Синтез аналогов нейропептидов на основе L-5-окситриптофана тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ

Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени химико-технологический институт им. Д. И. Менделеева

На правах рукоппсн

АЛИ ЮССЕФ

СИНТЕЗ ДИАЛОГОВ НЕЙРОПЕПТНДОВ НА ОСНОВЕ Х.-5-0ЙСЙТРШ0ФШ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва — 1992 г.

Работа выполнена в Московском ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени химико-технологическом институте им. Д. И. Менделеева.

Научные руководители — доктор химических

Официальные оппоненты: . доктор химических наук, доцент Авраменко Г. В.; кандидат химических наук, старший научный сотрудник Скляров Л. Ю.

Ведущая организация — Всесоюзный заочный институт пищевой промышленности, г. Москва.

Защита диссертации состоится _ 1992 г. в Час. на заседании специализиро-

ванного совета Д 053.34.07 в Московском химико-технологическом институте им. Д. И. Менделеева (125190, Москва, А-190, Миусская пл., д. 9) в ауд. ^

С диссертацией можно ознакомиться в научно-инфо.рмационном центре Московского химико-технологического института им, Д. И. Менделеева.

Автореферат разослан ¿з -¿уу^э^992 п

Ученый секретарь специализированного совета

ни ^ » 1«_/ ^ С ^ V. и • ( < ¿V < 1 Ш XI IV.

ских наук, старший научный сотрудник Г. В. Попова,

Е. П. БАБЕРКИНА

I. ОЕЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одшш из важнейших открытий последних дат явилось выделение природных эндогенных веществ - энко-фаллков и эпдорфинсв. Эти соединения представляют собой подано птзды, обладающие морфиноподобной активностью. Большое научное. и практическое значение приобретает модификация энкефалинов различными соединениями как аминокислотного, так и неаминокислот-цсго характера с целью увеличения срока их действия и появления дополнительной активности.

Одя*'.м из ааг-нзйз:.« биологически активных соединений является б-окслтриптофан - аналог тирозина - который образуется такта, как и знкефадшш, в мозге человека я аашотннх и является иредсоственником веяного биогенного шина серотонина (5-гидрок-з;прга1таглине],Саротошш, как известно, ссч'динежю с разносторонняя физиологическим дзйствкем, несот в себе функции нейромедча-горэ и нейромодулятора, наруиенче обмена которого вызывает тя-талв&хв психические состояния. Энкефалины тайно мог/т быть яей-^смэдиатсрами ш .модуляторами на уровне синадтичэских связей :ояга, обеспечивающих торможэние боли.

К настоящему времени синтезированы различные аминокислотное производные 5-окситриптофана. Их высокая фармакологическая ¡ктивпость послужила предпосылкой для получения нами новых сое-'дноний, в частности,'энкефалинов, модифицированных 5-окситриц-■офаном.

Цель работы. Цель настоящей работы - синтез аналогов ■„ег^-знквфалина, модифицированных в 1-ом положении 5-окситрип-офаном [б-ОТг^-у/^^-энкефалина, рассмотрение условий их олучения и свойства.

Научная новизна и практическая значимость. Определенный нтерес представляло получение измененных аналогов адина с неполной цепью, амидных и эфирных. При синтезе анало-эв Г5-0Тг^~/£гг5-энкефалйна предполагалось рассмотреть пути к получения, свойства, подготовить на биологические испытания зобходимые образцы.

Известно большое количество синтетических аналогов энкефа-ша, есть данные- о высокой биологической активности аминокис-)тшх производных 5-окочтриптофана и 5-окситриптаыина. Нами ¡зработанц пути получения /¿¿¿-энкефалиновых аналогов, содер-

- г -

жащих в 1-ом положении 5-ОТг~р , в виде эфиров или амидов. Синтезированные нами соединения представляют собой потенциальные нейропептиды и требуют дальнейшего их всестороннего биологического изучения.

Публикации и апробация работы. По материалам диссертации депонирована I статья. Результаты исследования доложены на Всесоюзных конференциях: П Всесоюзная конференция "Химия, биохимия и фармакология производных индола" (Тбилиси, I99L), 1У Московская конференция молодых ученых по химии и химической технологии (1991).

