Особенности субстратной специфичности и чувствительности к ингибиторам эстераз вредных насекомых тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ
|
Тилябаев, Заитжон
АВТОР
|
||||
|
доктора биологических наук
УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ
|
||||
|
Ташкент
МЕСТО ЗАЩИТЫ
|
||||
|
1998
ГОД ЗАЩИТЫ
|
|
02.00.10
КОД ВАК РФ
|
||
|
|
||||
АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН
ИНСТИТУТ БИООРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ им. АКАДЕМИКА А. С. САДЫКОВА
мв ОД
? 'I
На правах рукописи
ТИЛЯБАЕВ Заитжон
УДК 577.15:632.7
ОСОБЕННОСТИ СУБСТРАТНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К И Н Г Иг 1ТОРАМ ЭСТЕРЛЗ ВРЕДНЫХ НАСЕКОМЫХ
02.00.10 — Биоорганическая химия, химия природных и физиологически активных веществ
АВТОР ЕФ ЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
Ташкент — 1998
Работа выполнена в Институте биоорганической химии им. академика А. С. Садыкова Академии наук Республики Узбекистан.
Официальные оппоненты:
Чл.-корр. АН РУ, доктор биологических наук, профессор Т. А. СОАТОВ
Доктор биологических наук, профессор А. А. АХУНОВ Доктор биологических наук, профессор Ш. К- КАСЫМОВ
Ведущая организация:
Ташкентский Государственный университет
Защита состоится «_¿_»„_zffi_.1998 г.
Р, ее
в «_*L_» час на заседании специализированного совета
Д. 015.21.01 при Институте биоорганической химии им. академика А. С. Садыкова АН Республики Узбекистан по адресу: 700143 г. Ташкент, пр. X. Абдуллаева 83, тел.: (371) 1623540, Fax: (371) 1627071.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института.
Автореферат разослан « ^ »_--1998 г.
Ученый секретарь _..
Специализированного совета —■ ,
доктор химических наук, профессорч^^?^/^'\7 Н. И. БАРАМ
ОБЩАЯ ХЛТ'ЛКТРПШИКЛ РЛЯ01М
Постановил проблени, еэ актуальность. Мир :iac.s>:-.\к.: отличается беоконечвкч psuiccffpaairm и играет Ссльатю рс-ль в т:г *-Г"->\- i деятель ноет:! челсвекг.. Мзшйгахьяо? пепедъзоягк:;? ?-э.ч рэгл; полезные ot-onoTS аас?кс».?.к и рзшэначькая С-срьба с т?р>*дчк:л: лид-лп; составляет одну яг существенных ?алзч согрек-шгой наук;;. Бллллзл часть представителей этого класса /шюгного мкрэ является лр-лигглл-j.fsr седьсклл:о?лпстнекны;: культур. позтему прс'лене Реллггы г"от-: химики. бяоасти. энтомологи и груш? спеш;.г-л::с;ты улел~лл внимание.
Сс-едзнне и 'лнроксе исполлговгнпе в оелъоксхсопйгтвенл: л лрьк-тике ртутьг ргзт.г;ктах, кгсрорган'гческлк н лрупу: пелглипл-г. .^тглл-Еыджгдуплл реи» в развитии зэапты растений, дз.тз сгрсшшЛ гчгкгш;-ческий гыигр,-«1 л кригеяс- г. ¡лчо'-'ьте.лг-к-му росту шревогг пр:пгегсгт*и предсвслютг-лл л o.-:pin для прсишекнссти. После 5ти;< раетк-.-::: успехов кагалсо. что прс^ля/а контроля численгтоти Ередк'-г, ллселл.лг уже решена. По мера того кгн У вредителей РкрзСзтдаглэот устойчивость к np;'!i'?«.ww инсектглуллам, длл достдоешя зфЗикта текгпчнссти стали печчдпетъ догн преплрзтев, что привело к их накопяс-иот в invz-фер? и, кзк. следствие, к ухудшении геологической оСетзиовчи ел мил -гнх ргги:нлл лят^нсиввог:? гемтадемня.
Хк,'¡г гее кий метод. ганимн^т лгллруюлее место е спстеп= ooithik раотеикй. К кр«кэрзгам с -маг-й пли умеренной аерскоггитясс:дю относятся й первую очередь органические соединения фооферо. и ¡!рлло,;г д-кые корОампксеон кислоты. Неодолимость углубления игучечгл мелочи?-мор TOKcnr-iwr-» действия ппсектицицсЕ и с'лодлние нз этей отлове избирательных л з^е'стпЕннл кйс?ктиЦ1'ДОВ пролив л-ке:-:й'гулрчч:»г' вредителей обеспечит в Судуцем бееезгено? ил применение Геу кгяк-лиСс отр;:дл~!:-л:-нчл последствий для здоровья человс-кэ г. с кружок?;:;,-л среды.
Место); деистЕпя большинства инсектицид"; яеляются <|*р.гнтп!: системы, кстсгда обеспечив кот нермз.глкое протекание вссл гтэтор рог-впткл, рсстл г рлЕ'.'чл?ен;!л гр-едитгл^й. Сйедг>взтельно, Еогмсля^оть пеленало золейл:~о нлиянея на регуляторнне процессы организм? косоко-мьгх с?г"г»я:л: лкс'< элг-ностх: исследований фермент - дигзндкил ереп.г-дойсопй н л л тор "с к ссгдонш. а тзкке прогнозированию структур будущих пнееклггклдль.
- 4 -
? ! с::««« этой проблемы на современном этапе большое значение п:г:сл:-дованпе субстратной специфичности и чувствительности к :з!Г1Лгм;.&ч. ъ частности, холинзстераа • (,ХЭ) и кзрбэксилзотераа Л«':, т.к. .43 являются общепризнанной биологической ышвеныо, на ко-пр'/с ь&лгко иигибврующ&е действие фосфорорганическнх и карба-• п.-'сектпцидсь, & КЕЗ и ряд неспецпфпческих эстераэ-участвуют в
!¡с 1 ^л'лч^-'кпх превргценяях ксенобиотиков, в том числе и пестицидов. К.г;<к. вис- каталитических свойств зстераз, по-видимому, может слу-Ч1П1 п; лчпноп иаСирательной токсичности ннсектнцздов по отношению к нп ь'яекзпитающим.
в о&аэд с этиы, получение научно обоонованник сведений относится! ко рацконазьнего подхода к изысканию инсектицидов против "вредн-телей хлопчатника, осноззнногс на изучении каталитических свойств эттера:?' членистоногих при их взаимодействии с субстратами и ингиби-' тсрамл пс-злужнло основанием для выполнения данной работы.
Диосертещюнная работа представляет собой часть фундаментальный ис.слгдг.вшпш, проводимых в лаборатории тонкого органического синтеза 41ш;:е:;:.гпческн активны:: соединении-.в соответствии с задание!,! ГКНТ РУ ъ р£?.;кчл программы 5Ф по теые: 2.29,03 "Синтез синергистов к ле-ктрстнг'лкки препарата,), инсекто-акарицндаы й исследование их иеха-•ы&,\;а действия1'. Номер гссрегиотрацип 01.940003706.
Ц;ш. исследования: поиск элективных инсектицидов против совок, *.; саранчи на основе установления спектра зстераз, их локали-;г-.;;!!л е с?/,--чигие эти;-: вредителей, включающий изучение топографии г'мг'.л'.'гпческсго центре. эст&раэ членютонсгих и позвоночных методом страт кс- пигибитсрного анализа.
Для достижения поставленной цели являются:
- ьзектпфшсацпл эстераэ на основе широкого исследования ■у(, -тр-.тний специфичности и чувствительности к ингибиторам различной ■■;';■:: :-:•■■-;-.ой структуры;
- установление локзлнвации и динамики активности эстераэ в про-.'-.•••ч с.чттенетич-окого равнития (совск);
"п; еделенке влияния температурного фактора л рН на ферыента-7.1дЛЫг 'ь.йстЕа остерза;
- ьчхьлгкие взаимосвязи активности зстераз ст структурных осо-> -лшг.стсб иссолъвованных субстратов и ингибиторов;
- иэ соноиэтш сустратво - ¡шгкбитсрного анаг.ява установление .-.сдгчнй о тс!Ьгр;гфш: экпгеншг цеитроэ эстерав;
- -Б -
- оценка ?гМект1гансот1! вазбоя»4 активных ингибиторов п субстратов: '
- определение езксномзрнссгвй, • свагыгавиих. строение соедкнелгй со степгкья кг. .ятюогграгнегэ, тснекчеоего и епкорпздскзго д-йстэич. . .
»сиизич а тячултдасгои» зиуявкит.____ Еперзн* • лрг<~
зедеяс с'лстёмлтпч.ег'хос >й.-:л?дг6зВ1!? ферментов эст&рагксго каялзкез у тзккх врегштел-п кзк сй-ранчч; .' ргпкэл легка, :тЯая наггмн'зя ссака, ' паутин'луп пнерлгзкекгш таракан. Ксподьёуя нз5ср слецп1лг1ес!:пл
субстрзтсх? к •инпйатсров у члешкгтекегк;-:, •узтазоеленэ прасутстик? двух тиясе ХЭ и К£Э у ссЕск,->Э и'КВЭ у езргл'-и тгрзкгяз.
ВперЕн--- пачриСиэ йгуче-иы докалига^я, довяшжа акхаезссто и ки-кэтче-га;-? гггг>.!?гры-зстергг у. с зимой к мялеп лзгемней ссвс". Ллка-гано» ■ что в пронес-* снгегг-.ч-гтгаес'огс развитии совок зцетпллСли-нзетерега 'АХ?) лоуц^стЕ-йет с веч-фу.чкшю ткго в голсбксй чгсти, .тогда каг. бу^грллггллн-стерзгз (БуХЭ> и- КВЭ'г грузнем отдел* гредв-, телей. Згдрш? эти;-; |ерме:-пев дскагано с пешйп субзтрзтнс-ттгкС-г.• торнер шарага. ' ' .. .
• Епервш ссуц-?сгЕ *5Ко . сравнительное иослс-дсвзнле 'реекш;з!»н5й спссгбностп хэ п КЬЭ ' теплфрознчх п'.ч*€1шстоноп:х при их враш*з-дейст^ги с'кдбсрсч.яс&я тлсру'стрзтс-н а гес клелерзляк-:- значогев. Иауч?;т<?' ■ зядоетерзеных с?с-й~т£ тп'бптсрсг. . слс-сс^нщ с5пзтлу.с и несираи&'о сгяйгезпеа с эстс-разая:' (г 'ггшгшэсти от хлчиче-сжои структуру] ЕНЯВ1Ш! ос^спнсстл\ т?х учэг-гксв Ка?гСЙТ1П?СКвГ0 центра ' фер'кнтоз,. с кггзрк.ш.Е^жг^я-йгтзуш' зф$ектсру,
Изучали »-етаявтичгеив* .сгсйзхга ИЗ соезк и кеугяя егккьл при гирроляге гцогф'рез ззфэтпчеекпх- кербоновк: кнаяст.
■Ь'риг.вучеяпи ггвпг.;:мсст5; 'аатпг'стерзгкья огспств фос4срсргзни-ческих соглкнеигл (-ЮОУ от хкматесксй структ'/ры зьаг^енн сдезув-зше гакЬнсмзр!юсти: • .
• - вэлгапе окне госструктур- в состлав мото-г/лы фсс|срэргакп-чёсклх' - пнгйбитсрса. вигкЕзет всграстак;® их антгхолинэссерзгней &к~ • тявязсти, "-что снгггис с присутствием в эотрввс« ««нхре ХЭ .аякоя-' ного центра? ' .. • ■ " '
- сигёгаэ •гсЭдявенйя ке ингпСтфувт гни чвотэтея очень слабы?«! инпйатергмя КВЭ; что ло:>агкгз5Т отсутствие анионного центра у этих ферментов; . • - ' '•
- ' - увелгленне ;«г-га мс-тил-новы::- групп при атоме $сс|сра у '1РС
.сопровождается возрастанием их активности по отношенда к эстеразам, это возрастание строго определённо и BSBHCfir ['.от типа и- источника фермента . и доказывает Срисутетвие, -гидрофобных- участков' у - эстераз, протяженность которых отличается у '.ферментрз^нвотнькс . равных ' 'классов: ' -------------''•..'.:" ■ • -'•', '■ ■'--■ '• ./
- с объемными рздйкзлзмЕ в. ¿осфорильной чгюти ¿¡злее' специт фичны по отношению к' КБЭ, чем X3j / •' '.' '.... ' ' •'.•
- введение в отщепляемую часть'. 'ингибиторов- групп ; с кратными связями."зпс-зобствует возрастанию реакшшной способности ингибиторов' по -отнопеюю как к Х3,..гак к к' КЗВЭ." ■ Соединения с насыщенными -связями-такой способностью'не 'обладают?' . ' '-•'•;.'■ .'. -■,•'" ; - .'•■ •' .
- соединения с ацетиленовой группировкой в своей структуре .са-• мые вффектлвнке ингибиторы; эстераа";.,'.' J \ .
- - сочетание в' молекуле ЦОС ацетиленовой и.. ал(мсниевой •. группировок сопровождается. возрастанием' гагиЬвруюдезч: действия -по отношению к ХЭ исследованных животных,; ;•. . "': '■• '. "V'. . .'.
