Потенциометрические сенсоры на основе органических ионообменников для определения β-лактамных и аминогликозидных антибиотиков тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ
|
Барагузина, Виктория Владимировна
АВТОР
|
||||
|
кандидата химических наук
УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ
|
||||
|
Саратов
МЕСТО ЗАЩИТЫ
|
||||
|
2006
ГОД ЗАЩИТЫ
|
|
02.00.02
КОД ВАК РФ
|
||
|
|
||||
На правах рукописи
Барагузина Виктория Владимировна
ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКИЕ СЕНСОРЫ НА ОСНОВЕ ОРГАНИЧЕСКИХ ИОНООБМЕННИКОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Р-ЛАКТАМНЫХ И АМИНОГЛИКОЗИДНЫХ АНТИБИОТИКОВ
02.00.02 - аналитическая химия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук
Саратов 2006
Работа выполнена в Саратовском государственном университете им. Н.Г. Чернышевского
Научный руководитель доктор химических наук, профессор
Кулапина Елена Григорьевна
Официальные оппоненты доктор химических наук, профессор
Гусакова Наталья Николаевна
доктор химических наук Остроумов Игорь Геннадьевич
Ведущая организация Казанский государственный университет
Защита состоится « ££ »2006 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 212.^43.07 при Саратовском государственном университете им. Н.Г.Чернышевского по адресу:
410012, Саратов, ул. Астраханская, 83, СГУ, корп.1, химический факультет.
С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Саратовского государственного университета им. Н.Г.Чернышевского.
Автореферат разослан « и
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор химических наук, профессор
4
Штыков С.Н.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы. В настоящее время р-лактамные и аминоглико-зидные антибиотики занимают ведущее место в лечении тяжелых инфекционно - воспалительных заболеваний. Однако успешное применение этих препаратов из-за низкого терапевтического индекса (особенно аминогликозидов) возможно лишь при строгом контроле их концентраций в биологических жидкостях. Актуальной проблемой является осуществление лекарственного мониторинга, который обеспечивает выбор адекватной индивидуальной дозы и схемы применения антибиотиков для повышения эффективности и безопасности лечения. Экспрессное количественное определение антибиотиков в биологических жидкостях и лекарственных формах необходимо для оценки физиологических и биохимических процессов, протекающих в организме. Для определения антибиотиков в настоящее время используются микробиологические, спектроскопические, хроматографические и электрохимические методы. Актуальным является разработка экспрессных методов определения антибиотиков, доступных для клинических и биохимических лабораторий.
К настоящему времени имеются единичные публикации по применению потенциометрии с ионоселективными электродами для определения антибиотиков в лекарственных формах. Исследования в данной области носят, в основном, прикладной характер. Не обоснован выбор электродноактивных компонентов (ЭАК) мембран сенсоров, не исследованы физико-химические свойства ЭАК в водных средах и в фазе мембраны, не изучены электроаналитические свойства мембран, чувствительных к антибиотикам.
Работа проводилась в соответствии с Координационным планом Научного Совета РАН по аналитической химии и координируемым Головным Советом по химии и химической технологии РАН по проблеме 2.20.1 "Развитие теоретических основ аналитической химии" по теме НИР 3.71.96 "Изучение механизма аналитических реакций разных типов в водных, неводных и мицелляр-ных средах для разработки высокоэффективных методов контроля за содержанием металлов, ПАВ, органических соединений в объектах окружающей среды", номер госрегистрации №01.200.114305.
Цель работы заключалась в установлении закономерностей влияния природы органических ионообменников на электроаналитические свойства по-тенциометрических сенсоров, чувствительных к р-лактамным и аминоглико-зидным антибиотикам.
Для достижения поставленной цели в работе необходимо было решить следующие задачи:
• оценить физико-химические характеристики органических ионообменников, входящих в состав мембран сенсоров, в водных средах и в фазе мембраны;
• установить влияние природы активных компонентов на электродные и транспортные свойства мембран, чувствительных к Р-лактамным и аминог-ликозидным антибиотикам;
РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА 1
• выявить основные переносчики заряда в фазе мембраны и на границе раздела мембрана-раствор;
• разработать методики определения антибиотиков в лекарственных формах и биологических жидкостях.
Обьекты и методы исследования. В работе исследованы жидкокон-тактные сенсоры с пластифицированными поливинилхлоридными (ПВХ) мембранами. В качестве электродноактивных компонентов мембран сенсоров, чувствительных к р - лактамным (Р-1ас) антибиотикам использовали ионные ассо-циаты Р-1ас - тетрадециламмоний ОТ)А); к аминогликозидам — ионные ассо-циаты гентамицина с тетрафенилборатом (ТФБ) и кислотным хром черным специальным (КЧС). Концентрацию активных компонентов в мембранах варьировали в интервале 0,001-0,1 моль/кг ДБФ (0,04-6,87%), массовые соотношения ПВХ:ДБФ составляли 1:3, толщина мембран - 0,3-0,5 мм.
Исследовали антибиотики р-лактамного ряда пеницшлиновой группы: бензипенициллин (Реп)
сбн5 -сн2 | н-у-Г^^"3
Л ^-N-1-С О бы а
и о
ампициллин (Ат)
С6Н5—СН
г сн2—с—ын нн2 5
О'
-к
сн3
СНз СООМа
оксациллин (Ох)
СбН5~Т
N..
О
1" о
СН3
-ЫН
О
г
N—
СНз
СоЫа
ЗН20
амоксициллин (Атох)
НО
н—С —ЫН-
ын2 0,
феноксиметилпенициллин (Реп)
цефалоспорины.
<г
Нз С н -
1 Сг"3
N СООЫ
Нз
Нз СОО\а
дефазолин (Се£)
__9 СОО N а
N -N
(!'-С Н 1
цефотаксим (СЮх)
0==с-N Н
Д71
Н^ 3 I
Н2—О—С-
:н3
СО(Жа
ОСНз
антибиотики аминогликозидного ряда: сульфаты
гентамицина канамицина
К'
N Н 2 I
Н
« н
Лекарственные вещества отвечали требованиям Государственной Фармакопеи.
Изучение состояния антибиотиков в водных средах проводили спектро-фотометрическим методом на спектрофотометре СФ-201 в автоматическом режиме. Контроль рН растворов проводили на иономере И-120.2, рН-метре рХ-150мП, со стеклянным электродом ЭСЛ-63-07. ЭДС цепи измеряли с помощью иономера И-130, электродом сравнения служил хлоридсеребряный электрод марки ЭВЛ-1МЗ.
Транспортные свойства мембран изучали в условиях диффузионного мас-сопереноса и постоянного тока. Для исследования транспортных процессов под током использована четырехэлектродная схема, состоящая из пары платиновых (токопроводящих) и пары хлоридсеребряных (регистрирующих) электродов. Измерения проводили в гальваностатическом режиме (I = 5мкА) в течение 8 ч, меняя через каждые 2 ч направление тока поляризации. Исследования проводили с растворами-источниками различной концентрации до установления постоянного значения потенциала и наступления равновесия; концентрации антибиотиков определяли способом градуировочного графика.
Селективность мембран на основе различных ЭАК оценивали методами биионных потенциалов и смешанных растворов. Определение антибиотиков в лекарственных формах и биологических жидкостях проводили способами добавок и градуировочного графика.
В работе использовали следующие методы исследования: прямая потен-циометрия, потенциометрическое титрование, спектрофотометрия, тонкослойная хроматография, метод постоянного тока, термогравиметрия, титриметрия.
Научная новизна полученных в диссертации результатов заключается в том, что:
• установлены закономерности влияния природы и концентрации активных компонентов мембран, состава внешних растворов на электродные, транспортные свойства сенсоров в растворах Р-лакгамных и аминоглико-зидных антибиотиков;
• по физико-химическим параметрам органических ионообменников анти-биотик-противоион показана возможность прогнозирования состава мембран сенсоров с оптимальными электроаналитическими характеристиками;
• на основании количественной оценки скоростей переноса, проницаемости и потока ионов антибиотиков в условиях диффузионного массопереноса и постоянного тока установлены основные переносчики заряда в фазе мембран сенсоров и на границе раздела мембрана-раствор;
• созданы жидконтактные потенциометрические сенсоры, чувствительные к Р-лактамным и аминогликозидным антибиотикам. Практическая значимость работы
• по величинам стационарного сопротивления мембран и пределам обнаружения антибиотиков установлен оптимальный состав сенсоров, чувствительных к р-лактамам и аминогликозидам;
• выявлено влияние кислотности среды на устойчивость антибиотиков; установлены временные границы хранения их стандартных растворов;
• разработаны методики ионометрического определения Р-лактамов и ами-ногликозидов в лекарственных формах и биологических средах.
На защиту автор выносит;
• физико-химические характеристики органических ионообменников в водных средах и фазе мембраны;
• закономерности изменения электродных и транспортных свойств мембран при варьировании природы и концентрации активных компонентов;
• аналитическое применение сенсоров, чувствительных к р-лактамам и аминогликозидам.
Апробация работы. Основные результаты работы доложены на V Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды с международным участием "Экоаналитика-2003" (Санкт-Петербург, 2003); IV, V Всероссийских конференциях молодых ученых "Современные проблемы теоретиче-
ской и экспериментальной химии" (Саратов, 2003, 2005); VI Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа с международным участием (Уфа, 2004); Всероссийской конференции по аналитической химии "Аналитика России" (Москва, 2004); конференции РФФИ "Фундаментальная наука в интересах развития критических технологий" (г. Владимир, 2005); Всероссийской конференции с международным участием "Электроаналитика-2005" (Екатеринбург, 2005), научных семинарах кафедры.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 работ, в том числе 7 статей, 2 депонированные рукописи, 5 тезисов докладов на международных и всероссийских конференциях.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 185 страницах машинописного текста, содержит 32 таблицы, 61 рисунок. Диссертация состоит из введения, 6 глав, выводов, списка литературы и приложений. Библиография включает 173 источника.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Во введении рассмотрена актуальность исследований, направленных на создание жидкоконтактных сенсоров для определения (î-лактамных и аминог-ликозидных антибиотиков в фармацевтических формах и биологических субстратах, сформулирована цель и задачи исследования, новизна и практическая значимость работы.
Глава 1 представляет собой обобщенные и систематизированные литературные данные по современным методам определения антибактериальных препаратов в лекарственных формах и биологических жидкостях, тканях и т.п.
В главе 2 описаны объекты и методы исследования, аппаратура. Приведены методики синтеза ЭАК, поливинилхлоридных мембран, конструкции жидкоконтактных сенсоров.
