Исследование свойстив холинэстераз и карбоксидэстераз озимой (Agrotis segetum Schiff.) и малой наземной (Spodoptera exiqua Hbh.) совок тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

АКАДГ^Ш RâJK PEXOTBCSCI УЗБЩШСИН

пкстпТУТ ЕГОСткГСХЯССП ZTZ'TZ клени академика A.C. Cáí^tOBA

Р [ ¡j Q Д На правах рукописи

1 О АИР 1995

к i ш à й s

Хабибяов Хокибобоовнч

7Ш 577.15.632.7

ПСШДОВШЕ СВОЙСТВ Х0ЙЁЭШ?13 а ШБОКСШШРАЭ ОЗШЮП (AGR0ÏIS .S2GBSUÜ SCSIfF. ) Я ШОЯ НДЭШОП ÍSPODOPSBRá timk ВВП. i созогс

02.га.10 - Опоорганическая хдаая, шшя прпролшгх и физвологичэсгт активных веществ

АВТОРВЭВР.ДТ

диссертации па соискание ученой степени кандидата биолопк"^"^ паук

Tfciraîiï? - XSÎ3

Работа выполнена в Институте биоорганической химии имени академика А.С.Садыкова АН Республики Узбекистан

. • Научные руководителя:

доктор химических наук, профессор Д.н.Далзшв кандидат биологических наук, старший научняй сотрудник З.йшйаав

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор А.А.Ахунов кандидат биологических наук, старший научный.сотрудник Э.с.Садиков

Ведущая организация: Узбекский научный исследовательский Институт защиты растений

Защита диссертации состоится " & " Л _ 1995 г. в? часов

на заседании специализированного совета Д ОК.21.21. при Институте биооргашнеской химии имени академика . А.С.Садыкова АН Республики Узбекистан.по адресу: 700143, г.Ташкент, улица.Х.Абдуллаева, 83.

С дассертацией ношо ознакомиться в библиотеке Института. Автореферат разослан " " ^Иалт**^ 1995 г.

Учений секретарь специализированного совета у• - ' •

докт. хш. наук, проф. н.И.Бараы

СЕЯШ ХШКЗШЗСЕКА РАВОШ

Аггеуа.я.яюсть npeümai. Одним -да резервов увеличения урожая хлопка-сырца является сшкэнке потэрь. оч наиболее опасных и шнро- • ко распространенных на посевах хлопчатника вредителей; хлопковой (Яeltothia artnlgem Шт..), озимой .(Agrotia aegetum Schiff.), малой наземной- (карадрина) (Spodoptera extqua Htm.) совок и др. Применение химических средств защиты растений слукит одним из вазкных факторов увеличения ураяайности хлопчатника, фосфороргани-ческие инсектицида занимают одно из ведущих мест.в мире в борьбе с вредными насекомыми, однако, существувдий набор средств борьбы с членистоногими не удовлетворяют требования сельского' хозяйства из-за того, что многие вредители.быстро приобретают устойчивость к применяемым инсектицидам. - .

Токсичность фосфорорганяческих и карбаматных инсектицидов по мнению многих.исследователей зависит от способности этих препаратов вызывать блок каталитической активности ацетилхолинэстераз (АХЭ), а устойчивость насекомых к такого года инсектицидам связан с индукцией ряда метаболических ферментных систем таких как, кар-боксилэстераз (КБЭ), глутатион-З-трансфераз, океидаз смешанных функций (ОСФ) и др. Поэтому перспектива' борьбы с вредными популяциями, насекомых зависит от всесторонних исследований свойств АХЭ н метаболических ферментов, механизма' их Функционирования, локализации и динамики' активности, а такте от, химической природы ингибиторов, способных эффективно воздействовать на функциональные свойства этих ферментов.

Цель и задачи работы. Настоящая работа посвящена' исследованию субстратной специфичности и чувствительности, к фосфорорганйческим ингибиторам ДОИ) разного строения ХЗ и КБЭ озшой и малой наземной совок в онтогенезе ее развития. В соответствии с'этим .в задачу исследования входило: '

■ - установление локализации й .дийамики активности ХЭ и КБЭ по фазам.развития озимой и малой наземной совок;' ■

- изучение субстратной специфичности ХЭ к КБЗ.;

- установление pH и температурного оптимума для ХЭ и КБЭ;

- разработка мнкрометода определения активности КБЭ;." разработка 'способа- выделения КБЭ из- гомогенаа' i грудного отдела озимой совки..- '.'

- определений антиэстераъных свойств ряда ®>И при их взаимодействии с ХЭ и-КБЭ; •• ■ •

Новизна, и практическая значимость работы., О помощью мртсяоь ферментативной кинетики установлено наличие' ХЭ И КБЭ. у

— —

озимой и малой наземной совок. Показана динамика активности этих ферментов в онтогенезе развития совок от стадии яиц до бабочек. Два типа ХЭ - АХЭ и БуХЭ локализованы соответственно в головном и грудном отделах совок. КБЭ-обнаружена только в грудной части вредителей, На основании субстратно-ингибиторного анализа дана характеристика строения каталитического центра ХЗ и КБЭ. Выявлены специфические субстраты КБЭ'в ряду тиозфиров карбоновых кислот и избирательные ФОН в .отношении ХЭ и КБЭ. S-зтилбутират рекомендован в качестве специфического субстрата для определения активности 'КБЭ колориметрическим методом. Разработан способ выделения КБЭ из гомогвна.та грудного отдела озвдой совки с использованием в качестве гидрофобного сорбента октадецилсилансилахрсыэ. Проведенные исследования открывают ,перспективы душ разработки научно обоснованных рекомендаций. в создании физиологически актнвяах земств, способных регулировать Ёэтабояическне прцесси, воздействуя на каталитические свойства ХЭ и КЕЭ локализованных в организме насекомых. ■..-"...'■' ;

АпрсбЕщая дкссвргаща. Результаты диссертация докладывались и обсугдались на Ш Кевдрлэввскоы съезде,по"»общей к прякладоой :с:с-мий (Кшск, 1993), на П-ол конференции биохвшков Узбекистана (Таякент, 1993), на Х-, ой конфорещща -биотического об-дества Ре.спублшш Тад2ы<истан (Дуванбо, 1993), на конференции молодых ученых -раопубдаи Узбекистан, посвявдщоЯ цамяти энтомолога, чл. корр. АН УзССР В.В.Яхонтова, на J-оы Кэадународара сишооиукэ по ХЕкии растительных вегрсгв (Tassom, 1994),'на конференции колола! ученых шгайдансй'-Б-гОй _1Ч>10ЕЗШ нрмнятпя- закона.о государственном язе® в Узбекистана (Ёойбрьт •1594), на 2-ой ковЕзрэвдни шлодкх -учета-.а специал^сюз Республики. Узбекистан, "Упп'-ЭБ" посвящоввоЗ памякг сааЬэкгмз !1.Е.НабЕава (январь, 1935).