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, посвященного синтезу и свойствам модифицированных знкефалинов, обсуждения результатов собственных исследований, экспериментальной части и выводов.

Работа изложена на страницах, содержит • таблиц, I рисунок и список литературы, включающий ссылок.

2. ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ

2.1. Синтез и свойства аналогов / ¿¿¿'-энкефатина, модифицированного в 1-ом положении / -5-ок-ситритофэном

Исходным соединением в синтезе [b-OTr^-ZfW-знкефалинов явился / Э-б-бензилокситриптофан, из которого был выделен L -изомер. Получение последнего возможно двумя путями: ферментативным гидролизом иммобилизованной или растворшой ампноацилг зы, а также ассиметрическим синтезом ¿-аминокислоты алкилирс вааием глицина в хиральном комплексе никеля (П). Оба эти методе разработаны на кафедре органической химии под руководством проу Н.Н.Суворова; Ввиду большей доступности и большего выхода целевого соединения, предпочтение отдано первому методу и вся наработка 5-окситриптофана проведена ферментативным гидролизом ами-ноацилазой сотрудниками кафедры органической химии. -Ж-Bei зилоксикарбонил-5-бензилокситриптофакШ был получен нош прям карбобэнзоксилированкем Л -б-бензилокситрштофанз при рН=9,5+] Выход соединения (I) во многом зависел от pH раствора и тщателз ности обработки реакционной массы. Максимальный выход составил cs75 %.

Для осуществления пептидного синтеза необходимо было вы-

брать защитные группировки и методы конденсации для аминокислот. Мы предпочли унифицировать защитные группы и применяли, в основном, бензилоксикарбонильную защиту, для защити аминогрупп, иногда третбутилоксикарбонилъную группу. Лля модификации ССОН-групп использовали метиловый эфир, амидную и изо-пропиламидную группировки. Введение / -5-окситрилтофана в 1-ое положение

¿ги5-эккефали.на можно было, в принципа, осуществить любым классическим методом пептидной тмил. Как наиболее применяемые, мы ранили испробовать карбодиимидныи метод, метод смешанных ангидридов и активированных эфироз.

2.1.1. Получение тетрааналогов [5-ОТгр}1-/г«5-энкефалина

Для того, чтобы полнее рассмотреть зависимость структура-свойства у завещанных аналогов -¿¿¿г5-энкефалша, нами вначале были синтезированы его укороченные аналоги в надо амида

5- ОТгр - Щ- Щ - РЛе - МН, 5- ОТгр-^Ши^и - ом

пептида Лз'А^ЛгР'Щ

тнми методгми, схема I.

Тур

( 6а ) и эфира

^ 9а ). Синтез замещенного тотра-■и^-РЬе-МЮ вели общеприня-

гг

Н-

ьЯе

а?а

22 .

1л

-ОН -ОС^М;

/V.

5а

6а.

Схема I

Н-1-

Ркг

-он И-

2.О.

ОН

- ОС Из -Мл

-А'Нг -МНх

- №

ОН

Для синтеза трипептида 2-(Жу.-Стёу-РЬе.- МНз. (5) вначале получали амид фенилаланига ;;з его у^-бензилоксикарбонил-нроизводного. При удалении бепзилоксикарбснильнсй защиты у соединения ( 2а ) каталитическим гидроганолизом и при конденсации амида фенялалачша ( 3 ) с Му. ( 4 ) получали (о).

Целевые соединения были полезны с низкими (до 20 %) выходами, их било трудно выделить в устойчивом виде из-за быстрого осмоления на воздухе. Несколько повысить выход

РНа-МНг I 5 ; удалось при использовании амида фенилаланина, полученного из метилового эфира фенилаланина.

Амид 'фенилаланина должен быть свежеприготовленный. Реакцию конденсации с - ( 4) вели карбодишкдным методом в

растворе, при избытке ДЦГК и температуре 30 °С, с выходом ( 5 ) менее 30 %. Каталитический гццрогеполиз амида в штанолэ проходил медленно, более 72 час, с выходом (5 а) менее 10 %. Конденсацию бензилоксикарбоншь-Б-бэнзилокситрштофана ( I ) с трилептидом ~ РЬг- ( 5а ) вели карбодиимид-

кытл методом б 5цзтокктр;;лб,мотодо;.; смешанных ангидридив, а также методом активированных эфнров через понтахлорфениловый эфир. Заметного преимущества ни один метод не показал. Для амида,

