Синтез и исследование новых тиоаналогов 3,4-дигидро-2-алкокси-6-бензил-4-оксопиримидинов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.03 ВАК РФ
|
Брунилина, Лейла Липпаритовна
АВТОР
|
||||
|
кандидата химических наук
УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ
|
||||
|
Волгоград
МЕСТО ЗАЩИТЫ
|
||||
|
2010
ГОД ЗАЩИТЫ
|
|
02.00.03
КОД ВАК РФ
|
||
|
|
||||
00^61190« __
Брунилина Лейла Липпаритовна
Синтез и исследование новых тиоаналогов 3,4-дигидро-2-алкокси-6-бензил-4-оксопиримидинов
02.00.03 - Органическая химия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук
2 8 ОПТ 2010
Волгоград-2010
004611908
Работа выполнена на кафедре «Аналитическая, физическая химия и физико-химия полимеров» Волгоградского государственного технического университета.
Защита состоится «15» октября 2010 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.028.01 при Волгоградском государственном техническом университете по адресу: 400131, г. Волгоград, пр. Ленина 28, ауд.209.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Волгоградского государственного технического университета.
Автореферат разослан «14» сентября 2010 г.
Научный руководитель
член-корреспондент РАН, доктор химических наук, профессор Новаков Иван Александрович.
Официальные оппоненты:
доктор химических наук, профессор, Злотин Сергей Григорьевич, доктор химических наук, профессор, Брель Анатолий Кузьмич.
Ведущая организация
Химический факультет Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова.
Ученый секретарь диссертационного совета
Дрябина С.С.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ*
Актуальность темы. 3,4-Дигидро-2-алкокси-6-бензил-4-оксопирими-дины (ДАБО) впервые были синтезированы и охарактеризованы как новый класс ингибиторов ретровирусной репликации группой итальянских исследователей, под руководством профессора М. Artico в 1993 году. Этому открытию предшествовал цикл работ исследовательской группы профессора M. Botta, направленный на создание новых аналогов противобактериального препарата -триметоприма (2,4-диамино-5-(3,4,5-триметоксибензил)пиримидина), ингибитора дегидрофолатредуктазы. Работы основывались, в значительной степени, на впервые открытой этой группой исследователей реакции циклоконденсации Р-кетоэфиров с получаемой in situ О-метилизомочевиной.
Таким образом, был синтезирован, так называемый, изотриметоприм -структурный изомер триметоприма, содержащий 3,4,5-триметоксибензильный радикал в положении 6 гетероциклической системы пиримидина. Это вещество, равно как и ряд его биоизостерических аналогов не проявили выраженной антибактериальной активности, однако, были исследованы на предмет противовирусного действия. Основанием к этому послужило структурное сходство полученных соединений и ранее полученного T. Miyasaka и соавторами 6-(фенилсульфанил)ациклотимидина. Для последнего вещества, к тому времени, уже была установлена противовирусная активность в отношении ВИЧ-1.
В результате этих исследований, было установлено наличие умеренно выраженной анти-ВИЧ-1 активности у 4-амино-2-метокси-6-(4-метоксибензил)пиримидина и 2-бутокси-6-(4-метоксибензил)пиримидин-4(3//)-она, что и послужило началом масштабных исследований ряда производных последнего соединения. В результате были получены новые кислород, серу и азотсодержащие аналоги этого вещества.
Производные ряда ДАБО, содержащие гомоалкильный заместитель при экзоциклическом гетероатоме изучены достаточно хорошо, что, в частности, относится и к взаимосвязи их химической структуры и противовирусного действия.
В то же время, в значительно меньшей степени исследованы соответствующие производные, содержащие гетероцепной фрагмент при экзоцикличе-
' В обсуждении результатов принимали активное участие д.х.н., профессор Орлинсон Б. С. и к.фарм.н., доцент Навроцкий М. Б..
ском гетероатоме, взамен гомоалкильного или гомоциклоалкильного. Несмотря на это, имеющиеся сообщения о высокой противовирусной активности 5-[(метилсульфанил)метил]замещенных производных ряда 5-ДАБО, обосновывают актуальность изучения особенностей синтеза такого рода веществ, наряду со сравнительной оценкой их фармакологической активности. На основании вышеизложенного целью настоящей работы является выявление закономерностей синтеза новых функциональных производных 2-(алкилсульфанил)пиримидин-4(3//)-онов и взаимосвязи «химическая структура - анти-ВИЧ-1 активность» в ряду полученных веществ. Для достижения поставленной цели были сформулированы и решены следующие задачи:
1. Направленное конструирование новых высокоактивных антивирусных соединений на основе производных 2-{[(алкил-сульфанил)алкил]сульфанил}- и 2- {[(арилсульфанил)алкил]сульфанил} -5-алкил-6-(арилалкил)пиримидин-4(ЗЯ)-онов.
2. Разработка нового способа синтеза алкилзамещенных эфиров 4-арил-З-оксобутановой кислоты, на основе соответствующих 2-арилуксусных кислот.
3. Изучение условий проведения конденсации алкилированных производных эфиров 4-арил-З-оксобутановых кислот с тиомочевиной.
4. Исследование взаимодействия полученных производных 5-алкил-6-(1-арилалкил)-2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1//)-она с а- и р-галоидалкилсульфидами.
5. Сравнительная оценка противовирусных свойств полученных производных 2-{[(алкилсульфанил)алкил]сульфанил}- и 2-{[(арилсульфанил)алкил] сульфанил} -5 -алкил-6-(арилалкил)пиримидин-4(3#)-онов и выявление зависимости структура - анти-ВИЧ-1 активность.
Научная новизна. Впервые показано, что в зависимости от химической природы исходного галоидалкилсульфида и реакционной среды, взаимодействие галоидалкилсульфидов с производными 2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4( 1 Я)-она протекает как региоселективное алкилирование по экзоциклическому атому серы, или как конкурентное £-моноалкилирование, 5Д1-, 5Д3-, или 5,0-диалкилирование, что позволило установить основные закономерности взаимодействия а- и (3-галоидалкилсульфидов с производными 2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1#)-она.
Установлено, что в случае алифатических а-галоидметилсульфидов проведение реакции в полярном протонном растворителе приводит к
сольволизу алкилирующего агента и регенерации исходного производного 2-тиоксо-2,3 -дигидропиримидин-4( 1 #)-она.
В отличие от ранее опубликованных (F. Bordwell, et al., 1957) данных о предпочтительном мономолекулярном замещении галогена в [(хлорме-тил)сульфанил]аренах, нами показано преобладание бимолекулярного механизма в случае взаимодействия этих соединений с 2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4( 1 /У)-онами и их металлическими солями.
Показано, что замещения в пара-положении ароматического ядра F- и МеО-группой в [(хлорметил)сульфанил]аренах, практически не оказывает влияние на направление и качественный состав продуктов их реакции с 2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1Я)-онами.
Практическая значимость работы. Предложен новый способ получения алкиловых эфиров 4-арил-З-оксобутановой кислоты, содержащих разветвленный алкильный радикал в положении 2 углеводородной цепи. Предложенный способ основывается на ацилировании хелатных форм магниевых енолятов моноэфиров алкилмалоновых кислот с последующим гидролизом и декарбоксилированием полученных интермедиатов синтеза. В результате удается получать целевые продукты с практически количественным выходом и высокой чистотой, без дополнительной очистки.
Получен ряд новых производных ряда 5-ДАБО, индивидуальность которых подтверждена методами ТСХ, ВЭТСХ, ВЭЖХ, а структура - данными элементного анализа, ПМР-спектроскопии и масс-спектрометрии.
Впервые показано, что полученные производные обладают выраженной анти-ВИЧ-1 активностью в наномолярном диапазоне концентраций.
Установлено, что усилению и расширению спектра противовирусной активности полученных веществ, способствует введение 3,5-диметилбензильного радикала в положение 6 пиримидинового гетероцикла, наряду с переходом от производных 2-тиотимина к производным 5-изопропил-2-тиоурацила.
Апробация работы. Полученные результаты докладывались на трех научных конференциях: 1st Turkish-Russian Joint Meeting on Organic and Medicinal Chemistry (Antalya (Турция), 14-17 октября 2009 г.), X международный семинар по магнитному резонансу (спектроскопия, томография и экология) (Ростов-на-Дону, 2-7 марта 2010 г.), Химия и медицина: VIII всероссийская конференция с международным участием (Уфа, 6-8 апреля 2010 г.).
Публикация результатов. По материалам диссертации опубликовано 2 статьи в изданиях, включенных в перечень ВАК, 4 тезиса научных докладов и получено положительное решение по заявке на патент РФ.
Объем и структура работы. Диссертация построена традиционно и состоит из введения, обзора литературы, посвященного производным 3,4-дигидро-2-алкокси-6-бензил-4-оксопиримидина, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка литературы, включающего 169 наименований. Работа изложена на 133 страницах машинописного текста, включая 14 таблиц.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Синтез этиловых эфиров 2-алкил-4-арил-3-оксобутановых кислот и их конденсация с тиомочевиной
1.1. Синтез этиловых эфиров 2-алкил-4-арил-3-оксобутановых кислот
Синтез новых тиоаналогов 3,4-дигидро-2-алксокси-6-бензил-4-оксопиримидинов (ДАБО), возможен при разработке эффективных способов получения ключевых полупродуктов для построения 5-алкил-6-(арилметил)пиримидин-4(3#)-онового остова - этиловых эфиров 2-алкил-4-арил-3-оксобутановых кислот. Последние вещества были выбраны из ряда 10 этиловых эфиров 2-алкил-4-арил-3-оксобутановых кислот, содержащие в своей структуре 2-тиенильный, 2,6-дихлор-, 2-фтор-б-хлор- и 3,5-диметилфенильный радикалы:
Где: Я = 2,6-С12 (II), 2-С1-6-Р (III), 3,5-Ме2 (IV); Я1 = Ме (а), Е1 (Ь), г-Рг (с).
Для синтеза р-кетоэфира (I а) был использован цинкорганический синтез Блэйза - модифицированная процедура описанная в литературе (М. В. Иашгог-
1а
П-ГУ а-с
ку, е! а!., 2008):
r~ CN
,_/ MeCH(Br)C(Q)OEt / Zn ^S THF
Me
» ^^y^-COOEt HCI - H20 O NHZnBr 1
COOEf
V VI 34%
Продукт был получен с невысоким выходом (34%), что связано со значительным осмолением в ходе кислотного гидролиза интермедиата синтеза. Последний процесс, в значительной степени, связан со способностью тиофенового гетероцикла подвергаться осмолению в кислой среде.
Для получения соединений II-IVa-с нами был разработан новый способ синтеза, являющийся модификацией описанного ранее метода (R.E. Ireland, J.A. Marshal, 1959), заключающийся в ацилировании магниевых хелатов моноэфи-ров алкилмалоновых кислот хлорангидридами соответствующих арилуксусных кислот (VII-IX), с последующим кислотным гидролизом - декарбоксилирова-нием интермедиатов синтеза:
соон
/У
РС1,
PhMe
^COCl
а
COOEt
II, III b,c; IV a-c
VII-IX X-XII
Где: R= 3,5-Me2; R1 = Me, Et, i-Pr; R = 2,6-Cl2, 2-C1-6-F; R1 = Et, z-Pr.
В случае синтеза (3-кетоэфиров На и Illa, в качестве ацилирующих агентов были использованы имидазолиды 2,6-дихлор- и 2-фтор-6-хлорфенилуксусных кислот (XIII, XIV), соответственно:
J4 „i
EtO^ ^----О
. ---- ^
СООН
N^1
•N
kv О
R
XIII, XIV
мк
THF
COOEt
THF
VII, IX Где: R = 2,6-Cl2,2-C1-6-F.
