.1.2. Получение ТМС производных.

4.1.3. Получение МО-ТМС производных

4.1.4. Получение енол-триметилсшилъных производных

4.2. Газовая хроматография стероидов.

4.2.1. Хроматографирование с использованием насадочных колонок

4.2.2. Хроматографирование с использованием капиллярных колонок

4.2.3. Идентификация стероидов с использованием метиленовых едини

4.2.4. Выбор внутреннего стандарта

4.2.5. Количественные аспекты определения клинически важных стероидов

4.2.6. Воспроизводимость метода.

4.2.7. Нормы экскреции стероидов женщин репродуктивного возрас

Актуальность темы. Прогресс в области диагностики многих серьезных заболеваний базируется на развитии новых методологических подходов в аналитической технике. Сегодня хорошо известна чрезвычайно важная роль стероидных гормонов в биохимических процессах и патогенезе многих заболеваний. Именно поэтому в настоящее время интенсивно разрабатываются различные способы их определения в биоорганических субстанциях. Диагностика заболеваний, связанных с нарушением синтеза и метаболизма стероидных гормонов в эндокринологии, гинекологии и онкологии, немыслима без определения содержания гормонов в организме. Постоянно возрастающее число больных бесплодием, которое часто оказывается связанным с гормональными нарушениями, резко повышает актуальность проблемы.

Как правило, медики, строя свои суждения об эндокринной патологии, ограничиваются простым измерением уровня гормонов в крови. Причина повышенного внимания именно к крови, как биологической субстанции, связана с созданием автоматизированных аппаратов, принципиально основанных на использовании высоко специфической реакции антиген -антитело, позволяющих делать анализы в большом количестве, быстро и качественно. Моча в качестве объекта исследования осталась на втором плане: как правило, при ее анализе ограничиваются лишь определением суммы 17-кетостероидов (17-КС), реже суммы 17-оксикетостероидов и дегид-роэпиандростерона (DHEA).

Однако, после довольно длительного периода "тотального увлечения" определением гормонов в крови выявились и серьезные недостатки этого метода, основные из которых перечислены ниже:

1. Моментальные колебания концентрации гормонов в крови, связанные с циркадными ритмами и другими возможными физиологическими процессами в организме, приводят к ложным выводам.

2. Значительные вариации нормативных показателей в зависимости от применяемой разновидности иммунологического метода существенно снижают надежность определения.

3. Ассортимент доступных, особенно в условиях современной России, наборов реактивов, необходимых для использования с максимальной эффективностью данного метода недостаточен. К тому же дороговизна и ограниченное время хранения наборов накладывает дополнительные ограничения на их практическое применение в клинических условиях.

4. Наконец: анализ крови не являясь неинвазивным методом диагностики, всегда создает некоторую вероятность случайного заражения пациента и врача лаборанта вирусами СПИДа, гепатита В и др.

70 - 80-е годы можно без преувеличения назвать "Золотым веком" развития методик определения стероидов в биологических жидкостях с использованием всевозможных химических и хроматографических способов. Именно в этот период были решены основные проблемы по практическому применению подобного анализа. Однако, несмотря на ряд успешных разработок в этом направлении, иммунологический метод все же "одержал верх" над химическим, причем основной причиной этой "победы" оказалась трудоемкость процессов, многоступенчатость стадий проведения химического анализа, и, как следствие, трудность их автоматизации.

Основные преимущества использования мочи в качестве объекта исследования связаны прежде всего с тем обстоятельством, что с мочой экскретируется большое количество стероидов, несущих обширную информацию не только о железах, в которых они синтезируются, но и о состоянии печени, где преимущественно стероиды подвергаются катаболизму. Кроме того, определение стероидов в суточной моче позволяет избежать влияния на результаты измерений циркадных ритмов, которые часто бывают значительными.

Анализ литературных данных позволяет заключить, что одним из наиболее мощных инструментов эффективного анализа стероидов в моче на современном этапе является капиллярная газовая хроматография. Это обусловлено, прежде всего, высокой чувствительностью и разрешающей способностью данного метода.

Хроматографическая кривая сложной смеси стероидов в моче - стероидный профиль (СП), как оказалось, является наиболее ценным диагностическим тестом при целом ряде заболеваний, связанных с нарушением синтеза и метаболизма стероидов, причем некоторые из заболеваний могут быть диагностированы только этим методом. К сожалению, широкому применению

СП в клинике препятствует длительность аналитического процесса, его многостадийность и, как следствие, высокая стоимость. Поэтому целью настоящей работы является поиск и разработка новых методологических подходов, позволяющих быстро и надежно определять стероиды в моче, причем существенным дополнительным требованием в условиях специфики клинической практики в России должна быть относительная дешевизна разработанного метода, а, следовательно, и его общедоступность. В целом естественно ожидать, что внедрение разработки позволит существенно улучшить выявляемость ряда заболеваний, снизить репродуктивные потери и осуществить качественный мониторинг за ходом проведения лечения.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, завершающегося постановкой задачи, экспериментально-методической части, двух глав, посвященных обсуждению полученных экспериментальных результатов и главы, в которой представлены некоторые аспекты практического использования разработанного метода, выводов, списка литературы и двух приложений.

Основные результаты представлены на выставках:

1. Общественное собрание Российской академии наук. «Экология. Здравоохранение.» 23 Марта - 3 апреля 1998 г., Москва.

2. XVI Менделеевский съезд по общей и прикладной химии. 25-29 мая 1998 г Санкт-Петербург.

3. "Научно-технический потенциал нефтегазовой и смежных областей промышленности" 29 июля -5 августа 1999 г., ВВЦ Москва.

Таким образом, в заключение данного раздела можно сделать выводы о том, что применение ККГ позволяет в значительной степени позволит защитить стероиды от деструктивного влияния кислоты. По кислотной стабильности стероиды можно расположить в ряд Ch>Et>An=DHEA>Pd>Pt>THF.

Стабильность стероидов к воздействию кислоты в значительной мере зависит от количества гидроксильных групп в молекуле.

3.3. Очистка образца. После проведения кислотного гидролиза, полученные в результате подобной процедуры свободные стероиды нельзя сразу вводить в хроматограф, так как экстракт содержит массу всевозможных примесей. Существует много способов очистки гидролизата, которые подробно были рассмотренных выше в литературном обзоре. В настоящей работе в качестве основного метода очистки выбран способ промывки гидролизата раствором щелочи с целью удаления эстрагенов, кислотных и других примесей. После щелочной обработки экстракт промывался дистиллированной водой, при этом удалялся остаток щелочи. С целью достижения наименьших потерь стероидов, стадия очистки гидролизата была также оптимизирована.

3.3.1. Техника эксперимента. После процесса комбинированного с экстракцией кислотного гидролиза бензол, содержащий растворенные в нем стероиды переносился в делительную воронку, в которую добавляли раствор щелочи. Делительную воронку, содержащую систему из двух фаз, закрывали пробкой и интенсивно встряхивали пять минут. Затем прибор оставляли стоять в неподвижном состоянии пять минут для разделения эмульсии. Нижний слой отбрасывали, а верхний переносили в стеклянную пробирку и центрифугировали для осаждения содержащихся в бензоле взвесей. Далее бензол переносили в коническую колбу и выпаривали досуха, а затем проводили стандартную процедуру дериватизации. Силилирующий агент удаляли выпариванием, после чего пробу растворяли в 1 мл гексана и переливали жидкость в сосуд для образца. Затем гексан также выпаривали. Сухой осадок растворяли в 1 мкл гептана и вводили в испаритель хроматографа. Количественный расчет проводили относительно внутреннего стандарта.

