Особенности состояния воды в биополимерах тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.04 ВАК РФ

На правах рукописи

РГб од

1 6 MAP 1ЯРЯ

Грунина Нагима Газизовна

ОСОБЕННОСТИ СОСТОЯНИЯ воды в БИОПОЛИМЕРАХ

Специальность 02.00.04 - физическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Йошкар - Ола 1998

Работа выполнена на кафедре физики Марийского государственного технического университета

I

Научный руководитель: доктор сельскохозяйсвенных наук,

профессор Н.В. Кречетова

Официальные оппоненты : доктор химических наук,

профессор В.И. Ившин

доктор химических наук, профессор В.И. Скоморохов

Ведущая организация: Институт физической химии РАН, г. Москва

Защита состоится марта 1998г. в ¿0 часов на заседании

диссертационного совета К 064.30.01 в Марийском государственном техническом университете по адресу: Марий Эл, г. Йошкар-Ола, пл. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Марийского государственного технического университета.

Автореферат разослан_

±0 февраля 1998г. Ученый секретарь диссертационного

совета, кандидат химических наук (\ /// М.Е. Гордеев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Биополимеры наряду с водой являются основными компонентами животных и растительных клеток. Изучение взаимодействия биополимеров с водой является важным научным направлением, имеющим широкий практический выход.

Это относится и к целлюлозе, входящей в структуру {снеточных стенок растений. Она является самым распространенным высокомолекулярным соедиенением и незаменимым сырьем технического и бытового назначения.

Не менее актуально изучение состояния воды в растительной клетке, где она по-разному связывается с белками, крахмалом, является растворителем низкомолекулярных соединений, обеспечивает транспорт ионов и атмосферных газов, представляет собой среду для протекания биохимических реакций, поддерживает конформашпо всех функционирующих клеточных структур.

В этой связи особенно интересно изучение состояния воды б таких живых объектах с малой влажностью, какими являются семяна растений. Уникальность этого организма придает ему важнейшее значение в жизни человека. Семяна сохраняют на Земле видовое разнообразие растений, без них невозможно воспроизводство и размножение растений.

Живой объект, в котором постоянно происходит обмен между его веществом и веществом среды, требует для своего исследования особого метода, который обладал бы малым возмущающим действием, гарантировал бы сохранность образца в процессе измерения, был бы чувствителен к тонким взаимодействиям и движениям на атомно-молекуяярном уровне. К таким методам можно отнести метод импульсного ЯМР.

Работа направлена на дальнейшее развитие научного направления, разработанного на кафедре физики МарГТУ "ЯМР релаксация в физико-химии водосодержащих целлюлозных систем".

Целью работы является исследование состояния воды в целлюлозе и изучение состояния воды в семянах сосны на различных этапах их жизнедеятельности.

Исходя из вышеизложенного в работе решались следующие задачи :

1. Определение содержания в целлюлозе жестко связанной воды;

2. Разработка метода определения термодинамических характе-ристик связанной воды;

3. Изучение состояния воды в воздушно-сухих семянах и набухающих семянах сосны по их спектрам ЯМР.

4. Изучение динамики водного режима семян сосны при прорастании в зависимости от :

- температурных воздействий,

- способа активации воды,

- срока хранения семян,

- способа извлечения семян из шишек.

Научная новизна работы. Впервые расчитано влагосодержание жесткс связанной воды, релаксирующей в короткой компоненте спада свободной индукции (ССН) сигнала протонного ЯМР. Показана возможность определение термодинамических характеристик связанной воды с помощью ЯМ1 релаксации в Фурье-спекгре длинной компоненты ССИ ЯМР обнаруженс несколько фракций связанной воды в воздушно-сухих и набухающих семянах Установлена зависимость между характеристиками ЯМР-релаксации 1 процессами жизнедеятельности семян. Обнаружено влияние способа активацш воды на ее биологическую активность.

Практическая значимость работы. Разработанные методики определения состояния воды в биополимерах и вскрытые с их помощью закономерности поведения системы "биополимер - вода" могут быть рекомендованы для внедрения в практику НИИ и учебных институтов.

Результаты проведенных исследований по активации процессов прорастания с помощью переменных электрических полей могут быть рекомендованы для практического внедрения предприятиям лесного хозяйства.

Разработанные методы внедрены в пракику НИР МарГТУ.