Исходные магниевые хелаты были получены in situ, путем обработки, соответствующих моноэфиров (XV-XVII) BuMgCl или ¡-PrMgBr:
R1
R4 ____ AlkMgHal EtC4 jf 0
}- COOEt
HOOC THF II
Mg
Синтез моноэфиров (XV-XVII) осуществлялся исходя из диэфиров (XVIII-XX), в соответствии с модификацией известного метода (М. Freund, 1884):
r1 КОН R1 нс1 R1
EtOOCT^COOEt ЕЮН КОО(ЛсООЕ1 HOOcAcOOEt
XVIII-XX XV-XVII
Индивидуальность и чистота всех полученных веществ была подтверждена данными ВЭТСХ, ВЭЖХ, а структура - данными элементного анализа, ПМР-спектроскопии и масс-спектрометрии.
В таблице 1 суммированы значения выхода и некоторые физико-химические свойства для вновь полученных веществ.
Таблица 1 - Физико-химические свойства ß-кетоэфиров I а, П-IV а-с
О COOEt
R2-/ V
Соединение R2 R1 Брутто-формула Выход, % т °с / КИП) ^ ' мм. рт. ст. ТПЛ) °С (растворитель для кристаллизации)
1а C4H3S Ме C11H14O3S 34 128-131/2 Масло
IIa 2,6-С12С6Н3 Ме Ci3Hi4Cl203 90 - 98-99 (гексан)
IIb 2,6-С12С6Н3 Et С,4Н16С1203 -100 154-157/0.6 Масло
II с 2,6-С12С6Н3 г'-Рг С15Н18С120з 96 - 66-68 (гексан)
III а 2-Cl-6-FC6H3 Ме C13H14C1F03 90 125-128/1 Масло
III b 2-Cl-6-FC6H3 Et C14H16C1F03 -100 135-138/1 Масло
III с 2-CI-6-FQH3 г-Рг C15H18C1F03 95 - 50-51.5 (гексан)
IV а 3,5-Ме2С6Н3 Ме C15H20O3 94 138-140/1 Масло
IV b 3,5-Ме2С6Н3 Et С16Н220з 96 150-152/1 Масло
IV с 3,5-Ме2С6Н3 г'-Рг с,7н24о3 86 157-160/1 Масло
1.2. Синтез производных 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1.Н)-она
Синтез 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1//)-онов (XXI а, XXII а-с1, ХШ-ХХ1У а-с) - исходных соединений для получения новых тиоаналогов ДАБО, был выполнен путем конденсации соответствующих р-кетоэфиров (I а, П-1У а-с) с (НгЫ^СБ, в присутствии ИаОЕ^ЕЮН, по известному методу (К. Оапе1, е1 а1., 1995):
О
к1 СООЕ1 (Н^СБ АсОН
ШжТаОН Ц^
Н
I а, П-1У а-с XXI а, XXII а-с1, ХШ-ХХ1У а-с
Где: Я1 = Ме (а), Е1 (Ь), г-Рг (с), Н (с!); Я2 = С4Н38 (I), 2,6-С12С6Н3 (II), 2-С1-6-РС6Н3 (III), 3,5-Ме2С6Н3 (IV).
Целевые продукты были получены с умеренным и удовлетворительным выходом. Это объясняется накоплением в системе щелочи в ходе процесса конденсации. Таким образом, основному процессу, согласно литературным данным, сопутствует щелочной гидролиз исходного р-кетоэфира, наряду с его расщеплением по Хунсдиккеру, а также процесс дезацилирования под действием присутствующего в системе этоксида натрия.
Индивидуальность и чистота всех полученных веществ была подтверждена данными ВЭТСХ, ВЭЖХ, а структура - данными элементного анализа, ПМР-спектроскопии и масс-спектрометрии.
Сведения о выходе и физико-химических свойствах полученных производных 2-тиоурацила суммированы в таблице 2.
ОС
Таблица 2 - Физико-химические свойства производных 5-алкил-б-(арилметил)-2-тиоурацила XXI а, ХХП-ХХ1У а-с
О
я;
ш
Т| пл
н
Соединение К1 Я2 Брутто-фориула Выход, % Тпл> °с (растворитель для кристаллизации)
XXI а Ме СюНю^ОБг 58 236-237.5 (АС0Н-Н20)
XXII а Ме 2,6-С12С6Н3 С12Н10ОС12Ы2О8 79 268-270 (ЕЮН)
XXIIЪ Ег 2,6-С12СбНз С13Нп0С12К205 81 272-274 (АсОН)
XXII с ¡-Рг 2,6-С12С6Н3 СиНнОСЬ^ОЗ 31 266,5-267,5 (МеСЫ)
XXIII а Ме 2-С1-6-РС6Н3 СиНцОС^Ов 84 243-244 (ЕЮН)
XXIIIЬ Е1 2-С1-6-РС6Н3 СцНкОСадОв 31 228-230 (МеСЫ)
XXIII с г-Рг 2-С1-6-РС6Н3 СнНнОСадОЗ 32 240-242 (МеСК)
XXIV а Ме 3,5-Ме2С6Н3 С,4Н160М208 48 270-271 (МеСЫ)
XXIV Ь Е1 3,5-Ме2С6Н3 С15Н180Ы208 41 218-220 (МеСЛ)
XXIV с /-Рг 3,5-Ме2С6Н3 С16Н20ОМ2О8 31 183-185 (МеСЫ)
2. Взаимодействие 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоурацилов с а- и 0-галоидалкилсульфидами
Производные 2-тиоурацила неоднозначно взаимодействуют с различными алкилирующими агентами. Реакция с галоидалкилсульфидами является относительно малоисследованной, так как ее проведение описано лишь для Ме8СН2С1 и Е18СН2С1 в среде безводного ДМФА в присутствии К2С03. В этой связи, нами было изучено взаимодействие различных производных 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоурацила с аллил-БСНгСГ (XXV) и Ме8СН2С1 (XXVI), Ме8СН2СН2С1 (XXVII), а также - 4-РС6Н48СН2С1 (XXVIII), РЬ8СН2С1 (XXIX) и 4-МеОСбНф8СН2С1 (XXX) в различных системах. Реакция проводилась в соответствии с четырьмя различными методами:
Метод А - в системе К2СОз - ДМФА при комнатной температуре.
Метод В - в той же системе и в тех же условиях, за исключением предварительного нагревания смеси исходного 2-тиоурацила, К2С03 и ДМФА при 90-100°С в течение 1 часа (образование калиевой соли исходного 2-тиоурацила).
Метод С - в среде безводного ДМФА, при комнатной температуре.
Метод D - в системе КОН - EtOH.
Региоселективность процесса определялась по выходу чистых продуктов З-моноалкилирования. Необходимые для проведения синтеза алкилирующие агенты, были получены из коммерческих источников (MeSCH2Cl, MeSCH2CH2Cl), либо - синтезированы в соответствии с модификацией метода Беме (Н. Böhme, 1936), путем хлорметилирования аллил-SH, 4-FC6H4SH, PhSH и 4-MeOC6H4SH.
2.1. Алкилирование 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоурацилов аллил-8СН2С1
и MeSCH2Cl
Процесс S-алкилирования проводился в соответствии с общим уравнением:
н
XXI а, XXII а-а, ХХШ-ХХ1У а-с XXXI а, ХХХП-ХХХ1У а-с, XXXV а, ХХХУ1а, с
Где: II = С4Н38 (XXXI), 2,6-С12С6Н3 (XXXII, XXXV), 2-С1-6-РС6Н3 (XXXIII, XXXVI), 3,5-Ме2С6Н3 (ХХУ1У); Я1 = Ме (а), Е1 (Ь), г-Рг (с), Н (ф; Я2 = Ме (ХХХ1-ХХХ1У), аллил- (XXXV, XXXVI).
В результате, было установлено, что относительной региоселективности процесса удается добиться при проведении реакции с 10%-ным избытком алки-лирующего агента, в ДМФА в присутствии К2С03. Полная конверсия исходного производного пиримидина в отсутствие К2С03, достигалась лишь при применении 100%-ного избытка алкилирующего агента. Проведение реакции в среде спиртовой щелочи приводила к полному сольволизу алкилирующего агента. В результате были выделены исходные производные 2-тиоурацила. Сведения о выходе целевых продуктов Я-моноалкилирования и методах их синтеза, приведены в таблице 3.
Таблица 3 - Метод синтеза и выход новых производных 2-{[(аллилсульфанил)-метил]сульфанил}- и 2-{[(метилсульфанил)метил]-сульфанил}-6-(арилметил)пиримидин-4(ЗЯ)-онЬв
О
Соединение к Я1 И2 Брутто-формула Выход, % (метод синтеза) т °г * пл? ^ (растворитель для кристаллизации)1
ХХХ1а С4Н38 Ме Ме СцН^гОвз 51 (В) 155-156 (А)
ХХХПа 2.б-С12С6Н3 Ме Ме СиНиа^ОБ, 53 (А) 232-235 (в)
ХХХПЬ 2,6-С12С6Н3 Е1 Ме С15Н16С12Ы2082 53 (А) 196-198 (в)
ХХХПс 2,6-С12С6Н3 ;-Рг Ме С16Н18С12К2082 44 (А) 203-205 (в)
ХХХШа 2-С1-6-РС6Н3 Ме Ме СиНиСИ^С^ 52 (А) 195-197 (О)
ХХХШЬ 2-С1-6-БСбНз Е1 Ме С|5Н16С1РК2082 52 (А) 153-155 (О
ХХХШс 2-С1-6-РС6Н3 1-Рг Ме С16Н18С1РН2082 43 (А) 165-167 (О
ХХХ1Уа 3,5-Ме2С6Н3 Ме Ме С1бН20Х2О52 26 (А), 32 (В), 43 (С) 152-153 (А)
ХХХГУЪ 3,5-Ме2С6Нэ Et Ме С17Н22М2082 59 (В) 175-176 (А)
ХХХГ/с 3,5-Ме2С6Нз г-Рг Ме С18Н24К2082 25 (В) 124-126 (Е)
хххуа 2,6-С12С6Н3 Н АН С15Н,4С12К2082 58 (В) 162.5-163.5 (Ю
XXXVI а 2-С1-6-РС6Н3 Ме АН С16Н16СШН2082 40 (В) 152-154.5 (А)
XXXVI с 2-С1-6-РС6Н3 г-Рг АН С18Н20С1РК2О82 36 (В) 162-165 0?)
' Растворитель для кристаллизации: А - с-СбНи, В - МеСЫ, С - ЕЮН, Б - ЕЮН - Н20, Е - С6Н|4, И - С6Ни - РЬМе, в - МеСЫ - ТНК.
2.2. Алкилирование 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоурацилов метил(2-
Из литературных источников известно, что Ме8СН2СН2С1 в незначительной степени склонен к мономолекулярному обмену галогена. Это связано с тем, что для соединения не характерно образование стабильного катиона при анио-ноидном отрыве хлора. В то же время, вицинальное расположение метилсуль-фанильной группы и атома хлора в молекуле, предрасполагает к наличию ан-химерного содействия в реакции бимолекулярного обмена галогена.
Получение целевых 2-{[2-(метисульфанил)этил]сульфанил}пиримидин-4(\Н)-онов описывается следующим уравнением:
Где: Я = СДЪБ (XXI, XXXVII), 2,6-С12С6Н3 (XXII, XXXVIII), 2-С1-6-РС6Н3 (XXIII, XXXIX), 3,5-Ме2С6Н3 (XXIV, ХХХХ); Я1 = Ме (а), Ег (Ь), г-Рг (с).