полученного ДЦГК методом, выход составил а 5 %. Попытка отщепления бензилоксикар-бонильной и бензильной групп у соединения ( 6 ) каталитически:,! гвдрогвнолизом также оказалась малоэффективной. В чистом виде соединение ( 6а ) было выделено с выходом менее 2 %, но по данным ПМР, оно все т содержало следы продукта неполного гидрогенолиза ( ¿Г м.д. 4.8 СН2, 7.4 РЬ-Вг£ ). Синтез тетрапептида

5-отгр - - - ОМе

( 9а ) вели общепринятыми метода-

ми, схема

Схема 2

Тгп ' Г

в£е

ш

й

' н-

2

■ОН

Н-М-осьсе^

7

он

«а.

9

Лг

Ми

Леи.

Н-

-ОН

■ ои

У—ОСИз

—ощ

— ОЩ

—ссН} _оси.

В синтезе трипептида 2- -Ziu -ОМе ( 8 ) вна_

чала поучали метиловый эфир лейцина ( 7 ). Метиловый эфир лей-идна ( 7 ) конденсировали карбодишлиднш методом с 2- Qi'^-( 4 ). Ввиду слабой растворимости карбоксильного компонента з органических растворителях, раакцшэ вели в отсутствии раствори-то лл в пасте, с добавкой пиридина - выход трипептида составил Si65 %. Бонзилокоикарбогалъную группу удаляли каталитически.! гидрогэнолизом в метанола с выходом ( 8а ) — 60 %.

Конденсацию бензилоксикарйонил-Б-бензилокситриптофана (I) с тркпоптпдсм G2y - Gl^ - ¿-Ни - О.Чв ( 8 а) вели карбодиимидным методом в ацзтонитрилэ, а такта катодом активированных эфиров через пентахлорфениловыи эфир и методом смешанных ангидридов. 2-Г>-( BzOUirp-GZu-fcPy -Zcu-OA'a (9) получен во всех катодах примерно с одинаковым выходом сх. 65 %.

Очистку соединения ( 9 ) осуществляли колоночной хроматографией и переосаждением. Каталитический гидрогенолиз z-ъ-аг C)Orii"p'-QCy- ОМв{ у ) приводил к одновре-

менному удалению бгнзилоксикарбонильной и бензильной групп, хотя и требовал повышенных (до 60 °С) температур и большого количества свежего катализатора (РгУ-чернь) Выход составил =¿35 %, Таким образом, при получении укороченных аналогов -¿£и-энкефа-лина, содержащих в первом положении б-окситриитофан стало очевидно, что введение амидной группы в фенилалашш приводит к осложнению реакции каталитического гидрогенолиза и конденсации трипептида с бензилоксикарбонил-б-бензшюкситрцптофаном ( I ).

Ввиду крайне низких выходов 5-ОТr-p-- Pht -С 6а ) и неоднородности конечного продукта синтез его оказался в плане наработки неэффективным.

Данные по выходам тетрааналогов /^энкесралина и промежуточным пептидам приведены в табл.1.

2.1.2. Получение метилового эфира [S-GTt-p]^- Zeu-ш-кефалина

Пентааналог /га5-эш;ефалнна 5-ОТrp-Gty-Gdu-phe. -Ltii-OM& ( I За ) получен но схема;/! 3 и 4. С (7

