Разделение и определение водорастворимых витаминов в экстракционных системах с органическими растворителями и полимерами поли-N-виниламидного ряда

Ерина, Оксана Владимировна

Разделение и определение водорастворимых витаминов в экстракционных системах с органическими растворителями и полимерами поли-N-виниламидного ряда тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

Ерина, Оксана Владимировна АВТОР

кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ

Воронеж МЕСТО ЗАЩИТЫ

2011 ГОД ЗАЩИТЫ

02.00.02 КОД ВАК РФ

Диссертация по химии на тему «Разделение и определение водорастворимых витаминов в экстракционных системах с органическими растворителями и полимерами поли-N-виниламидного ряда»

Автореферат диссертации на тему "Разделение и определение водорастворимых витаминов в экстракционных системах с органическими растворителями и полимерами поли-N-виниламидного ряда"

4840981

Ерина Оксана Владимировна

РАЗДЕЛЕНИЕ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ В ЭКСТРАКЦИОННЫХ СИСТЕМАХ С ОРГАНИЧЕСКИМИ РАСТВОРИТЕЛЯМИ И ПОЛИМЕРАМИ ПОЛИ-1Ч-ВИНИЛАМИДНОГО РЯДА

02.00.02 - Аналитическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

1 7 МАР 2011

Воронеж -2011

4840981

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Воронежский государственный университет»

Научный руководитель: доктор химических наук, доцент

Хохлов Владимир Юрьевич

Официальные оппоненты: доктор химических наук,

профессор Рудаков Олег Борисович

кандидат химических наук Шкинев Валерий Михайлович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского»

Защита состоится 18 марта 2011 года в 14:00 на заседании диссертационного совета Д 212.038.19 при Воронежском государственном университете по адресу: 394006, г. Воронеж. Университетская пл., 1. ауд. 439

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Воронежского государственного университета.

Автореферат разослан «17» февраля 2011 года

Ученый секретарь диссертационного совета

Крысин М.Ю.

Общая характеристика работы'

Актуальность работы. Водорастворимые витамины, такие как рутин, никотиновая, аскорбиновая и фолиевая кислоты являются одними из важнейших биологически активных веществ (БАВ), играющих ключевую роль в процессах окислительного метаболизма. Они незаменимы для нормального функционирования организма и находят все более широкое применение при производстве новых лекарственных средств и пищевых добавок. Именно стадия извлечения и очистки витаминов из растворов фармацевтической, пищевой и медицинской промышленности в значительной степени определяет чистоту, а, следовательно, качество и цену получаемых препаратов.

Для выделения, разделения и определения витаминов наиболее широко применяются хроматография и электрофорез. Базовая технология разделения витаминов основана на применении полимерных сорбентов. Однако сорбционный способ выделения витаминов иногда бывает малоэффективным в случае разделения крупных органических молекул, что связано с медленной диффузией веществ в зерне сорбента и возможным химическим взаимодействием между адсорбтивом и сорбентом, что затрудняет процесс регенерации. Кроме того, при определении малых количеств витаминов в производственных растворах часто необходима стадия их экспрессного концентрирования. В таких случаях, альтернативой является использование экстракции, как более быстрого процесса.

К настоящему времени разработаны способы экстракционного разделения и концентрирования аминокислот и некоторых витаминов, в частности никотиновой и аскорбиновой кислот с применением в качестве экстрагентов спиртов и сложных эфиров. Однако данных по экстракционному извлечению таких важных для нормальной жизнедеятельности организма витаминов как рутин и фолиевая кислота органическими растворителями практически нет.

Применение в качестве экстрагентов водорастворимых полимеров поли- Ы- амидного ряда, обладающих малой токсичностью является одним из перспективных направлений жидкостной экстракции. Известна высокая экстракционная эффективность водорастворимых полимеров по отношению к металлам и аминокислотам, однако, в отношении водорастворимых витаминов такие сведения отсутствуют.

Автор выражает искреннюю благодарность за ценные замечания и помощь в выполнении работы доктору химических наук Мокшиной Н.Я.

Цель работы - создание эффективных экстракционных систем на основе органических растворителей и водорастворимых полимеров для разделения и концентрирования рутина, фолиевой, аскорбиновой и никотиновой кислот и разработка способов их спектрофотометрического определения в многокомпонентных смесях.

В ходе работы решались следующие задачи:

• Установление закономерностей экстракции рутина и фолиевой кислоты в системах «спирт-водно-солевой раствор», «сложный эфир-водно-солевой раствор»; создание экстракционных систем на основе смесей органических растворителей для их извлечения.

• Определение количественных характеристик процесса экстракции (коэффициентов распределения, степени извлечения) аскорбиновой, фолиевой, никотиновой кислот и рутина в системе водорастворимый полимер - водно-солевой раствор.

• Выявление механизма взаимодействия водорастворимых витаминов с синтетическими водорастворимыми полимерами ряда поли-И-виниламидов.

• Разработка спектрофотометрического способа раздельного определения и экстракционного разделения индивидуальных витаминов в многокомпонентных смесях.

Научная новизна. Рассчитаны экстракционные характеристики (коэффициенты распределения и степень извлечения) рутина и фолиевой кислоты в системах водно-солевой раствор - спирты (сложные эфиры). Предложены экстракционные системы для их извлечения. Выявлен синергетический эффект при экстракции рутина бинарными смесями органических растворителей, приводящий к повышению степени его извлечения.

Показано, что по экстракционной селективности синтетические водорастворимые полимеры по отношению к никотиновой, аскорбиновой, фолиевой кислот и рутину располагаются в ряд: поли-Ы-винилпирролидон (ПВП) > поли-Ы-вииилкапролактам (ПВКЛ) > поли-М-винил-М-метилацетамид (ПВМА). Определены характеристики процессов экстракции витаминов (коэффициент распределения вещества Б и степень извлечения II) при различных значениях рН, типах высаливателей и соотношениях фаз.

С использованием методов ИК-спектроскопии и компьютерного моделирования предложен механизм взаимодействия в водных растворах водорастворимых витаминов (никотиновая, аскорбиновая, фолиевая кислоты, рутин) с полимерами ряда поли-М-виниламидов. Показано, что высокая эффективность данных экстракционных систем может быть

обусловлена образованием ассоциатов за счет водородных связей между полимером и витамином.

Показано, что применение поли-И-винилкапролактама позволяет проводить безреагентную реэкстракцию витаминов за счет первоначального образования полимерного осадка, содержащего витамин и последующего его растворения.

Предложены экстракционные системы на основе водорастворимых полимеров ряда поли-Ы-виниламидов для разделения двухкомпонентных смесей витаминов с использованием поли-Ы-винилпирролидона и поли-Ы-винилацетамида и трехкомпонентных смесей с применением в качестве экстрагента поли-Ы-винилкапролактама.

Практическая значимость работы. Разработаны эффективные экстракционные системы на основе водорастворимых полимеров: ПВП -водно-солевой раствор для извлечения и разделения никотиновой и аскорбиновой кислот и ПВКЛ - водно-солевой раствор фолиевой кислоты и рутина.

Разработаны способы спектрофотометрического определения с применением уравнений Фирордта и дифференциально-спектрофотометрический способ определения никотиновой, аскорбиновой, фолиевой кислот и рутина в бинарных и тройных смесях. Погрешность определения в бинарных смесях не превышает 7% и в тройных смесях не превышает 10%. Новизна предлагаемых решений подтверждена 2 патентами РФ.

Положения, выносимые на защиту:

• Коэффициент распределения и степень извлечения водорастворимых витаминов в системах «органические растворители-водно-солевые растворы витаминов» и «полимеры ряда поли-]Ч-виниламидов - водно-солевые растворы витаминов» определяются значениями рН, типами высаливателей и соотношением фаз.

• Комплексы в системах «водорастворимый полимер-водно - солевой раствор витамина» образуются за счет водородных связей между полимером и витамином при участии молекул воды.

• Способы спектрофотометрического определения никотиновой, аскорбиновой, фолиевой кислот и рутина в бинарных и тройных смесях с применением уравнений Фирордта и дифференциально-спектрофотометрического способа.

• Способ экстракционного разделения тройных смесей водорастворимых витаминов, заключающийся в извлечении витаминов поли-Ы-винилкапролактамом с их последующей термической реэкстр акцией.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 работ, из них 5 статей в журналах, входящих в перечень ВАК и 6 тезисов докладов на международных и российских научных конференциях.

Апробация. Основные результаты работы доложены на конференциях: III и IV Международных конференциях «Экстракция органических соединений» (Воронеж, 2005, 2010); III Международном симпозиуме «Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии» (Краснодар, 2005); III Международной конференции по химии и технологии ХТ'07 (Москва, 2007); 4-ой Всероссийской научно-методической конференции «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования» (Воронеж. 2010).