В данном случае, максимальный выход продуктов моноалкилирования по атому серы был, достигнут в случае проведения реакции в присутствии спиртовой щелочи, где согласно литературным данным наиболее характерно бимолекулярное нуклеофильное замещение. В то же время, проведение той же самой реакции в среде безводного ДМФА, в присутствии К2С03, сопровождалось существенным снижением выхода продуктов ^-моноалкилирования, в пользу образования полизамещенных продуктов. При проведении реакции в отсутствие К2С03, в среде ДМФА, алкилирования не наблюдалось.
Сведения о выходе целевых продуктов ^-моноалкилирования и методах их синтеза, приведены в таблице 4.
хлорэтил)сульфидом
о
о
Н
XXI а, ХХП-ХХР/ а-с
XXXVII а, XXXVIII-XXXX а-с
Таблица 4 - Метод синтеза и выход новых 5-алкил-6-(2,6-дигалобензил)-2-{[2-(метилсулъфанил)этил]сульфанил}пиримидин-4(ЗЯ)-онов
Соединение R R1 Брутто-формула Выход, % (метод синтеза) (растворитель для кристаллизации)2
XXXVII a C4H3S Me c„h!6n2os3 25 (В) 147-148,5 (А)
XXXVIII a 2,6-Cl2C6H3 Me c15h16ci2n2os2 97 (О) 189-190(0)
XXXVIII b 2,6-Cl2C6H3 Et c16h,sc12n2os2 35 (В) 203-205 (В)
XXXVIII с 2,6-С12С6Н3 2-Pr c17h19ci2n2os2 22 (В) 193-194 (А)
XXXIX a 2-ci-6-FQH3 Me c15h16cifn2os2 99 (Б) 187-188 (Б)
XXXIX b 2-Cl-6-FC6H3 Et C16Hi8C1FN2OS2 72 (Б) 170-173 (А)
XXXIX с 2-Cl-6-FC6H3 /-Pr C,7H)9C]FN2OS2 16 (Ъ) 165-166 (А)
XXXXa 3,5-Me2C6H3 Me c,7h22n2os2 32 (В), 74 (О) 153-154(А)
XXXXb 3,5-Me2C6H3 Et c18h24n2os2 33 (В) 149-150 (А)
XXXXc 3,5-Ме2СбН3 /-Pr cj9h26n2os2 35 (В) 106-107 (Е)
2.3. Алкилирование 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоурацилов арил(хлорметил)сульфидами
Наиболее нетривиально протекает реакция 5-алкилирования производных 2-тиоурацила арил(хлорметил)сульфидами, которая может быть записана следующим общим уравнением:
о О
H
XXI a, XXII-XXIV а-с XXXXI a, XXXXII-L а-с
Где: R = C4H3S (XXXXI), 2,6-С12С6Н3 (XXXXII, XXXXV, XXXXVIII), 2-С1-6-FC6H3 (XXXXIII, XXXXVI, XXXXIX), 3,5-Ме2С6Н3 (XXXXIV, XXXXVII, L); R1
Растворитель для кристаллизации: А - с-СбН^, В - MeCN, С - EtOH, D - EtOH - Н2О, Е - С6Н,4, F - С6Нн - PhMe, G - MeCN - THF.
= Ме (а), Е1 (Ь), 1-Рг (с); Я2 = Р (ХХХХ11-ХХХХ1У), Н (ХХХХ1, ХХХХУ-ХХХХУИ), МеО (ХХХХУШ-Ь).
В ходе проведенных экспериментов было показано, что наиболее высокий выход продуктов 5-моноалкилирования достигается в случае проведения реакции в среде спиртовой щелочи. Далее, выход снижается при проведении реакции в чистом ДМФА или в ДМФА в присутствии К2С03, без нагревания. Наиболее низкий выход продуктов £-моноалкилирования наблюдается при проведении синтеза в безводном ДМФА в присутствии К2С03, с предварительным нагреванием реакционной массы. Таким образом, арид(хлорметил)сульфиды объединяют в себе характерные черты, как алифатических хлорметилсульфидов, так и метил(2-хлорэтил)сульфида. Как и в случае последнего экипирующего агента высокий выход целевых продуктов получается при проведении реакции в среде спиртовой щелочи, а наиболее низкий - в безводном ДМФА в присутствии К2С03, с предварительным нагреванием реакционной массы. В то же время, как и в случае с МеБСН2С1, хороший выход целевых продуктов получается при проведении реакции в ДМФА в отсутствие К2СО3 с большим избытком алкилирующего агента, а также в системе К2С03 -ДМФА, без предварительного нагревания.
Сведения о выходе целевых продуктов ¿'-моноалкилирования и методах их синтеза, приведены в таблице 5.
Таблица 5 - Метод синтеза и выход новых производных 5-алкил-6-(арилметил)-2-{[(арилсульфанил)метил]сульфанил}пиримидин-4(ЗД)-онов
Соединение R R1 R2 Брутто-формула Выход, % (метод синтеза) Тлл, "С (растворитель для кристаллизации)5
XXXXIa C4H3S Me H C17HI6N2OS3 14 (В), 51 (С), 53 (Г» 161-163 (В)
XXXXIIa 2,6-Cl2C6H3 Me F Ci^CIJFNJOSÎ 70 (Е>) 187-188(С)
XXXXIIb 2,6-Cl2C6H3 Et F C20H17C12FN2OS2 31 (А) 165-166 (В)
Растворитель для кристаллизации: А - с-СбНп, В - MeCN, С - ЕЮН, D - EtOH - Н20, Е - С6Н,4, F - С6Нм - PhMe, G - MeCN - THF.
Продолжение таблицы S
Соединение R R1 R2 Брутто-формула Выход, % (метод синтеза) Тпл, °С (растворитель для кристаллизации)
XXXXIIc 2,6-Cl2CsH3 г-Рг F C2,Hl9Cl2FN2OS2 26 (A) 198-200 (F)
XXXXIIIa 2-Cl-6-FC6H3 Me F C19HI5C1F2N20S2 61 (D) 169-170 (С)
ХХХХШЪ 2-Cl-6-FC6H3 Et F C20HI7C1F2N2OS2 28 (A) 129-130 (A)
XXXXIIIc 2-Cl-6-FC6H3 j'-Pr F C21H19C1F2N20S2 53 (A) 175-177 (A)
XXXXIVa 3,5-Me2C6H3 Me F C2iH2iFN20S2 47 (D) 168-169 (В)
XXXXIVb 3,5-Me2C6H3 Et F c22h23fn2os2 50 (D) 148-149 (В)
XXXXIVc 3,5-Me2C6H3 г'-Рг F C23H25FN2OS2 46 (A) 114-115 (A)
XXXXVa 2,6-с12сбн3 Me h Ci9H16C12N20S2 68 (D) 196-197 (С)
XXXXVb 2,6-С12С6Н3 Et h C20H18C12N2OS2 30 (A) 168-169 (В)
XXXXVc 2,6-С12С6Н3 ¿-Pr h c21h20c12n2os2 47 (A) 200-201 (А)
XXXXVIa 2-Cl-6-FC6H3 Me h c19h16cifn2os2 64 (D) 186-187,5 (В)
XXXXVIb 2-Cl-6-FC6H3 Et h C2ûHi8C1FN20S2 50 (A), 61 (D) 179,5-181 (В)
XXXXVIc 2-Cl-6-FC6H3 /-pr h C2)H20C1FN2OS2 42 (A), 54 (D) 201-202 (А)
XXXXVIIa 3,5-Me2C6H3 Me h c21h22n2os2 49 (A), 58 (D) 169-170 (В)
XXXXVIIb 3,5-Me2C6H3 Et h c22h24n2os2 56 (D) 150,5-151,5 (В)
XXXXVIIc 3,5-Me2C6H3 г'-Рг H c23h26n2os2 48 (D) 124-125(А)
XXXXVIIIa 2,6-С12СбН3 Me MeO c20h!8ci2n2o2s2 64 (D) 221-222 (С)
XXXXVIIIb 2,6-С12СбН3 Et MeO c21h20ci2n2o2s2 27 (A) 168-170(А)
XXXXVIIIc 2,6-С12С6Н3 ¡'-Pr MeO c22h22ci2n2o2s2 28 (A) 168-169 (А)
XXXXIXa 2-Cl-6-FC6H3 Me MeO c2qh18cifn2o2s2 61 (D) 210,5-212 (С)
XXXXIXb 2-Cl-6-FC6H3 Et MeO c21h20cifn2o2s2 58 (A) 181,5-183 (В)
XXXXIXc 2-Cl-6-FC6H3 /-pr MeO c22h22cifn2o2s2 54 (A) 125-126,5 (А)
La 3,5-Ме2С6Нз Me MeO c22h24n2o2s2 53 (D) 175-176 (С)
Lb 3,5-Ме2С6Н3 Et MeO c23h26n2o2s2 59 (D) 157-158,5 (С)
Le 3,5-Ме2С«Н3 г-Рг MeO c24h28n2o2s2 40 (A) 128-130 (Е)
Полученные данные свидетельствуют о том, что изменение условий проведения реакции для арил(хлорметил)сульфидов возможно приводит к преобладанию бимолекулярного механизма в случае взаимодействия этих соединений с 2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1#)-онами и их металлическими солями. Таким образом, для этих алкилирующих агентов в зависимости от условий реализуются как бимолекулярный, так и мономолекулярный (Б. Вогс1\уе11, е1 а1., 1957) механизмы обмена атома хлора, причем в предложенных условиях механизм бимолекулярного замещения является доминирующим.
Интересно отметить, что введение заместителя в ид/м-положение ароматического ядра по отношению к сульфидной сере в арил(хлорметил)сульфидах метокси-группы или фтора, практически не влияет на выход целевых продуктов 5-моноалкилирования в выбранном ряду.
Индивидуальность и чистота всех полученных веществ была подтверждена данными ВЭТСХ, ВЭЖХ, а структура - данными элементного анализа, ПМР-спектроскопии и масс-спектрометрии.
Отнесения ЯМР-'Н-спектров некоторых полученных новых производных 2-{[(алкилсульфанил)алкил]сульфанил}- и 2-{[(арилсульфанил)алкил]сульфа-нил}-5-алкил-6-(арилалкил)лиримидин-4(3#)-онов приведены в таблице 6.