- более, высокой реакционной -споСс^йосяйи' пй'.;рйюй»шю '■ ?®3, чем хэ обладает 800 "со rtJyáiiofc;.'•"..•••' " ' ".-■.
Практичёоная значимость. Среди .¡зломных ■ з'фиров., сод*ркаа?1Х различные циклические ашониевие фрагменты, выявлены рещёрт.ва-, п'рдявг. ляющие высокие субстратные .свойства во стнэвени»' к БуХ& сыворотки крови аовади,' которые мсЦна применять длй адентификадад"..ЕуХ.Э;£:б.ир-: логических жидкостях. • • '- ..■' ■■--■ " ■••. " '" .- '"•.;-,-' ■ ;:..;-.„■• • ?
Предложена методика,определения активности КВЭ при noucags S-ал-гашбутиратов,. впервые синтезированных :я предложенных., ».качестве, aSi солютно специфических субстратов КВЭ,. «¿пользование которых сокращает количество реактивовфёрментнда пред^урв .и.время.- '
При иооледовании^чувотвительнооти ферментов к ФОС обнаружен ряд специфических ингибиторов'ХЭ и КБЭ, котаршэ'.рекомендайаки' в 'качестве синергиотов, ' повышай?« токсические :дё$1от®ня*' porapái. мбаурада", кар-бэфсса по отношений к паутинному кледу п дорсана по отношению к озимой совке. ' ,'_•; ■ .' ■'-ч ;'..■' ''! •■• '.';'• ;, .-.' .',
Апробация работы. Результаты проведенных исследовании докладывались и обо^даяис»!' '»а'•Й-"®'. .еюшозйуые^to химии природных-соединений (Рига, • 19S9 '-'«а,'фвфе^вдр? ■по биохимии клеточных мембран ( г. Бари, Италияi -1993 г. ) ,_нз Ме«ду-. народном, симпозиуме- 'Шзиолого-бирзсймические' основы -деятель'йсзсти мозга" (Санкт-Петербург, ,■ 1934 г.), щтогиуш.
/'.Химия растительных веществ V-(• Тайкент, 1934 г.), нз 3-ем Международном симпозиуме' по •биооргзнической кш<:пп (Дагомыс-,. 1995 г.), на 2-01.! Международное симпозиуме • по хишш природных соединении (Эокише-хпр, Турция, 1-&98' г.Ь'.'яа 14-ом и 15-см Менделеевских 'сггадах по общей и прикладной хи\ши (Ташкент,' 1939 г./ Минск, 1ЭЗЗ- г.), на Всесоюзном 00б92!энш1 "Химия,. применение а механизм действия инсектицидов и акарицидов" {Москва; "1390 г.); нз ■ Всесоюзной конференции " Токсикологические ■ проблемы ■ химических .катастроф" - ( Ленинград, 1991'г,), на Всесоюзной конференции "Химия и технология пиридинсо-. держзгох пестицидов" (Черноголовка, "1988 г.), нз всесовеяом семинаре "Химия фигиолсгнческл'активных соединений" (Черноголовка, 1539 г.)» нз' Всееог?ном «йпоайуме ."Физиология .медиаторов. Периферический сн-• нале' " (Казань,.' 1991 г'.),- . на Всессюгяой конференции "Фосфаты - 87" (Ташкент,-1997 г.), нз 4-ом Всессюном съезде $агйакозс.гэв (Ташкент, -1998 г.), на 1-сй, 2-ой и 3-еи конференция биохимиксЕ Узбекистана '(Ташкент,' 1986.' 1953',199бгг) ,на 5-ой-конференции биохимике в Средней Азда; и Кзгахсгзнз (Ташкент, 1931 г.),на 1-ой конференции биохимического сбс:-;-огва Тадлкйгст'ачз (Душанбе, 1993 г.на республиканском симпозиуме "Организм и среда" (Ташкент, 13ЭЕ г.), на республиканской .научно-технической конференции- ''Проблема ра?рз5стки химической технологии глторт.озаче'денной'продукции в Узбекистане. (Ташкент, 1935 г.),. на : Республиканской-конференции, "Защита- {ззетении и окручэювея среда" ' (Айдижан> 1995. г.:,. нз 2-йм Республиканском-научном коллоквиуме, организованном .ГлНТ и ВАК'РУ (Ташкент, 1997 г.)'.
. Публикации . По материалам: "диссертационной работы опубликовано в научных яурназах и сборниках- 36 статей, в матеркалак. сьездов, симпозиумов, конференций и совезднип- 19 тезисов научных докладов, а также 4 патента и 4 авторских свидетельства.
''"■'- Струи тур д и о5ы?м {»зботи. Диссертация'состоит' из введения,, анз-лиияеского обзора.литературы. с. обоснованием выбранного направления, экспериментальной части,.обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, описка использованной литературы и приложения.
... Диссертация .ивлояена на310 .страница:-: машинописного текста, содержит 35 •рисунков,.. 59 ¡таблиц'я библиография, состоящую иг 570 нзшеясваний. ' - - .
- • - В. процессе' выполнения цаетояг^ую' работу консуль тирс вали: академик АН--РУ Абдувахабов -А. А", '-и доктор хим. наук, профессор Далимов Д.Н, которым ззтор вура*ает свою признательность.
- é-
C О Д E V К А H И Е Р AEOÎU ■
Цдторяалц в нотодв ксолодоваиив. Объектами исследования 'служили
малая начинал сська :кзразрива.) ' - .Spódoptera exígúa НЬп..,отйш ccam-AfrotíS s-.:getcï: Schiff ' отряд 4èiyèxpkûm:-Lipi<icpt8ra), .сзрак-чз .tx-asía c,igçalaris ir^raccro^des i. (отряд upBiiùKÇiixtf'.-C'rthopte-гз), абаканский iapsi:¿E-.Feríj5Ísnet4 даепенпа L. (отряд • таракаио-sm-Blert optera), паутинний tàeas Tetranychus urticae■ Koch.-(класс пз-унообравтж-Arachnids), которые' яаиишсь. лаборатории»»} популяциями, виратаваемш! кв базе.Института; зоологии'АН , - ЕсерсйсюЬкого и узбекского H.'îîf защаш рзст&шш. '• :
В качестве мс.-очвнксь эатераг иополъвовалл гемог-каты -голов ' « грудок cobo;:, норькгй ткани. саранчи-Гк таракана. Зетерага. паутинного гле;р нсследоьвдн в гсыогената>:, пригсто&гёюшх .из цедц>; озобёй.
Aktíishgcti эстераэ насекомых сравнивал.!', со сгг'Лотезш сцворотсч ной íЕуКЭJ vi вритрецг-тарной 1АХЭ) жытнзотёрагш» лошади"» комерческлми препарата,in производства Шрадзкого НИИ ¿акции и сывороток. . . • ' .-',■•:
Активность КВЗ вреди гедеи сравнивали с 'активностей КЕЗ' печени свиньи - препарат'фирмы "Sigrr.a" (США).. '■■■.'.
Скорость холинзетерагвоге гидролиза тиохешшовых • зфиров :,. аце-тилтиохелнна (АТл). 'пропийншгаиохоакна (Шл). и бутириятиохогинз (ВТК) определяли спектрофотсмертески (Б1-1йзлД&51),. •
О наличии в гшг'г<5из1а>: КЬЭ рутшлл по их, способности гирролиео-вать S-алкшюЕие гфнрц кзрбоаошх.кивает. (1иляба?в,1333) и пара'-нптрофенплзцетатз (и-HïA) (Брик, 1977)'. ■ •
Тиохсшшсвые субстрату - комерчёскке резктйвы фирмы "Cherriapal", а . З-алкиовые зфири карбоновнх '.. кислот динтегнрораны в ИЕОК.АН''РУ канд. хш. наук Бабаевым Б.Н, и др. • .. • ' ."••
Кинетические параметры вВащдодепетвпя'эстераа с субс-тра'тзми.,. V и К1Г() определяли методами Лакнуиьера-Бэ'рка .(Кеяети, Д'ЗЭО)'и Г.срвгага-Воудена (1979). •• '-." -'".••';. '•■''■' - - . • '.
При определении активности >3 с'помищыр 'ткохслинОвык• зфирое и карбокешшотеразы с испох-ьгоЕзнием -З-алгашоьда.'эфнров 'карбоиовых •. кислот в качестве хромогена лрямзнадй 5,5-дити'о-б11Сгй--ннтро&енеойную кислоту.-, препарат фирмы "Koch Light Lab'.' .(ВеажэбратайряУ. ' ' '
Константы обратимого ¡шгпбированил (Кг> рзесчгдыза^н. ¡jo методу ,
- 9 -
• £рес; гк«йэ it-SiH .
Кснстэнтн скоростей бимолекулярной реакции (ко) взаимодействия эстераэ с необратимыми ингибиторами определяли графическим методом (Ересткин. 19'*:).
. Бее обратимые ингибиторы нз основе кзрбенгвых кислот, а такле 0-алкил-5 f -ß-этилмегкаптеэтил)метнлтксфосфснаты и их 'метплсульфоме-тилатьг. С',0-д1Г9лкнл-ь-бутннпПпер!:дштпсфосфатг!, О-ппклсгекспл- и 0-ш!.клспентил-3-прсп£ргплфенплтпсфссфзти, 0-пснтил-З- !.-^9-этилэнаба-■ ёинплфенил)тпефегфэты, Р,О-зиелкил-З-эпилупинантпофссфаты. С,О-диал-кил-?-прспзргилтлсфосфзты синтегирсЕань; в лаборатории академика Аб-дувахабоЕЗ A.A. под руководством профессора Далкмовз Д.Н. Дпиеопро-пил-3(/-этилмерклптоэтил>тнсфосфат Vfy-225) и его метплсульфометилат (Му-412),кедметилаты диэтокси- и д:шгопропокси-5-уикхогексил-метнл2,м;:коэтил)тлсфосфзта гГТ-152, ГТ-Г?1) получены в Институте эле-ментсорганнч?гкю: соединений РАН в лаборатории профессора Гслсвикова H.H. О-алкнл-S-Ск5р5ь1етскс!:мегпль!еркалтсолетил)мет;:лтпгфсстснати синтезированы дткторсм хим. наук Шиловым А.Э. в лаборатории чл.-корр. РАН Мастрсксвсп Т. А. Остальные .ингибиторы - коммерческие препараты различных фирм.
Злектрофсретпческое разделение зегерзз проводили на приборе для электрофореза фирмы "Reanal" по методу Легион (Devis, 1?65). Денсп-• тометрирсЕвние.гелей проводили нз приборе "Chrorescan-SDO" 'Великобритания ). '
Концентрацию белка 'е проба;-: определяли методом Лоури (итогу, 1951). - .
Токсичность фосфороргЕшпесквх соединений определяли методе»« пробит-анализа (Прозоровский, 1953), рзечитивая дозы, выгыващвв гибель 50?; вредителе и ¡.ЛЛсО ■ ■
Сйнергитичеокий эффект ингибиторов астераз устанавливали по метслпке для двухкомпенентных инсектицидных смесей (Гвоздя,1978). Эти эксперименты проводились сотрудниками Всероссийского института ээш1ты растений (Еазияьева.Т.И. 1 и института геологии АН РУ (Кувши-яогз H.2J., Хавакава М..
Е:е опыты проводили в 4-6-псЕТСркоотях. Статистическую обработку полученных г энных осуществляли по методу Иодлера (Muller, i960).
- 10 -
ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Идентификация аотораа. Гсмэгенаты нервной ткани саранчи голое и грудск совок катаЗигироьая;: гидролиз АТХ, ПТХ;БТХ,а та1-;че'п-Н$А- и Б-зталбутират (КЗ-14) (см.р»;. Г,?)•. Эти данные свидетельствует, что в оргзкнгме озранчи, . сзшой и малой наземной совок функционируют ХЭ
и КБЭ. гЪ.югензты голое совок о .высокой скорость» гидролизуют АТХ, •а ЕТХ весьма интенсивно расщепляется "гомогекатами грудок совок. По результата',! субстратных • • реакций принять решение о принадлежности .ферментов к типу ХЗ иди-КБЭ не всегда дает окончательный и • пслочзпелькнй'от^ет.. Поэтому дао-ьедены дополнительнее исследования ■-по ' реакционной способности ■ ферментов при г.:-. ввшэдействпи со специфическими, : ингибиторами - (см. .табл. '1). • • ' ' ■ . .
Рис.- 1. Зависимость активности астерпи оаранчи or концентрации cyßoTp.-uoB. (V - скорость в ынмоль-ш'^.часГ1; pS - отрица-тслышй логарифм малярной концентрации субстратов).
Эзерин - специфический ингибитор ХЭ тормозил гидролиз АТХ.и БТХ под действием гомогенатов голов, и грудок совок. Гд-? преимущественно ингибировад активность фермента, локализованного; в грудном-отделе совок, способного с высокой скороок» гидрэлиеирсвать БТХ. Остальные ингибиторы угнетают гидролиз как АТХ, тзк и SIX, только величины значении ко зйк соединений при использовании АТХ и БТХ различаются. Анализ чувствительности Х5 к .ингибитора! свидетельствует о том, что .у соьок присутствуют два типа ХЗ, отли-шщихоя по способности гидро-. лизовать АТХ if БТХ, а таыче по поведению к. де;ртвкн-икгбисорог. 1ер-
V
5 4,5 4 3,5 3 2,5 2 1,5 1
0,5 О
i Щ * . *' Ч
7 ■
7 г/
р-^ ps
—t—•л—ы
5 4 3 2 1 ♦ Б-эгялбу гираг в АТХ л п-НФА о БТХ
ж IITX
Ошмая сопка
М;»;з;<1 ншемнзя совки
А
. х
■
* / А* ?