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 110 страницах машинописного текста, состоит из введения, четырех глав, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 147 наименований, и приложения; содержит 34 рисунка и 34 таблицы.

СТРУКТУРА РАБОТЫ

В главе I приведены сведения об основных свойствах витаминов -активаторов окислительного метаболизма, а также о химических и физико-химических методах определения витаминов в чистом виде, фармацевтических препаратах, растительном сырье и биологическом материале. Литературные данные содержат сведения о способах выделения, концентрирования и разделения витаминов, особое внимание уделено описанию экстракции физиологически активных веществ.

В главе II приведены некоторые физико-химические свойства исследуемых водорастворимых витаминов: рутина (витамин Р), фолиевой (витамин Вс), аскорбиновой (витамин С) и никотиновой (витамин РР) кислот (табл.1).

В качестве экстрагентов использовались алифатические спирты (бутанол-1, пентанол-1), алкилацетаты (этилацетат, бутилацетат) и их смеси, также водорастворимые полимеры: поли-Ы-винилпирролидон (ПВП), поли-Ы-винилкапролактам (ПВКЛ), поли-1Ч-винил-М-

метилацетамид (ПВМА).

—сн—сн2-

ПВП

ПВКЛ

ПВМА

Таблица 1

Витамин Структурная формула Растворимость г/100см! Н20, 20°С

Рутин /он гдеR- но ^^^ 7—он н VVC- ^"iPsr OH OH 0,02

Фолисвая кислота 0 H J HIANA/ h cooh 1 H 0,05

Аскорбиновая кислота HO OH HO—CH-CH— OH 33,0

Никотиновая кислота С" 1,0

Приведены методики спектрофотометрического определения витаминов («Shimadzu» (Япония), экстракционного извлечения витаминов, определения констант устойчивости образовавшихся комплексов (метод молярных отношений). Приведена методика анализа фаз до и после экстракции методом ИК-спектроскопии (Фурье-ИК спектрометр Bruker Vertex 70), квантово-химического расчета ИК-спектров витаминов до и после экстракции полимерами, процедура оптимизации структур ассоциатов (пакет программ Gaussian-03, метод Хартри-Фока в базисе 6-311G(d,p)).

В главе III изложены результаты изучения процесов экстракции витаминов из водно-солевых растворов, рассчитаны количественные экстракционные характеристики (коэффициенты распределения D и степень извлечения R,%). Максимальная степень извлечения наблюдается при экстракции рутина бутиловым спиртом (62,5 %). При экстракции спиртами подтверждается общая тенденция экстракции органических соединений: при увеличении числа атомов углерода в молекуле экстрагента эффективность экстракции уменьшается (табл.2).

Таблица 2.

Коэффициенты распределения (О) и степень извлечения рутина (И) в системах водно-солевой раствор - спирты и водно-солевой раствор - алкилацетат

Высаливатель Этилацетат Бутилацетат Бутанол-1 Пентанол-1

N301 и ш,мг О К,% т,мг О 11,% т,мг Б ш,мг

1 1,6 13,8 0,31 0,9 7,5 0,19 18,7 62,5 1,56 15,0 59,5 1,49

2 1,4 11,7 0,26 0,3 2,7 0,06 11,4 53,3 0,53 12,3 50,2 0,26

О и 1 1,6 12,5 0,30 0,5 5,0 0,12 7,3 42,1 1,00 6,2 35,6 0,89

2 1,2 10,0 0,25 0,3 2,5 0,06 3,2 22,2 0,55 2,7 19,1 0,48

КВг 1 1,0 7,4 0,19 0,3 2,7 0,06 2,9 22,5 0,60 2,4 17,6 0,44

2 0,3 2,7 0,07 0,3 2,3 0,05 2,9 22,5 0,60 2,1 15,8 0,40

В работе установлена возможность извлечения витаминов (на примере рутина) смесями нескольких растворителей, поскольку известно, что компоненты экстрагирующей смеси могут взаимодействовать друг с другом с образованием молекулярных комплексов, для которых характерно повышение экстрагирующей способности, по сравнению с индивидуальными веществами, из которых они состоят. На рис. 1 представлена зависимость коэффициента распределения рутина от содержания бутанола при экстракции смесью бутанол - этилацетат.

1> 30-,

О 0.2 0.4 0.6 0.8 1

мольнаядоля бутанола

—«—Этилацетат-бутанол ЫаС1 - - - -Линейный (Линия аддитивности)

Рис. 1. Синергетический эффект при экстракции рутина двухкомпонентными смесями растворителей бутанол-этилацетат (высаливатель ШС1).

При мольной доле бутанола, равной 0,1 (рис.1) наблюдается антагонистический эффект, обусловленный частичной десольватацией рутина в органической фазе. Десольватация уменьшает растворимость экстрагируемого вещества в органической фазе, что приводит к уменьшению экстракционной способности растворителя. С увеличением

содержания бутанола, в интервале 0,2-0,9 мольных долей, за счет образования гидратосольватов и изменения активности воды, наблюдается синергетический эффект, заключающийся в увеличении степени разделения компонентов за счет повышения растворимости рутина в органической фазе. Рассчитаны коэффициенты синергетности (Кс=^(Вэкс/Т)ад„ (где Омх. и Е)адд - коэффициенты распределения вещества между данной смесью экстрагентов и водой, найденные экспериментально и вычисленная по правилу аддитивности) для рутина при экстракции смесями бутанол с алкилацетатами (высаливатель №С1) (табл. 3). При экстракции рутина из водно-солевых растворов №С1 смесью растворителей бутанол-этилацетат сольватное число не привышает 1,29, а константа образования 0,91; смесью бутанол-бутилацетат сольватное число равно 1,12, а константа образования 0,78. Малые значения констант образования свидетельствуют об образовании малоустойчивых смешанных сольватов, вследствие образования водородных связей. Степень сольватации рутина уменьшается в ряду бутанол > этилацетат > бутилацетат, что подтверждается соответствующими сольватными числами, при этом эффективность извлечения рутина также уменьшается.

Таблица 3.

Коэффициенты синергетности при экстракции рутина из водно-солевых растворов смесями бутанола с алкилацетатами.

Мольная доля бутанола Второй компонент смеси

Этилацетат Бутилацетат

0,1 - -

0,3 0,07 0,03

0,5 0,18 0,04

0,7 0,19 0,05

0,9 0,33 0,17

Таким образом, применение органических растворителей для извлечения рутина позволяет достигать довольно высоких степеней извлечения. Однако некоторые органические экстрагенты являются весьма токсичными, что делает необходимым введение стадии реэкстракции и их утилизация сопряжена с рядом экологических проблем. Поэтому актуальным является вопрос о поиске новых эффективных и безопасных экстракционных систем. С целью подбора более эффективных и экологически чистых систем для извлечения витаминов изучено экстракционное извлечение рутина, фолиевой, аскорбиновой и никотиновой кислот водными растворами полимеров поли-Ы- виниламидного ряда при различных рН и соотношениях фаз.

Коэффициенты распределения (Б) и степени извлечения (К) витаминов в системах с поли-И-винилпирролидоном и поли-Ы-

винилкапролактамом, приведены в табл. 4. Полученные данные свидетельствуют, что наиболее эффективными экстракционными системами для извлечения исследуемых витаминов являются поли-1Ч-винилпирролидон - (ТЧНОгЗОз и поли-Ы-винилкапролактамом - (МН4)2803, при рН=6,6 и соотношение фаз 5:1, позволяющие достигать степени извлечения до 95% при однократной экстракции (выделены наиболее эффективные системы). Эффективность экстракционных систем с солями аммония обусловлена более интенсивным гидролизом, приводящим к появлению большего количества ионов водорода, обладающих меньшим ионным радиусом.

Таблица 4.

Коэффициенты распределения (О) и степень извлечения (Я) рутина, аскорбиновой, никотиновой и фолиевой кислот ПВП и ПВКЛ при различных рН.