I^flbsssisi. По катерззлг::, даоевргацай опубликовано 5 сиачеВ и 6 тезисов. . . .

С^ру^щ, и обьса psSosa. Работа излоаона на 130 страницах иаайвоплсвога. текста и bsxhest в себя введение, обзор литера-чурц, опассаао .катодов есслодйе8ЕИЯ. -лзлотдэшьэ и обсуждение акс-вэрканголыш лзэдаг, заксяоши а ¿аиодо. Сшхсок. свшрзиура со-деряя 144 Бйгшх-дтя» :э ice 85 osjpycosaux авторов. Диссертация докуцаяткровепз р-эдт&а и' 39 таблицами.

кжаялш пешщпвдаз '

Што^та*» п што,гл- o.i'-f'FTO'-- псспод.'ят^ай цодвизь cvwin я

малая наземная совки, которые выращивались в лабораторных условиях. В качестве корма использовали листья хлопчатника и люцерны.

' Исследование свойств XD и КВЭ производили у гусениц (2-3, 4-5 возрастов), а также у насекомых предкуколочной, куколочной стадии и бабочек. Для определения активности ХЭ и КБЭ готовили гомогенат из грудаого и головного отделов из расчета I г ткани в 9 мл 0.05 М фосфатном буфере (pH 7,5), который подвергали центрифугированию при 10000 об/мин в течение 20 мин на центрифуге фирмы "ВеКшап", и надосадочную часть использовали в качестве источника ХЭ и КБЭ.

Активность ХЭ и КБЭ определяли при 2D°C pH - 7,5 с испсцьзо-' ваниен в качестве.субстратов тиохолиновые эфяры уксусной (ATX), пропионовой (ПТХ) и масляной (ВТХ) кислот - для; ХЭ, паравзтрофз-нилацетат (п-НФА), Д-алкиловые эфары карболовых кислот - для КБЭ. Тиохолиновые эфяры - препараты фирмы "Chemapol", п-ЮА, эзернн, прозерин коммерческие препараты, а S-алкиловне эфяры карбоновях кислот и ФОИ синтезированы в лаборатории тонкого органического сш1теза физиологически активных веществ L^OX им. Садыкова A.C. АН РУ (см.табл.1).

Основным методом исследования каталитической активности ХЭ и КПЗ служил элориметрический метод Эллмана (Kliman 1961), основанный на измерении скорости образования желтой окраски при ферментативном гидролизе субстратов с помощью Б.Б'-дитиобис-^-нит-робензойной кислоты) (ДТНБ).

Кинетические параметры взаимодействия ферментов с субстратами. (7ма1 и 1^) определяли по методу- Лайнуивера-Еерка. Бимолекулярные константы скорости (kg) кнгибирования ферментов ФОЙ■расчитывали по формуле kg=lg^- где [1] - концентрация ингибитора, t -

время в течение которого ингибитор взаимодействовал с ХЗ или КБЭ, Vo и Vt .- скорость реакций соответственно до., я после инкубации ферментов с ингибиторами.

Опыты повторяли 3-4 раза. Статистическую обработку полученных данных проводили по Мюллеру (Muller К.П., 1960). Для оценки статической достоверности различий результатов использовали.критерий Стьвдента. (Рокицкий П.Ф.,1961) До 0,05% уровня значимости'. .

Выделение КБЭ из гсмогената' грудного отдела озимой, совки осу-цестЕшлли при помощи гидрофобного сорбента октадецилсилансила-хрома, синтезированного к.х.п %н.с. У.ИногамоБым.

Плоктр^ф.-ритпческое рязде ie фракций КБЭ проводили методом Хошимотч (Tt'.''-?h!H 'tc Г., 1970 1С? полиакрйламлднсм геле. Белки в гелях гч.чьляли, испольпуя к] .¡тель кумаси .(Остермая Л.А.,

Таблица 1

Назваааа в структурные формулы использовании!. ингцбгторов

Назвашз

Структурные фор^/ли

Эзе'рш

Прозерад

O-D'PiiJi-S- ( р-эткзркштозтая ) -ыэпияхсСоофоазт (Гд-7 )

. Д^ОПрШИЛфТОрфОСфаг

/ . CKj

chj

(CEÍg^CWO-Q 3

HjCrií-CHj • CH3V0 ¿Hi

СЛ^С/ VC,E,-S-C л-

С. su • ¿14 с. О

i-C3ET0/ V'

îiV \с

RO

-CHgp-í

О, О-даашсш-Б-вшггупааЕа-тгофосфатц

'тез П = : C2iîô (¿Д-2); С3Е? (¿Д-3>; C4Hg ШН); С5НП (ДД-5)

с6н13(м-в>.

' 0-15ЕЩОГ0КС2Л-8-Щ>ОДЗрГ2Л-

фавшгёйо^эсфэзаз! (СБ-49). Çjr

0/PsS-CHo-CsCH

О^ЕТЕЛ^-Р-Бишагабаазкил- сб%\р/° ■ j^4) фзЕВЯгаофосеона? (Л-4) C6HnV

. О, O-^ia.'íi^-S чзу vüuni-пэхеддакофзефаш гдз'Пл: С23% (БД-&4);--Оз^ (БД-Б5); C^IIg (БД-5в); 1 04íig(БД-57)

не/ Vck,-Ç=C-CH2-\__)

О-цдакш :. iM-S-nponnproB-

Фтолтаг4оагонз1 (сп~5Q) f Vo7 ss-cîu-(;?ch

1981). Белок определяли методом Лоурл (Imry О.Н., 1951).

Цдаигвфаияцяя зстерэз з субсгретлой сзэгД^рзносгть

Гомогенаты голов и грудной части озимой а малой наземной- совок' катализировали гидролиз АТХ. ПТХ, БТХ, п-НМ. и Б-алкшювыё зфари уксусной, пропионовой и масляной кислот.. Ферменты голов совок расщепляют АТХ быстрее, чем ПТХ, а совсем медленно-- БТХ. Ферменты, локализованные в грудной части совок . гядролизовали все ■ тиосубстраты, которые были использованы при изучении фзрмбнтов головной части насекомых, однако, в отличий - от гомогената, 'приготовленного, из голов совок, 'фермента грудной'части . с . високой скоростью разлагают БТХ, несколько медленее ПТХ и очень медленно - АТХ. Поскольку $ер?ленты головной и грудной .части гидролизовали, тиохолиновые субстрата и rot каталитическая активность, ингибирова-лась специфическим ингибитором ХЭ,' эзерином,. в концентрации 2,0xIQ~7.(М),.ферменты; локализованные, в головном й грудном.отде- ■ лах, были отнесены к типу ХЭ. Бигюлекулярные'конйанты скорости взаимодействия - ферментов со. сггеци^лчесютш ингибитора!,®' (см.табл.2) при.использовании оптимальной концентрации субстрата (АТХ для ХЭ голов и. БТХ - для ХЭ.^рудйЫХ отделов), отличались, что свндетельстг'вт о наличии двух типов ХЭ-. Зави&глость ХЗ.активности от концентрации' тиохолиновых субстратов приведена на ргг'Л. Активность ХЭ голов и груди совок угнетается избытком АТХ, БТХ, и ПТХ. В отличии от типичных СуХЭ, ХЭ грудных'частей совок тормозится при повышений концентрации тиохолиновых субстратов. Кинетические параметры для гидролиза тиоэф^ров приведены1 в табл.З-. Серпента голов попек по сгтсссЬноста гидролкзовать. АТХ. яапошшавт XD нервной ткани других насекомых'й АХЭ млекопитающих. ХЭ голов насекомых, гидролизующей с наибольией скорость» АТХ н чувствительной к действию эзврина, можно отнести к. АХЭ и.-классифмшровать как ацетилгидрол.аза ацетилхолина (Й;Ф.'ЗЛ.1.7).:. /■ ' >'

