Пористые эпоксидсодержащие полимерные гидрогели тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.06 ВАК РФ

1 .Введение.

2.Литературный обзор

2.1. Эпоксидсодержащие мономеры как носители для иммобилизации белков.

2.1.1 .Отдельные представители эпоксидсодержащих носителей

2.1.2 Синтетические эпоксидсодержащие полимеры 8 2.1.3. Другие носители для связывания белков

2.2. Иммобилизация белка на эпоксидсодержащих носителях

2.2.1. Влияние природы белка

2.2.2. Особенности имобилизации белков на высокопористых носителях.

2.3. Гелеобразование в замороженных системах.

2.3.1. Состав замороженной системы

2.3.2. Жидкая фаза в замороженных системах

2.3.3. Невымороженный растворитель

2.3.4. Криогели, образующиеся при реакциях полимеризации или поликонденсации.

3. Результаты и их обсуждение.

3.1. Исследование особенностей гелеобразования в криоусловиях

3.1.1. Влияние концентрации инициатора.

3.1.2.Влияние суммарной концентрации сомономеров

3.1.3. Влияние температуры.

3.1.4. Влияние соотношения мономеров.

3.2. Определение плотности пространственной сетки криогелей.

3.3. К определению параметров сополимеризации, проводимой в криоусловиях.

3.4. Микроскопическое исследование сеток криогелей.

3.5 Изучение набухаемости синтезированных криогелей.

3.3. Иммобилизация альбумина.

4. Экспериментальная часть.

4.1. Характеристика исходных веществ.

4.2. Синтез и исследование эпоксидсодержащих криогелей.

4.2.1. Синтез эпоксидсодержащих сополимеров.

4.2.2. Определение состава сополимеров.

4.2.3. Определение зависимостей выхода сополимеров от условий проведения синтеза.

4.2.4.Методика определения плотности пространственной сетки криогелей.

4.2.5. Исследование криогелей методом сканирующей электронной микроскопии.

4.2.6. Определение набухаемости сополимеров.

4.2.7. Исследование иммобилизации альбумина на эпоксидсодержащих гелях.

5. Выводы

6. Литература.

Актуальность работы. Создание высокоэффективных гетерофазных полимерных носителей, предназначенных для иммобилизации различных биологически активных веществ, является весьма важной задачей химии и технологии высокомолекулярных соединений.

В настоящее время полимерные носители широко используются в различных областях, связанных с медициной, биотехнологией, биоорганической химией, в качестве компонентов иммобилизованных биокатализаторов аффинных и иммуносорбентов, терапевтических систем, реагентов для синтеза и анализа природных полимеров.

Несмотря на наличие достаточно большого круга известных в настоящее время носителей, для получения которых применялись как природные, так и синтетические высокомолекулярные соединения, вопрос создания носителей, отвечающих всем предъявляемым требованиям нельзя считать решенным.

Так, наиболее распространенными недостатками известных, в том числе производимых промышленностью, полимеров-носителей являются, в частности, необходимость . дополнительного активирования с использованием, как правило, высокотоксичных, нестабильных, малодоступных активирующих агентов (глутарового альдегида, бромистого циана, карбодиимидов и др.); наличие неспецифической сорбции, что исключительно важно для создания аффинных и иммуносорбентов. При иммобилизации высокомолекулярных лигандов сказывается стерическая недоступность функциональных групп, расположенных в массе носителя. Многие носители недостаточно устойчивы к воздействию микроорганизмов, имеют невысокую осмотическую устойчивость, обладают недостаточно хорошими гидродинамическими характеристиками.

Все это определяет постановку задачи разработки новых типов полимерных носителей, лишенных указанных недостатков.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы являлся синтез новых носителей с низким уровнем неспецифической сорбции, не требующих дополнительного активирования и предназначенных для иммобилизации различных биологически активных лигандов, на основе пространственных эпоксидсодержащих сополимеров 2гидроксиэтилметакрилата, обладающих чрезвычайно развитой макропористостью, которая достигается осуществлением синтеза сополимеров в криоусловиях в водной среде.

Для выполнения данной цели были поставлены следующие задачи:

- выяснение влияния условий проведения сополимеризации 2-гидроксиэтилметакрилата с эпоксидсодержащим мономером (глицидилметакрилатом, аллилглицидиловым эфиром) и сшивающим агентом (К,Ы'-метилен-бис-акриламидом) на выход, состав и свойства получаемого сополимера^ и выявление оптимальных условий их синтеза;

- исследование свойств, строения, макроструктуры полученных криогелей;

- исследование возможности иммобилизации на полученных полимерных носителях биологически активных лигандов.