■ /д
/А* ? '
.4' .¿г -
>.. О
/ / я *
I /
7 * /> г
а I -
рЗ
---н
1
п
N2
1 -
2
3 ■5
2 .
"■дГХ--
-пгх
- сгх •
- !>:этилбут>'у>аг --н-НФА
Рис. 2. Зависимость ак-зтдаоста эстераз совок от кстцентрашт : субстратов. А - гомогенат грудок, В - гомогенат голов._
к
Таблица 1
Чувствительность зст«раз нгсекшмх (Kj, xIO" M"1 мюг') К юанббггорам.
HÜroünwfu, (yterjunu MUUM Ошииш ClftlNI
____ roMoreiiAT
- Ч1ЛШ птл i>K»«i IU«t Цф*.П«1Ш
\ Ээюш к—aij ATX «2 7,5 18 0,61
HjC— ( )<—ац P 1ТГХ 492 6,9 20 3,0 0,0S2
БТХ 500 7,1 19 2,8 0,064
«—и ¿и, ICS-14 0 0 0 0 0
Гд-7 ATX m 0,60 2,2 0,47 1,0
ИТХ БТХ 1,37 1,40 0,É¿ . 2,0 U 0,46 . 0,51 ■ — '•
. C,HS ICS-14 3,1 0 V 0 10,Q
ДФФ ATJÍ 0,40 ÖÖ32 0,010 0,0053 30,0
КОТЛСПОЬ-РСГ ПТХ БТХ 0,4? 0,53 0,040 0,03 0,016 0,016 0,Ü0SÜ 0.0M1 34.0 28,0
KS-14 0,05 0 0,008 0 6,0
,—, л-4 СЬС ATX Г1ТХ 1,2 1,1 0,20 0,18 8,1 9,0 6,4 5,'f .. —
.бР БТХ KS-14 1.4 в 0,26 0 8,8 0 6,0 0
ВД-56 ATX 4.V 2,5 2,1 • 1,05 —
CP ^schjCSCCH, ПТХ ETX KS-14 3.7 4,4 0,0001 3,0 3.3 p - M ■ 1.8 0,001 0,93 1,0 » — '
JÍ-1 ,. <iTX 9,7 6,9 2.» 90,0 —
ИТХ 10,0 7,9 3,8 ; 83,0 — •
БТХ KS-14 8,0 1,S 8,3 0 4,0 : 0,6 88,0 0 ■ г
- i3 -
ментом, функционирующее в груди совок является БуХЭ, а в головном отделе - • АХЭ.
В отличие от ;<Э, гоюгенат грудок принимал участи? в гидролизе л-НФА и З-этилбутирата (КЗ-14). т.е. ето говорит о том, что в грудкой части совок Kpcve ЕуХЭ присутствует еде один фермент. ферментом является КБ?. Такое утверждение основывается ка неслособности ХЭ ращепляп. 3-?тил;утпрат (К5-14), з iSK*e на то?,д. что огерин в концентрации 4•!Ô"& Ы абсолютно не скзвывает влияние на процесс ра-щепления n-HîA и 3-отилбутиратз. Белее того величины значении Kg евзиуоделстоил .ингибиторов при определении активности ферментов при псыоздо холин"въо; офироз и З-этилбутирата сипно различаются (см.табл. 1). Нз основании полученных данных мо«ко гаеточитг, что з срганивые совск присутствуют три вида астерэз: в головной части -АЧЭ, в 'грудной - ЕуХЭ и КЕЭ.
Еикслекулярнке кснстазта скорости в?-г.*м^денстнп"- ферментов го-могензта нервней ткани саранчи о эзериком и СП! бливки при иополгео-вэнпи .АТХ ПТХ и ЗТХ в качестве субстратов и "K-ïho отличались от кг, измеренных . покосе и З-втплбутпратз, Поскольку значения кс не эа-впеелп от лрир-ль; тиохслинсвых афир:в >,г.*у.о уверенно говорить о тем, что ATX, т>; я ЕТУ. гидрсакгуются одни;', и тем ке ферментом, т.е. ХЭ, зктиеностъ которой ториогитгя ннвкими концентрациями евернна. Фермент. учзотв>л:ла:и в гидролиге л-НЗА и З-этилбутирата не чувствителен к эгерику, но его активность тормовптся №4. ч» иевволяет отнести его к КЕЭ. Гсмсгенат ганглиев саранчи ке гидреливовзл парзоксон -субстрат, нспольгуеыьл"! для установления активности арилэотерзвы (АРЭ), по еоеи вероятности, АРЭ отсутствует.
Присутствие ХЭ п КЕЭ у саранчи' было показано и электроферетн-чеекпм способом ка ПЛАТ, применял в качестве -убстратоз ^-нафтилаце-тат, АТХ. ПТХ и Е7Х.
Изучение днняник.н зкпшнрсти эотераз по Фазам развития совой
Проведены зргперга«нгн по изучен;® каталитической активности АХЭ, ВуХЭ и К5Э У гусениц S-9 и 4-5 всврастов, куколок, бабочек и яиц совок. Активность ХЭ возрастает от гусениц 2-3 возраста к гусеницам 4-5 всграста ( рис.З). У бабочек активность АХЭ и БуХЭ самая максимальная. Кеталитичеокая активность ферментов малой нагемной созкк ка все:-о фага:; разглгкя нп*.е, чем у гналогичккх ферментов с~и~
Фазы развития малой наземной совки
25
а к т и в н
О 'О с
т 6
го
15
а1кьэ вглхэ
ПЕуХЭ
Рт.З Дннамика акишнасти эстераз по фазам раавития совок
мой совки. ХЭ si КБЭ не обнаруживается из стации куколок и яиц. Схожие результаты по динамик? активности установлены при изучении КБЭ совск.
Таким образом. исследование динамики активности эстерзз у совск показало, что их зктивност! зависит от всграста и фзгь: развития насекомых. Чем еьи? стадия онтогенетического развития., тем эффективнее выражены каталитические свокотва эстерэа. На стадии куколки и яиц активность ХЭ и КБЭ отсутствует. видимо, иг-га яеподксй сформировак-ности, з такие гистолиза пшевгрителькну. и нервных тканей, функциональные свойства кот,срыл связаны с эстерзэамп.
Изменение ганпентрзцки водородных ионов (рН) ¡1 температуры в реакционней среде сопровождалось судествечкьгм изменением скорости фермектатлЕНо!': реакции под действием Х5 и КЗЭ. При увеличении температуры от *2БсС до -чс^С скорости гпдполгва AT/'. ВТК и S-этилСутпрат при в?шп.оде1'!СГ21:п с АХЭ, ЕуХЭ и КБЭ постепенно возрастает. Псвше-нйе температур» вкзе *43~t' приводит к с-киленто активности ХЭ и КБЭ ссзок. Следовательно, темпс-рэтурккп оптимум АХЭ, ЕуХЭ и КБЭ составляет +40°С, г.е. совки приспособлены к температурным условиям, характерным для Центрально-агиатского региона.
исследование рН-ээвнспмостп активнссти АХЭ, БуХЭ л КБЭ полагало, что оптимальным для ХЭ совок является рН=7,4. Максшальную ак-тиенсст! КЕс совок проявляют при.рН 7,8, ' т.е.•они несколько отличаются от ХЭ иоследсвзнкых нрелптелен.
Исследование субстратной специфичности яолинэстсрдз иасекомия
При определен:!;: степени_ специфичности фермента в качестве основного крпхерил попел-, гувт способность целого ряда субстратов, отличающихся логической \-сд1:$жэцкей различных частей молекулы, окз-зыват! влияя]-.? на скорость ферментативного превращения.
Для оиенгп субстратной спегафичнести ХЭ озимой, малой наземной совок и саранчи определены скорости ферментативного гидролиза АТХ, ПТХ и НТК-лсд действием ю: гемогенатов в широком интервале концентраций stik гфпров (см.рис 1,2.,3). Гомдгенаты грудного, головного отделе* совск и ганглиев саранчи гидролигозали все тпохолиновые зфнры (см. тз1-л. 2}.
Кшктическне периметрыfK<a xlfr3M н VwxilO^Mмг1 мшг1) ншролиде гиохолм шиих зфиров под действием ХЭ шсекомцх
Озимая сош» Малая шиемшш совка Саранча
Фаза Субстраты Голова 11)УДЬ Голова Грудь (нервная
ткань)
развитии Кш Voux К» К« Кф Vett К*
Гусеницы АТХ 4.5 1,2 7,0 1,11 2,0 2,81 5,6 3,01 — — .
2-3 ИТХ 2,0 0,97 1,8 1,6 3,0 4,2 .2,7 4,4 — —
возраста БГХ 5,0 0,27 3,6 V 6,6 1,61 6,67 6,60 — —
Гусеиицм АТХ 2,5 2,9 1,0 3,19 3,8 3,1 1,49 3,2 — —
4-5 птх 2,0 0,44 3,8 5,27 2,9 1,3 2,3 4,1 — — •
возраста БТХ 4,8 0,33 4,1 6,за 1," 0,6 3,8. 5,8 — —
Кабачки АТХ 5,9 4,7 4,0 3,83 3,41 «,3 3,6 ifi 4,5 1.1
(im&ro) ИТХ 3,8 2,9 5,85 5,58 3,0 4,21 3,3 4,8 0,9 13,0
БТХ 1,8 3,3 3,0 6,5 3,77 2.9 6,3 4,5 1,3
АХЭ cosок с наибольшей скоростью гидралкзуют ATM, в 3 • раза медленнее ИТХ, ВТК гвдролигуется слабее АТХ к хуже, чем ПТХ. Для БуХЭ совок наблюдается обратная- картина последовательности расщепления субстратов, т.е. ЕТХ гидролигуетея быстрее-ПГХ, а тем Солее АТХ. В этой связи следует отметя», что в' гомсгенатах целк«ч' гусениц хлопковой совки тз:-ж было обнаружено присутствие • .2-х типов ХЭ (Чары-ева. 1995). Один из них с наибольшей скорозть» гидроли?овал АТХ,' другой - ЕТХ. '
ЕуХЗ совок, гдаролиэуя все три субстрата, веоьмз существенно отличается тем, что избытки субстратов тормозят их активность., чте не характерно для типичных.-ЕуХЭ как теплокровных, так к членистоногих. Подобный факт наблюдался только в -случае БуХЭ пчел. •
Среди множества известных и обнаруженных нами субстратов ХЭ вы- • сскую избирателькость по отношение к АХЭ теплокровных проявляет АТХ, в случае же БуХЭ - БТХ, 1-метплП-(й-бутирштиоэтил) пиперидин и биохоликовый эфир З.З-океидамаслянног, кислоты.; Как' будет влиять структура этих субстратов на каталитические свойства ХЭ" насекомых? Для получения ответа на зтот вопрос- проведень; опыты по изучению их ' взаимодействия с ХЭ совок и саранчи (см. табл. 3). ; . '
ХЭ саранчи о наибольшей скоростью гпдрелизует АТХ; чем вое остальные представленные в табл.3 .эфиру,'-Субстрат на основе пиперидина
по своим параметрам уступает АТХ. а остальные являются слабыми субс-»
тратами ХЭ"¿того насекомого. По'способности расщепляться БуХЗ-озимой
Гшролипскок-рмх cüani JtiMtfKîu «}6tipa«w холмик icpvMMft
CjotTptr
!»! wenn H.v"4iM4 ггяк» ! :>5 ПЧТЯ
Âv? 'ir- Д .Ч > >')V> . Л Л í V»
i 1!« П? 26 i !5 и l'W
i п 100 21 !(«» i«', 12
3 мыт» si 14'í » 9fl ' (1 ?f>
i Г.КОДН" 0 ÍS(! в 0 . 97 M
« -1 Met!t'!-!(2-iij'H'rnniMi>imi}raH!fJ'tiTïi!.';i
г :*■::■:!' насет':;': ост: ;.е]?П пр.-зблнлзеття ?: А"л. ■:;-: п: ¡т-
'-;•:•-•; iri." устсел: ATA. г с - ' vr-::r ;т.т:* : г т п ~ '.;:::;:;:::::
'л;::?У'--""5 пятенсивк" 2уУ:'- лгигл::.