Таблица I

№ пп Соединение и соед Метод получения Выход % Однородность Ж

1. 5 лдгк =i30 £jiA)=0.65

2. (Gfyb - Phe - 5а Кат г/г на ря/С в метаболе, 5 ос а ю Неоднороден

3. 2-(Giu)z -leu - ОН е. 8 ДЦГК в от- — 55 %Г)=0.75

<7 сутствие

растворите-

ля, 0 °С

4, (Gtyk - ¿ьи- ОН г 8а Кат г/г на 60 Б) =0.15

с pet'/и в мета-коле , 50 °С

5. 6 ДЦГК в аце- if 5 Неоднороден

тонитриле, 30 ОС

&. z-5ibie)QTtf-(№fh-jleum 9 ДЦГК, МСА МАЭ г; 65 После хрома-тографическо-

го разделения и переосаждения Й/А)=0.7

7, S- OTrp- (-1 en-ОН е. 9а Кат. г/г на (pei чернь) ci 35 После поре-осаждения

в метаноле, ]?j(B)=0.15 •

избыток ка-

тализатора,

__е. 60 °с

Для синтеза пентапептида ¿е.и-ОМ&

(13а) были приманены бензилоксикарбоаильная или третбутилокси-

' карбонильная защиты для аминогрупп, бензильная - для гидроксила 5-гидрокситриптофана, метальная группа - для защиты СООН-группы остатка лейцина, а также применяли тотовые пентахлорфениловый эфир г-фенилаланина или пентахлорфениловый эфир Вос-глицина

производства Я&анаб , Венгрия. В первом случае никакого преимущества метода активированных эфиров перед ДЦ1К отмечено не было, выход дипоптида 2- РЬг-¿Си.- ОМе (ц) бил примерно одинаков и составил 60-58 %. В ДЦГК методе использование гидрохло-ркда метилового эфира лейцина ( 7 ) требовало большого количества основания (в данном случае пиридина) для нейтрализации соли и более полного протекания реакции. -г-\ л ,, т, >/* н тп

*9лтнгы :л)СКСгг :(а/})£0 Ъ)Сс<//9М- аыии. </:/; /; в/С ИСс, :(СН>Ъ СО :№<. Л / г)[с//Со: Си'се

Тп

?

еёи

гЛ

6&

-aw н—

-ОС&Щ

Схема 3

Р'пе 1е.и.

-гг

Ъа.

13

г-

-оцН-

10

,Оа

И_

CU

/лг

— ОН i- DCUS

— 0С#3

— схщ

- ОЩ

-ощ

-ОЩ

Тгр

-.0'

4

oil

Ge,

-ОН м -

14

15

УЗл

9

те

Схема 4 1&и

-ОН 2-

-DH Н-

fo

Н-

■ОН

Н-

1/

1fa

-ОМ 0СХ3

-ОСHj

■ ОСHi

- от

Применение пентахлорфенилового эфира Вос-глицина позволило с легкостью вести конденсацию с ¿ей- ОЛ/а (1Та) методом активированных эфиров. Удаление Вос-защиты тgkeq проходило без осложнений насыщенным раствором хлористого водорода в органических растворителях, например, эфире или хлороЬорко.

¡::;нссть применить

-диглпшна ила его лентахлослзклшз-

вого эфира, есчствокно болза желательно, хотя и при такой схеме 2+2: Z-ßty-ßfy (4) + Pht - ¿ей- ОМе (неявных хсровщтотв штода ДЦГК иди активированных эфнров тжз иэ бто откачено. При постадийнсм присоединении шинокаслэт в синтезе тэтрапелтмда Z-Phe-leu-O^YZ)» его выход также б оуит из превышал 30-35 %.

Свободный тетралепткд (12а) получали каталитическим гзд-рогенолизоы на /С катализаторе в метаноле. Конденсация £ -5-бецзилокситр:што$ана (I) с тетрапептидом (12а) осущост-влнлп методами ДЦПС,смешанных ангидридов, активированных зфп-ров, схема 3= ДЦГК метод бьш более приемлем. Через 3S час. реакционного времени послз хроматографического разделения и па-реосааденпл , выделяли mmm^mv^Z-slBitjOIrp-lßf^-pne-leu-OMe (13) с выходом 40 схема 3. Принцип минимальных ззнщт и унификация защитных групп и позволили сократить количества стадий синтеза по схеме 3+2, схема 4.

Мы пршенили полученную нами гриэтиламмонийяую соль даглицина (14) в конденсации с Z -5-банзилокситрклтофаном (I) по методу смешанных ангидридов. Трудность заключалась в том, что триэтиламмонийуая соль дкглицина практически не растворима в органических растворителях, а /^-б-бензилокситриптофан легко образовывал стойкий смешанный ангидрид с изобутиловым эфиром хлор-угольной кислоты.

Начальную стадии реакции вели при(-5-10)°С, избытке три-атиламина и строго расчетном количестве изобутилоэого эфира хлоругольной кислоты в этилацетате.