В главе 3 оценены основные физико-химические характеристики органических ионообменников, входящих в состав мембран: соотношения компонентов, произведения растворимости ионных ассоциатов, их термическая устойчивость.
Глава 4 посвящена изучению состояния Р-лактамных антибиотиков в водных средах; электроаналитических свойств сенсоров, чувствительных к р-лактамам. Приведены результаты исследования транспортных свойств мембран в условиях диффузионного массопереноса и постоянного тока.
В главе S приведены результаты спектрофотометрического исследования различных партий и серий аминогликозидных антибиотиков. Приведены данные влияния природы активных компонентов на электродные и транспортные свойства мембран, чувствительных к аминогликозидным антибиотикам.
Глава 6 посвящена аналитическому применению сенсоров для детектирования р-лактамных и аминогликозидных антибиотиков в лекарственных формах и биологических жидкостях (смешанной слюне).
В приложениях приведены методики определения антибиотиков в фармацевтических препаратах и смешанной слюне, представлены акты о внедрении.
Физико-химические характеристики органических ионообменников
С целью направленного выбора активных компонентов мембран ионосе-лективных электродов, чувствительных к антибиотикам р-лактамного ряда и аминогликозидам, были изучены основные физико-химические свойства органических ионообменников - тетрадециламмония с анионами р-лактамов, тетра-фенилбората и азокрасителя кислотного хром черного специального с катионами аминогликозидов.
Стехиометрические соотношения компонентов, а также величины произведений растворимости (А» определяли методом осадительного потенциомет-рического титрования (рис. 1, 2). Так как индикаторный электрод сохраняет функцию на титруемый ион после точки эквивалентности, величины рассчитывали по формуле:
с (V,-V }
К =10 5 «ИГУ 2 к.тт /
У1+У2
где Е- величина потенциала, найденная по кривой титрования после к.т.т., мВ; £° - начальная величина потенциала при Уант=0, мВ; 5 - угловой коэффициент электродной функции, мВ/рС; Саяг- концентрация раствора антибиотика, М; У/ - объем раствора тетрадециламмония бромида, взятого для титрования, мл; У2 -объем антибиотика после к.т.т.; Кктт — объем антибиотика в к.т.т., мл.
В качестве индикаторных использовали электроды на основе: Реп-ТОА для пенициллинов, СеГ-ТОА, Оох-ТБА для цефалоспоринов; Ген-ТФБ и Ген-КЧС для аминогликозидов.
Обработка кривых титрования тетрадециламмония бромида растворами Р-лактамных антибиотиков проводилась по методу Грана. Экспериментальные данные преобразовывали в функции, дающие линейную зависимость параметра Грана (Г = 10 , где Е - потенциал (мВ); Б = 0,059 мВ/рС) от объема титранта. Конечную точку титрования находили графически. По кривым потенциометри-ческого титрования установлено, что р-лактамы реагируют с тетрадециламмо-нием в стехиометрическом соотношении 1:1, аминогликозиды с тетрафенил-боратом и азокрасителем кислотным хром черным специальным - 1:2. Величины произведений растворимости и соотношений компонентов в ионных ассо-циатах приведены в табл. 1.
По величинам произведений растворимости (К5) органических ионообменников, сделан вывод о возможности их использования в качестве электрод-ноактивных компонентов мембран ИСЭ. Близкие значения Кб ионных ассоциа-тов позволяют предположить, что пределы обнаружений антибиотиков с электродами на основе различных ЭАК не будут иметь существенных различий.
По результатам исследования термической устойчивости ионных ассо-циатов Р-1ас-ТОА, Ген-ТФБ и Ген-КЧС установлен температурный интервал
существования фазы электродноактивных соединений. Термоаналитическое исследование показало, что ионные ассоциаты Р-1ас-ТОА являются индивидуальными соединениями, в состав которых не входит вода. Высушивание органических ионообменников следует проводить при 60-70°С. Электродноактивные компоненты гентамицина с тетрафенилборатом и кислотным хром черным специальным являются термически стойкими соединениями. Образцы не претерпевают существенных изменений при нагревании до 100°С.
Рис. 1. Кривые титрования М О*3 М рас- Рис. 2. Кривая потенциометрического твора ТОА-Вг МО'3 М растворами бен- титрования гентамицина тетрафенилбо-зилпеницилллина (1), ампициллина (2) ратом
Таблица 1. Основные физико-химические характеристики органических ионообменников (п=3, р=0,95)
ЭАК соотношение компонентов 4 Л вг
Реп -ТО А 1:1 (6,9± 0,1)-10~8 0,01
Аш-ТБА 1:1 (8,5 ± 0,2)-10"8 0,01
Ох-ТОА 1:1 (4,6 ± 0,1)-10"'° 0,01
СеМ-ОА 1:1 (2,2±0,1)-108 0,02
аох-ТЭА 1:1 (2,0±0,1)-10~8 0,02
Ген-ТФБ 1:2 (2,8+0,1 )• 10"8 0,01
Ген-КЧС 1:2 (8,9±0,1)-10~7 0,01
Электроаналитические свойства сенсоров, чувствительных к Р-лактамным антибиотикам
Для изучения основных электроаналитических характеристик ИСЭ в растворах антибиотиков необходимо оценить состояние антибактериальных веществ в водных средах. Нами проведены исследования по установлению временных границ хранения стандартных растворов антибиотиков, выявлено влияние кислотности среды на их устойчивость. Спектрофотометрически были исследованы различные серии пенициллинов и цефалоспоринов (рис. 3).
Как видно из рис. 3 оптическая плотность в Я.тах отличается для разных серий цефазолина (ДАцихЮ.З), что свидетельствует о различном содержании основного вещества в лекарственных препаратах. Спектры цефотаксима различных производителей практически идентичны.
Рис. 3. Спектры поглощения раствора цефазолина различных производителей (ССе(=510"5 М): 1- ФАО «Ферейн»; 2- ООО «Хант-Холдинг»; 3- ООО «Компания «Деко»
Установлено влияние кислотности среды на основные оптические характеристики цефалоспоринов. Так, для цефазолина происходит смещение Апих (ДАтах=0,5), а в случае цефотаксима происходит гипсохромных сдвиг полосы поглощения (ААта)1=0,5; ДХтах=30 нм). Увеличение ОПТИЧеСКОЙ плотности и ^чпах при изменении кислотности среды можно объяснить тем, что в кислой среде антибиотики быстро гидролизуется, (3-лактамное кольцо раскрывается, образуя производное 7 - аминоцефалоспорановой кислоты, а в случае цефотаксима происходит дальнейшая гетероциклизация (лактонизация), образуется дезацетил-цефотаксим. Дезатетилцефотаксим - производное цефотаксима, которое в больших количествах может быть обнаружено в биологических жидкостях. Дезатетилцефотаксим также проявляет микробиологическую активность и известно, что соединение максимально стабильно в интервале рН 4,3-6,5.
Растворы пенициллинов также во времени неустойчивы, происходит гидролиз антибиотиков. Таким образом, стабильность растворов р - лактамов зави-
сит от температуры, рН раствора и др. Поэтому в настоящей работе использовались только свежеприготовленные растворы антибиотиков.
Для создания сенсоров, чувствительных к р-лактамным антибиотикам, необходимо было установить оптимальный состав мембран, способ введения ЭАК в фазу мембран, оценить их электродные (угловой коэффициент, интервал линейности), транспортные (поток ионов, проницаемость, сопротивление мембран) и операционные (срок службы сенсоров, дрейф потенциала) характеристики.
Ионные ассоциаты Р-1асЛТ)А вводили в фазу мембраны в виде индивидуальных соединений (способ 1) или экстракционно при кондиционировании электрода на основе ТОАВгв 10"2М растворе антибиотика в течение суток (способ 2). При этом бромид-ионы обмениваются на потенциалопределяющие ионы Р-лактамов:
(С,оН21)4Шг + р-1ас-Ыа -> (СшН21)4М+Р-1ас~ + №Вг
В табл. 2 в качестве примера приведены основные электроаналитические и операционные характеристики сенсоров, чувствительных к Р-лактамам при различных способах введения ЭАК.
Таблица 2. Влияние природы и способа введения ЭАК на электрохимические свойства ИСЭ (п=3, р=0,95)
ЭАК Е=П-18С) 8, мВ/рС ПрО,М ДЕ, мВ/сут Срок службы, мес.
Реп - ТОА М0"5-М0"' 58 ±2 1,9-10"6 1 4
(1 способ)
Реп - ТОА З-Ю'-ЫО"1 57 ±2 5,0-10"5 2 3
(2 способ)
Се^ТОА (1 способ) М0"5-М0-1 60±2 4,5-10"6 2 4
СеМт (2способ) ыо'М-ю"1 55±1 6,1-105 2
Установлено, что сенсоры на основе Р-1ас-ТЕ)А, введенными в виде индивидуальных соединений) обладают большим сроком службы, стабильными электроаналитическими характеристиками. Аналогичные данные получены для сенсоров на основе ионных ассоциатов тетрадециламмония с анионами ампициллина, оксациллина, цефотаксима.
По основным электроаналитическим характеристикам сенсоров при варьировании концентрации Р-1ас - ТО А (0,001 - 0,1 моль/кг ДБФ) в мембранах установлен их оптимальный состав: ЭАК - Реп-ГОА, СеМТ)А, Оох-ТБА, Сэ. ак-0,01 моль/кг ДБФ, соотношение ПВХ : ДБФ = 1:3.
Сенсоры на основе органических ионов р-1ас-ТОА проявляют чувствительность к антибиотикам пенициллинового и цефалоспоринового рядов (рис. 4а, б). Данные табл. 2 и рис. 4а, б свидетельствуют о том, что линейность электродных функций сохраняется в широком диапазоне концентраций антибиотиков, угол наклона близок к теоретическому для однозарядных ионов. Потен-циалопределяюшей является реакция ионного обмена на границе раздела мембрана/раствор:
Р-1ас • ТОА+ <» Р-1ас" + ТЭА+ (диссоциация ионообменника в фазе мембраны), Р-1ас"„ <=> Р-1ас'р,
Е,мВ 400
300
100
о рС
а б
Рис. 4. Электродные функции сенсоров в растворах р-лактамных антибиотиков: бензилпенициллина (1); ампициллина (2); оксациллина (3); амоксицилли-на (4);феноксиметилпенициллина (5) (ЭАК - Реп-ТОА);цефазолина (6); цефо-таксима (7) (ЭАК Се^ТЛА, Оох-ТОА)
При исследовании динамических свойств селективных электродов установлено, что природа аниона лекарственного вещества в составе ЭАК и анализируемом растворе практически не влияет на время установления стационарного потенциала. Для времен отклика исследуемых сенсоров по отношению к антибиотикам в растворе наблюдается последовательное уменьшение (95 при переходе от разбавленных растворов к более концентрированным. Сенсоры характеризуются небольшим временем отклика (0,5-1 мин), следовательно, обладают высокой ионообменной способностью.