Обоснование выбора объектов исследования. Конкретным объектом исследования были криогели на основе сшитых сополимеров 2-гидроксиэтилметакрилата с ненасыщенными мономерами, содержащими эпоксидную группу: глицидилметакрилатом и аллилглицидиловым эфиром и сшивающим агентом - (Ы^'-метилен-бис-акриламидом).

Использование эпоксидсодержащих мономеров глицидилметакрилата и аллилглицидилового эфира позволяло получать 6 эпоксидсодержащие носители, не требующие дополнительного активирования.

Использование в качестве связываемого лиганда доступного сывороточного альбумина человека позволило выявить характер влияния на процесс иммобилизации строения носителя.

Научная новизна. В работе впервые в условиях криоструктурирования синтезированы макропористые пространственные сополимеры гидроксиэтилметакрилата, N,N' -метилен-бис-акриламида и эпоксидсодержащих мономеров (глицидилметакрилата и аллилглицидилового эфира). Впервые исследован процесс сополимеризации данных мономеров в замороженных водных системах и выяснено влияние условий синтеза на строение и свойства сополимеров. Выявлена корреляция между строением сополимеров и их свойствами -набухаемостью и строением макропор. Показано, что полученные сополимеры способны связывать значительные количества белка.

Практическая значимость работы. В работе синтезированы новые полимерные носители, обладающие развитой пористостью, низкой неспецифической сорбцией по отношению к белкам и способные к иммобилизации значительных количеств белковых лигандов.

2. Литературный обзор

5. Выводы

1. Используя принцип образования полимеров в водных замороженных средах впервые получены пористые полимерные криогели на основе пространственных сополимеров 2-гидроксиэтилметакрилата, N,N'-метиленбисакриламида и эпоксидсодержащих соединений (глицидилметакрилата и аллилглицидилового эфира).

2. Исследованием особенностей сополимеризации 2-гидроксиэтилметакрилата, 1Ч,К'-метиленбисакриламида с глицидилметакрилатом и аллилглицидиловым эфиром в криоусловиях установлен характер влияния на протекание процесса температурного и временного факторов, соотношения мономеров, концентрации инициатора и мономеров на выход и состав синтезируемых сополимеров и выявлены условия, позволяющие получать гели с заданными характеристиками.

3. Микроскопическими и электронно-микроскопическими исследованиями установлено, что полученные криогели представляют собой системы с развитой пористой структурой с размером пор от единиц до сотен микрометров. Показано, что расстояние между узлами сшивки, определенное по зависимостям «деформация-напряжение» уменьшается с увеличением количества сшивающего агента в системе.

4. Показано, что полученные гели характеризуются высокими скоростями протока жидкости и имеют высокую осмотическую стабильность в растворах с различной ионной силой и различным рН.

91

Изучением набухания гелей в различных средах показана их высокая устойчивость к изменению ионной силы и рН среды.

5. На примере сывороточного альбумина человека продемонстрирована высокая способность полученных сополимеров к ковалентному связыванию белков без дополнительного активирования. Исследованием связывания белка различными образцами гелей выявлены оптимальные структуры сополимеров, позволяющие получать носители с максимальной иммобилизующей способностью.

1. Коршак В. В., Штильман М.И. -Полимеры в процессах иммобилизации и модификации природных соединений. - М., 1984.- 261 с.

2. Katal J. Ероху and aldehyde polymers as reagents.- J. Polym. Sci., Polym. Symp.- 1978. vol. 62.- p. 251-270.

3. Svec F., Katal J. Ubersicht йЬег herstellung, modifizierund und anwendung von makroporosen flycidilmetacrylat-athylendimetacrylat-copolymeren.- Fasertorsch. Und Textiltechn.- 1978.- B.29, №7.- S. 477-480.

4. Svec F., Labskyy J., Lanyova L., Hradil J. The syntesis of 2-hydroxypropylene dimethacrylate in a mixture with glycidylmethacrylate and their copolymerisation to macroporous product.- Angew. macromol. Chem.- 1980.- vol. 90.- p. 47-55.

5. Svec F., Hradil J., Coupee J., Katal J. Reactive polymers. Macroporous methacrylate copolymers containing epoxy groups.- Angew. makromol. Chem.-1975.-vol. 48.-p. 135-147.

