Получение меченной тритием эйкозатриеновой кислоты и ее использование в синтезе простагландинов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.14 ВАК РФ

Список сокращений

Введете I

Глава I. Литературный обзор. Получение меченных тритием липидов.

1.1. Тритий - универсальный радиоактивный изотоп в органической химии.

1.2. Методы введения трития в биологически активные соединения.

1.2.1. Метод Вильцбаха.

1.2.2. Метод термической активации трития.

1.2.3. Гомогенный изотопный обмен с тритийсодержащими растворителями.

1.2.4. Прямой химический синтез.

1.2.5. Синтез с помощью атомов отдачи.

1.2.6. Биохимические методы.

1.2.7. Гетерогенные каталитические методы.

1.3. Простаглавдины: структура, биологическая активность, биосинтез.

Глава 2. Экспериментальная часть.

2.1. Материалы

2.1.1. Исходные вещества.

2.1.2. Катализаторы.

2.2. Методы.

2.2.1. Метод тонкослойной хроматографии (ТСХ)

2.2.2. Метод газо-жидкостной хроматографии (ГЖХ)

2.2.3. Метод УФ-спектроскопии.

2.2.4. Метод жидкостного сцинтилляционного измерения ft -излучения.

2.3. Методики проведения эксперимента.

2.3.1. Гетерогенное каталитическое дегалоидирование газообразным водородом (ГКД).

2.3.2. Гетерогенное, каталитическое гидрирование газообразным водородом (ГКГ).

2.3.3. Гетерогенное каталитическое гидрирование метилового эфира эйкозатрииновой кислоты газообразным тритием в растворе.

2.3.4. Омыление метилового эфира [%]эйкозатриеновой кислоты

2.3.5. Внутримолекулярное распределение трития в [3Н]ЭТК

2.4, Биосинтез меченных тритием простагландинов.

2.4.1. Идентификация меченных тритием проста-гландинов.

2.4.2. Метод избирательной экстракции эйкозатри-еновой кислоты в присутствии простагландинов.

Глава 3. Результаты и их обсуждения.

3.1. Исследование реакции ГКД полиненасыщенных жирных кислот.

3.2. Исследование реакции ГКГ полиненасыщенных жирных кислот.

3.2.1. Гидрирование малеиновой кислоты на катализаторах Е-Л.

3.2.2. Гидрирование амилового и црбпаргилового спиртов в диоксане при давлении водорода

333 гПа.

3.2.3. Исследование влияния среды на ГКГ аллилового и пропаргилового спиртов при давлении водорода 333 гПа.

3.2.4. Исследование влияния давления водорода на ГКГ аллилового и пропаргилового спиртов в диоксане.

3.3. Получение [%] эйкозатриеновой кислоты методом ГКГ ацетиленового предшественника газообразным тритием в растворе.

3.4. Исследование внутримолекулярного распределение трития в [%] эйкозатриеновой кислоте.

3.5. Окислительная циклизация препаратов [%]эйкозатриеновой кислоты в присутствии РбН-синтетазы.

3.6. Получение меченных тритием проста-гландинов из ,[%] эйкозатриеновой кислоты.

3.6.1. Кинетика накопления продуктов при ферментативном синтезе меченых простагландинов.

В настоящее время соединения, меченные радиоактивными изотопами все шире находят применение в самых разных областях науки. Дальнейшее развитие медицины, биологии, химии, фармакологии немыслимо без всестороннего внедрения радионуклидных методов исследования.

Особенно важную роль при этом играют биологически активные соединения, меченные радиоактивными изотопами биогенных элементов, т.е. соединения, меченные тритием, углеродом, фосфором, на долю которых приходится 2/3 всей мировой продукции меченых соединений. Только в одном Советском Союзе, номенклатура органических соединений, меченных радиоактивными изотопами, насчитывает более 600 наименований /I/.

Производство меченых соединений - это самостоятельная область тонкой химической технологии, которая сочетает в себе разработку эффективных способов введения соответствующих изотопов, обеспечивающих высокие значения молярной радиоактивности, высокую химическую чистоту получаемых препаратов и полное сохранение биологической активности меченых молекул и организацию серийного выпуска меченой продукции. То есть производство меченых соединений следует рассматривать как комплексную проблему, для решения которой требуется объединение инженерных, научных и экономических усилий.

Решение таких широкомасштабных задач возможно лишь в рамках государственной организации производства и облегчается в контекоте международной специализации, как это делается в странах-членах Совета Экономической Взаимопомощи.

Развитие атомной энергетики в Республике Куба было одним из ключевых решений II съезда КПК в 1980 г. С участием Советского Союза и Германской Демократической Республики начались работы по строительству первой атомной электростанции в городе Сиэнфуэгос и Центра ядерных исследований в Гаване /2/. Разработка, производство и использование меченных радиоактивными изотопами соединений - это одно из главных направлений развития ядерной промышленности Кубы. Велико значение этой проблемы и для кубинской экономики. Ежегодно Куба тратит миллионы доллаQ ров на приобретение в капиталистических странах меченных й, 14^ 32р? I3IIf I25j соединений, источников, радиоизотопных генераторов, закрытых источников разного назначения, наборов для радиоиммунологического анализа и другой радионуклидной продукции. Каждое меченое соединение, полученное в лабораториях республики даёт заметный экономический эффект и освобождает валютные ресурсы для обеспечения потребностей других областей экономики.

В рамках этой задачи, мы исследовали возможность получения меченных тритием простагландинов и их предшественников - С20 полжненасыщенных жирных кислот комплексным путем, т.е. с помощью гетерогенного каталитического гидрирования ацетиленовых аналогов 8,11,14-эйкозатриеновой кислоты с дальнейшим ферментативным их превращением в простагландины Hp Ej и Fj^ в присутствии микросомной фракции семенных пузырьков барана. В работе кроме того исследовано распределение трития в молекуле субстрата и его влияние на кинетику ферментативного синтеза простагландинов. Даны препаративные рекомендации для получения меченной тритием 8,11,14-эйкозатриеновой кислоты высокой молярной радиоактивности, содержащей тритиевую метку исключительно при двойных связях при полном сохранении её биологической активности.