При исследовании транспортных свойств мембран на основе органических ионообменников оценивались скорости переноса, проницаемость и поток
ионов антибиотиков в условиях диффузионного массопереноса и при постоянном токе при варьировании природы и концентрации ЭАК в мембранах, состава внешних растворов.
Установлено, что с увеличением времени контакта с примембранным раствором потенциал уменьшается и достигает стационарного значения через 30 мин, что свидетельствует о достижении состояния равновесия.
На рис. 5а, б представлены зависимости проницаемости и потока ионов от концентрации примембранного раствора для мембран на основе ионного ас-социата Ат-ТБА. Полученные зависимости (рис. 5а, б) свидетельствуют о том, что электродноактивные соединения в фазе мембраны находятся в диссоциированном состоянии, и переносчиками зарядов в мембранах являются ионы антибиотиков и тетрадецил аммония.
м/с
4-
ло7
моль/и1 с »■
о
-^с
а б
Рис. 5. Зависимости проницаемости (а) и потока ионов (б) антибиотиков от концентрации примембранных растворов в условиях диффузионного массопереноса (1), в условиях постоянного тока (2)
Установлено, что скорости переноса (2-1 О*7; 8-Ю"6 моль/м2хч), проницаемости и потока ионов антибиотиков под током выше в среднем на порядок, чем в условиях диффузионного массопереноса. Проницаемости и потоки ионов антибиотиков зависят от времени контакта мембран с растворами антибактериальных препаратов: через 2-3 суток данные параметры принимают стационарные значения. Уменьшение проницаемости с увеличением концентрации связано с насыщением мембраны, а увеличение потока ионов, в тех же условиях - с повышением количества ионов проходящих через мембрану.
Временные зависимости сопротивления мембран на основе ионных ассо-циатов Р-1ас-ТОЛ при варьировании концентрации ЭАК (1=5мА) приведены на рис.6. Все изученные мембраны характеризуются устойчивыми токами прово-
димости в течение продолжительных интервалов времени, даже после смены направления тока. Постоянные значения потенциала устанавливаются через 2 часа после пропускания тока через ячейку в том или ином направлении; величина падения напряжения на мембране не изменяется при смене направления тока. Это свидетельствует о том, что происходит обратимый ионный обмен между мембраной и внешним исследуемым раствором антибиотика (рис.6). При увеличении концентрации электродноактивных компонентов, сопротивление мембран уменьшается, что связано с увеличением концентрации ионообменных центров в фазе мембран. Фоновые мембраны имеют высокое сопротивление (Я=3 МОм); накопление подвижных носителей заряда в фоновой мембране происходит за счет поглощения ионов антибиотиков из раствора.
Рис. 6. Зависимости сопротивления мембран на основе ионных ассоциа-тов ампициллин - тетрадециламмо-ний (1-3), цефазолин-
тетрадециламмоний от времени контакта с 1х 10"3 М раствором ампициллина (1-3) и цефазолина (4-6). Концентрация ЭАК в мембране моль/кг ДБФ: 1-0,1; 2-0,01; 3-0,001; 4-0,1; 50,01; 6-фоновая
По стационарным сопротивлением рассчитаны кажущиеся константы диссоциации (К0ис) ассоциатов р-1ас-тетрадециламмоний в мембранной фазе, получено, что Кцж электродноактивных компонентов имеют близкие значения и составляют: (7,62±0,09> 10'2; (3,65±0,11)10'2; (5,12±0,15)-10'2 (6,44±0>07)-10 2для Реп-ТОА, Аш-ТОА, Ох-ТЭА, СеГ-ТОА соответственно. Это свидетельствует о том, что природа антибиотика в составе электродноактивных компонентов практически не влияет на свойства мембран на их основе.
Рис. 7. Зависимости сопротивлений мембран в 10"3 М растворе Реп (1) и предела обнаружения бензи-пенициллина (2) от концентрации ЭАК
К, МОм
1Дт
1а-
0,6 -
1
рПрО, м
0,001
0,01
0,05 0,1 Сэак
По величинам сопротивлений мембран и пределам обнаружения антибиотиков установлен оптимальный состав мембран сенсоров (СЭдк 0,01-0,05 моль/кг ДБФ, соотношение ПВХ : ДБФ = 1:3) (рис.7).
Потенциометрические сенсоры, чувствительные к аминогликозидным антибиотикам
Проведенное в настоящей работе спектрофотометрическое исследование гентамицина сульфата различных производителей (Дальхимфарм, Ферейн), различных сроков хранения свидетельствует о неодинаковом составе исследуемых препаратов: Хтш, находится в пределах 270-295 нм; оптическая плотность в максимуме колеблется от 0,3 до 0,9 (рис. 8). Растворы гентамицина сульфата имеют различную кислотность: рН 3,4 (Дальхимфарм, серия 3) - 4,6 (Ферейн, серия 1), которая увеличивается при хранении; оптическая плотность при этом возрастает (рис. 8).
Установлено, что л.тах и Атах различаются для исследуемых растворов гентамицина. Это свидетельствует о том, что содержание основного вещества колеблется в зависимости от производителя и анализируемой партии.
Таким образом, состояние гентамицина в водной среде является нестабильным и следует проводить тщательный контроль за содержанием гентамицина в фармацевтических формах. В работе использовали только свежеприготовленные растворы аминогликозидов.
Для моделирования состава мембран сенсоров, чувствительных к аминогли-козидам, использованы ионные ассоциаты гентамицина с тетрафенилборатом и кислотным хром черным специальным. На рис. 9 приведены электродные функ-
ции сенсоров на основе Ген-ТФБ и Ген-КЧС в растворах аминогликозидов; в табл. 3 сведены их основные электродные и операционные характеристики.
X, нм рС
Рис. 8. Спектры светопоглощения рас- Рис. 9. Электродные функции ИСЭ на творов гентамицина различных серий: основе Ген-ТФБ в растворах гентами-Дальхимфарм (1,2,3), Ферейн (4,5) цина (1), канамицина (2); Ген-КЧС в
растворе гентамицина (3, 4): Сэдк (моль/кг ДБФ)-0,01 (3); 0,001 (4)
Таблица 3. Влияние природы противоиона в составе ЭАК на характеристики сенсоров
--^ЭАК Свойства Ген-ТФБ Ген-КЧС
Е=А;-1§С), М МО"6-1-Ю"2 2,5-Ю-6- 1,6-10"л
Б, мВ/рС 28±2 24±2
ПрО,М 8-Ю"7 1,2-10"6
Время отклика, мин. 3-5 3-5
ДЕ мВ/сут. 3-4 3-4
Срок служ. мес. 1 2
Проведенное исследование показало, что сенсоры на основе гентамицина с тетрафенилборатом и азокрасителем кислотным хром черным специальным различаются по основным характеристикам (см. табл. 3). Электрод на основе Ген-ТФБ проявляет чувствительность как к гентамицину, так и к канамицину, угловой коэффициент максимально приближен к теоретическому, но для оптимальной работы сенсора в растворах гентамицина сульфата необходимо поддерживать соответствующий интервал кислотности (рН 6,0+0,1).
Электрод на основе Ген-КЧС является высокоселективным к гентамици-ну, обладает низким пределом обнаружения, и его можно рекомендовать для определения гентамицина в присутствии канамицина
Транспортные свойства мембран на основе ионных ассоциатов Ген-ТФБ и Ген-КЧС исследовали при постоянном токе. На рис. 10 представлены зависимости сопротивлений при постоянном токе со сменой поляризации от времени контакта с раствором аминогликозида.
Рис. 10. Зависимости сопротивления мембран на основе ионных ассоциатов Ген - ТФБ (2), Ген-КЧС (3, 4) с МО-3 М раствором гентамицина. Концентрация ЭАК в мембране, моль/кг ДБФ: 1- фоновая; 2 - 0,01; 3 - 0,001; 4-0,01
К,
МОЙ
1 I
0 2 4 в 8
Ьч
Сопротивление мембраны (при одинаковой концентрации ЭАК в фазе мембраны) на основе Ген-ТФБ выше, чем сопротивление мембран, в состав которого входит Ген-КЧС.
ПрО, * 105, М
Рис. 11. Зависимость сопротивления мембран от предела обнаружения гентамицина и концентрации ЭАК - Ген-КЧС (1,3); Ген-ТФБ (2)
0,012
Я, МОм
Показано, что низкими значениями сопротивления и предела обнаружения антибиотиков обладает мембрана на основе Ген-КЧС с концентрацией
электродноактивного компонента 0,01 моль кг/ДБФ (3), которая является оптимальной по составу (рис.11).
Аналитическое применение сенсоров
Коэффициенты потенциометрической селективности (&пот), например, бензилпенициллина к оксациллину и ампициллину близки и единице, то есть возможно определение индивидуальных антибиотиков или их суммарного содержания; К*" к ряду неорганических ионов (СГ, Г, Вг", НСОз",Н2РС>4\ НР042") позволяют использовать данные электроды для определения антибиотиков в биологических жидкостях
Разработаны экспрессные методики определения Р-лактамных и аминог-ликозидных антибиотиков в фармацевтических препаратах различных производителей, сроков хранения, форм выпуска (порошки во флаконах, таблетки, ампулы).
Содержание основного лекарственного вещества определяли в различных фармацевтических препаратах методом прямой потенциометрии (способ гра-дуировочного графика). Всего было проанализировано 48 образцов фармацевтических препаратов, содержащих пенициллины, примеры определений представлены в табл.4.
Оценку правильности проводили фармакопейным методом - йодометри-ческого титрования (табл.5). Сравнение результатов по Р- и ^критериям показало отсутствие систематической погрешности.
Таблица 4. Результаты определения антибиотиков пенициллинового ряда в лекарственных формах различных сроках хранения (п=3, р=0,95).