Триэтиламмонийную соль глицил-глицина не выделяли, а добавляли к реакционной массе суспензию диглкцика в смеси триэтил-ачина к этилацетата. Так как реакция протекает в готерофазной системе, добавление необходимо производить маленькими порциями на холоду (-5 °С) по мерз растворения образующегося пенгапепти-да, осуществляя постоянный хроматографический контроль.

После добавления всего количества суспензии и образования трипептида (по данным ТСХ), температуру реакционной массы можно поднять до комнатной, но требуется еще многочасовая выдержка реакционной массы смеси, так как незамедлительная обработка реакционной массы влечет за собой разрушение амщщой связи пожду 2.-5-бензилокситриптофаном к диглацшюы и резко снижает выход

делового еоедяпзюш. Тртитптпд 0!гп -

(15) получали о выходом СО По даншг« И'.'Р-спзг.трссг.ог.ш! соединение (15) содорл;ало слэдп аризтилашна (—5 £). Поэтому дая дольно!^:?!: яептцдкоЗ гсопдзнстцпи з хлсрофор'.'-э идя з эттчгацатато раствор трппоптпда 2-5(&2£)07гр~№у- (15) многократно прометала подкисленным всдпшт раствором, оерессахдали, знсуга-валя над !',у в вакуукв.

Синтез по схэиэ 3+3 осущзстБлшл тгопдэнсашгай соодпнвнпл (15) ЩГО методом с дкпвптлдои РЬс ОМ& (На), получен-

ном, как указывалось вкзз акало-'

гов. Сравнительные выходи э зсзискксотл от методов конденсации и условий реакций приведены в табл.2

Таблица 2

Получение 2-5-( &зВ )0Тгр-- Раг-J.su- X

X = -Мл для соединения (13). 1 = (/АППРго для соединения

(13)

Ы; |пл Соединение Jp Метод no-L_ff£22ÍJT"T!L_ Выход Однородность

I. *5(&ít)QTrp\G£u-G£u-. Phz-Uit-üka ú схема 4 T3 Д1,1л MCA 40 25 После хроглатог-ра/лг-юского раз деления и пера-осаждения • ф(А)=0.7 /КА) =0.7 до хроматографи-ческого разделения, неоднороден

2 -S{5?e) Olrp - Gfo- Gb Phe-Áeu-ачс " « схема 5 13 Ш ДЦК 40 i 45 После переосаждения ¿у(А)=0.7 А) =0.7 после хроглатографиче-ского разделения и переосая-дения

2. 3. ?. -5-(S2?JD1?D ' Gfy - Ph&'lcit.- 'mPro * 15 18 MCA ДОК 60 50 К В) =0.8 после промывания и первое ажде ния,еле-дн ТЭА /?|(А)=0.89 пос-лб хроматогра-фического разделения и перз--ОСа>";ЦНИЯ

Использований для всэх аминокислот банзияоксикарбонильной и бензильыой-защктных групп позволило унифицировать и метода отщепления. В данном случае также применяли каталитический гид-рогенолиз на Рd -катализаторах, в основном в метиловом спирте, смесях метилового и изопропшювого спиртов с добавкой уксусной кислоты или I экв HCl. Чтобы повысить выход свободного пентапеп-твда, требуется постоянно вводить з реакцию свежие порции катализатора, повышать температуру реакционной массы. Выход свободного пентапепткда в виде гидрохлорида 5-fflrp-(Gfy)¡-Fhs-Leu-0Ve (13а) составил 15 %.

Г -__ чТ / R

2.1.3. Получение ашздпого пентааналога [ й-игкру-4еи."-эа-кефалина

.5

Амидный пентааналог [b-QTypJ^-ZeuЕ по схеме 5.

-энхвфашша получали

Trp GÍíj

Phe

Схема 5 leи.

-он и-

dt

н-

ш

14

/5

//

//д

Н-Í-

2-

-OHZ-

-СНН-

М-

-DH

Н-

16

1?

1Ш

-ОН .ОСHi -OCH¿ -ОН -МУ, Pro WPro -МП ¡Pro _ МИ! Pro

toy

Для синтеза'амидиого производного выбрал! схему 3+2, как более эффективную. В качестве амидного компонента был взят изо-пропилампн, во-первых, ввиду ого большей стабильности по сравнению, например,с аыипо-, ыстиламино-, отиламино-группами, во-вторых, мы принял!! л о внимание данные по биологической активности различных амидов энкефалинов.