выводы

1- Методом гетерогенного каталитического гидрирования метилового эфира 8,11,14-эйкозатрииновой кислоты получена [%]8,П, 14- эйкозатриеновая кислота ([%]ЭТК) с молярной радиоактивностью 3120 ГБк/ммоль и радиохимической чистотой не менее 95$. Установлено, что полученная кислота содержит тритий только в положениях при двойных связях и имеет природную пространственную (цис) конфигурацию.

2- Изучено поведение катализаторов палладиевой группы в реакциях ГКГ полиненасыщенных жирных кислот газообразным тритием в растворе. Найдены оптимальные условия избирательного каталитического гидрирования ацетиленовых связей, при которых процесс восстановления протекает до стадии образования двойных связей.

3- Получен меченный тритием простагландин Ej с молярной радиоактивностью 430 ГБк/ммоль. Даны рекомендации для его препаративного получения.

4- Установлено, что конверсия полученной [8,9,11,12,14,15-%] эйкозатриеновой кислоты в простагландины не сопровождается кинетическими изотопными эффектами. Показана возможность получения меченных тритием простагландинов Pj^, Bj и Hj высокой молярной радиоактивности (сотни ГБк/ммоль).

5- Предложена методика избирательной экстракции эйкозатриеновой кислоты в виде ионных ассоциатов с катионным красителем - метиленовым синим из инкубационной среды, содержащей простагландины.

3.7. Заключение

Применение метода гетерогенного каталитического гидрирования для введения трития в полиненасыщенные жирные кислоты дает'возможность получить меченые соединения с высокой мольной радиоактивностью. Этот метод может быть использован для синтеза меченных тритием липидов в препаративных масштабах.

Проведение реакции каталитического гидрирования требует соблюдения строгого контроля за чистотой конечного продукта: за распределением метки в молекуле, стереоизомерией, позиционной изомерией и т.д.

Применение палладиевых катализаторов для гидрирования ацетиленовых связей обеспечивает большую степень включения трития в положения при двойных связях, но в то же время сопровождается рядом параллельных процессов, приводящих к потери изотопа и к понижению выхода основного продукта. Нами было показано, что главным конкурирующим процессом является изотопный обмен в аллильных положениях относительно двойных связей.

Использование катализатора Линдлара при кратковременном восстановлении позволяет значительно уменьшить выход продуктов изотопного обмена, давая при этом молярную радиоактивность близкую к теоретически возможной. Применение аргентированного силикагеля позволило очистить продукт от других примесей, образующихся в результате миграции двойных связей по цепи и транс-изомеризации. Химическая чистота полученной эйкозатриеновой кислоты - 95$ по данным ШХ.

Поведение полученной нами меченой жирной кислоты в реакции окислительной циклизации в присутствии РбН-синтетазы показало отсутствие изотопных эффектов. Это свидетельствует о том, что

ЭТК имеет природную (цис) конфигурацию, не содержит трития в положении C-I3, свободна от позиционных изомеров и может быть использована для кинетических исследований ферментов синтеза простагландинов.

Полиферментный комплекс, содержащийся в свежевццеленных микросомах везикулярных желез барана осуществляет окислительную о циклизацию [ Н]ЭТК с высоким выходом меченого простагландина Ej. Молярная радиоактивность продукта составляла примерно 50% от молярной радиоактивности субстрата. Использование же солюбили-зированных белков позволяет получить меченый простагландин Hj. При этом выделение продукта из реакционной среды необходимо осуществлять при пониженной температуре. Применение методов щелочной изомеризации PGEj и восстановления PQHj в присутствии Gig дает возможность получить меченные тритием простагландины Bj и Pj^ соответственно.

Особый практический интерес имеет разработанная нами методика избирательной экстракции хлороформом ионных ассоциатов эйкоза-триеновой кислоты с метиленовым синим в присутствии простагландинов. По своей простоте и точности она может быть применена как для быстрого отделения жирной кислоты от цростаглаидинов, так и для экспрессного и точного определения общей ее концентрации. С ее помощью мы определяли молярную радиоактивности не-прореагировавшей [%] ЭТК в процессе ее превращения в простагландины. Изменение молярной радиоактивности субстрата в ходе реакции давало информацию о наличии изотопных эффектов при ферментативном окислении.

На основании полученных таким образом результатов был сделан вывод о том, что кратковременная обработка эйкозатрииновой кислоты тритием на катализаторе Линдлара приводит к образованию меченой кислоты с высокой молярной радиоактивностью, не поя-вляющей изотопных эффектов при ее окислительной циклизации.

В отдельных опытах, не вошедших в диссертацию нами была изучена устойчивость меченной тритием эйкозатриеновой кислоты к разложению в неполярных растворителях при температуре -4°С. При этом наблюдали 40% сохранения после 6 месяцев хранения в указанных условиях. После очистки вещества с помощью метода ТСХ кислота сохраняла способность к циклизации под действием PGH-синтетазы.

Наконец нам хотелось бы выразить свою благодарность сотрудникам Института тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова за предоставление метилового эфира эйкозатрииновой кислоты, сотрудникам лаборатории изотопного обмена Института молекулярной генетики АН СССР за возможность работать на установке ОВТ и за помощь оказанную при выпольнении работы и сотрудникам МПНИЛ им. А.Н. Белозерского за помощь оказанную в работе и при написании диссертации.

130

1. Кастро Ф. О планах развития народного хозяйства Кубы в 1980-1985 г. Материалы II съезда КПК. М.: Политиздат, 1980, с.72.

2. Эванс Э. Тритий и его соединения. М.: Атомиздат, 1970, с.16.