№ пп Анализируемый объект Ан-тибио тик Производитель Год выпуска Найдено т±Аш, мг/25 мл Найдено ш±Дсо, масс, % Бг
1 порошок Реп ОАО «Биохимик» 1999 9,0+0,9 75±8 0,04
2 таблетка Аш Борисовский завод мед. препаратов 1998 9,1+0,9 71+7 0,04
3 порошок Ат АКО «Синтез» 1996 6,0±0,1 68±2 0,01
4 порошок Ох ОАО «Биохимик» 2003 9,2±0,2 89+3 0,01
5 таблетка Реп АКО «Синтез» 1996 3,3±0,1 33+2 0,01
Таблица 5. Результаты определения пенициллинов потенциометрическим и йодометрическим методами (п=3, р=0,95)
№ образца Антибиотик Ионометрия Иодометрия Р 1 эсп
т±Дш, % 8г,% т±Ат, % 8г,%
9 Реп 99±1 0,4 99±3 1,2 4,0
4 Ох 89+3 1,3 89±5 2,2 2,4
7 Ашох 33±2 2,4 34±3 3,5 2,0
3 Аш 68±2 1,2 68±3 1,8 3,2
I Впервые предложенные сенсоры были использованы для определения Р-лактамов и аминогликозидов в смешанной слюне. Корреляции концентраций ' антибиотиков в слюне и плазме крови позволяет использовать вместо проб кро-1 ви более доступные образцы смешанной слюны. Слюна содержит около 99,42% ! воды и 0,58 % растворенных органических и минеральных веществ. Смешанная ' слюна или ротовая жидкость отличается от секрета слюнных желез дополни' тельным присутствием микрофлоры. Пробоподготовку слюны проводили с по' мощью центрифугирования, в качестве депротенизатора использовался этило-1 вый спирт. Для предотвращения белкового отравления мембран необходимо ' кондиционировать сенсор в донорской смешанной слюне в течение 20 мин. Оп-' ределение содержания антибиотиков в биопробах пациентов проводили спосо-I бом добавок. Проанализировано 18 образцов смешанной слюны больных уро-' логическими заболеваниями (примеры определения антибиотиков приведены в 1 табл. 6).
' Для оценки правильности разработанной методики в биопробу сыворотки
' донора вводили добавку стандартного раствора антибиотика и далее пробу
9 проводят через все стадии пробоподготовки. Показано, что найденные содер-
V жания антибиотиков соответствуют введенным.
• Таблица 6. Результаты определение цефазолина и цефотаксима
1 в смешанной слюне больных (п=3, р=0,95)
I ___
Пациент Антибиотик Найдено, Бг
мкг/мл
1 СЮх 0,15±0,02 0,05
2 СеГ 0,20±0,05 0,10
3 СеГ 0,03±0,005 0,07
4 Ашох 0,76±0,06 0,03
5 Ат 0,90+0,03 0,01
Электроды на основе ионного ассоциата Ген-КЧС были использованы для определения гентамицина и канамицина в варианте осадительного потен-циометрического титрования в пробах смешанной слюны с внесенными добавками (табл.7, рис.12).
Таблица 7. Результаты определения аминогликозидов в пробах смешанной слюны с внесенным добавками антибиотиков методом потенциометрического титрования (п=3, р=0,95)
п/п Антибиотик Введено, мкг/мл Найдено, мкг/мл Б, %
1 Ген 0,48 0,47±0,01 2,1
2 Ген 2,39 2,32+0,02 2,9
3 Ген 1,43 1,40+0,01 2,1
4 Кан 0,93 0,91 ±0,01 2,1
5 Кан 9,30 9,00±0,01 3,0
Е, мВ
Рис. 12. Кривые потенциометрического титрования кислотного хром черного специального смешанной слюной с внесенными добавками аминогликозидов (МО^М; 2-10-5М; З-б-Ю^М)
Методики ионометрического определения антибиотиков не требуют сложной пробоподготовки, отличаются экспрессностью, широким диапазоном определяемых содержаний.
ВЫВОДЫ
1. Установлены закономерности влияния природы органических ионо-обменников на электроаналитические свойства потенциометрических сенсоров, чувствительных к антибиотикам. Показано, что близость физико-химических характеристик ЭАК обуславливает идентичность электродных, транспортных, селективных свойств мембран и позволяет прогнозировать создание сенсоров для детектирования индивиду-
альных или отдельных групп р-лактамных и аминогликозидных антибиотиков.
2. Оценены транспортные характеристики мембран (скорости переноса, проницаемость, поток ионов) при варьировании природы и концентрации органических ионообменников в фазе мембраны, природы и концентрации внешних растворов антибиотиков в условиях диффузионного массопереноса и постоянного тока. По величинам кажущихся констант диссоциации показано, что электродноактивные компоненты находятся в фазе мембраны в диссоциированном состоянии, основными переносчиками заряда являются ионы антибиотиков.
3. По величинам стационарных сопротивлений мембран и пределам обнаружения антибиотиков, способам введения электродноактивных компонентов в фазу мембран установлен оптимальный состав сенсоров. В качестве ЭАК рекомендованы ионные ассоциаты тетрадеци-ламмония с бензилпенициллином, цефазолином, цефотаксимом, ген-тамицина с тетрафенилборатом и кислотным хром черным специальным (С эак = 0,01 моль/кг ДБФ, соотношение ПВХ:ДБФ - 1:3).
4. Установлено, что водные растворы антибиотиков неустойчивы во времени, что связано с протеканием протолитических процессов. На практике необходимо использовать только свежеприготовленные растворы антибиотиков с предварительной спектрофотометрической оценкой содержания вещества.
5. Созданы потенциометрические сенсоры на основе органических ионообменников, чувствительных к Р-лактамам и аминогликозидам. Оценены их эксплутационные характеристики (дрейф потенциала, срок службы).
6. По коэффициентам потенциометрической селективности сенсоров показана возможность их применения для определения антибиотиков в фармацевтических препаратах и биологических жидкостях. Разработаны экспрессные методики ионометрического определения р-лактамов и аминогликозидов в твердых и ампульных лекарственных формах и смешанной слюне.
Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:
1. Кулапина Е.Г., Барагузина В.В., Кулапина О.И. Ионоселективные электроды для определения антибиотиков пенициллинового ряда в биологических жидкостях и лекарственных формах // Журн. аналит. химии. 2004. Т.59, №9. С.971—975.
2. Кулапина Е.Г., Барагузина В.В., Кулапина О.И. Экспрессное ионометриче-ское определение аминогликозидных антибиотиков в лекарственных формах и биологических жидкостях больных инфекционной патологией // Журн. аналит. химии. 2005. Т.60, №6. С.592-597.
3. Кулапина Е.Г., Барагузина В.В., Кулапина О.И. Определение гентамицина и
канамицина в биологических жидкостях и лекарственных препаратах // Хим.-фарм. журн. 2004. Т.39, №9. С.48-51.
4. Кулапина Е.Г., Барагузина В.В., Чернов Д.В. Электрохимические свойства мембран на основе ассоциатов р-лактамных антибиотиков с тетрадецилам-монием // Электрохимия. 2005. Т.41, №8. С.981-986.
5. Михалева Н.М., Кулапина Е.Г., Барагузина В.В. Транспортные свойства ионообменных и нанофильтрационных поливинилхлоридных мембран // Мембраны, 2005. №4. С.26-29. (Сер. «Критические технологии»),
6. Кулапина Е.Г., Барагузина В.В., Кулапина О.И., Михайлова Е.Е. Современные методы определения антибиотиков. М., 2003, 54 с. Деп. ВИНИТИ. №2155-В.
7. Кулапина Е.Г., Барагузина В.В. Методы определения аминогликозидных антибиотиков. М., 2004,17 с. Деп. ВИНИТИ. №264-В.
8. Барагузина В.В. Новые ионоселективные электроды, чувствительные к различным группам антибиотиков // Сб. научных статей молодых ученых, посвященный 75-летию химического факультета «Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии». Саратов, 2004. C.I05-109.
9. Кулапина Е.Г., Барагузина В.В., Петрова В.В. Ионометрическое и фотометрическое определение антибиотиков аминогликозидного ряда // Сб. научных статей «Органические реагенты в организованных средах». Саратов, 2003. Вып.7. С.94—98.
Ю.Кулапина Е.Г., Барагузина В.В. Электроаналитические свойства мембран на основе ионных ассоциатов тетрадециламмония с антибиотиками пеницил-линового ряда // IV Всерос. конф. по электрохимическим методам анализа с междунар. участием (ЭМА-2004). Уфа, 2004. С.131.
11. Кулапина О.И., Барагузина В.В. Ионометрическое определение антибиотиков в биологических жидкостях больных с инфекционной патологией // Всерос. конф. по аналит. химии «Аналитика России». М., 2004. С. 220.
12. Барагузина В.В., Кулапина Е.Г. Спектрофотометрическое определение ген-тамицина и канамицина в лекарственных препаратах // Всерос. конф. по аналит. химии «Аналитика России». М., 2004. С. 202.
13. Кулапина Е.Г., Барагузина В.В., Кулапина О.И., Чернов Д.В. Анализ медицинских объектов на содержание Р-лактамных антибиотиков с применением потенциометрических сенсоров // Всерос. конф. с междунар. участием «Электроаналитика-2005». Екатеринбург, 2005. С. 249.
14.Барагузина В.В., Гречушникова Д.В. Кулапина Е.Г. Новые потенциометри-ческие сенсоры для определения аминогликозидных антибиотиков // V Всерос. конф. молодых ученых «Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии». Саратов, 2005. С. 50.