Таблица 6 - Данные ЯМР-'Н-спектрального некоторых новых тиоанало-гов 3,4-дигидро-2-алкокси-6-бензил-4-оксопиримидинов
О
Соединение И К1 Ъ ЯМР-'Н-спектр, 5, м.д., J (Гц) (растворитель)
XXXIV а 3,5-Ме2С6Н3 Ме БМе 2.02-2.04 (м, ЗН, СНз (пиримидин)), 2.0Е-2.11 (м, ЗН, 8СНз), 2.20-2.22 (м, 6Н, СНз (Аг)), 3.77-3.78 (м, 2Н, СНг (бензил)), 4.244.27 (м, 2Н, 8СНг8), 6.80 (с, ЗН, С2'4'6Н (Аг)), 11.64 (с, 1Н, М3Н) (СБС13)
Продолжение таблицы 6
Соединение я К1 Ъ ЯМР-'Н-спектр, 5, м.д., 3 (Гц) (растворитель)
ХХХУШЬ 2,6-С12С6Н3 Ег СНгБМе 1.09-1.17 (м, ЗН, СН2СНз), 1-94 (с, ЗН, 8СН3), 2.15-2.25 (м, 2Н, СНгСНгБСНз), 2.51-2.66 (м, 2Н, СНгСНз), 2.74-2.80 (м, 2Н, 8СН2СН2), 4.18 (с, 2Н, СНг (бензил)), 7.08 (т, 1=8.12 Гц, 1Н, С4Н (Аг, бензил)), 7.25 (д, 1=8.12 Гц, 2Н, С2,5Н (Аг, бензил)), 13.59 (уш.с, 1Н, К3Н) (СС14)
ХХХХШс 2-С1-6-РС6Нз г-Рг 8СбН4Р 1.31 (д, 1=6.84 Гц, 6Н, СН(СНз)2), 3.15 (кв, 1=6.84 Гц, 1Н, СН(СН3)2), 4.08 (с, 2Н, СНз (бензил)), 4.10 (с, 2Н, БСНгБ), 6.87-6.97 (м, ЗН, С4Н (Аг, бензил), С2,6Н (Аг, фенил)), ■7.08-7.16 (м, 2Н, С3'5Н (Аг, бензил)), 7.237.28 (м, 2Н, С3'5Н (Аг, фенил)), 12.48 (уш. с, 1Н, И3Н) (СЙСЬ)
ХХХХУЬ 2,6-С12С6Н3 Ег 8С6Н5 1.02-1.07 (м, ЗН, СН2СНз), 2.49-2.54 (м, 2Н, СН2СН3), 4.18 (с, 2Н, СНо (бензил)), 4.30 (м, 2Н, 8СНг8), 7.08-7.17 (ЗН, м), 7.20-7.27 (ЗН, м), 7.37-7.47 (2Н, м), 12.55 (уш.с, 1Н, Х3Н) (СС14)
ХХХХ1ХС 2-С1-6- РС6Н3 г'-Рг 8С6Н4(МеО) 1.31 (д, J=6.84 Гц, 6Н, СН(СН3)2), 3.15 (кв, 1=6.84 Гц, 1Н, СН(СН3)2), 3.72 (с, ЗН, ОСНз), 4.06 (с, 4Н, СНз (бензил), 5СН28), 6.74 (д, 1=8.55 Гц, 2Н, С3,5Н (Ат, фенил)), 6.92-6.98 (м, 1Н, С4Н (Аг, бензил)), 7.107.25 (м, 4Н, С3,5Н (Аг, бензил), С2,,5Н (Аг, фенил)) (СБС13)
3.
Биологическая активность новых тиоаналогов ДАБО
3.1. Цитотоксичность и противовирусная активность в отношении дикого штамма ВИЧ-1 и клинически значимых мутантных штаммов ВИЧ-1
В ходе выполнения синтетической работы, был получен ряд новых тиоаналогов ДАБО, из которых некоторые соединения, к настоящему моменту, уже прошли биологические исследования4.
Противовирусная активность этих соединений была исследована на двух моделях: на колониях клеток МТ-4, зараженных вирусом, а также - изолированных ревертазах ВИЧ-1. Вновь синтезированные тиоаналоги ДАБО были также исследованы на предмет противовирусной активности относительно набора клинически значимых мутантов ВИЧ-1 (K103N, Y181C, и Y188L). В ходе исследований была выполнена оценка цитотоксичности полученных соединений, в соответствии с ранее описанным методом (М. Armand-Ugon, et al., 2005). Для проведения этих исследований были использованы дикий штамм ВИЧ-1 NL4-3, полученный по программе NIH AIDS Reagent от Национальных Институтов Здоровья (США), а также - мутантные штаммы ВИЧ-1, полученные от Medical research Council Centralized Facility for AIDS Reagents (Херфордшир, Англия). В качестве стандартов сравнения были использованы широко применяемые в клинике анти-ВИЧ-1 агенты - ифавиренц и невирапин.
Для всех изученных соединений были установлены следующие значения: ЭК;0 - концентрация вещества, необходимая для 50%-ного подавления цитопа-тических эффектов ВИЧ-1 в зараженной колонии клеток; ЦК50 - концентрация вещества, вызывающая гибель 50% незараженных клеток; ИС - индекс селективности, величина, характеризующая отношение ЦК50 к ЭК50.
Для объективной оценки спектра противовирусной активности полученных веществ, было рассчитано изменение порога чувствительности (при переходе от дикого к мутантному штамму ВИЧ-1), выраженное через фактор резистентности (ФР). Последняя величина, характеризует отношение ЭК50 для клинически значимого мутантного штамма ВИЧ-1 к ЭК50 для дикого штамма ВИЧ-1 NL4-3. Полученные данные суммированы в таблице 7.
4 Автор выражает глубокую признательность A. Mai, М.Artico, D. Rotili (Universita degli Stadi di Roma «La Sapi-enza», Italy), I. Clotet-Codina, J. A. Este (Retrovirology Laboratory IrsiCaixa, Badalona, Spain), G. Sbardella (Universita degli Studi di Salerno, Italy), G. Maga (Insituto di Genética Molecolare IGM-CNR, Pavia, Italy) за организацию и проведение биологических исследований.
Таблица 7 - Противовирусная активность и цитотоксичность в отношении дикого штамма ВИЧ-1 №4-3 и в отношении клинически значимых му-тактных штаммов ВИЧ-1 новых производных 5-ДАБО, обладающих наиболее выраженной активностью
Вещество Структура Дикий штамм ВИЧ-1 N1,4-3 Мутантный штамм ВИЧ-1 Неза раженная культура клеток МТ-4
У181С У188Ь KШN
- 5 п у - 2 ФР „ ч «п -Г ФР - § «Л ФР цк50, мкг/мл
ХХХХа Ме О ДМУУ 0,07 0,82 12 19,11 285 19,42 290 >25
ХХХХс Ме О Л, '-уЧи 0,01 0,19 16 1,65 142 3,34 288 >25
ХХХХУПс Ме О А '-р-гЛ« 0,02 0,30 20 0,52 34 3,00 197 >25
Невирапин ^ н % 0,09 >1 >11 >1 >11 >11 >11 >1
Ифави-ренц т о 0,001 >1 >1000 0,27 270 >1000 820 >1
Исходя из данных таблицы видно, что, соединения ХХХХа, ХХХХс и ХХХХУПс обладают значительно более выгодным профилем резистентности. Уровень изменения порога чувствительности (при переходе от дикого к му-тантным штаммам ВИЧ-1) для этих веществ, имеет несомненные преимущества перед таковым для Ифавиренца. В особенности, в этом отношении, следует отметить вещество ХХХХУПс. Кроме этого, важно отметить, что эти вещества
превосходят один из основных, применяемых в клинике антй-ВИЧ-1 агентов -Невирапин в 1.3-9 раз.
3.2. Закономерности структура - анти-ВИЧ-1 активность на основе выявления противовирусных свойств функциональных производных 2-(алкилсульфанил)пирнмидин-4(3#)-онов
Влияние заместителя при атоме серы. Анализ полученных данных показал, что наибольшую анти-ВИЧ-1 активность в отношении дикого штамма вируса N1,4-3 веществам сообщает наличие 2-(метилсульфанил)этильной группы при атоме серы. Эти вещества проявили более выраженную анти-ВИЧ-1 активность, по сравнению с соответствующими (метилсульфанил)метильными аналогами.
Следует отметить, что, согласно ранее полученным данным, противовирусная активность в отношении дикого штамма ВИЧ-1 возрастает примерно в 2 раза при переходе от 8-(метилсульфанил)метил-замещенных производных, к соответствующим этильным аналогам. В случае региоизомерных 2-(метилсульфанил)этильных производных этот переход приводит к более выраженному росту противовирусной.
Что касается веществ, содержащих при атоме серы (арилсульфа-нил)метильную группу, их активность, в отличие от карбонильных аналогов, как правило заметно ниже. 4-Фторзамещенные производные, как и 4-метоксизамещенные аналоги проявили близкий уровень активности к незамещенным аналогам.
Влияние замещения ароматического ядра С6-бензильного радикала.
В отличие от других, описанных ранее производных 5-ДАБО, в случае изученных веществ соединения, содержащие 3,5-диметилбензильный радикал при Сб-пиримидинового гетероцикла проявили сопоставимый или более высокий уровень активности, в сравнении с 2,6-дигалогензамещенными производными. При этом разница в активности 2,6-дихлор- и 2-фтор-б-хлорбензил-замещенных
аналогов была незначительна.
ч
Влияние заместителя в положении 5 пирмидинового гетероцикла.
Влияние заместителя в положении 5 пиримидинового гетероцикла на активность полученных производных Б-ДАБО было неоднозначным. В случае 8-[2-(метилсульфанил)этил]-2-тиоурацилов и Б - [(алилсульфан ил)мети л]-2 -
тиоурацила, С5-метильные аналоги оказывались более активными, чем соответствующие производные, содержащие этил или изопропил в положении 5 пири-мидинового гетеродикла.
В то же время, в случае 8-[(метилсулфанил)метил]-2-тиоурацилов, переход от 5-метил-замещенных производных к 5-изопропил-замещенным аналогам, как правило, сопровождался ростом противовирусной активности. Аналогичная ситуация наблюдалась и в случае 8-[(фенилсульфанил)метил]-6-(3,5-диметилбензил)-2-тиоурацилов. В отличие от этих соединений, производные 5-[(арилсульфанил)метил]-6-(2,6-дигалогенбензил)-2-тиоурацююв, содержащие этил или изопропил в положении 5 пиримидинового гетероцикла, как правило, были менее активны, чем соответствующие производные 2-тиотимина,
ВЫВОДЫ
1. Впервые предложен способ региоселективного 8-моноалкилирования 5-алкил-б-(арилметил)-2-тиоксо-2,3-дигидропиримидн-4(1//)-онов галоидалкилсульфидами, что позволило получить 51 новый тиоаналог 3,4-дигидро-2-алкокси-6-бензил-4-оксопиримидинов, обладающих выраженной противовирусной активностью в отношении дикого и клинически значимых мутантных штаммов ВИЧ-1.
2. Разработан новый способ получения этиловых эфиров 2-алкил-4-арил-3-оксобутановых кислот, основанный на ацилировании магниевых енолятов моноалкиловых эфиров алкилмалоновых кислот производными 2-арилуксусных кислот с последующим мягким гидролизом и декарбоксилированием продуктов реакции, что позволяет получать целевые соединения с практически количественным выходом в мягких условиях с использованием доступных исходных реагентов.
3. Исследована конденсация алкиловых эфиров 2-алкил-4-арил-3-оксобутановых кислот с тиомочевиной в основной среде, которая позволяет осуществить синтез 5-алкил-б-(арилметил)-2-тиоурацилов. Показано влияние щелочного металла в алкоголяте на выход целевого продукта.
4. Исследовано взаимодействие алифатических и жирно-ароматических а- и Р-хлоралкилсульфидов с калиевыми солями 2-тиоурацилов, а также -свободными 2-тиоурацилами (в присутствии или отсутствии акцептора хлористого водорода) в полярном протонном и апротонном растворителе.
Показано, что региоселективность ^-моноалкилирования в данном случае зависит от доминирующего механизма реакции, определяемого природой алкилирующего агента.
5. Установлено, что максимум региоселективности для ß-[(метилтио)этил]хлорида и [(арилтио)метил]хлоридов достигается в системе «гидроксид калия - этанол», а для [(метилтио)метил]хлорида - в системе «карбонат калия - ДМФА».
6. Исследована противовирусная активность новых тиоаналогов ДАБО в отношении штаммов NL4-3, K103N, Y181C, и Y188L ВИЧ-1 в культуре инфицированных клеток МТ-4, а также цитотоксичность этих веществ в культуре квази-инфицированных клеток МТ-4. Выявлена взаимосвязь химической структуры и биологической активности новых тиоаналогов 3,4-дигидро-2-алкокси-6-бензил-4-оксопиримидинов, что позволяет осуществлять направленный поиск анти-ВИЧ-1 агентов в этом ряду веществ.
7. Показана высокая ингибирующая активность 5-изопропнл-6-(3,5-диметилбензил)-2-{[(фенилсульфанил)метил]сульфанил}пиримидин-4(3#)-она в отношении изученных штаммов вируса, сочетающаяся с низкой цитотоксичностью, что позволяет рассматривать это вещество, как эффективный пролекарственный анти-ВИЧ-1 агент.
Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:
1. Novel Highly Potent Inhibitors of Retroviral Replication Based on 5-Alkyl-ó-(Arylmethyl) Pyrimidine-4(3H)-One Scaffold / A. Mai, И.А. Новаков, M. Artico, Б.С. Орлинсон, D. Rotiii, М.Б. Навроцкий, J.A. Este, A.C. Еремийчук, JI.JI. Брунилина // 1st Turkish-Russian Joint Meeting on Organic and Medicinal Chemistry, Antalya (Турция), 14-17 October 2009 : Programme and Abstracts Book.- [Antalya], 2009,- P. 29.- Англ.
2. Особенности взаимодействия а- и ß-хлорсульфидов с производными 6-(арилметил)-2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1Н)-она / И.А. Новаков, Б.С. Орлинсон, М.Б. Навроцкий, JI.JI. Брунилина, Е.А, Гордеева // Всероссийская конференция по органической химии, посвящ. 75-летию со дня основания Ин-та орг. химии им. Н.Д.Зелинского: сб. тез. докл. (Москва, 25-30 окт. 2009 г.) / ИОХ им. Н.Д.Зелинского РАН [и др.]. - М., 2009. - С. 312.
3. Использование метода 1Н и 13С ЯМР спектроскопии в установлении структуры продуктов взаимодействия фенацилгалогенидов с 6-(2,6-дигалобензил)-2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1Н)-онами / И.А. Новаков, Б.С. Орлинсон, М.Б. Навроцкий, Л.Л. Брунилина // X международный семинар по магнитному резонансу (спектроскопия, томография и экология) : матер, семинара (Ростов-на-Дону, 2-7 марта 2010 г.) / НИИ физической и органической химии ЮФУ [и др.]. - Ростов н/Д, 2010. - С. 90.
4. Направленное конструирование высокоактивных анти-ВИЧ-1 агентов на основе химерных производных ряда S-DABO / И.А. Новаков, Б.С. Орлинсон, М.Б. Навроцкий, Л.Л. Брунилина // Химия и медицина : тез. докл. VIII всерос. конф. с междунар. участием (6-8 апр. 2010, г. Уфа) / Ин-т орг. химии Уфимского науч. центра РАН [и др.]. - Уфа, 2010. - С. 34.
5. О специфике взаимодействия производных 2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1Н)-она с иодметаном и алкил(хлорметил)сульфидами / И.А. Новаков, Б.С. Орлинсон, М.Б. Навроцкий, А. Май, М. Артико, Д. Ротили, A.C. Еремийчук, Е.А. Гордеева, Л.Л. Брунилина, X. Эсте // Химия гетероциклических соединений. - 2010. - № 2. - С. 248-254.
6. The specific character of the reaction of derivatives of 2-thioxo-2,3-dihydropyrimidin-4(l#)-one with iodomethane and alkyl chloromethyl sulfides / I.A. Novakov, B.S. Orlinson, M.B. Nawrozkij, A. Mai, M. Artico, D. Rotili, A.S. Eremiy-chuk, E.A. Gordeeva, L.L. Brenilina, J.A. Este // Chemistry of heterocyclic compounds. - 2010. - N. 46 (2). - P. 200-205.
7. Решение о выдаче патента от 06.09.10 по заявке №2009138970 от 21.10.09. Способ получения этиловых эфиров 2-алкил-4-арил-3-оксобутановых кислот / И.А. Новаков, Б.С. Орлинсон, М.Б. Навроцкий, Л.Л. Брунилина.
Подписано в печать. й9.й£2010г. Заказ Ш5УЗ. Тираж ЮОэкз. Печ. л. 1,0 Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная.
Типография ИУНЛ Волгоградского государственного технического университета 400131, Волгоград, просп. им. В.И. Ленина, 28, корп. №7
Введение
Глава 1. 3,4-Дигидро-2-алкокси-6-бензил-4-оксопиримидины (ДАБО) и их биоизостерические аналоги: синтез и биологические свойства. 9 Раздел 1.1. Антология создания производных ряда ДАБО.
Раздел 1.2. Синтез (3-кетоэфиров.
Раздел 1.3. Конденсация |3-кетоэфиров с производными формамидина
- построение фрагмента 6-бензилпиримидин-4(3//)-она.
Раздел 1.4. Взаимодействие 6-бензил-2-тиоксо-2,3дигидропиримидин-4(1//)-онов с алкилирующими и арили-рующими агентами: синтез производных ДАБО.
Раздел 1.5. Сольволиз 2-замещенных 6-бензилпиримидин-4(1//)-онов: синтез производных ДАБО, N11- и А^тУ-ДАБО.
Глава 2. Обсуждение результатов
Раздел 2.1. Синтез этиловых эфиров 2-алкил-4-арил-3-окобутановых кислот и их конденсация с тиомочевиной
Раздел 2.2. Взаимодействие 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоурацилов с аи Р-галоидалкилсульфидами. Раздел 2.2.1. Алкилирование 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоурацилов аллил-БСНгО и Ме8СН2С1.
Раздел 2.2.2. Алкилирование 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоурацилов метил(2-хлорэтил)сульфидом.
Раздел 2.2.3. Алкилирование 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоурацилов арил(хлорметил)сульфидами.
Раздел 2.3. Биологическая активность новых производных МТМ-8
ДАБО и их аналогов.
Раздел 2.3.1. Цитотоксичность и противовирусная активность в отношении дикого штамма ВИЧ-1 86 Раздел 2.3.2. Ингибирующая активность в отношении клинически значимых мутантных штаммов ВИЧ-
Глава 3. Экспериментальная часть 104 Выводы 112 Список литературы
Актуальность темы. 3,4-Дигидро-2-алкокси-6-бензил-4оксопиримидины (ДАБО) впервые были синтезированы и охарактеризованы как новый класс ингибиторов ретровирусной репликации группой итальянских исследователей, под руководством профессора М. Artico в 1993 году [1]. Этому открытию предшествовал цикл работ исследовательской группы профессора M. Botta, направленный на создание новых аналогов противобакте-риального препарата - триметоприма (2,4-диамино-5-(3,4,5-триметоксибензил)пиримидина) [2], ингибитора дегидрофолатредуктазы. Работы основывались, в значительной степени, на впервые открытой этой группой исследователей реакции циклоконденсации (3-кетоэфиров с получаемой in situ О-метилизомочевиной [3].
Таким образом, был синтезирован, так называемый, изотриметоприм -структурный изомер триметоприма, содержащий 3,4,5-триметоксибензильный радикал в положении 6 гетероциклической системы пиримидина [4]. Это вещество, равно как и ряд его биоизостерических аналогов не проявили выраженной антибактериальной активности, однако, были исследованы на предмет противовирусного действия [5]. Основанием к этому послужило структурное сходство полученных соединений и ранее полученного T. Miyasaka и соавторами 6-(фенилсульфанил)ациклотимидина [6]. Для последнего вещества, к тому времени, уже была установлена противовирус-ная-активность в отношении ВИЧ- Г.
В результате этих исследований, было установлено- наличие умеренно выраженной анти-ВИЧ-1 активности у 4-амино-2-метокси-6-(4-метоксибензил)пиримидина и 2-бутокси-6-(4-метоксибензил)пиримидин-4(3//)-она, что и послужило началом масштабных исследований ряда производных последнего соединения. В результате были получены новые кислородные, сернистые и азотистые аналоги этого вещества. Генеалогическое дерево развития этих производных может быть представлено схемой 1.
Производные ряда ДАБО, содержащие гомоалкильный заместитель при экзоциклическом гетероатоме изучены достаточно хорошо, что, в частности, относится и к взаимосвязи их химической структуры и противовирусного действия, что отражается графической схемой 2 [7].
В то же время, в значительно меньшей степени исследованы соответствующие производные, содержащие гетероцепной фрагмент при экзоциклическом гетероатоме, взамен гомоалкильного или гомоциклоалкильного. Несмотря на это, имеющиеся сообщения о высокой противовирусной активности 5'-[(метилсульфанил)метил]-замещенных производных ряда £-ДАБО [8], обосновывают актуальность изучения особенностей синтеза такого рода веществ, наряду со сравнительной оценкой их фармакологической активности. В этой связи, была сформулирована цель настоящей работы: выявление закономерностей синтеза новых функциональных производных 2-(алкилсульфанил)пиримидин-4(3//)-онов и взаимосвязи «химическая структура - анти-ВИЧ-1 активность» в ряду полученных веществ. Для достижения поставленной цели были сформулированы и решены следующие задачи:
1. Направленное конструирование новых высокоактивных антивирусных соединений на основе производных 2-{[(алкил-сульфанил)алкил]сульфанил}- и 2-{[(арилсульфанил)алкил]сульфанил}-5-алкил-6-(арилалкил)пиримидин-4(3#)-онов.
2. Разработка нового способа синтеза алкилзамещенных эфиров 4-арил-3-оксобутановой кислоты, на основе соответствующих 2-арилуксусных кислот.
3. Изучение условий проведения конденсации алкилированных производных эфиров 4-арил-З-оксобутановых кислот с тиомочевиной.
4. Исследование взаимодействия полученных производных 5-алкил-6-(1-арилалкил)-2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1//)-она с а- и (3-галоидалкилсульфидами.
5. Сравнительная оценка противовирусных свойств полученных производных 2-{[(алкилсульфанил)алкил]сульфанил}- и 2-{[(арилсульфанил)алкил]сульфанил}-5-алкил-б-(арилалкил)пиримидин-4(3#)-онов и выявление зависимости структура - анти-ВИЧ-1 активность.
Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые показано, что в зависимости от химической природы исходного галоидалкилсульфида и реакционной среды, взаимодействие галоидалкилсульфидов с производными 2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1Я)-она протекает как региоселективное алкилирование по экзоциклическому атому серы, или как конкурентное £-моноалкилирование, ¿УУ1-, «Я/У3-, или £,(3-диалкилирование, что позволило установить основные закономерности взаимодействия а- и (З-галоидалкилсульфидов с производными 2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1//)-она.
Было установлено, что в случае алифатических а-галоидалкилсульфидов проведение реакции в полярном протонном растворителе приводит к сольволизу алкилирующего агента и регенерации исходного производного 2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1//)-она.
В отличие от ранее опубликованных Р. ВогсЬуеП и соавторами данных о предпочтительном мономолекулярном замещении галогена в [(хлорме-тил)сульфанил]аренах [9], нами показано преобладание бимолекулярного механизма в случае взаимодействия этих соединений с 2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1//)-онами и их металлическими солями.
Показано, что замещения в пара-положении ароматического ядра Б- и МеО-группой в [(хлорметил)сульфанил]аренах, практически не оказывает влияние на направление и качественный состав продуктов их реакции с 2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1#)-онами.
Предложен новый способ получения алкиловых эфиров 4-арил-З-оксобутановой кислоты, содержащих разветвленный алкильный радикал в положении 2 углеводородной цепи. Предложенный способ основывается на ацилировании хелатных форм магниевых енолятов моноэфиров алкилмалоновых кислот с последующим гидролизом и декарбоксилированием полученных интермедиатов синтеза. В результате удается получать целевые продукты с практически количественным выходом и высокой чистотой, без дополнительной очистки.
Получен ряд новых производных ряда S-ДАБО, индивидуальность которых подтверждена методами ТСХ, ВЭТСХ, ВЭЖХ, а структура -данными элементного анализа, ПМР-спектроскопии и масс-спектрометрии.
Впервые показано, что полученные производные обладают выраженной анти-ВИЧ-1 активностью в наномолярном диапазоне концентраций.
