Синтез и свойства биологически активных соединений, содержащих NO-донорный фрагмент тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

4843233 На правах рукописи

СЕРКОВ Игорь Викторович

СИНТЕЗ И СВОЙСТВА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ, СОДЕРЖАЩИХ РГО-ДОНОРНЫЙ ФРАГМЕНТ

2 ? ЯНВ 2911

02.00.10 - Биоорганическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук

Черноголовка, 2010

4843233

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте физиологически активных веществ РАН

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, член-корреспондент РАН, Варфоломеев Сергей профессор, директор Института биохимической Дмитриевич физики им. Н.М.Эмануэля РАН

доктор химических наук, заведующий лаборатори- Формановский Андрей ей, Институт биоорганической химии Альфредович

им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН

доктор химических наук, заведующий лаборатори- Кочетков Константин ей, Институт элементорганических соединений Александрович им. А.Н.Несмеянова РАН

Научный консультант:

доктор химических наук, профессор Безуглов Владимир Виленович

Ведущая организация: Учреждение Российской академии наук

Институт проблем химической физики РАН

Защита состоится «15» февраля 2011 г. в 14 часов на заседании специализированного совета Д 002.102.01 при Учреждении Российской академии наук Институте физиологически активных веществ РАН по адресу: 142432, Московская обл., Ногинский р-н, г. Черноголовка, Северный проезд, 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии наук Института физиологически активных веществ РАН

Автореферат разослан декабря 2010 г. Ученый секретарь специализированного совета

кандидат химических наук Великохатько Т.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Одно из направлений современной медицинской химии - концепция «многофункциональных лекарств». В рамках этой парадигмы понятию лекарственного средства как «магической пули» с максимальной селективностью, действующего на одну, строго определённую мишень, противопоставлена широта фармакологического действия и способность лекарственного вещества взаимодействовать с несколькими мишенями. Многофункциональные лекарства содержат в своей структуре несколько фармакофоров, действие которых дополняет друг друга. Такие препараты имеют более предсказуемый фармакокинетический профиль, у них существенно снижен риск несовместимости с другими препаратами за счёт уменьшения количества прописываемых пациенту лекарств. Одним из направлений в создании таких полифункциональных соединений является введение в молекулу известного лекарственного препарата фрагмента, являющегося генератором оксида азота (N0). N0 - химически активное соединение, которое непрерывно продуцируется в организме из аминокислоты аргинина с помощью КО-сингаз. N0 является внутри- и межклеточным мессенджером со многими важными биохимическими и физиологическими свойствами. Эта маленькая молекула не только передает биохимические сигналы, влияя таким образом на различные биологические системы, включая центральную нервную, сердечно-сосудистую и иммунную системы, но и действует как важный регулятор основных клеточных процессов. Нарушение биосинтеза и метаболизма N0 приводит к тяжелым заболеваниям, таким как инфаркт миокарда, ишемическая болезнь сердца, астма, нейродегенеративные заболевания (болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона), диабет и многие другие. Добавление к молекуле лекарственного средства ЛО-донорного фрагмента придает «старому» препарату новые свойства за счет активации физиологических механизмов, активируемых N0, и предотвращения различные патологий, вызванных отсутствием или недостатком генерации N0. Такая модификация существенно изменяет фармакологические свойства лекарственных веществ,

.1

расширяя области их применения и снижая, в большинстве случаев, присущие немодифицированным соединениям побочные эффекты. Это увеличивает фармакологический потенциал и эффективность лекарственного препарата.

Таким образом, развитие методов создания гибридных препаратов содержащих NO-донорный фрагмент, разработка способов введения NO-гене-рирующей группировки в молекулу биологически активного соединения -актуальные задачи в плане создания новых высокоэффективных лекарственных препаратов. Эти направления вносят существенный вклад в познание химических свойств биологически активных соединений и в теорию дизайна потенциальных лекарственных препаратов.

Данная работа является частью плановой тематики Института физиологически активных веществ РАН и выполнялась в соответствии с общесоюзной программой АН СССР «Простагландины», государственной научно-технической программой «Атеросклероз». Поддержана фантами: РФФИ 94-03-09326-а «Разработка новых способов синтеза эфиров и гиоэфиров природных простагландинов», 00-04-48797-а «Исследование молекулярного механизма и нейрорецепторной активности эндогенных каннабиноидов и их нитро-эфиров как новых эффективных биорегуляторов и потенциальных нейрокор-ректоров», 02-04-22002-НЦНИ-а (PICS 1582) «Изучение отношений структура-активность в ряду новых производных полиненасыщенных жирных кислот как потенциальных нейропротекторов», 04-04-49515-а «Эфиры полиненасыщенных жирных кислот. Синтез и исследование их влияния на ионные каналы в мембране нервных клеток».

Цель и задачи работы. Основная цель - разработка подходов и способов создания гибридных физиологически активных соединений, содержащих NO-донорный фрагмент, на основе биологически активных спиртов как основы потенциальных полифункциональных высокоэффективных лекарственных препаратов в рамках фундаментальной проблемы биоорганической химии - установление связи между структурой биологических соединений и их физиологической активностью. В задачи исследования входили: разработка

2

общих способов введения ЫО-донорной группировки на основе нитратов спиртов в молекулы биологически активных соединений; синтез таких модифицированных соединений на основе различных классов фармакологически значимых агентов; изучение фармакологических свойств синтезированных соединений.

Научная новизна. Разработаны новые конструкции и способы создания гибридных многофункциональных физиологически активных соединений на основе нитратов биологически активных спиртов - МО-донорных фармакофо-ров. Разработаны способы синтеза эфиров и амидов простагландинов и полиненасыщенных жирных кислот с нитратами спиртов и аминоспиртов. Показана универсальность разработанных способов введения МО-донорных группировок на основе нитратов биологически активных спиртов. Впервые синтезированы нитраты природных гидроксиаминокислот и пептиды на их основе. Впервые описано нитрование аллильной гидроксильной группы в молекуле простагландина. Проведено исследование биологических свойств синтезированных гибридных соединений и изучено влияние ГТО-генерирующего фрагмента на их физиологическую активность. Таким образом, создано новое направление в конструировании новых многофункциональных лекарственных препаратов.

Практическая значимость работы. На основе предложенных методов получения гибридных соединений, содержащих нитраты биологически активных спиртов как МО-донорный фрагмент, синтезированы 1,3-динитроглицерино-вые и нитроэтиленгликолевые эфиры, а также амиды с нитроаминоспиртами ряда физиологически активных соединений. В качестве исходных фармако-форов были использованы простагландины, полиненасыщенные жирные кислоты, нестероидные противовоспалительные средства (индометацин, ибупро-фен, ацетилсалициловая кислота), цефалоспорин й. Это означает, что разработанные методы применимы к разнообразным классам биологически активных соединений и могут использоваться при создании гибридных препаратов и с другими фармакофорами. Разработаны препаративные способы синтеза

3

нитросерина и нитротреонина. Проведено нитрование аллильной гидроксиль-ной группы в молекуле простагландина и синтезированы 15-нитраты проста-гландинов. Предложено использование триметилсилильной защитной группы для синтеза фторангидридов простагландинов. Показано, что введение NO-донорной группировки в молекулу фармакофора резко меняет фармакологические свойства последнего, что открывает путь к направленному конструированию новых лекарственных препаратов. Так, созданная на основе 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина Е| мазь оказалась эффективной при лечении ожоговых травм у экспериментальных животных. Автор защищает созданное новое направление в конструировании прототипов новых лекарственных препаратов на основе многофункциональных физиологически активных соединений, содержащих нитраты биологически активных спиртов - NO-донорных фармакофоров, и способы его реализации. Апробация работы. Основные результаты диссертации были представлены на: 9-ой Международной конференции «Простагландины и родственные соединения» (Флоренция, 1994 г.), XIV Международном симпозиуме по медицинской химии (Маастрихт, 1996 г.), Международной научно-практической конференции «Биологически активные вещества и новые продукты в косметике» (Москва, 1996 г.), IV Съезде Белорусского общественного объединения фотобиологов и биофизиков «Молекулярно-клеточные основы функционирования биосистем» (Минск, 2000 г.), 11-ой Международной конференции «Простагландины и лейкотриены: фундаментальная наука и новое клиническое применение» (Флоренция, 2000 г.), I Международной конференции «Химия и биологическая активность азотистых гетероциклов и алкалоидов» (Москва, 2001 г.), Международном симпозиуме «Успехи в синтетической, комбинаторной и медицинской химии» (Москва, 2004 г.), XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 2007 г.), III Съезде фармакологов России (Санкт-Петербург, 2007 г.), Научной конференции «Органическая химия для медицины» (Черноголовка, 2008 г.), VII Всероссийской

научной конференции «Химия и медицина, ОРХИМЕД-2009» (Уфа, 2009 г.),

4

IV Российском симпозиуме «Белки и пептиды» (Казань, 2009), VIII Всероссийской конференции «Химия и медицина» (Уфа, 2010), 5-ой Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, 2010).

Публикации- Основные результаты исследований, проведенных по теме диссертации, изложены в 15 статьях, 16 тезисах докладов и описаниях к 7 патентам и авторским свидетельствам.

Объем диссертации и ее структура. Диссертация изложена на 201 странице машинописного текста, содержит 17 схем, 9 таблиц, 14 рисунков и состоит из введения, 3 глав, выводов и списка цитируемой литературы объемом 329 ссылок. В первой главе «Обзор литературы» обсуждены методы синтеза многофункциональных соединений, содержащих органические нитраты как прототипов гибридных лекарственных препаратов нового поколения. Во второй главе описаны разработанные автором способы создания гибридных многофункциональных физиологически активных соединений на основе нитратов биологически активных спиртов и приведены данные по исследованию биологических свойств синтезированных гибридных соединений и влиянию N0-донорного фрагмента на их физиологическую активность. В третьей главе содержатся экспериментальные данные.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1.1 Концепция гибридных лекарственных препаратов.

содержащих ¡ЧО-донорнын фрагмент.

В связи с актуальной в последнее время концепцией «одно лекарство - много мишеней» нами разработана концепция новых гибридных лекарственных соединений, т.е. соединений, объединяющих в одной молекуле несколько фармакофоров. В качестве первого фармакофора выступает биологически активное соединение (как природное вещество, так и молекула действующего начала известного лекарственного препарата), а второй фрагмент

представляет собой связанную окись азота (N0), которая является важным

5

внутри- и межклеточным регулятором многих основных биохимических процессов и оказывает влияние на различные системы организма, включая центральную нервную, сердечно-сосудистую и иммунную системы. В результате вовлечения в механизм действия гибридного препарата эффектов высвобождаемой окиси азота может повыситься эффективность исходного фармакофора и измениться его фармакологический профиль, в том числе -произойти уменьшение побочных эффектов, присущих немодифицирован-ному соединению. Все это существенно расширяет область возможного применения данных гибридных препаратов. В качестве >ГО-донорного фармакофора нами предложены органические нитраты спиртов, и этот выбор был сделан сознательно по следующим причинам. Во-первых, у органических нитратов отсутствует спонтанная генерация N0, что позволяет направленно доставлять такие соединения в клетки-мишени без потери МО-генерирующей активности. Во-вторых, выделение N0 из нитратов спиртов - это тиолзависи-мый процесс, требующий участия специфических белков, что может обеспечить генерацию N0 в нужное время и в нужном месте. В-третьих, при генерации N0 из органических нитратов высвобождается гидроксильная группа, восстанавливая структуру исходного фармакофора. Образующееся природное или известное лекарственное соединение подвергается метаболизму по стандартным путям, и в организме не происходит накопление «неприродных» фрагментов с неизученными свойствами. И, наконец, в-четвертых, превращение в нитроэфиры меняет фармакокинетику и лигандные свойства исходного фармакофора. Например, соединение становится более липофиль-ным и может легче проникать через мембраны клеток или гематоэнцефали-ческий барьер.

Для введения нитратной группы в молекулу фармакологически активного вещества нами было использовано два подхода. Первый подход основан на прямом нитровании гидроксильных групп с образованием так называемых «безлинкерных» гибридных соединений. В случае отсутствия в молекуле гидроксильной группы или необходимости ее сохранения в конечном гиб-

6

ридном соединении, а также при лабильности исходного соединения в условиях нитрования ¡МО-донорный фрагмент присоединяли с помощью дополнительной группировки. Этот подход приводит к линкерным гибридным соединениям, когда два фармакофора соединены с помощью третьего дополнительного компонента. Принцип построения этих гибридных соединений показан на рис. 1.

Рис. 1

ПРИНЦИП ПОСТРОЕНИЯ ГИБРИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ, СОДЕРЖАЩИХ (ЧО-ГЕНЕРИРУЮЩИЙ ФРАГМЕНТ

В качестве линкеров для присоединения МО-донорного фрагмента мы использовали природные биологически активные спирты (глицерин, этилен-гликоль) и аминоспирты (этаноламин, 3-амино-1,2-пропандиол и другие). Такие природные линкеры были выбраны не случайно, а для того, чтобы в процессе метаболизма сконструированного гибридного соединения в организме не происходило образования чужеродных фрагментов, создающих дополнительную нагрузку на метаболический аппарат организма. Из спиртов были синтезированы соответствующие нитраты, которые вводили в молекулу в качестве МО-донорного фрагмента.

1.2. Общие подходы к синтезу гибридных соединении, содержащих МО-донорнын фрагмент

Наиболее удобным и распространенным способом синтеза нитроксисо-

единений остается прямое нитрование гидроксильной группы азотной кисло-

7

той или ее смесями, если при этом не происходит побочных процессов, связанных с деструкцией молекулы исходного спирта. Этим способом нами синтезированы из аминоспиртов линкеры, содержащие МО-донорный фрагмент (МО-линкеры), а также безлинкерные гибридные соединения, содержащие ЫО-генерирующую нитроксигруппу на основе простагландинов, насыщенных и ненасыщенных жирных кислот и гидроксиаминокислот.

Используя полученные нитраты аминоспиртов, а также 1,3-динитрат глицерина и мононитроэтиленгликоль в качестве МО-линкеров, нами разработаны способы синтеза гибридных соединений на основе простагландинов, полиненасыщенных жирных кислот, цефалоспорина в и ряда нестероидных противовоспалительных препаратов (ацетилсалициловая кислота, аспирин, индометацин, ибупрофен). Все эти соединения имеют карбоксильную группу, что позволило присоединить МО-линкеры с помощью эфирной или амид-ной связи.

2. Синтез биологически активных соединений, содержащих 1ЧО-донорный фрагмент.

2.1. Синтез линкеров, содержащих нитроксигруппы в качестве N0- донорного фрагмента (1ЧО-линкеров1.

В качестве МО-линкеров использованы глицерин, этиленгликоль и различные аминоспирты. Из них сначала были получены соответствующие нит-роксяпроизводные - нитраты аминоспиртов (1-4), 1,3-динитрат глицерина (5) и мононитроэтиленгликоль (6) (рис. 2). Нитраты аминоспиртов (1-4) получены нитрованием соответствующих аминоспиртов в виде азотнокислых солей. В качестве нитрующего агента был использован раствор 100% азотной кислоты в хлористом метилене. Выделившуюся в ходе реакции воду связывали с помощью рассчитанного количества уксусного ангидрида. В результате нерастворимые в хлористом метилене азотнокислые соли нитроксиаминоспир-тов выпадали в осадок и легко отделялись от реакционной массы с помощью простого фильтрования.

Рис. 2

А-0-,

-ЫН,

0'

"N0.

-К—%02

1 2,3-Бнс-нитроксипропиламшг (2,3-динитрат аминопропандиола)

2 нитрат ^-метил-этаноламина 3 нитрат этаноламина ОН

н.

0,К

'N0.

НО'

>10,

Н

4 нитрат 2-(2-аминоэтнламино)этанола 5 1,3-динитрат глицерина 6 мононкгроэтиленгликоль

2.2. Нитраты гндроксиаминокнслот.

Природные гидроксиаминокислоты серин и треонин являются не только распространенными компонентами белков и пептидов, но и обладают собственной биологической активностью. В литературе описаны синтезы нитро-эфиров дипептидов, содержащих серин и треонин. Однако данные дипепти-ды содержали защитную (^-группировку на аминогруппе. Удалить эту защитную группировку после нитрования для получения незащищенного нит-роксидипептида с сохранением нитратной группы невозможно.

Главная трудность синтеза нитратов серина и треонина заключается не в самом химическом процессе нитрования, а в выделении целевых соединений из реакционной смеси. Серин и треонин очень хорошо растворимы в воде и плохо в органических растворителях. Поэтому их невозможно выделить из реакционной смеси с помощью экстракции даже после превращения в нит-роксисоединения. Использование временных защитных группировок по ами-но- или карбоксильной группе для повышения липофильности получаемых аминокислот также не приводит к желаемому результату. Во-первых, такие защитные группы должны обладать взаимоисключающими свойствами: быть устойчивыми в кислых условиях реакции нитрования и удаляться также в кислых условиях. Использовать же защитные группировки, удаляемые в щелочных условиях или в реакциях гидрогенолиза, невозможно из-за лабильности нитроэфирной группировки в этих условиях. Во-вторых, даже если бы удалось подобрать соответствующую защитную группу, опять встала бы проблема выделения целевого продукта, но уже после удаления защиты.

Наиболее удачной нитрующей смесью в синтезе нитратов L-серина (7), D-серина (8) и L-треонина (9) (рис. 3) оказался раствор 100% азотной кислоты в хлористом метилене, ранее использованный для получения нитратов аминоспиртов (1-4).

Рис. 3

о о | о

NHj HNOj NHj HNOj NH, HNO,

7 нитро-Ь-серин 8 нитро-О-серин 9 нитрсЬ-треоник

Следует отметить, что этаноламин и его аналоги достаточно хорошо растворимы в хлористом метилене, что позволило нам использовать гомогенную реакционную смесь с медленным прибавлением раствора аминоспирта к нитрующей смеси. В данном случае исходные аминокислоты можно было растворить только в воде. Однако это привело бы к нежелательному разбавлению азотной кислоты с неизбежным снижением её нитрующей способности, а также к расслоению водной и органической фаз. Поэтому мы прибавляли к нитрующему раствору сухую аминокислоту. Образующаяся в ходе реакции вода растворяла азотнокислые соли нитратов гидроксиаминокислот. По окончании выделившуюся в ходе реакции воду связывали добавлением расчетного количества уксусного ангидрида, целевые соединения выпадали в виде кристаллического осадка и отделялись простым фильтрованием. Следует отметить, что добавление уксусного ангидрида вначале реакции нитрования приводит к образованию нежелательных ацетатов, трудноотделимых от целевых нитратов.

С целью изучения химических свойств полученных нитратов серина и треонина на их основе нами были синтезированы дипептиды - JV-Boc-(L)-пролин-(0)-нитросерин (10), /V-Cbz-(D,L)-npojiHH-(D)-Hinpocepini (11), N-Вос-глицин-(Ь)-нитротреонин (12) и Лг-Вос-(0)-аланин-(В)-нитросерин (13), а также защищенные нитроаминокп :лоты - Лг-Вос-(0)-нитросерин (14) и N-Ктос-(Ь)-нитротреонин (15) (рис. 4).

Рис. 4

гТ"-Лн о^а- нргМ^

ДА 0 0>Ю2 ^Г-О^О 0 N>N0, >сДо 0

ОКО,

11

сА>

0 коко: 0 '-око,

14

он око,

Дипептид Л'-Вос-(Ь)-пролин-(П)-нитросерин (10) был получен конденсацией Л'-Вос-(Ц-пролина (16) с (В)-нитросерином (8) с использованием «хлорформатного» метода через смешанный ангидрид (17), который затем без выделения конденсировали с (О)-нитросерином (8) в дипептид (10) (схема 1). Аналогично из А'-Вос-глицина и (Ь)-ннтротреонина (9) получили дипептид (12), а из Л'-СЬ2-(0,Ь)-пролина и Л'-Вос-(0)-аланина и (О)-нитросери-на (8) - днпептнды (11) и (13).