Главной проблемой щелочной очистки гидролизата являлось частичная потеря свободных стероидов, которые также растворялись в растворе щелочи. Поэтому было важно найти такую концентрацию щелочи, при которой удалось бы добиться наименьших потерь при условии обеспечения достаточной степени очистки гидролизата. В подобных экспериментах использовали водные растворы натрия бикарбоната и гидроокиси калия.

Для моделирования процесса очистки гидролизата в бензол вводили стероиды и стандарт, создавая при этом заранее известную заданную концентрацию.

3.3.2. Очистка раствором бикарбоната натрия. Для проведения модельного эксперимента первоначально была создана искусственно смесь стероидов An, DHEA, Pd и Ch, которая промывалась в 2-х мл 0,1, 0,5 и 1,0 N раствора бикарбоната натрия однократно, дважды и трижды. Полученные результаты представлены в таблице 2.

1. Van den Heuvel W.J.A., Sweeley С.С., Horning E.C. Separation of steroids by gas chromatography IIJ. Amer. Chem. Soc. -I960.- Vol. 82, №13.- P. 34813482.

2. Sweeley C.C., Horning E.C. Microanalytical separation of steroids by gas chromatography I/Nature (Engl.) -I960.- Vol. 187, № 4732, P. 144-145.

3. Литвинов Л.Д. Газовая хроматография как перспективный метод определения функционального состояния коры надпочечников (Предварит, сообщение) НАктуальн. вопр. клинич. мед. -М. 1963. С. 64-67.

4. Kihner М.А., Lipsett М.В. The analysis of urinary steroids using gas-liquid chromatography //Steroids 1964. - Vol. 3, №3. -P. 277-294.

5. Pinelli A., Formento M.L. A precise and sensitive method for the analysis of steroids in small urine samples by thin-layer chromatography gas-liquid chromatography И J. Chromatogr. 1972.- Vol. 68, №1. - P. 67-75.

6. Heyns W., Hendrikx A., De Moor P. Dosage des ll-desoxy-17-C.S. par chromatographic gazleuse HAnn. Endocrinol. 1965. - Vol. 26, №2.-P.168-169.

7. Matthijssen C., Coldzieher J.W. Analysis of total, grouped, and individual urinary 17-ketosteroids: a critical evaluation //Acta Endocrinol. 1971. - Vol. 68, №2.-P.31 1-333.

8. Berthou F., Bardou L., Floch H.H. Separation of urinary androstanediol and pregnanediol isomers by a combined gas liquid chromatography thinlayer chromatography method//J. Chromatogr.-\914.-Wo\. 93, №1, -P. 149165.

9. Voelter W., Jung G., Breitmaier E, Bouchon G., Bayer E., Gupta D. Comparisionof the trifluoroacetyl and trimethylsil ether derivatives for gas chromatography of steroids HAnal. Chem. Acta- 1971. Vol. 53, №1. -P. 185-188.

10. Gupta D., Breitmaier E., Jung G., Von Lucadou G., Pauschmann H., Voelter W. Gas-chromatographic comparison of trimethylsilyltrfluoroacetyl-, and heptafluorobutyrate steroid derivatives.// Chromatographia 1971. -Vol.4,№12.-P.572-575.

11. Holub W.R. Routine gas-liquid chromatographic method for simultaneous assay a majory urinary 17-ketosteroids, and pregandiol and pregnantriol HClin. Chem. 1971.-Vol. 17. №11. P.1083-1088.

12. Bober H., Gaul H. Vber die Gaschromatographie der Steroide 1/1 Mitt Ar-beiten mit dem Gaschromattographen GC-4. Beckman Rept. 1967,- №4. -S. 617.

13. Van de Calseyde J.F., Scholtis R.J.H., Schmidt N.A., Leijten C.J. Profiling urinary steroids. A reliable procedure I/Clin. Chin. Acta 1972. - Vol. 38, № 1. -P. 103-111.

14. Tomsova Z., Gregorova I., Jarosova M. Stanoveni 15 steroidu ze shupin 17-oxosteroida derivata progesteronu a tetrahydroderivatu kortikoida v termze mocovem extraktu plynovou chromatografii HVnitrni Lek. -1978. -Vol.24, №7. -P. 691-694.

15. Ros A. II profllo gascoromatografico degli steroidi neutru totali urinari nelPuomo normale. Valutazione di 18 steroidi ormonali. I I Boll. Soc . Ital. Biol. Sperim. -1969,- Vol.45, № 2, P. 141-144.

16. Tomsova Z., Gregorova I., Horky K. Separation of urinary steroids by gas-Iiq-uid chromatography on packed and mixed-bed columns. IIJ. Chromatogr. -1980. Vol.200, №1.-P.221-223.

17. Tomsova Z., Gregorova I., Horky K. Detrmination of 26 Urinary steroids in one Urine Sample by Gas-Liquid Chromatography //Adv. Steroid Anal. Proc. Symp. Budapest. -1982.-P.259-263.

18. Horning E.C., Devaux P.G., Moffat A.C., Pfaffenberger C.D., Sananchi N., Horning M.G. Gas phase analytical separation techniques applicable toproblems in clinical chemistry. HClin. chim. acta 1971. - Vol. 34, №2. - P. 135-144.

19. Horning M.G., Hung A., Hill R.M., Horning E.C. Variations in urinary steroid profiles after birth HClin. Chim. Acta.-1971.-Vol. 34, №2. P. 261-268.

20. Devaux P.G., Horning M.G., Hill R.M., Horning E.C. O- benzyloximes: derivatives for the study of ketosteroids by gas chromatography. Application to urinary steroids of the newborn human //Anal. Biochem. 1971. - Vol. 41, №1.-P. 70-82.

21. Devaux P.G., Horning M.G., Horning E.C. O-benzyloximes: derivatives for the study of ketosteroids by gas chromatography. Application to urinary steroids of the newborn human IIAnal. Lett. 1971. -Vol.4, №3 .-P. 151-160.

22. Anderson R.A., Defaye G., Madani C., Chambaz E.M., Brooks C.J.W. Lipophilic gel and gas-phase analysis of steroid hormones. Application to the human newborn HJ. Chromatogr. 1974. - Vol. 99, №1. - P. 485-494.

23. Kulpmann W.R., Breuer H. An improved method for the simultaneous determination of individual 17-oxosteroids and of pregnandiol in urine by gas-liquid chromatography HZ. Klin. Chem. und Klin. Biochem. 1977. -Bd. 15, №4. -S. 225-231.

24. Bottema J.K., Belderok W.J. Same remark on the simultaneous determination of pregnantriol and oestriol by gas chromatography //Clin. chim. acta 1976.-Vol.68,№2.-P. 199-201.