6. Lukas J., Bleha M., Votavova E., Svec F. Reactive polymers. XL. Study of the internal structure of thermally treated polymeric sorbents based on glycidylmethacrylate copolymers.- J. Chromotogr.- 1981.- vol. 210, №2 .- p. 255259.

7. Lukas J, Bleha M., Svec F. Katal J. An inverstigation of the internal structure of polymeric sorbents based on poly(2,3-epoxypropyl methacrylate-co-ethyllene dimethacrylate).- Angew. makromol. Chem.- 1981.-vol. 95.-p. 129-137.r

8. Hrudkova H., Svec F., Katal J. Reactive polymers. VIII. Reaction of the epoxide groups of the copolymer glycidil methacrylate- ethylendimethacrylate with aliphatic aminocompounds.- Brit. Polym. J.- 1977.- vol.9, № 3.- p. 238-240.

9. Bednar В., Janca J., Dusec K., Katal J. Homopolymarace 2,3- epoxypropyl-metakrylatu.- Sb. VSCHT Praze.- 1980.- S.3.- S. 241-258.

10. Horak D., Pelzbauer Z., ., Labsky J. The effect of diluents on the surface reactivity of polymers obtained from glycidilmethacrylate.-Angew. makromol. Chem.- 1983.-vol. 117.-p. 117-129.

11. Lukas J., Svec F. Makroporezni polymerny sorbenty proplynovou chromatografii na bazi glycidylmethacrylatovych kopolymeru.- Chem. listy.- 1983 -S.77, № 10.-S. 1064-1082.

12. Marousek V., Blenda M., Votavova E., Katal J. Einfluss der zusammensetzung des polymerisationsansatzes 2,3-epythiopropylmethacrylat-ethylendimethacrylat.-Sb. VSCHT Praze.- 1980.- S.3.- S. 269-278.

13. Hannibal-Friedrich O., Chun M., Sernetz M. Analysis of reation kinetics of bead by microfluorometry.- Macromolecules: Proc. microymp.- Prague, 1978.- p. 126-129.

14. Hannibal-Friedrich O., Chun M., Sernetz M., Sernetz M. Immobilization of (3-galactosidase, albumin, y-globulin on epoxy-activated acryulic beads.- Biotechnol. AndBioeng.- 1980.- vol.22, №1.- p. 157-175.

15. Kramer D. M., Lehman K., Pennewiss H., Plainer H. Oxirane acrylic beads (prep. 2878 C) for protein immobilisation: a novel matrix for biocatalysis and biospecific adsorbtion.- Macromolecules: Proc. int. Symp.- Mainz, 1979.- vol. 3.- p. 1959-1962.

16. Sernetz M., Hannibal-Friedrich O., Chun M. Bestimmung radialer dichtegradienten in oxiran-acrylharzperlen durch microinterferometrie und microfluorometrie.- Microsc. acta., 1979.- B. 81, №5.- S. 393-406.

17. Pitha J., Zawadzki S., Hughes B. A. Carriers for drugs and enzymes based on copolimers of allyl alycidil ether witch acrylamide.- Macromol. Chem.- 1982.- vol. 183, №4,- p. 781-788.

18. Zeitz U., Pauly H., Neue reaktive mikrogele als trager fur enzyme.- Angew. makromol. Chem.- 1979.- B.76-77.- S. 319-327.

19. Kraemer D. M., Lehmann K., Pennewiss H., Plainer H. Oxirane- acrilic beads, preparation 2878C.- Enzyme Eng.- 1978.- vol. 4.- p. 153-154.

20. Пат. 3106456 ФРГ, МКИ3 С 08 F 220/56. Verfahren zur herstellung von perlformigen, hydrophilen, gegeniiber proteinen bindungsaktiven tragerpolymeren.

21. A.C: 186559 ЧССР, МКИ3 С 08 F 20/28. Trojrozmerny porezni nosic, a zpusob jeho pripravy.

22. A.C. 187800 ЧССР, МКИ3 С 08 F 20/26. Trojrozmerny porezni nosic, sestavajici z porezniho anorganickeho materialu a polymeru.

23. Schneider В., Doskocilova D., Stokr J. et al. Structure of the product of polymeryzation of 2,3- epoxypropyl methacrylate in the presence of porous glass.-Acta Polym.- 1979.- vol. 30, № 5.- p. 283-289.

24. Katal J., Tlustacova M. Reactive polymers. XXII. Preparation of poly(2,3 epoxypropylmethacrylate) on porous glass.- Acta Polym.- 1979.- vol. 30, № 1.- p. 40-43.