Схема 1

16 17 10

| - ацетон, изобутилхлорформиат, Е13>!, 5°С, 20 мин; П - нитроксисерин, т.комн., 2 ч

Защищенные по аминогруппе нитроамино1сислоты получали по стандартным методикам синтеза таких производных, а именно с использованием ди-жрем-бутил-дикарбоната при получении соединения (14) и флуоренилме-тилхлорформата - для соединения (15).

2.3. Безлинкерные соединения, содержащие 1ЧО-донорный фрагмент, на основе простагландинов и ненасыщенных жирных кислот.

Простагландины (ПГ) являются полифункциональными соединениями,

для которых характерно проявление широкого спектра физиологической ак-

11

тивности, что препятствует широкому применению природных ПГ в качестве лекарственных препаратов из-за множественных побочных эффектов. Биологические эффекты N0 и ПГ близки по своей физиологической направленности. Поэтому создание гибридных ЫО-генерирующих соединений на основе ПГ представляется весьма перспективным для разработки более эффективных и безвредных препаратов. Нами синтезированы как линкерные, так и безлинкерные представители таких простагландиновых производных.

Представителями безлинкерных соединений на основе ПГ являются 15-нитраты 11-дезокси-ПГЕ1 (20) и его метилового эфира (21) (схема 2). Нами впервые синтезированы 15-нитроксипроизводные простагландинов прямым нитрованием гидроксильной группы 11-дезокси-ПГЕ! (18) или его метилового эфира (19) (см. таблицу 1).

Схема 2

он оыог

18 11-дезоксипростаглашщн Е, (£1 = Н); 20 |5-нитроксн-11,15-дидезоксипростагландик Е, (Я = Н);

19 метиловый эфир 11-дезоксипростаглаидина Е, 21 метиловый эфир \5-шпрокси-Н,15-дидеэокси-(Я - Ме) простагландина Е, (I? = Ме)

О

22 15-ацетокси-11-дезоксипростагландин Е, (Я = Н); ^^ 23 метиловый эфир 15-ацетокси-11-дезоксипростагландина Е; (Я-Ме)

ОАс

Применение стандартной смеси, состоящей из 67% азотной кислоты и уксусного ангидрида, для нитрования гидроксильной группы в ПГ (18, 19) приводило к образованию целевых нитратов (20, 21). Однако выход этих нитратов был невелик и не превышал 35%, при этом образовывалось неожиданно много 15-ацетоксипроизводных (22) и (23). Исключение уксусного ангидрида из реакционной среды позволило избежать образования ацетатов. При незначительном снижении выхода целевых нитратов конверсия простаг-ландина в этом случае составила 80-85% за счёт возврата непрореагировав-

шего ПГ с помощью хроматографии. Замена уксусного ангидрида на концентрированную серную кислоту практически не влияла на выход нитратов, а вместо ацетатов образовывались трудно идентифицируемые продукты дегидратации (табл. 1). Растворитель, в котором проводилось нитрование, практически не влиял на выход и чистоту целевого нитрата. Наилучший результат по чистоте и выходу 15-нитратов достигнут при проведении реакции нитрования концентрированной (более 96%) HNOj в неполярном растворителе. При нитровании небольших количеств ПГ азотную кислоту получали in situ из нитрата натрия или калия и серной кислоты. При использовании различных нитрующих смесей и способов нитрования выходы нитратов свободной кислоты (20) и метилового эфира (21) были практически одинаковы. Однако следует отметить, что метиловый эфир (21) устойчив при хранении, тогда как кислота (20) в отсутствие растворителей довольно быстро подвергается разложению с потерей молекулы азотной кислоты.

Таблица I. Условия нитрования и выходы 15-нитрокси-11,15-

дидезоксипростагландинов Е|.

Условия реакции Выход нитрокси-производного, % Побочные продукты

NaN03, H2S04, СН2С12, 20°С, 1 ч 65-75 практически отсутствуют

HNOj (100%), СН2С12> 10°С, 40 мин 75-85 практически отсутствуют

HNO, (67%), диоксан, 20°С, 4 ч 15-25 исходный ПГ

HN03 (67%), Ас20, диоксан, 20°С, 4 ч 22-34 15-0 Ас

HN03 (67%), H2S04, диоксан, 20°С, 4 ч 25-30 продукты дегидратации

Прямым нитрованием азотной кислотой гидроксильной группы было синтезировано и безлинкерное соединение на основе гидроксипроизводного ненасыщенной жирной кислоты - 12-нитрорицинолевая кислота (24).

Рис. 5

24 ! 2-нитрорипинолевал кислота

13

2.4. Гибридные соединения, содержащие 1ЧО-донориый фрагмент.

на основе нестероидных противовоспалительных препаратов.

Нестероидные противовоспалительные препараты (^АГО) (аспирин, индометацин, напраксен, ибупрофен и др.) в течение многих лет применяются в качестве жаропонижающих и противовоспалительных средств. Присоединение к структуре ЫБАШ фрагмента, генерирующего N0, позволило создать новый класс противовоспалительных препаратов, так называемых N0-генерирующих нестероидных противовоспалительных препаратов (М0-М8АГО). Такие гибридные соединения, сохраняя противовоспалительную активность исходного препарата, обладают гораздо меньшим отрицательным воздействием на желудочно-кишечный тракт. Предполагается, что ЫО-К^АГО защищают желудочно-кишечный тракт путем локального выделения N0, приводящего к усилению кровообращения в слизистой оболочке. Кроме того, N0 сам обладает гастропротекторными свойствами. Нами синтезирован ряд N0-генерирующих ЫБАШ, содержащих в качестве МО-донора нитроксигруппу, присоединенную к основной молекуле через аминоспирт в качестве линкера (25-31), а также 1,3-ДНГ-эфиры ибупрофена (32) и индометацина (33) (рис. 6).

Рис. 6

25 (Я = Н) нитроэтаноламид индометацина;

26 (Я = Ме) /У-метнлнитроэтаноламид индометацина

27 амид индометацина и 2-(2-аминоэтиламино)нитроэтанола

33 ],3-динитроглицериновый эфир индометацина

0>Ю,

•ом О,

28 нитроэтаноламид ибупрофена

29 амид ибупрофена я 1,2-дюштрата З-амннопропаншюла

Я—«о,

<ж о

30 (И = Ас) нитроэтаноламид ацетилсалициловой кислоты;

31 (Я = Н) нитроэтаноламид салициловой кислоты

\\ //

о око,

о

сжо2

32 1,3-динитроглицериновый эфир ибупрофена

Амиды ивдометацииа (25-27) синтезировали по методу «смешанных ангидридов» реакцией с изобутилхлорформиатом с последующей конденсацией с нитратами аминоспиртов (схема 3). Выход целевых соединений составлял 65-85%.

Схема 3

34 индоме7ацлн 35 25 нитроэтаноламид индомстацина

/ - ацетоннтрил, иэобугнлхлорформиат, EtзN, 5°С, 20 мин; И - ннтроэтаноламин, т.комн., 2 ч

Использование этого метода для синтеза производных ибупрофена и салициловой кислоты не привело к желаемому результату. Реакция амидиро-вания либо проходила с выходом не более 40%, либо основным продуктом реакции был изобутиловый эфир кислоты. Не дало положительных результатов и использование высокореакционноспособных имидазолидов. Наиболее удачным оказался способ синтеза через промежуточные хлораншдриды (схема 4).

Схема 4

36 ибупрофен 37 28 нитроэтаноламид ибупрофена

1 - хлороформ, 50С12. т.кип., 4 ч; П - хлороформ, нитроэтаноламинамин, Н^М, т.комн., 18 ч

Сначала из ибупрофена (36) кипячением с БОСЬ в хлороформе синтезировали хлорангидрид (37). Затем реакционную смесь упаривали, получившийся хлорангидрид конденсировали с нитроэтаноламином (3) с образованием нит-

15

роэтаноламида ибупрофена (28). Аналогично бьши синтезированы амиды (29—31). 1,3-ДНГ-эфиры ибупрофена (32) и индометацина (33) синтезированы по методу «смешанных ангидридов» с арилсульфокислотами, а эфир (32) - также через хлорангидрид (37).

2.5.1УО-донорные производные цефалоспорина в.

Цефалоспорины широко применяются в медицине и по структуре и механизму действия близки к пенициллинам. Цефалоспорин О также используется для ферментативного получения дезацетоксицефалоспорановой кислоты и синтеза разнообразных пролекарств. В последнем случае присоединенный к 3'-углеродному атому цефалоспорина фрагмент молекулы лекарственного соединения высвобождается в организме за счет ферментативной реакции. Значительно меньше внимания уделяется производным цефалоспоринов по карбоксильной группе. В качестве прототипа нового класса антибиотиков, содержащих ЫО-донорный фрагмент, был выбран 1,3-динитроглицериновый эфир цефалоспорина С (40), который является альтернативой синтезировано-го ранее конъюгата цефалоспорина с 3-морфолиносидноимином. Его синтезировали по методу «смешанных ангидридов» с арилсульфокислотами, в данном случае с 2,4,6-триизопропилбензолсульфокислотой (схема 5).

Схема 5

Сначала реакцией цефалоспорина в (38) с ТРБП синтезировали смешанный ангидрид (39), который затем в присутствии ДМАП конденсировали с 1,3-ди-

16

нитратом глицерина (5) с образованием 1,3-ДНГ-эфир цефалоспорина в (40).

2.6. Синтез гибридных линкерных соединений на основе ПГ и ПНЖК.

Для синтеза гибридных соединений на основе ПГ и полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) с помощью ЬЮ-линкера применены два подхода. В первом случае использовали нитроаминоспирты (1-4), а также 1,3-ди-нитрат глицерина (5) и мононитроэтиленгликоль (6), которые присоединяли к основной молекуле в виде сложноэфирной или амидной группировки, то есть присоединяли N0-линкеры. Во втором случае присоединяли только линкеры (аминоспирты или этиленгликоль), а затем проводили нитрование полученного амида или эфира.

2.6.1. Амиды ПГ и ПНЖК с ннтратами амнноспнртов.

Амиды ПГ с нитратами аминоспиртов получали методом «смешанных ангидридов» по стандартной методике (схема 6). Для этого ПГ, например 11-дезокси-ПГЕ| (18), превращали в смешанный ангидрид (41), который без выделения вводили в реакцию с нитроэтаноламином (3) с образованием нитро-этаноламида 11 -дезокси-ПГЕ| (42).

Схема 6

он

18 11-асзоксипростагланднн Е,

42 нитроэтаноламнд 11-дезоксипростагланлина Е, / - ацетонитркл, изобутилхпорформиат, Е13К, 5СС, 20 мнн, аргон; и - нитроэтаноламин, т.комн., 2 ч

Аналогично синтезированы нитроэтаноламиды простагландинов Е2 (43),

р2а (44), арахидоновой (нитроанандамид) (48) и эйкозапентаеновой (50) кис-

17

лот, а также амиды ПГЕ2, ПГР2а, 11-дезокси-ПГЕ| и арахидоновой кислоты с 1,2-динитратом 3-амино-1,2-пропандиола (45, 46, 47 и 49) (рис. 7).

Рис. 7

43 нитроэтаноламид простагландина Е2

оыо,

око,

но он

44 нитроэтаноламид простагландина Р,,,

45 амид простагланлина Е, и 1 Д-динктрата 3-амино-1,2-пропандшш1

ОКО,

46 амид простагландина Р2о и 1,2-динитрата З-амино-1,2-пропанднола

ОКО,

око2

47 амкд 11-дезоксипростагландина Е, и 1,2-динитрата 3-амино-1,2-пропандиола

ОШ,

48 нитроэтаноламид арахидоновой кислоты (нитроанандамид)

49 амид арахидоновой кислоты и 1,2-динитрата 3-амино-!,2-пропандиола

ОШг

50 нитроэтаноламид эйтсоэапентаеновон кислоты

Для синтеза амидов жирных кислот с нитратами аминоспиртов был также использован метод активации карбоксильной группы через образование высоко реакционноспособного пентафторфенилового эфира (схема 7). По этому методу, например, из арахидоновой кислоты (51) реакцией с бис-пен-тафторфенилкарбонатом (52) получили пентафторфениловый эфир (53), который далее реакцией с нитроэтаноламином (3) превратили в нитроанандамид (48). Преимущество данного способа активации карбоксильной группы заключается в возможности предварительной наработки относительно устойчивого пентафторфенилового эфира жирной кислоты.

18

Схема 7

Нитроанандамид (48) и нитроэтаноламид эйкозапентаеновой кислоты (50) были синтезированы также вторым способом (схема 8), а именно нитрованием соответствующих этаноламидов. Так, из эйкозапентаеновой кислоты (54) и этаноламина через промежуточный смешанный ангидрид (55) был синтезирован этаноламид эйкозапентаеновой кислоты (56), из которого реакцией нитрования получали нитроэтаноламид эйкозапентаеновой кислоты (50). Преимущество этого метода заключается в том, что по ходу синтеза получаются этаноламиды ПНЖК, которые можно использовать как соединения сравнения при проведении биологических испытаний.

Схема 8

/ - МеСЫ, изобугилхлорформнат, 5°С, 20 мин, аргон; Н - этаноламин, тя-омн., 2 ч; т- бензол, Ас,0, НШ^ 5-10°С, 30 мин

2.6.2. Эфнры ПГ и ПНЖК с нитратами спиртов.

При создании гибридных соединений кроме нитроксиаминов, присое-

19

диняемых через амидную связь, нами использованы «эфирные» КО-линкеры: 1,3-динитрат глицерина (5) и мононитроэтиленгликоль (6). Модификация карбоксильной группы ПГ путем превращения ее в эфиры с простыми или сложными спиртами часто используется для создания производных ПГ с целью модификации фармакологического профиля последних. В каждом конкретном случае для получения таких производных используются специально разработанные способы, так как универсальные способы синтеза сложных эфиров ПГ практически отсутствуют. Большинство методов синтеза эфиров карбоновых кислот основывается на активации карбоксильной группы с последующей реакцией образовавшегося активированного производного с соответствующим спиртом. Специфической проблемой в синтезах производных по карбоксильной группе таких полифункциональных соединений, как ПГ, является необходимость сохранения остальных функциональных групп (гид-рокси- и кетогруплы) при активации карбоксильной группы.

2.6.2.1. Синтез 1.3-динитроглицериновых эфиров ПГ.

1,3-Динитроглицериновые эфиры (1,3-ДНГ-эфиры) ПГ были получены этерификацией природных ПГ 1,3-динитратом глицерина (5) через активацию карбоксильной группы исходного ПГ. Разработано и исследовано несколько способов такой этерификации: 1 - через смешанные ангидриды с арилсульфокислотами; 2 - через активированные ацилимидазолиды; 3 - путём реакции ПГ с 1,3-динитратом глицеринхлорформиата с последующей перегруппировкой в искомый эфир; 4 - через превращение ПГ в высоко реак-ционноспособный фторангидрид.

1. Арилсульфохлориды достаточно давно применяются как конденсирующие агенты в реакциях этерификации карбоновых и аминокислот, а также для образования фосфоэфирной связи в нуклеотидном синтезе. В зависимости от силы карбоновой кислоты и нуклгофильности спирта реакция этерификации протекает либо через образование промежуточного смешанного ангидрида, как в случае бензойной кислоты, либо через арилсульфонат спир-

та, как было постулировано для этерификации свободных аминокислот. В случае реакции ПГ с арилсульфохлоридами реакция, по-видимому, проходит через образование смешанного ангидрида ПГ и арилсульфокислоты. Так, все наши попытки получить этиловый эфир ПГ реакцией переэтерификации этилового эфира р-толуолсульфокислоты не привели к целевому соединению, а ТСХ-анализ продуктов реакции не выявил образования симметричного ангидрида ПГ. Из этого можно сделать вывод, что сначала происходит образование смешанного ангидрида ПГ с арилсульфокислотой, который затем подвергается нуклеофильной атаке спиртом с образованием сложного эфира ПГ. По этому методу сначала для предотвращения возможных реакций арилсульфо-хлорида с 1,3-динитратом глицерина простагландин, в данном случае ПГЕ2 (57), превращали в смешанный ангидрид (58) реакцией с арилсульфохлори-дом (р-толуолсульфохлоридом (ТвС1) или 2,4,6-триизопропилбензолсульфо-хлоридом (ТР8С1)) в присутствии триэтиламина (схема 9). После завершения данной стадии прибавляли 1,3-динитрат глицерина (5) и каталитическое количество диметиламинопиридина (ДМАП). В результате получали целевой 1,3-ДНГ-эфир ПГЕ2 (59).

Схема 9

57 простагландин Б, 58

59 1,3-диюпроглицериновый эфир простагландина / - толуол-аиетон, Тг,С1, Ес3Ы, тко^н., 10 мин, аргон; И - 1,3-динитрат глицерина, ДМАП, т.комн., I ч

Недостаток этого метода - побочная реакция хлорирования аллильного

гидроксила в положении 15 молекулы ПГ, особенно при использовании ТзС1,

что приводит к загрязнению целевого соединения трудноотделяемыми при-

21

месями и к уменьшению выхода эфира. Попытки избежать нежелательной реакции хлорирования заменой хлорангидридов арилсульфокислот на их активированные амиды - /7-толуолсульфонилимидазол, триизопропилсульфо-нилимидазол, триизопропилсульфонилтриазол - оказались неудачными.

Этим методом помимо эфира 59 были синтезированы 1,3-ДНГ-эфиры простагландинов Е1 (60), Ещ (61), Аг (62), А1 (63) и 02 (64) (рис. 8).

Рис. 8

о /ОКОг

60 1,3-датитроглниернновый эфир простагланлина Е, (1,3-ДНГ-ПГЕ,)

(ЖО,

оыо,

61 1,3-дннитроглииериновый эфир простагланлина Р2о(1,3-ДНГ-ПГТ2а)

62 1,3-дкннгроглицеркновый эфир простагланлина А, (1,3-ДНГ-ПГАг)

шо2

омо,

63 1,3-линитроглицериновый эфир гтростагландина А; (1,3-ДНГ-ПГА,)

О он

64 !,3-пинитропшцериновый эфир простагланлина П.З-ДНГ-ПШ,}

2. Высоко реакционноспособные имидазолиды широко применяются для синтеза амидов и сложных эфиров кислот. В случае получения сложных эфиров необходимы кислотные катализаторы. Этот метод был применен нами для синтеза 1,3-ДНГ-эфиров ПГ (схема 10).

Схема 10

но

он ч^ "и он

57 65

/ - ааетонитрил, С1Л, т.комн., 1.5 ч, аргон; Н - 1,3-дннитрат глицерина, РуНС1 т.комн., 2 ч

Сначала реакцией ПГЕг (57) с 1,1'-карбонилдиимидазолом (СЭ1) в ацс-тонитриле получали имидазолид (65), который без выделения конденсировали с 1,3-динитратом глицерина (5) в присутствии гидрохлорида пиридина и получали эфир ПГ. Однако выход целевого эфира (59) был невысок (30-45%), что, по-видимому, связано с низкой реакционной способностью 1,3-динитра-та глицерина (5).

3. Смешанные ангидриды с производными угольной кислоты часто используются для активации карбоксильной группы при получении амидов кислот. Кроме того, такие смешанные ангидриды под действием ДМАП могут претерпевать перегруппировку в сложный эфир и поэтому иногда применяются для получения труднодоступных эфиров. Это свойство смешанных ангидридов использовано нами для получения 1,3-ДНГ-эфиров ПГ (схема 11).

Схема 11

5 66 1,3-ди-(?-нитрат глицеринхлорформиата

О о

57 67

(- толуол, фосген, ЕцМ; и - этклацетат, 66, Е^Ч 0°С, 30 мнн, аргон; Ш - ДМАП, 0°С, 1 ч

Сначала из фосгена и 1,3-динитрата глицерина (5) был синтезирован 1,3-динитрат глицеринхлорформиата (66) - достаточно устойчивое соединение, которое может быть дополнительно очищено перегонкой в вакууме. Реакцией хлорформиата (66) с Г1ГЕ2 (57) получили смешанный ангидрид (67), который не выделяли. К реакционной массе прибавляли ДМАП, что приводило к перегруппировке смешанного ангидрида в целевой 1,3-ДНГ-эфир (59).