ХЭ грудной части, .совой' с высокой скоростью гидролизует БТХ, она таКке чувствительна к деЙствйй эзе'риаа, и ее «окно' классифицировать- как йу-ХО аго!.п!-идролаза.а!ялх0яшоп (К.Ф.З.ГЛ.О). Одпа-ко. в. отличии от всех, известных ХЭ, БуХЭ совок очень медленно, гидролизует АТХ и ее активность.угнетзеТся высокими концентрациями субстратов. :'. . . ■ .'■,.•■'- :■-'-'■ .-':v';. ----Исследований зависимости каталитачоско* активноегя Aró и ЕуХЭ насекомых от телпэрзтури п рпрагхщяояпсй cpéjpi показйло, Гчто для проявления .'максимальной1 Ькттн&сти ^необходима- температура. 40°С и -píl • - 7i-i. 'D'rr 'результаты - шказывайт'-,.. ро.. озя-йя .-и. мэдая

6 - .

" •____Таблица 2

Чувствительность О^, Н та ) ХЭ озимой совки к ингибиторам различной химической природа

Ингибитор!. • 1 , ХЭ головной части ХЭ грудной части

' А1'Х ■ Ы'х

Прозариы 2.4Ш04 2,1хЮ3

Гд-7. • 4,74x10® 2,42x10

• ; Л-4 6,43хЮ4 9,6x106

ЕД-Бб I,42x10® 2,70x10®

Сг^^О/ с ©г -, - - ,р2

Рис Л. Зависимость активности ХЭ и КБЗ озимая (А и П) и малой наземной совок от концентрации субстратов. Л - грудная ча-гь', Б -головная часть (I - АТХ.2 ПТХ,3 - БТХ.4 - К5-!.Я10зН,гг(ЙЯ''-!!Г)}).

И - скорость ферментативного гидролизасубстратон (шл.-'ль/м.с.чпс), , рЭ - отрицательный логарифм молярной коншгнтрзшш -сузетротои .

«

8

«

«О •

• Ч g

0

1

з

ч

£

о

ьР

L, rt е- со со о> S S88

» • -. • • ■ m m m

о» о to «ojm ' cocjîm

ti U1 - <D СО fct a 4* to . ниш

со ш 1

Ч ч-п.

со -ч" из со (о

incito hÎcj cï со со n

8

aj еч S м «i «о со N

• А » * » «I Л »

Ci ч? H со м о ло -ч* м

0

s

H . «о С . Я S5 Я .' 8 S S

• ~ с» «>'*.• • * - * «

m k n со ю <0 со ip <0

о и

t- t-î со

о So V о S о

• • - *v' ф . » •

м со со

см й й a s 8 g s s • • » • * « •

И О Ö « O O *Nn

ih Q o ia о ш ' <ft os to

я К- • • • • ' • • •

rttq с* tt tacots

¿ i о

У sis g g g

il « ai

il

I ^

lu 'è

£r •■■ 8

3, ^

Щ Ô

s 4 if

£?■■• 8

f Q

»

наземная совки приспособлены ■ к реишу высоких температур, характерных для Среднеазиатского' региона. ,

Дешкзка. 8ЕШ5ИОСТЙ 23 г: 1ЩЗ 'озжой и калой казенной совок. Локализация к динамика активности ХЭ исследована го фазам развития срвок. Результаты, этих исследований, представлены в табл.4. ! / ' Таблица 4

Активность 23 озимой ж малой наземной совок по фазам развития

вазы развития Активность в относительных единицах ' >

Озташя совка Малая наземная совка |

Голова Грудь Голова грудь 1

Гусешвд* . 2-3 розраста Гусеница . 4-5 возраста Куколки ' "Бабочки. • Яйца 0,25 . 0,28 0,45 0,87 } " ' • . ' ! 0,61 0,83 0,49 0,92 ! :''■ ■■ V' .■ .. ■;■■. ■ 1 Активность' "ее обнаруживается 1 1,0 / . 1,0 , 1,0 . 1,0 ; Активность не ^ обнаруживается.^ j

•-/лрпшно.оть ХЭ по цэрз перехода от,-фазы гусошщ- к фазе бабочек возрастает. Следует ответить, отсутствие ферментативной активности да стадки куколок н яиц, У куколок Отсутствие ХЭ активности, ви-<дтз, вызвано процессом гистолиза, в результата которого исчезают кзотив -фзнкцаоашшо вайыа. системы .насекомйх: пищеварительная, Е-пдокрнякая,. нервная тГдр г Отсутствие активности ХЭ на фазе яиц, ■вероятно, тшо объяснить нес^р^шровШноетьа.тречис^енкых'функ--цаональшх систем. Тагам образоь! -ХЭ; головного и ~грудного отделов .отличаются щштичесвдки парамзтрами,; кзстс-ы их локализации по фазал развития йасекс:лых-.

Крош тиохолккоЕих .'эфаров гомогенат грудных отделов соеок эф--фзктишо расаегшиш п~ШД'я' 8-алкиловые вфпрн карбоновнх кисло! (рис.2). Гокогашты голов нз обладал1Гсвойства!Л1 .гидролизовиватс эти субстрат«. Что'Ьзерва в концентрации, кото-,

рая.торйзнла' щстйвность АХЭ и Бх'ЗСЭ совок, не вля&п'-щ активность фэрцэвта, .•■ хфвн^вдэго :у^астия 'в рйдэоленйи п- ®а и .тиозфиров. Отсвдэ милует,- что щ м» пртптщт ''участия ® тэдрлэдзе этих суй -•стратов. . Ггдаэ п-НМ '¿фшошисй.. дйя -Есслздоранля. кчтзлатичоскиг свойств.'-таракгша (¿Ней., 1979), саранта:.(риибасп--Г>,1^0). ко-мйсое 'Кеттррмац' А../ • и. другрх .. иэсексщ.?. .ч V• ллгллояке

в •V) СНд-С(0)-5-11 Г С2Н5С(0)ЗН - 03^0(0 )ЗЯ а,

7 6 Б 4 3 2 : V?'