25. Пат. 2750595 ФРГ, МКИ3 С 08 F 20/26. Support material for immobilization of biologically active substance.- C.A.- 1978.- vol. 89.- pl93189n.

26. A.C. 755296 СССР, МКИ3 С 07 G 7/02. Способ получения активированного носителя для иммобилизации биологически активных веществ.

27. А.С. 664468 СССР, МКИ3 С .08 G 7/02. Способ получения активированных носителей.

28. Пат. 4415664 США, МКИ3 С 12 N 11/14. Epiamine-based support matrix.

29. Пат. 4415663 США, МКИ3 С 12 N 11/14. Support matrix for immobilized enzymes.

30. Виноградов E. Л., Мальков E. И., Зайцев П. И. и др. Пленочные носители для иммобилизации ферментов.- Ж. прикл. химии. -1985.- Т.58, №4.- с. 755761.

31. Hermanson J., Reaction with epoxy activated silica.- J. Chromatogr.- 1984.- vol. 297, №1.-p. 67-69.

32. Porath J. General methods and coupling procedures/ Jakoby A., Wilchek B. Methods in enzymology.- 1974.- vol. 34.- p. 13-30.

33. Sundberg L., Porath J., Preparations of adsorbents for biospecific affinity chromatography.- J. Chromatogr.- 1974.- vol. 90, №1. p. 87-98.

34. Штильман М.И. Реакции в системе «белок — полимерный носитель», используемые при иммобилизации ферментов // Успехи химии.- 1979,-Т.48, № ll.-c.2061-2086.

35. Valentova О., Marek Н., Svec F., et al. Comparison of different methods of glucose oxidase immobilization // Biotechnol. and Bioeng.-1981.-Vol. 23, N 9.- P. 2093-2104.

36. Hosaka S., Murao Y., Masuko S., Miura K. Preparation of microspheres of poly(glycidylmethacrylate) and its derivatives as carries for immobilization proteins И Immunol. Comun.- 1983.- Vol. 12, N 5.- P. 508-517.

37. Marek M., Jary J., Valentova O., Vodrazka Z. Immobilization of glycoenzymes by means of their glycosidic components // Biotechnol. Lett.- 1983.- Vol. 5, N 10.-P. 653-658.

38. Коршак B.B., Штильман М.И., Торчилин В.П. и др. Об относительной реакционной способности некоторых водорастворимых эпоксидсодержащих полимеров с а химотрипсином // Докл. АН СССР.- 1983.- Т. 273, № 3.- С. 626-628.

39. Штильман М.И., Торчилин В.П., Козлов А.А. Модификация белков водорастворимыми эпоксидсодержащими полимерами // Тез. докл. Всесоюзн. симп. по инженерной энзимологии.- Кобулети, 1985.- С. 31.

40. Штильман М.И., Шлимак В.М., Козлов А.А. и др. О молекулярно-массовых характеристиках сополимеров N-винилпирролидона иаллильных мономеров // Высокомол. соединения. Сер. Б.-1984.- Т. 26, № 12.-С. 901-905.

41. Drobnik J., Saudek V., Svec F., Kalal J. Enzyme immobilization techniques on poly(glycidyl methacrylate-co-ethylene dimethacrylate) carrier with penicillin amidase as model // Biotechnol. and Bioeng.- 1979.- Vol. 21, N 8.- P. 1317-1332.

42. A. C. 810718 СССР, МКИ3 С 07 G 7/02. Способ получения иммобилизованных ферментных препаратов.

43. Морозова Л.В., Минакова Т.Т., Тизенберг Г.М. и др. Синтез и противосиликотическая активность сополимеров N-винилпирролидона с винилглицидиловым эфиром этиленгликоля // Хим.-фармац. ж.- 1983.- Т. 18, № 1.- С. 61-64.

44. Dhal Pradeep К., Deshpande D.D., Babu G.M. Copolymerization based on glycidyl methacrylate monomer // IUPAC MACRO'83.- Bucharest, 1983.- Abstr. Sec. 1.-P. 46.

45. Рихтер M., Аугустат 3., Ширбаум Ф. // Избранные методы исследования крахмала. Пер. с нем. М.: Пищ. пром-сть, 1975. С. 14 M.Richter, S.Augustat, F.Schierbaum Ausgewahlte Methoden Der Stark-chemie. Leipzig: VEB Fachbuchverlag, 1969.