При использовании свежеприготовленного хлорформиата (66) выход реакции этерификации близок к количественному.

4. В практике для синтеза сложных эфиров широко применяются гало-идангидриды, в частности хлорангидриды кислот. Однако ПГ наряду с карбоксильной группой содержат в своей структуре дополнительные гидрок-силъные группы, вовлекаемые в побочные реакции при получении хлоран-гидридов. Из-за этого галоидангидриды ПГ не привлекли внимание химиков как активированные производные для синтеза эфиров простагландинов. Нами при изучении реакции фторирования простагландинов было найдено, что превращение ПГ в его фторангидрид можно провести с помощью четырёх-фтористой серы (8Р4) и фторирующих агентов на её основе, в частности мор-фолиносульфотрифторида (МСТФ) (рис. 9), в мягких условиях. Полученный фторированием ПГАг в качестве промежуточного соединения фторангидрид 15-фтор-15-дезокси-ПГА2 был превращен гидролизом в слабощелочной среде в 15-фтор-15-дезокси-ПГА2 и использован при синтезе 15-фтор-15-дезокси-ПГЕ2 в виде свободной кислоты.

Рис. 9

sf, о n-s-f

f

/~\ ? I. nAN

WTF V/T ЛЛР

f 1 f N f

четырехфтористая морфолинсупьфо- N-трйметалсилил- иианурфторид

сера трифторнд (МСТФ) морфолин (ТМС-морфотш)

Однако, как бьшо сказано выше, молекула ПГ помимо карбоксильной группы содержит одну или две гидроксильные группы, которые также подвергаются реакции фторирования аминотрифторсульфуранами. Поэтому для использования этого метода в синтезе производных по карбоксильной группе природных ПГ нами разработаны схемы синтезов фторангидридов, не затрагивающие гидроксильные группы молекулы. Для защиты гидроксильных групп применили временную их защиту силильными группировками, такими как отре/я-бутилдиметилсилильная (BDMS) и триметилсилильная (TMS), которые удаляли после получения соответствующих производных по

24

карбоксильной группе ПГ.

При использовании ОМВЗ-защитной группировки простагландин, например ПГАг (68), исчерпывающе силилировали трет-бутилдяметтхлор-силаном (ОМВЕС1) в присутствии имидазола (схема 12). Полученный БМВБ-эфир 15-ОМВ5-ПГА2 (69) обрабатывали раствором 30%-ной Н-О^ в метаноле. В этих условиях защитная силильная группировка удаляется только с карбоксильной группы. Аналогичный результат получается, если вместо раствора перекиси водорода в метаноле использовать водный раствор 1М соляной кислоты в ТГФ. Эта реакция проходит значительно быстрее (примерно за 1 минуту), в то время как при использовании перекиси водорода для завершения реакции требуется около часа. Однако при использовании соляной кислоты из-за быстроты процесса затруднён контроль протекания реакции гидролиза, и при небольшом удлинении времени реакции происходит частичное деблокирование гндроксильной группы. Полученный 15-ВМВЗ-ПГА2 со свободной карбоксильной группой (70) фторировали МСТФ с образованием фторангидрида (71) при сохранении силильного эфира на гидроксильной группе. Затем реакцией нуклеофильного замещения с 1,3-динитратом глицерина (5) в присутствии триэтиламина синтезировали эфир (72). Силильную защитную группировку с гидроксильной группы удаляли кислым гидролизом и получали 1,3-ДНГ-эфир ПГА2 (62).

Схема 12

о

о

и

оыо,

>N0.

/ - ДМФА, ОМВБО, имидазол, т.комн., 18ч;п-ТГФ, 1МНС1, т.комн., 1.5 иин; ш - СН,С1Д, МСТФ, аргок, ~78°С, 40 мин; /V - ацетон, 1,3-диннтрат глицерина, у - ТГФ, НЬ'

Недостатком этого метода является его многостадийность и, главное, необходимость проведения хроматографической очистки полученных промежуточных силилированных простаноидов. Более предпочтительной была бы такая силильная группа, которая удалялась в ходе реакции фторирования только с карбоксильной группы и сохранялась бы на гидроксильных группах. Наше внимание привлекла триметилсилильная защитная группировка. Сложные триметилсилиловые эфиры неустойчивы в условиях реакции фторирования MSTF, однако при этом происходит также деблокирование и гидроксильных групп. После серии экспериментов нами было найдено, что если в качестве фторирующего агента использовать не сам MSTF, а его смесь с А-триме-тилсилилморфолином (TMS-морфолин) в соотношении 1:1, то защитная TMS-группировка на гидроксильных группах сохраняется, в то время как на карбоксильной она замещается на фтор с образованием фторангидрида. Согласно приведенной схеме, раствор ПГЕ2 (57) в ТГФ обрабатывали смесью гексаметилдисилазана и триметилхлорсилана (схема 13). Полученное TMS-производное ПГЕ2 (73) фторировали эквимолярной смесью MSTF и TMS-морфолина. Полученный фторангидрид (74) реакцией с 1,3-динитратом глицерина (5) в присутствии триэтиламина превращали в эфир (75) и после кислого гидролиза TMS-эфира получали целевой 1,3-ДНГ-эфир ПГЕ2 (59).

Схема 13

57 73

74 75

i - ТГФ, гексаметалдисилазан, TMSC1, т.комн., 2 ч, аргон; ii - CHXI,, МСТФ, TMC-морфолин, 4°С, I ч, затем 73, -65°С, 30 мни, аргон; Ш • бензол, 1,3-диитрат глицерина, EtjN, ДМАП, х.комн., 3 ч; МеОН, 3N HCl, т.комн., 30 мин

Использование BDMS- или TMS-защитной группировки зависит от

26

структуры конечного соединения. Как показали наши исследования, при получении производных по карбоксильной группе природных ПГ предпочтение следует отдать использованию ТМБ-защитной группировки. Для синтеза же карбоксипроизводных фтордезоксианалогов ПГ лучше подходит ЕШМ8-за-щита. В этом случае одновременно с удалением ВОМЗ-защитной группировки с карбоксильной группы можно частично деблокировать и гидроксильные группы (в основном аллильную гидроксильную группу при С-15 атоме ПГ), что не удаётся сделать в случае ТМБ-эфиров. Затем в реакции фторирования моносилилированного простаноида действием МСТФ происходит образование фторангидрида при одновременном фторировании и гидроксильной группы. Этим методом из ПГЕ2 (57) был получен 1,3-ДНГ-эфир 15-фтор-15-дезокси-ПГЕз (80) (схема 14). ПГЕ2 исчерпывающе силилировали с образованием производного (76). Полученный силилированный ПГ (76) обрабаты

Схема 14

о,

СЮМВБ

омэ,

око.

эмвзо

80 1,3-динитроглицериновый эфир 15-фтор-15-дезоксипростагландина Е, I - ДМФА, ОМВЭИ, имидазол, 25°С, 18 ч; и - ТГФ, 1М НС1, 5 мин; Ш - СН;С(,, МСТФ, -78°С. I ч; IV - бенэоя, 1,3-динитрат глицерина, Ег3М, ДМАП, т.комн., 3 ч; V - ТГФ, 50%-ая НГ, т.комн., 1 ч

вали раствором 1М соляной кислоты в ТГФ в течение 5 минут. При этом удаляется силильная защита с карбоксильной группы, а также с одной из гидрок-

сильных групп и образуется смесь моносилильных производных Г1ГЕ2 -11-БМВЗ-ПГЕг (77а) и 15-БМВ8-ПГЕ2 (77Ь) (с преобладанием изомера со свободной гидроксильной группой в положении 15), которую разделяли хрома-тографически. Выделенный таким образом 11-ОМВ5-ПГЕ; (77а) фторировали М5ТР. Синтезированный фторангидрид силилированного 15-фтор-15-дез-окси-ПГЕ2 (78) конденсировали с 1,3-динигратом глицерина (5) и получали эфир (79). Защитную силильную группировку удаляли с помощью плавиковой кислоты и получали 1,3-ДНГ-эфир 15-фтор-15-дезокси-ПГЕ2 (80). В качестве фторирующего агента при синтезе фторангидридов можно также использовать цианурфторид, который реагирует исключительно с карбоксильной группой, не затрагивая при этом гидроксильные группы. Однако эта реакция проходит в присутствии пиридина в качестве основания, отчего при синтезе фторангидридов этим методом частично происходит катализируемая пиридином реакция получившегося фторангидрида со свободными гидрок-сильными группами молекулы того же ПГ, что приводит к смеси трудно идентифицируемых продуктов внутри- и межмолекулярной конденсации и, как следствие, к резкому снижению выхода целевого соединения. Однако цианурфторид оказался удобным реагентом при синтезе фторангидридов ПНЖК, не имеющих в своей структуре гидроксильных групп, и был использован нами для синтеза их производных (см. ниже).

Сравнение приведённых способов синтеза 1,3-ДНГ-эфиров простаглан-динов показывает, что наилучшие результаты достигаются при использовании метода, основанного на реакции перегруппировки смешанного ангидрида простагландина и 1,3-динитрата глицеринхлорформиата (66) (метод 3). Выход целевого соединения при этом способе конденсации приближается к максимальному (-90-95%), особенно при использовании свежеполученного хлорформиата. Однако получение соответствующего хлорформиата требует применения высокотоксичного фосгена. Хороший выход (около 75%) достигнут при использовании в качестве промежуточных соединений высокореакционных фторангидридов ПГ (метод 4). Тем не менее, данный способ требу-

28

ет предварительного получения ТМБ-эфиров ПГ с последующей процедурой удаления силильной защиты. Наиболее практичным способом синтеза 1,3-ДНГ-эфиров ПГ оказался метод с использованием в качестве промежуточных соединений смешанных ангидридов с арилсульфокислотами (метод 1). Этот способ позволяет получать 1,3-ДНГ-эфиры с неплохим выходом (65-70%), без дополнительных процедур и использования опасных реагентов. Наименее удачным оказался метод активации карбоксильной группы через имидазоли-ды (метод 2). Выход в этом случае составлял не более 35-40%, что, по-видимому, связано с особенностью 1,3-динитрата глицерина.

2.6.2.2. 1,3-Динитроглинернновые н шггроэтнлеиг.чнколевые эфипы ЖК.

Используя разработанные методы синтеза, мы получили также 1,3-ДНГ-эфиры ряда жирных кислот - арахидоновой (81), докозагексаеновой (82), эйкозапентаеновой (83), а,а-диметиларахидоновой (84), линолевой (85), линоленовой (86), пальмитиновой (87), каприловой (88) и лауриновой (89) (рис 10), а также мононитроэтиленгликолевые зфиры арахидоновой (90), докозагексаеновой (91), эйкозапентаеновой (92), а,а-диметнларахидоновой кислот (93), а,а-диметилэйкозапентаеновой кислот (94) и а,а-диметил-докозагексаеновой кислот (95) (рис 11).

Рис. 10. 1,3 -Динитроглицериновые эфиры жирных кислот о

81 1,3-динитроглицершшвый эфир арахидоновой кислоты (1,3-ДНГ-АК)

82 1,3-дкшгсроглицериновый эфир докозагсгсаеновой кислоты (1,3-ДНГ-ДГК)

омо.

,0\0

око.

око.

83 1,3-динитроглицериновый эфир эйкозапентаеновой кислоты (1,3-ДНГ-ЭПК)

84 1,3-диюгтроглицериновый эфир а,а-диметил-арахидоновой кислоты (1,3-ДНГ-ДМАК)

око,

око,

ош,

око,

85 1,3-дннитроглицериновый эфир линолевой кислоты (1,3-ДНГ-ЛНК)

о

86 1,3-динитроглицериновый эфир лнно.чековой кислоты (1,3-ДНГ-ЛНЛК)

87 1,3-динитроглииериновый эфир Пальмитиновой кислоты (1,3-ДНГ-ПК)

о

о Г0К0'

шо,

оно,

88 1,3-дитоггроглицеринооын эфир каприловой кислоты (1,3-ДНГ-КК)

89 1,3-яннитроглкцеркновыЙ эфир ла>риковой кислоты (1,3-ДНГ-ЛК)

Рис. 11. Нитроэтиленгликолевые эфиры полиненасыщенных жирных кислот о

92 нитроэтиленгликолевый эфир арахидоновой кислоты (НЭГ-АК)

слухах,

93 яитроэтиленгликолевый эфир докозагехсаеновой кислоты (НЭГ-ДГК)

омо,

94 нитроэтнленглнколевый эфир эйкозапентаеиовой кислоты (НЭГ-ЭПК)

ОЫО,

95 нитроэтиленгликолевый эфир а,сс-диме-тилэрахидоновой кислоты (НЭГ-ДМАК)

омо2

94 нитроэтиленгликолевый эфир а,и-днметил-эйкозапентаеновой кислоты (НЭГ-ДМЭПК)

ОКО,

95 нэпроэтиленглшфлевый эфир а,а-диметил-докозагексаеновой кислоты (НЭГ-ДМДГК)

Представленные жирные кислоты не имеют в своей структуре гидрок-сильных групп. Поэтому при синтезе их 1,3-ДНГ и НЭГ эфиров нами был широко применен и «галоидангидридный» способ активации карбоксильной группы. Были использованы как фторангидриды, так и хлорангидриды этих кислот. Фторангидриды получали реакцией кислоты с избытком цианурфто-рида в присутствии пиридина при комнатной температуре. Фторангидрид образуется примерно за 1 час и его используют без выделения. Хлорангидриды кислот получали реакцией с избытком тионилхлорида в бензоле при комнатной температуре (примерно 2 ч), избыток тионилхлорида удаляли в вакууме. Синтезированные галоидангидриды кислот конденсировали со спиртом в

30

присутствии ДМАП. Через галоидангидриды получали также и этиленглико-левые эфиры, которые нитрованием азотной кислотой превращали в нитро-этиленгликолевые эфиры.

2.6.3. Химические свойства 1,3-ДНГ-эфиров ПГ.

Химические свойства синтезированных 1,3-ДНГ-зфиров ПГ изучены в реакциях химического перехода между ПГ различных типов и получения их производных, в частности в реакции гидроксиаминометилирования.

Схема 15

98 !,3-динитроглицериновьгй эфир 99 ! ,3-динитроглицериновый эфир

5-йодпростагландина [, (1.3-ДНГ-5-1-ПГЕ,) простагландина I, (1,3-ДНГ-ПП2)

Восстановление кетогруппы простагландинов типа Е позволяет перейти к простагландинам типа Р. Так, из 1,3-ДНГ-ПГЕ( (60) действием боргидри-да натрия в метаноле были получены 1,3-ДНГ-ШТ1 (96а,Ь) в виде смеси а- и Р-изомеров, что свидетельствует об устойчивости нитрогруппы глицериновой части молекулы в реакции восстановления данным реагентом (схема 15). Соотношение получаемых изомеров практически равное, с очень незначительным преобладанием а-изомера. 1,3-ДНГ-эфиры других менее доступных простагландинов также могут быть получены по стандартным методам превращений между типами простагландинов (схема 16). Так, 1,3-ДНГ-эфир ПП2 (1,3-ДНГ-эфир простациклина) (99) синтезирован из эфира (61) циклиза-

цией с йодом в эфир (98) с последующим дегидроиодированием в присутствии 1,8-диазабйцикло[5.4.0]ундец-7-ена (БВЦ). Реакцией с гидроксиламином из эфира (60) получен 1,3-ДНГ-эфир 9-оксиимино-ПГЕ1 (1,3-ДНГ-ПГЕгОХ) (97), также в виде смеси син- и анти-изоме-ров (схема 11). Однако в отличие от восстановления кето-труппы, здесь реакция проходит с преобладанием актн-изомера. Следует отметить, что попытки получить 1,3-ДНГ-эфиры 9-оксииминопростагландинов Е1 и Е2 реакцией самих 9-оксииминопростаглан-динов с 1,3-динитратом глицерина (5) давали гораздо худший результат: выход конечного продукта драматически падал независимо от применяемого способа этерификации. В щелочных условиях 1,3-ДНГ-эфиры ПГ не устойчивы. Так, нам не удалось получить 1,3-ДНГ-эфир ПГЕ2 (59) из 1,3-ДНГ-эфи-ра ПГА2 (62). По стандартной процедуре превращения простагландинов типа А в тип Е первая стадия заключается в эпоксидировании двойной связи в циклопентановом кольце молекулы ПГ действием перекиси водорода в присутствии гидроокиси калия. Оказалось, что в этих условиях из 1,3-ДНГ-эфи-ра ПГА2 (62) получается исключительно 10,11-эпокси-ПГА2 (100) (схема 17), а не его ДНГ-эфир. Специальным экспериментом (инкубирование 1,3-ДНГ-эфира ПГА2 (62) с Н202 в отсутствии КОН) показано, что сама перекись водорода без основного катализа не вызывает деградации ДНГ-эфира или его гидролиза.

3. Биологические свойства синтезированных соединений. 3.1. Биологические свойства 1,3-дииитроглнцериновых и нитроэтиленгликолевых эфиров ПНЖК.

Была изучена антиагрегационная активность синтезированных 1,3-ДНГ-эфиров ПНЖК 81, 82, 84-87 (табл. 2). Наиболее выраженную антиагрегаци-

32

Схема 17

о

о

онную активность в случае АК-индуцированной агрегации проявил 1,3-ДНГ-ДГК (82). В случае АДФ-индуцированной агрегации этот эфир также заметно снижал способность тромбоцитов к взаимодействию друг с другом. 1,3-ДНГ-АК (81) в отличие от самой свободной АК, которая является проаг-регантом, не индуцировал агрегацию тромбоцитов. Он эффективно ингиби-ровал как АК-, так и АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов при концентрации 0,1 мг/мл. Таким образом, включение в молекулу АК динитро-глицеринового фрагмента привело к полной потере этой кислотой проагрега-цнонных свойств. 1,3-ДНГ-эфиры других жирных кислот также в той или иной степени ингибировали межтромбоцитарное взаимодействие (табл. 2).

Табл. 2. Влияние 1,3-ДНГ-эфиров жирных кислот на агрегацию тромбоцитов человека in vitro, индуцированную АК (1) и АДФ (2) (Лтах, %)

Соединение Концентрация исследуемого вещества, мг/мл

0 (контроль) 0.1 0.01 0.001

1 2 1 2 1 2 1 2

1,3-ДНГ-АК (81) 75±3 79±3 12±3 26±2 50±3 58±3

1,3-ДНГ-ДГК (82) 54±3 64±4 16±2 48±5 23±1 67±7 43±3

1,3-ДНГ-ДМАК (84) 64±3 69±4 48±3 59±2 63±1 65±5

1,3-ДНГ-ЛНК (85) 55±2 61±8 47±3 47±3 57±3 57±3

1,3-ДНГ-ЛНЛК (86) 54±3 59±6 30±3 39±6 42±3 42±3 46±2 46±2

1,3-ДНГ-ПК (87) 53±3 59±1 29±4 56±2 51±2 57±2 48±5 57±2

Было показано, что НЭГ-АК (92) обладает выраженной каннабимимети-ческой активностью. Во всех четырех тестах классической «каннабиноидной тетрады» НЭГ-эфир (92) проявил каннабиноидоподобное действие, сходное с анандамидом. Он дозозависимо вызывал аналгезию (тест «горячая пластинка»), каталепсию (тест с кольцом), гипотермию и резко снижал локомоторную активность (тест «открытое поле») (табл. 3). (Эксперименты проведены под руководством к.х.н. М.Ю.Боброва).