I 1111111 г 1 1 .1 11 1 я

°3 4 5 С6 °7 8 9 СЮ 4 1_С4 Сб С2 С4 1-С4 Рис.2. Зависимость скорости гидролиза астатических тиозфиров карбоновых кислот КБЭ печени свиньи (I), озимой (2) и малой наземной (3) совок от Я.

эффы карооновых кислот , при изучении КБЭ печени свиньи (Тилябаев 3. и др.,1991). Это дает основание считать, что в грудном отделе, помимо ХЭ, локализована еще и КБЭ. .

Каталитическая активность КБЭ была и-следовала по фазам развития совок (см. табл.Б). Наибольшая активность КБЭ характерна для бабочек, а наименьшая - для гусениц 2-3 возраста. Как в случае с ХЭ, нет активности КБЭ на стадии куколок и яиц.

Таблица 5

Активность КБЭ озимой и малой наземной совок по фазам/развития

Фазы ргзвития Активность в относительных единицах

Озимая совка Малая наземная совка

Голова Грудь " Голова Грудь

Гусеницы 2-3 возраста Гусеницы 4-Б возраста Куколки Бабочки Яйца Активности нет . 0,50 Активности нет 0,71 ' Активность не Активности нет . 0,72 Активности нет 0,00 обнаруживается

Активности нет 1,0 Активность не Активности нет 1,0 обнаруживается

В исследованиях, посвященных каталитическим свойствам ХЭ капустной мухи показано, что кроме холиновнх эфиров этот фермент гпдрслизует п-НФА (Краснова, 1991). В этой .связи нами подробно изучена кинетика гидролиза Г>-алкиловых эфяров, кислородные аналоги когорчх исподк-„укггся при исследований каталитических' свойств. "ЕЭ чп'ч'.от'тачпих и пас»деч«1х (Кг1е11, 1972,' Тилябаев 3., 1908).

Проведенные исследования по гидролизу S-алкиловых эфиров основаш: на измерения скорости образования тиолшртов в результате расщепления 'эфиров под действием КЕЭ с помощью 5,Б'-днтао-оис-нйтробен-зойной кислоты колориметрическим методом Эллмана (Ellman, 1961). Преимуществом использования S-алкиловых эфитов является, во-первых, то, что они гидролязуют только КБЭ и с большей скоростью, чем iiriïï'â, во- .вторнд, применение высокочувствительного колориметрического метода позволяет изучать свойства КБЭ при малых ее содержаниях, что особенно ваашо при исследовании ферментов насекомых , которые имеют очень маленькие размеры, а содержание в кк; фэркзнтов к баз того нпчтоано мало.

Как показали проведенные эксперименты, КБЭ озимой и малой на-зошой совок с высокой скоростью гидролязуют все исследованные субстрат. Скорость их гидролиза непрерывно войрастает. В отличие от ХЭ совок швыаение концентрации субстратов не вызывает тормо-ïseîîh активности КБЭ ■ (рис.1), что также наблюдается при гидролизп п-ША КБЭ другими насекомыми. В' гидролизе этих субстратов могут принимать участие не одна КБЭ, а'песколыш. Поэтому была предпринята поштка выделения КБЭ из грудного'' отдела озимой-совки г опродатвш ее фозщо-зкдаешк характеристик., КБЭ является гпдрсфобшазз бэлвеми и козгому для ее 'вделэнкя использован? гя^рофойш хрркэтогрсфая (сорбент штадецилсилаксаиахром)..

Вдаязн» 833 cÉskû созш. На колонку с сорбентом, предвари-•гелию .-урааноЕваогауа. '0,1й' растворзц трифгоруксуспой. кислоты {'Ш), Tia":oc7iEi_rc:.:orcH32 грубого отдела озгкой сс>аки. Экстракт в тэчеши 13 часов иосколшсо pce лгпопускалд upá помощи перистальтического' пасоса. ШссфЗлрозшш бзхлш'уд^гадп. нрошваштем колонки О Л fî раствором Ш4 СорбпроваШшо бзлаи злшровалп раствором изо-нрепзнол:; а грэдажге его концентрации от 10 -о 100% (рио.З). сбохоэ шоошш шгшЕсость КБЭ со'нарушшзотся при алвдм 60% изо -пронгд^ологл. 13 годе прэдогршлша •.шжершдеатов было установлено, что нря уиаршшгц (гвшоратура 30-33°С) раствора взоцропаво--дз аетпвиоезг- КБЭ нрхетлчеекзг m цзпопялась. Поэтому в дедъне&шг sa пзрзой стсдая от растззрятзля кзбс&яялись с использоьашюи ря-тернаго'нсплрй'гслп. Ос~агок подоргад: лкфшдюИ супка. Шт.. отрод&зкш пктазаэстк: awr© фордепга ?ст8воьл«як>. чк боло. тятя с 83 граиюй очиецш;.,.

&£чкгрофорттскоо г.овдодоегшпо кдалсккой яго !ю::г^)йло пс-Ш'вт ОДНОЙ ПОКОСЫ с ВНССКОЯ КПЗ «КТШ320СШ), í.ü'jopftí! г;ЛЭЛа р?.гярнуп г.эосу 61000 Ао. Уладьяач оитквзость 'loiv'-vco 0.2Г

Р"! а И л

а

а

сп

4,-?

30 $

60 «У- 120

Объем (ш!)

150

А.*

> ^ "с -1 ■■•.чялд,;

*

ч»1*

Л

1 I

г.- .1

1

Рис.3. Профиль эадии КБЗ грудной части озимой совки рсс?зорс;г изоцрспанола и ¿лектрофореграмма очищенное КБЗ (А - белки маркеры, Б - очинённая КЕЭ). .

Е/ыг белка. Бее Б-здкиловУе эффы эффективно разрушались под дей- " ствием этой КБЭ. С наиболее высокой- скоростью гидролизуется Б-этиловый афир масляной кислоты (КБ-14), который предложен нами в качестве селективного субстрата при определении каталитической активности КБЭ (табл.6). .

Для детального изучения ферментативных свойств и сравнения выделенного белка с годагенатом грудной части озимой совки были проведены эксперимента по определению констант ингибирования с использованием ингибиторов, отличающихся своей химической структурой ^габл.7).