46. Bringham J.E., Gidley M.J., Hoffmann R.A., Smith C.G. // Food Hydrocolloids 1994. V. 8. № 3/4. P. 331-335.

47. Tanaka R., Hatakeyama Т., Hatakeyama H. // Polymer International 1998. V. 45. № l.P. 118-121.

48. Lozinsky V.I., Damshkaln L.G., Brown C.R.T., Norton I.T. // Polymer International 2000. V. 49. № 11. p. 1434-1442.

49. Lozinsky V.I. // Proc. 216-th Ann. ACS Meeting, Division of Polymeric Materials: Science and Engineering, ACS, Boston, 1998. V. 79. P. 238-244.

50. Рогожин C.B., Вайнерман E.C., Лозинский В.И. // Докл. АН СССР 1982. Т. 263. № 1.С. 115-121.

51. Лозинский В.И., Вайнерман Е.С., Рогожин С.В. А. с. 1008214 СССР//Б.И. 1983. № 12. С. 1311-38.

52. Лозинский В.И., Корнеева М.Н., Вайнерман Е.С., Рогожин С.В. //Докл. АН СССР 1983. Т. 270. № 1. С. 101-103.

53. Lozinsky V.I., Korotaeva G.F., Vainerman E.S., Rogozhin S.V. / Colloid & Polymer Sci. 1984. V. 262. № 8. P. 617-622.

54. Лозинский В.И. // Успехи химии 1998. Т. 67. № 7. С. 641.

55. Домотенко Л.В., Лозинский В.И., Вайнерман E.G., Рогожин С.В. //Высокомолек. соед. А. 1988. Т. 30. № 8. С. 1661-1665.

56. Mori Y., Tokura Н., Yoshikawa М. // J. Materials Sci. 1997. Y. 32. №2. P. 491498.

57. Damshkaln L.G., Simenel I.A., Lozinsky V.I. // J. Appl. Polym. Sci. 1999. V. 74. № 8. P. 1978-1983.

58. Lozinsky V.I., Damshkaln L.G. // J. Appl. Polym. Sci. 2000. V. 77. №9. P. 2017-2023.

59. Smith P., Pennings A.J. // Polymer. 1974. V. 15. № 7. P. 413-419.

60. Берлин A.A., Пенская E.A. // Докл. АН СССР 1956. Т. ПО. № 4. С. 585-591.

61. Kuhn W., Majer Н. // Angew. Chem. 1956. В. 68. № 10. S. 345-349.

62. Jellinek H.H.G., Fok S.Y. // Makromol. Chem. 1967. B. 104. № l.S. 18-24.

63. Барамбойм H.K. // Механохимия высокомолекулярных соединений. М: Химия, 1978. С. 275.

64. Butler A.R., Bruice Т.С. // J. Amer. Chem. Soc. 1964. V. 86. № 3.P. 313-322.

65. Bruice T.C., Butler A.R. // J. Amer. Chem. Soc. 1964. V. 86. № 19. P. 41044111.

66. Pincock R.E., Kiovsky Т.Е. // J. Chem. Educ. 1966. V. 43. № 7. P. 358.

67. Pincock R.E. // Ace. Chem. Res. 1969. V. 2. № 4. P. 97-109.

68. Pincock R.E., Kiovsky Т.Е. // J. Amer. Chem. Soc. 1965. V. 87. ч №9. P. 2072-2085.

69. Сергеев Г.Б., Батюк B.A., Степанов М.Б., Сергеев Б.М. // Докл. АН СССР 1973. Т. 213. №4. С. 891-899.

70. Вода и водные растворы при температурах ниже 0°С. / под ред. Франкса Ф., пер. с англ., Киев: Наукова думка, 1985. 387 с. Water and Aqueous Solutions at Subzero Temperatures. / под ред. F.Franks. New York London: Plenum Press, 1982.

71. Katayama S., Fujiwara S. // J. Phys. Chem. 1980. V. 84. № 18. P. 2320-2327.

72. Suzuki E., Nagashima N. // Bull. Chem. Soc. Japan 1982. V. 55. №9. P. 27302737.

73. Gusev D.G., Lozinsky V.I., Vainerman E.S., Bakhmutov V.I. // Magn. Res. in Chem. 1990. V. 28. № 7. P. 651-660.

74. Kuntz I.D. // J. Amer. Chem. Soc. 1971. V. 93. № 2. P. 514-522.

75. Ogino K., Sato H. // J. Polym. Sci, Polym. Phys. 1995. V. 33. № 3.P.445-452.

76. Horii F., Masuda K., Kaji H. // Macromolecules 1997. V. 30. № 8. P. 25192523.

77. Masuda K., Horii F. // Macromolecules 1998. V. 31. № 17. P. 5810-5818.

78. Mikhalev O.I., Serpinski M., Lozinsky V.I., Kapanin P.V., Chkeidze I.I., Alfimov M.V. // Cryo-Letters 1991. V. 12. № 4. P. 197-203.