25. Kaplan H.G., Hreshchyshyn M.M. A rapid gas-chromatographic method for the quantitative of urinary estrone, esradioIe-17, estriol and pregnandiol throughout pregnancy //Steroids 1972. -Vol. 19, №6. -P.763-770.

26. Taylor G.F., Carter N.G. The simultaneous determination of pregnandiol and 17-ketosteroids by gas chromatography and total urinary oestrogens by fluorimetry, all from the same urinary extract //Pathology 1981. - Vol. 13, № 1. - P. 97- 100.

27. Van Kampen E.J., Hoek W. Urinary Steroid Spectra by Gas Chromatography //Clin. Chim. Acta 1967. - Vol. 16, №4. -P. 442- 444.

28. Hoek W., van Kampen E.J. Urinary Steroid Spectra by Gas Chromatography //Clin. Chim. Acta 1968. - Vol. 19, №3.-P.371-381.

29. Frensdorf E.L., van Kampen E.J., Hoek W. Urinary Gashromatographic Steroid Spectra //Clin. Chim. Acta 1970. - Vol.22, №1. -P. 77-81.

30. Trocha P., D'Amato N.A. Method for Screening Urinary Steroids by Gas Chromatography //Clin. Chem. 1978. - Vol. 24, №2. - P. 193-199.

31. Kecskes L., Juricskay Z. Steroid spectrum in human urine as revealed by gas chromatography. 1 Quantitative analysis of С -С О steroids //Acta Biochem. et biophys. Acad. Sci. 19 21 2-3 Hung. 1975. - Vol. 10, №1 - 2. -P. 37-49.

32. Juricskay Z., Kecskes L. Steroid Spectrum in Human Urine as Revealed by Gas Chromatograohy. Quantitative Analysis of С -С О Steroids //Acta. Biochem. et Biophys. Acad. Sci. 19 21 2-3 Hung. 1978. - Vol. 13, №4. - P. 279-291.

33. Scommegna A., Chattoraj S.C. Automated analysis of urinary steroids. Obstet. and Gynecol-1968.- Vol. 32, №2. -P. 277-284.

34. Makin H.L.J., Trafford D.J.H. A Semi-Automated Computerized Gas-Liquid Chromatographic system for urinary Steroid Profile Analysis IIJ. Clin. Chem. and Clin. Biochem. 1982. - Vol. 20, №12. -P. 899-905.

35. Edwards R.W.H. Prediction of the relative molar flame ionization response for steroids IIJ. Chromatogr. 1978. -Vol. 153, №1.-P. 1-6.

36. Edwards R.W.H. Temperature dependence of ethylene unite values of steroids in Gas-liquid chromatography IIJ. Chromatogr. 1978. -Vol. 154, №2. -P. 183-190.

37. Fennimore L.C., Whitford J.H. and Davis C.M. Nickel gas chromatographic columns: to alternative to glass for biological samples. IIJ. Chromatogr. -1977.-Vol. 140, №1. P.9-15.

38. Kirk D.N., Shaw P.M. Gas Chromatography of Steroids: the Use of Steroid Derivatives as stationary Phases IIJ. Chem. Soc. 1971. №23. - P. 3979-3982.

39. Zielinski W.L., Jr., Johnston K., Muschik G.M. Nematic Liquid Crystal for Gas-Liquid Chromatographic Separation of Steroid Epimers И Anal. Chem. -1976. -Vol. 48, №6. P. 907-911.

40. Логунов В.П., Мазхар С.А. Определение содержания стероидов в моче больных псориазом методом хроматографии //Клин. лаб. диагн. -1994. -Том.4, Стр. 11-13.

41. Kabra P.M. Clinical analysis of individual steroids by column liquid chromatography HJ. Chromatogr. 1988. Vol. 429. P. 155-176.

42. Halperin-Walega E.S., Greene F.E. J. Determination of hydroxytestosterones by isocratic, high-performance liquid chromatography with an internal standard ULiq. Chromatogr. -1985. Vol.8. P. 1677.

43. Leuvering J.H., Thai P.J., White D.D., Schuurs A.H. J. A homogeneous sole particle immunoassay for total oestrogens in urine and serum samples //Immunol. Methods -1983. -Vol.62.№2, P. 163-164.

44. Bleving D.D., Kelly D.M. Solid phase extraction concentration of anabolic steroids from biological matrices. Pittsburgh Conf., Anal. Chem. and Appl. Spectrosc. Chicago (111) Fevr 27. March. 1994: abstr. Chicago (111), 1994. P.861.

45. Schoeneshofer M., Weber В., Oelkers W., Nahoul K., Mantero F. Urinary excretion rates of 15 free steroids: potential utility in differential diagnosis of Cushing's syndrome. //Clin. Chem. 1986. -Vol. 32. P.93-96.

46. Lawson G.J. Rapid method for the measurement of methylprednisolone and its hemisuccinate in plasma and urine following «pulse therapy» by high-performance liquid chromatography //J. Chromatogr. 1985.- Vol.342. №2, P. 251-260.

47. Heikkinen R., Fotsis Т., Adler-Creutz H. Reversed-phases C18 cartridge for extraction of estrogens from urine and plasma //Clin. Chem. -1981. -Vol. 27, №7, P. 1186-1189.

48. Li S.F.Y., Ony C.P., Lee M.L., Lee H.L. Supercritical fluid extraction and chromatography of steroids with Freon 22 HJ. Chromatogr. -1990.-Vol.515, p.515-520.

49. Din N., Bartle K.D., Clifford A.A., Castle L. An investigation of supercritical fluid extraction of trenbolone from beef. J. High. Resolut. Chromatogr. -1996.-Vol. 19, P. 465-469.

50. Leuvering J.H., Thai P.J., White D.D., Schuurs A.H. J. A homogeneous sole particle immunoassay for total oestrogens in urine and serum samples И J. Immunol Methods -1983. Vol.62. P. 163.

51. Risk M., Holland O.B., Brown H. Rapid chromatographic purification of urine steroid glucuronates for determination of aldosterone secretion rate IIJ. Chromatogr. -1984.- Vol.317. P.367.

52. Van Kampen E.J., Anker A.P. Steroid spectra, pattern recognition and quantitative analysis //Clin. Chim. Acta-\91\.- Vol.34, № 2, P. 241-260.

53. Kuelpmann W.R., Breuer H. An improved method for the simultaneous determination on individual 17-oxosteroids and of pregnandiol in urine by gas-liquid chromatography///. Clin. Chem. Biochem. -1911.- Vol.15. P.225.

54. Fotsis Т., Adlercreutz H. The multicomponent analysis of estrogens in urine by ion exchange chromatography and GC-MS-I. Quantation of estrogens after initial hydrolysis of conjugates //J. Steroid Biochem -1987.- Vol.28. № 2, P. 203-213.