3. Гайсинский М., Ацлов Ж. Радиохимический словарь элементов. М.: Атомиздат, 1968, с.43.

4. Boyd а»A, Autoradiography in Biology and Medicine

5. N•7*, Acad. Press., 1955» p.17.

6. Нейман Л.А., Введение трития в биологически активные соединения с помощью обменных методов. Успехи химии, 1981, т.50, №2, с.195-233.

7. Нормы радиационной безопасности ВРБ-76 и основные санитарные правила 0СП-72/80. М.: Энергоиздат, 1981, с.$7.

8. Моисеев А.А., Иванов В.И. Справочник по дозиметрии и радиационной гигиене. М.: Атомиздат, 1973, с.41.

9. Berg". G.M., Jong W., Nijjkamp FiPV Attenuated depresor respons to arachidonic acid and prostaglandins in undipped renal hypertensive rats:. J. Eh.armac.,1980, v.68, р'.519-524-';:

10. Wersler B.B., Marcus A.J., Jaffe E;AV Synthesis of prostaglandin I2 by cultured human and bovine endothelial cells. Proc. Natl, AcadV Scia; USA, 1977» v.74, M9, p.3922-39261.

11. Hamberg M;, Samuelsson B. On the specifity of the oxygenation of unsaturated fatty acids catalyzed by Soybeen hipo-xidase. J; BiolV ChemV, 1967, t.242, №22, p.5329-5335.

12. Лясс Ф.М, Радионуклидная диагностика. M.: Медицина, 1983, С.82.

13. Mitchell J.S1^, King E.A., Marrian D.HV, Chipperfield Br. Some, <x,s>jbecis of tic b'oto^cae roPe of / гъзтаъ&игеЬпб

14. Acta Radiologica (New Series), 1963, v,1, Ш5, p.321-326,1.. Шишков A.B., Филатов Э.С., Симонов Е.Ф., Унукович М.С., Гольданский В.И., Несмеянов Ан.Н. Получение меченных тритием биологически активных соединений. ДАН СССР, 1976, т.228, №5, с.1237-1239.

15. Wilzbach К.Е, Tritium labelling by exposure of organic compounds to tritium gas. J. Amer. Chem. Soc,, 1957, v;79» p.Ю13.

16. Wolfgang В., Pratt Т., Rowland F; Production of labelled organic material with accelerated tritium. J. Amer. Chem. Soc., 1956, v. 78, №19, Р.5132Ф

17. Dorfman L.M., Wilzbach K.E. Tritium labelling of organic compounds by means of electric discharge. J. Ehys. Chem. Ithaca, 1959. v.63, №6, p.799-801.

18. Cacase P., Guarino A., Montefinale G. Labelling of organic compounds by mercury photosensitized reaction with tritium gas. Nature, Ld., 1961, v.189, p. 54-55

19. Ache H.I., Thiemann A., Herr W. Katalysche Wirkung von Iod bei der %-Markietung nach Wilzbach. Chem., 1961, v.73» №21, s.707-711.

20. CShanem N.A., Westermark T. Unspecific tritium labelling accelerated by microwave, alternating current and direct current electrical discharges and by UV radiation. J. Amer. chem. Soc., 1960, v.82, №16, 5.21432-4433.

21. Meshi Т., Sato I. Studies of tritium-labelled compounds. 7. ®ie Flatinum-catalized exposure reaction. Bull. Chem. Soc; Japan, 1964, v.37, Ш5, p.683-687.

22. Орлова М.А., Несмеянов Ан.Н. Реакции атомарного трития с фенил адалином и тирозином. Радиохимия, 1978, т.20,< -Г28

23. Feng P.Y. у Greenlee T.W. Specific 'tritium labelling of organic compounds by the gas exposure method. Proc. Syiap. Tritium Phys. Biol. Sci., IAEA., Viena, 1962, v. 2, p.11-20.

24. Baba S., Brodie H., Hayano M., Kwaes G., Gut H. Stereoselective saturation of a carbon-csrbon double bond tinder Wilzbach conditions. J. Org. Chem., 1964, v.29, N 9, P. 2751-2753.

25. Wilzbach K#B. Gas exposure method for tritium labelling. Proc. §p»p. Tritium Phys. Biol. Sci., IAEA, Viena, 1962, V.2, p. 3-10.

26. Gordon M.P., Intrieri O.M., Brown G.B. Nucleosides labelled with Tritium in the Bibosil Group. J. Ашег. Chem. Soc., 1958, v.8o, N 19, p.5161-5164.

27. Симонов Е.Ф., Унукович M.C., Филатов Э.С., Шишков А.В. Исследование реакций атомарного трития с аминокислотами. Химия высоких энергий, 1978, т.12, ЖЕ, с.8-10.

28. Филатов Э.С., Симонов Е.Ф., Могильников В.П. Исследование реакций атомов трития с аминокислотами. Химия высоких энергий. 1979, т.13, М, с.373-376.

29. Филатов Э.С., Симонов Е.Ф., Шишков А.В., Могильников В.П. Получение оС -аланина-% воздействием атомарного трития нагретого до 2000 К на твердую мишень аланина при 77 К. Радиохимия, 1979, т.21, гёб, с.909-912.

30. Орлова М.А., Симонов Е.Ф., Филатов Э.С. Исследование реакций атомарного трития с аминокислотами.

31. Химия высоких энергий, 1979, т.13 » с*468-473.

32. Филатов Э.С., Орлова М.А., Симонов Е.Ф.

33. Реакции атомов трития с фенилаланином и тирозином в интервале температур 77-4000 К. Вестник МГУ. Сер. Химия, 1980,т.21, М, с.49-52. 37 Ehrenkaufer R., Wolf A., Hembree W., Lieberman S.