: гс-л и \ней ••••;•. ••.:•:....... * -
.);•! о;ч::;: лглзлп. vím Бу/'-r кйсек-::.:^;' являет:1-: 'г.::.: с;::;~ у. г-~к:5:п::"етл-н::с;1 кислсгк. "pi: сптпмесгнт:''тснекут ;:.:::1;': гттрз-T"s торс m ' гттслпей Ali: Hs::i:cee ье: т : ^ = е А С ~.т:'-:. Г.: v;h:~ :"-.'к Е7.'! сет:!.: ; гейт г с;.: сблал^ет ::J оссюй те-'::. тс:.: Трс-
:м. n:c. :-• су С третит : к :
.:::T: np: : лп::сп ; • с-:«:-::-: с: тр De;:::.. ет:т ; : .-'-к-:;;--. :тт 'гс -
е.-глн. что -■Г - "■■ w - 1- :чг.гссе с: слсгсС:-:: ее:: кзу-- ".CT'T'.CT.Ti с
ТГ'. -:yí трзс.т. Пел : ислеслт-гсгг: - ::::су:- i"
;::с1;:рь: : ••• с г " г-лсс •с"ТГ v. чем ;:::сл:г: ПУ.У.т
И(:олддрп;;»цр (iyfjcTpftrmr't ^псикфтиост:; 'х••<■■•,':'■ ^'".орпи
¡•35 сбледтт опрск:;: су! стретч::: -г.ту:' ::ч:-т у.ту . £ :• • ; : ет::::, ?. т.-кке ореглег.у' o-cî пспске тег;::*:: г:-"::: ;.;бт~г~тсз зпечгле -.и-учеке г::зР-Л;!гу;::ото ' ук~"тт:;. -у:л::.....v :■ ::
лей'к:: тле см с "-гЬр.З» но ;•:■: тсгтс:. >:■-. г.р, . чт: не/гт-чсус се с:тр :: tïk, - тт:г:л en: трлр-: г roc - "-'i т "■'Er ое;--тп: со::';;:>. Ile eir: т........: ттлть' с :.....' ......'т ;
~ 1-3 -
!'.лшна<1 4
х!!»-4 »-.г 'М/ча«) тнолыил
(К - С - .'1 •
II
О
«¡»Ц!М< 111 и .....
Г>6с»рач В а* ЛХ ) В}ХЭ ......КЬЧ
и,!. сы&ариткя пенсии
< ¡и «мь ц 0 «.(иа
КК~! ГШ Ь 6 0 0
КК-З <1Ь Г,Л,1 и 0 0,1)4 7 4.9
К.Ч.} чь Г«Пи 0 0 1>,01 6,69
КК-5 пь 4 ,П,з II 0 6,21
(¿.4-6 111, 1>1117 0 0 0 €,81
С'(Ь Ы ¡а 0 0 0 633
КК-8 (Из 0 0 0 _«¿3
К8-11 <111.1 0 0 0 3,83
К8-13 С1И5 ОНц 0 о 0 7,39
К8-12 СМ, ¡-СЛЬ 0 0 р 5.01
К.Ч 14 СлЧ, СгШ 0 О 0 7,87
К8 15 ель С«И9 0 0 0 ш
КЬ 1о Г,И, ¡<>И? ........0......... 0 0 ........<У?......
1> - ИФА _00>043 0,<Ю4о -...... _
нее псдьерчены рзец&шздоээ при вззшсдействии с КЕЗ. Зависимость ак-гь'зиогтп КБЭ печени от е'в спиртсвсй части молекулу з$ира напоминает здкэисдераскх» падрслаза окссвфпрсь уксуонсй кислоты пер влиянием КЕЗ печени л.ыугл, которую набяздшн: Диксон и Уэ£б • (01ксп. •УеЬЬ, ' 1ЙУ9). Однако с.-с-дует отметить, что "тазз-фира гидрслпвуются КБЗ быстрее, чей и:'. кигягрзднке аналога. Интересно то, что гептильноё произведи;.; уксусной кислоты как твсз$ир,- гак и окооэфнр, гидролкауктся с симои Ь'Ь::-СК1:: старостью, по сравнению о другими зфнрзми этой серии субстратов.
Среди тноЕфиров прсвионовэй и масляной киолот с наиболее высокой скоростью рзэлзгнотсч газ соединения с Я »-О4Н3 и К «-С2Н5 , которые сказались оптимальным субстратами для КБЗ печени свиньи. Они не кэдв*ргаЕгся расаешкдаш ХЭ да-не при белее .высоких концентрациях, что указывает на их абсолютную специфичность по отношению к КБЗ. В этой и следует отметить., что срег.и гсыологое малгтиона и п-нит-ро-|->ш:_- зфнров оптимальными субстратами КБЭ являются так*® эфнры н-прс-т!аь )ла (Паи!егтзп, 1976. МаНю1га, 1936). ■ '
Этллсвкй ejjjp масляной кислоты (З-этилбуткрат) является иаиЬо-л»? гидролпгуе:.'ым субстратом КВЭ, n-H'ÍA такле гизрсдпгуется КЕЗ, но скорость его расцепления в 4 ра?а медленее по сравнен:и с S-гтилСу-тиратон. ¿елее того. п-НГА. кгк покагэно рзиее (Краснова.. 1Э39), может подвергаться ргглодению УЗ. что сютзг ero оиец;ф!чнсс-ч. в реакциях клталигируемь;:-; КЕЗ.
S- елкилсвке зфщ-ы карбонокых юклот интенсивно ргсцелллкгся КБЭ сзрзячи и освс-к. Характерно, что кн избыток, сак.че кек. и избыток n-H'ÎA. не зкгквовт гуО лгрзтногс торыс.иенил активности КБЭ. 3}иры уксусной кислоты с to лее высокой скоростью гидролпеуютол _ К£3 печени свиньи.. че:; ~геок. По мере возрастания числа кетилглл-'/; групп в их тиолл"лл:ном плдпкеле голголп? с-уботратоз под д-пстшем КЗЗ каоеко-ï.'bix н-'пг-ггкгн: псв:,.":\эеТ';'.ч им. рис.4).
ЧубТ2п:-:.-ляте?ь КЗ? свиньи у игмгнгпж згрукгян субстратов отличается от КБЗ сов /к: sb^?:¡9 теологи ? :сй серп;: гуСттрзтов по гидрелгеу-чети мало гтлп'п^~ч от т~;ксиливсгО прси;л олнсго. По этого ол-дует; :-л: гллг'со.нне сСлвссп ?гт[ swv:. пункл? КЗ? гекньи и сорок рволичль; по прот'-1«,е"нп-тн. Есгэраот,-кн-* ектлэнос:;! ХЕЭ ,волочено и при ич ?зз:".!сд-ч':ст?н1: с тксв^чрвгл; по с ов/всл кислстк. Колпчест-гс-гош* з?рэ:етгь: гкзре-тп гидролирл -\!;:p:i> пглпгоновсл и кзолякои кислот вкле. чем ггоивввлнкл уксусной ..л-лслы ¡,ск, рил. л.? и В).
.Ивччекие возлмос-лстпп Ц.Э солок о тио-з^ирв-л; квг'оноек:-; кислот. имекхкл легичечл: игквняклукс'л структуру, вп-роке проведенное нгм:. псвв"лкло выявить свс-лбрвгтге субстратной спеоптпчнсотп КЕЗ игучекну;-: нзеекеккл и !!л?коп;пг-гап.
Текли с';яо,л/, к гегульоэте- изучения килвтпчес-лос лвсег'етрсг гидреливо тлеловкл Ми; ов кар С гиге;';: к:глгг д:-з ю;нстз;:;к КБ? насе-•ceven п. млекчил'-ллопч с'в-'з; узек ряд ноги:-: слслчОпч-скил субстратов КБЭ., к~т':г;ы? рв-чгекдук гол лея лк'пс.п г^оекгл ~ри уослловлвнпи кзр-5оклввз-терлс-кол акткн.ч:сзи ? гканях гзвличнку чивотнео:,
Ие^лг'доп.'Н!!^ чдогптрдениптчэяг«}»па g í'CMjiJ'qwp.vriinvírww пс^ди/^нйвд
Чнгн'лп/гнкч впали? reeKóníi. ¡-влялпвгруеккл г-"--л ^волл, не ог-ранкчгвве-сн сл-в-лк ;тс. C'-ir1?;,-: г ллл че действует в-лловво ко
СН3-
234 56789 10 11
С,И5-С-S—- R
V
7 t 6 5 4
зв
2 1
■-t— 5
S
S
Fkc. 4. Яаппстшсть ско-¡uni'iH .KnpCiUiUîiœKvjojinaiio-ro ■ гкдролиаа тлогфцлш карпашпшх кислот от и it глрунтурн .
КЮ малой шшомшШ
COIiUlf
о т Ы>3 озимой огшкн '
л - KfW Г-НИНЬН-
R * С.ib;..-: i - irao-OJP.
- 21 -
активность эти:-: ферментов. Обязательным является оценка реакционней способности ингибитора." которая, в первую очередь, ээвленг от его химического строения.
Наиболее сильны;«: ингибиторами ХЭ саранчи и таракана сказались - м-;тп,ц~у.оьс'ометплаты 0-ал кил-S {Ji- ?тн.омегклптоэтнл)ыетилтнофосфснатов (см. 'fin.5 А г В). Различия в величина;-', кг с заряженными (S) и негз--ргаевводи (S) ФОН укагь-вает на зачяуа роль анионного пункта у ХЗ эти.:', насекомых. Активность сульфидных (S) и сульфокпевых (3) 10И зависит от длины их злкилькых рндпкэлоЕ.Величины ко ХЭ саранчи с суль-фешквк/.'! 'Kî! резко возрастали при удлинении R от -СНз г,о -С3Н7. В случае с сульфидными SC5J чувствительнссть ХЭ изменялась подобным № образен. Из зтого следует, что гидрофобный участок ХЭ саранчи по своей протяженности соответсвуех длине цепочки состоящей пз 2-х ые-тиленсрых групп. При удлинении Р. до -С5Н11 величина К£ ХЭ таракана с (S) изменялась мало, а начиная с -¡JgHia, кг снп«а-зсь, как и у ХЭ оаракчи. очевидно, у ХЭ тэракэнз, как и у ХЭ зритрспитсв челзвекз, гидрофобный участок в районе эстернгного центра соответствует длине 2-х -СНз групп.
. Акспхолшзстерагнгя активность метплтиофссфснатов со 0=0 группой в тиоэлкпльнои части молекулы вьете, чем У сульфидных ïOîî, но нг:*.е,. чем у îOi! с сульфидной серой. При этом наибольшей активностью по откошен:» к ХЭ саранчи и таракана обладает соединение с К=-С5Пц. КБЭ саранчи и таракана по чувствительности к ЗШ отличаются от ХЭ (рис, 6.А.Б. ). Нэи^Жьз'пе различия наблюдались- в опытах с ыетилтпефо-сфонатрыи, - '.«.^л в тиоалкилыпм радикале ; С=0 • группировку и суль-фониевуг с-о" - -■> личины кг КБЭ саранчи с этими ингибиторами были в 100-500 р?з .M о ХЭ, Замена в структуре îC€ сульф-сниегои серы
.на сульфидную не лонидата антикарбсксилзстерзгнуп активность соединении, как ото имело местов в случае о ХЭ, а, напротив, увеличив,ала в 4-10 .раз. Более -низкие величины кг КВЭ о сульфониевнми СОИ по сразнетзо с их незаряженными аналогами' свидетельствуют об отсутствии . анионного пункта у КЕЭ.
Мети-тиофосфснзты с карбокопэ^пряси связью самые сильные ингибиторы КБЭ саранчи и таракана.Наиболее активными среди них были соединения с Н«-С5Ни,--СеН1э и -C?Hi5. Высокой избирательностью к ферменту саранчи обладает соединение с R =-C?His, величина и® которого • з. ?-i розавыте, чем с ХЭ. Евое выше избирательность этих ФСК! в отно-
а с-о
Б .
4 —е—I—I—^—(—4
О 1 2 3 4 5 6 7 К
в - 8 - о -С=0 —а -в
С 12 3 4 5 6 7 + .
-ф-с=0 о-Б
та -
с;. Соединение с З-проип'ль-нь;м радикал.:и пнгпбпруёт активность ХЭ совок слабо, я&схсшк/ . с но н'е способно к пок-ионночу вэтп'.модвпствию с-анкЪннш центром, иг-га отсутствия заряженной онневой головки ь ¿г.: структуре. ■ .'' Ягменение активности ХЭ совок были изучены при помо-•ши КО,.' -которые "отличаются строением г.етроцпклпческого остатка в тнольнои части молекулы (см.' табл. 5). Инги-бнрование активности ХЭ • совок Еоерастэвт при замене ыорфолнкового остатка на бо-
ри
Антахояшгастсразная
активность м ет)ит юфш;$он п-"топ: (й) -
(енз)иои£.зо4СНз (8) ^ СПэ^ОЮРСОЗьадЦЗ-. " (-' П:;; . ,.(С=0) - С!1з(0Е)Р(0)Е;Ш1£5-("I (Х)ГЧ:11з А - саранча, Б -. таракан.
Б
. Ig !"