55. Stitch S.R., Halkerston I.D.K. //Biochem J. -1956.- Vol. 73, P.710.

56. Shackleton C.H.L. Profiling steroid hormones and urinary steroids //J. Chro-matogr. -1986. -Vol.379. P.91-156.

57. Bredlow H.L. The hydrolysis of steroid conjugates, in Bernstein S. and Solomon S. (Editors), Clinical and Biological Aspects of Steroid Conjugation, Springer, Berlin, 1970, P. 131 -181,

58. Endocrinol. Suppl. -1978-. Vol. 217, №88. P. 96-120.

59. SIGMA chemical company 1996. Biochemicals organic compounds and diagnostic reagents. 1996. SIGMA. 493-495.

60. Voigt K.D., Schmidt H, //Methods of enzymatic analysis. Academic Press, New York, 1974. Vol.4

61. Hobkrik R., Nilsen M., Blahey P.R. Conjugation of urinary phenolic steroids in the nonpregnant human female urine particular reference to estrone sulfate HJ. Clin. Endocrinol. Metab. -1969. -Vol.29. P.328-337.

62. Karim M.F., Taylor W. Steroid metabolism in the cat. Biliary and urinary excretion of metabolites of oestradiol IIBiochem J. -1970. -Vol.117. P.267-270.

63. Bain J.D., Kasman L.H., Bercovitz A.B., Lasley B.L. A comparison of three methods of hydrolysis for estrogen conjugates IISteroids -1984.- Vol.43. № 6, P.603-619.

64. Tang P.W., Crone D.L. A New Method for Hydrolyzing Sulfate and Glucuro-nyl Conjugates of Steroids 11 Anal. Biochem. -1989.- Vol.182. P.289-294.

65. Количественный анализ стероидов /Герег Ш., под ред. И.В. Торгова, В.Г. Березкина. М.: Мир, 1985

66. Bournot P., Ramirez L.C., Pitoizet N., Maume B.F., Padieu P. //Synthesis and gas chromatographic-mass spectrometric analysis of reduced compounds derived from 6t- 6-hydroxy- 11-deoycorticosterone. Steroids -1989.- Vol.53. № 1-2, P.149-168.

67. De Jong E.B., Horsten B.P., Goldschmidt H.M. -1985. In proc. Int. Symp. Capillary Chromatogr., 6h, Ed P. Sandra, Huething, Heidelberg. P. 610-619.

68. Vanluchene E., Vandekerckhove D. Group fraction of free and conjugated steroids by means of disposable silica-based anionaxchange columns. HJ. Chromatogr. -1988.- Vol.546. № 1, P. 175-182.

69. Родчинков Г.М., Уралец В.П., Семенов В.А. Газохроматографическое и масс-спектрометрическое обнаружение дексаметазона и его метаболитов в биожидкостях человека. //Журнал аналитической химии -1987. Т. XLII, Вып.9, Стр. 1678-1683.

70. Уралец В.П., Семенов В.А. Селективное газохроматографическое определение кетостероидов с термоионным детектором. //Журнал аналитической химии. -1984. Т. XXXIX/ Вып. 5, Стр. 938-941.

71. Gerhardt K., Ludwig-Kohn H., Henning H.V., Remberg G., Zeeck A. Identification of Oesrogen Metabolites in Human Urine by Capillary Gas Chromatography and Mass Spectrometry. IIBiomed. and Environ Mass Spec-trom. -1989.-Vol.18. P. 87-95.

72. Fotsis Т., Adlercreutz H. The multicomponent analysis of estrogens in urine by ion exchange chromatography and GC-MS. 1 Quantitation of estrogens after initial hydrolysis of conjugates IIJ. Steroid. Biochem. -1987.- Vol.28. № 2, P. 203-213.

73. Fotsis T. The multicomponent analysis of estrogens in urine by ion exchange chromatography and GC-MS. Fraction and quantitation of the main groups of estrogens conjugates IIJ. Steroid. Biochem. -1987.- Vol. 28. № 2, P. 215-226.

74. Beyssac I., Martini M.C., Cotte. Estrogen identification and determination in Filatov human placent extracts by high performance liquid chromatography HJ.Int.J.Cosmet.Sci. -1986.- Vol.8. № 4, P. 175-188.

75. Rizk M.S., Zakhari N.A., Walash M.I., Toubar S.S., Brooks C.J.W., Anderson R. Gas chromatography and mass spectrometry of dimethylethylilyl ether derivatives of norethisterone metabolites in plasma HActa Pharm. Nord. -1991.- Vol.3. P.205-219.

76. Ishibashi M., Irie Т., Miyazaki H. Diethylhydrogenil- cyclic diethylsilylene derivatives in the gas chromatography-mass spectrometry of hydroxylated steroids. IV. Hydrocortisone IIJ. Chromatogr. -1987.- Vol.399. P. 197-206.

77. Masse R., Ayotte C., Dugal R. Studies on anabolic steroids. 1 Integrated methodological approach о the gas chromatographic mass spectrometric analysis of anabolic steroid metabolites in urine HChromatogr. -1989.-Vol.489. № 1, P.23-50.

78. Steffenrud S., Borgeat P., Bertrand M.J. Syntheses and comparison of three reagents for allyldimethylsilylation of prostaglandins and steroids: a gas chromatographic method HJ. Chro matogr. Sci.-1989 Vol.9, P.545-548.

79. Van den Heuvel W.J.A., Sjovall J., Horning E.C. Gas-chromatographic behavior of trifluoracetxy steroids HBiochim. Biophys. Acta. -1961.- Vol.48, № 3, P.596-599.

80. Garcia-Regueiro J.A., Diaz I. Determination of 5a-androst 16-e-3one in back fat of digs by GC ECD HJ. High Resolut. Chromatogr. and Chromatogr. Com-mun. -1985,- Vol. 8, №10, P.698- 699.

81. Casademont G., Pere В., Garcia Requeiro J.A. Simultaneous determination in calf urine of twelve anabolic agents as heptafluorobutiryl derivatives by capillary gas chromatography mass spectrometry HJ. Chromatogr. В -1996.-Vol.686. P. 189-198.

82. Murray S., Watson D. Bis-trifluoromethylbenzoyl derivatives for steroid analysis by gas chromatography electron capture negative ion chemical ionization mass spectrometry HJ. Steroid. Biochem. -1986,- Vol.25. № 2, P.255-260.

83. Watson D., Murray S., Taylor G.W., Gower D.B., Ruparelia В., Vinson G.P., Anderson E. Gas chromatography electron capture mass - spectrometry of steroids of human origin. И Biochem. Soc. Tranns -1988.- Vol.16. N 5, P.737-738.

84. Jarman M., McCague R. //The selective protection of the 3-keto functions of steroids as heptafluoro-p-tolyl enol ethers HJ. Chem Soc. Perkin Trans. -1987.-Ptl,№ 5, P. 1129-1133.

85. Mizumoto Т., Kondo S. An application of he cycloborate formation of steroids to the analysis of urinary neutral steroids by gas-liquid chromatography И Clin. Chim. Acta -1985.- Vol.147. № 2. P. 159-165.

86. Shimizu K., Yamaga N., Yamasaki H., Kohara H., Нага Т., Adachi K. Determination of 17-hydroxyprogesterone in blood by GC/MS lllgo Masu Kenkyu-kai Koenohy -1985.- Vol. 10, P. 189-192.