Апробации работы. Результаты исследований по теме диссертации докладывались и обсуждались на : Республиканской научно-практической конференции "Проблемы леса и охраны природы в республике Марий Эл" (Йошкар-Ола 1992); Всероссийском совещании "Физико-химические методы исследования структуры и динамики молекулярных систем" (Йошкар-Ола 1994); Всероссийском семинаре "Структура и динамика полимерных систем" (Йошкар-Ола 1995); Третьей Всероссийской конференции "Структура и динамика молекулярных систем" (Йошкар-Ола 1996); "Вавиловских чтениях" (Йошкар-Ола 1996, 1997), ежегодных конференциях по итогам НИР за 19701997 годы.

Публикации. По теме диссертации опубликовано пятнадцать работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, трех глав, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 130 страницах машинопосяого текста и включает в себя 8 таблиц, 40 рисунков. Список использованной литературы состоит из 120 наименований.

Во введении обосновывается актуальность темы, формулир-уются цели и задачи исследования.

Первая глава посвящена обзору существующих теоретических и экспериментальных представлений о структуре воды, р ее состоянии в биополимерах.

Во второй главе приведены характеристики объектов исследования, дано описание методик определения ЯМР релаксационных характеристик, даегся краткое описание аппаратурного комплекса, используемого в этой работе.

В третьей главе представлены экспериментальные данные и их обсуждение.

Работа оканчивается заключением с общими выводами.

Объекты и методы исследовании. В качестве объекта исследования использовались : хлопковая целлюлоза ГОСТ 595-79 (содержание а -целлюлозы 99.7%, степень кристалличности СК-0.72); семяна сосны вида Ртиз 8Иуех1г1я Ь. с деревьев различного возраста, произрастающих на одинаковом типе почвы при одинаковых климатических условиях.

В работе использовались следующие методы исследования : Импульсный метод ЯМР, снятие изотерм сорбции и десорбции, аппарат Якобсона для проращивания семян, установка для высокочастотного диэлектрического нагрева (частота 4.5 МГц, мощность 500 Вт), магнитная мешалка ММ-5 (максимальная амплитуда 30 мТл при частоте 30-33 Гц). Исследования проводились на двух ЯМР - релаксометрах с частотами 20 и 42 МГц с применением многоимпульсных методик для измерения времен спин-спиновой Тг и спин-решеточной Т; релаксации, быстрого преобразования Фурье ССИ дш получения частотного разрешения спектров.

КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Определение содержания связанной и жестко связанной воды в целлюлозе. Определение термодинамических характеристик воды, связанной с

цетюлозой

Анализ экспериментальных данных показал, что релаксационная функция ф(т) временного спада ядерной намагниченности системы целлюлоза-вода описывается выражением :

<P<J) = Pa -exp[-(yf-)2 ]+ pb -ехр[-уН (1)

'la * 2b

где Ра и Рь - населенности фаз "а" и "Ь".

Между фазами, "а" (протоны прочно связанной воды и протоны клетчатки) и "Ь" (протоны менее связанной воды) осуществляется медленный обмен, так что эти компоненты легко разделяются.

Для определения содержания прочно связанной воды тьа, протоны которой вносят вклад в амплитуду короткой компоненты ССИ было получено следуещее выражение :

А 2

-4— т ¿-0.55 т

П л

т Ь = —-0,4 5 • '--(2)

где ампшппуда короткой компоненты, .4?, ml - амплитуда и масса эталона, соответственно; т - масса образца т =тц+ т", тц • масса целлюлозы. Показано, что отношение части амплитуды короткой компоненты пропорциональной числу протонов прочно связянной воды к полной ее амплитуде А®, определяется выражением

Информация о количестве наиболее прочно связанной воды представляет значительный интерес при изучении параметров микроструктуры образца, его сорбционных характеристик в условиях различной влажности и температуры.

На основе теории ЯМР в мультифазных системах были получены соотношения, позволяющие определить содержание гидратно-сорбированной активными центрами клетчатки воды и>т при условии быстрого обмена:

где Т2т - время релаксации гидратной воды в первом слое с влагосодержанием н'ш, Т2 - время релаксации воды при влагосодержании ж

Известно, что при малых влагосодержаниях системы "клетчатка-вода" вполне приемлимо использование уравнения БЭТ для описания сорбционных процессов. Нами было получено модернизированное выражение для константы равновесия БЭТ :

где/- относительная влажность воздуха.