S,0
fi.O
.ft 4 с-о
, s
/
47
/ /
/
4
I -|_„ ^ I . - I
О 1 2 3 4 .5 б 7 —S+ ' a ■ S л C=0
1g к,
. 6
4--I —I- - t-- И- ! •• ;
О ! 2 3 I S 6 7
о ri С О
л-е cc..:*4i:e гесегесгкс-;-: с;-"!? : T-airrrcv. Л? :?ÎV
?н;;гнны;': г.унчт э'^глглгго секст?. X? сосок гггслсссí.'.í-
}¡.. у, l'fl -"-r-.A^H-
ч' -:п 'сет1.сйлчл~;.т,
С и-лге уссенселеклл PiírKTS пагг.блрсе?л';!ч ï'.'C с населенней;! л л:' ленесьсосч-ньл.ш групяирсзкз:и: лголед-ны
спугк пз и&учешзв ил е?=лло-ЛгЙГТНЛЛ - Хс i см. соХл. г) Для с: ед::чен;:л с несчц-н-ль:уп селеямп cso — tío-h сле-Скй терпении": .с-фЬ*:-™ по cpaîHîH-s с i ОС сдоенной и ГрСПНГЙ СВЯЗЬЮ, ?S.4ÍH2- нэсн-п;екнсй связи на двойную п голе? на тропнуп гслргнсдз-'ется Еограстанлем величин Среди ÎOO с кратным! ггчгяш напбольлу'С! активно. :те проявляют соединения с яцеi ил е н с з с л с е m зiю. т.е. с
.Pre. Р. Лп>;т;ф''>!>:и;нл-пстсрааиап актш'чнеть мушл ï'TO'I'' oî'jonron:
(S) - Olli (!И:)Г(0)::'Х 11:3-
(3) а!з(0Л)!'(0)П(Х!! л; о£н5
Л - |;''р:?П".'1, Н - тлрч"~п. V. Г .. •
Таблица i
Чувствительность (Ka,xlO*Ml миг1) холишсчсрал к ФОС разного строения
M А В OUNUIOBKI lUuwai ce«*«
АХЭ БуХЭ AX> БуХЭ
О-СШн -CJIi 0.1Î 0,37 0,« 0^1
O-Cillu M 10,0 S.1 71.0
ocaiu ßl 1N*,4r N . 14,0 <M 78,1
1 O-CjHil 1,36 M зл 64,7
оаы o5 «w 62,0 . 69,0 i9,0
О 0,1,4 'vZ/0 0 W7 0 2,47
il о -ClU'"ö 1,04 4Д5 0 W
о Ol,- CO 11,0 23,0 75,0 87,0
CsHii -aiicii=aii 0,07 0,043 8,03 .8, OS
Cd lis -сиян^сш 8,4 9,10 «,J1
ш CsIIu -CHjCSSâCB 1,4 S,G 2,0 3,4
С'Ли -cHjC esech 0,41 3,ä 0,9 1 1,7
CjHII • -ацсшь. 0,03 0,01 0,002 0,04
CJlu -ai(ciiih fl,U31 0,04 0,0015 0,05à
iOO со значительной ^Г-Здектрсннон плотность».
О-Елийнии длины ахкильного радикала 0,0-дналкил-5-проларгшшю-фоофатов на. ХЭ рассмотрены на примере соединений представлены^ в табл. 6. Последние представители этой серии ФОС проявляют заметный иигибируютий эффект в отноаении БуХЭ совок. Зависимость ме.*ду структурой -ЮС и п:< действием на ХЭ паутиного клеша аналогична той, которая была установлена в отношении АХЭ совок. С увеличением длины С-агкшвного радикала от -С0Н5 до -CaHia эгошооть соединений возрастает в случае ГуХЗ малой наземной совки.
Таблица б
Aum jшшн>стершла» тливисипь (Ki х 11Н, М1 • мыи') О^О-дыллом-S-ирон« ¡я v.'i I uu^ct^a | ш
КО S-ni,-r.!CH
м- Оммс 9 ГОВЬ"» Нам-шша uhiks вХяспкоаки Ш}ТНШШв вЧл-.лигав
а COS1.-S .......та».......
АХЭ ЩУП KX.i fijX'J AX'i $э
1 C2lii 0,11 430 0,01 0,15 0,043 0,06 4,4 0,38
2 (hil, 2,0 8,7 0,91 0,51 0,11 3,04 4,8 0,38
3 <Ulb 0,03 14,7 0,004 0 ,87 0,003 1,17 - 0,1»
4 C'lllu 0,4 10,0 0,01S 1,33 0,012 2.» 0,7 -
5 caiu 0,002 0,011 1,05 0,002 1,3 0,53 -
0 - ITo данный Чарыевой 1994, н К}тушгвой 199И.
Изучен эффект ингибирсвзния ХЭ новыми <РОС, которые, кроме ацетиленовой связи, добавочно в своем составе имеют еще и циклический аминофрагыент (пиперидин.! и алкшкше радикалы различно]'! длины I табл. 7)..' Наличие у таких 20С пиперидина способствует возрастанию их Ентиколпнзстеразной активности для БуХЭ.
При удлинении О~алкилп;сго радикала наблюдается возрастание инг-бирующей активности ФОС. Такое повышение является следствием усиления гидрофобного взаимодействия ыеяду углеводородными радикалами, рзополо-еннкми в фосфорильной части молекулы ЮС и- комплементарным им гилрофобнам образованиям эстеразного участка активной поверх-
4}ксг!»пгл1>и<к1ь (К»*105 М-1 ипвг1) ХЭ к0,0-даалкзи^>4шо!ф1сдж!о-бут-г<г'} ■
П'пфчефлам:
КО.
КО'
З-ПЬ-СгС-СН!'
-о
№ -Т .1. 4 К ?>п чар сгсвкя Няшшая совка ©Хлопкозяа совка
АХ") КуХЭ АХЭ АХЭ БтХЭ
Гг!1, С ,Й г ль ¡то-Г'ЛЬ <1.94 520,0 0,6 "" К7,6...... 260,0 0,22 .....75.9...... 748,0 0,45 ......6 о...... 83,0 5,27 . .
.............. '-Л**
орз .........16,?.........
150,0 89,0 0,32 147
©- Из ,та1!мм Чярыевой, 1994 г.
носи; ХЭ.
¡¡а основании чувствительности ХЭ членистоноги}', и клекопитйщих к последованкгм 20'? можно отметить, то. что для проявления высокого антихолинзстерапкого эффекта ингибиторам необходимо иг.:еть в составе своей молекулы определенны? функциональные группировки: ацетилене- . вую, аммониевую и аткпл1Нь!е радикалы спрэделевого размера при атоме фосфора. ■ • ' .
Еолыишгтно'ингибиторов с аммониевой головкой в тисалкпльнсп части не влила на глдрелиг субстратов под действием КБЭ. еггок. Подобное являкк? лзкгггяо в отношении КБЭ таракана, тлей, нервной ткз-нк и жирового телз пустынной саранчи при исследовании кинетики тер-ко»е>ния КБЭ карбачата.ш и '300, со-ерадж аммониевые фрагменты.
Чувствительность ¡53 созок в- О-алгагд-З-пропилфенытюфосфрнатзм еззг.сит от структуры О-алкильяого радикала (см.табл. 8). '.Рост дакнк К у этих .200 сопровождается пзльемем величин к<>. Для КВЭ печеш-' свиньи такое пгменекпе в структуре К приводит к снижению .активности ТОН. Ксличестгекнуе параметры гначеяний К£ "единения (с Е = -СэНц) о Г.ЕЭ огик'сп соей: печгни свиньк оченъ Испеки. Несуцестьенко• раг-личзигся ко и в 01н:::сенг.и оозлпкенип й. тегдг как вещество с О-пек-ткльвш разжал:;-.! в 15-1" рае сильнее пгдзгзз-т активность КЕЭ узлег. назе!Жой осеки, чем ф*р«.:5нта сгимсй сгекл. Сукггтв«няз еь:ое кг и д;:г весвстрз с 0-гек-!:ль!ж: ссте.гком. Для лгелг^згзчкк?: 153 характер»-нп'1;:™ чупгтгкгельнесть к соединен;.":! с кгомгекгклгкуу радикалам, ко-
T.-X.Ü:
.büss;-f rCuc íu-.ci^it.üijij '.i l ].viti-«iüiiu-n< íií; 1С') У-
CK«"
K'i.'jH,
JA
У
~T
Cilla
¡-CjIIii
C.Hu
O i.e.Vdi cubí.á
3,79 .
Т<Й'
■ 5,75
Малда я;, кмилз
ш".....
5,7«»
69,2
Cor¡;x,:4
3,;S5
0,31
1,22
торий.является отнсоительно сильны» ш:г¡¡битером КБЭ малой наземной собки. Это соединение в 2,7 и 18,4 papa слабее тормозит активность К.ВЗ озимой совки и печени свиньи соответственно. Из это следует, что ас.г-разный центр КБЭ исследованных- животных не приспособлен к сорбции :ЮС с пэо-пентпльнъш радикалом.
Выраженной актикарбсксилзстерзвкой активность»: обладают ФОС с кратными еватф (см. табл. .9), Их активность на g 3 порядка вше актпьассти насыщенных аналогов этих ингибиторов.
• Таблица 9
Аитнкарбоксилэстераэпая активное! ъ (K¡xlOs ?vJ 'йпи >) О-апкил-S-- 'R'-фенилтиофосфоиатоа:
ja а B' Ознква f < Малая наи-чг.аа соека
i í.'slli, tH2CJl=CIb 15,0 ____ 13,0
з Cdl» <iw:ii=cnj 16,9 18,0
3 СЧЩ ClhOsCH ,_ 220,0 6SI>,0
4 5 (Ли ílhOCH 75,0
(■íllll cuicilih 1.Й0 63
6 Ш1» <ll(í4ijh OJST
1 CÜlu cihcmahk 3,10 74
8 аи.э CihCIHCIhp 0,61 10,9
- SS -
0,0-диалкил-3 пропаргилтиофосфаты среди КЕЭ- избирательно тормозят активность КБЭ паутинного клеща (см. табл. 10).
• Таблица 10
Атчкар^ксилэстграмзя актяттп. (ICv: tO'iVf Чяпг1) 0,0-диалк»л -S-iipoiiapinji-
mt4)'!>s ют КО ч . <>
iW S Cll2-CîO!
№ К Ibsmaö гккмй I |>у 1Н1П1ЫЙ Свииыг
клещ
т 17,tí li.o 16.0 0.66
г С,Ib 28.« 14,0 170,0 3,9
3 141» ■10,(1 48,0 280,0 40,0
4 Csllii »8,0 6V.0 320,0 100
5 íiíln 101,0 .48,0 5500,0 73
Фермент совок менее чувствителен к эт::м ФОС, eme слабее "их гибнрующэя- активность río отношению к КБЭ печени, свиньи. Постепенное увеличение длины Q-алкильногс радикала ФЭС приводит к возрастанию га: активности по отношению к КБ? членистоногих.
Таким образом, эксперименты по исследован«» шгибиторной специфичности КБЭ совок показали, что среди ФОС одражевное пнгибирующее влияние на активность КЕЭ оказывают тиозфиры кислот фосфора, ' содер- • жащие ацетиленовую связь в тиольнои чзсти ингибиторов. Роль ацетиле--' новой группы заключается в значительной ускорении образования фер-мент-ингибиторного комплекса. Как известно, - комплементаркость 'молекулы ингибитора активной поверхности ХЭ и КБЭ обуславливает "продуктивную" сорбцию, которая зависит от согласованности различных видое взаимодействия: ион-ионного, гидрофобного, а в нагеы случае и от. ориентации ацетиленовой группы. При согласованности веек этик типов взаимодействия сорбированная молекула ингибитора ориентируется на активной поверхности зстераз так. что атом фосфора и серинсвый гкд-рокеял ферментов кроотанственнс обличены, что способствует аффективному протеканию процесса фоофорндпрованпя, который гьрачается • в более высокзЕс значениях Kg. При "несогласованных" ввзимедейзтвит: молекула ФОН располагается так. что атом фосфора и. оериновып гг.дрок-оил пространственно разобщены» имекхдиеоп реакционно способные,фрагменты г.е могут принять участие в формировании общего •• цесс-а фссфо-р!-г!"'""1'3ния ас™ераг и акт ингпбировгння затруднен.
- й -
На основании излс:«;-1шш результатов можно отметить, что в para-•латвческг-ы центре КБс» я отличие -от ХЗ насекомых отсутствует зккоявин пункт, который .играет важную роль у всех тттж ХЗ. Вместо рнисн-лсго пункта у КЕ'З пмееосл группировка, ксяг.[ ля стюссботьуег огрбиш авкильных радикалов ололныл оф;гр ьь клрос.ш иы.ч кислот и atoa с кар,-оокопдзфпр.нсп свявЕЮ, по затрудняет -'С лп.«енп:- Ci.DC с онпеьой голоь-"коп. По cpatHcHíí» XX остхр.езнкл цмпр к es лучак ирплюосблен к сорбции SOG' с сбъеыншя и \-даин-:-нны:.ц: v; ловслп ро/пшми радикалами при атом- фоефсра. общим длл у:? и КЕЗ членискшо их лвляетол их а-ямс-тие, бысокэл чуветьительноСгс к 100 о яиршлсисвг.й связно. Дтгашй факт снлзен с присутствием в активном u~¡nr: novченнмх зст&рзи поялрной груглпгрсвкк, оСлала;-а:ей гмслот.* .-¡ .•д-.ч.с-и к ьшсгыи ос значительной % '-^лектроннхй р.азтн- :ub. Е'холх чкрг...кнт'-.в виявлеин специфические оС'"тр-и ингибиторы ,-Ь и Г;.'Х
Тщуугшооть__н_ сиадгшш.д««;\»ннгкбтчдрса зптеряа
Исследована токсичное«. д-ял;й:л • Х- (клрбм,. сок.члч'етплмерьзлтгме-тил.^етилтпофссфситпов, v., г*кс>« к/ :"ьл не irзут гкрлда, л в ?и*е ьрв-. ш лля ни:-: характерна ыкогзл ьктиык.т np¡: шпмГ-нрсзшт КБЭ и КЗ саранчи и 1зрзклнз. Устангвлгно, »nu о пильне ¡'¡л наездное (Ей-9) ;:а-рлктеризу :-тся нзксгшдой токпг.чг. > ¡.к ирг. по;-. .;•.- состнси и Bir/Tpmin-дсством .пгшен~н:ш м:м. тхбл. i 1. :Х> удлхн-чшл R их тсксичность отмается. Наблмдасн.с-ш ¿акт не 'льг ¡сюд олуч'мн'.м. поскольку сходные • даяние полулень!'ь блохпмииесхпх и «rw вколгппэтчг/. опигах проведенных 'на комнаткой эллкотсй и -ш-лгяпой 1лл;:. паутинном клоке и ,а.:ерпканск'.м тар сочне.