87. Rossi S.A. Development of short-column GC/MS and GC/MS/MS strategies: fundamentals and applications to anabolic steroid analysis /Avail. Univ. Microfilm Int Order № DA9219235 -1991. P.271; C.A. 1994 Vol. 120, 183118h

88. Rossi S.A., Johnson J.V., Yost R.A. Short-column gas chromatography / tandem mass spectrometry for the detection of underivatizeed anabolic steroids in urine //Biol. Mass. Spectrum. -1994.- Vol.23, №3, P. 131-139.

89. Zuric I.S., Sperling A.K., Megers K.P. The determination of anabolic steroids by MECC, gradient HPLC, and capillary GC HJ. Forensic Sci. -1994 Vol.39, P.74-85.

90. Makin H.L.J., Trafford D.J.H., Nalan J., Kirk D.N. Development of a library of gas chromatographic and mass spectral characteristic of steroids HJ. Endocrinol. -1993.- Vol.139. P.38.

91. Georgakopaelos C.G., Tsika O.G., Kiluris J.C., Jurs P.C. Prediction of gas chromatography relative retention times of anabolic steroids HAnal. Chem. -1991.-Vol. 63. P. 2025-2028.

92. Felder R.A.//C/m.C/7em.-1991.-Vol. 37, №2, P. 301-302.

93. Synovec R.E., Johnson E.L., Moore L.K., Renn C.N. Column liquid chromatography: equipment and instrumentation. I I Anal. Chem. 1990. -Vol. 62, № 12, P. 357-370R.

94. Drumgold M.R., Berry W.F., Tharp S.Y. Quantitative analysis of cocaine and phencyclidine using laboratory robotics and capillary gas chromatography. HLC-GC 1990.- Vol. 8, № 5, P. 392-396.

95. Tejada S.B, Sigsby J. E. Identification of Chromatographic Peaks Using Lotus 1-2-3®'//J. Chromatograph. Science. -1988.- Vol. 26, P.494-500.

96. Holland J.F., Leary J.J., Sweelley C.C. Advanced instrumentation and strategies for metabolic profiling//,/. Chromatogr. Biomed. Appl. 1986. - Vol. 379. -P. 3-26.

97. Honour J.W., Price D.A., Taylor N.F. Marsden H.B., Grant D.R. Steroid biochemistry of virilising adrenal tumours in Childhood. I I Eur J. Pediatr.-19S4.-Vol.142, № 3.-P. 165-169.

98. Endocrinology /Ed. Leslie J. De Groot J.-Philadelphia, London, Toronto, Montreal, Sydney, Tokyo. 1989. -Vol. 1, 2, 3.

99. Shackleton C.H.L.,Taylor N.F. and Honour J.W./M« Atlas of Gas Chromatographic Profiles of Neutral Urinary Steroids in Health and Disease / Packard -Becker, Delft, Illinois 1980.

100. Энциклопедия по безопасности и гигиене труда. Т.1. пер. с англ. М.: ПРОФИЗДАТ. 1985. С.647.

101. Legrand C., Dousset В., Tronel H., Belleville F., Nalet P. J. Measurement of plasma testosterone by gas chromatography negative -ion mass spectrometry using pentafluoropropionic derivatives //Chromatogr. Biomed. Appl. -1995.-Vol.663, № 2, P.187-192.

102. Pommier F., Sioufi A., Godbillon J. Quantitative determination of nort-estosterone acetate in human plasma by capillary gas chromatography with mass-selective detection HJ. Chromatogr. A -1996.- Vol.750, P.75-81.

103. Watson D.G., Midgley J.M., McGhee C.N.J. IIAdvances Steroid Analysis '90/Proc. Symp. Analysis Steroids. Pecs, Apr. 24-26, -1990. Budapest -1991. -P.225-233.

104. Vanluchene E, Hinting A., Dhont M. at al. Steroid determination in human ovarian follicylar fluid using capillary gas chromatography HJ. Steroid Biochem. -1990. Vol. 35, № 1. -P. 83-89.

105. Key T.J.A., Pike M.C., Baron J.A., Moore J.W., Wang D.Y., Thomas B.S., Bulbrook K.D. Cigarette smoking and steroid hormones in women HJ. Steroid Biochem. Molec. Biol-1991.- Vol.39, № 4a. P. 529-534.

106. Schmidt N.A., Borburgh H.J., Penders T.J., Weykamp C.W. Steroid profiling an update llClin. Chem.-1985.-Vol.31, № 4.- P.637-639.

107. Pike A.W., Moynihan C, Kibler S. at al. Semi micro quantitative analysis of complex Urinary steroid mixtures in healthy and diseased states //J. Chromatogr. Biomed. Appl. 1984. - Vol. 306. - P. 39-50.

108. Weykamp C.W., Penders T.J., Schmidt N.A., Borburgh A.J., van de Calseyde, Wolthers B.J. Steroid Profile for Urine: Reference Values //Clin. chem. -1989.-Vol.35,№ 12.-P.2281-2284.

109. Homoki J., Rodens K., Teller W.M. Infantile spasms: Urinary steroid excretion during corticotropin (ACTH) treatment. Advances Steroid Analysis '87

110. Ргос. 3rd Symp. Analysis Steroids Sopron, Hungary Oct. 20-22, -1987, Budapest 1988.-P. 473-478.

111. Hughes I.A., Arisaka O., Perry L.A., Honour J.W. Early diagnosis of 11-hy-droxylase deficiency in two siblings confirmed by analysis of novel steroid metabolites in new-born urine //Acta Endocrinol.-1986.-Vol.lll, № 3.-349-354.

112. Homoki J., Holl R., Teller W.M. Harnsteroidprofile dei Cushing Syndrom und Tumoren der Nebennierenrinde HClin. Wochenschr 1987. - Vol. 65, № 15.-P.719-726.

113. Afkinson A.B., Ferguson Т., Sheridan В., Heaney A.P. Urinary Cortisol excretion in essential hypertension IIJ.Endocrinol. -1994. Vol.140. Suppl. P.64.

114. Rolland D., Patricot M.C., Mathian В., Revol A. Determination of the urinary excretion of tetrahydroaldosterone by gas chromatography. Normal abult values IIAnn. Biol. Clin. (Paris) -1987. Vol.45. P.70-73.

115. Vierhapper H., Nowotny P., Waldhausl W., Frisch H. Capillary gas chromatography as a tool for characterization of urinary steroid excretion in patients with congenital adrenal hyperplasia HJ. Steroid Biochem. 1985. - Vol. 22, №3.-P. 363 -369.

116. Shackleton C.H.L., Irias J., McDonold C., Imperato-McGinley J. Late-onset 21-hydroxylase deficiency: reliable diagnosis by steroid analysis of random urine collections И Steroids 1986. - Vol. 48, № 3 - 4. - P. 239 - 250.

117. Horning E.C., Horning M.G. Metabolic profiles: gas-phase methods for analysis of metabolites HClin. Chem.-\91\.~ Vol. 17, № 8, -P.802-809.

118. Egusa Genshi, Mori Hiroshi, Yamane Kiminor at al. //Hiroshima J. Med. Sci.-1990.-Vol.39, № 4.-P.145-147.

119. Dean H.J., Shackleton C.H.L., Winter J.S.D. Diagnosis and natural history of 17-hydroxylase deficiency in a new-born male HJ. Clin. Endocrinol, and Me-tab.- 1984.-Vol.59, № 3.- P.513-520.