Учитывая связь с с энтропией и энтальпией для связанной воды, при снятии температурных зависимостей с были расчитаны термодинамические характеристики системы хлопковая целлюлоза - вода, которые представлены в Табл. 1

М>т =И'

т

(4)

(I-/)2_

Лу-(1 -/))

(5)

Таблица 1

Темпер- Констант Чистая Влагосод Время Энтропи Изохорно-

атура Т а равнов- теплота ад- ержание "оседлой яДй, изотермически

К есия С сорбции, монослоя жизни" Дж/моль й потенциал

кДм/моль И-щ, % молекулы воды, с кДж/моль

293 131 31.2 3.05 0.02(1 слой) 1.5*1040 слой) 20.8 21.84

313 73.7 29.7 2.93 - 22.9 7.77

383 49.4 29.4 2.51 - 47.1 -28.56

2. Анализ спектров ЯМР воздушно-сухих и набухающих семян сосны На рис.1 представлен спектр воздушно сухих семян (влажность 12.9%). Широкая линия с Т2 около 0.07 мс характеризует воду, относительно проч-но

связанную с полярными труппами белков, так как ее подвижность ограничена. Узкая

ое I-...............-"!.....-.....—...........1--------*—........—--------------- компонента с Т2 около

0.3 мс отражает .относительно слабо связанную запасным крахмалом воду.

Свободной воды в системе не

| | Н"-:.....-................-

1 1

1 ! ; ! \ !

-..........

-20

О 20

хим. сдвиг, м.д

40

Рис.1. Спектр ЯМР воздушно-сухих семян

наблюдается. В спектре представленном на рис. 2 - те же семяна после 7 часов замачивания (влажность 19-21%) - сужение линий говорит об увеличении

подвижности воды - Подвижность воды, связанной с белком увеличилась в 3 раза (ТУ= 0.21 мс). По-видимому, переход к данному состоянию белковых молекул связан с перекидыванием водяных мостиков между первичными центрами связывания воды, что приводит к обр-азованию вокруг молекулы белка сети из водных молекул,

-20 О

КИИ. СДВИГ, м.д

Рис.2. Спектр ЯМР семян после 7 часов набухания

связанных водородными связями. Линия относительно слабо связанной воды образовала дублет, что говорит о появлении новых фракций воды со средним Т2= 0.32 мс в каждой фазе.

В спектре на рис. 3 мы наблюдаем состояние воды в семянах, набухавших двое суток (влажность 45-50%). Здесь время релаксации Тг воды, связанной с белком измкеняется мало, видимо, продолжается процесс гидратации плотно упакованного запасного белка в белковых, телах. Зато узкая линия спектра указывает на возникновение четырех фракций воды

КИМ. сдвиг, м.д Рис.3. Спектр ЯМР семян на 2 сутки набухания

пространственно разобщенных вследствие того, что соответствующие протоны находятся в разных локальных полях. Времена релаксации, соответствующие этим фракциям : Т2(1)= 2.5 мс, 12(2/= 1.8 мс, Тг^ 1.35 мс и Т2(4)=105 мс. Воду первых двух фракций, связанную относительно слабо, можно отнести к межклеточной воде, а в фазах 3 и 4 - к сорбированной крахмалом и клетчаткой. Приведенные спектры демонстрируют динамику поступления и распределения воды при набухании.

3. Температурные воздействия на состояние воды в воздушно-сухих

семянах

Опыты проводились в трех модификациях:

- каждая партия семян выдерживалась при определенной температуре в течение 10 минут, одновременно измерялись релаксационные характеристики, семяна сразу же выкладывались на прорастание;

- релаксационные характеристики снимнлись через сутки после температурного воздействия, семена также выкладывались на прорастание. Интервал температур в указанных опытах 30-75 °С, влажность 12.9%.

- Образцы семян доводились до влажности 15% и выдерживалист в течение 12 часов при отрицательных температурах (от -2 до -27 °С). Спустя сутки измерялись релаксационные характеристики и семена выкладывались на прорастание.