Экстра-гент Витамин Высаливатель (нас. р-р) рН Соотношение фаз 10:1 Соотношение фаз 5:1

г Э я,% г О

поли-К-винилпирролидон аскорбиновая кислота (ЫН,)230, 1.5 0.3 0.03 21 0,3 0.01 25

5,8 0,2 0,08 65 0,2 0,28 69

11,4 0,5 0,05 25 0,4 0,07 28

N3280, 1,5 1,4 1,27 48 1,0 1,00 50

5,4 0,7 9,80 91 1,1 12,2 92

11,4 1,7 6,60 88 1,0 8,26 88

(КН4),803 1,3 0,8 0,77 48 0,5 0,82 49

5,7 0,9 2,49 75 0,9 8,22 94

11,3 0,8 1,94 70 0,8 2,47 75

никотиновая кислота (МН4),804 1.4 0.3 0.77 58 0,2 0.15 18

6,7 0,6 2,40 88 0,7 5,70 96

11,6 0,4 2,00 83 0,2 3,90 95

Ка,80, 1,4 0,4 0,40 50 0,3 0,14 34

6,7 0,6 6,83 92 0,4 7,75 95

11,5 0,2 0,35 36 0,3 0,19 39

(МН4),803 1,3 0,1 0,03 25 0,1 0,09 52

6,5 0,2 2,09 95 0,6 4,48 96

11,2 0,1 0,17 70 0,1 0,31 78

0 ос « 1 § 1 а и Ё л с; о с рутин (Ш,)2804 2.0 0.5 0.14 23 0,6 0.26 30

6,6 0,5 0,29 38 0,6 0,43 42

11 0,4 0,20 35 0,5 0,31 38

N3,30, 2,0 0,5 0,02 3 0,6 0,05 10

7,6 0,5 0,05 10 0,6 0,15 20

9,5 0,6 0,03 5 0,6 0,15 20

(МН4),303 2,0 0,4 0,3« 50 0,3 0,75 59

6,6 0,4 3,38 90 0,4 3,8 95

9,5 0,4 1,61 88 0,4 2,47 93

2.0 0.4 0.96 72 0,4 0.99 75

6,6 0,5 1,88 80 0,4 2,15 87

о 11 0,5 1,70 75 0,4 1,71 83

и я N33803 2,0 0,4 0,89 67 0,4 0,91 69

О! Я! 7,6 0,4 1,00 76 0,4 1,20 78

<ц К 9,5 0,4 0,97 73 0,4 1,52 79

о (ЫН^О, 2,0 0,3 0,98 74 0,3 1,10 77

6,6 0,4 2,17 88 0,5 2,29 92

9,5 0,3 2,10 86 0,3 2,19 89

Особенностью ПВКЛ является наличие нижней критической температуры растворения (НКТР) в водных растворах в интервале температур 32-37°С. При достижении данного температурного интервала наблюдается образование полимерного осадка, содержащего экстрагируемый компонент. В работе была показана возможность выделения рутина методом температурного осаждения с ПВКЛ (табл. 5). Практически полное извлечение рутина (94%) происходит из экстракта при соотношении фаз 1:5.

Таблица 5.

Масса рутина и процентное содержание, после его экстракции ПВКЛ из водно-солевого раствора, содержащего сульфат аммония при осаждении в фазе водного

раствора полимера.

Соотношение фаз до экстракции рН Шрутят в фазе водного р-ра ПВКЛ, мг Шру,и„, В ВОДНОМ р-ре после осаждения, мг ГПругИПа В осадке, мг Массовая доля осажденного рутина, %

1: 10 2,0 0,35 0,11 0,24 68,5

6,6 0,57 0,08 0,49 86,0

11,0 0,56 0,10 0,46 82,1

1:5 2,0 0,45 0,11 0,34 75,6

6,6 0,63 0,04 0,59 93,7

11,0 0,61 0,08 0,53 86,9

Ошибка определения рутина составляет 2%.

Полученные экспериментальные данные позволяют сделать вывод о целесообразности применения поли^-винилпирролидона, поли- К-винил-N -метилацетамида в качестве экстрагентов в системах с водорастворимыми витаминами. Применение поли-И-винилкапролактама в качестве экстрагента позволяет проводить безреагентную реэкстракцию.

Для выяснения механизма взаимодействия «полимер - витамин» были изучены ИК-спектры экстракционных систем. На рис. 2 и 3 представлены ИК-спектры рутина в водном растворе до и после его экстракции поли-ЬГ-винилпирролидоном. При переходе рутина в фазу полимера происходит образование ассоциата полимер-витамин, о чем свидетельствует образование новой водородной связи между С=0 группой полимера и ОН

группой рутина, что отражается на спектре в виде нового пика в области 1613 см"1 и смещения частот в области 3300-3200 см"1. При сравнении со спектрами компонентов до экстракции наблюдается смещение частот в более низкочастотную область, что свидетельствует об упрочнении образующихся связей.

V, см"1

Рис 2. ИК-спектр ПВП(1) и рутииа (2) в водном растворе при рН=7

3400 2400 1400 400

V. СМ"1

Рис.З. ИК спектр рутина после экстракции водным раствором ПВП.

С целью количественной оценки характеристик водородных связей в системе витамин-полимер были рассчитаны энтальпия, энергия и длина водородной связи по соотношениям, предложенным Пиментелом2. Рассчитанные значения параметров водородных связей до и после экстракции в водной фазе при экстракции ПВП представлены в табл. 6. После экстракции рутина раствором ПВП наблюдается увеличение энергии водородной связи (Е„) и уменьшении ее длины, что свидетельствует об упрочнении связи в экстракционной системе.

2 Водородная связь / Дж. К. Пиментел, О. Мак-Клеллан ; Пер. с англ. М.О. Буланиной, Г.С. Денисова, Д.Н. Щепкина; Под ред. В.М. Чулановского .— М.: Мир, 1964 .— 462 с.

Таблица 6.

Параметры водородной связи в системе вода- рутин - полимер до и после экстракции ПВП.____

Частоты колебаний ОН-группы рутина, V ОН, см"' Энергия связи, Ен, кДж/моль Энтальпия связи, ДН, кДж/моль Длина связи, Кон...о. А

До экстракции 3300 28,3 27,2 2,8

После экстракции 3200 35,4 30,4 2,7

В работе был проведен квантово-химический расчет ИК-спектров и оптимизация структур активных центров молекулы. Подтверждено смещение максимумов поглощения валентных колебаний ОН групп рутина в сторону меньших частот от 3303 см"1 до 3216 см"1 и смещения частот валентных колебаний группы С=0 молекулы полимера от 1654 см"1 до 1615 см"1, что свидетельствует об образовании водородной связи между С=0 группой полимера и ОН- группой в положении 6 молекулы рутина и согласуется и экспериментальными данными (рис. 4 и 5).

—сн—сн,-

Рис. 4. Схема возможного взаимодействия рутина с водой (а) и рутина с водным раст вором ПВП (б)

Рис. 5 Оптимизированная структура репрезентативного фрагмента системы ПВП — вода - активный центр молекулы рутина.

Аналогичные закономерности наблюдаются для остальных систем «водный раствор витамина - раствор полимера». Происходит упрочнение межмолекулярных водородных связей в системе вода-витамин-полимер относительно водородных связей в системе вода-витамин, что способствует переходу витамина из водной фазы в фазу полимера.

В главе IV представлены способы спектрофотометрического определения витаминов, которые могут быть использованы при контроле содержания индивидуальных компонентов в поливитаминных смесях и пищевых добавках.

Для раздельного спектрофотометрического определения витаминов в их смесях был применен метода Фирордта. В соответствии с найденными значениями молярных коэффициентов светопоглощения, концентрации рутина, фолиевой, аскорбиновой и никотиновой кислот в анализируемых двухкомпонентных смесях можно определить из уравнений:

I — система: фолиевая кислота (1) — аскорбиновая кислота (2) С1 = 4,8'10"5'А1 - 1,5-КГ5-А2, С2 = 7,9-10"5-А2-2,3-10-5-А, ;

. II - система: фолиевая кислота (1) — никотиновая кислота (2) С1=4,9-10-5-А1-1,4-10"5-А2, С2 = 40,0-1(Г5-А2-15,3 -10'5-А, Метод позволяет определять витамины в интервале концентраций 10"6-10"2 моль/дм3, с погрешностью, не превышающей 7%.

Однако, анализ смесей рутина с фолиевой, никотиновой и аскорбиновой кислотами методом Фирордта представляется затруднительным, поскольку погрешности определения компонентов достигают 18% и более в силу значительного перекрывания максимумов в их УФ-спектрах.

С целью снижения погрешности при определении рутина в его смесях с аскорбиновой, никотиновой и фолиевой кислотами разработан способ дифференциально-спектрофотометрического определения в интервале концентраций 10~6 - 10~2 моль/дм3, с погрешностью определения не более 7%:

I система: фолиевая кислота (1) — рутин (2)

С, =3,6-10"5-А, -6,5-10"5-А2 + 2,7-10"5 С2 = 6,8- Ю-5-А2 - 4,1 • 10"5-А, + 0,5-10"5

II система: рутин (1) — никотиновая кислота (2)

С, = 3,610"5-А, - 6,7-10"5-А2 + 1.6-10"5 С2 = 55,3-1(Г5-А2 — 31,5- 10"5-А| + 1,5'Ю"5 Результаты экстракции смеси витаминов в системе водный раствор (ЫН4)2504 - полимер с последующим спектрофотометрическим определением представлены в табл. 7. Как видно из таблицы, степень

извлечения рутина составила 95%, а степень извлечения никотиновой кислоты 33%. Лучше всего разделяются фолиевая (извлекается 91%) и никотиновая кислоты (извлекается 0,2%), т.е. достигается практически полное извлечение фолиевой кислоты из смеси. Фактор разделения (Р) указан в пояснениях к таблице 7.