Табл. 3

Тест «каннабиноидной тетрады» Контроль НЭГ-АК

«Горячая пластинка» (время задержки болевой реакции), % 100 159 ±26

«Открытое поле» (число секторов, пересеченных с 3-й по 15-ю мин после инъекции) 57.6 ±11.5 4.6 ± 1.5

«Кольцо» (время в неподвижности в течение 5 мин наблюдения), с 29.5 ±7.5 185.5 ± 15.4

Падение ректальной температуры через 10 мин после инъекции, °С — -2.62 ± 0.5

Изучено взаимодействие 1,3-ДНГ-АК (81) и НЭГ-АК (92) с оксигемо-глобином (НЮ2) и метгемоглобином (тНЬ). (Эксперименты проведены под руководством д.б.н. М.А.Киселя). Показано, что добавление эфира (81) к НЬ02 сопровождается существенным увеличением скорости окисления гемопротеина в высокоспиновую ферриформу - тНЬ. Уже при соотношении гем : эфир = 1:2 значительная доля НЬ02 превращается в тНЬ. Мононитрат НЭГ-АК (92) не оказывал подобного действия. Динитрат 1,3-ДНГ-АК (81) вызывал также изменение и спектральных характеристик метгемоглобина, что, возможно, связано с нарушением целостности молекулы белка и потерей гема.

Изучено влияние этиленгликолевого (ЭГ-ДГК) и нитроэтиленгликоле-вого (НЭГ-ДГК) (93) эфиров докозагексаеновой кислоты на калиевые потен-циалзависимые каналы и АМРА-рецепторы - одного из трех подтипов глу-таматэргических рецепторов - и на функционирование изолированных митохондрий печени крыс. Оба эфира не влияли на потенциалзависимые калиевые каналы в отличие от действия самой докозагексаеновой кислоты. В то же время они оказывали заметное влияние на ответы АМРА рецепторов, хотя характер этого влияния был отличен для каждого вещества. Если ЭГ-ДГК вызывал дозозависимую потенциацию трансмембранных КК-вызванных токов (КК - каиновая кислота - агонист АМРА рецепторов) в нейронах Пуркинье мозжечка крыс, то его нитроксианалог (93) вызывал, наоборот, их дозозави-симое угнетение (табл. 4). (Эксперименты проведены под руководством д.б.н. В.В.Григорьева). Таким образом, введение МО-донорного фрагмента изменило

характер действия ЭГ-ДГК на противоположный.

Таблица 4. Действие прогаводных докозагексаеновой кислоты на амплитуды

каинат-вызванных токов в нейронах Пуркинье мозжечка крыс

Концентрация % изменения токов АМРА рецепторов*

ЭГ-ДГК НЭГ-ДГК (66)

10 нМ +15% -11%

100 нМ +79% -24%

1 мкМ +62% -24%

* - амплитуда каинат-вызванных токов в отсутствие производных докозагексаеновой кислоты взята за 100%.

ЭГ-ДГК и НЭГ-ДГК (93) при добавлении к суспензии митохондрий, не содержащей кальция, вызывали их деполяризацию. Они также дозозависимо предотвращали кальций-индуцированное набухание митохондрий. В присутствии циклоспорина А - ингибитора неспецифической проницаемости мембран — этот эффект усиливался. (Эксперименты проведены под руководством к.х.н. Е.Ф.Шевцовой).

3.2. Биологические свойства 1,3-диннтроглицериновых зфиров ПГ.

Исследование биологических свойств синтезированных 1,3-динитро-глицериновых эфиров простагландинов показало, что введение в молекулу простагландина ИО-донорного фрагмента - 1,3-динитроглицериновой группировки резко изменило фармакологический профиль последних. Так, 1,3-ДНГ-ПГЕг (59) в 5 раз более активен как гипотензивный агент, чем сам ПГЕ2 (табл. 5). При этом он не вызывает изменения частоты сердечных сокращений и тахифилаксии у подопытных животных. Еще одним важным отличием эфира (59) является его способность расслаблять гладкие мышцы изолированной аорты крысы, тогда как ПГЕ2 является вазоконстриктором. Причем этот эффект не зависит от типа агониста, которым было вызвано предварительное. сокращение изолированной аорты (адреналин, ПГЕ2 или ШТ2а) (табл. 6). Для 1,3-ДНГ-ПГЕ2 (59) также характерно значительное увеличение (более чем в 20 раз) бронходилататорной активности и уменьшение конст-

рикторной активности по отношению к изолированной матке по сравнению с ПГЕ2 (табл. 5). (Эксперименты по изучению вазодюгататорной и миорелавссантной активностям синтезированных соединений проведены под руководством к.м.н. В.В.Малыгина).

Таблица 5. Биологические свойства 1,3-ДНГ-ПГЕ2

Фармакологический тест Активность, ЕС50, М

1,3-ДНГ-ПГЕ2 ПГЕ2

Снижение кровяного давления (ЕВ20) 2.7±0.13 13.Ш.2

Сокращение изолированной матки крысы 0.4±0Л 0.08^0.016

Изолированная аорта крысы 0.68±0.12 (расслабление) 84±1 (сокращение)

Расслабление трахеи морской свинки 0.007±0.025 0.14±0.08

Сокращение дна желудка крысы 0.06±0.01 0.04±0.015

Таблица 6. Вазодилататорная активность 1,3-ДНГ-ЛГЕ;

Тип агониста Расслабление изолированной аорты крысы, ЕС50, М"6

1,3-ДНГ-ПГЕ2 1,3-ДНГ + ПГЕ2

адреналин 1.7±0.15 60.0±40.0

пге2 0.68±0.31 3.6±1.0

ПГЕ2а 3.0±1.0 8.Ш.0

Аналогично изменились и фармакологические свойства ПГР2а. 1,3-ДНГЧПТ2а (61) более чем в 10 раз превосходит ШТ2а по способности сокращать миометрий матки крысы. При этом он менее активен, чем исходный ГОТ2а( как констриктор гладких мышц желудка крысы и не отличается от него по действию на гладкие мышцы кишечника. Эфир (61) также является ва-зодилататором по отношению к изолированным аорте крысы и трахее морской свинки, тогда как сам ШТ2а обладает вазоконстрикторными свойствами по отношению к этим объектам (табл. 7).

Введение ЫО-донорного фрагмента резко изменило фармакологические свойства и ПГЕ|. 1,3-ДНГ-ПГЕ, (60) и 1,3-ДНГ-ПГЕгОХ (97), так же как

и предыдущие 1,3-ДНГ-эфиры ПГ (59 и 61), являются вазодилататорами, а сам ПГЕ1 - вазоконстриктор. При этом следует отметить, что и 9-оксиими-нопростагландин Е, (ПГЕгОХ) оказался вазодилататором, хотя и намного более слабым (примерно два порядка), чем динитроглицериновые эфиры. Скорее всего, это связано с тем, что и оксииминная группировка является донором окиси азота, но гораздо менее эффективным, чем нитроксигруппа. Миотропная активность по отношению к изолированной матке крысы у эфира (60) выше, а констрикторное действие на желудок почти на порядок слабее, чем у природного ПГЕ| (табл. 8). Последнее свойство позволяет преодолеть одно из ограничений природных ПГ как лекарственных препаратов, а именно их констрикторное действие на желудочно-кишечный тракт, приводящее к диарее.

Таблица 7. Биологические свойства 1,3-ДНГ-ШТ2а

Фармакологический тест Активность, ЕС50, М"4

и-днг-ттга пггга

Сокращение изолированной матки крысы 0.009±0.0017 0.11±0.04

Изолированная аорта крысы 0.54±0.19 (расслабление) (сокращение)

Изолированная трахея морской свинки 1СШ.5 (расслабление) (сокращение)

Сокращение дна желудка крысы 0.13±0.01 0.05±0.015

Сокращение изолированной кишки крысы 0.175±0.07 0.13±0.071

Таблица 8. Биологические свойства 1,3-ДНГ-ПГЕ1 и 1,3-ДНГ-ПГЕрОХ

Фармакологический тест Активность, ЕС50» М"6

1,3-ДНГ-ПГЕ) ПГЕ, 1,3-ДНГ-ПГЕ,-ОХ ПГЕрОХ

Сокращение матки крысы 0.33±0.08 2.70±0.80

Изолированная аорта крысы 2.10±1.50 (расслабление) 0.16±0.11 (сокращение) 0.64±0.17 (расслабление) 54.16±45.0 (расслабление)

Сокращение дна желудка крысы 0.30±0.012 0.04±0.01

Наблюдаемые изменения фармакологической активности синтезированных 1,3-ДНГ-эфиров ПГ, по-видимому, связаны именно с введением в молекулу ЫО-донорного фрагмента, а не глицеринового остатка. Известно, что глицериновые эфиры простагландинов являются слабыми агонистами «классических» ПГ-рецепторов, но в то же время обладают собственной фармакологической активностью, практически не блокируемой антагонистами ПГ-рецепторов. Данные по воздействию 1,3-глицериновых эфиров ПГ на гладкие мышцы отсутствуют в литературе, но, учитывая отмеченное выше слабое взаимодействие с ПГ-рецепторами этих эфиров, можно предположить, что значительный вклад в изменение спектра миотропной активности вносит введение в молекулу глицеринового эфира ^'О-доиорного фрагмента. Особенно это заметно по выявленному у 1,3-ДНГ-эфиров ПГ мощному вазодилататор-ному действию. При этом инкубация изолированной аорты крысы с эквимо-лярной смесью ПГ£2 и 1,3-динитрата глицерина (5) также вызывает релаксацию гладких мышц аорты, а не констрикцию, которую индуцирует сам ПГЕг. Следует, однако, заметить, что данная смесь значительно уступает по своей релаксантной активности 1.3-ДНГ-ПГЕ2 (59) (табл. 6).

ПГЕ] проявляет сильную антиагрегационную активность. Аналогичными свойствами обладает и окись азота. Поэтому представлялось весьма инте-Табл. 9. Влияние 1,3-ДНГ-П1'Е] и 1,3-ДНГ-ПГЕгОХ на агрегацию тромбоцитов

человека т уИго, индуцированную АДФ (10"5 М) (Атзх, %)

Соединение Концентрация исследуемого вещества, мг/мл

0 контроль 10 1 0.1 0.01 0.001 1x10^ 1x10"5

РОЕ, 60+3 12±1 15+2 27+4 43±5 50±1 54±4

ПГЕ]-ОХ 76±1 7±1 58+4 63+3 73+3 69±2 67±2

ДНГ-ПГЕ1 56±2 7±1 12+1 29±4 37±4 47±1 51±3

ДНГ-ПГЕгОХ 76±1 4±1 19±2 64±4 67±5

ресным выяснить, какое влияние окажет введение ГГО-донорного фрагмента именно на это свойство ПГЕ]. Проведенные эксперименты показали, что 1,338

ДНГ-ПГЕ, (60) и 1,3-ДНГ-ПГЕгОХ (97) обладают выраженными антиагре-гационными свойствами. Они дозозависимо ингибирует агрегацию тромбоцитов, вызванную арахидоновой кислотой (АК) и аденозиндифосфатом (АДФ). Наиболее ярко это свойство проявляется у эфира 60. Он не намного, но все-таки лучше ингибирует агрегацию, чем сам ПГЕ1 (табл. 9). (Эксперименты по изучению антиагрегационной активности синтезированных соединений проведены под руководством д.м.н. В.А.Макарова).

Было изучено влияние 1,3-ДНГ-эфиров ПГ на сопротивляемость организма неблагоприятным условиям среды (рис. 12). Проведенные исследования показали, что 1,3-ДНГ-эфи-ры ПГ на модели гипобаричес-кой гипоксии проявляют защитную активность. Наиболее ярко это свойство проявилось у 1,3-ДНГ-ПГЕ, (59). При токсической гипоксии (моделировали острым воздействием окиси углерода) наилучшее защитное действие отмечено у 1,3-ДНГ-ПГЕ1 (60) и 1,3-ДНГ-ПГЕгОХ (97). Они же оказались наиболее эффективными и при защите от токсического отека легких с развитием дыхательной недостаточности (моделировали острым воздействием диоксида азота), хотя эти соединения применялись в концентрации в 10 раз большей, чем 1,3-ДНГ-ПГЕ2 (59). (Эксперименты проведены под руководством д.м.н. В.В.Чумакова).

На основе 1,3-ДНГ-Г1ГЕ| (60) нами были разработаны мицеллярные и липосомальные композиции, улучшающие локальное кровообращение. Полученные композиции позволяют создать высокую локальную концентрацию ДНГ-эфира в месте нанесения препарата, необходимую для достижения терапевтического эффекта, путем ограничения его распространения с кровотоком, и тем самым предохраняя его от быстрой биодеградации в организме.

Рис. 12. Влияние 1,3-ДНГ-эфиров простагландинов на сопротивляемость организма неблагоприятным условиям среды (выживаемость мышей в условиях действия токсических факторов, %)

□ контроль ЕВ 1,3-ДКГ-11ГЕ2 В 1,3-ДНГ-ПГЕ1 И 1,3-ДНГ-ПГЕ1 -ОХ

- Юм г/кг) за 10 гала воздействия

СО (11г/мЗ)

гипооария {9000 м)

Этот эффект особенно проявляется при использовании липосомальной формы, то есть когда 1,3-ДНГ-ПГЕ| (60) при создании лекарственной формы предварительно включается в липосомы из природного фосфатидилхолина. Специальными экспериментами на животных (кролики) было показано локальное действие препарата. Так, было отмечено отсутствие снижения агрегационной способности тромбоцитов в общем кровотоке, а т^кже минимальное воздействие на систему гемодинамики и гемостаз. При этом разработанные композиции показали очень хороший результат при лечении ожоговых поражений. На рис. 13 и 14 показано влияние мицеллярной

формы 1,3-ДНГ-ПГЕ! (60) на сохранение ожогового струпа и на эпителизацию ожоговой раны (результаты выражены в условных единицах, максимальная выраженность признака -3). Из диаграмм видно, что при применении препарата, содержащего 1,3-ДНГ-ПГЕ] (60), заживление ожоговой раны происходит гораздо быстрее. Через две недели струп полностью отпадает, а под ним обнаруживается молодая эпителиальная ткань без признаков кератизации. В контроле же струп практически сохранялся, а по его краям появлялись следы нагноения.

7. Заключение.

Нами разработаны основные подходы к созданию гибридных физиологически активных соединений, содержащих ЫО-донорный фрагмент, на основе нитратов биологически активных спиртов как основы потенциальных

40

Рис. 13. Влкмяяе мнцелляриай ф ар ми 1,3-ДНГ-ПГЕ1 ни сохранение ожогового струей

3 7 14

Рис. 14. Влияние мицеллярной формы 1,3-ДНГ-ПГЕ! на эпителизацию ожоговой равы

3 7 14

полифункциональных высокоэффективных лекарственных препаратов. Разработаны способы введения ЫО-донорной группы в молекулу ПГ и ПНЖК как с помощью линкера, так и в безлинкерном варианте. В качестве линкеров нами предложены биологически активные спирты, такие как глицерин, эти-ленгликоль, ряд аминоспиртов. Они после превращения в нитроксисоедине-ния образовывали МО-донориый фармакофор, который присоединяли к молекуле природных веществ (ПГ или ПНЖК). Разработанные способы введения ЫО-донорного фрагмента, а также сами >Ю-донорные группировки на основе биологически активных спиртов оказались весьма удобными и универсальными. С их использованием синтезированы ЬЮ-линкерные гибридные соединения на основе антибиотиков и ЫБАШ. Разработаны способы синтеза гибридных соединений, у которых ЫО-генерирующая группа присоединялась к молекуле исходного вещества непосредственно. Такие безлин-керные соединения синтезированы на основе простагландинов, полиненасыщенных жирных кислот, гидроксиаминокислот и ряда других биологически активных соединений.

Таким образом, на основании концепции гибридных КО-содержащих соединений разработаны универсальные способы синтеза таких гибридных соединений и синтезирована обширная библиотека нитратов биологически важных природных веществ и действующих начал известных синтетических лекарственных веществ. Эти исследования, инициированные предложенным нами синтезом динитроглицериновых эфиров простагландинов, в настоящее время превратились в одно из активно развиваемых направлений дизайна потенциальных полифункциональных лекарственных препаратов.

Биологические испытания подтвердили положительные изменения фармакологических свойств полученных гибридных соединений по сравнению с исходными веществами. Так, введение >Ю-донорного фрагмента усилило специфическую вазодилататорную, бронхолитическую и миотропную (матка) активности природных ПГ и одновременно снизило их констриктор-ное действие на желудочно-кишечный тракт. Это делает данные соединения

41

перспективными для создания на их основе бронхолитических препаратов и препаратов для родовспоможения. Введение динитроглицеринового фрагмента в молекулу АК превращает ее из проагреганта в антиагрегант. Синтезированные 1,3-ДНГ-эфиры ПГ показали хорошие результаты по защите экспериментальных животных от воздействия вредных химических факторов. На основе 1,3-ДНГ-ПГЕ2 разработаны композиции, показавшие высокую противоожоговую активность.

Таким образом, синтезированные гибридные соединения, содержащие МО-донорный фрагмент, являются весьма перспективными в плане создания на их основе лекарственных многофункциональных препаратов. Эти соединения могут найти применение в качестве бронхолитических препаратов, в акушерстве, лечебной косметологии, как противоожоговые средства экстренной терапии, особенно когда ожоговое поражение сопровождается отравлением продуктами горения. Отдельные положения диссертации защищены отечественными и зарубежными патентами.

ВЫВОДЫ

1. На основе созданной концепции гибридных соединений, содержащих N0-донорный фрагмент, разработаны общие схемы их синтеза как с помощью линкеров, несущих 1ТО-донорнук> группу, так и в безлинкерном варианте.

2. Показана универсальность разработанных методов введения >Ю-донорно-го фрагмента на основе биологически активных спиртов.

3. Разработаны способы синтеза гибридных соединений на основе простаг-ландинов и полиненасыщенных жирных кислот, содержащих нитрокси-группу в качестве ИО-донорного фрагмента.

4. Впервые предложено использовать триметилсилильную защиту в синтезе фторангидридов простагландинов.

5. Впервые описано нитрование аллильной гидроксильной группы в молекуле простагландина и синтезированы 15-нитраты 11-дезокси-ПГЕ] и его метилового эфира.

6. Синтезированы новые гибридные соединения, содержащие нитроксигруп-пу, на основе антибиотиков и ряда нестероидных противовоспалительных средств.

7. Разработаны способы синтеза нитратов гидроксиаминокислот и впервые синтезированы нитраты L- и D-серина и L-треонина, а также дипептиды на их основе.

8. Проведенные биологические исследования на моделях in vitro и in vivo показали, что добавление NO-донорных группировок в молекулу ПГ и ПНЖК резко меняет профиль действия последних, усиливая фармакологически полезные свойства и снижая побочные эффекты. Так динитроглице-риновый эфир ПГЕг показал увеличенную более чем в 20 раз бронхолити-ческую активность по сравнения с немодифицированным ПГЕг, а динит-роглицериновый эфир nFF2a на порядок превосходил природный nrF2a как констриктор мышц изолированной матки крысы. Введение динитро-глицериновой группы в молекулу природного простагландина превратило последние из вазоконстрикторов в вазоделататоры по отношению к препаратам изолированной аорты. Введение динитроглицериновой группы в молекулы полиненасыщенных жирных кислот придаёт им способность ингибировать агрегацию тромбоцитов человека. Включение в молекулу арахидоновой кислоты динитроглицеринового фрагмента привело к полной потере этой кислотой проагрегационных свойств и превратило ее в ан-тиагрегант.

9. Разработанная на основе 1,3-динитроглицеринового эфира ПГЕ| композиция показала эффективные результаты при лечении ожоговых травм у экспериментальных животных.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ В СЛЕДУЮЩИХ РАБОТАХ Патенты

1. Серков И.В., Безуглов В.В., Пачева Л.М., Малыгин В.В., Гафуров Р.Г., Лилле Ю.Э., Самелъ Н.Э., Бергельсон Л.Д. Г,3'-Динитроглицериновый эфир простагландина F2a, обладающий миотропиой активностью по отношению к гладкой мускулатуре // Авторское свидетельство № 1640963, приоритет от 06.10.1989.

2. Безуглов В.В., Серков И.В., Пачева Л.М., Голованова Н.К., Журавлева Л.И., Самелъ Н.Э., Лилле Ю.Э., Малыгин В.В., Безноско Б.К., Гафуров Р.Г., Бергельсон Л.Д. Г,3'-Динитроглицериновый эфир простагландина Е2, обладающий гипотензивной вазо- и бронходилаторной активностью // Авторское свидетельство № 1832680, приоритет от 06.10.1989.