120. Brem A.S., Matheson K.L., Conca Т., Morris D.J. Effect of carbenoxolone on glucocorticoid metabolism and Na transport in toad bladder 11 Am. J. Physiol.-1989.-Vol.257. №4.-P.F700-F704.

121. Phillipou G, Higgins B.A. A new defect in the peripheral conversion of cortisone to Cortisol IIJ. SteroidBiochem.- 1985.-Vol. 22, № 3.-P.435-436.

122. Brochu M., Belanger A., Tremblay R.R. Plasma level of C-19 steroids and 5a-reduced steroid glucoronides in urine androgenic and idiopathic hirsute women HFert. Steril.-Ш!.- Vol.48, № 6.-P.948-953.

123. Serafini P., Lobo R.A. Increased 5a-reductase activity in idiopathic hirsutism HFert. Steril.-1985.-Vol.43, № 1.- P.74-78.

124. Peterson R.E., Imperato-McGinley J., Gautier Т., Shackleton Urinary steroid metabolites in subjects with male pseudoher maphroditism due to 5a-reduc-tase deficiency HClin. Endocrinol. (Oxf) 1985. - Vol.23, № 1. - P. 43-53.

125. Stewart P.M., Shackleton C.H.L., Beastall G.H., Edwards C.R.W. 5a-reductase activity in polycystic ovary syndrome //£<2ra^.-1990.-Vol.335, № 8687, P.431-433.

126. Орлов E.H., Николаев H.H. Анализ стероидов мочи методом газожидкостной хроматографии. //Клин. Лаб. Диагн.-1993.-№ 2, Стр. 20-22.

127. Stoner E. The clinical development of a 5a-reductase inhibitor, finasteride HJ. Steroid Biochem. andMolec. Biol.-1990.- Vol. 37, № 3.-P.375-378.

128. Payne D.W., Packman Y.N., Adashi E.Y. Follicle stimulating hormone inhibits granulose cell 5 alpha reductase activity. Possible role of 5 alpha -reductase as steroidogenic pubertal switch. HJ. Biol. Chem.- 1992.- Vol. 267, № 19.-P.13348-13355.

129. Holt D.A., Levy M.A., Metcalf B.W. //Пат. 4882319 США/ РЖ 19. Химия. -1991, №4, С.- 29-30, 4 089П.

130. Phillipou G. Investigation of urinary steroid profiles as a diagnostic method in Cushing's syndrome. //Clin Endocr. (Oxf.)-1982.- Vol.16, № 5. -P. 433-439.

131. Corrall R.J.M., Wakelin K., O'Hare J.P. O'Brien I.A., Ishamail A.A., Honour J. 5a-reductase deficiency: diagnosis via abnormal plasma levels of reduced testosterone derivatives //Acta Endocrinol. -1984. -Vol. 107, № 4.-P. 538-543.

132. Imperato-McGinley J., Gautier Т., Pichardo M., Shackleton C.H.L. The diagnosis of 5a-reductase deficiency in infancy //J. Clin. Endocrinol, and Metab. -1986. -Vol.63, №P.1313-1318.

133. Muller L., Phillipou G. Quantification of 5a- and 5P androstendiolos in urine by gas chromatography mass spectrometry //Clin. Chem. -1987. Vol.33, № 2, Ptl , 256-260.

134. Egger H-J., Reiner J., Spiteller G. Harn-Steroidprofile hirsuter Frauen HJ.

135. Chromatogr. Biomed. Арр1.-\91Ъ.-Уо\Л45. № 3.-P.359-369.

136. Rutine screening and quantition of urinary corticosteroids using bench-top gas chromatography -mass- selective detection I/J. Chromatogr. -1992. Vol.573. P. 183-190.

137. Nishikaze Osamu, Furuya Etsuko. Urinary 17-ketosteroid sulphates and 17-hydroxycorticosteroid glucoronides in normal adults, subjects with hypertension, obesity, hyperlipemia and diabetes mellitus HJap. J. Clin. Chem.-1988.-Vol.17, №2.-P. 55-63.

138. Honour J.W., Goolamali S.K., Taylor N.F. Prenatal diagnosis and variable presentation of recessive x-linked ichthyosis IIBr.J.Dermatol.-\985.- Vol.112, № 4.-P.423-430.

139. Corrie J.E.T., Edwards C.R.W., Budd P.S. A radioimunoassay for 18-hidroxycortisol in plasma and urine HClin. Chem.- 1985.- Vol.31, № 6.-P.849-852.

140. Ulick S., Blumenfeld J.D., Atlas S.A., wang J.Z., Vaughan E.D. The unique steroidogenesis of the aldosteronoma in the differential diagnosis of primaryaldosteronism HJ. Clin. Endocrinol andMetab. 1993. - Vol. 76, № 4. - P. 873 -878.

141. Wolthers B.G., Kraon G.P.B., van der Molen J.C., Nagel G.T., Rouwe C.W., Lenting F., Boersma E.P. Urinary Steroid profile of a new-born suffering from pseudohypoaldosteronism HClin. Chim. Acta -1995. Vol.236. P.33-43.

142. Nishikaze Osamu, Furuya Etsuko. Значение определения сульфатов 17-ке-тостероидов в моче. HJap. J. Clin. Chem.-1987.- Vol.16, № 2. -P. 85-95.

143. Hahnel E., Wilkinson S.P., Hahnel R. Urinary steroid profiles in pregnancy by capillary column gas chromatography HClin. chim. Acta.- 1985.-Vol.151, № 3.-P.259-271.

144. Honour J.W., Kelnar C.J.H., Brook C.G.D. Urine steroid excretion rates in childhood reflect grouth and activity of the adrenal cortex IIActa endocrinol. -1991.-Vol. 124, № 2.-P.219-224.

145. Taylor N.F., Shackleton C.H.L. Gas Chromatographic Steroid Analysis for Diagnosis of Placental Sulphates Deficiency: A Study of Nine Patients. IIJ. Clin. Endocrinol, andMetab.-1979.-Vol.49, № 1 .-P.78-86.

146. Monder C., Stewart P.M., Lakshmi V., Valentino R. Burt D., Edwards C.R. Licorice inhibits corticosteroid 11-dehydrogenase of rat kidney and liver: in vivo and in vitro studies I I Endocrinology 1989. - Vol. 125, № 2. - P. 10461053.

147. Meny L.-J., Sjovall J. Method for combined analysis of profiles of conjugated progesterone metabolites and bile acids in serum and urine of pregnant women IIJ. Chromatogr. В -1997.-Vol. 688, P. 11-26.

148. Montoneri C., Pedalino F., Chillemi R., Sciuto S. Urinary steroid profiles in gestosis syndrome IIEurop.J. Obstetr. Gynecol. Reprod. Biol.-1986. -Vol. 21, № 3.-P. 151-157.

149. Yovich J.L., Stanger J.D., Yovich J.M., Tuvik A.I., Turner S.R. Hormonal profiles in the follicular phase, luteal phase and first trimester of pregnanciesarising from in-vitro fertilisation //Br. J. Obstet. Gynaecol. -1985. Vol.92. № 4. P. 374-384.