2 -^енилаланид-лешхин-изопрошшамид (I7) был получен ме-

тодом смешанных ангидридов. Тралепгад

(15) оыл конденсирован с дклептадом Phe • ¿tu - A'HiPrc1

Ятг*)

(после каталитического гидригенолиза последнего) ДЦГК методом. Выход пантапептида составил 50 % посла хроматографического разделения и пореосалдешя.

Если каталитическое отцепленкэ .¿-защиты у Z- Ph£ -/в-ci. -изопропиламида (17)' проходил без осложнений, то на заключи -тельной стадии получения свободного пентапептида-аналога ✓¿¿¡¿/'-энкзфалина (18а) такяе обнаружились трудности.

Очевидно, одновременное удаление % и ,$э£-защит с фрагмента 5-окситрнптофана в пентапептиде осложнено. Ранее нами был проведен подобный гвдрогенолиз на более коротких пептидах 5-окситр:штофана и его различных аминокислотных производных. Тем не менее, в случав более длинных цепей, даже у тетра-анало-гоз эта реакция услоглилась, т.е. наблюдали неполный гидрогено-лиз блокирующих групп. ,

По данным ЯМР и достаточно легко отщеплялась Z -блок11рота(8.н.д!Ь 6в8Щ,Ш1 7.S-?.5ß)i: только после вве-

дения многократного избытка катализатора, повышения температуры и введения эквивалента хлористого водорода были достигнуты по-локитольные результаты и удалось практически полностью отщепить Й и £>гв -группы.

Серьезнее влияние оказывала и природа растворителя на течение этих реакций. Так проведение каталитическоТо гидрогеноли-за в изопропиловом спирте, смеси изо-пропилового спирта и метилового спирта (3:1) было не эффективно. В смеси изопропнловый спирт н метиловый сп.:рт (2:7) гидрогонолиз протекал долго и неполно.В 3-х компонентной смеси метиловый спирт и изопропилоаый спирт и уксусная кислота (7:2:2), по данным ТСХ-, в реакционной смеси всегда прксутстзоват продукт'неполного отщепления защит. И только после прибавления эквивалента HCl гщфогенолиз заканчивался и можно было выделять свободный пентапептид в виде его соли с выходом (I8a) ¿z 20

Условия получения fß-GT>-f>fl аналогов /^¿¿5-знке-

фалина приведены в табл.3.

Для подтверждения структуры синтезированных соединений нами были рассмотрены их спектральные характеристики: УФ, Ж, ЯМР (% и ^С) в отдельных случаях масс-спектры. Ультрафиолетовые спектры представляют интерес как качественная'оценка при введении 2 -5-бензилокситриптофана в пептидную цепь. Действительно все пептидные производные 5-бензилокснтриптофана:

Таблица 3

Каталитический гидрогенолиз ¿б-ОТГу^-пептидов -

i^j Соединение К соед, Растворитель °С Катализатор Выход, % Однородность

1. 2. 3. 4. 5- югр-ееу-еер-Phe-Мь 5-OTrp- SCu- Ш-leiL- DMe / с и 5-отry-£-2<j- Phe- / ей - от 5-0Ггр-Pfy-Sfa-Phe -¿еи-А'ШРгс 6а 9а 13а 18а МеОН Me ОН Ыэ0Н:Ас0Н+1 экв НС (2:7) изо-Рго-ОИ'-МШ (3:1) изо- Pro- Ш МеОН: изо- Pro-ОН ■' АсОН (7:2:2) + I экв HCI 20 50 60 I 50-60 10 20 Р d/Z избыток Рс/-черкь избыток Pd/'C избыток Р^-черкь избыток « 2 ~35 —15 sIO »20 Неоднороден ¿/Б)40.25 Однороден в виде Ак.шта после первое издания . Неоднороден в виде гид— рехлорида ду(Б;=0.2 ^(Б)=0.25

(6),:%-(tu-Zeu- OMe(g)t a,-sfoípl)?-Éfy-fity-Ph -¿su - ОН а (te), 2-sf¿2-ÍJ0Trp- ee¿t - 6¿tf- Phe -Xeu -M4¡Pro

(18) BK9DT четко вирзг.енное поглощение о максимумом ¿ =286-288 нм, присущее индолыюму фрагменту.