Таблица 7.

Экстракция смеси витаминов в системе водный раствор (N114)2804 - полимер.

Смесь таминов н Е (и и ез е- О До экстракции,С|, 10"5, моль/дм3 Результаты определения в орг. фазе, С|,10"5, моль/дм3 Степень извлечения, %

к т О С(, с2, С,, С2, Я]

I ПВМА 4,54 3,28 4,23 1,13 93,3 ±0,9 34,6 ±0,7

II ПВП 3,29 16,25 3,10 5,29 94,5±0,7 32,5±0,5

где С) и Сг - концентрация первого и второго витамина в водно-солевом растворе до и после экстракции: смесь I- фолиевая кислота (1) — рутин (2), коэффициент разделения -Р=2,7; смесь II- рутин (1) — никотиновая кислота (2), Р=2,9.

Наибольший интерес представляет разделение витаминов в их многокомпонентных смесях (3 и более). Состав трехкомпонентных смесей можно определить по методу Фирордта. Для смеси никотиновая кислота (НК) - рутин (Р) - фолиевая кислота (ФК), уравнения Фирордта имеют вид: снк=62,6-10"5-А262- 61,4-10"5-А267+ 13,4-10"5-А282 ср = -3,9 • 10"5 • А262 + 10,6 ■ 10"5 • А267 - 5,0 • 10-5 • А282 сфк= -0,1 • 10"5-А262- 3,4- 10~5'А267 + 6,5 • 10"5-А282 Адекватность предложенных уравнений для трехкомпонентных смесей была подтверждена методом "введено - найдено" и погрешность определения компонентов данной смеси составила не более 10 %.

В работе показана возможность экстракционно-спектрофотометрического определения состава трехкомпонентных смесей витаминов (табл. 8).

Таблица 8.

Экстракция смеси рутина (р), фолиевой (фк) и никотиновой (нк) кислот в системе водный раствор (N114)2804 - ПВКЛ.

До экстракции, С/ ,103, моль/дм3 Результаты определения в орг. фазе, С^ 10"5 моль/дм3 Степень извлечения, %

Снк сР Сфк Сщс Ср Сфк Кнк Кфк

5,7 1,0 2,0 6,3 1,1 0,4 75,1 ±0,5 80,3 + 0,4 4,0 ±0,8

Так, первоначально, из смеси никотиновая кислота - рутин -фолиевая кислота, путем экстракции поли-Ы-винилкапролактамом можно

практически полностью извлечь фолиевую кислоту. После экстракции фолиевая кислота остается в водно-солевой фазе, а рутин и никотиновая кислота переходит в фазу ПВКЛ, что позволяет упростить процедуру анализа водной фазы и использовать для определения рутина и никотиновой кислоты в смеси метод дифференциальной спектрофотомерии (И система). Оставшиеся витамины - рутин и никотиновую кислоту можно разделить при помощи поли-1Ч-винилпирролидона, либо возможен вариант разделения, при котором используются органические экстрагенты.

Выводы

1. Выявлены закономерности экстракции рутина и фолиевой кислоты спиртами и алкилацетатами. Показано, что при переходе от бутанола к пентанолу и от этилацетата к бутилацетату эффективность экстракции витаминов снижается. Рассчитаны характеристики процесса экстракции витаминов индивидуальными растворителями и бинарными смесями (коэффициенты распределения, степень извлечения, сольватные числа, константы образования, коэффициенты синергетности). Предложены бинарные системы растворителей для эффективного извлечения витаминов (степень извлечения в пределах 70-80 %).

2. Определены количественные характеристики межфазного распределения рутина, фолиевой, никотиновой и аскорбиновой кислот в экстракционных системах, содержащих ПВП, ПВКЛ и ПВМА при различных значениях pH, типах высаливателя и соотношениях фаз. Оптимизирован состав фаз и условия экстракционного выделения витаминов в водных полимерных системах, позволяющие достигать степеней извлечения более 95%. Обнаружено, что применение в качестве экстрагента водного раствора поли-М-винилкапролактама, проявляющего способность к термоосаждению, позволяет проводить безреагентную реэкстракцию витаминов путем нагревания раствора выше температуры фазового разделения.

3. Методами ИК-спектроскопии и методом компьютерного моделирования изучены взаимодействия в системах, содержащих рутин, никотиновую, аскорбиновую и фолиевую кислоты и водорастворимые полимеры. Установлено образование комплексов «витамин-полимер» за счет межмолекулярных водородных связей. Предложены схемы образующихся комплексов и рассчитаны параметры водородных связей в экстракционных системах.

4. Разработаны спектрофотометрические способы раздельного определения аскорбиновой, никотиновой, фолиевой кислот и рутина в двойных и тройных смесях в интервале концентраций 10"6 - 10~2 моль/дм3.

Предложены уравнения Фирордта для систем содержащих аскорбиновую, никотиновую и фолиевую кислоты. Погрешность определения витаминов в двухкомпонентных смесях для аскорбиновой кислоты не превышает 0,6%, для никотиновой и фолиевой кислот - 7%. В трехкомпонентной системе максимальная погрешность определения никотиновой кислоты составила 10%, для фолиевой кислоты 11% и рутина 7%. С целью снижения погрешностей определения витаминов, спектры которых значительно перекрываются разработан дифференциально-спектрофотометрический способ определения компонентов бинарных смесей фолиевая кислота -рутин и рутин - никотиновая кислота. Погрешность определения для рутина не превышает 5%, для фолиевой кислоты погрешность максимально составила 4% и для никотиновой кислоты -7%.

Основные положения диссертации изложены в следующих публикациях:

1. Ерина О.В. Экстракция рутина в системах водно-солевой раствор -водорастворимый полимер и его термическое осаждение поли-N-винилкапролактамом / O.B. Ерина, В.Ю.Хохлов, В.Ф. Селеменев, Г.В. Шаталов // Известия Вузов.: Серия «Химия и химическая технология»,- 2010.- Т. 53, Вып. 3.- С. 52-54

2. Ерина О.В. Экстракция рутина поли->1-капролактамом / О.В. Ерина, В.Ю.Хохлов, Г.В. Шаталов //Экстракция органических соединений ЭОС-2010: IV Международ, конф., Воронеж, 20-24 сент. 2010г.: сборник докл. - Воронеж. 2010. - С. 327

3. Ерина О.В. Экстракция водорастворимыми полимерами витаминов -активаторов окислительного метаболизма / О.В. Ерина, В.Ю.Хохлов, В.Ф. Селеменев, Г.В. Шаталов // Фармобразование 2010: 4-я Всерос. Науч-метод. Конф., Воронеж. 2010. - С. 143

4. Ерина О.В. Экстракционное извлечение фолиевой кислоты водорастворимыми полимерами / О.В. Ерина, В.Ю.Хохлов, В.Ф. Селеменев, Г.В. Шаталов // Известия Вузов.: Серия «Химия и химическая технология».- 2009. - Т.52, Вып. 9. - С. 36-38

5. Пат. РФ № 2374642 Способ определения никотиновой кислоты в водном растворе / Н.Я. Мокшина, О.В. Ерина, O.A. Пахомова, Г.В. Шаталов; заявл. 27.05.2008. Опубл. 10.11.2009. Бюл. № 33.

6. Пат. РФ № 2361202 Способ определения аскорбиновой кислоты в водном растворе / Н.Я. Мокшина, О.В. Ерина, O.A. Пахомова, Г.В. Шаталов; заявл. 27.05.2008. Опубл. 10.07.2009. Бюл. № 19.

7. Мокшина Н.Я. ИК-спектроскопия в анализе водной фазы при экстракционном разделении аминокислот и витаминов / Н.Я.

Мокшина, O.A. Пахомова, O.B. Ерина, P.B. Савушкин // Украинский химический журнал,- 2008,- Т. 74, № 7. - С. 47-51.

8. Мокшина Н.Я. Синергизм при экстракции аскорбиновой и никотиновой кислот бинарными смесями растворителей / Н.Я. Мокшина, О.В. Ерина, O.A. Пахомова, Р.В. Савушкин II Журнал физической химии,- 2007,- Т. 81, № 12. - С. 2181-2185.

9. Ерина О.В. Экстракция водорастворимых витаминов растворителями различной природы / О.В. Ерина, Н.Я. Мокшина // III Международ, конф. по химии и технологии ХТ'07 (посвящается 100-летию со дня рождения академика Н.М. Жаворонкова), Москва 2007г.: сборник докл. - Т.4 - С. 69

10.Ерина О.В. Экстракция рутина из водно-солевых сред. / О.В. Ерина, Н.Я. Мокшина, В.Ф. Селеменев, JI.C. Нечаева // Системный анализ и управление в биомедицинских системах.- 2005.- Т. 4. №3,- С. 364-366.