Рисунки 4-9 иллюстрируют полученные результаты. На них приняты следующие обозначения: АБЬ - амплитуда длинной компоненты ССИ, АК -амплитуда короткой компоненты ССИ; Т1К, ТШ - времена спин-решеточной релаксации короткой и длинной компонент соответственно, а Т2К - время спин-спиновой релаксации кототкой компоненты,Т2Д-длинной.

температура, С

Рис.4. Кинетические зисимости времен Т1К и 'ГШ

30 <0 90

температура, С

«И

и л «1(4

Рис.5. Кинетические зисимости амплитуд компонент ССИ

М »0 50 Ю 70 температура, С

Рис.6. Зисимости времен Т1К и ТШ для семян, подвергнутых действию высоких температур

«ими

температура, С

Рис.7. Зисимости амплитуд компонент ССИ для семян, подвергнутых действию высоких температур

КЗ

но

и

£ к» р

■30 и

температура, С

Рис.8. Зисимости времен Т1К и ТШ для семян, подвергнутых действию низких температур

и

и

£ ! М

-о- ТМ ¡о ¡0

пш

тм щ 48.

-21 ■»

тешеркура, С

Рис.9. Зисимости амплитуд компонент ССИ для семян, подвергнутых действию низких температур

М»ЧМТД«¥ *

В процессе нагревания образцов (рис. 4) обнаруживается спад АЕ>Ь и АК, выходящий за изменения, установленные законом Кюри, что свидетельствует об удалении относительно слабо связанной воды в процессе нагревания (АОЬ) и удалении относительно прочно связанной воды, релаксирующей в короткой компоненте ССИ (АК), наиболее заметные изменения этих величин начинаются с 45 °С. Характер спада Т1К (рис. 5) свидетельствует о том, что релаксационный процесс в короткой компоненте характеризуется набором времен корреляции, так как наблюдаемый минимум этой зависимости приходится на широкий температурный интервал, это обусловлено набором разнородных активных центров адсорбции и гетерогенности данной фазы. Взрастание ТШ указывает на увеличение молекулярной подвижности относительно слабо связанной воды. Значения Т2К не меняются существенно, что говорит о малом влиянии этих температур на подвижность протонов твердой фазы и относительно прочно связанной воды.

На рис. 6 и 7 видно следующее. Всвязи с тем, что АК после обработки образцов уменьшилось, а Т1К увеличилось, то механизм сшш-решеточной релаксации в этом случае можно объяснить спиновой диффузией и дпполь-диполышм взаимодействием, характерным для твердотельных объектов.

Спад АК обусловлен тепловой десорбцией прочно связанной воды. Это указывает на то, что наименее активная вода удалилась из короткой компоненты и осталась наиболее активная. ТШ практически не изменилось, что указывает на стабильность структуры семени, Т2К также- не изменилось.

Более плавный характер изменения релаксационных характеристик на рис. 6,7 говорит о включении компенсаторного механизма клеток, восполняющего водопотери и влияние температурного стресса, согласно исследованиям, эти функции выполняют в клетке специальные белки теплового шока.

В результате низкотемпературных воздействий на увлажненные семена (рис. 8) АК уменьшилась за счет связанной воды, молекулы которой мигрировали в область льдовыделения в результате температурных градиентов и разности осмотических давлений в различных точках объема. АО уменьшилась, так как свободная вода и часть слабо связанной воды превратилась в лед. После оттаивания создались благоприятные условия для испарения свободной воды, полученной, изо льда, поэтому часть воды удалилась. Т1К (рис. 9) несколько увеличилось потому, что вода из короткой компоненты мигрировала в длинную, следовательно создались благоприятные условия дня релаксации по принципу спиновой диффузии. Показатели всхожести в двух опытах высокотемпературного стресса следующие. В первом опыте наибольшая всхожесть (94%), наибольшая длина проростков и наибольшее число проростков с наибольшей длиной - при 30° С. Интенсивное прорастание наблюдалось на 5-й день. Всхожесть уменьшается к концу интервала температур до 80%, интенсивное прорастание после нагревания семян свыше 35 0 С наблюдается на 7-й день. Во втором опыте максимальная всхожесть (80%) при температуре обработки 35 0 С и выше уменьшается к концу интервала температур до 47%. Длина проростков значительно меньше, сравнительно с первым опытом, интенсивное прорастание - на 5 день.