34. Tritium distribution and glucine production in L-Valivelabeled by microwave discharge activation of tritium gas.

35. J. Labell. Сотр. and Radiophamu, 1977 f v.13, p. 359-362.no

36. Филатов Э.С., Симонов Е.Ф., Орлова M.A. Реакционная способность атомов водорода. Успехи химии, 1981, т.50, Ж2, с.2167-2197.

37. Филатов Э.С., Симонов Е.Ф., Бательман В.Д. Вероятность реакции отрыва водорода от аминокислот атомами трития и внутримолекулярное распределение трития в меченых аминокислотах. Химия высоких энергий, 1981, т.15, Ж,с.73-76

38. Филатов Э.С., Орлова М.А., Симонов Е.Ф.о

39. Внутримолекулярное распределение трития в фенилаланине- Н полученном действием атомов трития на j -фенил- о( -аланин. Вестник МГУ. Сер. Химия, 1980, т.21, №2, с.160-162.

40. Филатов Э.С., Котелевцев Ю.В.

41. Получение и очистка алкалоида %-цитизина холинергичес-кого лиганда никотинового типа действия. Биохимические Науки, 1982, №3, с.99-101.

42. Гоникбер Э.М., Дегтярев И.А., Унукович М.С., Шишков А.В.,о

43. Филатов Э.С. Получение Н-рибонуклеазы методом активации трития при высокой температуре и ее очистка при помощи аффинной хроматографии. ДАН СССР, 1976, т.22, М, с.112.

44. Hembree W., Ehrenkaufer E., Lieberman S., Wolf A.

45. Л gene.?a£ method £>/ /rc'iC-i*/»? cdbEtZtsig /ruCSVvucv/e.dieckabqe o-cJimJien cf "frib'ur* gab.

46. J. Biol. Chem., 1973, v.248, Nil , p.5532-5535.

47. Скрипкин А.Ю., Волынская A.B., Шишков А.В.,Гольданский В.И.

48. Исследование механизма связывания додецилсульфата натрия лизоцимом. Молекулярная биология, 1981, т.15, №6, с.1364-1370.

49. Tritium labelling of steroids Ъу microwave discbarge activation of tritium gas.

50. J« ЬаЪе11. Сопф. and Radiopharm., 1979» v.16, p.603-608.

51. Смоляков B.C., Петренко А.Г., Ушаков A.H., Нейман Л.A. Получение меченного тритием тетрафторбората триэтилоксония -реагента для модификации белков. Биоорган. Химия, 1981, т.7, ВЗ, с.455-457.

52. Ducat Ь. Cbtencion de рг ostaglandina А2 (PGA^) marcada contritio. Rev. Cub. Farm., 1982, Iff 16, p.264-270.

53. Несмеянов Ан.Н., Филатов Э.С., Симонов Е.Ф., Орлова М.А.

54. Изучение механизма реакции атомарного трития с аминокислотами. в сб. Органические соединения, меченные радиоактивными изотопами. Материалы II Симпозиума стран-членов СЭВ. Ленинград, 1981, ч.2, с. 52-58.

55. Филатов Э.С., Лебедев В.А., Несмеянов Ан.Н.

56. О вероятностях бимоле^лярных химических реакций при высоких энергиях. Химия, высоких энергий, 1977, т.II, Р4, с.291-308.

57. Макаров В.А., Филатов Э.С., Несмеянов Ан.Н.

58. Реакция атомов водорода с замороженными углеводородами при 77 К. Химия высоких энергий , 1969, т. 3, № 5, с.413-419.

59. Kansha М., Drabarek S. Synthesis of tritium labelled phenylalanine. Kadiochem. Radioannal. Lett., 1979, v.38,p.155-157.

60. Long M.A., Garnett J.L., Vining E.F. Rapid deiteriation and tritiation of organic compounds using organometallic and elemental halides as catalysts. Ferkin Trans. J. Chem.Soc., 1975, Ш12, p.1298-1303;

61. Leptak A., Kiss L., Lerikey B; Tritiation of steroids compounds. Acta Biol. Debrecina, 1969» №7/8, p.17-24.

62. Ифравский Д. Проблемы мечения кардиоактивных стероидлак-тонов тритием, в сб. Органические соединения» меченные радиоактивными изотопами. Материалы II Симпозиума стран-членов СЭВ. Ленинград, 1981, С.1У7-208.

63. Kritchevsky D., Мс Candless F., Eholl J. Trolein-%:. J. AmerV Chem. SocV, 1955» v.77» Ш2.Ч-, p.6655-6656.

64. Clifford M.C., Evans EVA';1, Kilner AVE., Warrell B.C. Distribution of tritium label in DL- G-% phenylalanines JV Label; CompdsV, 1975» v. 11, VQf p. 431-444.

65. Weinberger HV, Porter J. Incorporation of tritium oxide into growing chlorella pyrenoidosa cells. Science,1953» v.157, p.636-639.

66. Thomsom S.I., Walibon A. The Pt-catalyzed exchange reaction between cyclohexehe and % and % water. Trans. Faraday Soc;, 1957, V.53, p.821-831.

67. Мягкова Г.Й., Якушева Л.А., Борцюкова O.G., Шатекая В.Б., Евстигнеева Р.П. Синтез арахидоновой, 3Н.арахндоновой кислот, и их превращение в простаглаццины Е^, %ос» t^lfgoC . Биоорган. Химия, 1982, т.8, W2, с.255-259.

68. Mounts T.L., Dutton H.J. Methylesters of unsaturated fatty acids labelled with tritium in the methyl group'. J.; Label. Compds.', 1967» v.3, P .'343-345 •

69. Bardon L., Grstes de Paulet A. Synthesis of double labeled cholesteroyl linolenate and arachidonate. J. Label. Compds., 1965» v.1, Ш1, p.54-56.

70. Stoffel WV, Wolf G.D. Chemise Synthese von 1-0-% Palmi-toil-L-glicerin-3-phosphate. Hoppe-Seylers Z. Fhysiolo-gische Chemie, 1966, v.347, №1-3, s.94-101.