11.Ерина О.В. Экстракционно-фотометрическое определение рутина в водных средах / О.В. Ерина, Н.Я. Мокшина, В.Ф. Селеменев, JI.C. Нечаева // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация,- 2005. № 1,- С. 26-28.

Работы М» 1,4,8,10,11 опубликованы в журналах, входящих в Перечень ВАК

Подписано в печать 15.02.11. Формат 60*84 '/к,. Усл. печ. л. 1. Тираж 100 экз. Заказ 195.

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии Издательско-полиграфического центра Воронежского государственного университета. 394000, Воронеж, ул. Пушкинская, 3

Содержание диссертации автор исследовательской работы: кандидата химических наук, Ерина, Оксана Владимировна

ГЛАВА

СОДЕРЖАНИЕ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Современные способы определения водорастворимых витаминов - активаторов окислительного метаболизма

1.2 Теоретические основы экстракции

1.3 Водорастворимые полимеры в экстракции 25 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования, их основные характеристики

2.2 Методика проведения экстракции витаминов

2.3 Определение водорастворимых витаминов методом

УФ-спектроскопии

2.4 Определение рутина в рабочих растворах методом тонкослойной хроматографии

2.5 Спектрофотометрическое определение констант 42 устойчивости комплексов в системе витамин — полимер — вода

2.6 Метод инфракрасной спектроскопии (ИКС)

2.7 Компьютерное моделирование взаимодействий в 44 экстракционных системах

2.8 Статистическая обработка результатов 45 ЗАКОНОМЕРНОСТИ ЭКСТРАКЦИИ РУТИНА, 47 ФОЛИЕВОЙ, АСКОРБИНОВОЙ И НИКОТИНОВОЙ КИСЛОТ ОРГАНИЧЕСКИМИ РАСТВОРИТЕЛЯМИ И ВОДОРАСТВОРИМЫМИ ПОЛИМЕРАМИ

3.1 Экстракционное выделение рутина и фолиевой 47 кислоты из водно-солевых растворов гидрофильными

ГЛАВА экстрагентами

3.2 Экстракционное выделение рутина, фолиевой, аскорбиновой и никотиновой кислот из водно-солевых растворов синтетическими полимерами

3.3 Межмолекулярные взаимодействия в системах «водорастворимый полимер -водно-солевой раствор витамина»

СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ И ЭКСТРАКЦИОННОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ

ВИТАМИНОВ В МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ СИСТЕМАХ

4.1 Определение рутина, фолиевой, аскорбиновой и никотиновой кислот при совместном присутствии

4.2 Экстракционно-спектрофотометрический способ разделения и определения витаминов

ВЫВОДЫ

СПИСОК

ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертация по химии, на тему "Разделение и определение водорастворимых витаминов в экстракционных системах с органическими растворителями и полимерами поли-N-виниламидного ряда"

Водорастворимые витамины, такие как рутин, никотиновая, аскорбиновая и фолиевая кислоты являются одними из важнейших биологически активных веществ (БАВ), играющих ключевую роль в процессах окислительного метаболизма. Они незаменимы для нормального функционирования организма и находят все более широкое применение при производстве новых лекарственных средств и пищевых добавок. Именно стадия извлечения и очистки витаминов из растворов фармацевтической, пищевой и медицинской промышленности в значительной степени определяет чистоту, а, следовательно, качество и цену получаемых препаратов.

Применение в качестве экстрагентов водорастворимых полимеров поли-14- амидного ряда, обладающих малой токсичностью является одним из перспективных направлений жидкостной экстракции. Известна высокая экстракционная эффективность водорастворимых полимеров по отношению к металлам и аминокислотам, однако, в отношении водорастворимых витаминов такие сведения отсутствуют.

В ходе работы решались следующие задачи:

• Установление закономерностей экстракции рутина и фолиевой кислоты в системах спирт—водно-солевой раствор, сложный эфир-водно-солевой раствор; создание экстракционных бинарных систем на основе органических растворителей для их извлечения.

• Выявление механизма взаимодействия водорастворимых витаминов с синтетическими водорастворимыми полимерами ряда поли-Ы-винил амидов.

Показано, что по экстракционной селективности синтетические водорастворимые полимеры по отношению к никотиновой, аскорбиновой, фолиевой кислот и рутину располагаются в ряд: поли-И-винилпирролидон (ПВП) > поли-№-винилкапролактам (ПВКЛ) > поли-М-винил-Ы-метилацетамид (ПВМА). Определены характеристики процессов экстракции витаминов (коэффициент распределения вещества Э и степень извлечения Я) при различных значениях рН, типах высаливателей и соотношениях фаз.

С использованием методов ИК-спектроскопии и компьютерного моделирования предложен механизм взаимодействия в водных растворах водорастворимых витаминов (никотиновая, аскорбиновая, фолиевая кислоты, рутин) с полимерами ряда поли-К-виниламидов. Показано, что высокая эффективность данных экстракционных систем может быть обусловлена образованием ассоциатов за счет водородных связей между полимером и витамином.

Показано, что применение поли-Ы-винилкапролактама позволяет проводить безреагентную реэкстракцию витаминов за счет первоначального образования полимерного осадка, содержащего витамин и последующего его растворения.

Предложены экстракционные системы на основе водорастворимых полимеров ряда полинМ-виниламидов для разделения двухкомпонентных смесей витаминов с использованием поли-И-винилпирролидона и поли-Ы-винилацетамида и трехкомпонентных смесей с применением в качестве экстрагента поли-1Ч-винилкапролактама.

Положения, выносимые на защиту:

• Коэффициент распределения и степень извлечения водорастворимых витаминов в системах «органические растворители-водно-солевые растворы витаминов» и «полимеры ряда поли-Ы-виниламидов -водно-солевые растворы витаминов» определяются значениями pH, типами высаливателей и соотношением фаз. с

Заключение диссертации по теме "Аналитическая химия"

ВЫВОДЫ

2. Определены количественные характеристики межфазного распределения рутина, фолиевой, никотиновой и аскорбиновой кислот в экстракционных системах, содержащих ПВП, ПВКЛ и ПВМА при различных значениях рН, типах высаливателя и соотношениях фаз. Оптимизирован состав фаз и условия экстракционного выделения витаминов в водных полимерных системах, позволяющие достигать степеней извлечения более 95%. Обнаружено, что применение в качестве экстрагента водного раствора поли-Ы-винилкапролактама, проявляющего способность к термоосаждению, позволяет проводить безреагентную реэкстракцию витаминов путем нагревания раствора выше температуры фазового разделения.

4. Разработаны спектрофотометрические способы раздельного определения аскорбиновой, никотиновой, фолиевой кислот и рутина в

6 2 двойных и тройных смесях в интервале концентраций 10" - 10" л моль/дм . Предложены уравнения Фирордта для систем содержащих аскорбиновую, никотиновую и фолиевую кислоты. Погрешность определения витаминов в двухкомпонентных смесях для аскорбиновой кислоты не превышает 0,6%, для никотиновой и фолиевой кислот -7%. В трехкомпонентной системе максимальная погрешность определения никотиновой кислоты составила 10%, для фолиевой кислоты 11% и рутина 7%. С целью снижения погрешностей определения витаминов, спектры которых значительно перекрываются разработан дифференциально-спектрофотометрический способ определения компонентов бинарных смесей фолиевая кислота - рутин и рутин - никотиновая кислота. Погрешность определения для рутина не превышает 5%, для фолиевой кислоты погрешность максимально составила 4% и для никотиновой кислоты -7%.

Список источников диссертации и автореферата по химии, кандидата химических наук, Ерина, Оксана Владимировна, Воронеж

1. Колотилова А.И. Витамины: Химия, биохимия и физиологическая роль / А.И. Колотилова А.И. Л.: Изд-во Ленингр. Ун-та, 1976. - 248 с.

2. Ленинджер А. Основы биохимии: В 3 т. / А. Ленинджер. Т. 1. — М.: Мир, 1985.-365 с.

3. Горбачев В.В. Справочник: Витамины микро- и макроэлементы / В.В. Горбачев Минск: Книжный дом ; Интерпрессервис, 2002. - 544 с.4.- Биохимия: учебник для вузов / В.П. Комов и др. М.: Дрофа, 2004. - 640 с.

4. Шнайдман Л.О. Производство витаминов / Л.О. Шнайдман М.: Пищевая промышленность, 1973. 442 с.

5. Химическая энциклопедия: в 5 т. / И.Л. Кнунянц и др.. — М.: Изд-во Советская энциклопедия, 1988. — 623 с.