79. Mikhalev O.I., Yakovleva I.V., Trofimov V.I., Shapiro A.B. // Cryo-Letters 1985. V.6. № 4. P. 245-255.

80. Михалев О.И., Каплан A.M., Трофимов В.И., Тальрозе В.Л. // Докл. АН СССР 1986. Т. 287. № 2. С. 385-389.

81. Mikhalev O.I., Karpov I.N., Kazarova Е.В., Alfimov M.V. // Chem. Phys. Lett. 1989. V. 164. № 1. P.96-102.

82. Серпински M. // Дис. канд. физ.-мат. наук. М.: ИХФ РАН. 1992. 122 с.

83. Андроникашвили Э.Л. // Биофизика 1972. Т. 17. № 6. С. 1068-1074.

84. Pouchly J., Biros J., Benes S. // Makromol. Chem. 1979. B. 180. №3. P.745-749.

85. Nakamura K., Hatakeyama Т., Hatakeyama H. // Polymer 1983. V. 21. №7. P. 871-880.

86. Hatakeyama Т., Nakamura K., Hatakeyama H. // Makromol. Chem. 1983. B. 21. №6. S. 1265-1274.

87. Kamide K., Okajima K., Matsui Т., Kobayashi H. // Polym. J.1984. V. 16. №3. P. 259-263.

88. Kumagai H., Nakamura K., Fujiwara J. // Agric. Biol. Chem.1985. V. 49. №11. P. 3097-3099.93. de Vringer Т., Joosten J.G.H., Junginger H.E. // Colloid & Polymer Sci. 1986. V. 264. № 7. P. 623-630.

89. Ross Y.H. // J. Food Sci. 1986. V. 51. № 3. P. 684-690.

90. Hatakeyama Т., Yoshida H., Hatakeyama H. // Polymer 1987. V. 28. №7. P. 1282-1287.

91. Lovric Т., Pilizota V., Janekovic A. // J. Food Sci. 1987. Y. 52. №3.P. 772-780.

92. Jochem M., Korber C. // Cryobiology 1987. V. 24. № 6. P. 513-518.

93. Miyawaki O., Abe Т., Yano T. // Agric. Biol. Chem. 1988. V. 52. №12. P. 29953001.

94. Charoenrein S., Reid D.S. // Thermochim. Acta 1989. V. 156. №3.P. 373-380.

95. Simatos D., Blond G. // В кн.: Water Relationships in Food. / под ред. Levine H., Slade L. New-York: Plenum Press, 1991. P. 139.

96. Kerr W.L., Ju J., Reid D.S. // J. Food Sci. 1993. V. 58. № 3. P. 675-681.

97. GoffHJD. //Pure & Appl. Chem. 1995. V. 67. № 11. P. 1801-1809.

98. Tanaka R, Hatakeyama Т., Hatakeyama H. // В кн.: Gums and Stabilizers for the Food Industry. / под ред. Williams P.A., Phillips G.O. London: Publ. Royal Soc. Chem., 1998. P. 43.

99. Hatakeyama H., Hatakeyama T. // Thermochim. Acta 1998. V. 308. №1/2. P. 3-11.

100. Tanaka N., Motomura Т., Ishii N., Shimura K., Onishi M., Mo-chizuki A., Hatakeyama T. // Polymer International 2000. V. 49. № 12. P. 1709-1717.

101. Podorozhko E.A., Kurskaya E.A., Kulakova V.K., Lozinsky V.I. // Food Hydrocolloids 2000. V. 14. № 2. P. 111-118.

102. Ш- Huang L., Nishinari K. // J. Polym. Sci., Polym. Phys. 2001.V.39. № 5. P. 496-502.

103. Khokhlov A.R, Khalatur P.O. // Physica A. 1998. V. 249. № 2. P. 249-255.

104. Zheligovskaya E.A., Khalatur P.O., Khokhlov A.R. // Phys. Rev. E. 1999. V. 59. №3. P. 3071-3077.

105. Лозинский В.И., Сименел И.А., Курская Е.А., Кулакова В.К., Гринберг В .Я., Дубовик А.С., Галаев И.Ю., Маттиассон Б., Хохлов А.Р. // Докл. Акад. наук 2000. Т. 375. № 5. С. 637-640.