71. Teng L., Bruce R.B. Synthesis of tritium labelled phenylephrine. J. Label. Compds. and Radiopharmv, 1978, V.15, W=3, P« 321-324.

72. Snyder F;, Piantadosi CV Labelling a and radiopurity of lipids. Adv. in Lipid Research N.Y., 1966, v.4, p.257-279.

73. Osband J.M. The synthesis of naturally ocurring and labelled 1,4-polyunsaturaated fatty acid. Progress in the chemistry of fats and other lipids, 1966, v.X, 152-154.

74. Stoffel W'. Synthesis of ^G- and %-labelled polyunsaturated fatty acids'. Proceeding of the* conference on methods of preparating and storing marked molecules. EUR. Brussels, 1964, p.843-854.

75. Tenny K.S., Gupta SVC*, Nystrom R.F., Kummerov F.AV

76. The synthesis of tritium labeled 9»l0-oleic acid. J. Amer";

77. Oil Chem. Soc;, 1963, v.lo, Ш5, p.172-175V

78. Tenny E;;s. The chemical synthesis and biological use of tritium labelled 9,10-oleic acid. Diss; Abstr., 1961, тг;;22, N25, p.1574V

79. Barton Rosrmberg A.! Metabolism of glucosyl %.ceramide by human skin fibroblasts from normal and glucosylce— ramidotic subjects; J. Biol. Chem.,1975» v.250, P.3966-3971V

80. TgGatt S., Rapport M.M; Enzymic hydrolysis of sphingolipids of ceramide lactoside by an enzyme from rat brain. Biochem.' J., 1966, v;i0l, p.680-686;

81. Seyama J., Yamakawa Т., Komai T. Application of the isotope dilution method to microanalytical determination of five classes of sphingolipids in tisues. J. Biochem., 1968, v. 64, p.487-493

82. Anggard E.t Green К., Samuelsson В. Synthesis of tritium labeled prostaglandin E^ and studies of its metabolism in guinea pig lung. J. Biol. Chem., 1965, v.240, NS5, p.1932-1940 V

83. Samuelsson B. Prostaglandins and related factors. 27* Synthesis of tritium labelled prostaglandin E^ and studies of its distribution and excretion in the rat. J. Biol. Chem., 1954, v.239, N212, p.4091-4096.

84. Koch G.K., Dalemberg J.W. Preparation of tritium labelled prostaglandin E^ by hidrogenation of PGE2 over EhCl(PEh^)^. J. Label. Compds., 1970, v.6, №4, p.395-398.

85. Hsi R'i'S.P. 17,18-tritium-labelled prostaglandins. J. Label. Compds';' and Radiopharm. 1978, v.14, KS4, p.515-526.

86. G-ut M., Uskokovic M. Reduction of -bromosteroids with tritium; J. Org; Chem., 1960, v.25, N!5, p.792-794*

87. Hesselbo Т., Long R.E. The synthesis of tritiated L-nor-adrenaline of high activity. Proc. 2nd Int. Conf• on methods of preparing and storing labeled compounds, 1966,p.831-838.

88. La Brosse E.H. Axelron J., Eopin I.L. Kety S.S. The metabolism of tritium labeled epinephrine in man. Proc. Symp. Tritium PhysV Biol*. Sci., IAEA, Vienna, 1962, v;2, p.407-4-12;

89. Tsao Yung Chen, Chan Nien Pao. Preparation of prostaglandin F2oC -9-%; Tzu Jan. Tsa Chin., 1978, v.1, NS4, p.210-213;'

90. Schroepfer G.J., Bloch K. The stereospecific convertion of stearic acid to oleic acid. J. Biol; Chem., 1965, v.240, N11, p.54-63.

91. Макаров В.А., Филатов Э.С. Реакции диспропорционирования ирекомбинации циклогексильных радикалов при низких температурах.

92. Химия высоких энергий, 1970, т.4, с.467

93. Несмеянов Ан.Н., Лоздеев В.В. Горячий синтез соединений, меченных радиоактивным тритием. Успехи Химии,1963, т.02, F7, с.773-799.

94. Wolfgang R. , Rowland Fm, Torton С. Production of radioactive organic compounds with recoil tritons. Science, 1955, v.I2i, p.715-717•

95. Donoso A* , Zapata P., Alvares J, Incorporation of tritia-ted choline by the corotyd body incubated in vitro. Arach. Biol. Med. Exp., 1970, v.7, N 1-3, p.X-7.

96. Depres J.P*, Greene A.K., Orabbe P. j -lactam prostaglandins. Tetrahedron Letters, 1978, v.25, p.2I9l-2l94„

97. Koshihara X., Inagaki A., Murota S. Induction of prostacyclin formation by sodium n-butyrate in a cloned epithelial level. Biochim. Biophys. Acta, 1981,v.664,N2,p.278-290,

98. Satch K., Mitsuhashi , Kinishiya K. , Kaway T., Maida K., Sakamoto S. Biosynthesis of prostaglandins from arachido-nic acid by the rat ovary. Prostaglandins and Med., 1982; v.6, N 6, p.589-600.

99. Toung D.W. Stereospecific synthesis of tritium labelled organic compounds usjng chemical and biological methods. Isot. Org. Chem., 1978, v.4, p.177-192.

100. Akesson B. Effects of analogues of ethanolamine and choline on phospholipid metabolism in rat hepatocytes. Biochem. J., 1977, v.168, p.401-408.

101. Hamberg M., Samuelsson B. On the mechanism of the biosynthesis of PGE2 and PGP2 • J. Biol. Chem., 1967, v.242,1. N 22, p.5325-5343.