3. Серков И.В., Безуглов В.В., Пачева Л.М., Петрухина Г.Н., Самелъ Н.Э., Макаров В.А., Малыгин В.В., Лилле Ю.Э., Гафуров Р.Г., Бергельсон Л.Д. 1',3'-Динитро-глицериновый эфир простагландина Е\ и 9-оксима простагландина Е|, обладающие вазодилаторной и антиагрегационной активностями // Авторское свидетельство № 1825786, приоритет от 15.01.1991.

4. Безуглов В.В., Серков И.В. 1,3-Динитроглицериновые эфиры полиненасыщенных жирных кислот, гидроксипроизводных полиненасыщенных жирных кислот и простагландинов и способы их получения // Патент РФ № 2067094, приоритет от 27.09.1993 (Бюл. № 27, 27.09.96).

5. Безуглов В.В., Серков И.В., Дмитриев П.И., Воложин А.И., Петрухина Г.Н., Макаров В.А. Средство, улучшающее кровообращение, для наружного применения // Патент РФ № 2098097, приоритет от 07.07.1994.

6. Bezuglov V.V., SerkovI.V. Dinitroglycerol esters of prostaglandins //US Patent №5,625,083,29.04.1997.

7. Серков И.В., Безуглов B.B. Нитроксиалкиламинокислоты // Патент № 2340597, приоритет от 05.06.2008.

Статьи

1. Безуглов В.В., Бобров М.Ю., Грецкая Н.М., Арчаков A.B., Серков И.В.,

44

Феденюк А.П., Веревочкина Е.Ю., Когтева Г.С., Титова О.Ю., Марзанов Д.М., Де Петроцелъс Л., Бизоньо Т., Ди Марцо В., Маневич Е.М. Арахи-доноияэтиленгликоль и его нитроэфир - новые каннабимиметнческие соединения: окисление 15-липоксигеназой и гидролиз гидролазой амидов жирных кислот II Биоорганическая химия. - 1998. - Т. 24. - N 12. - С. 953-957.

2. Безуглов В.В., Андреюк Г.М., Серков И.В., Кисель М.А. Влияние липид-ных производных динитроглицерина и нитроэтиленгликоля на спектральные параметры гемоглобина человека // Биохимия. - 2000. - Т. - 65. - Вып. 6. -С. 804-809.

3. Васильева Т.М., Петрухина Г.Н., Макаров В.А., Серков И.В., Грецкая Н.М., Безуглов В.В. Действие новых синтетических динитроглицериновых эфиров жирных кислот на агрегацию тромбоцитов человека // Эксп. Клин. Фармакология. - 2003. - Т. 66. - № 6. - С. 44-46.

4. Серков И.В., Безуглов В.В. 0-Нитрование в простагландинах: синтез

15-О-нитрата-11 -дезокснпростагландина Е| и его метилового эфира // Биоорганическая химия. - 2006. - Т. 32.-№ 1.-С. 110-112.

5. Серков И.В., Григорьев В.В., Иванова Т.А., Грецкая Н.М, Безуглов В.В., Бачурин С. О. Действие производных докозагексаеновой кислоты на АМРА рецепторы в нейронах Пуркинье // Доклады Академии наук. - 2006. - Т. 411. -№3.-С. 1-2.

6. Серков И.В., Безуглов В.В. Синтез новых эфиров и амидов цефалоспо-рина G // Химия природных соединений. - 2007. - № 1. - С. 85-88.

7. Серков И.В., Шевцова Е.Ф., Дубова Л.Г., Киреева Е.Г., Вишневская Е.М, Грецкая Н.М., Безуглов В.В., Бачурин С.О. Взаимодействие производных докозагексаеновой кислоты с митохондриями // Доклады Академии наук. -2007. - Т. 414. -№ 3. - С. 415-418.

8. Серков И.В., Безуглов В.В. О-Нитраты гидроксиаминокислот серина и треонина // Химия природных соединений. - 2008. - № 1. - С. 52-53.

9. Серков И.В., Безуглов В.В. Фторангидриды простагландинов в синтезе

производных природных простагландинов по карбоксильной группе // Биоорганическая химия. - 2009. - Т. 35. - № 1. - С. 1-7. 10.Серков И.В., Безуглов В.В. 1,3-0-нитраты циклооксигеназных метаболитов эндоканнабиноида 2-арахидоноилглицерина. Синтез и свойства // Биоорганическая химия. - 2009. - Т. 35. - № 2. - С. 245-252.

П.Серков И.В., Безуглов В.В. Нитроксиалкиламиды как прототипы гибридных нестероидных противовоспалительных препаратов, содержащих NO-до-норный фрагмент // Доклады Академии наук. - 2009. - Т. 425. - № 6. -С. 777-779.

М.Серков И.В., Безуглов В.В. Многофункциональные соединения, содержащие органические нитраты, - прототипы гибридных лекарственных препаратов // Успехи химии. - 2009. - Т. 78. - № 5. - С. 442-465. 13 .Андрианова ЕЛ., Бобров М.Ю., Грецкая Н.М., Зитенко Г.Н., Серков И.В., Фомина-Агеева Е.В., Безуглов В.В. Действие нейролипинов и их синтетических аналогов на нормальные и трансформированные глиальные клетки // Нейрохимия - 2010. - Т. 27. - № 1. - С. 53-62.

14.Григорьев В.В., Серков И.В., Безноско Б.К., Иванова Т.А., Грецкая Н.М., Безуглов В.В., Бачурин С.О. Действие производных арахидоновой и докоза-гексаеновой кислот на АМРА-рецепторы в нейронах Пуркинье и на когнитивные функции у мышей // Известия РАН. Серия биологическая. - 2010. -№ 3. - С. 370-374.

15.Серков И.В., Грецкая Н.М., Безуглов В.В. Нитроанандамид, нитропроста-миды Е2 и f2a и их аналога // Химия природ, соед. -.2010. - № 5. - С. 591-594. Тезисы

1. Makarov V.A., Petmkhina G.N., Volozshin A./., Serkov J.V., Bezuglov V.V. The influence of NO-PGs on platelet function and microcirculation // 9-th International conference on "Prostaglandins and related compounds". - Florence, Italy. 4-8 June 1994. - Abstract book. - P. 61.

2. Serkov I.V., Bezuglov V.V. Synthesis and properties of NO-PGs // 9-th International conference on "Prostaglandins and related compounds". - Florence, Italy.

46

4-8 June 1994. - Abstract book. - P. 61.

3. Bezuglov V.V., Serkov I. V. Design of binary prostaglandin preparation. Approaches and examples // 9-th International conference on "Prostaglandins and related compounds". - Florence, Italy. 4-8 June 1994. - Abstract book. - P.45.

4. Malygin V.V., Serkov I.V., Bezuglov V.V., Makhaeva G. 1,3-Dinitroglycerol esters of prostaglandins as new perspective "binary" drugs for pharmacology and medicine // XlV-th International symposium on medicinal chemistry - Maastricht, Netherlands. 8-12 September 1996.-Abstract book.-P. P-3.11.

5. Безуглов B.B., Серков И.В., Макаров B.A., Воложин А.И., Кузьмина С.М., Маневич Е.М. Проставит - новое решение старых проблем // Международная научно-практическая конференция «Биологически активные вещества и новые продукты в косметике». - Москва. 26-28 ноября 1996. - Тезисы докладов. -С. 16-17.

6. Bobrov M.Yu., Gretskaya KM., Fedenyuk A.P., Yudushkin LA., Serkov I.V., Muller A., Bonne C., Durand Т., Bezuglov V. V. Novel bioactive amides and esters of polyunsaturated fatty acids closely related to endocannabinoids // 11-th International conference on advances in prostaglandin and leukotriene research: basic science and new clinical applications. - Florence, Italy. 4-8 June 2000. - Abstract book. - P. 94.

7. Кисель M.A., Андреюк Г.М., Серков И.В., Безуглов В.В. Гемоглобин - ключевой белок в системе генерации N0 из органических нитратов липидной природы // IV Съезд Белорусского общественного объединения фотобиологов и биофизиков «Молекулярно-клеточные основы функционирования биосистем». - Минск. 28-30 июня 2000. - Тезисы докладов - С. 254.

8. Безуглов В.В., Серков И.В. Синтез производных цефалоспорина G //1 Международная конференция «Химия и биологическая активность азотистых Ге-тероциклов и алкалоидов». - Москва. 9-12 октября 2001. - Тезисы докладов. -Т. 2, С. 36.

9. Serkov I. V., Bobrov М. Yu., Bezuglov V. V. Nitroesters of bioeffector lipids as novel NO-boosted regulators // International symposium on advances in synthetic, combi-

47

natorial and medical chemistry. - Moscow, 5-8 May 2004. - Abstract book. - P. 167. 10.Серков И.В., Безуглов В.В. Циклооксигеназные метаболиты эндоканнаби-иоидов, содержащие NO-донорный фрагмент // XVIII Менделеевский съезд по общей и прикладной химии. - Москва. 23-28 сентября 2007. - Тезисы докладов.-Т. 4.-С. 481.

11 .Григорьев В.В., Серков И.В., Иванова Т.А., Безноско Б.К., Грецкая Н.М., Безуглов В.В., Бачурин С.О. Действие производных арахидоновой и докоза-гексаеновой кислот на АМРА рецепторы в нейронах Пуркинье и на память у мышей // III Съезд фармаколргов России «Фармакология - практическому здравоохранению». - Санкт-Петербург. 23-27 сентября 2007. - Тезисы докладов. - С. 1-1667.

12.Серков И.В., Безуглов В.В. О-Нитраты биологически активных спиртов // Конференция «Органическая химия для медицны». - Черноголовка, Московская область. 7-11 сентября 2008. - Тезисы докладов. - С. 235.

13.Серков КВ., Вишневская Е.М., Безуглов В.В. Синтез нитроксиаминокис-лот и пептидов на их основе // IV Российский симпозиум «Белки и пептиды» - Казань. 23-27 июня 2009. - Тезисы докладов. - С. 156.

14.Серков И.В., Вишневская Е.М., Грецкая Н.М., Безуглов В.В. Амиды ней-роактивных липидов и их циклооксигеназных метаболитов с нитратами ами-носпиртов // VII Всероссийская научная конференция «Химия и медицина, ОРХИМЕД-2009». - Уфа. 1-5 июля 2009. - Тезисы докладов. - С. 266.

15.Серков И.В., Вишневская Е.М., Андрианова Е.Л., Бобров М.Ю., ГрецкаяНМ,, Безуглов В.В. Нитронейролипины и нитрооксилипины как прототипы новых многофункциональных соединений // VIII Всероссийская конференция «Химия и медицина». - Уфа. 6-8 апреля 2010. - Тезисы докладов. - С. 125-126.

1 бЕобров М.Ю., Андрианова Е.Л., Грецкая Н.М., Серков И.В., Безуглов В.В.

Нейролипины, простамиды и их синтетические аналоги как перспективные

нейропротекторы // 5 Международная конференция «Биологические основы

индивидуальной чувствительности к психотропным средствам». - Москва.

1-4 июня, 2010 - Тезисы докладов. - С, 27.

48

Сдано в печать 22.11.10. Подписано в печать 23.11.10. Формат 60x90 1/16 Объем 3 п.л. Заказ 338. Тираж 100

Отпечатано в типографии ИПХФ РАН 142432, Московская обл., г. Черноголовка, пр-т ак. Семенова, 5 Тел.: 8(49652)2-19-38

содержащие органические нитраты.

1.1. Введение.

1.2. Окись азота. Биосинтез в организме и механизм действия.

1.3. Экзогенные доноры оксида азота.

1.4. Противовоспалительные препараты.

1.5. Препараты для лечения нейродегенеративных заболеваний.

1.6. Антиоксиданты.

1.7. Карнитин.

1.8. Олеаноловая кислота.

1.9. Гибридные кардиопрепараты.

1.10. Другие гибридные соединения.

Создание эффективных лекарственных средств — фундаментальная проблема современной медицинской химии. В последнее время.активно разрабатывается концепция многофункциональных лекарств. Эта концепция противостоит понятию лекарственного средства как «магической пули» с максимальной селективностью, действующего на одну, строго определённую мишень. Для многофункциональных лекарств характерна широта фармакологического действия и способность взаимодействовать с несколькими мишенями, что существенно , повышает их эффективность. Структура молекулы многофункционального лекарственного препарата содержит несколько фармакофоров, действие которых дополняет друг друга. Такие препараты имеют более предсказуемый фармако-кинетический профиль по сравнению с одновременно вводимыми несколькими селективными лекарствами, у них существенно снижен риск несовместимости с другими препаратами за счёт уменьшения количества прописываемых пациенту лекарств, и, наконец, пациенты психологически больше доверяют таким препаратам. Одним из направлений в. создании многофункциональных соединений является введение в молекулу известного лекарственного препарата фрагмента генератора оксида азота (N0). Оксид азота — химически активное соединение, непрерывно продуцируется в организме из аминокислоты аргинина с помощью Ж)-синтаз и является внутри- и межклеточным мессенджером со многими важными биохимическими и физиологическими свойствами. Эта маленькая, молекула не только передает биохимические сигналы, влияя, таким образом, на различные биологические системы, включая центральную нервную, сердечно-сосудистую и иммунную системы, но и действует как важный регулятор основных клеточных процессов. Нарушение биосинтеза и метаболизма оксида азота приводит к тяжелым заболеваниям, таким как инфаркт миокарда, ишемическая болезнь сердца, астма, нейродегенеративные заболевания (болезнь Альцгейме-ра, болезнь Паркинсона), диабет и многие другие. Введение Ж)-донорного фрагмента придает известному препарату новые свойства за счет активации физиологических механизмом, опосредуемых NO, и предотвращения различных патологий, вызванных отсутствием или недостатком генерации NO. Такая модификация существенно изменяет фармакологические свойства лекарственных веществ, расширяя области их применения и снижая, в большинстве случаев, присущие немодифицированным соединениям побочные эффекты. Это увеличивает фармакологический потенциал и эффективность лекарственного препарата.

К началу наших исследований были известны лишь несколько соединений, которые можно отнести к многофункциональным органическим нитратам (например, никорандил). Поэтому разработка новых и развитие существующих методов создания гибридных препаратов, содержащих остаток органического нитрата, разработка способов введения NO-донорной группировки в молекулу биологически активного соединения, синтез соответствующих библиотек многофункциональных веществ была и остаётся актуальной задачей биоорганической и медицинской химии в плане создания новых высокоэффективных лекарственных препаратов, а так же вносит существенный вклад в познание химических свойств биологически активных соединений и в теорию дизайна потенциальных лекарственных препаратов.

Данная работа является частью плановой тематики Института физиологически активных веществ РАН и выполнялась в соответствии с общесоюзной программой АН СССР «Простагландин», государственной научно-технической программой «Атеросклероз», поддержана грантами РФФИ 94-03-09326-а «Разработка новых способов синтеза эфиров и тиоэфиров природных простагланди-нов», 00-04-48797-а «Исследование молекулярного механизма и нейрорецеп-торной активности эндогенных каннабиноидов и их нитроэфиров как новых эффективных биорегуляторов и потенциальных нейрокорректоров», 02-04-22002-НЦНИа (PICS 1582) «Изучение отношений структура-активность в ряду новых производных полиненасыщенных жирных кислот как потенциальных нейропротекторов», 04-04-49515-а «Эфиры полиненасыщенных жирных кислот. Синтез и исследование их влияния на ионные каналы в мембране нервных клеток».

Цель и задачи работы.

Основная цель данной работы - разработка подходов и способов создания гибридных многофункциональных физиологически активных соединений, содержащих Ж)-донорный фрагмент, на основе биологически активных спиртов как основы новых потенциальных высокоэффективных лекарственных препаратов в рамках фундаментальной проблемы биоорганической химии - установление связи между структурой биологических соединений и их физиологической активностью. Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1 - разработка общих способов введения М>донорной группировки на основе нитратов спиртов в молекулы биологически'активных соединений;

2 - синтез модифицированных соединений содержащих МЭ-донорную группировку на основе различных классов фармакологически значимых агентов;

3 - изучение фармакологических свойств синтезированных соединений.

Научная новизна.

Разработаны новые конструкции и способы создания гибридных многофункциональных физиологически активных соединений на основе нитратов биологически активных спиртов - ИО-донорных фармакофоров. Разработаны способы синтеза эфиров и амидов простагландинов и полиненасыщенных жирных кислот с нитратами спиртов и аминоспиртов. Показана универсальность разработанных способов введения МЗ-донорных группировок на основе нитратов биологически активных спиртов. Впервые синтезированы нитраты природных гидроксиаминокислот и пептиды на их основе. Впервые описано нитрование аллильной гидроксильной группы в молекуле простагландина. Проведено исследование биологических свойств синтезированных гибридных соединений и изучено влияние Ж)-донорного фрагмента на их физиологическую активность. Таким образом, создано новое направление в конструировании новых многофункциональных лекарственных препаратов.

Практическая значимость работы.

На основе предложенных методов получения гибридных соединений, содержащих нитраты биологически активных спиртов как Ж)-донорный фрагмент, синтезированы 1,3-динитроглицериновые и нитроэтиленгликолевые эфиры, а также амиды с нитроаминоспиртами ряда физиологически активных соединений. В качестве исходных фармакофоров были использованы проста-гландины, полиненасыщенные жирные кислоты, нестероидные противовоспалительные средства (индометацин, ибупрофен, ацетилсалициловая кислота), це-фалоспорин О. Это означает, что разработанные методы применимы к разнообразным классам биологически активных соединений и могут использоваться при создании гибридных препаратов и с другими фармакофорами. Разработаны препаративные способы синтеза нитросерина и нитротреонина. Проведено нитрование аллильной гидроксильной группы в молекуле простагландина и синтезированы 15-Онитраты простагландинов. Предложено использовать триметил-силильную защитную группу для синтеза фторангидридов простагландинов, которые были использованы при получении производных по карбоксильной группе. Показано, что введение Ж)-донорной группировки в молекулу фарма-кофора резко меняет фармакологические свойства последнего с уменьшением побочных эффектов, что открывает путь к направленному конструированию новых лекарственных препаратов. Так, созданная на основе 1,3-динитроглице-ринового эфира простагландина Е] мазь оказалась эффективной при лечении ожоговых травм у экспериментальных животных.

На защиту выносится.

1. Разработанные конструкции и способы создания гибридных многофункциональных физиологически активных соединений на основе нитратов биологически активных спиртов - ТчЮ-донорных фармакофоров.

2. Разработаные способы синтеза гибридных соединений на основе проста-гландинов и полиненасыщенных жирных кислот, содержащих нитроксигруппу в качестве Ж)-донорного фрагмента.

3. Нитрование аллильной гидроксильной группы в молекуле простагландина.

4. Разработанные способы синтеза нитратов гидроксиаминокислот и дипепти-дов на их основе.

5. Синтезированные гибридные соединения, содержащие нитроксигруппу, на основе антибиотиков и ряда нестероидных противовоспалительных средств.

6. Данные о фармакологических свойствах синтезированных соединений.

выводы

1. На основе созданной концепции гибридных соединений, содержащих N0-донорный фрагмент, разработаны общие схемы их синтеза как с помощью линкеров, несущих NO-донорную группу, так и в безлинкерном варианте.

2. Показана универсальность разработанных методов введения NO-донорного фрагмента на основе биологически активных спиртов.

3. Разработаны способы синтеза гибридных соединений на основе простаглан-динов и полиненасыщенных жирных кислот, содержащих нитроксигруппу в качестве NO-донорного фрагмента. Впервые предложено использовать три-метилсилильную защиту в синтезе фторангидридов простагландинов.

4. Впервые описано нитрование аллильной гидроксильной группы в молекуле простагландина и синтезированы 15-нитраты 11-дезокси-ПГЕ1 и его метилового эфира.

5. Синтезированы новые гибридные соединения, содержащие нитроксигруппу, на основе антибиотиков и ряда нестероидных противовоспалительных средств.