Установлено, что усилению и расширению спектра противовирусной активности полученных веществ, способствует введение 3,5-диметилбензильного радикала в положение 6 пиримидинового гетероцикла, наряду с переходом от производных 2-тиотимина к производным 5-изопропил-2-тиоурацила.
Публикации и апробация работы. По содержанию диссертации опубликовано 2 статьи в изданиях, включенных в перечень ВАК, 4 тезиса докладов и получено положительное решение по заявке на патент РФ. Полученные результаты докладывались на трех научных конференциях: 1st Turkish-Russian Joint Meeting on Organic and Medicinal Chemistry (Antalya (Турция), 14-17 октября 2009 г.), X международный семинар по магнитному резонансу (спектроскопия, томография и экология) (Ростов-на-Дону, 2-7 марта 2010 г.), Химия и медицина: VIII всероссийская конференция с международным участием (Уфа, 6-8 апреля 2010 г.).
Структура работы. Диссертация изложена на 133 страницах машинописного текста, содержит 14 таблиц, построена традиционно и состоит из введения, обзора литературы, посвященного классу производных 3,4-дигидро-2-алкокси-6-бензил-4-оксопиримидина, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка литературы, включающего 169 наименований.
Выводы:
Впервые предложен способ региоселективного 8-моноалкилирования 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоксо-2,3-дигидропиримидн-4(1//)-онов галоидалкилсульфидами, что позволило получить 51 новый тиоаналог 3,4-дигидро-2-алкокси-6-бензил-4-оксопиримидинов, обладающих выраженной противовирусной активностью в отношении дикого и клинически значимых мутантных штаммов ВИЧ-1. Разработан новый способ получения этиловых эфиров 2-алкил-4-арил-3-оксобутановых кислот, основанный на ацилировании магниевых енолятов моноалкиловых эфиров алкилмалоновых кислот производными 2-арилуксусных кислот с последующим мягким гидролизом и декарбоксилированием продуктов реакции, что позволяет получать целевые соединения с практически количественным выходом в мягких условиях с использованием доступных исходных реагентов. Исследована конденсация алкиловых эфиров 2-алкил-4-арил-3-оксобутановых кислот с тиомочевиной в основной среде, которая позволяет осуществить синтез 5-алкил-6-(арилметил)-2-тиоурацилов. Показано влияние щелочного металла в алкоголяте на выход целевого продукта.
Исследовано взаимодействие алифатических и жирно-ароматических а-и р-хлоралкилсульфидов с калиевыми солями 2-тиоурацилов, а также -свободными 2-тиоурацилами (в присутствии или отсутствии акцептора хлористого водорода) в полярном протонном и апротонном растворителе. Показано, что региоселективность б'-моноалкилирования в данном случае зависит от доминирующего механизма реакции, определяемого природой алкилирующего агента.
Установлено, что» максимум региоселективности для (3-[(метилтио)этил]хлорида и [(арилтио)метил]хлоридов достигается в системе «гидроксид калия - этанол», а для [(метилтио)метил]хлорида -в системе «карбонат калия - ДМФА».
Исследована противовирусная активность новых тиоаналогов ДАБО в отношении штаммов N1,4-3, КЮЗН ¥181С, и У188Ь ВИЧ-1 культуре инфицированных клеток МТ-4, а также цитотоксичность этих-веществ в культуре квази-инфицированных клеток МТ-4. Выявлена взаимосвязь химической структуры и биологической активности новых тиоаналогов 3,4-дигидро-2-алкокси-6-бензил-4-оксопиримидинов, что позволяет осуществлять направленный поиск анти-ВИЧ-1 агентов в этом ряду веществ.
7. Показана высокая ингибирующая активность 5-изопропил-6-(3,5-диметилбензил)-2- {[(фенилсульфанил)метил]сульфанил) пиримидин-4(3#)-она в отношении изученных штаммов вируса, сочетающаяся с низкой цитотоксичностью, что позволяет рассматривать это вещество, как эффективный пролекарственный анти-ВИЧ-1 агент. ч
1. 3,4-Dihydro-2-alkoxy-6-benzyl-4-oxopyrimidines (DABOs) : a new class of specific inhibitors of human immunodeficiency virus Type 1 / M. Artico et.al. // Antiviral Chemistry and Chemotherapy. 1993. - Vol. 4, N. 6. - P. 361-368.
2. A versatile route to potential dihydrofolate reductase inhibitors via the hitherto unknown 6-benzyl-2-(o-methyl)-uracils: synthesis of isotrimethoprim / M. Botta et al. // Journal of Heterocyclic Chemistry. 1989. - Vol. 26. - P. 883-884.
3. Synthesis, antimicrobial and antiviral activities of isotrimethoprim and some related derivatives / M. Botta et al. // European Journal of Medicinal Chemistry. 1992. - Vol. 27. - P. 251-257.
4. Bordwell, F. G. The hydrolysis of chloromethyl aryl sulfides / F. G. Bordwell, G. D. Cooper, H. Morita // Journal of the American Chemical Society. -1957.-Vol. 79.-P. 376-378.
5. Stenbuck, P. A new synthesis of 5-benzylpyrimidines / P. Stenbuck, R. Baltzly, H. M. Hood // Journal of Organic Chemistry. 1963. - Vol. 28. - P. 19831988.
6. Artico, M. Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NNRTIs) : a chemical survey from lead compounds to selected drugs for clinical trials / M. Artico//II Farmaco.- 1996.- Vol. 51, N. 5.-305-331.
7. Пат. W02004096147. Oxo-pyrimidine compounds / R. Storer, P. La Colla, M. Artico et. al. ; Idenix cayman LTD. № 2004013086 ; filed 28.04.04 ; patented 20.10.05.
8. Пат. AU771209B. Substituted 6-benzyl-4-oxopyrimidines, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them / P. La Colla, M. Artico ; Idenix cayman LTD. № 5284899 ; filed 19.07.1999 ; patented 07.02.04.
9. Characterization of the anti-HIV-l activity of 3,4-dihydro-2-alkoxy-6-benzyl-4-oxopyrimidines (DABOs), new non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors / E. Tramontano et.al..// New. Microbiol. 1994. - Vol: 17, N. 4. - P. 269-279.
10. Synthesis and antiviral activity of new 3,4-dihydro-2-alkoxy-6-benzyl-4-oxopyrimidines (DABOs) : specific inhibitors of human immunodeficiency virus Type 1 / M. Artico et.al. // Antiviral Chemistry and Chemotherapy. 1995. -Vol. 6, N. 1. - P. 1-8.
11. Synthesis and anti-HIV-1 activity of thio analogues of dihydroalkoxy-benzyloxopyrimidines / A. Mai et.al. // Journal of Medicinal Chemistry. 1995. -Vol. 38.-P. 3258-3263.
12. Dihydro(alkylthio)(naphthylmethyl)-oxopyrimidines : novel non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors of the s-DABO series / A. Mai et.al. // Journal of Medicinal Chemistry. 1997. - Vol. 40. - P. 1447-1454.
13. Structure-activity relationship studies on new DABOs : effect of substitutions at pyrimidine C-5 and C-6 positions on anti-HIV-1 activity / G. Sbardella et. al. // Antiviral Chemistry and Chemotherapy. 2001. - Vol. 12. - P. 37-50.
14. Does the 2-methylthiomethyl substituent really confer high anti-HIV-1 activity to S-DABO / G. Sbardella et. al. // Medicinal Chemistry Research. -2000. Vol. 10, N. 1. - P. 30-39.
15. Synthesis and biological investigation of S-aryl-S-DABO derivatives as HIV-1 inhibitors / C. Mugnaini et. al. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006. - Vol. 16, N. 13.-P. 3541-3544.
16. A versatile route to C-6 arylmethyl-functionalized S-DABO and related analogues / M. Radi et. al. // Organic Letters. 2007. - Vol. 9, N. 16. - P. 31573160.
17. Towards novel S-DABOC inhibitors : synthesis, biological investigation, and molecular modeling studies / M. Radi et. al. // Bioorg. Med. Chem. Lett. -2008.-Vol. 18, N. 21. -P. 5777-5780.
18. A multidisciplinary approach for the identification of novel HIV-1 non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors : S-DABOCs and DA VPs / M. Radi et. al. // Chem. Med. Chem. 2008. - Vol. 3, N. 4. - P. 573-593.
19. Novel slow-, tight-binding HIV-1 reverse transcriptase nucleoside inhibitors highly active against drug resistant mutants / R. Cancio et. al. // Chem. Med. Chem. 2007. - Vol. 2. - P. 445-448.
20. Synthesis and biological properties of novel 2-aminopyrimidin-4(3H)-ones highly potent against HIV-1 mutant strains / A. Mai et. al. // Journal of Medicinal Chemistry. 2007. - Vol. 50. - P. 5412-5424.
21. Синтез 2-[2(3)-(арилокси)алкил.тио]-6-метилпиримидин-4(ЗН)-онов как вероятных противовирусных агентов / М. С. Новиков [и др.] // Химия и технол. элементоорганич. мономеров и полимерн. матер : сб. науч. тр. / ВолгГТУ. Волгоград, 2002. - С. 53-56.
22. Синтез и противовирусные свойства 2-[(арилокси)этил.тио]пиримидин-4(ЗН)-онов / М. С. Новиков [и др.] // Вестник ВолГМУ. Волгоград, 2003. - Т. 59, Вып. 9. - С. 52-54.
23. Навроцкий, М. Б. Синтез, противовирусная и цитотоксическая активность 2-(алкилтио)-6-бензгидрил-4(ЗЯ)-пиримидинонов / М. Б. Навроцкий // Хим. фарм. ж. - 2003. - № 9. - С. 22-24.
24. Навроцкий, М. Б. Синтез и анти-ВИЧ-1 активность новых производных 2-(2-фталимидоэтил)тио.-4(ЗН)-пиримидинона / М. Б. Навроцкий*. // Хим. фарм. ж. - 2005. -№ 9. - С.16-19.
25. Навроцкий, М. Б. Синтез и изучение фармакологической активности новых производных 6-(арилметил)-4(ЗЯ)-пиримидинона : дис. . канд. фарм. наук : 15.00.02 / М. Б. Навроцкий. Пятигорск, 2002. - 192 с.
26. Синтез и анти-ВИЧ-1 активность 2-[2-(3,5-диметилфенокси)этил.тио]пиримидин-4(ЗН)-онов / М. С. Новиков [и др.] // ХГС. 2004. - Вып. 1. - С. 35-42.
27. Parallel solution-phase and microwave-assisted synthesis of new S-DABO derivatives endowed with subnanomolar anti-HIV-1 activity / F. Manetti et. al. //Journal of Medicinal Chemistry. -2005. Vol. 48. - P. 8000-8008.
28. Non-nucleoside HIV reverse transcriptase inhibitors, Part 61. : synthesis and anti-HIV activity of novel 2-(arylcarbonylmethyl)thio.-6-arylthio DABO analogues / G. F. Sun [et. al.] // Arch. Pharm. (Weinheim). 2005. - Vol. 338, N. 10. -P. 457-461.
29. Еремийчук, А. С. Синтез и исследование новых производных 6-(2,6-дигалогенбензил)-5-алкил-2-(алкилсльфанил)-4(377)-пиримидинонов: дисс. . канд. хим. наук : 02.00.03 / А. С. Еремийчук. Волгоград, 2008. - 135с.119
30. Synthesis and anti-HIV-1 activity of S-dihydro(alkyloxy)benzyloxypyrimidine derivatives / Z.-K. Rao et. al. // Monatshefte fur Chemie. 2008. - Vol. 139, N. 8. - P. 967-974.
31. Synthesis and biological evaluation of novel 2-(substituted phenylami-nocarbonylmethylthio)-6-(2,6-dichlorobenzyl)-pyrimidin-4(3H)-ones as potent HIV-1 NNRTIs / M. Yu et. al. // Bioorg. Med. Chem. 2009. - Vol. 17, N. 22. -P. 7749-7754.