Воздействие холода заметно увеличивает длину проростков, по сравнению с действием температур 35 0 С и выше, всхожесть равна 94-98%. Контрольная группа семян дала всхожесть 90%, интенсивное прорастание на 7 день и малую длину проростков.

На основании этих данных, можно сделать вывод, что кратковременные высокотемпературные воздействия, хотя и угнетают процессы метаболизма, но не губительны для жизнедеятельности семян. Действие низких температур в рассмотренных опытах - благоприятно. Особенно интересно постоянство Т2К

во время всех температурных воздействий. Очевидно, что комплекс протонов биополимеров и прочно связанной воды не меняет своей подвижности, функции этих структур не нарушаются, по-видимому, защитные структуры гемени блокируют нежелательные воздействия на комплекс ДНК-белок -носителя генетической информации.

4. Изучение водного режима семян сосны при прорастании в зависимости от способа активации воды, срока хранения семян и от способа

их обработки

В работе было рассмотрено влияние активации воды на прорастание :емян (исходная влажность - 11%). Использовались следующие типы активированной воды : талая, омагниченная. Активация воды возобновлялась каждые сутки. Для обеспечения корректности эксперимента, опыты проводились и на контрольной партии семян, не подвергавшейся обработке.

Обнаруженное нами возрастание Т2К для молодых семян при набухании и его незначительное изменение для старых семян для воды всех типов, показывает, что комплекс "прочно связанная вода - биополимер" более лабилен у молодых ссмян. У более старых семян для воды всех типов более существенно возрастание ТШ и Т2Б, то есть у них наблюдается большая лодвижность относительно свободной воды. Действие активации воды на ;емяна с точки зрения увеличения подвижности (по данным ЯМР-жсперкмента) происходило в следующем порядке. Наиболее сильное -^магниченной воды, затем талой смагниченной и галой. Показатели всхожести «дут по убыванию в следующем порядке активации воды : талая, талая змагниченная, не активированная и омагниченная. Самые большая всхожесть -у молодых семян. Опыт показал, что омагничивание воды примененным способом ингибирует процессы метаболизма. Наиболее биологически активной

оказалась талая вода, в которой происходит естественное набухание семян сосны. ^

Анализ зависимости ТШ и Т1К от срока хранения семян показывает уменьшение этих величин с возрастом хранения, что говорит об общем замедлении молекулярных взаимодействий протонов твердой фазы и прочно связанной воды с решеткой и уменьшении подвижности относительно свободных молекул воды. Т2К не зависит от срока хранения.

При анализе зависимости всхожести семян от способа их извлечения из шишек было обнаружено, что семеиа, извлеченные с помощью переменного электрического поля увеличивают всхожесть (95%) по сравнению с семенами, извлеченными конвекционным способом (85%). Это происходят потому, что в результате возникающего градиента температуры и влажности при первом способе ускоряется транспорт воды и растворенных в ней веществ к зародышу семени.

ВЫВОДЫ

1. На основе теории ЯМР-релаксации в мультифазных системах и теории сорбции в капиллярно-пористых телах, разработаны методы определения содержания связанной и жеско связанной с волокнами клетчатки воды.

2. С помощью ЯМР-релаксащш разработан способ определения термодинамических параметров воды в клетчатке. .

3. При применении ЯМР Фурье-спектроскопии установлено наличие двух фаз связанной воды в воздушно сухих семянах сосны. В набухающих семянах установлено наличие пяти фракций различным способом связанной воды.

4. Установлено, что высокотемпературные (до 75 °С) воздействия на воздушно-сухие семена, хотя и угнетают процессы метаболизма при

прорастании, но не губительны для жизнедеятельности. Действие низких температур (до -27 °С) в рассмотренных опытах - благоприятно.

5. Показано, что наиболее выраженными биологически-активными свойствами обладает талая вода, а наименьшими - омагниченная, и это воздействие сильнее проявляется в семенах сосны с молодых деревьев.

6. Молекулярная подвижность связанной воды с увеличением срока хранения семян уменьшается, что связано с частичным ее испарением и перераспределением воды в клетках.

7. Извлечение семян из шишек конвекционным способом угнетает их жизнедеятельность. Альтернативный способ с помощью неременного электрического поля увеличивает показатели всхожести. Это позволяет рекомендовать предложенный способ для внедрения в практику предприятий лесного хозяйства.