6. Разработаны способы синтеза нитратов гидроксиаминокислот и впервые синтезированы нитраты L- и D-серина и L-треонина, а также дипептиды на их основе.

7. Проведенные биологические исследования на моделях in vitro и in vivo показали, что добавление NO-донорных группировок в молекулу простагландина или полиненасыщенной жирной кислоты резко меняет профиль действия последних, усиливая фармакологически полезные свойства и снижая побочные эффекты. Так динитроглицериновый эфир ПГЕ2 показал увеличенную более чем в 20 раз бронхолитическую активность по сравнения с немодифи-цированным ПГЕ2, а динитроглицериновый эфир ШТ2(Х на порядок превосходил природный ПТТ2а как констриктор мышц изолированной матки крысы. Введение динитроглицериновой группы в молекулу природного простагландина превратило последние из вазоконстрикторов в вазоделататоры по отношению к препаратам изолированной аорты. Введение динитроглицери-новой группы в молекулы полиненасыщенных жирных кислот придаёт им способность ингибировать агрегацию тромбоцитов человека. Включение в молекулу арахидоновой кислоты динитроглицеринового фрагмента привело к полной потере этой кислотой проагрегационных свойств и превратило ее в антиагрегант.

8. Разработанная на основе 1,3-динитроглицеринового эфира ПГЕ1 композиция была эффективной при лечении ожоговых травм у экспериментальных животных.

1. Hopkins A.L. Network pharmacology: the next paradigm in drug discovery // Nature Chem. Bio. - 2008. - Vol. 4, № 11. - p. 682-690.

2. Drews J. Case histories, magic bullets and the state of drug discovery // Nature Rev. Drug Discov. 2006. - Vol. 5, № 8 - P. 635-640.

3. Gershell L.J., Atkins J.H. A brief history of novel drug discovery technologies // Nature Rev. Drug Discov. 2003. - Vol. 2, № 4. - P. 321-327.

4. Dogne J.-M., Hanson J., Supuran C., Pratico D. Coxibs and cardiovascular side-effects: from light to shadow // Curr. Pharmac. Design. 2006. - Vol. 12. - P. 971— 975.

5. Linker R.A., Kieseier B.C., Gold R. Trends in pharmacological sciences // Trends Pharm. Sci. 2008. - Vol. 29, № 11. - P. 558-565.

6. Morphy R., Kay С., Rankovic Z. From magic bullets to designed multiple ligands // Drug Discov. Today. -2004. Vol. 9. - P. 641-651.

7. Граник В.Г., Григорьев Н.Б. Оксид азота (NO) // Москва: Вузовская книга, 2004.-359 с.

8. Furchgott R.F., Zawadski J. V. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial muscle by acetylcholine // Nature. 1980. - Vol. 288. - P. 373-376.

9. Furchgott R.F., Cherry P.D., Zawadzki J. V., Jothianandan D. Endothelial cells as mediators of vasodilation of arteries // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1984. - Vol. 6. -P. S336-S343.

10. SoRelle R. Nobel Prize awarded to scientists for nitric oxide discoveries // Circulation. 1998. - Vol. 98. - P. 2365-2366.

11. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs C.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology // Pharmacol. Rev. 1991. - Vol. 43. - P. 109-142.

12. Ignarro L.J., Buga G.M., Wood K.S., Byrns R.E., Chaudhnri G. Endothelium-de-rived relaxing factor produced and released from artery and vein is nitric oxide // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. - Vol. 84, № 24. - P. 9265-9269.

13. Moncada S., Higgs C.A. The L-arginine nitric oxide pathway // N. Engl. J. Med. - 1993. - Vol. 329. - P. 2002-2012.

14. Реутов В.П. Цикл оксида азота в организме млекопитающих и принцип цикличности // Биохимия. 2002. - Т. 67, № 3. - С.353-376.

15. Kwon N.S., Nathan С.F., Stuehr D.J. Reduced biopterin as a cofactor in the generation of nitrogen oxides by murine macrophages // J. Biol. Chem. 1989. - Vol. 264.-P. 20496-20501.

16. Stuehr D.J., Kwon N.S., Nathan C.F., Griffith O.W., Feldman P.L., Wiseman J. N-omega-hydroxy-L-arginine is an intermediate in the biosynthesis of nitric oxide from L-arginine // J. Biol. Chem. 1991. - Vol. 266, № 10. - P. 6259-6263.

17. Mayer В., Hemmens B. Biosynthesis and action of nitric oxide in mammalian cells // Trends Biochem. Sci. 1997. - Vol. 22, № 12. - P. 477-481.

18. Moncada S., Higgs C.A., Furchgott R. International union in pharmacology nomenclature in nitric oxide research // Pharmacol. Rev. 1997. - Vol. 49. - P. 137-142.

19. Nathan C., Xie Q-W. Nitric oxide synthases: roles, tolls, and controls // Cell. -1994. -Vol. 78.-P. 915-918.

20. Tatoyan A., Giulivi C. Purification and characterization of a nitric-oxide synthase from rat liver mitochondria // J. Biol. Chem. 1998. - Vol. 273. - P. 11044-11048.

21. Sethi S., Dikshit M. Modulation of polymorphonuclear leukocytes function by nitric oxide // Thrombosis Research. 2000. - Vol. 100. - P. 223-247.

22. Schmidt H.H.H.W., Walter U. NO at work // Cell. 1994. - Vol. 78. - P. 919-925.

23. BeckK.F., Eberhardt W., FrankS., Huwiler A., Messmer U.K., Muhl H., Pfeilsc-hifter J. Inducible NO synthase: role in cellular signaling // J. Exp. Biol. 1999. -Vol. 202.-P. 645-653.

24. Weitzberg E., Lundberg J. O. Nonenzymatic nitric oxide roduction in humans // Nitric Oxide: Biology and Chemistry. 1998. - Vol. 2, № 1. - P. 1-7.

25. Ignarro L.J. Biosynthesis and metabolism of endothelium-derived nitric oxide // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1990. - Vol. 30. - P. 535-560.

26. Ignarro L.J. Heme-dependent activation of guanylate cyclase by nitric oxide: a novel signal transduction mechanism // Blood Vessels. 1991. - Vol. 28. — P. 67—73.

27. Hobbs A.J. Soluble guanylate cyclase: the forgotten sibling // Trends Pharmacol. Sci.- 1997.-Vol. 18.-P. 484-91.

28. Schlossmann J., Hofmann F. cGMP-dependent protein kinases in drug discovery //DrugDiscov. Today. -2005. Vol. 10. - P. 627-634.

29. Schmidt H.H.H.W., Lohmann S.M., Walter U. The nitric oxide and cGMP signal transduction system: regulation and mechanism of action // Biochim. Biophys. Acta. 1993.-Vol. 1178.-P. 153-175.

30. Moncada S., Bolanos J.P. Nitric oxide, cell bioenergetics and neurodegeneration // J. Neurochem. 2006. - Vol. 97. - P. 1676-1689.

31. Brunori M., Giuffre A., Sarti P., Stubauer G., Wilson M.T. Nitric oxide and cellular respiration // Cell Mol. Life Sci. 1999. - v 56. - P. 549-557.

32. Wiesinger H. Arginine metabolism and the synthesis of nitric oxide in the nervous system//Prog. Neurobiol. -2001. Vol. 64, № 4. -P. 365-391.

33. Luo Z.D., Cizkova D. The role of nitric oxide in nociception // Curr. Rev. Pain. -2000. Vol. 4, № 6. - P. 459-466.

34. Garthwaite J., Charles S.L., Chess-Williams R. Endotheliumderived relaxing factor release on activation of NMDA receptors suggests a role as intercellular messenger in the brain // Nature. 1988. - Vol. 336. - P. 385-387.

35. Hibbs J.B.Jr., Taintor R.R., Vavrin Z., Rachlin E.M. Nitric oxide: a cytotoxic activated macrophage effector molecule // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1988. -Vol. 157.-P. 87-94.

36. Stuehr D.J., Nathan C.F. Nitric oxide: a macrophage product responsible for cy-tostasis and respiratory inhibition in tumour target cells // J. Exp. Med. — 1989. Vol. 169.-P. 1543-1555.

37. Akaike T. Role of free radicals in viral pathogenesis and mutation // Rev. Med. Virol.-2001.-Vol. 11, №2.-P. 87-101.

38. Palmer R.M.J., Ferrige A.G., Moncada S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor // Nature. 1987. -Vol. 327.-P. 524-526.

39. Radomski M.W., Palmer R.M., Moncada S. An L-arginine/nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1990. Vol. 87. -P. 5193-5197.

40. Bath P.M.W., Hassal D.G., Gladwin A.M., Palmer R.M.J., Martin J.F. Nitric oxide and prostacyclin: Divergence of inhibitory effects on monocyte chemotaxis and adhesion to endothelium in vitro // Arterioscler. Thromb. 1991. - Vol. 11. - P. 254260.

41. Garg U.C., HasidA. Nitric oxide-generating vasodilators and 8-bromo-cyclic gu-anosine monophosphate inhibit mitogenesis and proliferation of cultured rat vascular smooth muscle cells // J. Clin. Invest. 1989. - Vol. 83. - P. 1774-1777.

42. Nakaki T., Nakayama M., Kato R. Inhibition by nitric oxide and nitric oxide-producing vasodilators of DNA synthesis in vascular smooth muscle cells // Eur. J. Pharmacol. 1990. - Vol. 189. - P. 347-353.

43. Brorson J.R., Schumacker P.T., Zhang H. Nitric oxide acutely inhibits neuronal energy production. The Committees on Neurobiology and Cell Physiology // J. Neurosci. 1999. - v 19. - P. 147-158.

44. Brown G.C. Nitric oxide and mitochondrial respiration // Biochim. Biophys. Acta-Bioenergetics. 1999. - Vol. 1411. - P. 351-369.

45. Jourd'heuil D., Grisham M.B., Granger D.N. Nitric oxide and the gut // Curr. Gastroenterol. Rep. 1999. - Vol. 1, № 5. - P. 384-388.

46. Lipton S.A. Neuronal protection and destruction by NO // Cell Death Differ. -1999.-Vol. 6.-P. 943-951.

47. Lipton S.A., Choi Y.B. A redox-based mechanism for the neuroprotective and neurodestructive effects of nitric oxide and related nitroso-compounds // Nature. -1993. Vol. 364. - P. 626-632.

48. Wimalawansa S.J. Nitric oxide: new evidence for novel therapeutic indications // Expert Opin. Pharmacother. 2008. - Vol. 9. - P. 1935-1954.

49. Гранин В.Г., Рябова С.Ю., Григорьев Н.Б. Экзогенные доноры оксида азота и ингибиторы его образования (химический аспект) // Успехи химии. 1997. -Т. 66, № 8. - С. 792-807.

50. Граник ВТ., Григорьев Н.Б. Экзогенные доноры оксида азота (химический аспект) // Изв. АН, Сер.хим. 2002. - № 8. - С. 1268-1313.

51. Everett S.A., Smith К.А., Patel К.В., Dennis M.F., Stratford M.R.L., Wardman P. Nitric oxide involvement in the toxicity of hydroxyguanidine in leukaemia HL60 cells//Br. J. Cancer. 1996. - Vol. 74. //P. S172-S176.

52. Bailey D.M., DeGrazia C.G., Lape B.E., Frering R., Fort D., Skulan T. Hydroxy-guanidines. New class of antihypertensive agents // J. Med. Chem. 1973. - Vol. 16, №2.-P. 151-156.

53. Fukuto J.M., Chaudhuri G. Inhibition of constitutive and inducible nitric oxide synthase: potential selective inhibition I I Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol. 1995. -Vol. 35.-P. 165-194.

54. Машковский М.Д. Лекарственные средства // Москва: Медицина, 1993. — Т. 1.-731 с.

55. Левина В.И., Данилов А.В., Григорьев Н.Б. Использование реакции образования нитропруссид-иона для непрямого полярографического детектирования соединений, генерирующих окись азота//Хим. фарм. журн. 1995. - Т. 29, № 8. -С. 55-59.

56. Rehse К., Shahrouri Т. New NO donors with antithrombotic and vasodilatingactivities, part 25. Hydroxylamine derivatives // Arch. Pharm. (Weinheim). 1998. -Vol. 331.-P. 365-367.

57. Koikov L.N., Alekseeva N. V., Lisitza E.A., Krichevsky E.S., Grigoriev N.B., Dani-lovA.V., Severina I.S., Pyatakova N.V., Granik V.G. Oximes, amidoximes and hydroxamic acids as nitric oxide donors // Mend. Commun., 1998. Vol. 8, № 4. - P. 165168.

58. Wang P.G., Xian M., Tang X., Wu X, Wen Z., Саг Т., Janczuk A.J. Nitric oxide donors: chemical activities and biological applications // Chem.Rev. 2002. -Vol. 102, P. 1091-1134.

59. Харкевич Д.А. Фармакология // Москва: ГЭОТАР Медицина, 1999. 527 с.

60. Brunton T.L. On the use of nitrite of amyl in angina pectoris // Lancet. 1867. -Vol. 2.-P. 97-98.

61. Schonafinger К,J. Heterocyclic NO prodrugs // Farmaco. 1999. — Vol. 54. -P. 316-320.

62. Feelisch M. The use of nitric oxide donors in pharmacological studies // Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 1998. - Vol. 358. - P. 113-122.

63. Bohn H., Beyerle R., Martorana P.A., Schonafinger K. CAS 936, a novel sydno-imine with direct vasodilating and nitric oxide-donating properties: effects on isolated blood vessels // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1991 - Vol. 18. - P. 522-527.

64. Megson I.L. Nitric oxide donor drugs // Drugs Future. 2000. - Vol. 25. - P. 701.

65. Feelisch M., Schonafinger K., NoackE. Thiol-mediated generation of nitric oxide accounts for the vasodilator action of furoxans // Biochem. Pharmacol. 1992. -Vol. 44.-P. 1149-1157.

66. Medana C., Ermondi G., Fruterro R., Di Stilo A., Ferretti A., Gasco A. Furoxansas nitric oxide donors. 4-Phenyl-3-furoxancarbonitrile: thiol-mediated nitric oxide release and biological evaluation // J. Med. Chem., 1994. ~ Vol. 37, № 25. P. 44124416.

67. Sorb a G., Medana C., Fruttero R., Cena C., Di Stilo A., Galli U., Gasco A. Water soluble furoxan derivatives as NO prodrugs // J. Med. Chem. 1997. - Vol. 40, № 4. -P. 463-469.

68. Bertinaria M. H3 receptor ligands: new imidazole H3-antagonists endowed with NO-donor properties // II Farmaco. 2003. - Vol. 58, № 3. - P. 279-283.

69. Lolli M.L., Cena C., Medana C., Lazzarato L., Morini G., Coruzzi G., Manarini S., Fruterro R, Gasco A. A new class of Ibuprofen derivatives with reduced gastrotoxi-city // J. Med. Chem. 2001. - Vol. 44, № 21. - P. 3463-3468.

70. Nirode W.F., Luis J.M., Wicker J.F., Wachter N.M. Synthesis and evaluation of NO-release from symmetrically substituted furoxans // Bioorg. Med. Chem. Lett. -2006.-Vol. 16.-P. 2299-2301.

71. Ghigo D., Heller R., Calvino R., Alessio P., Fruttero R., Gasco A., BosiaA., Pes-carmona G. Characterization of a new compound, S3 5b, as a guanylate cyclase activator in human platelets // Biochem. Pharmacol. 1992. - Vol. 43, № 6. - P. 12811288.

72. Oae S., Shinhama K. Organic thionitrites and related substances // Org. Prep. Proc. Int.- 1983.-Vol. 15.-P. 165-198.

73. Konorev E.A., Kalyanaraman B., Hogg N. Modification of creatine kinase by S-nitrosothiols: S-nitrosation vs. S-thiolation // Free Radic. Biol. Med. 2000. -Vol. 28.-P. 1671-1678.

74. Askew S.C., Barnett D.J., McAninly J., Williams D.L.H. Catalysis by Cu2+ of nitric oxide release from S-nitrosothiols (RSNO) // J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1995. -Vol. 2.-P. 741-745.

75. Williams D.L. S-nitrosothiols and role of metal ions in decomposition to nitric oxide // Methods Enzymol. 1996. - Vol. 268. - P. 299-308.

76. Singh R.J., Hogg N., Joseph J., Kalyanaraman B. Mechanism of nitric oxide release from S-nitrosothiols //J. Biol. Chem. 1996. - Vol. 271. - P. 18596-18603.

77. Wang P.G., Xian M., Tang X.P., Wu X.J., Wen Z, Cai T.W., Janczuk A.J. Nitric oxide donors: chemical activities and biological applications I I Chem. Rev., 2002.1. Vol. 102.-P. 1091-1134.

78. Hogg N. The kinetics of S-Transnitrosation a reversible second-order reaction // Anal. Biochem. - 1999 - Vol. 272. - P. 257-262.

79. PatelRP., HoggN., Spencer N.Y., Kalyanaraman B., Matalon S., Darley-Usmar V.M. Biochemical characterization of human S-nitrosohemoglobin: Effects on oxygen binding and and transnitrosation // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274. - P. 15487-15492.

80. Meyer D.J., Kramer H., Ozer N., Coles B., Ketterer B. Kinetics and equilibria of S-nitrosothiol-thiol exchange between glutathione, cysteine, penicillamines and serum albumin // FEBS Lett. 1994. - Vol. 345. - P. 177-180.

81. Stamler J.S. S-nitrosothiols and the bioregulatory actions of nitrogen oxides through reactions with thiol groups // Curr. Topics Microbiol. Immunol. 1995. -Vol. 196.-P. 19-36.

82. Arnelle D.R., Stamler J.S. NO+, NO*, and NO- donation by S-nitrosothiols: implications for regulation of physiological functions by S-nitrosylation and acceleration of disulfide formation // Arch. Biochem. Biophys. 1995. - Vol. 318. - P. 279-285.

83. Hogg N., Singh R.J., Kalyanaraman B. The role of glutathione in the transport and catabolism of nitric oxide // FEBS Lett. 1996. - Vol. 382. - P. 223-228.

84. Wong P.S., Hyun J., Fukuto J.M., Shirota F.N., DeMaster E.G., Shoeman D.W., Nagasawa H.T. Reaction between S-nitrosothiols and thiols: generation of nitroxyl (HNO) and subsequent chemistry // Biochemistry. 1998. - Vol. 37. - P. 5362-5371.

85. HoggN., Singh R.J., Konorev E., Joseph J., Kalyanaraman B. S-Nitrosoglutathi-one as a substrate for gamma-glutamyl transpeptidase // Biochem. J. 1997. -Vol. 323.-P. 477-481.

86. Butler A.R., Al-Sadoni H.H., Megson I.L., Flitney F.W. Synthesis, decomposition, and vasodilator action of some new S-nitrosated dipeptides // Nitric Oxide. 1998. -Vol. 2, № 3. — P. 193-202.

87. Keefer L.K., Nims R.W., Davies KM., Wink D.A. «NONOates» (1-substituted diazen-l-ium-l,2-diolates) as nitric oxide donors: convenient nitric oxide dosageforms // Meth. Enzymol. 1996. - Vol. 268. - P. 281-293.

88. Davies K.M., WinkD.A., Saavedra J.E., Keefer L.K. Chemistry of diazeniumdio-lates. 2. Kinetics and mechanism of dissociation to nitric oxide in aqueous solution // J. Am. Chem. Soc. -2001. Vol. 123. -P. 5473-5481.

89. Al-Sadoni H., Ferro A. S-Nitrosothiols: a class of nitric oxide donor drugs // Clinical Science. 2000. - Vol. 98, № 5. - P. 507-520.

90. Fitzhugh A.L., Keefer L.K. Diazeniumdiolates: pro- and antioxidant application of the «NONOates» // Free Rad. Biol. Med. // 2000. Vol. 28, № 10. - P. 1463-1469.