Автореферат
Барагузина Виктория Владимировна
Потенциочетрические сенсоры на основе органических ионообменников для определения р-лактамных и аминогликозидных антибиотиков
02.00 02 - аналитическая химия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук
Подписано в печать 01 02 06 Форма! 60x84 1/16 Объем 1,5 усл. печ л. Тираж 100 экз Заказ № $
Типография Издательства Саратовского университета 410012, г. Саратов, ул Астраханская, 83
•"2 866
Введение
Глава 1. Современные методы определения антибиотиков 10 (обзор литературы)
1.1.Микробиологические
1.2.Спектроскопические 13 & 1.3.Хроматографические
1.4. Электрохимические
Глава 2. Экспериментальная часть
2.1. Реагенты 43 2.1.1. Антибиотики
2.1.2. Очистка и определение основного вещества в 46 препаратах кислотный хром черный специальный
2.1.3. Хроматографическое и термоаналитическое 48 исследование исходных и очищенных препаратов кислотного хром черного специального
2.2. Синтез электродноактивных компонентов, изготовление 52 мембран и электродов
2.3. Методы исследования
Глава 3. Физико-химические свойства органических иопообменников
3.1. Растворимость и термическая устойчивость ионных 63 ассоциатов (3 лактам - тетрадециламмоний
3.2. Оценка физико-химических параметров ионных ассоциатов гентамиципа с тетрафепилборатом и с кислотным хром черным специальным
Глава 4. Электроаналитические и транспортные свойства мембран, 79 чувствительных к р-лактамным антибиотикам
4.1. Состояние Р-лактамов в водных средах
4.2. Поверхностные свойства мембран
4.3. Динамические характеристики ионоселективных электродов
4.4. Транспортные свойства мембран па основе соединений р- 100 лактам-тетрадециламмоний
4.4.1. Транспортные процессы в условиях нулевого тока
4.4.2. Транспортные процессы в условиях постоянного 106 тока
Глава 5. Потенциометрические сенсоры, чувствительные к аминогликозидным антибиотикам
5.1. Состояние аминогликозидов в водных средах
5.2. Поверхностные и операционные характеристики ИСЭ на основе различных ионообменпиков
5.2.1. Электроаиалитические свойства ИСЭ на основе 121 ионного ассоциата гентамицин-тетрафенилборат
5.2.2. Электроаналитические свойства ИСЭ на основе 124 ионного ассоциата гептамицин-кислотный хром черный специальный
5.3. Объемные свойства аминогликозидных мембран
Глава 6. Аналитическое применение разработанных сенсоров
6.1. Ионометрия р-лактамных антибиотиков
6.1.1. Оценка коэффициентов потенциометрической 133 селективности
6.1.2. Определение содержания пенициллинов в 137 ^ фармацевтических препаратах
6.2. Слюна как диагностически значимая биологическая 143 жидкость
6.2.1. Ионометрическое определение р-лактамов в 147 смешанной слюне доноров и больных людей
6.3. Определение аминогликозидных антибиотиков
6.3.1. Оценка коэффициентов потенциометрической селективности
6.3.2. Ионометрическое определение аминогликозидов в 155 лекарственных средствах
6.3.3.Спектрофотометрическое определение гентамицина 159 и канамицина в фармацевтических препаратах
6.3.4. Определение аминогликозидных антибиотиков в 161 смешанной слюне
Выводы
Актуальность работы. В настоящее время Р-лактампые и аминогликозидные антибиотики занимают ведущее место в лечении тяжелых ипфекционпо - воспалительных заболеваний. Однако успешное применение этих препаратов из-за низкого терапевтического индекса (особенно аминогликозидов) возможно лишь при строгом контроле их концентраций в биологических жидкостях. Актуальной проблемой является осуществление лекарственного мониторинга, который обеспечивает выбор адекватной индивидуальной дозы и схемы применения антибиотиков для повышения эффективности и безопасности лечения. Экспрессное количественное определение антибиотиков в биологических жидкостях и лекарственных формах необходимо для оценки физиологических и биохимических процессов, протекающих в организме. Для определения антибиотиков в настоящее время используются микробиологические, спектроскопические, хроматографические и электрохимические методы. Актуальным является разработка экспрессных методов определения антибиотиков, доступных для клинических и биохимических лабораторий.
К настоящему времени имеются единичные публикации по применению потепциометрии с иопоселективпыми электродами для определения антибиотиков в лекарственных формах. Исследования в данной области посят, в основном, прикладной характер. Не обоснован выбор электродноактивных компонентов (ЭАК) мембран сенсоров, не исследованы физико-химические свойства ЭАК в водных средах и в фазе мембраны, не изучены электроаналитические свойства мембран, чувствительных к антибиотикам.
Работа проводилась в соответствии с Координационным планом Научного Совета РАН по аналитической химии и координируемым Головным Советом по химии и химической технологии РАН по проблеме 2.20.1 "Развитие теоретических основ аналитической химии" по теме НИР 3.71.96 "Изучение механизма аналитических реакций разных типов в водных, неводных и мицеллярных средах для разработки высокоэффективных методов контроля за содержанием металлов, ПАВ, органических соединений в объектах окружающей среды", номер госрегистрации №01.200.114305.
Цель работы заключалась в установлении закономерностей влияния природы органических ионообменников на электроаналитические свойства потенциометрических сенсоров, чувствительных к р-лактамным и аминогликозидиым антибиотикам.
Для достижения поставленной цели в работе необходимо было решить следующие задачи:
• оценить физико-химические характеристики органических ионообменников, входящих в состав мембран сенсоров, в водных средах и в фазе мембраны;
• установить влияние природы активных компонентов на электродные и транспортные свойства мембран, чувствительных к р-лактамным и аминогликозидиым антибиотикам;
• выявить основные переносчики зарядов в фазе мембраны и на границе раздела мембрана-раствор;
• разработать методики определения антибиотиков в лекарственных формах и биологических жидкостях.
Научная новизна полученных в диссертации результатов заключается в том, что:
• установлены закономерности влияния природы и концентрации активных компонентов мембран, состава внешних растворов на электродные, транспортные свойства сенсоров в растворах р~ лактамных и аминогликозидных антибиотиков;
• по физико-химическим параметрам органических ионообменников антибиотик-противоион показана возможность прогнозирования состава мембран сенсоров с оптимальными электроапалитическими характери сти кам и;
• на основании количественной оценки скоростей переноса, проницаемости и потока ионов антибиотиков в условиях диффузионного массопереноса и постоянного тока установлены основные переносчики заряда в фазе мембран сенсоров и на границе раздела мембрана-раствор;
• созданы жидконтактные потенциометрические сенсоры, чувствительные к р-лактамным и аминогликозидным антибиотикам. Практическая значимость работы
• по величинам стационарного сопротивления мембран и пределам обнаружения антибиотиков установлен оптимальный состав мембран сенсоров, чувствительных к р-лактамам и амипогликозидам;
• выявлено влияние кислотности среды на устойчивость антибиотиков; установлены временные границы хранения их стандартных растворов;
• разработаны методики ионометрического определения р-лактамов и аминогликозидов в лекарственных формах и биологических средах. На защиту автор выносит:
• физико-химические характеристики органических иопообменников в водных средах и фазе мембраны;
• закономерности изменения электродных и транспортных свойств мембран при варьировании природы и концентрации активных компонентов;
• аналитическое применение сенсоров, чувствительных к р-лактамам и аминогликозидам.
Апробация работы. Основные результаты работы доложены на V Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды с международным участием "Экоаналитика-2003" (Санкт-Петербург, 2003); IV, V Всероссийских конференциях молодых ученых "Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии" (Саратов, 2003, 2005); VI Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа с международным участием (Уфа, 2004); Всероссийской конференции по аналитической химии "Аналитика России" (Москва, 2004); Конференции РФФИ "Фундаментальная наука в интересах развития критических технологий" (г. Владимир, 2005); Всероссийской конференции с международным участием "Электроаналитика-2005" (Екатеринбург, 2005); научных семинарах кафедры.
ВЫВОДЫ
1. Установлены закономерности влияния природы органических ионооб-менников на электроаналитические свойства потенциометрических сенсоров, чувствительных к антибиотикам. Показано, что близость физико-химических характеристик ЭАК обуславливает идентичность электродных, транспорт-пых, селективных свойств мембран и позволяет прогнозировать создание сенсоров для детектирования индивидуальных или отдельных групп р-лактамных и аминогликозидных антибиотиков.
2. Оценены транспортные характеристики мембран (скорости переноса, проницаемость, поток ионов) при варьировании природы и концентрации органических ионообменников в фазе мембраны, природы и концентрации внешних растворов антибиотиков в условиях диффузионного массопереноса и постоянного тока. По величинам кажущихся констант диссоциации показано, что электродноактивные компоненты находятся в фаз$ мембраны в диссоциированном состоянии, основными переносчиками заряда являются ионы антибиотиков.
3. По величинам стационарных сопротивлений мембран и пределам обнаружения антибиотиков, способам введения электродноактивных компонентов в фазу мембран установлен оптимальный состав сенсоров. В качестве ЭАК рекомендованы ионные ассоциаты тетрадециламмония с бензилпени-циллином, цефазолином, цефотаксимом, гентамицина с тетрафенилборатом и кислотным хром черным специальным (Сэдк = 0,01 моль/кг ДБФ, соотношение ПВХ:ДБФ -1:3).
4. Установлено, что водные растворы антибиотиков неустойчивы во времени, что связано с протеканием протолитических процессов. На практике необходимо использовать только свежеприготовленные растворы антибиотиков с предварительной спектрофотометрической оценкой содержания вещества.
5. Созданы потенциометрические сенсоры на основе органических ионо-обменников, чувствительных к Р-лактамам и аминогликозидам. Оценены их эксплутационные характеристики (дрейф потенциала, срок службы).
6. По коэффициентам потенциометрической селективности сенсоров показана возможность их .применения для определения антибиотиков в фармацевтических препаратах и биологических жидкостях. Разработаны экспрессные методики ионометрического определения Р-лактамов и аминогликозидов в твердых и ампульных лекарственных формах и смешанной слюне.
1. Яковлев В.П., Яковлев С.В. Антибактериальные препараты: современное состояние и перспективы // Антибиотики и химиотерапия, 2001. -Т 46. -№11.- С.19-22.
2. Мелептьева Г.А. Фармацевтическая химия, Т 2. - М.: Медицина, 1976. - 825с.
3. Кивман Г.Я., Геймап И.Я. Определение содержания пенициллина и тетрациклина в малом объеме крови человека // Антибиотики, 1972.-№ 4. С.362-366.
4. Krzek J., Kawa-Patek М. Biologiczne i fizykochemiczne oznaczanie chlowodorkow tetracykliny i oksytetracykliny oraz chloramfenikolu w recepturowych postaciach lecow // Farm, pol., 1986. Vol. 42. - № 11. -P.598-601 (цитир. из РЖ хим. 1987, № 210353). ,
5. Карпов B.JI. Определение аминогликозидных антибиотиков в биологических жидкостях // Антибиотики, 1984. № 9. - С.695-703.
6. Панченков Р.Т., Маршак A.M., Макаренков И.С. и др. Фармакокине-тика канамицина сульфата в лимфе и крови при осложненных острых воспалительных заболеваниях органов брюшной полости // Антибиотики и химиотерапия, 1990. Т.35. - № 2. - С.222-225.
7. Колосова А.Ю., Блинцов А.Н., Самсонова Ж.В., Егоров A.M. Разработка твердофазного иммуноферментного анализа гентамицина в сыворотке крови человека // Антибиотики и химиотерапия, 1998. № 2. -С.9-13.
8. Evangelista R., Schapoval E. Scherman contribuigao do dosemento de anti-bioticos aminoglicosidicos em preparagoes farmaceuticas I metodo microbiologico dos cilindros em placas 11 Rev. cienc. farm, 1983. № 5. - P. 1720.
9. Haginaka J., Wakai J., Yasuda H., Uno T. Spectrophotometric assay of penicillins by reaction with 1,2,4 triazole and mercury (II) chloride // Anal. Sci., 1985. - Vol. 1. - № 1. - P.73-76 (цитиров. из РЖ хим. 1986, №120358).
10. Alwartham A., Adbel Fattan S., Zahran N. Spectrophotometric determination of cefalexin in dosage forms with imidazole reagent // Talanta, 1992. -Vol. 32. № 6. - P.703-707.