150. Homma K., Masumoto M., Takeshita E., Iri H., Anzo M., Sato S., Matsuo W. Assessment of the urinary steroid profiles in new-born infants by GC/MS selected ion monitoring system //Horumon to Rinsho -1994. Vol. 42. P. 623629.

151. Fotsis Т., Adlercreutz H. The multicomponent analysis of estrogens in urine by ion exchange chromatography and GC-MS-11. Quantities of estrogens after initial hydrolysis of conjugates HJ. Steroid Biochem.- 1987.-Vol.28, № 2,-P.203-213.

152. Lacinova Z., Tomsova Z., Siep B. Gas chromatographic determination of estrogens in urine of pregnant women HSb. Lek. -1990. Vol.92. P. 12-17.

153. Lerhardt K, Ludwig-Kohn H, Henning H.V., Remberg G., Zeeck A. Identification of oestrogen metabolites in human urine by capillary gas chromatography and mass spectrometry HBiomed. and Environ. Mass. Spectrom. 1989. -Vol. 18,№2.-P. 87-95.

154. Adlercreutz H., Fotsis Т., Bannwart C. Hamalainen E. Bloigu S., Ollus A. Urinary estrogen profile determination in young Finnish vegetarian and omnivorous women HJ. Steroid Biochem.- 1986.-Vol.24, № 1.-P.289-296.

155. Masse R., Bi H., Du P. Studies on anabolic steroids. VI1. Analysis of urinary metabolites of formebolone in man by gas chromatography-mass spectrometry //Analysis chim. Acta 1991.-Vol. 247, № 2, P. 211-221.

156. Schneider M.A., Honour J.W. Adrenal cortex, tumour, and peripheral production of deoxycorticosterone //Steroids -1992. Vol.57. P.7-12.

157. Orlov E.N., Loginova K.B., Antipov E.M., Nikolaev N.N., Plate N.A., Makarov O.V. Adenocarcinoma of endometrium: Interrelation between etio-cholanolone and cholesterol //European Journal of Cancer 1993.- Vol. 29 A, Suppl. 6. - P. SI28.

158. Ahman H., Jansson S., Wangberg В., Tisell L-E., Schersten, Hansson G., Bengtsson B-A., Ernest I., Jakobsson C-E., Lindstedt S. Adenocortical carcinoma diagnostic and therapeutical implications HEur. J. Surg. -1993.-Vol.159, 149-159.

159. Minowada S. Analysis of urinary steroid metabolites in patients with adrenal tumour and congenital adrenal hyperplasia by capillary column gas chromatography //Nippon Hingokika Gakhai Zasshi -1985. Vol.76. P. 15301540.

160. Danza G., Dini S., Bartolucci G., Zentinti G., Becorpi A., Massi G.B. Guarna A., Serio M. Isotopic dilution GC-MS measurement of 4-hydroxyandrostenedione in postmenopausal breast cancer. IIEndocr. Relat. Cancer. -1996. Vol.3. 137-143.

161. Ludwig-Koehn H., Henning H.V. Some Aspects of Quantification of Neutral Steroid Metabolites in Body Fluid of Healthy and Uremic Subjects by Capillary Gas Chromatography//Л High Resol. Chromatogr. & Chromatogr. Com. -1986.- Vol. 9, P.35-38.

162. Ayotte C., Goudreault D., Charlebois A. Testing for natural and synthetic anabolic agents in human urine. IIJ. Chromatogr. В 1996. - Vol. 687. P.3-25.

163. Kim Т., Suh J.W., Ryu J.-C., Chung .C. Park J. Excretion study of catabolism an anabolic steroid in human urine HJ. Chromatogr. В -1996.- Vol.687. P.79-83.

164. Harrison L.M., Fennessey P.V. Methandrostenenolone metabolism in humans potential problems associated with isolation and identification of metabolites UJ. Steroid Biochem -1990.- Vol.36. P.407-414.

165. Yap B.K., Johnston G.A.R., Kazlauskas R. Routine screening and quantitation of urinary corticosteroids using bench-top gas chromatography mass-selective detection IIJ. Chromatogr.- 1992.-Vol.573, № 2.-P.183-190.

166. Masse R., Bi H., Ayotte C., Dugal R. Studies on anabolic steroids. 11 Gas chromatographic /mass spectrometric characterisation of oxandrobone urinary metabolites in man IIBiomed. Environ. Mass. Spectrom. -1989.- Vol.18. № 6. P. 429-423.

167. Dobo R., Zalka A., Hollosi I., Pucsok J. IIAdvances Steroid Analysis '87/Proc. 3rd Symp. Analysis Steroids. Sopron, Hungary Oct. 20-22,-1987, Budapest, .1988.-P. 293 -298.

168. Zhang J., Liu C.S., Bi H.G., Zhang Y.Z., Zhou Т.Н. The chromatographic-mass spectrometric analysis and detection of anabolic steroids in human urines and a metabolic study /lYaoxue Xuebao -1991. Vol.26. P. 598-605.

169. Zhang J., Liu C., Zhang Y., Zhang C., Ye L., and Zhou T. Gas chromatogra-phy-mass spectrometric analysis of anabolic steroids in human urine //Clin. Chem. Lett. -1990.- Vol.1, P. 143-146.

170. Zhang J., Liu C.S., and Zhou Т.Н. Gas chromatography mass spectrometric analysis of boldenone urine metabolites in man IIYaoxue Xuebao -1991.-Vol.26, P. 362-366.

171. Arafat E.S.S., Ceesay K., Smith J., and Elsohly M.A. GC-MS analysis of anabolic steroids in human urine HJ. Miss. Acad. Sci. -1990.- Vol.35. P. 11-14.

172. Cartoni G.P., Ciardi M., Giarrusso A., and Rosuti F. Capillary GC-MS investigation of the metabolism of formyldienolone in man. HJ High. Resolut. Chromatogr. -1991.- Vol.14. P. 838-842.

173. Goudreault D., Masse R. I I J. Steroid Biochem. and Mol. Biol.- 1991.-Vol.3 8, № 5,-P.639-655.

174. Durbeck H.W., Buker I. /1 Advances Steroid Analysis'90 /Proc. Symp. Analysis Steroids. Pecs, Apr. 24-26, 1990. -Budapest 1991. - P. 347-354.

175. Durbeck H.W., Buker I. Metabolism of 17t-methyltestosterone in male human adults. Adv. Steroid Anal. '90: Proc. Symp. Anal, steroids, Pecs. Apr.24-26 1990. Budapest -1991.- P. 347-354.

176. Schoene C., Nedderman A.N.K. Houghton preliminary study of the metabolism of 17a-methyltestoserone in hors utilizing gas chromatography -mass spectrometry techniques ПAnalyst (Cambridge) -1994.- Vol.119. P. 25372542.

177. Masse R., Goudrealt D. Studies on anabolic steroids 11. 18-hydroxylated metabolites of testosterone, methenolone, and stenbolone: new steroids isolatedfrom human urine HJ. Steroid Biochem. Mol. Biol. -1992. Vol. 42. № 3-4, 399410.