I Таблица 6

Кинетические параметры гидролиза субстратов НВЭ. озимой совки

■ ■! " ' Субстрат гоаогенат очищенная кш

«м ^хт т (Ы мг ■1час"*) К,, (И) ... ттах т (М мг'-'-час--1)

КВ-14 П-ША 2,65хЮ~3 3.20Х10"3 ■ 8,1хЮ_6 1,02хЮ~б 2,81x1О"3 З.С0Х1СГ3 63,0x10 ° _ 4,БЭх10~5

• • • Таблица 7

Величина констант .(1^, хЮ^Г^мин"1) ингибирования КБЭ ■ озимой совки при использовании ингибиторов . различной структуры (субстрат - КБ-и)

Ингибитор " Гомогенат Очищенная КБЭ

Гд-7 ^ - —650 • 660

ДФ9 ' 1,93" 2,12

СБ-БО 0,488 . < .0,52

ТШЕ51 .образом, на основании анализа полученных результатов еоеио 1;онглатаровз"ь, что в организма озимой совки локализованы два таза ХЭ и КБЭ. &ХЗ обнаруживается в головном, а ВуХЭ в груд-пси отдел®. КБЭ зжко локализована в . грудной части вредителей.

ЧггзэдтгвяЕсо^ь ¿3 КБЭ. оззмЗ к иахсП назкгзй сокок г. .

Общи доя ХЗ и КПЗ яелягтея йжжирование кх каталитической ектевлостк ФОН.

• В табя.О иредставхош давше по егжяяюо известных вяшйгго-рзв ХЭ таких как эггсрвя, щязбрпн, Гл-7, Л?? н*» квталтпэскио сгоЗотва МЭ а Б|ХЭ. огк-'ой созкн в онтпгж^г.

ячлзетсч ДЭКОК«.* »^КТЯГЯ^' К".-07>«!ТИ»!Д' ВПГКСтрг».

А1Э эритроцитов крови человека (ИЗч) и не избирательным ингибитором АХЭ и БуХЭ озимой совки, .^причем величины констант мало зависят от фазы развития озимой совки. .

Прозерин, синтетический аналог эзерина, является специфичным ингибитором АлЗ озимой совки, зависимость величины от фазы развития озимой совки четко выражена для ВуХЭ. Так. величина к^ для БуХЭ гусениц озимой совки (2-3 возраста) в 30 раз выше, чем для БуХЭ гусениц озимой совки 4-5 возрастов. Для бабочек эти различия составляют лишь в 3 раза. ,

Четко выракенная специфичность действия по отношению к АХЭ озимой совки оказывает Гд-7, Наиболее эффективным ингибитором ХЭ

Таблица 8

Константы скорости ингибирования хЭД^М^шщ-1) АХЭ и БуХЭ озимой совки стандартными ингибиторами

Инги- Теплокровные Озимая совка

би- АХЭч БуХЭл 2-3 возраст 4-Б возраст Бабочки

тор АХЭ БуХЭ АХЭ БуХЭ АХЭ БуХЭ

Эзерин 85 - • 2,8 3,0 2,0 2,1 1,6 "1,2

Прозерин 9,4 - ■ 2,4 0,21 0,22 0,007 0,2 0,07

Гд-7 5,8 0,44 47 2,4 47. 0,05 40 . 0,03

ДФ$ 6,8 730 5300 1600 '800 520 - - 5700 340

озимой, совки является ЯФФ. -По своей"_антиацетилхсиш!Эстеразной активности он на три порядка превосходит аналогичное действие в отношении АХЭч. В то ее время величины ДФФ с БуХЭ сыворотки крови лошади (БуХЭл) мало чем отличатся от БуХЭ озекой совки, что указывает на выракепность гидрофобных участков в зсторазпсм пункте АХЭ озимой совки.- ' ' ■

Результаты взаимодействия^ выше приведенных ингибиторов с КБЭ озимой совки приведены в табл.9. Эзерин и прозерин зе взаивд-

е т ТуЗблихха 9 Константа скорости газгибировашя - О^. х101< пян ■*■) КБЭ

;___стандартными пнгибкторгш __

Ингибитор Тенлскровних Озимая совка

2-3 возраст 4-5 возраст Бабочки

Озетлга •1Т--7 нз нпгпйтровал ко иягябисовал не ютгоЗировад ' не иягпбироваа олг 65 8в 1,3 1,20 0,15 0,11 0,20

действуют с КБЭ печени свиньи (КБЭс) и озимой совки. Гд-7 является: аффективным необратимым ингибитором КБЭ озимой совки, причем здесь наблюдается зависимость измеьсмия величины от фазы развития насекомого. Антихолинэстеразная эффективность Гд-7 на 1-2 порядка вцше в случае с КБЭ озимой совки, чем КБЭс, а-ДФФ, наоборот, более эффективнее тормозит активность КБЭс, чем КБЭ озимой

собки.

Изучено влияние эзерина, прозерина, Гд-7 и Д4Ф на ХЭ

(табл.10) и КБЭ (табл.11) малой наземной совки.

т т Таблица 10

Константы скорости ингибирования (к2< хЮ М мин ) АХЭ и БуХЭ стандартными ингибиторами

теплокровные Малая наземная совка *

Инги- 1 АХЭч БуХЭл 2-3' возраст 4-5 возраст Бабочки

битор АХЭ БуХЭ АХЭ* БуХЭ АХЭ БуХЭ-

Эзерин 35 - 7,9 8,0 3,2 4,4 2,7 2,1

Прозерин 9,4 - 9,3 0,81 75 0,055 1.3. 0,051

Гд-7 5,8 0,44 2,5 10 62 37 10 85

Д® ' 6,8 730 . 200 300 30 400 630 710

Для сравнения в табл.10 приведены величины кр для АХЭч и ЕуХЭл. Как видно из этих данных, существует четкая зависимость изменения величину от фазы развития этих насекомых. Эта зависимость особенно характерна при действии на ХЭ малой наземной совки эзерина и прозерина: величины уменьшаются при переходе от гусениц к .бабочкам. Прозерин с высокой скоростью ингибирует АХЭ малой наземной совки, а Гд-7 и ДФФ АХЭч. Антихолинэстеразная активность ФОИ - Гд-7. и.ДФФ в зависимости от возраста насекомых имеет обратную картину, чем в случае .с'ззерином и прозерином.

Сопоставление данных табл.7 с данными табл.9 показывает, что ХЭ совок отличается чувствительностью к • одному и тому же ингибитору. Это) очевидно, связано с имеющимися различиями в строении активного .центра ХЭ этих двух видов совок.

КБЭ малой наземной совки (табл.11) также не ингибируется ни ззерином, ни прозерином, в отличие от КБЭ озимой совки, КБЭ малой наземной сойки менее чувствительны к действию Гд-7. По мере перехода от гусениц к, бабочкам величина У^, Гд-7 по отношению к ~КСЗ возрастает, что характерно и для ДФФ. Следует отметить, что закономерность зависимости величины кг. от фазы развития насекомых наиболее вырахена в случае КТО малой наземной-спт и, чем для они

мой совки.