11. Askal H., Saleh G., Omar N. Utility of certain л-acceptors for the spectrophotometric determination of some penicillins // Analyst, 1991. Vol. 116. -№ 4.-P.3 87-390.
12. Issopouls P.B. Spectrophotometric determination of cephalexin, cephradine, ampiciliin and amoxycillin using copper (II) acetate as a complexing agent // J. Pharm. and Biomed. Anal., 1988. Vol. 6. - № 3. - P.321-327.
13. Alvarthan A., Metvally F., Al-Tamimi S. Spectrophotometric assay of certain cephalosporins based on formation of ethylene blue // Anal. Lett., 1993.- Vol. 26. № 12. - P.2619-2635.
14. Morelli B. Derivative spectrophotometry in the analysis of mixtures of cefotaxime sodium and cefadroxil monohydrate // Journal of Pharm. and Biomed. Anal., 2003. Vol. 32. - № 2. - P.257-267.
15. Alwarthan A., Al-Lohedan H. Kinetic determination of cephalexin in drug formulations // Talanta, 1994. Vol. 41. - № 2. - P.231-255.
16. A1-Khamees H., El-Shafie F., Hagga M. E. Kinetic method for the quantitation of ampicillin trihydrate in bulk and in drug formulations // Sci. pharm., 1995. Vol.63. -№ 3. - P.191-206.
17. E1 Walily M., Gazy A., Belal S. Use of cerium(IV) in the spectrophotometry and spectrofluorimetric determinations of penicillins and cephalosporins in their pharmaceutical preparations // Spectrosc. Lett., 2000. Vol.33. - № 6. -P.931-948.
18. Jzquierdo P., Gomez-Hens A., Perez-Bendito D. Simultaneous kinetic fluorimetric determination of amoxycillin and clavulanic acid by the stoppcd-flow mixing technique // Analyst, 1993. Vol. 118. - № 6. -P.707-710.
19. Matousova O., Peterkova M., Kakas B. Stanoveni ampicilinu a oxacilinu ve smesi // Cs. farm., 1983. Vol. 32. - № 5. - P.l53-155 (цитир. из РЖ хим. 1984, №230231).
20. А1у F., Hefnawy М., Belal F. A selective spectrofluorimetric method for the determination of some 'a'-aminocephalosporins in formulations and biological fluids // Anal. Lett., 1996. Vol. 29. - № 1. - P.l 17-130.
21. Красникова A.B., Иозеп A.A. Спектрофотометрическое определение пенициллиновых антибиотиков // Хим.-фарм. журнал, 2003. Т. 37.9. С.49-51.»
22. Nunez-Vergata L., Roa A., S., Gonzalez-Barbagelata R. Indirect spectro-photometric method for determining epicillin. // J. Assos. Offic. Anal. Chem., 1986. Vol. 69. - № 2. - P.188-190 (цитир. из РЖ хим. 1987, № 200317).
23. Чиванов В.Д., Гребеник Л.И., Баранова В.М., Еременко В.И. Экспресс-обнаружение антибиотиков в мясопродуктах методом времяпролетной плазменно-десорбционной масс-спектрометрии // Журн. аналит. химии, 1997.-Т. 52.-№ 10. -С.1105-1109.
24. Veselinovic D., Jelikic-Stankov М. Spectrophotometric determination of tetracycline and doxycycline in pharmaceutical preparations // Pharmazie,1987. Vol. 42. - № 3. - P. 199-200 (цитир. из РЖ хим. 1988, №160241).
25. Veselinovic D., Jelikic M. Spectrophotometric determination of tetracycline in pharmaceutical preparations // Гласи. Хем. друш. Белград, 1983. Т. 48. - № 8. - С.539-540 (цитир. из РЖ хим. 1984, №100295).
26. Saha U. Calorimetric determination of tetracycline hydrochloride in pharmaceutical preparations // J. Assos. Offic. Anal. Chem., 1987. Vol. 70. -№ 4. - P.686-688 (цитир. из РЖ хим. 1988, №ЗГ355).
27. Jzquierdo P., Gomez-Hens A., Perez-Bendito D. Simultaneous stopped-flow determination of tetracycline and doxycycline in serum based on lo-thanide-sensitized luminescence // Anal. Lett., 1994. Vol. 27. - № 12. -P.2303-2316.
28. Zhang X., Baeyens W., van der Borre A., van der Weken G. Chemilumi-nescence determination of tetracyclines based on their reaction with hydrogen peroxide catalysed by the copper ion // Analyst, 1995. Vol.120. - №2. -P.463-466.
29. Vetuschi C., Ragno G. A rapid evaluation of tetracycline and its dehydration products by UV derivative spectrophotometry // Farmaco, 1990. -Vol.45. № 6. - P.757-769 (цитир. из РЖ хим. 1991, №20312).
30. Сааведра Ф.Э., Беликов В.Г., Соловей Н.В. Спектрофотометрическое определение окситетрациклина гидрохлорида // Фармация, 1976. № 1. -С.78-79.
31. Алыков Н.М. Фотометрическое определение аминогликозидных антибиотиков // Антибиотики, 1980. № 11. - С.336-339.
32. Кулапина Е.Г., Барагузина В.В., Кулапина О.И. Определение гентамицина и канамицина в биологических жидкостях и лекарственных препаратах // Хим:-фарм. журнал, 2004. -Т. 39. № 9. С.48-51.
33. Сипливая Л.Е., Шевцова Г.М., Лазарев А.И. и др. Иммуномодули-рующее действие аминогликозидных антибиотиков при различных технологиях введения // Антибиотики и химиотерапия, 1999. Т. 44. -№ 2.- С.29-32.
34. Алыков Н.М. Фотометрическое определение аминогликозидных антибиотиков // Антибиотики, 1984. Т. 29. - № 5. - С.336-338.
35. Алыков Н.М. Фотометрическое определение мономицина в биологических материалах // Антибиотики, 1980. № 12. - С.911-913.
36. Мухамедзянов P.M., Лиходед В.А. Метод количественного определеIния гентамицина сульфата // Антибиотики и химиотерапия, 1991. -Т.36. -№7.-С.14-16.
37. Sampath S., Robinson D. Comparison of new and existing spectropho-tometric methods for the analysis of tobramycin and other aminoglycoside //J. Pharm. Sci., 1990. V. 79. - № 5. - P.428-431.
38. Izquierdo P., Pavon P., Gomez-Hens A., Perez-Bendito D. Kinetic fluorimetric determination of aminoglycoside antibiotics by reagents // Fre-senius J. Anal. Chem., -1994. V. 349. - № 12. - P.820-823.
39. Rizk M., Jounis F. Spectrophotometric assay of certain aminoglicosoide antibiotic using, chloraniel // Anal. Lett., 1984. V.,17. - № 6. - P.1803
40. IMflgelista R., Schapoval E. Scherman contribuigao do dosemento de anti-bioticos aminoglicosidicos em preparagoes farmaceuticas III metodo espec-trofotometrico da ninhidrina // Rev. cienc. farm., 1983. № 5. - P.29-33.
41. Evangelista R., Schapoval E. Scherman contribuigao ao dosemento de anti-bioticos aminoglicosidicos em preparagoes farmaceuticas II metodo espec-trofotometrico do susfato de cobre // Rev. cienc. farm., 1983. № 5. - P.21-27.
42. Palmer A. Ultaviolet spectrophotometric determination of gentamicin // Anal. Proc., 1985. V. 22. - № 5. - P. 139.
43. Wilmott N., Miller J., Tyson J. Potential use of a tprbium transferring complex as a labes in an immunoassay for gentamicin // Analyst, 1984. - V. 109. - № 3. - P.343-345
44. Чернышев A.M., Карташов B.C., Арзамасцев А.П. Определение относительного содержания канамицина в препаратах капамицина сульфата методом ПМР спектроскопии // Хим. фарм. журн., 1982. - Т. 16. -№ 2. - С.244-247.
45. Титова O.JI. Сорбционное концентрирование и последующее определение аминогликозидных антибиотиков: Автореф. дисс. к.х.и. Астрахань, 1998. - 22с.
46. Stankov М., S'tankov D., Melicevic Z., Veselinovic D., Djurdjevic P. Fluorimetric and derivative spectrometric determination of norfloxacin // Spectrosc. Lett., 1993. Vol. 26. - № 9 - P. 1709-1714 (цитир. из РЖ хим. 1994, №18Г154).
47. А1у A., Al-Tamimi S., Alwarthan A. Chemiluminescence determination of some fluoroquinolone derivatives in pharmaceutical formualtions and biological fluids using Ru(bipy){2+}[3.]-Ce(IV) system. // Talanta, 2000. -Vol.53. № 4. - P.885-893. 26.
48. Lian N., Zhao H., Sun C., Chen S., Lu Y., Jin L. A study on terbium sensitized chemiluminescence of ciprofloxacin and its application // Source: Microchemical J., 2003. Vol. 74. - № 3. - P.223-230.
49. Khattab F. Spectrophotometric determination of streptomycin using carbazo // Indian J. Pharm. Sci., 1983. Vol. 45. - № 2. - P.99-101 (цитир. из РЖ хим. 1984, №100293).
50. Ramana G., Meerty S., Jagannadha P., Raju J. Spectrophotometric determination of sulphacetamide sodium with o-chloranil in dosage forms // Indian J. Pharm. Sci., 1988. Vol. 50. - № 2. - P. 138-140 (цитир. из РЖ хим. 1984, №90261).
51. El Ries M. Spectrophotometric and indirect determination of lincomycin by atomic abcorption spectrospoy (AAS) // Anal. Lett., 1994. Vol. 27. - № 8. -P.1517-1531.
52. Espinosa-M., Valenzuela A., Salinas F., Canada F. Kinetic determination of ansamicins in pharmaceutical formulations and human urine. Manual and semiautomatic (stopped-flow) procedures // Anal. chim. acta., 1998. Vol. 376. - № 3. - P.365-375.
53. Murilo Pulgarin J.A., Alanon Molena A. Determination of nafcillin and me-thicillin by different spectrofluorimetric techniques //.,Talanta, 1994. Vol. 41.-№ 1.-P. 21-30.
54. Соколова Л.И., Черняев А.П. Определение антибиотиков цефалоспо-ринового ряда в биологических объектах методом обращено-фазовой ВЭЖХ // Хим. фарм. журн., 2002. - Т. 36. - №5. - С.39-45.
55. Jeanbaptiste В., Kestelijn С., Van den Dunghen S. and el. Assay of amoxycillin in plasma using LC-MS-MS // J. pharm. belg., 1998. Vol.53. - № 3. -P.197.