106. Папков С.П. // Студнеобразное состояние полимеров. М.: Химия, 1974, 256-261 с.

107. Kudela V. // В кн.: Encyclopedia of Polymer Science and Engineering. New York e.a.: J.Wiley & Sons, 1987. V.7. P. 783.

108. Tanaka Т. // В кн.: Structure and Dynamics of Biopolymers. / под ред. Nicolini С. M. Dordrecht e.a.: Martinus Nijhoff Publ., 1987. P. 237.

109. Филиппова O.E. // Высокомолек. соед. С. 2000. Т. 42. № 12. С. 2328

110. Шиц А.А. // В кн. Энциклопедия полимеров. М.: Советская энциклопедия, 1972. Т. 1. С. 594.

111. Иржак В.И., Розенберг Б.А., Ениколопян Н.С. // Сетчатые полимеры. М.: Наука, 1974. 248 с.

112. Роговина Л.З., Слонимский Г.Л. // Усп. химии. 1974. Т. 43. №6. С. 1102.

113. Flory P.J. // В кн.: Encyclopedia of Polymer Science and Engineering. New York e.a.: J.Wiley & Sons, 1987. V. 10. P. 95.

114. Kaetsul.//Adv.Polym. Sci. 1993. V. 105.P.81-89.

115. Kaetsu I., Okubo H., Ito A., Hayashi K. // J. Polym. Sci., Polym. Chem. 1972. V. 10. №8. P. 2203-2209.

116. Kaetsu I, Ito A., Hayashi K. // J. Polym. Sci., Polym. Chem. 1973. V.l 1. №8. P. 1811-1818.

117. Yoshida M., Kumakura M., Kaetsu I. // Polymer 1979. V. 20. №1 .P. 3-7.

118. Yoshida M., Kumakura M., Kaetsu I. // Polymer 1979. V. 20. №1.P. 9-21.

119. Каргин B.A., Кабанов B.A. // ЖВХО 1964. Т. 9. № 6. С. 602.