Проводоншдо исследования показали,

что ХЭ озим-н' и малой к;)

Таблица II

Константы слоростп ингибирования (kg, xIQ^rtára-1 ) КБЭ

Ингибитор КБЭс КБЭ' Налой наземной совки !

2-3 возраст 4-5 возраст Бабочки ]

эзерип не ингиОировал не ингибировал .

Прозерш не ингибировал не ингибировал J

Гд-7 0,12 2,7 . 6,4 9,9 1

ДФ5 1,20 2,2 0,59 0,89 j

земной совок довольно чувствительна к действию ФОИ. Поэтсад интересно было провести ингибиторпнй анализ при помощи даалкилтЕо-фосфатамн эпилупинина и. шпгорндинбутинола, кмензих в своей стррс-туре неизменную катионнуи часть и постепенно услоашзщуюся фос-форильную часть (см. рас.4).

Как видно из приведенных графиков (рис.4), при взаимодействии, с дхэ и ВуХЭ озимой и .малой наземной. совок, диалкшлиофосфатсз эпилупишша при переходе от С2Н5 к Сдй? наблюдается скачсгс вэли-г чины leg на 2-3 порядка, а это характерно для гусеняц 2-3 п d—13 возрастов. Отличие мезду AI3 и БуХЭ сово:г состоит в чувсткггаль-ности к дпгэксилтиофосфату. ашмуииншиг. Снзгвшю ' антшсолгзэстэ-разкоЗ активности наблюдается для ÀX3, а 'в-случае ВуХЗ паобсро? -повышение. '

¡Три взаимодействии ХЭ- бабочек озимой совки' (рис.4) с. собтвот-ствушщш.ш далшлтио'Ххзсфаташ.'эшшушааша вэлкчкаа bg для соединения с R-- СдЦ,. спияаотся и в цагш картина остается схожей, кап и для гусениц. При -взшиодвйсгшя о БуЯЗ- бабочек активность этого ингибитора тате® свеквотся, но в'дальцейЕёй наблюдается нвгпачтг-Т9.шшй рост.Из si3C4.3,;-oî"eHHoro следует, что у АХЭ к БуХЭ гусо-нзщ озпшй совкя в раЯсио эстеразвого .щгакга ожшшой. поворжноста жоется гцзрофобшй участок когтеиевтаранЯ струхяуро ©СИ с про-тшыш рздтаалсм. Как' известно, на Ътадай куколки в результата гистолиза п<пеза5зт iîî-'егздкеся нервная, плг.овйрттельнгя и другяо системя, когорта заново образуются у бабочйс пугса гзегогензэа. Коошду изтду чувст.тлпо,"ьпостьв ХЭ гуссшщ и бабочек сггноЗ сошп к отак ФОИ суеюстяш ятано- различая (cu. рнс.4 В п В), оСуслзв-ткпт гчщкфотгя ляспсом комкештарпого яяя • nintsnrepa с пропащим рздшт*, к кцре§обвсЗ областью кож&ктящяюЗ в

ая№<г;пгпр1 urtrncïtTopiikfi анализ (рпс.4), прэвддэнпй прп по-'

2 3

I

i

I-

ОЗИМАЯ СОВКА

О 2 3 4 5 . К 7 МАЛАЯ• НАЗЕМНАЯ СОВКА

К

У

о

я 7 К 5 '4

к*

о' о

5-о-о-

-О1

II

(.V2

п.

5 6

I

О)

"ис.З. Зависимость антиацетил- (1) и аатиоутирилхолинэствразной (II) активности 0,0-диалкил-Б-^угашэнткофосфатов: Сп%г>+10ч_/.0 /—\ от п для АХэ и БуХЭ озимой и малой наземной совс

,А - гусеницы 2-3 возраста, Б - гусеницы 4-5 возраста,В - бабочки); 1бк? - величина анткхолинэстеразная активность

совок

мощи диалзаитиофосфатов згталупинийа указывает на некоторую схо-кесть АХЭ ryceitr", малой наземной гооыш (см. рис.4 Б н В) с АХЭ гусениц озимой совкп (ст.]. рис.5 Б*и В). Обращает на себя внимание изменение величины IgR, в завйсишсти от числа углеродных атомов (л) как в случае /.ХЭ, так и БуХЭ' малой наземной совки. Резко отличается кривая зависимости величины kg от "п". и для ХЭ бабочек, причем гидрофобный участок, комплементарный- пропильному радикалу исчезает (рис.4). Это подтверждает тот факт,, что ео время фазн куколки ХЭ активность памп не обнаруживается, и на стадии бабочки, видимо, вновь образуются эти ферменты и соответственно происходит изменение структурных элементов активной поверхности ХЭ изученных насекомых.

Как видно, из графика (рко.Б.) зависимости величины , БуХЗ гусеницы озимой 'совки c^yicTypa \0,0-дадкшгбут1тл1шкр11дилт1ю-фосфатов характеризуются более; -вдсокой, чувствительностью я изучаемым ингибиторам, чем АХЭ. Прячем:■ ход' 1 кривых'■ зависимости' от п сийбатен, однако, шдобная зависимость ,'А|Э а, БуХЭ для бабочек озимой совки отличена. • ... -/ . ■ ' •

Для ХЭ малой назёмной совки .выявленные' закономерности тша-ния величины lgkg от "п" очень,. Схош с' таков£ш, озимой -совки (рис.5). '■.■-•'.- -,,.'-. ••'.;.. :''

Результаты проведешюго. :анайиза ttoítóa^ÉT-.;- что в patona зсте-разного пункта АХЭ и БуХЭ .гусенщ'-озщ.юЯ иЧ.шйй наземкой совок имзётсй гидрофоЬшй участой:':к0ьзмей'ейтар^ прошугьно;чу радикалу 0-алкшп>ной группа ФОС. хЭ '.бабоадк 'бзйюа-и 'малоа наземной совок отличаются структурный!

Исследована чуб'ст?итеф>йо'сй> К8Э -, ^ерффоввнх' й- набёкойаг К о-циклопен'т^-й^пройарйл^н^тйофос$она,?У. < а ■■,. Ь-щйслогексвд-З--прсшархтафбЕЩтио^'сфона^ч^.'-.".-' .;■ 1 ¡'' ■■[;'■■■.• , ,

Дайнйе ингйбирувдай «йб*Л2,

показываат, что озйлай й. tóiáá- щй^^'-'бфаф.' рйШ&ся йр чувствительности к. &тйм.Ш.-'^/бёЙвй! éümiM. -^i-,спадах развития с высокой "скоростью Ю&рВщии- 4й** логексильный радикал. Й яй|в1ЙЬ®'|&зипй. твительяосй. к'этим- сбвдйнвййяа.' ¿о. все* возрастах, за исключением бабочек»; шйё' к-'аейстгай5.®?Й в./дадагойтайш?» остатком. 11ябл»д.эекио различия^. псйпзиёаЬ?,.'. *ífa, участок: декштой ' поверхности' КБЗ„ tía ••rotó^mí-.Bjtoitótóííát..ЧО^Ш-рщ^йв^щгрвв,-различен . для 'FEO озимой- совки:- он К OÓejE^--чрттт с а К5Э .совят'-

ОЗИМАЯ СОВКА

-О II

О 2—3- 4

о—о

II

/ /

// б

г. I

3 4.