178. Zhang J., Liu C., Zhou T. Analysis of metabolites of the contraceptive norethisterone in urine by GC-MS HCaodeng Xuexiao Huaxue Xuelao -1993.-Vol.14. P. 184-186. C.A. -1993.- Vol. 118, 205356x.

179. Suess S., Boll E., Holsboer F. Urinary multisteroid analysis applying glass-capillary gas chromatography a new technique to assess adrenocortical activity in depression. IIPharmacopsychiatry -1986.- Vol.25. P.255-260.

180. Ludwig-Koehn H., Hening H.V. Some aspects of quantification of neutral steroid metabolites in body fluids of healthy and uremic subjects by capillary gas chromatography //J. High Resolution Chromatogr. Chromatogr. Commun. 1986.- Vol.9. P.35-38.

181. Sye Wen Fa, Cheng Chia Tsung. A study of the human urinary steroid metabolic profile using a DB-1 fused silica capillary column IIJ. Clin Chem. Soc. (Taipei) -1985.- Vol.32. P.59-64.

182. Lekic M., Sober M., Buruncevic E. Determination of testosterone and its metabolites in urine by gas chromatography-mass spectrometry HVestn. Slov. Kern. Dues. -1986.- Vol.33 P. 245-249.

183. Masse R., Laliber C., Tremblay L., Dugal R. Gas chromatographic/mass spectrometry analysis of 19-nortestosterona urinary metabolites in man IIBiomed. Mass. Spectrom -1985.- Vol.12. P.l 15-121.

184. Орлов Е.Н., Антипов Е.М. Применение хроматографа JIXM-80 для анализа стероидов мочи // Медицинская техника -1995.- №5, С. 38-39.

185. Вайсбергер А., Проскауэр Э., Риддик Дж., Тупс Э. /УОрганические растворители./Под ред. Я.М. Варшавского: Пер. с англ.-М., 1958 -С.285.

186. Резников А.Г. Метод определения гормонов. Справочное пособие. Киев «Наукова думка» 1980.

187. Shackleton C.H.L., Honour J.W. Simultaneous estimation of urinary steroids by semi automated gas chromatography. Investigation of neo-natal infants and children with abnormal steroid synthesis. // Clin. Chim. Acta 1976.- Vol. 69. P.267.

188. Leunissen WJ.J. Quantitative aspects of the determination of steroid profiles from urine by capillary gas chromatography Автореф. дис. PHD 1979.

189. Acevedo H.F., Campiell Е.А., Hayeslip D.W. et all. Urinary cholesterol. IV. Its excretion in women with neoplasms of the genital system. HObstet. Gyn-1971.-Vol.37, N 3,-p.425-436

190. Waard F.de, Thyssen J.H.H., Veeman W., Sander P.C. Steroid hormone excretion pattern in women with endometrical carcinoma 11 Cancer 1968, Vol.22, N 5, P.988-993.

191. Mehta A.E.,Matwijiw I.,Taylor P.J. Salamon E.A.,Kredentser J.V., Faiman C. Should androgen levels be measured in hirsute women with normal menstrual cycles?//Int. J.Fertil-1992. Vol. 37, N 6. -P. 354-357.

192. Obermann H., Spiteller G., Hoyer G-A. Struktur eines aus Menschenharn isolierten С -Terpenoids-2-Hydroxy-15-oxoatra-19ctylan-4a-carbonsaure. HChem.Ber-1973.-Bd. 106, N 11. -S. 3506-3518.

193. Lobo R.A., Paul W.L., Coebelsmann U. Dehydroepiandrosterone sulfate as an indicator of adrenal androgens function. //Obstet. Gynecol. 1981.-Vol. 57, N1,-P. 69-73.

194. Nowaczynski W., Fragachan F.,Silah J. Millette В., Genest J. Further avidence of altered adrenocortical function in hypertension. Dehydroepiandrosterone excretion rate HCan.J.Biochem.- 1968. -Vol. 46, N 9. -P. 1031-1038.

195. Jacobs H.S.//ЛEndocrinol.Invest. 1988. -Vol.11, (Suppl.l) -P. 1.

196. Орлов E.H., Николаев H.H., Макаров O.B., Антипов Е.М. Репродуктивная функция в супружеской паре. Тез. докл. Екатеринбург, 1994. Стр. 113.

197. Долмагамбетов А.А., Орлов Е.Н. Патогенетически обоснованная терапия гирсутизма препаратом ДИАНЕ-35. //Тезисы научно практической конференции молодых ученых и врачей. 30 октября -1996.- Schering. стр. 9.

198. Wilson J.D., Griffin J.E., Russell D.W. Steroid 5a-reductase 2 deficiency //Endocrine Rev. -1993.- Vol.14. N 5. P.577-593.

199. Чмож Л.А., Орлов Е.Н., Николаев Н.Н., Макаров О.В., Антипов Е.М. Повышение активности 5а-редуктазы печени у женщин с наличием гирсутизма и угрозой прерывания беременности //Репродуктивная функция в супружеской паре г. Екатеринбург. 1994.- стр. 113

200. Stewart P.M., Edwards C.R.W. 5a-reductase and polycystic о\ъг\Ы/Lancet -Ibid.-1990. -Vol. 335, N 8700. P. 1277-1278

201. Serafani P., Lobo A.R. Increased 5a-reductase activity in idiopathic hirsutism IIFert. SteriL- 1985. Vol. 43. P. 74-78.

202. Giagulli V.A., Giorgino R., Vermeulen A. Is plasma 5a-androstane 3t,17-diol glucoronide a biochemical marker of hirsutism women ? //J.Steroid Biochem andMol Biol.-1991 Vol.39, N 1. P.55-61

203. Stewart P.M., Edwards C.R.W. 5a-reductase and polycystic ovaries//Lancet -Ibid.-1990. -Vol. 335, N 8700. P. 1277-1278

204. Chayen R., Laurian L., E.Kisch., Goldberg S., Hoerer E., Stern N. 5a-reductase and polycystic ovaries. //Lancet 1990.-Vol.335,N 8700. -P. 1277-1278.

205. Rosenfield R.L. 5a-reductase and polycystic ovaries. //Lancet 1990. -Vol.335, N8700.P. 1277-1278-195318. van Seters A.P., Moolenaar A.J., Dorksen J. 5a-reductase and polycystic ovaries I/Lancet -I990.-Vol. 335, N 8700, -P. 1277-1278.

206. Montoneri C., Pedalino F., Chillemi R., Sciuto S. Urinary steroid profiles in gestosis syndrome //Eur. J. Obstet. Gynnecol. Reprod. Biol., 1986, Vol. 21, P. 151-157.

207. Орлов E.H., Долмагамбетов A.A., Макаров O.B. Некоторые особенности метаболизма стероидов при ОПГ-гестозах. // Тезисы докладов. Проблемы ОПГ-гестозов. Чебоксары 15-17 октября -1996.- стр. 69.

208. Орлов Е.Н., Подтетенев А.Д., Николаев Н.Н. Применение стероидных профилей мочи для оценки эффективности терапии гормональной недостаточности плаценты //Клиническая лабораторная диагностика -1998 г. Том. 8, Стр. 45.