102. Якушева Л.А., Мягкова Г.И., Бордюкова 0.0«, Евстигнеева Р. И Синтез цис, цис, цис, 8, XX, 14 эйкозатриеновой, ^Н.диго-мо — Y -лино ленов ой кислот и их превращение в простагландины Ер Р1оС, [%]Ер

103. Биоорган, Химия, 1982, т.8, №3, с.422-428.

104. Шевченко В,П. Мясоедов Н.Ф., Безуглов В .В., Бергельсон Л.Д Получение меченных тритием олеиновой кислоты и: простагландинов Eg и P^qc . Химия природных соединений, 1980, //Z,с.148-157•

105. Мясоедов Н.Ф., Сидоров Г.В. Введение тритиевой метки в компоненты нуклеиновых кислот гидрогенолизом соответствующих предшественников. I. Гидрогенолиз тритием 8 бром/замещенных цуриновых соединений. Радиохимия, 1980, т.22, №4, с.574-577.

106. Мясоедов Н.3>., Сидоров Г.В. Введение тритиевой метки в компоненты нуклеиновых кислот гидрогенолизом соответствующих предшественников. XX. Ридрогенолиз тритием 5 бром-замещенных пиримидиновых соединений. Радиохимия, 1980, т.22, №4, с.579-584.

107. Масоедов Н.Ф., Сидоров Г.В. Введение тритиевой метки в компоненты нуклеиновых кислот гидрогенолизом соответствующих предшественников • У. Изучение кинетики и механизма реакции.каталитического дегалоидирования. Радиохимия, 1981, т.23, №2, с.288-295,

108. Мясоедов Н.Ф., Сидоров Г.В., Введение тритиевой метки в компоненты нуклеиновых кислот гидрогенолизом соответствующих предшественников. У1. Изучение катализаторов гидрогенолиза. Радиохимия, 1981, т.23, №2, с.288-295.

109. Andre Т.', Dllborg S. Eadioactive Tetracycline. J. Amer. Chem. Soc., 1957, v.79, №1» p.494-4-95.

110. Козел Я., Гануш Я. Приготовлнние фосфорана (CgH^gBsCftl-COOR с высокой молярной радиоактивностью, в сб. Органические соединения, меченные радиоактивными изотопами. Материалы

111. Симпозиума стран членов СЭВ, Ленинград, 1981, чЛ, с.88-90.

112. Филип И., Богачек Л. Получение 5, урацила высокой иолнрной активности, в сб. Органические соединения, меченные радиоактивными изотопами. Материалы II Симпозиума стран членов СЭВ, Ленинград, 1981, ч.1, с.102-111.

113. Симпозиума стран членов СЭВ, Ленинград, 1981, чЛ, с.137-145.

114. Eidinoff M.LV, Knoll «Т.Е., Fukushima D.E. Equilibrium between protium, deuterium and tritium in the system hidrogen acetic acid. J; Amer. Chem. SocV, 1952, v.74, №21, p.5280-5284;113

115. Schuldiner S. Mechanism of hydrogen producing reactions on palladium.' VI. Atomic hydrogen over voltage on an Pd-Hbielectrode. J. Electrochem; Soc.,1959» v.106, р.440-4ЧЛ;:

116. Сокольская A.M., Решетников C.M. Гидрогенизация 3-сульфолена. Кинетика и Катализ, 1965, т.6, №3, с.559-562.

117. Gillespie L.J., Galstaum L.S. The palladium-hydrogen equilibrium and new palladium hydrides; J. Amer. ChemV Soc; 1936, v.58, №11, P.2565-2569V

118. Алгуджан А.А. Исследование кинетики и механизма реакции каталитического гидрирования углеводородов, XI. Изучение твердой системы Pi -Н как гидрирующего катализатора. Ш, 1952, Т.26, №12, с.1750-1Ж.

119. Schraven J., Сар С., Nowoczek GV, Sandhoff К. A radiometric assay for sialydase acting on ganglioside

120. Analytical Biochemistry, 1977, v.78, Ш2, p.333-339.

121. Шевченко В.П., Мясоедов Н.Ф., Волгин Ю.В., Безуглов В.В.,

122. Бергельсон Л.Д. Получение меченных тритием ненасыщенных жирных кислот методом гетерогенного каталитического изотопного обмена в растворе: с газообразным тритием. Радиохимия, 1980, т. 2Z , №6, с.905-910.

123. Buchman D., Pri-Bar I., Shimoni M.v Smoskowitz L. Ц^Ъо^ел-M'um e.ke-k^e -in $о£и6ъП e^Utf^d (y W-me.frx.ePs. J. Labelled Compounds, 1974, т. 10, p.

124. Шевченко В.П., Мясоедов Н.Ф., Проказова Н.В., Шапошникова Г.И Бергельсон Л.Д. Получение меченных тритием сфингогликолипи-дов гетерогенным каталитическим изотопным обменом с газообразным, тритием, в растворе. Биоорган. Хинин, 1981, т.7,1. И, с.131-135.

125. Glascock E*F#> BeiiLius Ь.В*

126. Studies oil the origin of milk fat. 1. The location of tritium in stearic acid produced by the catalytic radiation.

127. Bieohem. J., 1956, v.62, В , p.529125. evans e.A, Sheppard H.C., Terner J.С., Warrell D.C.

128. A new approach to specific labelling of organic compounds with tritium, catalyzed exchange in solution. J. Labelled

129. Compounds, 1974, v.10, p.569-587.

130. Pri-Bar I., Burchman D. Hydrogen exchange between molecular tritium and dibenzyl in solmtion catalyzed by transition metalls. Inter. J. Appl. Radiat. and Isotop., 1976$n1, p .53-57.

131. Simon H., Berngruber B. The mechanism of the catalytic hy-drogenation of ОС, -unsaturated carbonyl compounds. 7. Tritium isotope effects* Tetrahedron, 1970, v.26, N6,p.1401-1408.