32. The anti-HIV activity of three 2-alkylsulfanyl-6-benzyl-3, 4-dihydropyrimidin-4 (3H)-one derivatives acting as non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor in vitro / J. Long et. al. // Yaoxue Xuebao. -2010. Vol. 45, N. 2.-P. 228-234.
33. Synthesis and biological evaluation of novel C5 halogen-functionalized S-DABO as potent HIV-1 non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors / H. Qin et. al. //Bioorg. Med. Chem. -2010. Vol. 18, N. 9. - P. 3231-3237.
34. Synthesis and biological evaluation of novel 2-arylalkylthio-4-amino-6-benzylpyrimidines as potent HIV-1 non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors / H. Qin et. al. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2010. - Vol. 20, N. 9. - P. 30033005.
35. Aal, M. Т. A. Synthesis of some new S-DABO and HEPT analogues with expected biological activity against HBV / M. T. A. Aal // Synthetic Communications. 2002. - Vol. 32, N. 9.-P. 1365-1377.
36. Mastering beta-keto Esters / S. Benetti' et. al. // Chemical Reviews. -1995.-Vol. 95.-P. 1065-1114.
37. Kagan, H. B. Reaction de reformatsky sur les nitriles. I. Preparation de ß-ceto-esters non substitues, mono ou disubstitues en a / H. B. Kagan, M. Y.-H. Suen // Bulletin de la Societe chimique de France. 1966. - P. 1819-1822.
38. Hannick, S. M. Improved procedure for the Blaise reaction : a short, practical route to the key intermediates of the saxitoxin synthesis / S. M. Hannick, Y. Kishi // Journal of Organic Chemistry. 1983. - Vol. 48, N. 21. - P. 38333835.
39. Narkunan, K. Synthesis of 5-hydroxy-ß-oxo esters using sonochemical Blaise reaction / K. Narkunan, B.-J. Uang // Synthesis. 1998. -P. 1713-1714.
40. Synthesis of novel uracil non-nucleoside derivatives as potential reverse transcriptase inhibitors of HIV-1 / N. R. El-Brollosy et. al. // Archiv der Pharmazie. -2009. Vol. 342, N. 11. - P. 663-670.
41. Synthesis and antiviral evaluation of 6-(trifluoromethylbenzyl) and 6-(fluorobenzyl) analogues of HTV drugs emivirine and GCA-186 / N. R. El-Brollosy et. al. // Archiv der Pharmazie. 2008. - Vol. 341, N. 1. - P. 9-19.
42. Synthesis and anti-HIV-1 activity of new MKC-442 analogues with an alkynyl-substituted 6-benzyl group / Y. L. Aly et. al. // Archiv der Pharmazie. -2007. Vol. 340, N. 5. - P. 225-235.
43. Synthesis and anti-HIV-1 activity of 1,3-phenylene bis-uracil analogues of MKC-442 / Y. L. Aly et. al. // Journal of Heterocyclic Chemistry. 2007. -Vol. 44, N. 2.-P. 381-387.
44. Multiple pathways in the synthesis of new annelated analogues of 6-benzyl-l-(ethoxymethyl)-5-isopropyluracil (emivirine) / F. D. Therkelsen et. al. // Organic and Biomolecular Chemistry. 2003. - Vol. 1, N. 16. - P. 2908-2918.
45. Pedersen, O. S. The flourishing syntheses of non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors / O. S. Pedersen, E. B. Pedersen // Synthesis. 2000. - Vol. 4.-P. 479-495.
46. Sato, T. Facile synthesis of p-ketoesters by coupling reaction of the re-formatsky reagent with acyl chlorides catalyzed by a palladium complex / T. Sato, T. Itoh, T. Fujisawa // Chem. Lett. 1982. - P. 1559-1560.
47. Holmquist, C. R. A selective method for the direct conversion of aldehydes into P-keto esters with ethyl diazoacetate catalyzed by tin(II) chloride / C. R. Holmquist, E. J. Roskamp // Journal of Organic Chemistry. 1989. - Vol. 54, N. 14.-P. 3258-3260.
48. Lazar, J. Mannich condensation of the methyl ester of 7-oxocholic acid / J. Lazar et. al. // Chemistry and Industry. 1963. - Vol. 22. - P. 913.
49. Bestman, H. J. Neue-synthesemoglichkeiten fur a-verzweigte (3-keto-carbonsaureester / H. J. Bestman et. al. // Chemische Berichte. 1970. - Vol. 103.-P. 2794-2801.
50. Pollet, P.L. 3-ketoesters by malonic synthesis / P. L. Pollet et. al. // Journal of Chemical Education. 1983. - Vol. 60, N. 3. - P. 244-246.
51. Органикум : Практикум по органической химии. В 2 т. Т. 2. / X. Беккер и др.. М. : Мир, 1992. - 474 с.122
52. Studies on chemotherapy. X. Antithyroid compounds. Synthesis of 5-and 6-substituted 2-thiouracils from p-oxoesters and thiourea / G. W. Anderson et al. // Journal of the American Chemical Society. 1945. - Vol. 67. - P. 21972200.
53. Miller, W. H. The synthesis of some 6-substituted-2-thiouracils / W. H. Miller, A. M. Dessert, G. W. Anderson // Journal of the American Chemical Society. 1948. - Vol. 70. - P. 500-502.
54. Jackman, M. The preparation of some 6-substituted-2-thiouracils / M. Jackman, A. J. Bergman, S. Archer // Journal of the American Chemical Society. -1948.-Vol. 70.-P. 497-500.
55. Симон, И. Б. Синтез веществ с антитиреоидным действием. III. S-Метил-6-производные тиоурацила / И. Б. Симон, И. И. Ковтуновская // ЖОХ.- 1951.-Т. 21, №4.-С. 760-764.
56. Straley, J. Ethyl benzoylacetate / J. Straley, A. Adams // Organic Syntheses. 1963. - Vol. 4. - P. 415.
57. Modi, P. Indole-2-acetic acid methyl esters : methyl 5-methoxyindole-2-acetate / P. Modi, R. Oglesby, S. Archer // Organic Syntheses. 1993. - Vol. 72. -P. 125-134.
58. Ireland, R.E. A new synthetic method for the preparation of a-substituted P-ketoesters 4. / R. E. Ireland, J. A. Marshall // Journal of the American Chemical Society.- 1959.-Vol. 81, N. 11.-P. 2907-2908.
59. Bram, G. Nouvelle synthese de p-cetoesters du type RC0CH2C02Et a partir du malonate acide d'ethyle / G. Bram, M. Vilkas // Bulletin de la Societe chimique de France. 1964. - Vol. 5. - P. 945-951.
60. Brooks, V. D. W. C-Acylierung unter praktisch neutralen Bedingungen / V. D. W. Brooks, L. D.-L. Lu, S. Masamune // Angewandte Chemie. 1979. -Vol. 91, N. l.-P. 76-77.
61. Brooks, D. W. C-Acylation under virtually neutral conditions / D. W. Brooks, L. D. L. Lu, S. Masamune // Angewandte Chemie, International Edition. -1979.-Vol. 18. -P. 72-74.
62. Pollet, P. A One-step synthesis of y,5-unsaturated ß-ketoesters / P. Pollet, S. Gelin // Synthesis. 1978. - Vol. 2. - P. 142-143.
63. Pollet, P. Tetronic acids and derivatives IV1 1 Part III / P. Pollet, S. Gelin // Journal of Heterocyclic Chemistry. - 1975. - Vol. 12. - P. 787.
64. Pollet, P. Synthesis and lactonization of -y-acetoxy ß-ketoesters / P. Pollet, S. Gelin // Tetrahedron. 1978. - Vol. 34, N. 10. - P. 1453-1455.
65. Achenbach, H. Piperolide synthesis synthese des piperolids. / H. Achenbach, J. Witzke // Tetrahedron Letters. 1979. - Vol. 18. - P. 1579-1580.
66. Пат. US4795812, PCT/US86/00074. 4-Substituted 6-aryl-pyrimidine compounds / Wierenga W., Skulnick H.; Upjohn CO. № 06/913,882 ; filed 22.09.86 ; patented 03.01.89.
67. Wierenga, W. General, efficient, one-step synthesis of ß-keto esters / W. Wierenga, H. I. Skulnick // Journal of Organic Chemistry. 1979. - Vol. 44, N. 2. -P. 310-311.
68. A safe economical method for the preparation of ß-oxo esters / R. J. Clay et. al. // Synthesis. 1992. - P. 290-292.
69. Synthese totale stereospecifique de la dl-prostoglandine A 2 / J. Martel et. al. // Tetrahedron Letters. -/1972. Vol. 15. - P. 1491-1496.
70. Katagiri, N. Studies on ketene and its derivatives. CIX. Synthesis of naturally occuring anthracene-9, 10-dione / N. Katagiri, T. Kato, J. Nakano // Chem. Pharm. Bull. 1982. - Vol. 30, N. 7. - P. 2440-2446.
71. Wierenga, W. Aliphatic and aromatic P-keto esters from monoethyl malonate : ethyl 2-butyrylacetate / W. Wierenga, H. I. Skulnick // Organic Syntheses. 1980. - Vol. 7. - P. 213-215.
72. Riegel, B. The synthesis of p-keto esters by the decomposition of acy-lated malonic esters / B. Riegel, W. M. Lilienfeld // Journal of the American Chemical Society. 1945. - Vol. 67, N. 8. - P. 1273-1275.
73. Breslow, D. S. A new synthesis of P-ketoesters of the type RCOCH2COOC2H5 / D. S. Breslow, E. Baumgarten, C. R. Hauser // Journal of the American Chemical Society. 1944. - Vol. 66. - P. 1286-1288.
74. Taylor, E.C. A new synthesis of diethyl p-ketoadipate / E. C. Taylor, A. McKillop // Tetrahedron. 1967. - Vol. 23, N. 2. - P. 897-900.
75. Bowman, R. E. Experiments on the synthesis of carbonyl compounds. Part V. p-Keto-esters and nitriles / R. E. Bowman, W. D. Fordham // Journal of the Chemical Society (Resumed). - 1951. - P. 2758-2760.
76. Pichat, L. Ethyl acryloylacetate and» its homologs by acylation- of trimethylsilyl ethoxycarbonylacetate / L. Pichat, J.-P. Beaucourt // Synthesis. -1973.-P. 573-574.
77. Wang, X. A process for the synthesis of |3-ketoesters using in-situ generated (trymethylsilyl)malonates / X. Wang et. al. // Tetrahedron Letters. 1994. - Vol. 35, N. 50. - P. 9323-9326.
78. Синтез 6-арилметил- и 6-арилоксиметил-2-тиоурацилов / М. Б. Навроцкий и др. // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета : сб. научн. тр. / ВолгМУ. Волгоград, 2002. - Т. 58, Вып. 8. -С. 27-30.
79. Davidson, D. The structure of Meldrum's supposed P-lactonic acid / D. Davidson, S. A. Bernhard // Journal of the American Chemical Society. 1948. -Vol. 70, N. 10. - P. 3426-3428.
80. Oikawa, Y. Meldrum's acid in organic synthesis. 2. A general and versatile synthesis of (3-keto esters / Y. Oikawa, O. Yonemitsu, K. Sugano // Journal of Organic Chemistry. 1978. - Vol. 43, N. 10. - P. 2087-2088.
81. Methyl phenylacetate from phenilacetyl chloride and meldrums acid / Y. Oikawa et al. // Organic Syntheses. 1985. - Vol. 23. - P. 198-202.