Величина ЛДко в отнг.аеио o-foi-Mi! п; и юмклхшш на noKf ош и Енутригюлостнои ВЕеленпи-р-яко ¡,ло.'ош"посн: Ил ТОКСИЧНОСТЬ мрггл ь первсы случае л нивкз - вс втгр.-н, чг. мсхпс, сбм.чгнкзь анатомической и морфслоппетк'н у'трукг.'рой ллгсл лм локровсв схрлнчн, которых по ■своей орг.эдязлшы и пл' ¡ж. in ллсл-тся кошлммл барьерами, на ¡¡ути ®)С к бпо'лплехн. Более тс го. избогоо, что обмол пгливюсзь детск'-с-цируваих ферменюз веет:, л í-m¿ в п..ф.'-.-кьк тканях, что способствует инте)!спелому разрушению1' ioiM'X JO'-, а м^едоьзтешю и быстрому снижений дозы 'ККСГЛб'олпзлр'ЛМшМ; о -I-X0 лг'л грихс^ленни через покосом п мембраннм:- оболочки.
Таблацз Ii
Токсичность О-влхял-S (кэдгом>тжсимеП1Лме9ка1ггочегил) мепмтиофосфонятов
СП, О
■«•• S-CH,-S-CH,-¿:OCHj
.......I................. 1 ¡ Шифр Сдявнч» Тяракян JÎZts»)*rtr ск»,% СКю, иыпь
N R ФОС Прм вакю инн п* Е'гжро При WlJTTp« брюшн. вмдент Ион muwjrn СММЛЯЧ-ш тля Зли»., вп т.та Гяаяшй долгопола« ш«ц Дом. irrt* мг/жг
1 f 3 4 5 6 CÍHÍ C-ÎÎ7 ели С,Hu CjHij С,Hi, C.IÍ17 nií-Ч Ш-221 Ш-206 Ш-207 Ш-203 Ш-204 Ш-205 ■ 6J 10,0 18,0 30,0 260,0 300.0 340,0 0,9 13 33 6,9 3.8 46,9 53,4 8,9 12,0 16,0 45,0 450 500,0 0,0001 0,0904 0,000» 0,00018 0,0005 о.аоов 0.0ЙЗЗ 0,00018 0,00012 0,00063 0,00tW2 0,0021 OJá 0,012 0,021 0,034 0.120 0,145 ОЛЮ 0.175 О.ОООЗ 0,0007 0,000« 0.0007 ь 0,0011 0,0015 0,014 0,0007 0,029 0,025 0,02« 0,079 0,137 0457 250 250 250 250 250 250
Эталоны: CK«o,%
ÏVf r.lj — - 2,0- 0,0012 - »,»35 0,004 0,07 1500,0
KMlñmUwr ___ :з,б 0,00013 - 0,00035 0.004 300.0
■Si -
OrHDCIJTSBt НО BHSK7S ТШТПЧИООТЬ <IOC ДЛЯ 184С-Й, no Cp-íBliC-HíKi C членистоногими, шлко г&гятнить гнашхельно боле« бистрш. чгм n ганпгме насекомих кар&&к,г.т-з'1грь2.ша! гцср.элиэ1.м ICU по елгА-,к,:,{нр-«;ои сваги. Причина снижении алти;:ол,н|> ri ерзгиой актиаи.оти iKiñftou, р-ирсвашшх ШЗ пяк.'жчлетси в в?м£НеР>:и их ¡рзф^рклвдш^й .•.иoc.oбяc•.^-
EusfeaiiHoü rt-ai-'u;! с.-льг.л^нп-'У ктргко ;¡ ;г*тг.ряцх свойств иар-Сч-г.еилат аннона п р_л- пени:* с <-.арб .¡-глинн/.й группой пли снпленпен ^лектро^плъности зтси-i ;г"1-"ра i :л -детвы; з^кть пола, вшшышоги расположением карбоксила? аянона.
Снижение iüíso л ли чз-гнцстонсгйг. по ¡.¡ере увеличения длины R v •>алкш:-5- (кзр';-;етокс;;ы7" тпл^'еркзптомечплЗз^-тнлтнсфасфонзтсй г.вязано с гидри^сбаой сорбцией I.;. «а лплил.-ш:. ¡-¡епбраяах трахейной системы, •лироьсго тела и обслс-;¡:a¡: сегы*№&; ш,ч ганглиев и кшечника. Не исключено и то, что часть илгпСкторок, -Хлада-лоих высокой гидрсфоб-ностъю, вэзпшдейстЕугг<: с КБЭ г- лт.:}.«, м: плечной и пергчгай ткани вредителей. В результате тэюя npupt, реько и,мается дога ингибитора, способного блокировать активность ;.Ъ.
Целенаправленное применение ингибиторов КВЗ моле г служить одним иг способов преодоления резистентности насекомых к инсектицида,i. О-сктмл-S- {карбметсксиуатпл^(еркапт0нет1;л)и^т1и1тп0ф0с4лэнат (1-205) бил применен в качестве глнергиста периетриил i,Рос давнева, 1Q91). Он оказывал потетшруквдШ эфрект на токсическое действие перметрина в отношении таракана и комнатной.пуки.
0,0-диалкил-З-лрспарпнсисфосфаты, как отмечалось выше, более избирательно угнетаю? КБЭ паутинного клеща, чем аналогичны;-: ферментов назекомкс. Ншйовее "шшфкима среди них оказались КС с 0,0-дипентил- и 0,О-дигексильныш радикалами. Это явилось-основанием для. их изучения в качестве веществ, способных потенцировать токсичность шэурояа,' рсгсрз и зта|ооа в отясаени» пауттш клещей (см.табл.12). Оба этих соединения по показателям КОД превосходят пи-перонилбутокскд (эталонный ои.чергпст! при действии на резистетные к мееуролу популяции-паутнннсгп клелз.
О.Э-дибуспл-З-пипсридинг-бут-й-пк-тиофосфат (Щ-56) выбывает эффект синергизма действия карбофоса для паутинного клеша .(см. табл. 13). Максимальный эффект крмзсзнцисгоюй cueca наблюдается при Oigo» Данная ксмпогициовнал смесь по своему действию
превышает известный аналог, состсяи,!:й иэ карбофсоа и 0,0-дигек-'сил-З-луликактпэросфата (Васильева, 1983), что создает предпосылки
К<- ^фдамгш ск1крлт;чгосяп> леЯгтвня (КСД) 0,0 двдлккл-5-прс«а?П!Л1Г,офо»фзтов; <ïlO)j!'(W>!>-tIÎ г-Cst'.ll по отлопкиям к 4jsc:i;iriMM:c£i (S) в jw3»¡rramí<>tS (Я) (¡onj.-ui.KÍÍ
l¿:nrv;!í;iof о клсмдя
UawíprwT Forep , Мг-зурол Эгафос •> ЛД» для Mblißeü «г/кг Cliso, % дяа nafntüHo го клеща
S я S R s R
S=t:¡Hu -s- .M. 6,4 1.0 20,0 1,0 1,0 350 >0,05
1,9 20,0 1,0 7,6 ISO >0,05
'} галоп: шн; 1,0 *,0 Í.O 1.Î 1.0 1,0
ТаОлица 13
Влнэдпе карбофоса, КД-56 и m kcmiioиздай из uajTHKiwro клеим
К ri !! « S И T я » и и, %
3 2 3 4 s ъ
Ka};6i!íf>íi£ 0,0035 - 0,C<f31 0,COS о,е> 0,02
БД-Sä - 0,05 U,CQ3 0,02 0,01 0,005
CKîS о,ms ß,M о,(юзооет о,em 0,ÜÜ03 О.СОЗ
для ijOEOKSDESHis ЕД'55 Е кзк^стсе селективного сихеггпста карбофоса. . '■
Дсрссн шш О- (5,6,0'-1рП>:оорОПГГу5рИ1ьН-2!-0,0-Д:'.5~1!ОфООф£Т ■ Б концентрации 0,02Sï вызывает IOS гибель гусениц озимой совки. При, ученьшевкн его концентрации токсичность скитается. Смесь ; i : i >. ссстсяазяся из дсроапа (в кшц. 0.005'í) и БЕ-с6 ксиц.' C.CÓ05*«). вУс'ывает ioo-; летально:ть гусениц сг;ксй орвкп. Тогда как токсичность дорсанд без ЕД-Б5 составляет "0% ■ (табл.'. Í4).
Следовательно, ЕД-5В проявляет . погенцмруклни ефоект не только нз токсическое действ;;; карбофоса, но и дороак?, топчем ссд-.-гчанпе дорсаяе, е пред^скенной кзгпооииас оокрздаетоо в 5 раз, что дает возможность иопосьзовато ЦН-Е5.2 качестве пслитункоиокз-ьного спнергис-
Вдииздг дорсанз, БД-56 н ах ксмяозшвгУ к» |уеижн скжа
Парзшгш Кошкитрздк», %, д.а. I Ъбедь, %, 5-дягь учпа
Дорст, 48 */« к.э. 0,635 70,0
ЛЙО£811.-38 *'% к->. 0,001 50,0
Дорсаи, 48 V» к.з. 0,0905 45,0
ДврС4Н + 0,«15 100
ВД-56 0,0005
ДорСШ! + о,(ш 50
ВД-56 0,ШИ1
ДярСвН + 0005 95
БД-5Й , сишз
Конграль - 0
ЛДя,БД-55 для шет 310 м / юг
та, способного потенцировать инсектицидные свойства карбофоса и дор-оана.
Кг приведенных... данных следует, что -успех в согданпи высскоэф-.фектизных инсектицидов будет газиеить от полноты наших знаний относительно свойств эотераэ членистоногих, а чзотностп, от понимания вакнсстп изучения структурных особенностей каталитического центра ферментсй с которыми взаимодействуют средства ввсгцты растений фосфо рсрганпчеокой и карбаматяой природы.
выводы
' . 1. -Проведено систематическое исследование $гриеитов эсгерааного комплекса' насекомых' - вредителей хлопчатника. При псмг/ди специально синтезированных групп' субстратов и ингибиторов установлено, что з организме озимой и малой навемной ссвок функционирует два типа хови-нзстераа и карбоконлэстераеа, в нервной ткани саранчи - одна холин-встерааа и одна карбоксшзотерааа.-
2. Впервые подробно изучены локализация,, динамика активности и кинетические-параметры активности эстерзз огимой и налой наземной оовск в процессе их онтогенетического развития. Подобраны сптюшь-ные условия проявления эстеравнсй активности в модельной системе,-холинзстерагы и карбоксилзстерагЗ совок максимально активны при рН 7,4 и 7,8-соответственно и температуре +40°С., что является покавате-лем приспособленности вредителей к климатическим условиям Централь-Н с;-зг нате кого региона.' ' ''■ '
- 34 -
3. Осуществлен сравнительный анализ реакционной способности у.о-ликзстераз вредителей при взаимодействии" о набором тиохолиновых рубогратов и установлено, что их гидролиз-протекает с угнетением*активности бутирилхолинэстеразы совок. Эта особенность, выявленная у совок, не встречается у аналогичных ферментов млегапитакмцих и ряда членистоногих.
4. Изучен ферментативный гидролиз 5-алкиловы.ч зфиров уксусной, пропионовой и масляной кислот под действием холинэстераз и карбокои-лзс-тераз. Показано, что их специфический пиролиз осуществляется только карбоклплэстерзззми. 5-алкилсвые эфирн пропноновой кислоты предложены в качестве специфических тест-субстратов при установлении кзрбокснлзстеразнои активности в биологических жидкостях колориметрическим методом, который из-за высокой чувствительности дает воз- . модность определить активность фермента, экономя при этом время, количество ферментного препарата и необходимые реагенты.
5. Исследованы аптнэотеразные свойства серии фосфорорганическп:--соединений о логически изменяющейся структурой. Установлено, чтг способность тормозить активность холинзстераз п карбексилэстераз насекомых и позвоночных зависит ох строения ингибиторов и структурны;; особенностей организации кзталитичекого. центра эотераз.
5. На основании изучения зависимости антиэстеразных. свойств различных фосфорорганичеоких ингибиторов выявлены следующие - закономерности:
- наличие ониевых структур в составе молекул ингибиторов сопровождается возрастанием их антпхолинэстеразногэ эффекта и наоборот, такие соединения не ингибируют или являются очень слабыми антикар-боксилзотеразными агентами, что является прямым докзательстеоы присутствия в активном центре холингстераа. анионного пункта и его отсутствие в каталитическом центре карбс^клзстераз;
- увеличение числа метиленовых групп при атоме фосфора сопровождается увеличеснием их тормозящего аффекта, такое возрастание строго определенно и зависит от типа и источника фермента и свиде-тельтствует о наличии гидрофобных участков у эотераз. протяженность которых различна для ферментов из' исолёлсваяных групп животных;
- сочетание е молекуле одного ингибиторе ацетиленовой и аммониевой группировок резко увеличивает аффект и;: д'еистгпл ас отясвенаэ к холинзстерззам;
- соединения с ацетиленовой свлр.ью - и .,сло>;н:э^хркоп группой
S5 -
. сильные ингибиторы карбоксилзстераз членистоногих.