6. Методы анализа лекарственных веществ / Н.М. Максютина и др.. -Киев: Здоров'я, 1984.-222 с.

7. Перельман Я.М. Анализ лекарственных форм / Я.М. Перельман. Л.: Медгиз, 1961.-616 с.

8. Беликов В.Г. Фармацевтическая химия. В 2 ч.: Учебное пособие / В.Г. Беликов- 4-е изд. перераб. и доп. М.: МЕДпресс - Информ, 2007. -624с.

9. Ю.Сливкин А.И. Гликозиды в фармации: Методическое пособие / А.И. Сливкин Воронеж: Воронежский государственный университет, 2002.- 112 с.

10. П.Островский Ю. М. Экспериментальная витаминология / Ю. М.

11. Островский Минск: Наука и техника, 1980. - 550 с. 12.Куркун В. А. Сравнительное исследование содержания суммы флавоноидов и антраценпроизводных в препаратах травы зверобоя /

12. В.А. Куркун, О.Е. Правдивцева // Хим.-фарм. журнал. 2008 г. — Т. 42. - № 4. - С. 40-42.

13. Уильяме Р.Т. В кн. Биохимия фенольных соединений. М.: Мир, 1968-С. 234-258

14. Шталь Э. Хроматография в тонких слоях / Э. Шталь М. : Мир, 1965. -230 с.

15. Bleier W. Chirirdjian J. Thinlayer Chromatography of organic / W. Bieier, J. Chirirdjian // Journal Planta med. 1972. - V. 22. - P. 145-147.

16. Идентификация органических соединений / P. Шрайнер и др.. М.: Мир, 1983.-703 с.

17. Флавоноиды и оксикоричные кислоты некоторых представителей дикорастущей флоры Грузии / С.В. Дурмишидзе и др.. Тбилиси: 1981.-200 с.

18. Дейнека В.И. ВЭЖХ в исследовании флавоноидов. Определение рутина / В.И. Дейнека, A.M. Григорьев, В.М. Староверов // Хим.-фарм. журнал. 2004 г. - Т.38. - № 9. - С. 23-25.

19. Fabjan N. Rutin content in buckwheat (Fagopyrum tataricum Gaertn.) as a Source of Dietary Rutin and Quercitrin / N. Fabjan, J. Rode // Food Chem. -2003. — №51 .- P. 6452-6455.

20. Kreft I. Rutin content in buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench) food materials and products / I. Kreft, N. Fabjan, K. Yasumoto // Food Chem. № 3.-2006.-P. 508-512.

21. Государственная фармакопея издание X, М.: «Медицина», 1968. 1079 с.

22. Запорожец O.A. Определение аскорбиновой кислоты методами молекулярной спектроскопии / O.A. Запорожцев, Е.А. Крушинская // Журн. аналит. химии. 2002. - Т. 57. - № 4. - С. 343-354.

23. Фарайзаде М.А. Простой и надежный спектрофотометрический метод определения аскорбиновой кислоты в фармацевтических препаратах / М.А. Фарайзаде, C.B. Нагизаде // Журн. аналит. химии. -2003. Т. 58. - № 10. - С. 1037-1043.

24. Кулис Ю.Ю. Определение аскорбиновой кислоты анализатором в биологических средах / Ю.Ю. Кулис, A.A. Друнгилине // Журн. аналит. химии. 1990. - Т. 45. - № 10. - С. 2039-2043.

25. Дмитриенко С.Г. Сорбционно-фотометрическое определение аскорбиновой кислоты с помощью гетерополикислот, иммобилизованных на пенополиуретане / С.Г. Дмитриенко, Л.В. Гончаров, В.К. Рунов // Журн. аналит. химии. 1998. - Т. 53, № 9. -С. 914-918.

26. Марченко Д.Ю. Индикаторные трубки для определения восстановителей в растворе / Д. Ю. Марченко и др. // Журн. аналит. химии. 1997. - Т. 52. - № 12. - С. 1287.

27. Морозко С.А., Иванов В.М. Тест-методы в аналитической химии. Раздельное определение методом цветометрии / С.А. Морозко, В.М. Иванов // Журн. аналит. химии. 1997. - Т. 52. - № 8. - С. 858.

28. Слепченко Г.Б. Контроль качества биологически активных добавокiметодами вольтамперометрии. Определение витаминов Bi, В2, С, Е и кверцетина / Г.Б. Слепченко и др. // Хим.-фарм. журнал. 2005. -Т.39. - № 3. - С. 54-56.

29. Абдуллин И.Ф. Потенциометрическое определение аскорбиновой кислоты. Оценка ее вклада ее вклада в интегральную антиоксидантную способность растительного материала / И.Ф. Абдуллин и др. // Журн. аналит. химии. — 2002 — Т. 57. № 4. - С. 418-421

30. Яшин Я.И. Анализ пищевых продуктов и напитков методом высокоэффективной жидкостной и ионной хроматографии с электрохимическими детекторами / Я.И. Яшин, А.Я. Яшин // Журн. аналит. химии. 2004. - Т. 59. - № 12. - С. 1237-1243.

31. Голубицкий Г.Б. Устойчивость аскорбиновой кислоты в водных и водно-органических растворах для количественного определения / Г.Б. Голубицкий и др. // Журн. аналит. химии. 2007. - Т. 62. - № 8.-С. 823-828

32. Костарной A.B. Использование высокоэффективной жидкостной хроматографии для анализа многокомпонентных лекарственных препаратов / A.B. Костарной, Г.Б. Голубицкий, Е.М. Басова // Журн. аналит. химии. 2008. - Т. 63. - № 6. - С. 566-580

33. Шаршунова М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии / М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалец. -М.: Мир, 1980.-615 с.

34. Аксенова Э.Н. Фармацевтический анализ препаратов из группы водорастворимых витаминов современными физико-химическими методами: Автореф. Дис. . канд. фармац. наук. / Э.Н. Аксенова -М., 1989.- С. 2-6, 14-16.

35. Френкель А.В. Количественное определение витамина РР и РР-амида в спиртовом растворе методом кислотно-основного титрования / А.В. Френкель, M.JI. Калия, Н.А. Петухова // Хим.-фарм. журнал. 1991. -Т.25. — №7. - С. 82-83

36. Wang S.X. Calorimetric study and thermal analysis of crystalline nicotinic acid / S.X. Wang, Z.C. Tan, M.H. Wang // Journal Thermodynamics Anal, and Calorim. 2004. - № 1. - P. 335-342.

37. Государственная фармакопея СССР, 11-е изд., -М.: Медицина, 1990. 56 с.

38. Стачинский А.Н. Титриметрические методы определения водорастворимых витаминов в таблетках и инъекционных растворах/ А.Н. Стачинский, Т.Ю. Арчинова // Фармация. 1988. - Т.37. -№3. -С. 29-31.

39. Шлямина О.В. Кулонометрическое титрование гидрозидов и ацилгидразидов производных бензойной и изоникотиновой кислот / О.В. Шлямина, Н.А. Морозова // Журн. аналит. химии. - 2008. - Т. 63.-№4. с. 421-429.

40. Fabio R. P. A multicommuted flow system for sequential spectrophotometric determination of hydrosoluble vitamins inpharmaceutical preparations / R. P. Fabio, F. Boaventura // Anal. Chem. 2003.-№ 19.-P. 191-200.

41. Савушкин P.B. Экстракция и спектрофотометрическое определение аскорбиновой и никотиновой кислот/ Р.В. Савушкин. автореф. дис. . канд. хим. наук Воронеж. 2006. - С. 3 - 7, 11-17.

42. Ren Nai-Lin. Definition folates acids in tablets with use as an oxidizer persalfat potassium / Ren Nai-Lin, Wei Jie-Shan, Han Da-Xiong // Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory. 2004. - № 5. - P. 909-912.

43. Rodriguez-Bernaldo De Quiros A. Determination of folates in seaweeds by high-performance liquid chromatography / Rodriguez-Bernaldo De Quiros A., Castro De Ron C., Lopez-Hernandez J. // J. Chromatogr .2004. -№ 1-2.-P. 135-139.

44. Ульянова C.B. Использование физико-химических методов в анализе поливитаминных препаратов, содержащих водорастворимые витамины В1, В2, В6, С и никотинамид. / C.B. Ульянова и др. // Фармация. -1993. № 6. - С. 60-62.

45. Карцова JI.A. Одновременное определение водо- и жирорастворимых витаминов в различных режимах высокоэффективной тонкослойной хроматографии / JI.A. Карцова, и др. // Сорбционные и хроматографические процессы. 2007. - Т. 7. - № 6. - С. 909 - 916.

46. Филимонов В.Н. Хроматографическое поведение водорастворимых витаминов / В.Н. Филимонов, И.Ф. Колосова, JI.H. Балятинская // Журн. аналит. химии. 1991. - Т. 46. -№ 4 - С. 758-763.