132. Шевченко В.П., Мясоедов Н.Ф., Получение меченных тритием биогенных аминов и их аналогов. Химия. Природных Соединений, 1980, !Р5\ с.657-663.

133. Soc., 1964, v.4I, N5» p.388-390.

134. Ажгихин И.О. Простат ланд ины. М»: Медицина, 1978, е.9.

135. Euler von U.S. On the specific vasodilating and plaim muscle stimulating substances from accessory genital gland in man and certain animals. J. Physiol. (London), 1936, v.88, p.213-234.

136. Cockrill J.R., Miller E.G., Kurzrok R. The substance in human seminal fluid affecting iterine muscle. Amer. J. Physiol, 1935» V.H2, p.577-580.

137. Armstrong D.T# Role of prostaglandins in ovarian responses to luteiniring hormone. Xn: Advances in prostaglandin and thromboxane research, 1976, v.2, p.934-935*

138. Robert А,, Neramis J., Phillips J.P* Effect of prostaglan-din-Ед- on gastric secretion and ulcer formation in rati Gastroenterology, 1968, v.55, p.481-487.

139. Weinheimer a.J., Spraggins R.b. fhe ocurrence of two nev prostaglandin derivatives (I5-epi-PGA2 and its aoetate-aetbyl ester) in the gorgonian Plexaura homomalla. Tettrahedron Lett,, 1969» N59, p.5185-5188.

140. Uiyares C., Menendez £., Ruiz X. Identificacion de prostaglandins en diversas especies de gorgonlas cubanas.

141. Rev. Cub. Farm., 1974, N8, p.97-126.

142. Spat A., Siklos S. Possible role of prostaglandins in aldosterone regulation. In: Advances in prostaglandins and thromboxane research, 1976, v.2, p.967-968.

143. Tilhardt H., Hedqyist P. A possible role of prostaglandins in the regulation of vasopressin secretion in rats* Mfe sci., 1970, v.9, part I, p.825-850.

144. Steinberg D., Vaughan И., Atrand 0. Effects on the prostaglandins on hormone-induced metabolism of free fatty acids. J. Clin. Invest.* 1964, v.45, p.1533-1540.

145. Fain J.ft. Stimulation by insulin and prostaglandin Ej of glucose metabolism and inhibition of lipolytic action of theophylline on fat cells. Endocrinology, 1968, v.83, p.548-554.

146. ТЬ.е renal prostaglandins. In: International conference on prostaglandins, Florence, 1975, p.236-242»

147. Horton E.W. Biological activities of pure prostaglandins. Bxperientia, I$65» v. 31, p.113-118.

148. Embrey M.P., Morrison D.I<. The effect of prostaglandins on human pregnant myonestrium. J* Obstet. Gynecol. Brit. Comm., 1968, v.75» p.829-832.

149. Horton E.W., Main J.H. Further observations on the central nervous actions of prostaglandins Ej. Brit. J. Pharmac., 1967, т*30, p.568-581.

150. Bergstrcm £>. , Carlson L., Weeks J* The prostaglandinsa family of biological actir lipids* Pharmac. Rev., 1968, v. 20, Н7» p. 1-48.

151. Hamberg M., Samuelsson B. Detection and isolation of an endoper oxide intermediate in prostaglandin biosynthesis* Proc. Natl. Acad. Sci., 1973» v.70, N3, p.899-903»

152. ITugteren D.H., Hazelhof Ё. Isolation and properties of intermediates in prostaglandin biosynthesis» Biochia» Biophys. Acta, 1973, v.326, JT3, p.448-461.

153. Samuelsson В» Biosynthesis of prostaglandins* Fed* Proceedings, 1972, v.3I, N5, p.1442-1450.

154. Miyamoto T., Ogino N., Tamamoto S., Hayaishi 0* Purification of PG endoper oxide sinthetase from bovine vesicular gland* J. Biol* Chem*, 1976, v.251, N9, p.2629-2636.158. Smith W.L., bands W.E.M.

155. Oxygenation of polyunsaturated fatty acids during prostaglandin biosynthesis by sheep vesicular gland. Biochemistry, 1972, v.II, N17, p.3276-3285*

156. Мевх А.Т., Басевич. В.В., Ярвит И., Варфоломеев С.Д. Инактивация эедопероксидпростагландинсинтетазы микросом-ной фракции тромбоцитов человека в процессе реакции. Биохимия, 1982, т.47, Ш, с.1852-1858.

157. Мевх А.Т., Вржещ П.В., БасевичВ.В., Варфоломеев С.Д. Полиферментная система, синтеза про стаглаединов. В моногр. Химическая и биологическая кинетика. М.: Изд. Московского Университета, 1983, с.224-292.

158. Мевх А.Т., Вржещ П.В., Швядае В.Ю., Варфоломеев С.Д., Мягкова Г.И., Якушева Л.А. Простагландинсинтетаза. Инактивация эндопероксид FG-синтетазы лимитирующего фермента синтеза простагландинов. Биоорган, Химия, 1981, т.7, Р5, с. 695-703*

159. Мзвх А.Т., Голуб Н.Б., Варфоломеев С.Д., Филиппович Е.И., Макаров В.А., Евстигнеева P.Q. Влияние модификации карбоксильных групп протогемина XX на свойства, эндопероксид-простаглаццинсинтетазы. Биоорган. Химия, 1983, т.9, №8, сЛ056-1062.

160. Smith р.ь., Carpenter it.P. Studies of the mechanism of inactivation of prostaglandin endoperoxide synthetase. Fed. Proceedings, 1982, v.41, N4, p.I443-I449

161. Wallach D.P., Daniels E.G. Properties of a novel preparation of prostaglandin synthetase from sheep seminal vesicles. Biochim. Biophys* Acta, 1971» v.251, N , p.445-447.