91. Furnandez T.P., Lizasoqin I., Lera I.C., Moro M.A. Neuroprotective effects of DETA-NONOate, a nitric oxide donor, on hydrogen peroxide-induced neurotoxicity in cortical neurons // Neuropharmacology. 1999. - Vol. 38, № 9. - P. 1307-1315.

92. Saavedra J.E., Shami P.J., Wang L.Y., Davies KM., Booth M.N., Citro M.L., Keefer L.K. Esterase-sensitive nitric oxide donors of the diazeniumdiolate family. In vitro antileukemic activity // J. Med. Chem. // 2000. Vol. 43, № 20. - P. 261-269.

93. McClean R.E., Campbell M.L., Vorce M.D. Association reaction of manganese, iron and ruthenium with nitric oxide // J. Phys. Chem. A. 1999. - Vol. 103. -P. 2659-2663.

94. Hayton T.W., Ledzdins P., Sharp W.B. Coordination and organometallic chemistry of metal-NO complexes // Chem. Rev. 2002. - Vol. 102. - P. 935-992.

95. Ford P.C., Laverman L.E. Reaction mechanisms of the relevant to formation of iron and ruthenium nitric oxide complexes // Coord. Chem. Rev. 2005. - Vol. 249. -P. 391-403.

96. Kowaluk E.A., Seth P., FungH.L. Metabolic activation of sodium nitroprusside to nitric oxide in vascular smooth muscle // J. Pharmaco. Exper. Therap. 1992. -Vol. 262, №3.-P. 916-922.

97. Bates J.N., Baker M.T., Guerra R., Harrison D.G. Nitric oxide generation from nitroprusside by vascular tissue. Evidence that reduction of the nitroprusside anion and cyanide loss are required // Biochem. Pharmacol. 1991. - Vol. 42. - P. SI 57-S165.

98. Орлова Е.Ю. Химия и технология бризантных взрывчатых веществ // Москва: Химия, 1981.-310 с.

99. Murrel W. Nitroglycerine as a remedy for angina pectoris // Lancet. 1879. -Vol. l.-P. 80-81.

100. Berlin R. Historical aspects of nitrate therapy // Drugs. 1987. - Vol. 33. (Suppl. 4)-P. 1-4.

101. Ahlner J., Andersson R.G., Torfgard K., Axelsson K.L. Organic nitrate esters: clinical use and mechanisms of actions I I Pharmacol. Rev. 1991. - Vol. 43. -P. 351-423.

102. Parker J.D., Parker J.O. Nitrate therapy for stable angina pectoris // N. Engl. J. Med.-1998.-Vol. 338.-P. 520-531.

103. Pataricza J., Репке В., Balogh G.E., Papp J. G. Polarographic detection of nitric oxide released from cardiovascular compounds in aqueous solutions // J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 1998. - Vol. 39. - P. 91-95.

104. Kurz M.A., Boyer T.D., Whalen R., Peterson Т.Е., Harrison D.G. Nitroglycerin metabolism in vascular tissue: role of glutathione S-transferases and relationship between NO- and N02-formation // Biochem. J. 1993. - Vol. 292 (Pt. 2). - P. 545-550.

105. McGuire J. J., Anderson D.J., McDonald B.J., Narayanasami R., Bennett B.M. Inhibition of NADPH-cytochrome P450 reductase and glyceryl trinitrate biotransformation by diphenyleneiodonium sulfate // Biochem. Pharmacol. 1998. - Vol. 56. -P. 881-893.

106. Chung S.J., Fung H.L. Identification of the subcellular site for nitroglycerin metabolism to nitric oxide in bovine coronary smooth muscle cells // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1990. - Vol. 253. - P. 614-619.

107. Ignarro L.J. After 130 years, the molecular mechanism of action of nitroglycerinis revealed // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. - Vol. 99. - P. 7816-17.

108. Chen Z, Zhang J., Stamler J.S. Identification of the enzymatic mechanism of nitroglycerin bioactivation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. - Vol. 99. -P. 8306-8311.

109. Ignarro L.J. Biological actions and properties of endothelium-derived nitric oxide formed and released from artery and vein // Circ. Res. 1989. - Vol. 65. -P. 1-21.

110. ChongS., FimgH.L. Biochemical and pharmacological interactions between nitroglycerin and thiols. Effects of thiol structure on nitric oxide generation and tolerance reversal // Biochem. Pharmacol. 1991. - Vol. 42. - P. 1433-39.

111. Fung H.-L. Biochemical mechanism of nitroglycerin action and tolerance: Is this old mysterysolved? 11 Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2004. - Vol. 44. - P. 67-85.

112. Wessler C., Homann A., Fricke U., Lehmann J. NO donors, part 8 1.: synthesis and vasodilating activities of substituted benzylnitrates compared to cyclohexylme-thylnitrate and GTN // Eur. J. Med. Chem. 2003. - Vol. 38, № 6. - P. 581-586.

113. Noack E. Investigation on structure-activity relationship in organic nitrates 11 Methods Find. Exp. Clin. Pharmacol. 1984. - Vol. 6, № 10. - P. 583-586.

114. Bron J., Sterk G.J., Vanderwerf J.F., Timmerman H. Synthesis and pharmacology of a series of new organic nitrate esters // Pharm. World Sci. 1995. - Vol. 17, №4.-P. 120-125.

115. Bogaert M.G., Rosseel M.T. Vascular effects of the dinitrate and moninitrateesters of isosorbide, isomannide and isoidide // Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 1972. - Vol. 275. - P. 339-342.

116. Yeates R.A., Laufen H., Leitold M. The reaction between organic nitrates and sulfhydryl compounds. A possible model system for the activation of organic nitrates // Mol. Pharmacol. 1985. - Vol. 28. - P. 555-559.

117. Balazy M., Kaminski P.M., Mao K., Tan J., Wolin M.S. S-Nitroglutathione, a product of the reaction between peroxynitrite and glutathione that generates nitric oxide // J. Biol. Chem. 1998. - Vol. 273. - P. 32009-32015.

118. Kowaluk E.A., Chung S. J., FungH.L. Nitrite ion is not an active intermediate in the vascular metabolism of organic nitrates and organic nitrites to nitric oxide // Drug. Metab. Dispos. 1993. - Vol. 21. - P. 967-969.

119. Taira N. Similarity and dissimilarity in the mode and mechanism of action between nicorandil and classical nitrates: an overview // J. Cardiovasc. Pharmacol. -1987.-Vol. 10 (Suppl. 8).-P. S1-S9.

120. Van Bortel L.M., Spek J.J., Balkestein E.J., Sardina M., Struijker Boudier H.A. Is it possible to develop drugs that act more selectively on large arteries? // J. Hyper-tens. 1999. - Vol. 17. - P. 701-705.

121. Benedini F., Bertolini G., Gromo G., Mizrahi J., Sala A. The discovery of a new organic nitrate: an overview // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1995. - Vol. 26 (Suppl. 4).-P. S1-S5.

122. Wallace J.L. Nonsteroidal antiinflammatory drugs and gastroenteropathy: the second hundred years // Gastroenterology. 1997. - Vol. 112. - P. 1000-1016.

123. Ivey K.J. Mechanisms of nonsteroidal anti-inflammatory drug-induced gastric damage. Actions of therapeutic'agents // Am. J. Med. 1988. - Vol. 84. - P. 41-48.

124. Vane J.R. Inhibition of prostaglandin synthesis as a mechanism of action for aspirin-like drugs // Nature: New Biology. 1971. - Vol. 231. - P. 232-235.

125. Vane J.R., Flower R.J., Botting R.M. History of aspirin and its mechanism of action// Stroke. 1990. - Vol. 21 (Suppl. 12). - P. 12-23.

126. Wallace J.L., Miller M.J.S. Nitric oxide in mucosal defense: A little goes a long way // Gastroenterology. 2000. - Vol. 119. - P. 512-520.

127. Takeuchi K, Ukawa H., Konaka A., Kitamura M., Sugawa Y. Effect of nitric oxide-releasing aspirin derivative on gastric functional and ulcerogenic responses in rats: comparison with plain aspirin // J. Pharm. Exp. Ther. 1998. - Vol. 286. -P. 115-112.

128. Burgaud J.L., Ongini E., Del Soldato P. Nitric oxidereleasing drugs: a novel class of effective and safe therapeutic agents // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2002. -Vol. 962.-P. 360-371.

129. Muscara M.N., McKnight W., Del Soldato P., Wallace J.L. Effect of a nitric oxide-releasing naproxen derivative on hypertension and gastric damage induced by chronic nitric oxide inhibition in the rat // Life Sci. 1998. - Vol. 62. - P. PL235-PL240.

130. Keeble J.E., Moore P.K. Pharmacology and potential therapeutic applications of nitric oxide-releasing non-steroidal anti-inflammatory and related nitric oxide-donating drugs //Br. J. Pharmacol. 2002. - Vol. 137. - P. 295-310.

131. Wallace J.L., Ignarro L.J., Fiorucci S. Potential cardioprotective actions of NO-releasing aspirin // Nat. Rev. Drug Discovery. 2002. - Vol. 1. - P. 375-383.

132. Del Soldato P., Sorrentino R., Pinto A. NO-aspirins: a class of new anti-inflammatory and anti-thrombotic agents // Trends Pharmacol. Sci. — 1999. Vol. 20. -P. 319-323.

133. Keeble J., Al-Swayeh O.A., Moore P.K. Vasorelaxant effect of nitric oxide releasing steroidal and nonsteroidal anti-inflammatory drugs // Br. J. Pharmacol. -2001. Vol. 133, № 7. - P. 1023-1028.

134. A.Al-Swaetn O., Clifford R.H., Del Soldato P., Moore P.K. A comparison of the anti-inflammatory and anti-nociceptive activity of nitroaspirin and aspirin // Br. J. Pharmacol. -2000. Vol. 129. - P. 343-350.

135. Wallace J.L., McKnight W., Del Soldato P., Baydoun A.R., Cirino G. Antithrombotic effects of a nitric oxide releasing gastric sparing aspirin derivative // J. Clin. Invest. 1995. - Vol. 96. - P. 2711-2718.

136. Chiroli V., Benedini F., OnginiE., Del Soldato P. Nitric oxide-donating non-steroidal anti-inflammatory drugs: the case of nitroderivatives of aspirin // Eur. J. Med. Chemistry. 2003. - Vol. 38. - P. 441-446.

137. Mitchell J.A., Akarasereenont P., Thiemermann C., Flower R. J., Vane J.R. Selectivity of nonsteroidal antiinflammatory drugs as inhibitors of constitutive and inducible cyclooxygenase // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1993. - Vol. 90. -P.11693-11697.

138. Del Soldato P.II International Patent Publication WO PCT 01/12584. 2001.

139. Rivolta R., Aureli R. New process for the preparation of nitrooxyderivatives of paracetamol // US Patent № 0149801. 2007.

140. Al-Swaetn O.A., Futter L.E., Clifford R.H., Moore P.K. Nitroparacetamol exhibits anti-inflammatory and antinociceptive activity // Br. J. Pharmacol. 2000. -Vol. 130.-P. 1453-1456.

141. Romero-Sandoval E.A., Curros-Criado M.M., Gaitan G., Molina C., Herrero J.F. Nitroparacetamol (NCX-701) and pain: first in a series of novel analgesics // CNS Drug Reviews. 2007. - Vol. 13, № 3. - P. 279-295.

142. Del Soldato P. Pharmateutical compounds // US Patent 6,869,974 Bl. 2005.

143. Zha S., Yegnasubramanian V., Nelson W.G., Isaacs W.B., De Marzo A.M. Cyclooxygenases in cancer: progress and perspective // Cancer Lett. 2004. - Vol. 215. № l.-P. 1-20.

144. Rigas B., Williams J.L. NO-donating NSAIDs and cancer: An overview with a note on whether NO is required for their action // Nitric Oxide. 2008. - Vol. 19. -P. 199-204.

145. Wallace J.L., Cirino G., McKnight G., Elliott S.N. Reduction of gastrointestinal injury in acute endotoxic shock by flurbiprofen nitroxybutylester // Eur. J. Pharmacol., 1995. Vol. 280, № 1. - 63-68.

146. Van'tHofRJ., Del Soldato P., Ralston S.H. NO-NSAIDs: A novel class of osteoclast inhibitors // Mediators of inflamm. 1999. - Vol. 8 (Suppl. 1). - P. S128.

147. Bur gaud J.L., Benedini F., Robinson E.M., Del Soldato P. HCT-1026 flurbiprofen nitroxytlbutyl ester // Drugs Future. 1999. - Vol. 24. - P. 858-861.

148. Hauss-Wegrzyniak B., Willard L.B., Del Soldato P., Pepeu G., Wenk G.L. Peripheral administration of novel anti-inflammatories can attenuate the effects of chronic inflammation within the CNS // Brain Research 1999. - Vol. 815, № 1. - P. 36^3.

149. Hauss-Wegrzyniak B., Vraniak P., Wenk G.L. The effects of a novel NSAID on chronic neuroinflammation are age dependent // Neurobiol. Aging. 1999. - Vol. 20. -P. 305-13.

150. Wenk G.L., McGann K., Mencarelli A., Hauss-Wegrzyniak B., Del Soldato P.,

151. Fiorucci S. Mechanisms to prevent the toxicity of chronic neuroinflammation on forebrain cholinergic neurons // Eur. J. Pharmacology. 2000. - Vol. 402, № 1-2. -P. 77-85.

152. Tallet D., Del Soldato P., Oudart N., Burgaud J.-L. NO-steroids: potent antiinflammatory drugs with bronchodilating activity in vitro // Biochem. Biophy. Res. Commun. -2002. Vol. 290. - P. 125-130.

153. Paul-Clark M.J., Mancini L., Del Soldato P., Flower R.J., Perretti M. Potent an-tiarthritic properties of a glucocorticoid derivative, NCX-1015, in an experimental model of arthritis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. - Vol. 99, № 3. - P. 1677-1682.

154. Scarpini E., Scheltens P., Feldman H. Treatment of Alzheimer's disease: current status and new perspectives // Lancet Neurol. 2003. - Vol. 2. - P. 539-547.

155. Knapp M.J., Knopman D.S., Soloman P.R., Pendlebury W.W., Davis C.S., Gracon S.L A 30-week randomized controlled trial of high-dose tacrine in patients with Alzheimer's disease // J. Am.Med. Assoc. 1994. - Vol. 271. - P. 985-991.

156. Crismon M.L. Tacrine: first drug approved for Alzheimer's disease // Ann. Pharmacother. 1994. - Vol. 28. - P. 744-751.

157. Watkins P.B., Zimmerman H.J., Knapp M.J., Gracon S.I., Lewis K.W. Hepato-toxic effects of tacrine administration in patients with Alzheimer's disease // J. Am. Med. Assoc. 1994. - Vol. 271. - P. 992-998.

158. Thatcher G.R.J., Bennett B.M., Reynolds J.N. Nitric oxide mimetic molecules astherapeutic agents in Alzheimer's disease // Curr. Alzheimer Res. 2005. - Vol. 2. -P. 171-182.

159. Rosini M., Andrisano V., Bartolini M., Bolognesi M.L., Hrelia P., Minarini A., Tarozzi A., Melchiorre C. Rational approach to discover multipotent anti-Alzheimer drugs // J. Med. Chem. -2005. Vol. 48, № 2. - P. 360-363.

160. Bartolini M., Bertucci C., Cavrini V, Andrisano V. P-Amyloid aggregation induced by human acetylcholinesterase: inhibition studies // Biochem. Pharmacol. -2003.-Vol. 65.-P. 407-416.

161. Berliner J. A., Navab M., Fogelman A.M., Frank J.S., Demer L.L., Edwards P. A., Watson A.D., Lusis A.J. Atherosclerosis: basic mechanisms. Oxidation, inflammation and genetics // Circulation. 1995. - Vol. 91, № 9. - P. 2488-2496.

162. BraunwaldE. Approach to the patient with cardiovascular disease. In Harrison's Principles of Internal Medicine, 16th ed.; Kasper D.L., Braunwald E., Fauci A., Hauser S., Longo D., Jameson J.L., Eds.; McGraw-Hill: New York, 2005. P 1301-1304.

163. Keaney J.F.Jr., Vita J.A. Atherosclerosis, oxidative stress and antioxidant protection in endothelium-derived relaxing factor actions // Prog. CardioVasc. Dis. -1995.-Vol. 38.-P. 129-154.

164. May J.M. How does ascorbic acid prevent endothelial dysfunction? // Free Radical Biol. Med. 2000. - Vol. 28. - P. 1421-1429.

165. Konya C., Ferdinandy P. Vitamin C: new role of the old vitamin in the cardiovascular system // Br. J. Pharmacol. 2006. - Vol. 147. - P. 125-127.

166. Cena C., Chegaev K, Balbo S., Lazzarato L., Rolando B., Giorgis M., Marini E., Fruttero R, Gasco A. Novel antioxidant agents deriving from molecular combination of vitamin C and NO-donor moieties // Bioorg. Med. Chem. 2008. - Vol. 16. -P. 5199-5206.

167. Tahir H., Hindsgaul O. Regio- and chemoselective alkylation of L-ascorbic acid under mitsunobu conditions // J. Org. Chem. 2000. - Vol. 65, № 3. - P. 911-913.

168. Tsia P.-L., Hu M.-K Free radical scavenging and antioxidative activity of melatonin derivatives I I J. Pharm. Pharmacol. 2003. - Vol. 55. - P. 1655-1660.

169. Leon J., Acana-Castroviejo D., Escames G., Tan D.X., Reiter R.J. Melatonin mitigates mitochondrial malfunction // J. Pineal Res. 2005. - Vol. 38. - P. 1-9.

170. Chrysselis M.C., Rekka E.A., Kourounakis P.N. Hypocholesterolemic and hypolipidemic activity of some novel morpholine derivatives with antioxidant activity I I J. Med. Chem. -2000. Vol. 43, № 4. - P. 609-612.

171. Chrysselis M.C., Rekka E.A., Siskou I.C., Kourounakis P.N. Nitric oxide releasing morpholine derivatives as hypolipidemic and antioxidant agents // J. Med. Chem., 2002. Vol. 45, № 24. - P. 5406-5409.

172. Cena C., Boschi D., Tron G.C., Chegaev K., Lazzarato L., Di Stilo A., Aragno M, Fruttero R, Gasco A. Development of a new class of potential antiatherosclerosis agents: NO-donor antioxidants // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004. - Vol. 14. -P.5971-5974.

173. Arya P., Alibhai K, Quin H., Burton G.W. Design and synthesis of analogs of vitamin E: Antiproliferative activity against human breast adenocarcinoma cells // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. - Vol. 8. - P. 2433-2438.

174. Tonazzi A., Galluccio M., Oppedisano F., Indiveri C. Functional reconstitution into liposomes and characterization of the carnitine transporter from rat liver microsomes // Biochim. Biophys. Acta-Biomembranes. 2006. - Vol. 1758. - P. 124-131.

175. Pochini L., Oppedisano F., Indiveri C. Reconstitution into liposomes and functional characterization of the carnitine transporter from renal cell plasma membrane // Biochim. Biophys. Acta-Biomembranes. 2004. - Vol. 1661. - P. 78-86.

176. Piermatti O., Fringuelli F., Pochini L., Indiveri C., Palmerini C.A. Synthesis and characterization of carnitine nitro-derivatives I I Bioorg. Med. Chem. 2008. -Vol. 16, №3.-P. 1444-1451.

177. Kato G., Hosein E.A. Synthesis of isomers of acetylcarnitylcholine and other carnitine derivatives // Can. J. Chem. 1969. - Vol. 47, № 7. - P. 1177-1187.

178. Liu J.J. Pharmacology of oleanolic acid and ursolic acid // J. Ethnopharmacol. -1995.-Vol. 49. -P. 57-68.

179. Liu Y., Hartley D.P., Liu J. Protection against carbon tetrachloride hepatotoxi-city by oleanolic acid is not mediated through metallothionein // Toxicol. Lett. -1998. Vol. 95, № 2. - P. 77-85.

180. Liu J., Liu Y., Madhu C., Klaassen C.D. Protective effects of oleanolic acid on acetaminophen-induced hepatotoxicity in mice // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1993. -Vol. 266, №3.-P. 1607-1613.