47. Филимонов В.Н. Особенности хроматографического разделения водорастворимых витаминов в изократичной ОФ ВЭЖХ / В.Н. Филимонов, С.И. Сирицо, H.A. Макрушин // Сорбционные и хроматографические процессы. 2006. - Т.6. - № 2. - С. 191-197.

48. Филимонов В.Н. Влияние состава бинарной подвижной фазы на разделение водорастворимых витаминов в режиме ионной хроматографии / В.Н. Филимонов, С.И. Сирицо, JÏ.H. Балятинская //

49. Сорбционные и хроматографические процессы. 2004. - Т.4. - № 6. -С. 764-768.

50. Кожанова JI.A. Определение водо- и жирорастворимых витаминов в поливитаминных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / JI.A. Кожанова, Г.А. Федорова, Г.И. Барам // Журн. аналит. химии. 2002. - Т. 57. - № 1. - С. 49-54.

51. Староверов В.М. ВЭЖХ-анализ водорастворимых витаминов в составе поливитаминного сиропа «Олиговит» / В.М. Староверов, В.И. Дейнека, A.M. Григорьев, и др. // Хим.-фарм. журнал. 2004. -Т. 38. - № 3. - С. 43-46.

52. Луцнева А.И. Анализ и стандартизация водорастворимых витаминов / А.И. Луцнева, Л.Г. Маслов, Н.С. Евтушенко // Фармация. 1998. -№5.-С. 27-29.

53. Быков A.M. Лабораторный контроль водо- и жирорастворимых витаминов с помощью метода ВЭЖХ / A.M. Быков, Т.Н. Малова, Г.Н. Дударева // Аналитика Сибири и Дальнего Востока 2004, тез. докл. конф. Новосибирск, - 2004. - Т. 2. - С. 134.

54. Основы жидкостной экстракции / Г.А. Ягодин и др.. — М. : Химия, 1981.-400 с.

55. Коренман И.М. Экстракция в анализе органических веществ / И.М. Коренман. -М.: Химия, 1977. 200 с.

56. Мокшина Н.Я. Экстракция аминокислот и витаминов: монография / Н.Я. Мокшина. Воронеж: ВГТА, 2007. - 246 с.

57. Коренман И.М. Методы количественного химического анализа / И.М.Коренман. М.: Химия, 1989. - 200 с.

58. Чернова Р.К. Гидратно-сольфатный механизм в мицеллярной экстракции /Р.К. Чернова и др. // Журн. аналит. химии. № 7.— 2003.—С. 706.

59. Холькин И. А. Бинарная экстракция В Зч. Ч. 1 Химическая технология. / И.А. Холькин 2000. - №5. - С. 39-45.

60. Шкинев В.М. Экстракция неорганических ионов в водных системах на основе полиэтиленгликоля. / В.М. Шкинев, Н.П. Молочникова // X конференция по экстракции: тез. докл. конф.: Уфа, 1994.-С.149.

61. Шкинев В.М. Двухфазные водные системы на основе водорастворимых полимеров для выделения и разделения актиноидов в различных средах / В.М. Шкинев, Н.П. Молочникова, В.Ф. Мясоедов // Радиохимия. -1995. Т. 37. - № 5. - С. 385- 397.

62. Мокшина Н.Я. Некоторые закономерности экстракции аскорбиновой кислоты гидрофильными спиртами / Н.Я. Мокшина и др. // Известия вузов. Хим. и хим. технол. 2004. - Т. 47. - Вып. 10 - С. 120-122.

63. Ерина O.B. Экстракционно-фотометрическое определение рутина в водных средах / О.В. Ерина, H .Я. Мокшина, В.Ф. Селеменев, J1.C. Нечаева // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация.- 2005. №1,- С. 26-28.

64. Егуткин H.JI. Экстракция дигидрокверцетина трибутилфосфатом и сульфоксидами / H.JI. Егуткин, Т.П. Груздева, В.А. Хурматуллина // Экстракция органических соединений: тез. докл. III Междунар. конф.: Воронеж, 2005. С. 195.

65. Мокшина Н.Я. Синергизм при экстракции аскорбиновой и никотиновой кислот бинарными смесями растворителей / Н.Я. Мокшина, О.В. Ерина, O.A. Пахомова, Р.В. Савушкин // Журнал физической химии.- 2007.- Т. 81, № 12, -С. 2181-2185.

66. Вострикова О.М. Особенности экстракции витамина Bi2 п-кризолом / О.М. Вострикова, E.JI. Смольская, H.JI. Егуткин // Журн. прикладной химии. 1991.-Т. 64.-№ Ю.-С. 2202-2205.

67. Смольская E.JI. Синергентные смеси для экстракции витамина В12 из водных растворов / E.JI. Смольская, О.М. Вострикова, H.JI. Егуткин // Журн. прикладной химии. 1993. - Т. 66. - № 3. - С. 686 - 689.

68. Shaopu L., Zhuyuan Z., Hongqun L. Spectrophotometry determination of vitamin B12. in a pharmaceutical formulation using triphenylmethane acid dyes / L. Shaopu, Z. Zhuyuan, L. Hongqun // J. Pharm, and Biomed. Anal. 2002. - № 3. - P. 685-694.

69. Лутцева А.И., Маслов Л.Г. Методы контроля и стандартизации лекарственных препаратов, содержащих водорастворимые витамины /А.И. Лутцева, Л.Г. Маслов // Хим.-фарм. журнал. 2000. - № 9. - С. 30-37.

70. Бондаренко М.С. Применение трехфазной экстракционной системы для анализа биологически активных веществ / М.С. Бондаренко, В.А.

71. Франковский, Э.Т. Оганесян И Журн. аналит. химии. 1988. - Т. 43 — № 3. — С. 511 - 515.

72. Yadong Guo. Simultaneous definition riboflavinum, a nicotinic acid and nicotinamide a method of a supercritical fluid chromatography / Guo Yadong // Sepu Chinese Journal of Chromatography. 2003. — № 6. -P. 603-605.

73. Латин H.H. Получение С02-экстрактов как пример «зеленой» экстракции / Н.Н. Латин, О.Н. Стасьева, В.М. Банашек // Экстракция органических соединений: тез. докл. III Междунар. конф.: Воронеж, 2005.-С. 256.

74. Рудаков О.Б. Низкотемпературная жидкостная экстракция как способ пробоподготовки фенолов для анализа методом обращенно-фазовой ВЭЖХ / Рудаков О.Б. и др. // Журн. аналит. химии. № 2.— 2010.— С. 121-122.

75. Привалко В.П. Молекулярное строение и свойства полимеров / В.П. Привалко Ленинград : Химия, 1986. -168 с.

76. Шкинев В.М. Гибридные экстракционно- и мембранно-электрохимические методы определения элементов с использованием водорастворимых полимеров / В.М. Шкинев, Е.А. Осипова // Журн. аналит. химии.-2003.-Т. 58-№7.-С. 712-713.

77. Шляхина Ю.В. Применение водорастворимых полимеров для экстракционного извлечения ароматических аминокислот / Ю.В. Шляхина и др. // Изв. Вузов. Химия и хим. технология. 2006 - Т. 46. - № 6. - С. 20 - 22.

78. Говарикер В.Р. Полимеры. / В.Р. Говарикер М.: Наука, 1990. - 396 с.

79. Молекулярные комплексы полимеров / Б.А. Жубанова и др. // -КазССР: Наука, 1988. 172 с.

80. Шкинев В.М. Экстракция роданидных и галогенидных комплексов металлов в двухфазных водных системах полиэтиленгликоль — соль -вода / В.М. Шкинев, Т.Н. Нифантьева // Журн. аналит. химии. 1989. -№8 . - С.1368 -1373.

81. Пер-Оке Альбертсон. Разделение клеточных частиц и макромолекул / Альбертсон Пер-Оке М.: Мир, 1974. 384 с.

82. Molochnikova N.P. Aqveous Biophasic Separation / N.P. Molochnikova, and south. //Solvent Extr. Ion Exchange. -1992. Vol.10. -№ 4. - P. 697-712.

83. Myasoedov B.F. Aqveous Biophasic Separation: Biomolecules to Metals. /

84. B.F. Myasoedov, N.P. Molochnikova, V.M. Shkinev // Solvent Extr. Ion Exchange. -1993. Vol.9. - № 6. - P. 532 - 539.

85. Нифантьева Т.И. Двухфазные водные системы на основе полиэтиленгликоля и неорганических солей / Т.И. Нифантьева и др. // Журн. высокомолекул. соединения. —1989. Т. 31. - № 10. —1. C.2131-2135.