82. Moody, C.J. Diels-alder reactivity of pyrano4,3-b.indol-3-ones, indole 2,3-quinodimethane analoges / C. J. Moody, K. F. Rahimtoola // Journal of the Chemical Society Perkin Trans. 1990. - Vol. 1. - P. 673-679.
83. The synthesis of 3-(l'-hydroxyethyl)-2-azetidinone-4-yГ acetic acid via dianion chemistry an important intermediate in thienamycin total synthesis / I. Shinkai et. al. // Tetrahedron Letters. - 1982. - Vol. 23, N. 47. - P. 4899-4902.
84. Studies on cerebral protective agents. VI. Synthesis of novel 4-(4-nitrobenzoyl)pyrimidine and related compounds with anti-anoxic activity / M. Oh-kubo et al. // Chem. Pharm. Bull. 1994. - Vol. 42, N. 6. - P. 1279-1285.
85. Capozzi, G. A protocol for the efficient synthesis of enantiopure ß-substituted ß-lactones / G. Capozzi, S. Roelens, S. Talami // Journal of Organic Chemistry. 1993. - Vol. 58, N. 28. - P. 7932-7936.
86. Завьялов, С.И. Кислота Мельдрума реагент для синтеза производных тиофана / С. И. Завьялов, О. В. Дорофеева, О. К. Таганова // ЖОХ. -1985.-Т. 55.-С. 1691-1692.
87. Houghton, R. P. A modified preparation of ß-keto esters / R. P. Houghton, D. J. Lapham // Synthesis. 1982. - Vol. 12. - P. 451-452.
88. Bouveault, MM. L. Syntheses d'ethers acylacetiques a 1 aide des ethers C-acylacetylacetiques / MM. L. Bouveault, A. Bongert // Bulletin de la Societe chimique de France. 1902. - Vol. 27. - P. 1088-1095.
89. Fisher, H. Synthese der tetramethyl-tetraprorylporphine I-IV und von octapropylporphin / H. Fisher, M. Goldschmidt, W. Nussler // Annalen der Chemie. 1931.-Vol. 31.-P: 1-54.
90. Sonn, A. Uber den y-phenylacetessigester / A. Sonn, W. Litten // Berichte der deutschen Chemischen Gesellschaft. 1933. - Vol. 66B. - P. 15121520.
91. Степанов, Ф. Н. Синтез и реакции (1-адамантил)ацетона / Ф. Н. Степанов, Л. И. Сидорова, Н. Л. Довгань // ЖОрХ. 1972. - Т. 8, Вып. 9. - С. 1834-1837.
92. Johnson, Т. B. Researches on pyrimidines. CLIX. Synthesis of 6-benzyl- and 5-benzyluracils / Т. B. Johnson, J. C. Ambelang // Journal of the American Chemical Society. 1938. - Vol. 60. -P. 2941-2944.
93. Monostory, J. New derivatives on carbon atom 6 of thiouracil with an-tithyroidal effects / J. Monostory // An. Asoc. Quirn. Argent. 1952. - Vol. 40. -P. 99-108.
94. Morren, H. G. (Methylbenzyl)thiouracil / H. G. Morren // Chemical Abstracts. 1955. - Vol. 49. - P. 1824-1828.
95. Ароян, А. А. Производные пиримидина. XXI. Замещенные 6-(4-Алкоксибензил)пиримидины / А. А. Ароян, M. С. Крамер // Арм. Хим. Журн. 1971. - Т. 24, № 2. - С. 161-166.
96. Пат. US2740785, C07D239/46; C07D239/00. 4-hydroxy-5-alkyl-6-arylpyrimidine derivatives / К. J. Rorig, R. Т. Nicholson; Searle & Co. 436992 ; filed 15.06.1954 ; patented 03.04.1956.
97. Anti-HIV active naphthyl analogues of HEPT and DABO / D.R. Imam et. al. // Monatshefte fur Chemie. 2002. - Vol. 133, N. 5. - P. 723-734.
98. Пат. AU771209B. Substituted 6-benzyl-4-oxopyrimidines, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them. / P. La Colla, M. Artico ; Idenix Cayman LTD. № 199952848 ; filed 19.07.1999 ; patented 18.03.04.
99. Solid phase synthesis of 2,6-disubstituted-4(3//)-pirimidinones targeting HIV-1 reverse transcriptase / E. Nizi et al. // Tetrahedron Letters. 1998. -Vol. 39.-P. 3307-3310.
100. Новаков, И. A. Synthesis of new derivatives of 6-(l-adamantylmethyl)-4(3//)-pyrimidinone / И. А. Новаков, Б. С. Орлинсон, М. Б. Навроцкий // Russian Journal of Organic Chemistry. 2009. - Vol. 45, № 2. - C. 316-317.-Англ.
101. Synthesis and antiviral activity of new 3,4-dihydro-2-alkoxy-6-benzyl-4-oxopyrimidines (DABOs), specific inhibitors of human immunodeficiency virus type 1 / S. Massa et. al. // Antivir. Chem. Chemother. 1995. - Vol. 6, N. 1. - P. 1-8.
102. Новаков, И. А. Особенности реакции галогенирования 2-замещенных 6-бензгидрил-4(3#)-пиримидинонов / И. А. Новаков, Б. С. Орлинсон, М. Б. Навроцкий // ХГС. 2006. - № 9. - С. 1418-1420.
103. Renault, J. Synthesis and antiviral study of dihydrothieno and thiano-pyrimidine diones acyclic nucleosides as potential anti-НГУ agents / J. Renault, D. Laduree, M. Robba // Nucleosides Nucleotides. 1994. - Vol. 13, N. 5. - P. 11351145.
104. Пат. US 4521599. Process for the preparation of l,3-oxazine-4-ones / H. Skulnick, W. Wierenga ; The Upjhon Company. № 06/651,494 ; filed 17.09.84 ; patented 04.06.85.
105. Parallel solution-phase and microwave-assisted synthesis of new S-DABO derivatives endowed with subnanomolar anti-HIV-1 activity / F. Manetti et. al. // Journal of Medicinal Chemistry. 2005. - Vol. 48, N. 25. - P. 80008008.
106. Новаков, И. А. Десульфуризация 2-тиоксо-2,3 дигидро-4(1Н)-пиримидинонов оксиранами и 2-галогенацетонитрилами / И. А. Новаков, Б. С. Орлинсон, М. Б. Навроцкий//ЖОрХ. -2005. -Т.41, вып. 4. - С. 617-619.
107. Novel synthesis and anti-HIV-1 activity of 2-arylthio-6-benzyl-2,3-dihydro- l//-pyrimidin-4-ones (Aryl S-DABOs) / Y. L. Aly et. al. // Synthesis. -2007.-Vol. 13.-P. 1955-1960.
108. Пат. US4912219. 2-(4-pyrimidin-2-ylamino)piperidin-l-yl.benzimidazole compound / P. Manoury, J. Binet, G. Defosse ; Synthelabo. JMb 07/283,468 ; filed 12.12.88 ; patented 27.03.1990.
109. Spychala, J. A facile preparation of N2-arylisocytosines / J. Spychala // Synth. Commun. 1997.,- Vol: 27, N. 11. - P. 1943-1949.
110. Reactions of 6-benzyl-5-methyl-2-(methylsulfanyl)pyrimidin-4(3H)-one with aliphatic and aliphatic-aromatic amines / И. А. Новаков и др. // Russian Journal of Organic Chemistry. 2009. - Vol. 45, N. 5. - C. 773-776. - Англ.
111. Сим, О. Г. Синтез биологически активных новых 5-замещенных производных 2-аминопиримидин-4(ЗН)-она : дисс. . канд. фарм. наук : 15.00.02 / О. Г. Сим. Москва, 2006. - 119 с.130
112. Синтез новых ^-адамантилпроизводных 2-амино-6метил-4(3//)-пиримидинона потенциальных активаторов выработки фактора некроза опухоли / И. А. Новаков и др. // ХГС. - 2006. - № 10. - С. 1541-1544.
113. Эффективный твердофазный синтез производных изоцитозина / И. А. Новаков и др. // ХГС. 2009. - № 11. - С. 1697-1701.
114. Яхонтов, JI. Н. Синтетические лекарственные средства / JI. Н. Яхонтов, Р. Г. Глушков. М. : Медицина, 1983. - 272 с.
115. Rolf, P. N, N'-Carbonyldiimidazole, a new peptide forming reagent / P. Rolf, G. W. Anderson // Journal of the American Chemical Society. 1960. - Vol. 82.-P. 4596-4600.
116. Freund, M. Zur kenntniss der malon-tartronsaure / M. Freund // Berichte der deutschen Chemischen Gesellschaft. 1884. - Vol. 17. -P. 780-786.
117. Вейганд, К. Методы эксперимента в органической химии. Часть 2. Методы синтеза / К. Вейганд Москва : изд-во иностранной литературы, 1952.-737 с.
118. Strube, R. Е. Malonic acid, tert-butyl ethyl ester / R. E. Strube // Organic Syntheses. 1957. - Vol. 37. - P. 34-36.
119. Substrate-induced stable enzyme-inhibitor complex formation- allows tight binding of novel 2-aminopyrimidin-4(3H)-ones to drug-resistant HIV-1 reverse transcriptase mutants / A. Samuele et. al. // Chem. Med. Chem. 2008. -Vol. 3,N. 9.-P. 1412-1418.
120. Synthesis and potent anti-HIV-1 activity of novel 6-benzyluracil analogues of r-(2-hydroxyethoxy)methyl.-6-(phenylthio)thymine / K. Danel [et.al.] // Journal of Medicinal Chemistry. 1996. - Vol. 39, N. 12. - P. 2427-2431.
121. Danel, K., Easy synthesis of 5,6-disubstituted acyclouridine derivatives / K. Danel, E. Larsen, E. B. Pedersen // Synthesis. 1995. - Vol. 8. - P. 924-936.
122. Böhme, H. Zur kenntnis der a-halogenierten thioather / H. Böhme // Berichte der deutschen Chemischen Gesellschaft. 1936. - Vol. 69. - P. 16101615.
123. Walter, L. A. Thioether barbiturates. I. Thiomethyl derivatives / L. A. Walter, L. H. Goodson, R. J. Fosbinder // Journal of the American Chemical Society. 1945. - Vol. 67, N. 4. - P. 655-657.
124. Enders, D. Diethyl(phenylsulfonyl)methyl.phosphonate : Phosphonic acid, [(phenylsulfonyl)methyl]-, diethyl ester / D. Enders, S. von Berg, B. Jandeleit // Organic Syntheses. -2000. Vol. 78. - P. 169-176.
125. Пат. DE845511. Verfahren zur herstellung aromatischer chlormethylsulfide / О. Scherer, К. Fink ; Farbwerke Hoechst, vormals Meister Lucius & Brüning. Patentanmeldung 22.11.1951 ; Patenterteilung 05.06.1952.
126. Пат. US2827492. Process of making aryl thioethers / L. W. Fancher, P. Hill ; Stauffer Chemical Company. № 559093 ; filed 16.01.1956 ^patented 18.05.1958.
127. Пат. DEI 112735. Verfahren zur herstellung von arylthioathern / E. Wiegand, W. Niemann ; Stauffer Chemical Company. anmeldetag 14.02.1958 ; bekanntmachung 17.08.1961.
128. Поконова, Ю. В. Галоидсульфиды / Ю. В. Поконова, Ленинград : Наука «Органические синтезы», 1977. — 279 с.
129. The anti-HIV activity of ADS-J1 targets the HIV-1 gpl20 / M. Ar-mand-Ugon et. al. //Virology. -2005. Vol. 343. - P. 141-149.
130. Титце, Л. Препаративная органическая химия: Реакции и синтезы в практикуме органической химии и научно-исследовательской лаборатории / Л. Титце, Т. Айхер. М. : Мир, 1999. - 704 с