Дашшо ИК спектров синтезированных пептидов подтверждают их строение и находятся в соответствии с литературными данными. Для производных 5-СТ»у> соединения (6,9,9а ДЗДЗа,15Д8,18а) характо- ■ ристдчесг.ке полосы поглощения приведены в табл.4.

Спектр л НМР % (400 Гц в CHCI,) соединений' (9,9а Д5ДЗДЗа, 18,18а) подтверждают строение, отнесение сигналов доя всех указанных соединений проведено с учетом инкрементов химических сдвигов электроотрицательных заместителей и мультиплетностп сигналов. Присутствие изопропилъной группы при^атоме -/Al-СО, соединение (18) и (18а).подтверждается наличием в спектре характерного по мульти-шгзтности сигнала (ОКТЕТ). Химический сдвиг протона (-СЙ) изопро-пильной группы такте является характерным для-изопрошшамвдов.

Константы спин-спинового взаимодействия (КССБ) .для протонов пндольного фрагмента ¿йэляются характерными для аналогичных трех-спиновых систем ABC, Jj6a 7а= 8.7 Гц, yJ4a 6з= 2.4 Пд для (18,13)

и Оба,7а= 8-4 "JabW- 2 ^ ДО* (ISaílSa).

Присутствие COOGHg, соединение (13,13а), подтверждается наличием синглэта при сГ 3.67 м.д. для (13) л ¿Гз.61 м.д. для (13а). Отнесение протонов для (13,13а) проведено тагам как и в случае (18) и (18а).

Для соединений (Г3а,18а) протон гидроксигрушщ характеризуется сигналом при $6.07 м.д., не меняет своего химического сдвига как при повышении температуры, так и разбавлении раствора в CDCIg. Эти данные свидетельствуют о наличии внутримолекулярной водородной связи в молекулах (13аД8а). .

Данные ЯМР-спектроскопии для аминокислотных последовательностей приведены в табл.5.

Спектры ЯМР - 13С также не противоречат предполагаемым'' структурам.

В масс-спектрах соединений (9а,13а,18а) не наблюдали образования пика молекулярного иона. Фрагментация всех пептидов идет по общепринятым для аминокислотных последовательностей схемам и так-~е подтверждает структуру синтезированного соединения. Фрагментация б-окситриптофановои части проходит по охекэ, характерной для фргшгаптецип рвдаотыготшк »роизиоднкх б-оксптотггаичнп.

Таблица 4

рп Соединение . Й ЗО0Д. Частота валентных колебаний, 9 см-I

G=0 CGtVH c-o, OH ЖН, Ф ЖН2, /н3

I. Fhe-Щ 6 T700 1670, 1560 C-0 1240 № 3380, ЖЕ? 3320, ^ 3340 две полось

о к,. И-фЦСГгр-В^-С^- 9 1735 1660, C-0 1235 Д'Н 3340-

Хеи-Ма 1700 1540 -3400

3. 9a 1740 1670, -0H 3600 /СН 3330-

1705 1Б55 ■ о -3400 ¿'Но 2800-^ -3000 ацетат

4. Phe-Xeu-M& 13 1735 1700 1670 1560 C-0 1240 ^Н 3340

5. S-OTrp-G^-Sfy-Phi- I3a 1740 1670, -0H- 3500 № 3340

Леи- от 1705 1550 . уиир ■ /Но 3340, 3320

Phe-yteu.- Am!Pro два полосы

6. 18 1700 1670, 1560 C-0 1250 № 3320-3340

7. I8a J. 1660, -0H 3500 Л'Н 3340

leu-Mjf/Pro 1560 ушр № 2800+ -5-3000

Диф,

3340,

^ 3320

две полосы

S. 15 1700 1650, C-0 1240 УК 3340

1560 -OH 3550

Данные элементного анализа также не противоречат предлагаемому строению указанных соединений.

На биологические испытания подготовлен кзопропиламид--/-Л9-р

¿е*. . Г

ЯМ?-Саектры ( <5* , м.д.^Н

Таблица 5

1»

Ьш

Соединение

¡соед.