Среди исследованных веществ впервые выявлена группа чреьвь-чайно высоко специфических субстратов и ингибиторов холинэстераз и карбоксилзстераз, покаьана принципиальная возможность создания веществ, способных избирательно взаимодействовать как с холннэстераза-ш, так и с карбоксилэстеразами, что весьма'ваяно при конструировании новк!Х Сислсгически активных соедпнеий.
S. Определена токсичность для членистоногих и мыши ингибиторов эстерзз со сложнозфирной связью, показана пзибрательность их действия для членистоногих.
9. Элективные ингибиторы зстерзз 0,0-днпентпл-, 0,0-дигек-сил-З-пропаргилткофосЗпти и 0,0-дибутил-З-(пиперид1то5ут-2-ин)тио-фосфат^'в экспериментах на паутинном клеще и озимой совке повывали эффект токсического действия карбофоса, мезурола, рогора и дорсана, что послужило основанием для их рекомендации в качестве синергистов к инсектицидам различней химической природы.
10. Инсектицидные препараты против совок рекомендуются применять 'на стадии гусениц 2-3 возраста, когда активность зстераз самая минимальная, это позволит снизить дозу расходуемого препарата, что лвляется важным для решения проблемы гак б экономическом аспекте, так и в социальном - из-за нежелательного избыточного содержания инсектицида в"окружающей среде.
Список опубликованный работ по материалам диссертант
I. Статьи, изданные а научная журналах и сборникак
а.Тилябаев 3., Абдувахзбов A.A., Далимов Д,Н. Вредные нзееко-мыа хлопчатника и исследование их холинэстераз и кербоксилзотераа (Обзор). В кн. Пробжны и перспенпит разшмя хшпш врнродомх и фи-аиожгически анттшх веществ. Таикент. Фан. 198S-- С. 212-254.
'2. Тиллбаев 3.Далимов Д, Н.,Абдувахабов A.A., Алланиявова М. Структурно-функшганальнач характеристика бис-аминеэфирев алифатических дш-зрбеновыг. кислот (Обзор). В сб. научи, трудов "Сжрутура a функции природных и фиаиологиирслн ммх аоетчетш" £ып. Нукус. 1092.- С. 3-30
3.' Михайлов С.С.,(tfeftsDHi I.C., Щербак И.Г.Дштбзев 3., Еек-
- В6 -
турсынсв Е., Абдувжзбов A.A. Мзтабшииескп? превращения фсофорорга1 шгаеских соединений со слоияозфирной связно (Обгор).' Там же. С. 135-157. . •
4, Тилябаев 3., Далююв J.H., КушеьХ.Х., Гафуров -М.В., ?бдуг вахабов А.А'. Зависимость между структурой и ходинергическсй эффективностью различных производных алкалоида анзбзгшш. (Обгор). • //Хим. природа. t:oeдни. 1994 N1 0.19-38,
5. Тилябаев 3. Чувствительность ходйнзстерагы и карбоксилэсте-разы саранчи и таракана к о-алкллметилиюфосфонатам с О-авкильными радикалами рагличной длины..'/ Химия фитю.тгичсст ¿штваих ве^сспз. Нальчик КБГУ 1980 С.85-97. •
8. Сундуков О.В., Тшзябаев 3. Фракционный состав и пнгкбитср-нэя специфичность эстераз нервной ткани саранчи.// Вяи. Всесовт. ШШ sanpim растений. 1930 N43 C.SS-30.
7. Мэстрюкова Т. А.. Шипов А.Э., Емкутева Е. А., Бр'есткин А. П., Брик Я. Л. .Мандельштам ¡O.E. рГедин А.Н., Нокко Т.Н., Тилябаев 3., Рсславцевэ O.A., Катан».С.. ЕрповаЕ.А.. Кабачвик М.И. Синтез,взаимодействие с эетерагами н токсичность - О-алккл-S-(карбметоксиметил-мерклпто!л?т1ш}-метплтпо(ЬосфонзтоЕ.//' Паз. АН СССР, сер. хин, 1980, N5 С.1131-1135. ' .
8; Тилябаев S. Токсичность л антиэстерзэные -свойства тиофссфо-рорганическнх проивзсдных меркаптоуксусной кислоты.//Докл. АН УвССР. 1383 1-J9 С, 45-45. . ' •
9. Добреньков Д.Г., Тилябаев 3., Дадимов Д. Н., Абдувачзбов A.A. Взаимодействие холикзстероз теплокровных со сложными эфирзми N-Чр-оксипрепил)пиперидинов и их. иодметндаыи. .'/ Хим. природа, соедоп. 1826 Ш С.753-765.
10. Гулямов И., Тилябаев 3., Далпков Д.Н., Абдувачабсв A.A. Эффект- гидрофобного взаимодействия в реакциях 0-зропил-5(_|3-этидуер-каатозтил)метйлтюфосфоЕатсв и их кетилоульфокетилатсв с холннэоте-ралемп теплокровных. ■'/■Хим. природа, соедш. 193? N5 C.69S-70Q.
11. Добренькое А.Г. Дилябаев 3. .Далимов.Д.Н., Абдуванабов A.A. Производные аиабавина й нитиепна - оЭраткше ингибиторы ксдпнэсте-рас. s/Хин. природа. Сое,тцн. 1938 К1 С.37-100.
12. Добреньков А,Г. ,.Тиляб£бв 3.. Станкевич Е.Ю. .Даглшв Д.Н, ¿бдувахзбсв A.A. АвтилсЕИнзстерагная активность карбсновых ионоэфи-ров li-'Cj!-оксчочроппл)эфедрина.. .4-С_/3-ов;оппролнд)псевдо?федрина и их подкегилатоБ, // Докл. М УаССТ 3223 "2 С. 34-35.
- з? -
. 13. _Гулямов М., Далимов Д.Н., Тилябаев 3., Каыаев Ф.Г.,Абдувз-хабов А'.А. Синтез некоторых бис-(2-мсрфолино-'1-мегидзтшговых) зфпрст карбоно'вых кислот и изучение их . взаимодействеа с холинзстеразами. //Хин.природы.саедин.1988 П2 С.239-243.
14. Добреньков А.Г., Леонтьев В.В., Тилябаев 3., Далимов Д.Н., АбДУЕЯХс^СВ А. А. Взаимодействие о холинзстеразами и конформационный 'анализ аналогов ацетилхолпна, содержаюшлх алкалоиды эфедрин и псев-дозфедри'н. // Хим.природ».соедин. 19SS N5 0.654-658.
15. Гулямов Ы., ТилябаевЗ., Абдувзхабов A.A., .Пудога Т., Еихрева -I.A., Годовиков H.H. Синтез и холинергическая активность бис (1-гшлёрдпно-2-бутиноЕнх)эфиров некоторых дикарбоиовых кислот.
yya6. jXiM.ls. 1989 Ü5 0.10-14,
. Л б. Абдувзхабов А.А., Григорьева Г.М., ТилябаевЗ. Метилсуль-фометплаты О-алкил-Ь'-^-атнлмеркаптоэтил) метплтиофосфонзгов как эффекторы для изучения холинэстераз различного происхождения. // Ней рахиШш 1988 т.?. Ш С.592-596.
IV. Срыбная Л.А, Тилябаев 3. Гафуроь М.В, Далимов Д.Н, АбдуЕЗ-хабов А,А. о-алкил-3-алкилфенпл'п!сфасфонаты,обладамдпе антшсарбокои-дэстеразной активностью. // Дркл.АВ РУ "1952N8-7 С.42-44.
. 13. Еаймирзаев С.С.,Далимов Д.Н..Тиллбаев 3.,Абдувахабов A.A., Кзнаев Ф.Г. Гафуроа М.Б.Синтез и антпхолннэстеразная. активность й-ш1кл'огексилфенилфосфо новых кислот, содержлаоншх гетероциклические радикалы. // Уad.Хин.я. 1993 Н2 С.55-59.
19. Кушиев Х.Х..Тилябаев 3.,Далимов Д.Н., Сравнительная характеристика холинзотераз озимой совки (Agrotis seg-eturs Schiff).//to-ут.тр.Гулисжшснаго университета. Cepwi общая биология 1993 вып 1. С.179-186.
£0. Тилябаеа 3..Ваймирзаев С.с., Кушиев Х.Х., Далимов Д.Н., Гафурсв М.Б. Новые фосфорилированные производные анабазина,лупинина и их антихолинзотеразные свойства. /( Хим. природа. соедон. "1994 М1 0.66-70.
21. Далимов Д.Н,, Гафуроа М.Б., Тилябаев Э. Кзмаев 5.Г., Абду-вахабов А.А.МетилтШкфоефонаты М-^з-окоилропилзнзеазпна - синтез, строение и чувствительность к ним холинзотераз. // Хим. прнродм. со едии. 1994 т с. 70-74. "
. 22. Кушиев Х.Х. .Тилябаев З. .Далимов Д.Н. .Тураханов У.А. Биохимическая кзрактерис'тика, холинзсгеразы озимой совки Agrotis seg-etuß Schiff;.-./'' Хам. природа, caecal. 1394 Ш С. 141-142,
23. Кушиев Х.Х., Дали» ras Д.Н.,ТпляОз?е 3.»Бабаев Б.Н., Абдува-/.-<tm A.A. обратимы? ингибиторы бутнрилхолннэстерази среди дпфенил-
киатов,свдердащих норфодш и пиперидин. //Доля. ЛИ РУ 1994 «1 С.29-31. • -. ■ *
24. Дэлнмов Д.Н., Тилябаев 3.. Гафуров М.В., Кушиев Х.Х., Ту-' раханов У. Синтез некоторых ингибиторов ферментов метаболизма"И их биолоппеск-ая активность. // Сгругтура и футашя природных и физиало-аинсспи аптгваых соединений Сб.научнлр. Нукус 1934 вып. 3 С.21-27/
25. Кушиев Х.Х. ,Тилябаев 3,Далимов Д.Н. Сравнительная хзракте- • рнстпсз ходиизстеразы и карбсксклэстерагь: озимой совки.// Гам яе С. 27-34. ... - ■ ■■
26. Тилябаев 3.,Кушиев Х.Х. .Абдуллаена JI.K. ,Дзлшов Д.Н. Алкалоида и их фосфорплиронашше- производные в качестве регуляторов кз-татитическои активности ходннэстерзз насекомых.//Хаи.природа.соедон. 19ЭБ Ш: С, 1S3-197. . ''"'.•■
.11. йаюрские свидетельстпа и патенты
27.Ä.С. -¡11560891 (СССР, 1930). Дийометилат бис (2-перидино-1-иетилзталоЕого) эфира адияиювой кислоты." обладавшей способности ян-гпбирогать-колинзстеразы./ Дзликов Д.Н.,Абдур&хабс® А.А.,Гулямов М., Тилябгев 3. . •'■••..
• 23.A.C. ?М Б 40430 (СССР, 1090) 1-ыетил-1-12-бутирилтиоэГ!1л')п)!-перидиний нодистый - субстрат для определения' каталитической ачтив-ясстй бутнрилхолинзстеразы. /Абдува>:абов Д..А, Верба Г.Г.'Дилябаев 3. Далиюв Д.Н., Добренькое А.Г.
29.А,С. М1642709 (СССР, .1991)-. Б-аякилтисбутнраты' субстраты для определения кзгампнческсп активности карбоксдазстеразы./. Тиля-баев 3.,Датемов Д.Н.'.Абдувау-абсв А.А.,Бабаев Б/Н; '
20.A.C. N1705177 (СССР, 19Э1Ь. 0,0-диазкил-8-пропарг1ШТИО$ос-фонаты, обладзюя;ге способностью иигпбирсвать активность карбокоилэс--терзгы. ./ Налимов Д.Н.,. Тилябаев 3., Кугушгва Л.И., Абдувахабов А.А; £з5аев S.h". • ' : •'"
31.Патент НИ 10 (УвР,1394) З.З-охспджои кпслотаси бпсхолпилп з1ир;шпвг дпйрдидй- - бутирплхолпнэотеразакинг - субстрата сифатида 'Шщлабоев В,Абдува;;обоз А.А, - Долшгэа Д.Н, 'Са«ш В.-А, ТОпузян В..0/
- 39 -
//Расыий ахборотнома 199-1 U2 152 б.
" 32. Патент И1109 (УвР,19'34) Холинэстераэага кргшн фасмкикз эга
• булган О-игабушл-ü-H- {н-пгаервд1и)и8опроикадех»шшн1юс4«на'гштг хлоргедрати. г Долимое Д.Н.Ррфурсв М.Б., шзлабпеа 3., ^бдур.а:-;сбен A.A., Космачев a.b. '.-раймий ахборотнома 199-1 И2 -1П16.
33.Патент и 'JJX1 (Уг?Р,19а4) Иеопропилкгиитийв.5ос4оиатлэрш1пг антихолинзетераг-а фаоллхкка эга булган. 0--а;л:нл-Ш-гекоамеъиг-шг
• !юн)$оефойзх. •' -гcftypса М.Е., Ти&кгйсев 3., Даше* Д.Н. // Раони»! ажбораздюма 1994 ¡<з ?2->';- б.