56. Haginaka J., Wakai J. Liquid chromatographic determination of ampicillin and its metaolites in human urine by postcolumn alkaline degradation // J Pharm. and Pharmacd., 1987. Vol. 39. - № 1. - P.5-8. (цитир. из РЖ хим. №10Г371).
57. Rosseel М., Bogaert М., Valcke Y. HPLC assay of ampicillin in plasma and broncho alveolar lavage fluid, using fluorescence detection // Chromatographic 1989. - Vol. 27. - № 5-6. - P.243-246 (цитиров. из РЖ хим. 1990, №19Г448).
58. La Follette G., Gambertoglio J., White J.A., Knuth D.W., Lin E.T. Determination of clindamycin in plasma or serum by HPLC with ultraviolet detection // J. Chromatorg. Biomed. Appl., 1988. Vol. 431. - № 2. - P.379-388.
59. Munson J., Kubiak E. A HPLC assay for clindamycin phosphate and principal degradation product in bulk drug and formulations // J. Pharm. and Biomed. Anal., 1985. Vol. 3. - № 6. - P.523-533.
60. Shat J., Weber D. Hing performance liquid chromatografhic assay of pir-limycin in human serum and urine using 9 - fluorenylmethylchloroformate //J. Chromatogr, 1984.-Vol. 309. - № 1.-P.95-105.
61. Abbon R., Deeks N., McCarthy R., Morris M., Harris A., Hutchinson G., Fowles S.The quantitative determination of ticarcillin (BRL 2288) in human plasma and urine by automated ASTED{TM }- HPLC // J. pharm. belg., 1995.-Vol. 50. № 4. - P.300.
62. A1-Rashood K. Simultaneous determination of ampicillin and dicloxacillin in pharmaceutical formulations by high-performance liquid chromatography //J. Liquid Chromatogr, 1995. Vol. 18. -№ 12. -P.2457-2465.
63. Lauback R., Rice J., Bleiberg В., Muhammad N., Hanna S. Specific HPLC determination of ampicillin in bulrs, injectables, capsules oral suspensionsby reverse phase, ion-pair chromatography // J. Liquid Chromatogr., 1984. -Vol. 7. - № 6. - P.1243-1265.
64. Kanion I., Zachariadis G., Stratis J. Separation and determination of five penicillins by reversed phase HPLC // J. Liquid Chromatogr., 1993. Vol. 16. -№ 13. - P.2891-2897.
65. Wright J., Durham C., Dunbar J. Determination of ticarcillin and clavulanic acid in serum by liquid chromatography // JAOAC Jnd., 1992. Vol. 75. -№1.- P.30-33 (цитир. из РЖ хим. 1993, № 7Г313).
66. Моррег В. Liquid chromatographic determination of carbenicillin and tica-racillin in injectable dosage forms // J. Assoc. Offic. Anal. Chem., 1988. -Vol. 71. № 2. - P.390-393 (цитир. из РЖ хим. 1989, № Ю337).
67. Targove М., Danielson N. High performance liquid chromatography of clindamycinantibiotics using tris (bipyridine) chemiluminescence detection // J. Chromatogr. Sci., 1990. - Vol. 28. - № 10. - P.505-509.
68. Bawdon R., Hemsell D., Hemsell P. Serum and pelvic tissue concentrations of ceftriaxone and cefazolin at hysterectomy // J. Liquid Chromatogr., 1984. Vol. 7. - № 10. - P.2011-2020.
69. Nahata M.C. Measurement of cefasolin in plasma and peritoneal dialysis fluid by HPLC // J. Liquid Chromatogr., 1990. Vol. 13. - № 11. - P.2285-2291.
70. Hendrix C., Thomas J., Yun Li-Ming, Roets E., Hoogmartens J. Quantitative analysis of cefalezin by liquid chromatography on poly(styrene-divinilbenzene) // J. Liquid Chromatogr., 1993. Vol. 16. - № 2. - P.421-445.
71. Bazant L., Klima J., Koren C. Sensitive HPLC determination of cefaclor in human plasma I I Abstr. Conf. «Anal. Chem. and Appl. Spectrosc.», Atlanta, 1993.-P. 130.(цитир. из РЖ хим. 1994, № 5Г270).
72. Ladana A., Marino A., Rotatori М., D'Ascenro Giusppe, Pappalardo Giuseppe, Reggio Dario. About a fast and reliable method for the determination of cefoxitin in the bile // Ann. chim. (Hal)., 1984. Vol. 74. - № 1112. - P.769-777.
73. Cox Sherry K., Burnette J., Huss В., Frazier D. Determination of cefoxitin in serum and tissu // J Chromatgr. В., 1998. Vol. 705. - № 1. - P.145-148.
74. Касабулатов H.M., Мануйлов K.K., Воропаева С.Д. Трансплацентарный переход цефтазидима в эксперименте у животных в разные сроки беременности // Антибиотики и химиотерапия, 1993. Т. 38. - №1. -С.33-38.
75. Hang P., Drexler G., Meyer М. HPLC determination of ceftazidime in serum, urine, CSF and peritoneal dialysis fluid // J. Liquid Chromatogr., 1984. -Vol. 7. № 5. - P.979-987.
76. Martin J., Mendez R. HPLC analysis of cefmetazole and nocardicins A and E in human serum and urine using solid -phase extraction // J. Liquid Chromatogr., 1988.-Vol. 11. № 8. - P.1729-1739.
77. Nygard G., Nahba K. An isocratic HPLC method for the determination of cephalosporins in plasma // J. Liquid Chromatogr., 1984. Vol. 7. - № 7. -P.1461-1475.
78. Дементьева H.H. Использование ВЭЖХ в фармацевтическом анализе // Фармация, 1979. № 2. - С.60-67.
79. Рубашева J1.M:, Лаврова М.Ф., Бражникова М.Г. 'Количественное определение антибиотика тобрамицина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии // Антибиотики, 1983. № 4. - С.254-258.
80. Lu Jie, Cwik М. Determination of paromomycin in human plasma by re-versed-phase HPL / Book Abstr. Chicago (111.)., 1996. P.548.
81. Tsuji К., Goets J. Normal phase higt-performance liquid chromatographic determination of neomycin sulfate detivatized with l-fluoro-2,4-dinitrobenzene//J. Pharm. Sci., 1982, - Vol. 71. - № 10. - P. 1160-1164.
82. Barends O., Blauw J. Pre column derivatization of aminoglycosides with 1 -fluoro-2,4 - dinitrobenze // J. Chromatogr., 1985. - Vol. 322. - № 2. -P.321-331.
83. Feng C., Lin S., Wu H., Chen S. Trace analysis of amikacin in commercial preparation by derivatization and IIPLC // J. Liq. Chromatogr. and Relat. Technol., 2001. - Vol. 24. - № 3. - P.381-392.
84. Tawa R., Matsunaga H., Fujimoto T. High-performance liquid chromatographic analysis of aminoglycoside antibiotic // J. Chromatogr. A., 1998. Vol. 812.-№ 1-2. P.141-150.
85. Freeman M., Hawkins P. The analysis of gentamicin sulphate in pharma-coutical specialities by high performance liquid chromatography // J. Liquid chromatogr., 1979. V. 2. - № 9. - P.l305-1307.
86. Timothy A., Haneke A., Selzer G. Determination of gentamicin sulfate Cia, C2 and Ci components by ion pair liquid chromatography with electrochemical detection // J. Assoc. Offic. Anal. Chem., 1983. V. 66. - № 1. -P. 172-175.
87. Kraisintu K., Parfitt R., Rowan W. A high performance liquid chromatographic method for the determination and control of the composition of gentamicin sulphate
88. Выдрин A.B, Шихалеев И.В., Махортов B.J1. и др. Изучение компонентного состава препаратов гентамицина сульфата // Хим-фарм. журн., 2003. Т.37. - №8. - С.52-54.
89. Apffel J., Lammers К., kok W.T., Brikmann U., Frei R., Burgess C. Analysis of neomycins А,В and С by HPLC with post-column reaction detection //J. Pharm. and'Biomed. Anal., 1985. Vol. 3. - № 3.'~ P.259-267.
90. Kny L., Witte P., Quantitative von gentamicin // Pharmazie, 1986. -V.41. № 6. - P.433.
91. Brunt E., Limberg J., Derendorf II. HPLC assay and erytrocyte partitioning of flerexacin, a new flouroquinolone antibiotic // J. Pharm. and Biomed. Anal., 1990.-Vol. 8.-№ 1.-P.67-71.
92. Lagana A., Marino A., Rotatori M., Curini R., D'Ascenzo G., Miano L. HPLC analysis of norfloxacin in human tissues and plasma with fluorescence detection // J. Pharm. and Biomed. Anal., 1988. Vol. 6. - № 3. -P.221-228.
93. Carlucci G., Mazzeo P., Fantozzi T. Determination of ofloxacin in pharmaceutical forms by high performance liquid chromatography and derivative uv - spectrophotometry // Anal. Lett., 1993. - Vol. 26. - № 10. -P.2193-2201.
94. Sheridan M.E., Clarke G.S. Improved HPLC determination of doxycycline in serum and urine using solidphase extraction columns // J. Chroma-torg. Biomed. Appl., 1988. Vol. 434. - № 1. - P.253-258 (цитир. из РЖ хим. 1989, № 11Г362).
95. Hisao О., Keiichi U., Kenichi H., Keiko X., Makoto S. Improvement chemical analysis of antibiotics reversed-phase high-performance liquid chromatography // J. Liquid Chromatogr., 1984. Vol. 298. - № 3. - P.435-443.
96. Wrightson W., Myers S., Galandiuk S. Analysis of monocycline by high-performance liquid chromatography in tissue and senjm //J. Chromatgr. В., 1998. Vol. 706. - № 2. - P.358-361.
97. Wenzel Т., Collete L., Hahlen D., Hendrickson S., Yarmaloff L. Liquid chromatographic europium (III) luminescence detection // J. Chromatorg. Biomed. Appl., 1988. Vol. 433. - P. 149-158 (цитир. из РЖ хим. 1989, № 9Г343).
98. Degroodf J., Wyhowski de Bukanski В., Srebrnik S. Multiresidue analysis of tetracyclines in kidney by HPLC and photodiode array defection // J. Liquid Chromatogr., 1993.-Vol. 16. №16. - P.3515-3529.
99. Sokolic M., Filipovic В., Pokorny M. High performance liquid chromatographic procedures in monitoring the production'and quality control of chlortetracycline // J. Chromatogr., 1990. - Vol. 509. - № 1 - P.l89-193.
100. Duthu G. Assay of erytromycin from human serum by high performance liquid chromatography with electrochemical detection // J. Liquid Chromatogr., 1984. Vol. 7. - №5. - P. 1023-1032.