86. Цыплухина Ю.В. Экстракция а аминокислот с ароматическими заместителями синтетическими водорастворимыми полимерами / Ю.В. Цыплухина.: дис. . канд. хим. наук. Воронеж, 2006. — 140 с.

87. ЮО.Зварова Т.И. Экстракция комплексов металлов с водораствориыми реагентами в двухфазных водных системах полиэтиленгликоль соль - вода - органический реагент / Т.И. Зварова, В.М. Шкинев // Журн. аналит. химии. - 1988. -№ 1. - С.37 -44.

88. Лазурьевский Г.В. Практические работы по химии природных соединений / Г.В. Лазурьевский, И.В. Терентьеав, A.A. Шамшурин. М: Высшая школа, 1961. С. 142-145

89. Нифантьева Т.И. Экстракция гуминовых кислот в двухфазных водных полимерных системах / Т.И. Нифантьева и др. // Журн. аналит. химии. 2000. - Т. 55. - № 10. - С. 1030 - 1032.

90. Энциклопедия полимеров. / Каргин В.А. и др. М.: Советская энциклопедия, 1972. - 840 с.

91. Шкинев В.М. Водорастворимые полимеры в экстракционных и мембранных методах разделения и концентрирования / В.М. Шкинев // Аналитика и Аналитики: тез. докл. Междунар. Форум: Воронеж, 2003.-С. 122.

92. Сидельниковская Ф.П. Химия N-винилпирролидона и его полимеров / Ф.П. Сидельниковская. М.: Наука, 1990. - 150 с.

93. Horin S. The effect of added salt on the interaction between polymer and detergent in aqueous solution / S.Horin, H. Arai // Journalof Colloid and Interface Scince. 1990. - Vol. 32. - № 3. - P. 547 - 550.

94. Пилипенко A.T. Разнолигандные и разнометальные комплексы и их применение в аналитической химии / А.Т. Пилипенко, М.М. Тананайко М.: Химия, 1983. - 224 с.

95. Ю.Саввин С.Б. Модифицированные и иммобилизированные органические реагенты / С.Б. Саввин, A.B. Михайлова // Журн. аналит. химии. 1996. -Т.51. -№ 1. -С.49-56.

96. Свойства органических веществ. Справочник / A.A. Потехин и др.. Л.: Химия, 1984. - 520 с.

97. Кирш Ю.Э. Поли-М-винипирролидон и другие поли-ТМ-виниламиды /Ю.Э. Кирш-М.: Наука, 1998. -251 с.

98. Владимиров Ю.А. Фотохимия и люминесценция белков / Ю.А. Владимиров. М.: Наука, 1965. - 232 с.

99. Н.Филлипович Ю.Б. Основы биохимии / Ю.Б. Филлипович. М.: Высшая школа, 1993. - 495с.

100. Андреева Н. А. Витамины групп фолиевой кислоты / Н. А. Андреева. -М.: Наука, 1963. С. 27-32.

101. Андреева Н. А. Ферменты обмена фолиевой кислоты / Н. А. Андреева. М.: Наука, 1974. - С. 5-15.

102. Мелцер Д. Биохимия. Химические реакции в живой клетке в 3 томах / Д. Мелцер М.: Мир, 1980 - Т. 2. - с. 275

103. Девис М., Остин А., Патридж. Дж. Витамин С: Химия и биохимия / М. Девис, А. Остин, Дж. Патридж. М.: Мир, 1999. - 170 с.

104. Леутский К. М. Никотиновая кислота. Витамин РР / K.M. Леутский. Львов: Изд-во Львовского ун-та, 1980. — 156 с.

105. Мокшина Н.Я. Экстракция тирозина и фенилаланина смесью гидрофильных растворителей из водно-солевого раствора / Н.Я. Мокшина, С.И. Нифталиев, O.A. Пахомова // Изв. Вузов. Химия и хим. технология. 2005 - Т. 48. - № 1. - С. 109-111.

106. Розен A.M. Химия экстракции / A.M. Розен Новосибирск: Наука, 1984.-84 с.122.3олотов Ю.А. Экстракция в неорганическом анализе / Ю.А. Золотов М.: Химия, 1982. - 82 с.

107. Коренман Я.И. Экстракционное выделение диоксибензолов из водных сред / Я.И. Коренман, Т.Н. Ермолаева //Журн. прикл. химии. 1989.-Т. 62.-№ 1. - С.114 -117.

108. Кирш Ю.Э. Превращения поли-Ы-виншткапролактама в водно-органических смесях. / Ю.Э. Кирш и др. // Журн. физ. химии. -1996. Т.70. - № 8. - С. 1403-1407.

109. Берштейн И.Я. Спектрофотометрический анализ в органической химии / И.Я. Берштейн, Ю.Л. Каминский Л.: Химии, 1986. — 198с.

110. Шлефер Г.Л. Комплексообразование в растворах / Г.Л. Шлефер -М., Л.: Химия, 1964. 264 с.

111. Бабко А.К. Физико-химический анализ комплексных соединений в растворах / А.К. Бабко Киев: Наука, 1955. - 325 с.

112. Наканиси К. Инфракрасные спектры и строение органических соединений / К. Наканиси- М.: Мир, 1965. 219 с.

113. Беллами Л. Новые данные по ИК-спектрам сложных молекул / Л. Беллами. М.: Мир, 1971. - 318 с.

114. Казицына Л.А. Применение УФ-, ИК-, ЯМР- и масс-спектроскопии в органической химии / Л.А. Казицына, Н.Б. Куплетская- М.: Высшая школа, 1979.-240 с.

115. Углянская В. А. Инфракрасная спектроскопия ионообменных материалов / В. А. Углянская и др., Воронеж: ВГУ, 1989. - 208 с.

116. Пиментел Дж. К. Водородная связь / Дж. К. Пиментел, О. Мак-Клеллан ; Пер. с англ. М.О. Буланиной, Г.С. Денисова, Д.Н. Щепкина; Под ред. В.М. Чулановского .— М. : Мир, 1964 .— 462 с.

117. Соловьев М.Е. Компьютерная химия / М.Е. Соловьев, М.М. Соловьев М.: Солон-Пресс, 2005. - 535 с.

118. Кларк Т. Компьютерная химия / Т. Кларк М.: Мир, 1990. - 381 с.

119. Новоселов Н.П. Компьютерное моделирование взаимодействия целлобиозы с органическими растворителями / Н.П. Новоселов и др. // Журн. физ. химии. 1998. - Т.72. - № 7. - С. 1207-1212.

120. Бутырская Е.В. Интерпретация батохромного и гибсохромного сдвига колебательных частот катионообменника / Е.В. Бутырская, В.А. Шапошник, A.M. Бутырский и др. // Журн. аналит. химии. -2007.-Т. 62.-№ 10. С.1035-1039.

121. Foresman J.B., Frisch А. // Pittsburgh: Gaussian Inc., 1995.

122. Черновьянц M.C. Систематические и случайные погрешностихимического анализа : учеб. для вузов / М.С. Черновьянс. М. : ИКЦ «Академкнига», 2004. - 157 с.

123. Ерина О.В. Экстракция рутина из водно-солевых сред. / О.В. Ерина и др.// Системный анализ и управление в биомедицинских системах.- 2005.- Т. 4. №3. С. 364-366.

124. Mokshina N.Ya. Extraction and spectrophotometry deretmination of aromatic amino acids in aqueous solutions and albumins hydrolyzed albumins / N.Ya. Mokshina // Ecological Congress International Journal. -2002. Vol. 5. - № 2. - P. 1-4.

125. Коренман И.М. Экстракция органических веществ / И.М. Коренман . М.: Химия, 1997. - 200 с.

126. Ерина О.В. Экстракция рутина растворителями-гомологами / О.В. Ерина, Н.Я. Мокшина, Р.В. Савушкин // Экстракция органических соединений ЭОС-2005: III Международ, конф., Воронеж, 17-21окт. 2005г.: сборник докл. Воронеж. 2005. — С. 327

127. Мокшина Н.Я. Явление синергизма при сорбции и экстракции биологически активных веществ / Н.Я. Мокшина, В.Ф. Селеменев, Г.Ю. Орос // Сорбционные и хроматографические процессы. 2002. -Т. 2.-Вып. 2.-С. 166-174.

128. Мокшина Н.Я. Раздельное определение никотиновой кислоты и ароматических аминокислот / Н.Я. Мокшина // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. 2007. - Т. 73. - № 9. - С. 22 -24.

129. Нб.Ерина О.В. Дифференциально-спектрофотометрический способ определения витаминов в их смесях. / О.В. Ерина, В.Ю. Хохлов, В.Ф. Селеменев // Заводская лаборатория. Диагностика материалов.-Принята в печать.

130. Чарыков А.К. Математическая обработка результатов химического анализа / А.К. Чарыков Л.: Химия, 1984. - 167 с.