181. Liu Y., Kreppel H., Liu J., Choudhuri S., Klaassen C.D. Oleanolic acid protects against cadmium hepatotoxicity by inducing metallothionein // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1993. - Vol. 266, № 1. - P. 400-406.

182. Liu J., Liu Y., Parkinson A., Klaassen C.D. Effect of oleanolic acid on hepatic toxicant-activating and detoxifying systems in mice // J. Pharmacol. Exp. Ther. -1995. Vol. 275, № 2. - P. 768-774.

183. Chen L., Zhang Y., KongX., PengS., Tian J. Synthesis and biological evaluation of nitric oxide-releasing derivatives of oleanolic acid as inhibitors of HepG2 cell apoptosis // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007. - Vol. 17, № 11. - P. 2979-2982.

184. BreschiM.C., Calderone V., Digiacomo M., Martelli A., Martinotti E., Minutolo F., Rapposelli S., Balsamo A. NO-sartans: a new class of pharmacodynamic hybrids as cardiovascular drugs // J. Med. Chem. 2004. - Vol. 47, № 23. - P. 5597-5600.

185. Sonoki H., Nakamura M., Takeshita A. Nipradilol, a new beta-adrenergic blocker, reduces left ventricular remodeling following myocardial infarction in spontaneously hypertensive rats // Heart Vessels. 1997. - Vol. 12. - P. 19-26.

186. Yellon D.M., Alkulaif A.M., Pugsley W.B. Preconditioning the human myocardium // Lancet. 1993. - Vol. 342. - P. 276-277.

187. Murry C.E., Jennings R.B., Reimer K.A. Preconditioning with ischemia: a delay of lethal cell injury in ischemic myocardium // Circulation. 1986. - Vol. 74. -P. 1124-1136.

188. B.Breshears S.R., Wang S.S., Bechtolt G., Christensen R.E. Purines. VIII. The Aminolysis of Certain Chlorosubstituted Purines // J. Am. Chem. Soc. 1959. — Vol. 81, № 14. - P. 3789-3792.

189. Engelhardt F.C., Shi Y.-J., Cowden C.J., Conlon D.A., Pipik B., Zhou G., McNamara J.M., Dolling U.-H. Synthesis of a NO-Releasing Prodrug of Rofecoxib // Org. Chem. 2006. - Vol. 71, № 2. - P. 480^191.

190. Nicolau A. In: Bioactive Lipids (Eds. Nicolau A., Kokotos J.) // Bridgewater: Oily Press, 2004.- 197 p.

191. Lekin D., Sieck A., Betzing H., Kunze H. In: Advances in prostaglandin and thromboxane research (Eds Samuelsson B., Paoletti R.N.Y.) // New-York: Raven Press, 1978.-Vol. 3.-193 p.

192. Ongini E., Chiroli V., Benedini F., Del Soldato P. Prostaglandin derivatives // US Patent 7,273,946 B2. 2007.

193. Price A.H., Clissold S.P. Salbutamol in the 1980s. A reappraisal of its clinical efficacy//Drugs. 1989. - Vol. 38, № 1. - P. 77-122.

194. Naline E., Zhang Y, Qian Y., Mairon N., Anderson G.P., Grandordy B,, Adve-nier C. Relaxant effects and durations of action of formoterol and salmeterol on the isolated human bronchus // Eur. Resp. J. 1994. - Vol. 7. - P. 914-920.

195. Cummings S.R., Rubin S.M., Black D. The future of hip fractures in the United States: Number, costs, and potential effects of postmenopansal estrogen // Clin. Orthop. 1990. - Vol. 252. - P. 163-166.

196. Wang J., Shang F., Jiang R., Liu L., Wang S., Hou J., Huan M., Mei O. Nitric oxide-donating genistein prodrug: design, synthesis, and bioactivity on MC3T3-E1 cells // J. Pharmacol. Sci. 2007. - Vol. 104, № 1. - 82-89.

197. Sugiiira T., Kondo S., Sukagawa A., Nakane S., Shinoda A., Itoh K, Yamashita A., Waku K. 2-Arachidonoylglycerol: a possible endogenous cannabinoid receptor ligand in brain // Biochem.Biophys.Res.Commun. 1995. - Vol. 215. - P. 89-97.

198. Fowler C.J. The contribution of cyclooxygenase-2 to endocannabinoid metabolism and action // Br. J. Pharmacol. 2007. - Vol. 152. - P. 594-601.

199. Kozak K.R., Rowlinson S. W., Marnett L.J. Oxygenation of the endocannabinoid, 2-arachidonylglycerol, to glyceryl prostaglandins by cyclooxygenase-2 // J. Biol. Chem. -2000. Vol. 275, № 43. - P. 33744-33749.

200. Woodward D.F., Liang Y., Krauss A.H-P. Prostamides (prostaglandin-ethanola-mides) and their pharmacology // Br. J. Pharmacol. 2008. - Vol. 153. - P. 410-419.

201. Olah G.A., Malhotra R., Narang S.C. Nitration: methods and mechanisms // New York: VCH, 1989. P. 269-278.

202. Fishbein L., Gallaghan J.A. The Preparation of cis- and trans-l,4-dinitroxy-2-butene // J. Am. Chem. Soc. 1956. - Vol. 78, № 6. - P. 1218-1220.

203. Dimstan I., Griffiths J. V., Harvey S.A. Nitric esters. Part I. Characterisation of the isomeric glycerol dinitrates //J. Chem. Soc. 1965. P. 1319-1324.

204. GoldingP., Millar R.W., PaulN.C., Richards D.H. Preparation of di- and polynitrates by ring-opening nitration of epoxides by dinitrogen pentoxide (N205) // Tetrahedron. 1993. - Vol. 49, № 32. - P. 7037-7050.

205. GoldingP., Millar R.W., Paul N.C., Richards D.H. Preparation of di- and polynitrates by ring-opening nitration of oxetanes by dinitrogen pentoxide (N205) // Tetrahedron. 1993. - Vol. 49, № 32. - P. 7051-7062.

206. Golding P., Millar R.W., Paul N.C., Richards D.H. Preparation of nitramine-nitrates by ring-opening nitration of aziridines by dinitrogen pentoxide (N205) // Tetrahedron. 1993. - Vol. 49, № 32. - P. 7063-7076.

207. Hwu JR., Vjas K.A., Patel H.V., Lin C.-H., Yang J.-C. Practical methods for preparation of nitrate esters // Synthesis. 1994. - Vol. 5. - P. 471-473.

208. Strazzolini P., Giumanini A.G., Runcio A. Nitric acid in dichloromethane solution. Facile preparation from potassium nitrate and sulfuric acid // Tetrahedron Lett. 2001. - Vol. 42. - P. 1387-1389.

209. Gavrila A., Andersen L., Skrydstrup T. A convenient and simple procedure for the preparation of nitrate esters from alcohols employing LiN03/(CF3C0)20 // Tetrahedron Lett. -2005. Vol. 46. - P. 6205-6207.

210. Романова Л.Б., Иванова M.E., Нестеренко Д.А., Еременко JI.T. Синтез азотнокислых солей нитроксиалкиламинов // Известия АН. Серия химическая. — 1994. № 7. - С. 1271-1272.

211. Boehning D., Snyder S.H. Novel neural modulators // Annu. Rev. Neurosci. -2003.-Vol. 26.-P. 105-131.

212. Schell M.J., Molliver M.E., Snyder S.H. D-serine, an endogenous synaptic modulator: localization to astrocytes and glutamate-stimulated release // Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 1995. - Vol. 92, № 9. - P. 3948-3952.

213. Gavrila A., Andersen L., Skrydstrup T. A convenient and simple procedure for the preparation of nitrate esters from alcohols employing LiN03/(CF3C0)20 // Tetrahedron Lett. 2005. - Vol. 46, № 37. - P. 6205-6207.

214. Серков И.В., Безуглов В.В. О-Нитраты гидроксиаминокислот серина и треонина 11 Химия природных соединений. 2008. - № 1. - С. 52-53.

215. Серков И.В., Безуглов В.В. Нитроксиалкиламинокислоты // Патент № 2340597, приоритет от 05.06.2008.

216. Серков И.В., Вишневская Е.М., Безуглов В.В. Синтез нитроксиаминокислот и пептидов на их основе // IV Российский симпозиум «Белки и пептиды» Казань. 23-27 июня 2009. - Тезисы докладов. - С. 156.

217. McKay F.C., Albertson N.F. New amine-masking groups for peptide synthesis // J. Am. Chem. Soc. 1957. - Vol. 79, № 17. - P. 4686-4690.

218. Caprino L.A., Han G.Y. The 9-fluorenylmethoxycarbonyl amino-protecting group // J.Org.Chem. 1976. - Vol. 37, № 62. - P. 3404-3409.

219. Сергеева М.Г., Варфоломеева А.Т. Каскад арахидоновой кислоты // Москва: Народное образование, 2006. 256 с.

220. Di Marzo V, Fontana A., Cadas К, Schinelli S., Cimino G., Schwartz J.C., Piomelli D. Formation and inactivation of endogenous cannabinoid anandamide in central neurons //Nature. 1994. - Vol. 372 (6507). - P. 686-691.

221. Stella N., Schweitzer P., Piomelli D. A second endogenous cannabinoid that modulates long-term potentiation //Nature. 1997. -V. 388. - P. 773-778.

222. Zhang F., Iadecola C. Reduction of focal cerebral ischemic damage by delayed treatment with nitric oxide donors // J. Cereb. Blood Flow Metab. — 1994. Vol. 14. -P. 574-580.

223. Fernández-Tomé P., Lizasoain I., Leza J.C., Lorenzo P., Moro M.A. Neuroprotective effects of DETA-NONOate, a nitric oxide donor, on hydrogen peroxide-induced neurotoxicity in cortical neurons // Neuropharmacology. 1999. - Vol. 38, № 9. -P. 1307-1315.

224. Серков И.В., Безуглов B.B. О-Нитрование в простагландинах: синтез 15-0-нитрата-11-дезоксипростагландина Ej и его метилового эфира // Биоорган, химия.-2006.-Т. 32, № 1.-С. 110-112.

225. Serkov I. V, Bobrov M.Yu., Bezuglov V. V. Nitroesters of bioeffector lipids as novel NO-boosted regulators // International symposium on advances in synthetic, combinatorial and medical chemistry. Moscow, 5-8 May 2004. - Abstract book. - P. 167.

226. Серков И.В., Безуглов B.B. О-Нитраты биологически активных спиртов //

227. Конференция «Органическая химия для медицны». Черноголовка, Московская область. 7-11 сентября 2008. - Тезисы докладов. - С. 235.

228. Серков КВ., Безуглов В.В. Нитроксиалкиламиды как прототипы гибридных нестероидных противовоспалительных препаратов, содержащих NO-донорный фрагмент // Доклады Академии наук. 2009. - Т. 425, № 6. - С. 777-779.

229. Халиков Ш.Х., Кодиров М., Алиева С.В. Синтез и противовоспалительная активность ацетилсалициламинокислот и пептидов // Химия природ, соед. -2006. -№ 2. С.169-172.

230. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия // Москва: Просвещение, 1987. -727 с.

231. Beger R.D. Computational modeling of biologically active molecules using NMR spectra // Drug Discovery Today. 2006. - Vol. 11, № 9-10. - P. 429^135.

232. Pan J-L., Syu M-J. Kinetic study on substrate and product inhibitions for the formation of 7-amino-3-deacetoxy cephalosporanic acid from cephalosporin G by immobilized penicillin G acylase // Biochem. Engineering J. 2005. - Vol. 23, № 3. -P. 203-210.

233. Grant J. W., Smyth T.P. Toward the development of a cephalosporin-based dualrelease prodrug for use in ADEPT // J. Org. Chem. 2004. - Vol. 69, № 23. -P. 7965-7970.

234. Tang X., Cai Т., Wang P. G. Synthesis of beta-lactamase activated nitric oxide donors //Bioorg. Med. Chem. Lett. -2003. Vol. 13, № 10. - P. 1687-1690.

235. Серков И.В., Безуглов B.B. Синтез новых эфиров и амидов цефалоспорина G // Химия природ, соед. 2007. - № 1. - С. 85-88.

236. Безуглов В.В., Серков И.В. Синтез производных цефалоспорина G // I Международная конференция «Химия и биологическая активность азотистых Ге-тероциклов и алкалоидов». Москва. 9-12 октября 2001. - Тезисы докладов. -Т. 2, С. 36.

237. Boissonnas R.A. A new method of peptide synthesis // Helv. Chim. Acta. -1951.-Vol. 34.-P. 874-879.

238. Vaughan J.R. Acylalkylcarbonates as acylating agents for the synthesis of peptides//J. Am. Chem. Soc. 1951. - Vol. 73. - P. 3547-3548.

239. Серков И.В., Безуглов B.B. Многофункциональные соединения, содержащие органические нитраты, — прототипы гибридных лекарственных препаратов // Успехи химии. 2009. - Т. 78, № 5. - С. 442-^65.

240. Серков КВ., Безуглов В.В. Циклооксигеназные метаболиты эндоканнабино-идов, содержащие NO-донорный фрагмент // XVIII Менделеевский съезд по общей и прикладной химии. — Москва. 23-28 сентября 2007. — Тезисы докладов. — Т. 4.-С. 481.

241. Серков КВ., Грецкая Н.М., Безуглов В.В. Нитроанандамид, нитропростами-ды Ег и F2aH их аналоги // Химия природ, соед. 2010. - № 5. - С. 591-594.

242. Соколов Г.П., Каула И.Я., Фрейманис Я.Ф., Гаварс М.П. Полный синтез и свойства простагландинов. X. Гидроксилсодержащие эфиры 11-дезоксипроста-гландина Ej // Биоорган, химия. 1987. - Т. 13, № 5. - С. 670-678.

243. Соколов Г.П., Туровский И.Я., Фрейманис Я.Ф. Тотальный синтез и свойства простагландинов. XXIV. Синтез глицеридов с простагландиновым ацильным остатком // Биоорган, химия. 1989. - Т. 13, № 5. - С. 690-697.

244. Безуглов В.В., Серков И.В. 1,3-Динитроглицериновые эфиры полиненасыщенных жирных кислот, гидроксипроизводных полиненасыщенных жирных кислот и простагландинов и способы их получения // Патент РФ № 2067094, приоритет от 27.09.1993 (Бюл. № 27, 27.09.96).

245. Bezuglov V. V., Serkov I. V. Dinitroglycerol esters of prostaglandins // US Patent № 5,625,083, 29.04.1997.

246. Серков КВ., Безуглов В.В. 1,3-О-нитраты циклооксигеназных метаболитов эндоканнабиноида 2-арахидоноилглицерина. Синтез и свойства // Биоорган, химия. 2009. - Т. 35, № 2. - С. 245-252.

247. Serkov I.V., Bezuglov V.V. Synthesis and properties of NO-PGs I I 9-th International conference on "Prostaglandins and related compounds". Florence, Italy. 4-8 June 1994. - Abstract book. - P. 61.

248. Bezuglov V. V., Serkov I. V. Design of binary prostaglandin preparation. Approaches and examples // 9-th International conference on "Prostaglandins and related compounds". Florence, Italy. 4-8 June 1994. - Abstract book. - P.45.

249. Brewster J.H., Ciotti C.J.Jr. Dehydrations with aromatic sulfonyl halides in pyridine.1 A convenient method for the preparation of esters // J. Am. Chem. Soc., 1955.-Vol. 77, №23.-P. 6214-6215.

250. Arai I., Muramatsu I. A simple and convenient method for esterification of tryptophan and other amino acids // J. Org. Chem. 1988. - Vol. 48. - P. 122-123.

251. Amarnath V., Broom D. Chemical synthesis of oligonucleotides // Chem. Rev. -1977. Vol. 77, №2. - P. 183-217.

252. Haywod-Farmer J. Long-range interactions of cyclopropyl groups with carboni-um ion centers // Chem. Rev. 1974. - Vol. 74, № 3. - P. 315-360.

253. Fahrenholtz K.E., Boris A., Kennedy T.W., Kierstead R.W.J. Steroidal imidazole-1-carboxylic acid esters // J. Med. Chem. 1974. - Vol. 17, № 3. - P. 337-342.

254. Kim S., Kim Y.C., Lee J.I. A new convenient method for the esterification of carboxylic acids // Tetrahedron Lett. 1983. - Vol. 24, № 32. - P. 3365-3368.

255. Марковский Л.Н., Пашинник B.E. Новые фторирующие агенты в органическом синтезе (Ред. Л.С.Герман, С.В.Земсков) // Новосибирск: Наука, 1987. -С. 121-139.

256. Markovskij L.N., Pashinnik V.E., Kirsanov A.V. Application of dialkylamino-sulfur trifluorides in the synthesis of fluoroorganic compounds // Synthesis. 1973. -Vol. 12.-P. 787-789.

257. Безуглов B.B., Серков И.В., Гафуров P.Г., Ллерена Э.М., Пашинник B.E., Марковский Л.Н., Бергельсон Л.Д. Синтез 15-фтордезоксипростагландинов А2 и Е2 из простаглндина А2 Plexaura homomalla // Доклады АН СССР. 1984. -Т. 279, №2.-С. 378-380.

258. Серков И.В., Безуглов В.В. Фторангидриды простагландинов в синтезе производных природных простагландинов по карбоксильной группе // Биоорган, химия. 2009. - Т. 35, № 1. - С. 1-7.

259. Olah G.A., Nojima М, Kerekes I. Synthetic methods and reactions; IV. 1 Fluorination of carboxylic acids with cyanuric fluoride // Synthesis. 1973. - P. 487—488.

260. Oediger H., Moller F., Eiter К Bicyclic amidines as reagents in organic syntheses // Synthesis. 1972. -P. 591-598.

261. Васильева T.M., Петрухина Г.Н., Макаров В.А., Серков КВ., Грецкая Н.М., Безуглов В.В. Действие новых синтетических динитроглицериновых эфиров жирных кислот на агрегацию тромбоцитов человека // Эксп. Клин. Фармакология. -2003. Т. 66, № 6. - С. 44-46.

262. Безуглов В.В., Андреюк Г.М., Серков И.В., Кисель М.А. Влияние липидных производных динитроглицерина и нитроэтиленгликоля на спектральные параметры гемоглобина человека // Биохимия. 2000. - Т. - 65, Вып. 6. - С. 804-809.

263. Серков ИВ., Григорьев В.В., Иванова Т.А., Грецкая Н.М., Безуглов В.В., Бачурин С.О. Действие производных докозагексаеновой кислоты на АМРА рецепторы в нейронах Пуркинье // Доклады Академии наук. 2006. - Т. 411. -№ 3. - С. 1-2.

264. Серков ИВ., Шевцова Е.Ф., Дубова Л.Г., Киреева Е.Г., Вишневская Е.М., Грецкая Н.М., Безуглов В.В., Бачурин С.О. Взаимодействие производных докозагексаеновой кислоты с митохондриями // Доклады Академии наук. -2007. Т. 414. -№ 3. - С. 415-418.

265. Ordway R. W, Walsh J. V.Jr., Singer J.J. Arachidonic acid and other fatty acids directly activate potassium channels in smooth muscle cells // Science. 1989. -Vol. 244.-P. 1176-1179.

266. Guindon J., Hohmann A.G. A physiological role for endocannabinoid-derived products of cyclooxygenase-2-mediated oxidative metabolism // Br. J. Pharmacol. -2008.-V. 153, №7.-P. 1341-1343.

267. Безуглов B.B., Серков КВ., Дмитриев П.К, Воложин А.И., Петрухина Г.Н., Макаров В.А. Средство, улучшающее кровообращение, для наружного применения // Патент РФ № 2098097, приоритет от 07.07.1994.

268. Андрианова Е.Л., Бобров М.Ю., Грецкая Н.М., Зинченко Г.Н., Серков КВ., Фомина-Агеева Е.В., Безуглов В.В. Действие нейролипинов и их синтетических аналогов на нормальные и трансформированные глиальные клетки // Нейрохимия-2010. Т. 27.-№ 1.-С. 53-62.