162. Fryer W.A., Stanley J.P., Blair E. Autooxidation of polyunsaturated fatty acids* II. A suggested mechanism for the formation of TRA. Reactive materials from prostaglandin-like endoperoxides. Lipids, 1976, v.II, N5, p.370-379*

163. NUgteren D.H., Beerthuis B.K., Van Dorp I).A. The ensymic conversion of all cis-8,II,I4 eicesatrienoio acid into prostaglandin Ej. Reel. Trav. Chia., 1966, v.83, p.405-409.

164. Takaguchi C., Kahno E., Sih C.J., Mechanism of prostaglandin biosynthesis* I* Characterization and assay of bovine prostaglandin synthetase. Biochemistry, 1971» v.IO, p.2372-2376.

165. Goetz j.M., Sprecher E. inhibition of prostaglandin bio» synthesis by triynoic acids. Prostaglandins, 1976, v.12, p.187-192.

166. Cheng W.Y., Wyche A., lysz T., Needleman p. Prostaglandin Endoperoxide Eg Isomerasa is Dissociated from Prostaglandin Endoperoxide synthetase in the Renal Cortex; J. Biol. Chem.1982, V.257» N24, p. I4632-I4634.

167. Лилле Ю., Смородин E., Марвет P. О кинетических свойствах простагландин-эндопероксид-синтетазы. Изв. АН ЭССР. Химия, 197У, т.28, №2, с.108-112.I

168. Vene В.» Shimizu Т., Kondo К., Eayaishi О. Activation mechanism of PG endoperoxide synthetase by hemoproteins. J. Biol. Chem., 1982, v.257, N10, p.5584-5588.

169. Ogino N., Miyamoto Tamamoto S., Hayaishi 0. Prostaglandin endoperoxide E isoraerase from bovine vesicular gland microsomes, a glutatione-requiring enzyme»

170. J. Biol. Chem., 1977, v.252, H3t p.890-894.

171. Nugteren D.H., Tan Dorp D.A. The participation of molecular oxygen in"the biosynthesis of PGrS, Biechim. Biophys. Acta. 1965, v*98, H3, p.655-656.

172. Samuelsson B. On the inc orp or at i on of oxygen in the eon-version of 8,11,14 eicosatrienoic acid to PGEj. «Г. Amer. Chem. Soc., 1965, v. 87, Ж13» p.3011-3013*

173. Hamberg M., Samuelsson B. On the specificity of the oxygenation of unsaturated fatty acids catalyzed by Soybean lipoxidaso. J* Biol. Chem*, 1967, v.242, n22, p.5329-5335.

174. Tai H.H. Mechanism of prostaglandin biosyntfiesis in Babbit kidney medulla. Biochem. J», 1976, v. 160, N3, p.577-581.

175. Toshimoto A., Ito E., Tomita b. Oof actor requirements of the enzyme synthesizing prostaglandin in bovine seminal vesicles. J. Biochem. (Japan), 1970, v.68, p.487-499.

176. Samuelsson В. , Stallberg G. structure and synthesis of a derivative of prostaglandin Ej. Acta Chem. Scand., 1963, ▼•17, p.810-816.

177. Mozinge R. Palladium Catalyst. Org. Syn. 1955» v.3> p>685-690.

178. Van der Onderaa F. J., Buytenhek M., Nugteren D.A., Tan Dorp D.A. Purification and characterization of prostaglandin endoperoxide synthetase from vesicular glands. Biochim. Biophys. Acta, 1977, v.487, N2, p.315-331*

179. Bygdeman M*, Samuelsson B. Quantitative determination of prostaglandins in human semen. Clin. Chim. Acta, 1964, v.IO, N5, p. 566-568.

180. Andersen N.H. Dehidratation of prostaglandins. Studyby spectroscopic method. J. bipid Res. ,1969, v.IO, N3,P.320.

181. Корейман И.If. Фотометрический анализ. Метода, определения органических соединений. М.: Хиыия, 1У75, с.227.1У0- Сокольский Д.В., Друзь В.А. Введение в теорию гетерогенного катализа. М.: Высшая, школа, 1981, с.103,

182. Полторакс О.М., Воронин B.C., Хемосорбция и. катализ на платанированных катализаторах. I. Дисперсность платины по хемоеорбционным данным. ШХ, 1965, т.39, №6, е.1476-1482.

183. Дзисько В.А., Борисова М.С., Носкова С.П. Влияние химического состава и условий приготовления на, свойства никелевых катализаторав. 17. Низкопроцентные никель алюминиевые катализаторы. Кинетика и Катализ, 1974, т. 15, РЗ, с.751-757.

184. Ермаков Ю.И., Нанесенные катализаторы, полученные с применением металлорганических соединений переходных металлов. Изв. СО АН СССР, 1976, й°4, вып.2, с.58-73.

185. ХУ4- Дукат Л.П., Вржещ П.В., Шевченко В.П., Лыс Я.И., Мягкова Г.И., Мевх А.Т., Варфоломеев С.Д., Федосеев В.М., Мясоедов Н.Ф., Якушева Л.А. Фкрментативный синтез меченных тритием простагландинов из 3Н.ЭТК. Биоорган. Химия, 1984, т. , МО, ;с.1395-1400.

186. Шарыгин Л.Н., Чухланцев В.Г. Влияние температуры промо-роживания водных гелей на пористость адсорбента. MX, 1968, т.42, №8, с.2120-2122.

187. Мальцев Н.Н., Стерлядкин З.К., Михеев В.И. Гидрирование ненасыщенных соединений при атмосферномдавлении в присутствии контактных ядов.да СССР, 1950, т.71, с.477.

188. Физер Л., Физер M. Реагенты для органического синтеза. М.: йф, 1970, т.2, с.137.200— Меландер Л., Сондере У. Скорости реакции, изотопных молекул. M.J Мир, 1983, с.101.201 Feigen L*P., Hyman А.Ь.

189. V^sca^ <ui/£uetbce$ of fros. Fed. Proceeding, 1981, v,40, N7» p. 1985-1986.