■ 34.Нзтгкт Hilf',-' ¡953) урптак каната каран аклрицпд
композиция. /Долимов Д. н. р шллаб.зев Ь., Бсбо'ь Е .11., Опиатов М.,
• Куввивзр Н.Д., Хсззг.мсеэ U.K.,// Расмий ахйорогилма iö&d К2(18) 116.
1И. Тваипи научит доиладпа
35. Абдувахабг.-в Д.Л,Григорьева Г.М,Тихяб:кь 3, /Сравнительно.:) исследование' гидрофобных, областей активного uempa колгоюстераз.' /1-я иш1$. биохимиков Узбекистана Ташкент,17-15 ноября 1386. С.3-4.
36.Далимов Д:Н., 1 илябзеЕ 3., Е»й&6ург Г.М. , Гафуров М.В.,Бабаев В., Абдулэева Л.К.,Карт£*ь ДЛ.. Камае!; v.!'. /г'.хрбоьюилпрованные. и фосф&рюнфсвшгеые' авкалоидн-синтэз,с грукгурп п их взаимодействие с холинэстераз5),!и. //" 14-я Менделеевский сгпзд по tttospjl и прикладной 5ШМГО1. läSa.T. 1. С. 4С8. . .
■ 37. Гафуроз М. Б., Тилябаев 3.. Даликст Д. Н, , Абдуваабов A.A. •Синтев некоторых фссфоридирг,ванных проигводных .<Ь/-оксипропилпппе-ридинз и изучение их действия на холинзетерави. И-о Ввеодш. коор-дии.сонещ.по пвотпцидам.Черноголовка 1-1-16 мал 1930 С.30.
.. 3S. Бабаев Б. Н. .Тилйбаев з.,Д&жшав Д.Н., Абдувахабов A.A. -Исследование холиязотераз и карбсксилэстерав в сея.':» с проблемой избирательности действия инсектицидов. Таи же С. 14:2.
39, Тилябаен 3. .Срьйиая Л. А.,Бабаев Б.И. .Дагагаа Д. Н.,АЗдува-.хабов A.A. Исследование к=рбсксилостераз печени свиньи с помощью тп-осубстратоЕ'п фосфорсрганических. соединений. // 5-я копф. бшхишшпа ресоуб.--iJp-.Aa. н Казахстана Тэикент 12-15 неябрл 1901. С. 103.
• ' . 40.Да:хи>.юв Д.Н.'," Тилябаев 3. .Кушиев Х.Х. .Еоймпрззез С.С. ,Ал-лаяияаова tt.К, ,. Гзфурсв М.Б. .Бабаев 5.Н. .Абдувахабов A.A. Испольво-
- 40 т
взние ферментов • метаболизма для анализа пестицидов различной химической природы. //15-й Мепделпеионий г,*еад по общей и прикладной химии. Минск 1993. т. 1. С 321-313. ' . .. '
41.К.ушиев Х.Х., Тклябаев 3.. Даягмов Д.Н., Турахаиов 7.А. /Свойства холинэсгераэ озиуой совки..// 1-я научи.нонф.бжш«м.об-ва Республики Таджикистан "Проблемы биохимии" Душанбе 21-23 сентября 1993. C.V6. ' .■•'.■.'
42.Кушиев Х.Х. .Лплябзев 3. .Далимов Д.Н.,Абдувахабов А.А., Исследования кэрбсгсилэстеразы' озимой и малой.(карадрины) наземной совок методом субстратно-ингибйторного анализа; (' 2-я конф.биохимиков Узбекистана Ташкент, гн-24 ноября 1993. С.55.
43. Tilyabaev l.,Dalirnov D.N, .Eabaev. B.H.,Kushiev Hb.Hb. /Use of thioesthers of alyphatic carbon acid for determination of pig liver carboxyl est erase activity. /■' 2-ed IUBMB conference Biochemistry of Cell Membranes. September 29-october 3. 1993 Bari, . Italy. P. ill.
44. Тилябаев 3.,Кушлев Х.Х. ,Далп>лов Д.Н. /Экологические основы защиты хлопчатника от вредных насекомых. // Сирдарё вилоятида экология таълим ва тарбия: муаммо, муло^аза ва такли#лар 1-чи юиюят илмий-амалий пенгаши. Гулистсн 1994. 66-6.7 б. .
45. Tilyabaev z., Saitrnuratova O.Kh;, Palimov D.N. /Characteristics of cbolinesterase activity of the brain neurous nuclei, // The international Simposium "Phisiological 'and biochemical basis of brain activity" June 22-24, 1994. St-Peterburg, P. 69."
46. Tilyabaev Z,Abduvakhabov A.A. Natural compounds in the study of catalytic centers of metabolic enzymes. // Third International Simposium on Bioorganic Chemistry. Dajorrys September 17-23. 1995. P.119
47.Долимов Д.H., Тиллзбоев 3., Абяу в&хрбов A.A.' Физиологии фаол модделэрнинг синтези ва келгусида улардан к^шлок хужалиги' ва тнббиетда фойдаланнш. // Кнмёвий рсантивларппнг синтез» ва уларии ишлаб чяиариш. Тошкеят,' ТсдлДУ - 1995, 161 б.
48.0ймзтсв М. ,Кувшщова Н.Д. ,ОтаназзроБ X..Далимов Д.К, , AS- дуллаева Д.К, Твлпбаев 3. Поиск синергдатоз карбофоса, фозаловз среди фосферорганячессзи соединений различной химической природа для подавленна численности вредных членистоногих. ■'."•Организм ■ ва муяртт" Респ. 2-чи симпозиум материадллри. Тошкек'т-: Фаз; 193.5 й, 1''4-;1?5 б.
- 41 -
49.33KTGE3 0,3:, Хгтаюва М., Гилябэев 3.-, Бабаев Б.И.,- Ку-ииев Х'.Х.Ойматев 1.1. Влияние некоторых фсс|лроргзшчес.ких препаратов на эстеразный и фссфокипидный состав оаииой поекп. Там но. с. 1b8-18s.
' БО.Опиатов М. .Эзнтоьв А.З,, Кшивлова П., 'Кукишсвз Н.Д., Тп-'ллбаев S., йасшгов Д. П., Ходдаег, и. I. Биодлгнчеек.-зд акшшхль л некоторые Еолр.стч!, кеу.лнпама действия ьосфарсргзнпческнх преплрнтов на озимую совку../_Респуб. ноп$. "Заж.ша pre-.Tcmril и снруяащоя среда" Андижан 28-2'Э Ы5Л J9»6 г. С. 55-53. "
' .' •' 61. Тплябаев 3. . Кушпев Х.Х., Яздшэь Д.Н,. 5стерзг>ы насекомых и их роль а соадашш средств загди'ти растений. •'/ 3-я кик-i. örai-жии. Узбекистана. Тавкент 11-13 ноябри 1990 г. С. 73.
;f*5S. AdoslvaKhahuv A.A., Tilysba-vv 2, H-aural rcKr.pcur.ds and their-derivatives in study of the rnechcrusK oi tl.e neti.Pnlic enzymes furtctioninp./<Scre-omlI rii.tir national лн.роьча,.: оГ Ihr: niiMiistry of na tiiral cmpoiinds. Eskisehlr- Turkey, 22-21 ootoper, h<3ö, P.iis.
'53;Ti'lyab3tv Z.,. Abduvakhabov a.a. Chesacal ¿od» lest ion oi Anabasis aphylia alkaloids and study c,f their physiological activity. Тан ш. Р.1б0. •
т и л л а в й е в- 3 0üt ж о н
■ "Зараркукандн х,ашаротлар эстераваларишшг узига rfiс булган cy6cíрзтлик.мооапги вз ннгибитерлгрга ниоозтаи сееувченлигшшнг хусуснятлнри" мавзусидаги докторлнк . диссертацилспкпнг. к^ск^ча мзгмуни
'••'' Уибу ив ззраркунандз .хашаротдар; чигнрткз, сувзрак, кузгп ва кичик курук^ик тунламалврининг зстераза спектрнн» тадн,и^ этишга багишланган". Чигиртва ьа суеарак ■ нерв ту^шларида колинзетераза (хэ, к.ф,3.1 .■ i, i) ва .карсс-к.пшэстерва (кбэ,'К.Ф.З. 1л.1.)-фзшагати аникланггш; 2-3 вз 4-6 били куртларнинг, щунингдек, тунлзмаяар капа-лакларинйнг бои ва • кукрак . н^смларидан тайерлангз» гоиогенятлар так л или шуни курезтднки,' 'боа' щкида адетнлхадпнэстераз.з (а.хэ,к.ф.з.1.1.7), кукрек к^смида эса БутирилхслинзстераззХЕуХЗ, к.ф.з,1.1.8) ва кбэ' (к.ф,3:.1. 1.1.) мзгжудэкая. Акикванган холи-
H3CTepa?3.iap ysara j^od cyScTpawiap -.K3p0otf KWGJiDTaaapHiiHr niaKanim a^npaap:? 9psa\wfla, KE3 aca cwpKa, nponHoS sa Moi? KiiciOTaaapHHar-S-aMut afepaapH sa iiapa-KHTpoieHMaaueiai epaaMijfla, iifleHTtifiiKeysifl , KSMJinran. ScTepaaaaap, niywiHrfleK, MaHTji^aw .ajiwajunHyDUii CTpyKT^paiiii Oiip KpTDp 'iracfopopraHHK 6npi!K!^aaap. TaKiipura'nesyE'iaHJim'h acocnfla K,ai.i ivjeHrmiiiKai^H K^uiiwraH. • • .
to"mai!3HraH cyficTpaTlaap, jmniSHTopjiap e3 yji3pHiiHr actepaaajiap GiuiaH yaapo TatcupnHiiKr KHHeiiiK napaMeTpaapii opaqiisarw 6orjiaHimiiiHHHr cojimmipMa TyaiunH-OyHKUHOHaJi Ta^iimi- cyr awKByBUis bs ^stfiapoiitap X'3, KE9 ■ KarajiimiK MapKasjiapH TonarpafjHacnAa Ta$QfcyT5ap MSBxynaiirMHii i:ypcaraJiraH. ypramuiraH gcTepasanap 3'iJxiieKTopJiapii. opaciifla X9 sa, KB3 cyCcipaTaapn Ba HHriiQiiTopjiapHHiijir ^aBi^yjioHzta cuppa _ . cnemi$HK rypy^ti aHi;:>.ianr3H. ^ ■ - '•'•.■'"
OjihS Bopjuraa Tanr^iKpuiap. Hatriwaciwa Kprnicn- xy»annr«ra aapyp OyaraB- HHrsi OiioaoniK GHpHKM^apHirBaratMaHriipKiB yyya liy.i ouyB-uh, Hocnemi$viK eciepaaaiap . ¿a X3 ¿¡aojuuiriiHii cacatfiTilpyB'W. HHoeKTituKflBapHiijiHr asxapm TatcjipuHK oim-ipyEra noaiiiyHKivioHaa HHra6ii-Topaap xochji k^mim itMKOHiffiwiapH w.aBAy/!.-nrn KypcaTiuirsH, '."
TILYABAEV ZAITJON -
The peculiarltes of the pests esterases . substrate specificity and sensitivity to\ the inhibitors
' '•• SUKHU-Y '•' '
The work is devoted to.the stude of the esterase spectrum of the pests: locust (Loousta migrataria nugratcrioides L.), cockroach (Periplsneta arnericana t.) arid wis screech {.Agrotis segetum Schiff, Spodoptera eig-ua Hon.). It is established that, cholinesterase. (ChEs E.G.3.1.1.3) and carbosylestrase.(CBE, E.G.3.1.1.1) are functioning-in the nervous tissue'of-the locust and cockroach.' The analysis of . boncg-enates, made from the head and/pectoral parts of the caterpillars of 2-3 arid 4-5 ages, , and also butterflies of'the quls screch showed that there is .acetylcholinesterase (AChE, E;C;3.1,1.7). irrthe..
:cerebral- _part," and butyrilehplinesterase (BuehE, C.E.3.1.1.8) arid CBE lri the. pectoral one.. •
- The discovered. chclinesterases are. identified with the help,of 'specific substrates - thyocholinic esters of carbonic acids, and CBE - with the help of-S-alkyl esters of. the acetic," propionic and oil acids and para-nitrophenilacetate (p-NPA). ■ Esterases are identified also on the -basis; of sensitivity to the action of the series of phosphororg-anic compounds (PDC) with logically changing structure-.
"The comparative structurally-functional analysis of the relationship:between the structure of the applied substrates, inhibitors arid .their kinetis parametrs"of the interreaction with esterases showed the existence of the differences in topography of the man-maliapfs and insect'3 ChE and CBE catalytic centre. Among- the studied esterases effectors - the group of extremaly highly specific ChE 'arid'CBE substrate's and inhibitors is revealed as a result of the carried studies.' The principal possiblity of development the of po-'lyfunctiohal inhibitors,, capable to suppress the activity of nonspecific .esterases, ' CbE arid of potentiating- inf luence on the toxic action."'of. insecticides, that opens the perspective to construct new biologically-active compounds, -'necessary for the needs of the agriculture.'.
■ A^s