í р а г м 9 а

Р.1В

¡другие ¡группы

■ ÍVrp-Gty-Gcu -Leu OMtî

9а

. I ä-QTrp -e¿y - ¡3¿y -Phe -Leu - ОМв

i

fr-

S-OTrp -Gfy-Gfy -Phe -Leu-шарю

I3a

I8a

4.44 CH 3.15 GHo

6.86.6.91, ß.65,6.SB /ИЗД./ 7.2-7.5 /NH,. NH иадГ

4.44 CH 3.15 CHg

6.53.5.92, 6.63,7.02 /инд/,-7.2+7.53 /NHn, NH ИЦД/

4.45 CH 3.17 CEj

6.96,6.91, 6.-66,6.99 /ивд./ 7,2-7.5■

nhq, NH

8.03,8.10 Mil 3.09,3.82 CHg

8.02-8.10 NH 3.07,3.83 CHo

8.05-8.12 NH 3.10,3.84 CH2

3.07 NH 3.69 Ш,

4.35 CH 16. 1.54 CHo 1.85 CH" I 0.&ЭД.0Г CH,

¡8.05 'JE 4.50 CH 3.07CH2

7.0-7.2

/ pft /

8.10 NH 4.48 CH

05 OH

8.8 NH 4.32 CH 1.48 CHo 1.Э9 CR4 1.0,1.0?. сн3

8.07 Uli 4.35 CH

3.05 (Tri, 1.50 CHU 7.03- 1.89 СБ*

o-s?(CH

■7.29 / ph /

I.0I

3.61 OCHg 6.09 CH

8.12 NH, /NH-pro / 4.00 CH /им (рпз/

1.13,1.15

/мн ¡pro 6.07 ОН

I

- в -

выводы

1. На основе РЛ-5-бензилокситриптофана - рацемата фермэн-' тативным гидролизом растворимой аминоацилазой наработан бензил-

оксикарбояил-5-бензшгокситриптофан (I), проведено его карбобенро-!нсилироваше для дальнейшего синтеза 5-окоитркптофаноЕЫХ аналогов /¿и -энкефалина.

2. Синтезированы укороченные аналоги .¿«г-энкефатша; тет-рашптиды 5-ОТгу>-Ё1у-(г£у- РЬе-МН* (6а), Ъ-С^^-^-х-си-ОМа (9а). Показано, что по-за низких выходов ^ЭД тетрапеи-тида, соединение (6а), в прзпаратпзном плане интереса на представляет. Метиловый эфир тетралептида (9а), напротив, достаточно доступен,'его можно получить обычякг,:и методой пептидной конденсации.

3. Синтезированы пентапептиды £5-€Т^х-аналогиж?4'^5~знкефа-лина з виде метилового эфира и изопропиламида

(13а),' (18а) с выходами («15 %),

(—20 %), соответственно. Показана возможность примензнпя методов смешанных ангидридов, карбодиимидногс, активированных зфирсв для ■ введения бензилоксикарбонил-5-бензилокситрштофана в пептидную цепь. Рассмотрены преимущества и ограничения различных схем пептидного построения цепи, выбрана схема 3+2,как болеэ благоприятная. ,

4. Показано, что при получении [5-ОТгур/-/ац^-ааалогов энке-фаликов, возможна унификации защитных групп (Я ,&г£), методов конденсации, методов удаления защит (каталитический гидрогенолиз). Одновременный каталитический гидрогенолиз лГ и Вг£ групп с остатка 5-окситридтофана затруднен и зависит от даны пептидной цепи, природа растворителя, температуры, количества катализатора,

: Основное содержание диссертации изложено в следующих работах;

1. Али Юссеф, Попова Г.В. Синтез 5-0Тгр-/ек: -энкафалинов./'/Статья, деп.¿>4750-391 от 24.12.91,1991. 0.27-ЗЗ.Москва,ВИНИТИ.

2. Али Юссеф, Попова Г.В. Синтез аналогов /^-энкефалина.//Тезисы докладов ТУ Московской конференции молодых ученых по химии и химической технологии (с участием иностранных специалистов) "ШТ-1У". Мопква-1991. С ЛОЗ.

3. Али Юссеф, Г.ч.Попова и др. Синтез 5-окситриптофилпептидов- ' аналогов нейропептидов'.//Тезисы докладов П Всесоюзной конференции "Химия,биохимия и фармакология производных индола". Тоилиои-19ЭТ. С. 34. , -