/°>

8;

,1 , ', I

К,

9 8 7

; 5

-о II

МАЛАЯ НАЗЕМНАЯ

л- 9 8

7 Г

9 ■

:© I

7 7 б

■ 5

' 4

п.

9II

•• О2 3 # . О 2.3 4 . • '. .9 2 .3 4 .

, Ряс.6, Зашсимость антиацитил- (I) и антйбутарилхолин- . ■эстеразной (II) ектявности 0,0-дашлваы-З-бутинщшеридо-

• ог п/ош ДХЗ а .БуХЗ оащой н малой неземной совок (А2тЗьозрастагБ-Г7Сеящы 4-Б возраста, В - бабочка» V бзлгяшм йятаоашэстераздая, активность.'

9

Таблица ¡12

Чувствительность (к2,10%-1мин-1) КБЭ насекомых к ингибиторам

Сб%\р^° С6Н5\р//Р

[ 'У-О7 Б-011^-0=011 , СУ^ ^-СН2-С=СН

(I) - (II)

Ин- Озимая совка Малая наземная совка

ги-

би- 2-3 4-5 2-3 4-5 КБЭс

тор возраст возраст Бабочки возраст возраст Бабочки

I 6,9 5,1 . 5,2 3,6 6,6 0,33 30

II 39 21 24 1,6 4,9 8,0 1.4

к препарату с щшюпентильным фрагментом. При сравнении величин для КБЭ печени свиньи с таковыми данными для КБЭ. озимой и малой наземной совок можно отметить то,, что фермент печени свиньи по своей чувствительности к этим ингибиттаы напоминает КБЭ малой наземной совки, но значения .величин-к^ в'случае КБЭ свиньи на порядок выше, когда-в случае КБЭ малой наземной совки (2-3 и 4-Б возрастов) различия в величине констант ингибирования незначительны.

ВЫВОДЫ

1. Исследован эстеразнкй состав,головного и грудного отделов озимой и малой наземной совок в онтогенезе их развития. Показано, • что в головном отделе локализована АХЭ, а в'грудном -'БуХЭ и КБЭ. Активность БуХЭ озимой и малой наземной совок ингибируется избытком тиосубстрата, что отличает фермент совок от БуХЭ теплокровных. Наиболее высока активность у'бабочек и наименьшая у.гусениц 2-3 возрастов. На стадии яиц и куколок ХЗ и КБЭ отсутствует.

. 2. Выявлено, что ХЭ озимой и малой наземной совок проявляют максимальную активность при рН 7,4.и температуре +40°С. ■

3; Показано, что КБЭ озимой и малой наземной совок с высокой,-скоростью ; идролизуют 5-алкиловые эфиры карбоновых- кислот • и п-НФА. Высокие концентрации этих субстратов в отличие от. ХЭ, не вызывают угнетение активности этого фермента. Максимальная актив- ' яость КБЭ наблюдается при рН 7,3 и температуре +40"С.

4. Впервые с использовагшем в качестве сорбента октадецилси-яансшшрома выделена и очищена КБЭ из гомогёната грудного отде-1а озимой.совки. Электрофоретическое исследование очищенного в 86 заз фермента показало, что он имеет .молекулярную массу 61000 Да."

г- ЕО -

Ь.- Субстратный анализ активной Поверхности 1ССЭ озимой и малой наземной совок позволил выявить гидрофобные участки комплементарные к структуре З-гексилыюго и 5-октильного радикалов тиоэфиров карбоноЕых кислот. Среди этих соединений выявлены сугубо специфические субстраты КБЭ свиньи, озимой и малой наземной совок.

6. Ингибиторный анализ активной поверхности Ш, БуХЭ и КБЭ озимой и малой наземной совок при помощи гомологичных рядов 0,0-диалкил-3-зпилугшнан и Б-бутинпиперидилтиофосфатов позволил выявить сходство и различия в.структуре активного центра этих ферментов и аналогичных ферментов теплокровных. Среди исследованных ФОС'обнаружены высокоизбирательные.. ингибиторы эстераз изученных насекомых., *

ЯШСОК ОПУБЛШОВАНШХ РАБОТ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕГТА1ДО

I.' Х.Х.Кушиев.,' З.Тилябаев, Д.Н.Далимов, А.А.Абдувахабов. Исследование карбоксилэстеразы озимой и малой наземной совок методом. субстратно-ингибиторного анализа в связи' с проблемой создания инсектицидов ; избирательного -действия //Тез. докл.-. П-ой- конф. "Биохимиков Узбекистана" 22-24 'ноября 1993. С.53С.

' 2 'Д.Н.Далимов,' . -З.Тилябаев, ' Х.Х.Кушиев,- С.С.Баймирзаев, Ы.К.Аллашязова, М.Б.Гафуров, .Б.Н.Баба'ев, А.А.Абдувахабов. Использование ферментов метаболизма для 'анализа . пестицидов . различной хиШческоЙ природы '//Тезисы. доклада XV Менделеевского сьезда по общей.и нримадаой.химии. Минск 24-29 мая 1993. Т.1. с.312-313.

3. Х'Х-Кушев* З.Тилябаев, Д.Н.Далимов., У.А.Турахапов. Свойства холинзстераз озимой совки //Тезисы докладов первой конференции' биохимического общества Республики .Таджикистан "Проблемы биохимии". Душанбе 21-23 сентября 1993. С.70. '

• 4. М.К.Алланиязова,. С.С.Баймирзаев, Х.Х.Кушиев, З.Тилябаев, Д.Н.Далимов,'' М.Б.Гафуров, К.У.Утениязов. Синтез и антихолинэсте-разная активность ряда эфиров дикарбоновых и фенилфосфоновых кислот. с различными цдклическшизаместителями //Вестник Караколпак-. ского отдаления АН РУ, 1993. N 3. с.З? 30.

: 8. З.Тилябаев, -Д.Н.Далимов, Х.Х.-Кушиёв, ■ М.Б.Гафуров, .А.А.Абдувахабов, Зависимость между. : структурой и хожнергической эффективностью различных Производных алкалоида анабазина //Химия природ, соедин. 19941 К I. С.19-33-

• 6. Х.Х.Кушиев, З.Тилябаев, Д.Н.Далимов, У.А.1Турахан^в. Биохимическая характеристика холинэстеразы озимой.,совки- А§хоШ; аеие-1;ит БсШГ. //Химия природ. соедин. 1994. Я Г. С.Ш-н:1.