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих работах:

1. Грунина Н.Г., Грунин Ю.Б. Спектрометр спинового эха // сб. Тезисы докладов научно-технической конф. НИР,- Йошкар-Ола, МПИ, 1970.- с22.

2. Грунина Н.Г., Рябков A.B., Грунин Ю.Б. Изучение взаимодействия связанной воды с волокнами целлюлозы методом ядерной магнитной релаксации // сб. Материалы научной конференции по итогам НИР за 1973г.- Йошкар-Ола, МПИ, 1974.-c.25.

3. Грунина Н.Г. Исследование развития удельной поверхности сульфатной целлюлозы в процессе ее размола методом импульсного ЯМР // сб. Материалы научной конференции по итогам НИР за 1973г.- Йошкар-Ола, МПИ, 1974.-c.27.

4. Грунина Н.Г. ,Кожинова Г.Ю., Кузнецова А.А., Грунин Ю.Б. Релаксомстр спинового эха П сб. Материалы научной конференции по итогам НИР за 1974г.-Йошкар-Ола, МПИ, 1975.-С.99-100.

5. Грунина Н.Г., Грунин Ю.Б. Возможности импульсного метода ЯМР I определении параметров системы биополимер-вода // Химия древесины.-1990 №1.~с.102-104. '

6. Грунина К.Г. .Кречетова Н,В. Исследование водного режима семян соснь обыкновенной при прорастании методом ЯМР // сб. Проблемы леса и охрань природы в республике Марий Эл: Материалы республиканской научно практической конференции.-Йошкар-Ола, 1992.-0.33-34.

7. Грунина Н.Г., Кречетова Н.В. Извлечение семян из шишек сосш обыкновенной переменным электрическим полем и его влияние на прорастани семяй // Межвузовский сб. Физико-химические методы анализа вещества Йошкар-Ола, 1994.-С.98-101.

8. Грунина Н.Г., Кречетова Н.В. Определение термодинамических параметро связанной воды в семянах сосны обыкновенной методом ядерной магнитно релаксации // сб. Физико-химические методы исследования структуры динамики молекулярных систем: Материалы Всероссийского совещания Йошкар-Ола1994 .-с. 156-158.

9. Грунина Н.Г., Карасева М.А. Оценка эффективности влият микроэлементов на процессы прорастания семян хвойных пород методом ЯМ

// сб. Физико-химические методы исследования структуры и динамики [ молекулярных систем: Материалы Всероссийского совещания,- Йошкар-Ола1994.-с. 168-170.

10. Грунина Н.Г., Кречетова Н.В. Применение микроэлементов при выращивании сеянцев сосны обыкновенной // сб. Восстановление, выращиваение и комплексное использование лесов России.-тезисы докладов Всероссийской научно-технической конференции.-Йошкар-Ола, 1995.-е.60-61.

11. Грунина Н.Г., Кречетова Н.В. Влияние температуры воздуха на процессы жизнедеятельности семян сосны обыкновенной в условиях Поволжья // сб. Восстановление, выращиваение и комплексное использование лесов России,-тезисы докладов Всероссийской научно-технической конференции.-Йошкар-Ола, 1995.-С.52-53. ■

12. Грунина Н.Г., Кречетова Н.В. Влияние температуры воздуха на семяна и прирост сосны обыкновенной в условиях Поволжья // сб. Структура и динамика полимерных систем.- Материалы Всероссийского совещания, ч.З.- Йошкар-Ола,

1995.- с.97-99.

13. Грунина Н.Г., Кречетова Н.Ф., Карасева М.А.-0 молекулярном смешении системы "целлюлоза-вода" // сб. Структура и динамика полимерных систем,-Материалы 3 Всероссийской конференции, ч.4,- Йошкар-Ола-Казань-Москва,

1996,- с.60-63.

14. Грунина Н.Г. Метод ЯМР-релаксации в биологических системах // сб. Вавиловские чтения,- Йошкар-Ола, 1996.-c.478.

15. Грунина Н.Г. Состояние воды, связанной с волокнами целлюлозы // сб. Вторые Вавиловские чтения.-Йошкар-Ола, 1997.-c.123. (

ПЛД № 2018 от 05.10.94 Усл.печ.л. 1,3. Тираж 100 экз. Заказ № 6919.

ООП МарГТУ. 424006 Йошкар-Ола, ул. Панфилова, 17