120. Nambu M. // Kobunshi Ronbunshu 1990. V. 47. № 9. P. 695.

121. Kaetsu I., Kumakura M., Yoshida M. // Biotechnol. Bioeng. 1979. V. 21. №5. P. 847-850.

122. Fujimura Т., Kaetsu I. // Z. Naturforsch. 1982. B. 37c. № 2. S. 102-107.

123. Kumakura M., Kaetsu I. // J. Appl. Biochem. 1983. V. 5. № 3. P. 165-171.

124. Kumakura M., Kaetsu I. // J. Appl. Biochem. 1983. V. 5. № 4/5. P. 348-355.

125. Fujimura Т., Kaetsu I. // Appl. Biochem. Biotechnol. 1983. V. 8. №2. P. 145150.

126. Kumakura M., Kaetsu I. // J. Chem. Technol. Biotechnol. 1983. V.33B. № 2. P. 95-102.

127. Kumakura M., Kaetsu I. // J. Appl. Polym. Sci. 1983. V. 28. № 12. P. 37593763.

128. Kaetsu I., Kumakura M., Kikuchi S., Adachi S., Suzuki M. // Z. Naturforsch. 1983. B. 38c. № 9/10. S. 812-820.

129. Fujimura Т., Kaetsu I. // Int. J. Appl. Radiat. Isotop. 1983. V. 34. №6. P. 929935.

130. Kumakura M., Kaetsu I. // Int. J. Biochem. 1984. V.l 6. № 11. P. 1159-1164.

131. Kumakura M., Kaetsu I. // Polymer J. 1984. V. 16. № 2. P. 113-119.

132. Kumakura M., Kaetsu I. // J. Appl. Polym. Sci. 1984. V. 29. № 9. p. 27132720.

133. Kumakura M., Kaetsu I., Kobayashi T. // Enzyme Microb. Technol. 1984. V. 6. № l.P. 23-29.

134. Kumakura M., Kaetsu I. // Bioscience Repts. 1984. V. 4. № 3. P. 181-189.

135. Kumakura M., Kaetsu I, Nisizawa К. I I Biotechnol. Bioeng. 1984. V. 26. №1. P. 17-25.

136. Kumakura M., Kaetsu I. // Process Biochem. 1984. V. 19. № 3. P. 124-131.

137. Fujimura Т., Kaetsu I. // Z. Naturforsch. 1985. B. 40c. № 7/8. S. 576-580.

138. Kumakura M., Kaetsu I., Nisizawa K. // Biotechnol.jAppl. Bio-efrem. 1986. V. 8. № 2/3. P.195-201.

139. Kumakura M., Kaetsu I. // Process Biochem. 1988. V. 23. № 2. P. 51-62.

140. Tamada M., Kasai N., Kaetsu I. // Biotechnol. Bioeng. 1988. V. 32. №3. P. 386-393.

141. Kumakura M., Kaetsu I. // J. Appl. Polym. Sci. 1989. V. 37. № 8. P. 22292236.

142. Kumakura M. // J. Mol. Catal. B. Enzym. 1995. V. 1. № 1. P. 11.

143. Kaetsu I. // Radiat. Phys. Chem. 1996. V. 47. № 3. p. 419-425.

144. Higa O.Z., Kumakura M. // Biomaterials 1997. V. 18. № 9. p. 697-701.

145. KumakuraM. //Polym. Adv. Technol. 2001. V. 12. № 7. p. 415-421.

146. Sutani K., Kaetsu I, Uchida K. // Radiat. Phys. Chem. 2001. V. 61. №1. P. 4954.

147. Fujimura Т., Kaetsu I. // Biotechnol. Bioeng. 1987. V. 29. № 2. P. 171-177.

148. Kumakura M., Kaetsu I. // Makromol. Chem. 1983. B. 184. № 9. P. 1831-1838.

149. Yoshi F., Kaetsu I. // Appl. Biochem Biotechnol. 1983. V. 8. № 2. P. 115-122.

150. Kumakura M., Kaetsu I. // J. Mol. Catal. 1984. V. 23. № 1. P. 1-9.

151. Kumakura M., Kaetsu I. // J. Chem. Technol. Biotechnol. 1984. Y. 34B.№l.P.39-44.

152. Piskin K., Area E., Piskin E. // Appl. Biochem. Biotechnol. 1984. V. 10. № 1.Р. 73-60.

153. Kumakura M., Kaetsu I. // Colloid & Polymer Sci. 1984. V. 262. № 6. P. 450460.

154. Lozinsky V.I., Vainerman E.S., Titova E.F., Belavtseva E.M., Rogozhin S.V. // Colloid & Polymer Sci. 1984. V. 262. № Ю. P. 769-779.

155. Belavtseva E.M., Titova E.F., Lozinsky V.I., Vainerman E.S., Rogozhin S.V. // Colloid & Polymer Sci. 1984. V. 262. № 10. P. 775-783.

156. Lozinsky V.I., Vainerman E.S., Ivanova S.A., Titova E.F., Shtilman M.I., Belavtseva E.M., Rogozhin S.V. //Acta Polymerica 1986. B. 37.№3. S. 142-150.

157. Lozinsky V.I., Morozova S.A., Vainerman E.S., Titova E.F., Shtilman M.I., Belavtseva E.M., Rogozhin S.V. // Acta Polymepa 1989. B. 40. №1. P.8.

158. Tighe BJ. // В сб. Proceedings of the 3rd Internat. Conf. on Diffusion in Polymers, York, UK, 13-15 February, 1991 . P. 11 .

159. Righetti P.O., Brost B.S.W., Snyder R.S. // J. Biochem. Bio-phys. Meth. 1981. V. 4. № 5/6. P. 347-355.

160. Алфрей T.A., Борер Дж., Марк Г. Сополимеризация.- М., 1953.-266 с.

161. Calvin Е. Schildknecht. Allyl compounds and their polymers (including polyolefins).-Wiley-Interscience, 1973.

162. Франке Ф. Свойства водных растворов при температурах ниже 0 °С: сб. тр. под ред. Ф. Франкса.- Киев, 1985.- С. 176-273.

163. Alfrey Т., Goldfinger. G. The mechanism of copolymerization// J. Chem. Phys.-1944.-Vol. 12, N 6.-P. 205-209.

164. Езриелев А.И., Брохина Э.Л., Роскин Б.С.,аналитический метод вычисления констант сополимеризации // Высолкомол. Соединения. Сер. А.-1969.-Т. 11, №8.-С. 1670-1680.

165. Tidwell P.W., Mortimer С.A. An improved method of calculating copolymerization reactive ratios // J. Pol. Sci.-1965.- Vol. ЗА, N. l.-P. 369-387.

166. Meyer V.E., Chan R.C. Computer calculation of batch-type copolymerization behavior // Polym. Prepn.-1967.-Vol. 8, N 1.- P. 209-215.

167. Fineman M., Ross S.D. Linear method for determining monomer reactivity ratios in copolymerization // J. Pol. Sci.-1950.- Vol. 5.- P. 251-284.