.- 7. З.Тилясаэа, Х.Х.Кушиев, Д.ЛТ.,Дздшмов. Окояэте'яак основы

защиту хлопчатника от вредных пасокомих //Стгрдарэ вплоятида экологии таълвм ва тарбяя. I штай ¿иалиЗ гшсумая* Кяьрузаларнпнг кяскача иазмуни. Гужетон, 1994. аврал. Б,ев-67.

8. Х.Х.Кушиев, З.Тилябаев, -Д.Й.Лалгзчзв. Срапштольйая характеристика холинэстераз я карбоксилзбтераз озямой таэвак ¿grotte ее-getrn Schiif. //В сб. науч. трудов Каракалпакского госунпвэрспгз-та "Структура и фупкция хият природах и (Тнззодопнескях активных соединений" Нукус, 1994. Взп.З. С.27-34.

9. З.Тилябаев, С.С.БаЕмнрзаев, Х.Х.Кушиев, М.Б.Гафуров, Нсвпе фосфорилироваяные производные анабазина и их антйтшюстерззкне свойства //Хишя природ, собдян. IS94. H 1. G.C3-70.

10. ^Д.Куисов. I^sa зарарогнаадалгршанг нэтаСоллта фэргяот-лари фаоллигига pli муздт, харорзт ва таркибада алкалоид б$агяз ингибиторларшшг таьспри //УР нанг Давяат тиля ^ацадзга уезут-нинг 5 йаллигяга бариалай'ан еш олямларзинг бярпичи плЛШ анг.укз-ш. Наърузаларнивг .щтецача мазмунп. ' Тсшкеш, T4-I5 ноябрь, 1994 й. Б.24-2Б. '

11. ЗД.Цункев. З.Тшшбаев, Д.Н.Далг/'ов. Пахта огаз-тирлз чароита® зтр-^мдигая отюя д-гжЕЖг скслошх кусгчнюра //Еп оли?«ар ва мутахзссяс.-.-'-тплР П-аг.ай ент/^апд. г^руэя-ларпкпг пюг.ача маггови. Гкгаэет ТГ;?5 ÎS-I7 ;шар. .04 •

■ - 22 - .

КУВГИ (AGHOTIS SLGEWM SCHIFF.) DA "КИЧИН 1рТУ1{ЛШС (SPODOPTERA EXIQJA HM.) ТУ1ЩАШ ЩАРОТЛЛРИ ХОЛШЮСТЕРАЗА DA

КАРБ0КСИЛЭС1ЕРАЗА ФШМИЛАРШШГ ХУСУСИПТЛШШ УРГ/.lfflil ^ДЛ^шее

: Ушбу гузашшг зараркунанда ^ашаротлари - кузги ва кичик itypyiyifflc тунламлари ыетаболитик ферыентларининг каталитик хусуси-ятларини танлаб таъсир этувчи .инсектицидлар яратиш муаммоси билан боглщ .уодда, субстрат ва иыгибиторлар билан анализ цилиш усулла-рд воситасида Урганишга багишланган.

.Юцорида 1;айд этилган з^ашаротлар холинэетераза (ХЗ) ва карбок-скдэстераза (КБЭ) ферментларининг каталитик хусусиятларини |рга-нишдаи олинган натюкалар, куйидаги хулосаларда уз аксики топган:

- кузги ва кичик ^ypyiputK тунлаш ^ашарсугларининг бош на кук-рак цисии ту^шаларида ХЭ ва ,КБЭ фэрментларининг мавжудлш,,и йа дшамикаси бу ^ашаротларшшг бутун ривожланиш онтогенези давомида аншршнган;

- ХЭ лв КБЭ ларжшг субстратларга нисбатан мойнллиги урганил -

гаи;

- тунламлар ХЭ ва КБЭ ферментларининг максимал каталитик фаол-лнкка зга буладаган оптимал шароитлар (pH мухит, харорат) ани^-лацгшг,

- тунла,4яарнкнг КБЭ ферментшш. ашщлашияг у сули яратилган;

- кузгн тунлам ^ашароти кукрак кисми гомогенатидан КБЭ фораэнтани агратиб олшшинг ¡шги у сули яратилган;

- бир цатор фосфороргшаш ннгибиторларшшг ХЭ ва КПЗ лир билан узаро таъсири асосида эстеразалар фаоллигига к'фши хусусинт-лари ашл^ланган;

- тунламлар КБЭ ларанинг махсус ингибиторлари тот-.лган.

Олннган. натикалар есосдда з^ашаротлар ХЭ ва КБЭ ферментлари

фаол маркчзкнинг тузшпшн ^aipma хулосалар чицарилган.

Дассвртацион иш иатикаларвдан .усимликларни хнм:ч1 нилишдч ¡за-ыснввнй у.суллар яратига билан шугилляшкпган илмий муягеяеалчрда файдаяанся булада.

INVESTIGATION PROPERTIES OP CIIOIDfeSTERASES

OF Annans SmETUU SCHITF. Ap SPOWPTERA EKldlA ffOff.

U.B.Cu$hlev ■ .

This work dedicated studying oi catalltlc properties oi metabolltic enzymes of Agratia segstm Schiff. and Spodcptsra extqrn Hbn. - basic peats of cotton by the method of substrata -Inhibition analysis In connection with problem or selectively action insecticides.

In this work it was sfco«a following obtained resultea on studying oi chollne3teraseB (CliS) and carfoosylesteraaea (CDS) ol Agratia segetwn and Spoc'cptsm cxtqva:

- localization and dinoics activity or ChE End CBE ."¿ratio aegetm and Spodapiera- exiqm vm established in ontfcogehecin development in their frental snd dreast'al parts. .

-• BUbotrati7e opeclflty of C'flS and GEE raa' studied, optimal conditions (plf. teaparatur-a) for sasteiil of catalltlc activity oi ciiE and CBS oi Kid insects.sera estsblielisd.

- mlcH-mathcds of the insecto' C33 activity identification

"75rO iIS7elOC3Cl.

- mjttcd of purification' CB3 Zrcti spsoGsn&tea- -of .¿¿¡rotia 26Qctm drsoatsl tsvt "?aa d<57olcpsd. . . ■

- <5ntieator?o prcp^rtiea oi nxcpiv of p^cpharoigonic inhiM-':or3 in their intoractlca 'fitli ChS r.sd CBS ners sstntJlioiad.

•■ ¿pacific inliibitoro of CB2 of ths iEsecta trow discover,?-!.

Cn tiwr bana of obtained results it 7:35 coacltulM tfcopograpliy ■ictiva centra of CM2 and CBS of'studied pato insssta.

Dissertation ratorials nay fe used. ifl cstsblleizKnts corrylES ¡■•(it acJ<mttfio nwrcters cn janrcrdde • «xJsrn. plant» protection '.'oana.