101. Kato Y., Yokoyama Т., Shimokama H., Xudo K., Xabe J., Mohri K. Determination of erytromycin in human plasma and whole blood by high-performance liquid chromatography // J. Liquid Chromatogr., 1993. Vol. 16.-№3.-P.661-680.
102. Hoagland R., Sherwin J. Vancomycin: a rapid HPLC assay for a potent antibiotic // J. Anal. Toxicol., 1984. Vol. 8. - № 2. - P.'75-77 (цитир. из РЖ хим. 1985, №12Г376).
103. Hosotsubo Н. Rapid and specific metod for the determination of van-comicin in plasma by HPLC on an aminopropyl column // J. Chromatorg. Biomed. Appl., 1989. Vol. 487. - №2. - P.421-427. (цитир. из РЖ хим. 1990, № 17Г397)
104. Kubo Н., Kobayashi Y., Kinosrita Т. Fluorescence determination of streptomycin in serum by reversed-phase ion-pairing liquid chromatography // Anal. Chem., '1986. Vol. 58. - № 13. - P.2653-26S5.
105. Kubo H., Kobayashi Y., Kinosrita Т., Li H. Fluorescence determination of streptomycin in serum by HPLC using mobile phase containing fluoro-genic reagent//Anal. Biochem., 1987. Vol. 162. - № 1. - P.219-223.
106. Simmonds R., Wood S., Ackland M. A sensitive HPLC assay for prospectomycin, an aminocyclitol antibiotic, in human plasma and serum // J. Liquid Chromatogr., 1990. Vol. 13. - № 6. - P. 1125-1142.
107. Будников Г.К., Майстренко В.Н., Вяселев М.Р. Основы современного электрохимического анализа. -М.: Мир, 2003 .-592с. ил.
108. Щукина Т.И., Катюхии В.Е., Штейнгардт Ю.Н., Букреева Е.Б. Определение пенициллина в биологических объектах методом катодной инверсионной 'вольтамперометрии // Журн. аналит. химии,"* 1993. -Т.48. №2. - С.366-369.
109. Chaney E., Baldwin R.P. Voltammetric determination of doxorubicin in urine by adsorptive preconcentration and flow injection analysis // Anal, chem. acta, 1985.-Vol. 176.-P. 105-112.
110. Wang E. Liu Y. Cyclic voltammetry and chronopotentiometry with cyclic linear current scanning of tetramycin at the water/nitrobenzene interface // J. Electroanal. Chem., 1986. Vol. 214. - № 1-2. - P.494-464.
111. Schroder В., Voigt R., Patsch R., Horn G., Spencker F. B. Pulse-polarographic determination of P-lactam antibiotics and its clinical applications // Fresenius'Z. anal, chem., 1988. Vol. 331. - № 5. - P.529-530 (цитир. из РЖ хим. 1989, №2Г408).
112. Leech D., Wang J., Smyth M. Electrocatalytic detection of streptomycin and related antibiotics at ruthenium dioxide modified graphite-epoxy composite electrodes //Analyst, 1990. Vol. 115. - № 11 - P.1447-1450.
113. Beltagi A. Determination of the antibiotic drug pefloxacin in bulk form, tablets and human serum using square wave cathodic adsorptive stripping voltammetry // J. of Pharm. and Biomed. Anal., 2003. Vol. 31. - № 6. -P. 1079-1088.
114. Федорчук В.А., Пучковская Е.С., Анисимова JI.C., Слепченко Г.Б. Применение вольтамперометрии для определения антибиотиков стрептомицина и азитромицина // Журн. аналит. химии, 2005. Т. 60. -№6. - С.586-591.
115. Yao S.Z., Shiao J., Nie L.H. Potentiometric determinationof penicillins with ion-selective electrodes // Talanta, 1989. Vol. 36. - № 12. - P. 1249.
116. Campanella .L., Mazzei F., Sbrilli R., Tomassetti M. Benzylpenicillin PVC membrane electrode for the determination of antibiotics in formulations // J. Pharm. and Biomed. Anal., 1988. Vol. 65. - № 3. - P.299.
117. Abulkibash A, Sultan S, Al-Olyan A et al. Differential electrolytic potentiometric titration method for the determination of ciprofloxacin in drug formulations // Talanta, 2003. V.61. - P.239-244.
118. Шведене H.B., Боровская C.B. Иоиометрическое определение лактамных антибиотиков// Журн. аналит. химии, 2003. Т. 58. - № 11. -С.1208 - 1213.
119. Кулапина Е.Г., Барагузина В.В., Кулапипа О.И. Ионоселективныеiэлектроды для определения антибиотиков пенициллинового ряда в биологических жидкостях и лекарственных формах // Журн. аналит. химии, 2004. Т. 59. - №9. - С.971-975.
120. Государственная фармакопея СССР X изд. М.: Медицина, 1968. -1080с.
121. Cross J.T. The identification and determination of.cationic surfaseactive agents with sodium tetraphenylboron // Analyst, 1965. Vol. 90. - № 1071. -P.315-324.
122. Хольцбехер 3., Дивиш Л., Крал М. и др. Органические реагенты в неорганическом анализе: Пер. с чешс. -М.: Мир, 1979. 752с.
123. Басаргин Н.Н., Яковлев ПЛ., Занина И.А. О свйзи между кислотно-основными свойствами о, о'-диоксиазосоединений и аналитическими совйствами их комплексом с ванадием (IV) // Журн. аналит. химии, 1969. Т. 24. - № 6. - С.813-817.
124. Степанов Б.И. Введение в химию и технологию органических красителей.- М.: Москва, 1971. 448с.
125. Вайсберг А. Органические растворители. М.: Инлит, 1958. 518с.
126. Камман К. Работа с иопоселективными электродами. М.: Мир, 1980. -285с.
127. Баулеску Г., Кошофрец В. Применение ионоселективных мембранных электродов в органическом анализе. М.: Мир, 1980. -230с.
128. Никольский Б.П., Матерова Е.А. Ионоселективные электроды. Д.: Химия, 1980. - 240с.
129. Основы аналитической химии: в 2 т. / под ред. Ю.А. Золотова. М.: Высшая школа, 1999.
130. Корыта И., Штулик К. Ионоселективные электроды: Пер. с чешс.-М.: Мир, 1989.-272с.
131. Пендин А.А., Леонтьевская П.К. Электрод, обратимый к тетрафе-нилборат иону, и его аналитические возможности // Жури, аналит. химии. 1979. Т: 34. №11. С. 2113-2118.
132. Марьянов Б.П., Пронин В.А. Применение ЭВМ для обработки данных потенциометрического титрования при определении серебра в ме-деэлектролитных шламах // Журн. аналит. химии. 1984. Т. 39. № 9. С. 1625 -1629.
133. Марьянов Б.М. Метод линеаризации в инструментальной титримет-рии. Томск., изд-во Томского университета, 2001. - 154с.
134. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1993. Ч. 1,2.
135. Dumkiewicz R. Ion selective electrode with a membrane pseudoliquid phase used for benzylpenicillin determination // Chem. Anal., 1992. Vol. 37. - № 2.- P.203-210.
136. Мокров С.Б. Стефанова B.M., Иванков B.C., Караван B.C. Отклик мембранного потенциала на содержание в системе водорастворимых неэлектролитов фенола и его производных // Электрохимия, 1995. -Т. 31. -№2.-С.167-173.
137. Морф В. Принципы работы ионоселективиых электродов и мембранный транспорт: Пер. с англ. М.: Мир, 1985. - 280с.
138. Кулапина Е.Г., Баринова О.В. Электрохимические свойства мембран на основе ассоциатов физиологически активных аминов с тетра-фенилборатом // Электрохимия, 2001. Т. 37. № 8. - С.935-940.
139. Петрухин О.М., Урусов Ю.И., Евсевлеева Л.Г., Боржицкий Ю.А. Динамические характеристики ионоселективиых' мембранных электродов на основе ионообменных материалов // Электрохимия, 1995. -Т.31. № 2.- С.127-134.
140. Кулапин А.И., Михайлова A.M., Кулапина Е.Г. Транспортные свойства пластифицированных мембран на основе органических ионооб-менников // Электрохимия, 2002. Т. 38. - № 4. - С.435-439.
141. Фиалков 10.Я., Житомирский А.Н., Тарасенко Ю.А. Физическая химия неводных растворов. Л.: Химия, 1973. - 376с.
142. Кулапина Е.Г., Апухтина Л.В. Транспортные свойства мембран на основе соединений Ва(П)-полиоксиэтилированный нонилфенол-тетрафенилборат // Электрохимия, 1998. Т.34. - № 2. - С.177-181.
143. Тениус К. Пластификаторы: Пер. с нем. М.: Мир, 1964. - 915с.
144. Жданович Ю.В., Насонова Л.И. Аминогликозидпые антибиотики: классификация, методы выделения и очистки // Антибиотики и химиотерапия, 1997. Т. 42. - № 12. - С.33-39.
145. Гусель В.А., Маркова И.В. Справочник педиатра по клинической фармакологии. -М.: Медицина, 1989. 317с.
146. Навашин С.М., Навашин П.С. Фармакокинетические показатели антибиотиков и их значение при разработке схем антибактериальной терапии, прогнозе эффективности // Антибиотики и химиотерапия, 1992. -Т. 38.-№ 10-11. С.-26-33.
147. Белоусов Ю.Б., Ушкалова Е.А. Формульная система в антибиотико-терапии // Антибиотики и химиотерапия, 2001. Т. 46. - №11. - С.23-35.
148. Гаврилова О.А. Количественная характеристика физико-химических свойств ротовой жидкости у дошкольников // Стоматология, 2004. - №2. - С.54-56.
149. Большая медицинская энциклопедия: 3-е изд.-М.: 1984. - Т. 23. -С.436.
150. Петрович Ю.А., Подорожная Р.П. Физиология гисто-гемотических барьеров.-М.: 1977.-С.353-360.
151. Бабаева А.Г., Шубникова Е.А. Структура, функция и адаптивный рост слюнных желез-М.: 1979.
152. Агаджаян Н.А, Тель J1.3., Циркин В.И., Черноокова С.А. Физиология человека. С-П.: Сотис, 1998. - 537с.
153. Лакин Е.М., Зорян М.М., Кац М.М. и др. Определение содержания лекарственных веществ в слюне в клинических и экспериментальных исследованиях фармакокинетики // Фармакология и токсикология, 1987, Т.50. - №4. - С. 93-100.
154. Леонтьев В.К., Галиулина М.В., Ганзина И.В. Изменение структурных свойств слюны при изменении рН // Стоматология, 1999. - №2. -С.22-24.
